en
stringlengths 1
8.65k
| vi
stringlengths 1
3.19k
|
|---|---|
In this study, 54 patients with relapsed or refractory non-Hodgkin's lymphoma (NHL) were treated in a phase II, multicentric trial with ifosfamide-mesna 1500 mg/m2 IV days 1-3, idarubicin 12 mg/m2 IV day 1 and etoposide 100 mg/m2 IV day 1-3 (MIZE). Overall response was 72%; complete response (CR) and partial response (PR) were 46% and 26% respectively. In Stage I-II pts CR was 59% and in Stage III-IV pts CR was 40.5%. Patients who relapsed from an initial CR had a 64% CR rate when treated with MIZE, in contrast to refractory disease's patients who only had 19% CR (p = 0.004). The group of pts that had an objective response (CR + PR) to front line therapy had a 2 year survival rate of 55% compared with none for refractory disease (p = 0.029) after salvage therapy. Median survival for the entire group was 17.5 months. Better survival was seen in pts who were asymptomatic with low levels of LDH, previous CR, non high-grade histology, and limited disease stage at relapse. Toxicity was mainly hematologic: 91.5% had neutropenia, (56.5% grade III-IV), and 9.5% died from infectious complications. Other clinical toxicities including cardiac toxicity were negligible. MIZE chemotherapy was effective in patients with relapsed and refractory lymphoma and showed limited clinical and cardiac toxicity. Myelosupression was the most frequent single toxicity. | Trong nghiên cứu này, 54 bệnh nhân u lymphô ác tính không Hodgkin tái phát hoặc khó chữa được điều trị trong giai đoạn II, thử nghiệm đa trung tâm với ifosfamide-mesna 1500 mg/m2 IV ngày 1-3, idarubicin 12 mg/m2 IV ngày 1 và etoposide 100 mg/m2 IV ngày 1-3 (MIZE ). Đáp ứng chung là 72%; đáp ứng hoàn toàn (CR) và đáp ứng một phần (PR) lần lượt là 46% và 26 %. Ở giai đoạn I-II tỷ lệ đáp ứng CR là 59% và ở giai đoạn III-IV tỷ lệ đáp ứng CR là 40,5 %. Tỷ lệ tái phát từ CR ban đầu là 64% khi điều trị bằng MIZE so với bệnh nhân bệnh khó chữa chỉ có 19% CR (p = 0,004 ). Nhóm bệnh nhân có đáp ứng khách quan (CR + PR) với điều trị tiền tuyến có tỷ lệ sống thêm 2 năm là 55% so với không có đáp ứng đối với bệnh khó chữa (p = 0,029 ). Thời gian sống thêm trung bình của cả nhóm là 17,5 tháng. Sống thêm tốt hơn ở nhóm bệnh nhân không có triệu chứng, nồng độ LDH thấp, CR trước đó không cao, mô bệnh học không cao, giai đoạn bệnh còn hạn chế. Độc tính chủ yếu là về huyết học: 91,5% có giảm bạch cầu, 56,5% giảm bạch cầu độ III-IV, 9,5% tử vong do biến chứng nhiễm trùng. Các độc tính khác về mặt lâm sàng bao gồm cả độc tính về tim đều không đáng kể. Hóa trị liệu MIZE có hiệu quả trên bệnh nhân u lymphô ác tính tái phát và khó chữa và có độc tính hạn chế về mặt lâm sàng và tim. Độc tính đơn thuần thường gặp nhất là ức chế tuỷ. |
The human HMGI-C gene encoding a member of the high mobility group protein family normally is expressed only during embryonic/fetal development but in none of the adult tissues tested so far. Recently, the HMGI-C gene has attracted a lot of interest since its rearrangements seem to underlie the development of frequent benign mesenchymal tumors. We have therefore checked CD34 positive hematopoietic stem cells and their normal and malignant descendants for HMGI-C expression. CD34 positive stem cells from healthy donors and the leukemia samples tested were positive while all peripheral blood samples from healthy volunteers were negative. We have concluded that the expression of the HMGI-C gene in leukemia seems to be a secondary effect due to abnormal stem cell proliferation and might be a sensitive tumor marker for particular types of leukemia. | Gen mã hóa HMGI-C ở người thuộc họ protein nhóm di động cao thường chỉ biểu hiện trong quá trình phát triển phôi/tế bào gốc nhưng chưa có mô trưởng thành nào được thử nghiệm. Gần đây, gen mã hóa HMGI-C được quan tâm nghiên cứu nhiều bởi sự sắp xếp lại của nó dường như làm nền tảng cho sự phát triển của các khối u trung mô lành tính. Do đó, chúng tôi đã kiểm tra sự biểu hiện của các tế bào gốc tạo máu dương tính CD34 và các tế bào gốc bình thường và ác tính của chúng. Các tế bào gốc dương tính |
Primary lymphomas arising in the adrenal gland are extremely rare. The presenting symptoms are nonspecific and may be related to lymphoma or to associated adrenal insufficiency. In this report we describe the case of a 61 year old woman with idiopathic thrombocytopenic purpura and primary bilateral non Hodgkin's lymphoma of the adrenals. | U lymphô ác tính nguyên phát ở tuyến thượng thận là rất hiếm gặp. Các triệu chứng lâm sàng không đặc hiệu và có thể liên quan đến u lymphô ác tính hoặc suy thượng thận. Trong nghiên cứu này chúng tôi mô tả một trường hợp bệnh nhân nữ, 61 tuổi, xuất huyết giảm tiểu cầu vô căn và u lymphô ác tính hai bên không Hodgkin nguyên phát ở tuyến thượng thận. |
We present the case of a two-year-old child with an atypical presentation of chronic myeloid leukemia. At diagnosis, he showed clinical and biological features of juvenile chronic myeloid leukemia (CML). However, eosinophilia was observed in blood and bone marrow. The bone marrow karyotype did not demonstrate the Philadelphia chromosome but BCR-ABL rearrangement was shown to be present by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis and confirmed by fluorescent in situ hybridization (FISH) analysis. Discussion centres on the differentiation between juvenile CML and childhood chronic myelogenous Leukemia and the importance of carrying out RT PCR for all juvenile CML cases. | Chúng tôi trình bày một trường hợp bệnh nhi 2 tuổi với biểu hiện không điển hình của bệnh bạch cầu dòng tủy mạn tính. Khi chẩn đoán, bệnh nhi cho thấy các đặc điểm lâm sàng và sinh học của bệnh bạch cầu dòng tủy mạn tính ở trẻ vị thành niên (BLTQĐTN ). Tuy nhiên, có sự hiện diện của bệnh bạch cầu ái toan trong máu và tủy xương. Kiểu nhân tế bào tủy xương không cho thấy nhiễm sắc thể Philadelphia nhưng sự sắp xếp lại BCR-ABL được chứng minh bằng phân tích phản ứng chuỗi sao chép ngược (RT- |
Acute myeloid leukemia (AML) is infrequent in patients with human immunodeficiency virus (HIV) infection. Among AML, acute promyelocytic leukemia (APL) has been rarely described in such patients, with only one case being published. We report a 30 years-old intravenous drug abuser HIV-infected male with APL who attained complete clinical, morphological, and molecular remission after differentiation therapy with all-trans-retinoic acid (ATRA) followed by intensive chemotherapy. The results of treatment in this patient and in other AML published cases suggest that therapy for AML should not be modified because of HIV infection if patients have an adequate performance status. | Bệnh bạch cầu dòng tủy cấp (BLTQĐT) thường gặp ở bệnh nhân nhiễm virus gây suy giảm miễn dịch ở người (HIV ). Trong số các bệnh nhân nhiễm HIV, bệnh bạch cầu cấp dòng tủy (BLTQĐT) hiếm khi được mô tả ở các bệnh nhân này, chỉ có một trường hợp được công bố. Chúng tôi báo cáo một bệnh nhân nam nhiễm HIV, 30 tuổi, bị bệnh LXM cấp thể M3 sau điều trị biệt hóa bằng acid all-trans-retinoic (ATRA) và |
A woman with Philadelphia chromosome-positive c-ALL with +8 and i17q in addition underwent an unpurged blood stem cell autograft after 200mg/m2 melphalan in first relapse. Maintenance therapy with 6-mercatopurine was started following the autograft. Moderate pancytopenia developed after 4 months, and myelodysplasia (refractory anemia) was diagnosed which rapidly evolved into AML. The cytogenetic findings remained unchanged. She also developed CNS disease, but the blasts in the cerebrospinal fluid were lymphoid in character on immunophenotyping. She then received palliative treatment until death. The remarkable features here are the evolution into myelodysplasia and AML with retention of the original complex karyotype, and subsequent coexistence of lymphoid disease in the CNS and myeloid disease systemically. It is possible that the lineage switch and development of myelodysplasia in this case may have been secondary to treatment, but persistence of the original cytogenetic clone makes this unlikely. This may have been the result of some unusual effect of the treatment on the original clone, or expansion of a small unidentified myeloid clone present originally which gained a proliferative advantage due to the ALL-type treatment. This case confirms the aggressive and polymorphic nature of Ph+ ALL which may be the result of origin from an early progenitor cell (stem cell disease). | Một phụ nữ với c-ALL dương tính với nhiễm sắc thể Philadelphia với +8 và i17q được ghép tế bào gốc máu không có nhiễm sắc thể sau 200mg/m2 melphalan tái phát lần đầu. Điều trị duy trì bằng 6-mercatopurine được bắt đầu sau ghép. Giảm ba dòng vừa phải phát triển sau 4 tháng và myelodysplasia (thiếu máu khó chữa) được chẩn đoán và tiến triển nhanh chóng thành AML. Các phát hiện về di truyền tế bào không thay đổi. Cô cũng phát triển bệnh thần kinh trung ương, nhưng các vụ nổ trong dịch não tuỷ là do lympho kiểu hình. Sau đó cô được điều trị tạm thời cho đến khi chết. Các đặc điểm đáng chú ý ở đây là sự tiến hóa thành myelodysplasia và AML với sự duy trì kiểu nhân sơ ban đầu, và sau đó là sự tồn tại của bệnh lympho trong CNS và bệnh myeloid một cách có hệ thống. Có thể sự chuyển dòng và phát triển của myelodysplasia trong trường hợp này có thể chỉ là thứ yếu so với điều trị, nhưng sự tồn tại dai dẳng của bản sao di truyền tế bào gốc khiến điều này khó xảy ra. Đây có thể là kết quả của một số tác dụng bất thường của điều trị trên bản sao gốc, hoặc sự mở rộng của một bản sao nhỏ không xác định được có nguồn gốc ban đầu đã đạt được lợi thế sinh sôi nảy nở do điều trị kiểu ALL. Trường hợp này khẳng định tính chất tiến triển và đa hình của Ph + ALL có thể là kết quả của một tế bào tiền thân sớm (bệnh tế bào mầm). |
An unusual case of bullous pyoderma gangrenosum in a patient with myelodysplastic syndrome during treatment with granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) is reported. The possible relationship between G-CSF therapy and pyoderma gangrenosum, as well as the beneficial effect of cyclosporin A therapy, is discussed. | Một trường hợp bất thường của bệnh pyoderma gangrenosum bọng nước ở bệnh nhân có hội chứng myelodysplastic trong quá trình điều trị bằng yếu tố kích thích dòng bạch cầu hạt (G-CSF ). Mối liên quan giữa điều trị G-CSF với pyoderma gangrenosum cũng như tác dụng có lợi của cyclosporin A được thảo luận. |
The current public debate on nicotine concentrates on the abuse potential of nicotine per se. However, little is known about the interaction of nicotine with other drugs of well-established abuse liability such as cocaine. Indeed, cigarette smoking increases the intake of cocaine and other drugs of abuse. In order to test if these epidemiological data are reflected in a neurochemical correlate of the reinforcing effects of drugs of abuse, i.e., dopamine overflow in the nucleus accumbens, in vivo brain microdialysis was used to examine the effects of nicotine and cocaine either alone or in combination in freely moving rats. Furthermore, the effects of the nicotine + cocaine combination were compared to another drug combination of high abuse potential, i.e., heroin + cocaine ('speedball'). Both nicotine + cocaine as well as heroin + cocaine stimulated nucleus accumbens dopamine overflow in an additive manner. Repeated intermittent administration of nicotine did not significantly alter the effects of a subsequent challenge with the nicotine + cocaine combination. These data suggest that the clinical-epidemiological findings on either drug combination are reflected in a stimulatory interaction on nucleus accumbens dopamine overflow that is additive. No significant tolerance seems to develop to this effect of nicotine. These neurochemical findings support behavioral data suggesting that the reinforcing effects of cocaine and heroin are additive and predict that nicotine will enhance the reinforcing effects of cocaine. | Các cuộc tranh luận hiện nay về nicotine tập trung vào khả năng lạm dụng của bản thân nicotine. Tuy nhiên, người ta biết rất ít về tương tác của nicotine với các thuốc khác có trách nhiệm lạm dụng đã có từ lâu như cocain. Trên thực tế, hút thuốc lá làm tăng lượng cocaine và các thuốc khác bị lạm dụng. Để kiểm tra xem các dữ liệu dịch tễ học này có phản ánh tương quan về hóa học thần kinh của tác dụng tăng cường của các thuốc bị lạm dụng hay không, tức là sự tràn dopamine trong nhân accumbens, phương pháp phân tích siêu âm não trong cơ thể đã được sử dụng để kiểm tra tác dụng của nicotine và cocaine đơn độc hoặc kết hợp ở những con chuột di chuyển tự do. Hơn nữa, tác dụng của sự kết hợp nicotine + cocaine được so sánh với một sự kết hợp thuốc khác có khả năng lạm dụng cao, tức là heroin + cocaine. Cả hai chất, nicotine + cocaine và heroin + cocaine, đều kích thích nhân accumbens tràn dopamine theo cách phụ gia. Việc liên tục sử dụng nicotine không liên tục không làm thay đổi đáng kể tác dụng của một thử thách tiếp theo với sự kết hợp nicotine + cocaine. Những dữ liệu này cho thấy các kết quả lâm sàng-dịch tễ học về một trong hai sự kết hợp thuốc được phản ánh trong một tương tác kích thích trên nhân accumbens tràn dopamine là phụ gia. Dường như không có sự dung nạp đáng kể nào đối với tác dụng này của nicotine. Các phát hiện về hóa học thần kinh này hỗ trợ cho các dữ liệu hành vi cho thấy tác dụng tăng cường của cocaine và heroin là phụ gia và dự đoán rằng nicotine sẽ tăng cường tác dụng tăng cường của cocaine. |
The formalin test, an experimental model of injury-induced central sensitisation, was used. The antinociceptive interaction between intrathecal morphine and clonidine was evaluated based on the inhibition of the phase 1 and 2 of the formalin response, induced by both drugs, given alone or in combinations with fixed dose ratios. Morphine and clonidine, at doses not affecting motor performance, produced dose-dependent inhibition in the formalin test, with similar ID50 values in phase 1 and 2; 0.66 and 0.45 nmol and 4.1 and 3.5 nmol, respectively. Isobolographic analysis revealed a significant synergy. The combination ID50 was found to be significantly lower than the respective theoretical additive ID50 for both fixed dose ratios (1:3 and 1:10) in both phases of the formalin test. The similar total dose fraction of the additive ID50 in phase 1 and 2 indicates the same magnitude of synergy and may suggest that the mechanisms of the spinal clonidine-morphine synergy do not differ significantly between both phases of the formalin test. | Nghiên cứu sử dụng phương pháp thử formalin, một mô hình thực nghiệm về cảm giác trung tâm do chấn thương. Tương tác chống độc giữa morphin và clonidin nội tiết được đánh giá dựa trên sự ức chế phản ứng formalin giai đoạn 1 và 2 gây ra bởi cả hai loại thuốc, được dùng đơn độc hoặc kết hợp với tỷ lệ liều cố định. Morphin và clonidin, ở liều không ảnh hưởng đến hoạt động vận động, tạo ra sự ức chế phụ thuộc liều trong thử nghiệm formalin, với giá trị ID50 tương tự ở giai đoạn 1 |
The effect of neurosteroids on the development of morphine tolerance and dependence was examined in mice. Development of tolerance to the antinociceptive effect of morphine sulfate (10 mg/kg, twice daily for 9 days) was measured in the tail-flick test and dependence was assessed from naloxone (2 mg/kg)-precipitated withdrawal jumps on day 10 of testing. Concomitant chronic administration of neurosteroids, allopregnanolone (0.5 mg/kg), pregnenolone sulfate (2 and 5 mg/kg) or dehydroepiandrosterone sulfate (2 and 5 mg/kg), followed by morphine (10 mg/kg) prevented the development of tolerance to the antinociceptive effect of morphine and suppressed the naloxone-precipitated withdrawal jumps. In contrast, dehydroepiandrosterone acetate (5 mg/kg) failed to modulate the morphine tolerance and dependence. The inhibitory effect was also seen upon concomitant administration of a neurosteroid precursor, progesterone (1-10 mg/kg), and a mitochondrial diazepam binding inhibitor receptor agonist, 4'-chlordiazepam (0.25-1 mg/kg), while an adrenocorticosteroid, hydrocortisone (1 and 10 mg/kg), failed to do so. However, acute treatment with these neurosteroids was not associated with any decrease in withdrawal jumping behavior in morphine-dependent mice. Neurosteroids themselves, at doses employed in the study, did not exert any effects on antinociception. These results support a role for neurosteroids in the development of tolerance to and dependence on morphine and suggest the potential utility of specific neuroactive steroids in its treatment. | Nghiên cứu đánh giá tác dụng của neurosteroid đối với sự phát triển dung nạp và lệ thuộc morphin trên chuột nhắt trắng. Sự phát triển dung nạp với tác dụng chống độc của morphin sulfat (10 mg/kg, 2 lần/ngày trong 9 ngày) được đo bằng test nhấp nháy đuôi và sự lệ thuộc được đánh giá bằng các thuốc naloxon (2 mg/kg) - precipitated withdrawal nhảy vào ngày thứ 10 của test. Sử dụng đồng thời các thuốc allopregnanolon (0,5 mg/kg) - pregnenolon sulfate (2 và 5 mg/kg) - dehydroepiandrosteron sulfate (2 và 5 mg/kg) - morphin sulfate (10 mg/kg) - dehydroepiandrosteron sulfate (10 mg/kg) - dehydroepiandrosteron sulfate (10 mg/kg) - dehydroepiandrosteron sulfate (10 mg/kg) - dehydroepiandrosteron acetate (5 mg/kg) - dehydroepiandrosterone acetate (5 mg/kg) - dehydroepiandrosterone acetate (5 mg/kg) - dehydroepiandrosterone acetate (1-10 mg/kg) - dehydroepiandrosterone agonist (0,25-1 mg/kg) - dehydroepiandrosterone sulfate (1 và 10 mg/kg) - dehydroepiandrosterone sulfate) - dehydroepiandrosterone acetate (5 mg/kg) - dehydroepiandrosterone acetate) - dehydroepiandrosterone acetate (5 mg/kg) - dehydroepiandrosterone acetate) - dehydroepiandrosterone acetate (5 mg/kg) - dehydroepiandrosterone acetate) - dehydroepiandrosterone acetate (1-10 mg/kg) - dehydroep |
Clocinnamox is a long-lasting, nonequilibrium, mu-opioid receptor antagonist in mice and monkeys. The present studies examined the in vivo and ex vivo effects of clocinnamox in rats. Under control conditions, morphine dose-dependently increased tail-withdrawal latencies from 50 degrees C water, with a mean ED50 of 7.3 +/- 1.1 mg/kg. Clocinnamox antagonized the antinociceptive effects of morphine. 1.0 mg/kg clocinnamox displaced the morphine dose-response curve 4-fold to the right of the control curve and 10 mg/kg clocinnamox eliminated morphine's antinociceptive effects at doses up to 1000 mg/kg for at least seven days. There was a gradual recovery of the antinociceptive response to morphine; however, the morphine dose-response curve did not return to its original position by five weeks after 10 mg/kg clocinnamox. Whole brain membranes were prepared from separate groups of rats for determination of binding parameters of [3H][D-Ala2, N-Me-Phe4,Gly5-ol]-enkephalin (DAMGO). Clocinnamox dose-dependently decreased [3H]DAMGO binding ex vivo and the decreased binding was a result of changes in Bmax. The control Bmax for [3H]DAMGO was 234 +/- 8 fmol/mg protein; in membranes prepared from rats pretreated with 10 mg/kg clocinnamox, the Bmax value for [3H]DAMGO was 54 +/- 2 fmol/mg protein. The Bmax values for [3H]DAMGO binding after an injection of 10 mg/kg clocinnamox returned towards control values gradually, four weeks after clocinnamox the Bmax was 178 +/- 10 fmol/mg protein. These results suggest that clocinnamox is a long-lasting, nonequilibrium mu-opioid receptor antagonist in rats. | Clocinnamox là thuốc đối kháng thụ thể mu-opioid, không cân bằng, có tác dụng kéo dài trên chuột nhắt trắng và khỉ. Nghiên cứu này khảo sát tác dụng trên thực nghiệm và ngoại nghiệm của clocinnamox trên chuột nhắt trắng. Trong điều kiện đối chứng, thời gian tiềm đuôi rút đuôi của morphin tăng phụ thuộc vào liều lượng nước 50 ⁇ C, với ED50 trung bình là 7,3 +/- 1,1 mg/kg. Clocinnamox đối kháng với tác dụng chống độc của morphin. 1,0 mg/kg clocinnamox thay thế đường cong phản ứng liều morphin gấp 4 lần về bên phải đường cong đối chứng và 10 mg/kg clocinnamox loại bỏ tác dụng chống độc của morphin ở liều lên đến 1000 mg/kg trong ít nhất 7 ngày. Đáp ứng chống độc của morphin phục hồi dần dần, tuy nhiên, sau 5 tuần điều trị 10 mg/kg clocinnamox đường cong phản ứng liều morphin không trở lại vị trí ban đầu. Màng não được chuẩn bị từ các lô chuột được điều chế với liều 10 mg/kg clocinnamox, giá trị Bmax cho protein DAMGO ex vivo là 54 +/- 2 fmol/mg. Giá trị Bmax cho liên kết DAMGO sau tiêm 10 mg/kg clocinnamox trở lại dần về giá trị đối chứng, 4 tuần sau tiêm clocinnamox giá trị Bmax là 178 +/- 10 fmol/mg. Kết quả này cho thấy clocinnamox là thuốc đối kháng thụ thể mu-opioid, không cân bằng, kéo dài. |
Since the cardiovascular effects of cholecystokinin (CCK) seem to particularly involve the A ('peripheral') subtype of CCK (CCK[A]) receptor, we examined the actions of two novel, highly selective CCK(A) receptor antagonists, PD140548 (N-alpha-methyl-N[(tricyclo[3.3.1.1(3,7)]dec-2-yloxy)carbony l]-L-tryptophyl]-D-3-(phenylmethyl)-beta-alanine) and SR 27897B (1-[[2-(4-(2-chlorophenyl)thiazol-2-yl)aminocarbonyl]acetic acid) on CCK-induced alterations in blood pressure and heart rate, and on the baroreceptor reflex in the conscious, instrumented rat. CCK (2 microg, i.v.) produced a pressor response and biphasic effects on heart rate involving an initial bradycardia followed by a pronounced tachycardia. Administration of PD140548 (10 mg/kg, i.v.) and SR 27897B (0.6 mg/kg, i.v.) significantly inhibited the pressor effects of CCK (35 and 47%, respectively), whilst reversing the bradycardic responses to a tachycardia. The CCK(A) receptor antagonists had different effects on the baroreceptor heart rate reflex since only PD140548 caused a significant increase in the gain or sensitivity of the reflex. This effect of PD140548 on gain is likely to occur via a central mechanism and may reflect the increased lipophilicity of PD140548 relative to SR 27897B. Overall, these investigations provide new evidence for the involvement of the CCK(A) receptor in cardiovascular regulation. | Do tác dụng tim mạch của cholecystokinin (CCK) dường như đặc biệt liên quan đến phân nhóm A của CCK (CCK [A] ), chúng tôi đã tiến hành kiểm tra hoạt động của hai chất đối kháng thụ thể CCK (A) mới, có tính chọn lọc cao, PD140548 (N-alpha-methyl-N [(tricyclo [3.3.1.1 (3,7)]dec-2-yloxy) carbony l]-L-t |
Acadesine, an adenosine regulating agent, attenuates the adverse effects of ischaemia on ventricular function in animals. This study examined its influence on pacing-induced ischaemia in 47 patients undergoing coronary angiography. After 15 min of recovery from control pacing, an infusion of acadesine (5, 10, 20, 50 mg/kg i.v.) was commenced and after a further 15 min the protocol was repeated with the infusion continued. At higher doses, minor beneficial effects on ejection fraction and myocardial lactate metabolism were observed. Haemodynamics were unaffected. Systemic lactate rose in relation to acadesine, up to 60% (P < 0.001 versus placebo). The data may indicate that acadesine stimulates anaerobic glycolysis in man. | Acadesine, một chất điều hòa adenosine, làm suy giảm tác dụng phụ của thiếu máu cục bộ lên chức năng thất ở động vật. Nghiên cứu này khảo sát ảnh hưởng của nó lên tình trạng thiếu máu cục bộ do nhịp tim ở 47 bệnh nhân chụp mạch vành. Sau 15 phút hồi phục nhịp tim có kiểm soát, truyền acadesine liều 5,10,20,50 mg/kg thể trọng được bắt đầu và sau 15 phút tiếp tục truyền. Ở liều cao hơn, tác dụng không đáng kể lên phân suất tống máu và chuyển hóa lactate cơ |
Avid Na+ retention is a hallmark of liver cirrhosis. The aim of this study was to investigate whether and how bradykinin is involved in Na+ retention in rats with CCl4-induced liver cirrhosis. To this end the bradykinin B2 receptor antagonist Icatibant (HOE 140) was used. On one hand, bradykinin has a renal natriuretic action. On the other hand, bradykinin is a potent mediator of both vasodilation and microvascular leakage. Both vascular mechanisms, which are reported for cirrhosis, could cause vascular underfilling and Na+ retention by activating the renin-angiotensin-aldosterone system. Icatibant normalised Na+ retention and reduced the hyperactivity of the renin-angiotensin-aldosterone system, suggesting a bradykinin-induced vascular disturbance. Icatibant had no significant effect on the mild hypotension which developed with CCl4 treatment. However, there was indirect evidence for enhanced microvascular leakage that was strongly inhibited by Icatibant. Our experimental results demonstrate that bradykinin is a key mediator of Na+ retention in liver cirrhosis and suggest that a bradykinin-induced increase in microvascular leakage is mainly responsible. | Duy trì Na+ là một dấu hiệu đặc trưng của xơ gan. Mục đích của nghiên cứu này là khảo sát xem liệu bradykinin có liên quan đến duy trì Na+ ở chuột cống bị xơ gan do CCl4 hay không. Để làm được điều này, Icatibant đối kháng thụ thể bradykinin B2 (HOE 140) đã được sử dụng. Một mặt, bradykinin có tác dụng hạ natri niệu thận. Mặt khác, bradykinin là chất trung gian mạnh cho cả giãn mạch và rò rỉ vi mạch. Cả hai cơ chế mạch máu được báo |
The effects of novel nitric oxide (NO)-releasing oxatriazole derivatives GEA 3162 and GEA 3175 were studied on cell proliferation and cGMP synthesis in human peripheral blood mononuclear cells stimulated with a lectin mitogen concanavalin A. GEA 3162 (1-30 microM) and GEA 3175 (3-30 microM) inhibited mononuclear cell proliferation in a dose-dependent manner being more potent than the earlier known NO-donor S-nitroso-N-acetylpenicillamine. The inhibitory action was more pronounced when submaximally stimulating concentrations of concanavalin A (0.1 and 1 microg/ml) were used and no inhibition was seen when concanavalin A concentrations were increased up to 10 microg/ml. The antiproliferative concentrations of GEA 3162, GEA 3175 and S-nitroso-N-acetylpenicillamine induced a rapid and transient increase in cGMP production in mononuclear cells cultured in the presence of concanavalin A. Both the antiproliferative action and the increased cGMP production were attenuated when red blood cells were added into the cultures indicating that NO is responsible for both of these actions. An analogue of cGMP, 8-bromo-cGMP (0.1-3 mM) reduced concanavalin A-induced proliferation in a dose-dependent manner suggesting that cGMP may be involved in the antiproliferative action of NO-donors. NO-releasing compounds have immunosuppressive actions which offer therapeutic possibilities and should be kept in mind as potential adverse events when these compounds are used in other indications. | Tác dụng ức chế sự tăng sinh tế bào và tổng hợp cGMP của dẫn xuất mới của oxit nitric (NO) GEA 3162 và GEA 3175 được nghiên cứu trên tế bào đơn nhân máu ngoại vi người được kích thích bằng lectin mitogen concanavalin A. GEA 3162 (1-30 microM) và GEA 3175 (3-30 microM) ức chế sự tăng sinh tế bào đơn nhân theo cách phụ thuộc liều mạnh hơn so với NO-donor S |
Molecular modelling and site-directed mutagenesis were used to identify eleven amino acid residues which may be involved in antagonist binding of the human tachykinin NK1 receptor. Recombinant receptors were expressed in mammalian cells using the Semliki Forest virus system. Wild type and mutant receptors showed similar expression levels in BHK and CHO cells, verified by metabolic labelling. Binding affinities were determined for a variety of tachykinin NK1 receptor antagonists in SFV-infected CHO cells. The binding affinity for GR203040, CP 99,994 and CP 96,345 was significantly reduced by mutant Q165A. The mutant F268A significantly reduced the affinity for GR203040 and CP 99,994 and the mutant H197A had reduced affinity for CP 96,345. All antagonists seemed to bind in a similar region of the receptor, but do not all rely on the same binding site interactions. Functional coupling to G-proteins was assayed by intracellular Ca2+ release in SFV-infected CHO cells. The wild type receptor and all mutants except A162L and F268A responded to substance P stimulation. | Nghiên cứu mô hình phân tử và đột biến định hướng tại chỗ được thực hiện để xác định 11 loại amino acid còn sót có thể liên quan đến liên kết đối kháng của thụ thể tachykinin NK1 ở người. Các thụ thể tái tổ hợp được biểu hiện ở các tế bào động vật có vú bằng hệ thống virus rừng Semliki. Các thụ thể hoang dại và đột biến cho thấy mức độ biểu hiện tương tự nhau ở các tế bào BHK và CHO, được xác minh bằng cách ghi nhãn chuyển hóa. Các mối liên kết được xác định cho nhiều loại chất đối kháng thụ thể n |
Enantiomers of norbicuculline, (+)[1S,9R] and (-)[1R,9S]erythro-1-[1'-(4',5'-methylenedioxyphthalidyl)]-6,7-meth ylenedioxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline and of the N-methyl derivatives {(+)[1S,9R] and (-)[1R,9S]bicuculline} were found to inhibit the progress of the gamma-aminobutyric acid transporter-mediated uptake of 40 microM [14C]gamma-aminobutyric acid into native plasma membrane vesicles from the rat cerebral cortex at 30 degrees C. The values for the dissociation constants of the reversible inhibition, relative to (+)[1S,9R]bicuculline, in order of increasing inhibition, were: (-)[1R,9S]bicuculline, 3.3; (+)[1S,9R]-bicuculline, 1.0; (-)[1R,9S]norbicuculline, 0.4 approximately (+)[1S,9R]norbicuculline; guvacine, 0.02. The norbicucullines have higher potencies than (+)[1S,9R]bicuculline for the gamma-aminobutyric acid transporter, in contrast to the relative potencies of these inhibitors for the inhibition of function and gamma-aminobutyric acid binding of the gamma-aminobutyric acid type A receptor. | Các chất đối kháng của norbicuculline, (+) [1S, 9R] và (-) [1R, 9S]erythro-1 - [1' - (4', 5' - methylenedioxyphthalidyl)]-6,7-meth ylenedioxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline và các dẫn xuất N-methyl {(+) [1S, 9R] và (-) [1R, 9S]bicuculline} |
We examined the effect of ondansetron, a 5-HT3 receptor antagonist, on the whole cell current response of freshly isolated hypothalamic and hippocampal neurons of rats to gamma-aminobutyric acid (GABA). The nystatin perforated patch technique was used to minimize run-down of the GABA current. While 1-150 microM ondansetron had no effect on membrane conductance, co-application with agonist reversibly depressed the maximal end GABA current. The concentration-response relation of GABA reveals a non-competitive mechanism. However, the inhibitory effect was more potent when ondansetron was co-applied with lower concentrations of GABA: i.e., the ondansetron concentration needed to depress the current induced by 5 microM GABA to half amplitude was 7 microM compared to 28 microM for the current induced by 10 microM GABA. Analysis of the current-voltage relationship with and without ondansetron indicated that the effect of ondansetron is not voltage dependent. Current-voltage relations also showed that the effect of ondansetron was not due to activation of a GABA-independent current because the reversal potentials were the same with and without ondansetron. The present data suggest that ondansetron's suppression of GABA-activated current may be the molecular basis of ondansetron-induced seizures observed in vivo. | Chúng tôi tiến hành khảo sát tác dụng ức chế dòng điện của ondansetron, một chất đối kháng thụ thể 5-HT3, lên phản ứng toàn bộ dòng tế bào của tế bào thần kinh vùng dưới đồi và hồi hải mã mới được phân lập đối với acid gamma-aminobutyric (GABA ). Kỹ thuật vá thủng bằng nystatin được sử dụng để giảm thiểu sự giảm dòng điện của dòng GABA. Trong khi ondansetron 1-150 microM không ảnh hưởng đến độ dẫn màng, thì đồng áp dụng với chất |
To characterize the role of phosphodiesterase type 4 (a cAMP-specific and rolipram-sensitive phosphodiesterase) among phosphodiesterases in the regulation of the intracellular cAMP level in cortical neurons, we investigated the effects of phosphodiesterase inhibitors on the intracellular cAMP levels in primary cultured rat cortical neurons. Selective inhibitors of phosphodiesterase type 4 and type 2 significantly enhanced beta-adrenoceptor-mediated cAMP increase. Selective inhibitors of phosphodiesterase type 1, type 3 and type 5/6 had no effect on the cAMP level. Rolipram enhanced the beta-adrenoceptor-mediated cAMP increase in cortical neurons, astrocytes and vascular smooth muscle cells at different minimum effective concentrations (10, 100 and 1000 nM, respectively). These findings indicate that phosphodiesterase type 4, showing a high-sensitivity to rolipram, plays a major role in regulating cAMP in the cortical neurons, and that rolipram at low doses enhances the intracellular cAMP increase in the cortical neurons selectively. | Để mô tả vai trò của phosphodiesterase type 4 (phosphodiesterase đặc hiệu với cAMP và nhạy cảm với rolipram) trong điều hòa nồng độ cAMP nội bào ở tế bào thần kinh vỏ não, chúng tôi đã nghiên cứu ảnh hưởng của chất ức chế phosphodiesterase lên nồng độ cAMP nội bào ở tế bào thần kinh vỏ não nuôi cấy ban đầu. Chất ức chế chọn lọc phosphodiesterase type 4 và type 2 tăng cường đáng kể nồng độ beta-adrenoceptor trung gian. |
The lipid domains of the cell membrane are believed to be one of the sites where biguanides exert their antihyperglycemic effect. We have examined the effects of metformin on the membrane fluidity of intact erythrocytes in vivo and in vitro. Membrane fluidity was measured by monitoring changes in the anisotropy of the fluorescent probe 6-antroyloxystearic acid (6-AS). The erythrocyte membranes from patients with non-insulin dependent diabetes mellitus treated with metformin were more fluid than those from non-insulin dependent diabetes mellitus patients treated by diet or healthy controls. There was no correlation between membrane fluidity and the plasma lipids or the parameters of metabolic control, suggesting that the high fluidity is an effect of metformin itself. Incubation of erythrocytes from healthy controls and diabetic patients treated by diet or glibenclamide with metformin in vitro confirmed that metformin increases the fluidity of erythrocyte membranes. In vitro metformin did not alter the fluidity of membranes from diabetic patients treated with metformin, perhaps because the basal high fluidity due to their in vivo interaction with plasma metformin could be increased no further. Since insulin appears to be required for the antihyperglycemic effect of metformin, the effect of insulin on membrane fluidity was also evaluated. Insulin generally had a small fluidizing effect on erythrocytes in vitro. The fluidizing action of both insulin and metformin could represent a membrane event common to the hormone and drug leading to additive or synergistic effects in vivo. | Các miền lipid của màng tế bào được cho là một trong những vị trí mà các biguanide có tác dụng hạ glucose huyết. Chúng tôi đã khảo sát tác dụng của metformin lên tính lỏng màng của hồng cầu nguyên vẹn in vivo và in vitro. Tính lỏng màng được đo bằng cách theo dõi sự thay đổi tính dị hướng của đầu dò huỳnh quang 6-antroyloxystearic acid (6-AS). |
Inhibition of monoamine oxidase B was investigated both in vitro and in vivo in rats by using the radioligand, N-(6-[18F]fluorohexyl)-N-methylpropargylamine ([18F]FHMP). Binding affinities of five compounds, deprenyl, clorgyline, fluoxetine, norfluoxetine and citalopram were studied. Fluoxetine and norfluoxetine showed affinities of 17 and 13 microM for monoamine oxidase B, respectively. Acute doses of fluoxetine and norfluoxetine (20 mg/kg) also significantly inhibited (10 to 15%) the binding of the radioligand in vivo while citalopram showed lower affinity (140 microM) for monoamine oxidase B and little effect in vivo. The in vivo effects of the various drugs were directly comparable to their in vitro affinities for binding to monoamine oxidase B in the correlation plot of percent control in vivo binding of [18F]FHMP and binding affinity, -logIC50 (R2 = 0.989). These results provide evidence for a potential role of monoamine oxidase B inhibition in the therapeutic effects of Prozac. | Nghiên cứu tác dụng ức chế monoamine oxidase B trên chuột cống trắng bằng xạ trị và in vivo trên chuột cống trắng bằng thuốc phóng xạ, N-(6 - [18F] fluorohexyl) - N-methylpropargylamine ([18F] FHMP). |
The putative endogenous cannabinoid, anandamide (0.2-2 mg/kg i.v.), decreased systemic blood pressure dose-dependently in anesthesized guinea pigs. These effects were prevented by the CB1 cannabinoid receptor antagonist SR141716A [N-(piperidin-1-yl)-5-(4-chlorophenyl)-1-(2,4-dichlorophenyl)-4-me thyl-1H-pyrazole-3-carboxamide x HCl] at the dose of 0.2 mg/kg i.v. The vasodepressor responses to anandamide were significantly potentiated and prolonged by a novel inhibitor of carrier-mediated anandamide transport, N-(4-hydroxyphenyl) arachidonylethanolamide (AM404) (10 mg/kg, i.v.). These results suggest that anandamide transport participates in terminating the vascular actions of anandamide. | Cannabinoid nội sinh giả định, anandamide (0,2-2 mg/kg thể trọng) làm giảm liều huyết áp hệ thống phụ thuộc vào liều gây mê ở chuột lang gây mê. Những tác dụng này được ngăn chặn bằng chất đối kháng thụ thể CB1 cannabinoid SR141716A [N-(piperidin-1-yl) -5-(4-chlorophenyl) -1-(2,4-dichlorophenyl) -4-me thyl-1H-pyraz |
OBJECTIVE The authors defined a new macroscopic classification of liver metastases from colorectal cancer. SUMMARY BACKGROUND DATA There were different prognostic results after the same operative procedure for liver metastases with similar background factors. METHODS Eighty-one resected liver metastases were classified into simple nodular (SN) or confluent nodular (CN) types according to the characteristics of the cut surface of the tumor. RESULTS The 5-year survival rates after hepatectomy were 41.7% for the SN lesions (n = 39) and 23.1% for the CN lesions (n = 42). The difference between the survival curves was statistically significant (p = 0.0307). Multivariate analysis using Cox's proportional hazards model revealed that the macroscopic type (p = 0.023), the tumor diameter (p = 0.0001), and the presence of lymph node metastases (p = 0.0016) were statistically significant independent prognostic factors. CONCLUSION The new macroscopic classification may be valuable as a prognostic factor reflecting the biologic behavior of liver metastases. | MỤC TIÊU: Các tác giả đã xác định một phân loại đại thể mới của di căn gan từ ung thư đại trực tràng. TỔNG HỢP DỮ LIỆU TỔNG HỢP CÓ KẾT QUẢ GIẢI PHẪU TRONG MỘT PHẪU THUẬT ĐỐI VỚI DỊCH TỄ CỦA UNG THƯ TRÊN MẠNG THAI TRƯỜNG TH |
OBJECTIVE We reviewed the adjuncts for brain and spinal cord protection and modifications of operative techniques. SUMMARY BACKGROUND DATA Two-staged repair--the "elephant trunk" technique--has provided the means for successful repair of massive aortic aneurysms, although historically morbidity has been high. METHODS Between February 1991 and February 1996, we operated on 512 patients for thoracic aortic aneurysm. Preoperative, intraoperative, or postoperative predictors of morbid outcomes were studied in 63 patients treated with the elephant trunk technique. Data were analyzed by contingency table methods. RESULTS After stage 1, there were no strokes among patients who received retrograde cerebral perfusion (0 of 53), two strokes occurred among patients who did not receive retrograde cerebral perfusion (2 of 10 [20%]), and early mortality occurred in 4 of the 63 patients (6%). Interval mortality occurred in 6 of 59 patients (10%); 3 (50%) of these 6 deaths were due to distal aortic aneurysm rupture. Thirty-eight patients have undergone stage two repair thus far. There was no incidence of neurologic deficit after stage 2, and early mortality occurred in 1 of the 38 patients (3%). CONCLUSIONS Extensive aortic aneurysm can be successfully treated using the elephant trunk technique. In this group of patients, retrograde cerebral perfusion eliminated neurologic complications. | MỤC TIÊU: Chúng tôi đã xem xét các phương pháp điều trị bổ trợ bảo vệ não và tuỷ sống cũng như thay đổi kỹ thuật phẫu thuật. Kỹ thuật "thân voi" sửa chữa hai giai đoạn đã cung cấp phương tiện cho việc sửa chữa thành công phình động mạch chủ lớn, mặc dù tỷ lệ biến chứng trong lịch sử là cao. Từ tháng 2 năm 1991 đến tháng 2 năm 1996, chúng tôi đã tiến hành phẫu thuật trên 512 bệnh nhân phình động mạch chủ ngực. 63 bệnh nhân được điều trị bằng kỹ thuật |
OBJECTIVE The mechanisms of cellular priming resulting in both adaptive and maladaptive responses to subsequent injury and strategies for manipulating this priming to constructive therapeutic advantage are explored. BACKGROUND DATA A cell is prepared or educated by an initial insult (priming stimulus). Investigations in both laboratory animals and humans indicate that cells, organs, and perhaps even whole patients respond differently to a proximal second insult ("second hit") by virtue of this prior environmental history. The opportunity to achieve the primed state appears to be conserved across almost all cell types. The initial stimulus transmits a message to the cellular machinery that influences the cell's response to a subsequent challenge. This response may result in an exaggerated inflammatory response in the case of the neutrophil (an often maladaptive process) or an improved tolerance to injury by the myocyte (adaptive response). Our global hypothesis is that cellular priming is a conserved, receptor-dependent process that invokes common intracellular targets across multiple cell types. We further postulate that these targets create a language based on the transient phosphorylation and dephosphorylation of intracellular enzymes that is therapeutically accessible. CONCLUSIONS Priming is a conserved, receptor-dependent process transduced by means of intracellular targets across multiple cell types. The potential therapeutic strategies outlined involve the receptor-mediated manipulation of cellular events. These events are transmitted through an intracellular language that instructs the cell regarding its behavior in response to subsequent stimulation. Understanding these intracellular events represents a realistic goal of priming and preconditioning biology and will likely lead to clinical control of the primed state. | Các cơ chế của quá trình mồi tế bào dẫn tới những phản ứng thích nghi và không thích nghi đối với tổn thương sau đó, cũng như các chiến lược điều khiển quá trình mồi tế bào này nhằm đạt tới những lợi thế chữa bệnh mang tính xây dựng đã được khám phá. DỮ LIỆU TRỞ LẠI Một tế bào được chuẩn bị hoặc giáo dục bởi một sự tấn công ban đầu (kích thích mồi). |
OBJECTIVE To determine the difference in wound complication and infection rates between suture and staple closure techniques applied to clean incisions in coronary bypass patients. BACKGROUND The true incidence of postoperative wound complications, and their correlation with closure techniques, has been obscured by study designs incorporating small numbers, retrospective short follow-up, uncontrolled host factors, and narrowly defined complications. METHODS Sternal and leg wounds were studied prospectively, each patient serving as his or her own control. Two hundred forty-two patients with sternal and saphenous vein harvest wounds had half of each wound closed with staples and the other half with intradermal sutures (484 sternal and 516 leg segments). Wound complications were defined as drainage, erythema, separation, necrosis, seroma, or infection. Infections were identified in the subset having purulent drainage, antibiotic therapy, or debridement. Wounds were examined at discharge, at 1 week after discharge, and at 3 to 4 weeks after operation. Patient preferences for closure type were assessed 3 to 4 weeks after operation. RESULTS Neither leg nor sternal wounds had a statistically significant difference in infection rate according to closure method (leg sutured = 9.3% vs. leg stapled = 8.9%; p = 0.99, and sternal sutured = 0.4% vs. sternal stapled = 2.5%; p = 0.128). There was, however, a greater complication rate in stapled segments (leg stapled = 46.9% vs. leg sutured = 32.6%; p = 0.001, and sternal stapled = 14.9% vs. sternal sutured = 3.7%; p = 0.00005). Sutures were favored over staples among patients who expressed a preference (sternal = 75.6%, leg = 74.6%). CONCLUSIONS With the host factors controlled by pairing staples and sutures in each patient, we demonstrated a similar incidence of infection but a significantly lower incidence of total wound complications with intradermal suture closure than with staple closure. | Xác định sự khác biệt về biến chứng và tỷ lệ nhiễm khuẩn vết mổ giữa khâu và khâu chỉ trong khâu sạch mạch trên bệnh nhân bắc cầu động mạch vành. Tỷ lệ biến chứng và mối liên quan giữa các biến chứng và kỹ thuật khâu chỉ hiện nay còn hạn chế bởi các phương pháp nghiên cứu gồm: số lượng ít, hồi cứu, theo dõi ngắn, không kiểm soát và các biến chứng được xác định hẹp. Phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang vết thương vùng xương ức và xương đùi, trong đó một nửa số vết thương được khâu chỉ trong da (484 vết thương ở xương ức và 516 vết thương ở chân ). Biến chứng được xác định là chảy dịch, ban đỏ, bong tróc, hoại tử, tụ huyết thanh, nhiễm khuẩn. Nhiễm khuẩn được xác định ở các nhóm dịch tiết, điều trị kháng sinh hoặc làm sạch mô hoại tử. Vết thương được kiểm tra tại thời điểm ra viện, vào 1 tuần sau khi ra viện và vào 3-4 tuần sau mổ. Bệnh nhân được đánh giá ưu tiên cho kiểu khâu chỉ sau 3-4 tuần mổ. KẾT QUẢ Cả hai loại vết thương ở chân và xương ức đều không có sự khác biệt về tỷ lệ nhiễm khuẩn theo phương pháp đóng chỉ (gạch chỉ chân = 9,3% so với đóng chỉ chân = 8,9%; p = 0,99, và khâu chỉ xương ức = 0,4% so với đóng chỉ xương ức = 2,5%; p = 0,128); tuy nhiên tỷ lệ biến chứng ở các đoạn dập chỉ cao hơn (gạch chỉ chân = 46,9% so với đóng chỉ chân = 32,6%; p = 0,001, và dập chỉ xương ức = 14,9% so với dập chỉ xương ức = 3,7%; p = 0,00005); tỷ lệ sử dụng chỉ khâu cao hơn khâu chỉ ở các bệnh nhân được khuyến cáo sử dụng chỉ khâu trong da (gạch chỉ xương ức = 75,6%; chân = 74,6% ). Kết luận: Với các yếu tố chủ quan được kiểm soát bằng khâu chỉ và khâu chỉ trong từng bệnh nhân, chúng tôi thấy tỷ lệ nhiễm khuẩn tương đương nhau nhưng tỷ lệ biến chứng tổng thể khi |
OBJECTIVE The purpose of this study was to analyze postoperative morbidity and mortality of patients included in a randomized trial comparing total versus subtotal gastrectomy for gastric cancer. SUMMARY BACKGROUND DATA There is controversy as to whether the optimal surgery for gastric cancer in the distal half of the stomach is subtotal or total gastrectomy. Although only a randomized trial can resolve this oncologic dilemma, the first step is to demonstrate whether the two procedures are penalized by different postoperative morbidity and mortality rates. METHODS A total of 624 patients with cancer in the distal half of the stomach were randomized to subtotal gastrectomy (320) or total gastrectomy (304), both associated with a second-level lymphadenectomy, in a multicenter trial aimed at assessing the oncologic outcome after the two procedures. The end points considered were the occurrence of a postoperative event, complication, or death and length of postoperative stay. RESULTS Nonfatal complications and death occurred in 9% and 1% of subtotal gastrectomy patients and in 13% and 2% of total gastrectomy patients, respectively. Multivariate analysis of postoperative events showed that splenectomy or resection of adjacent organs was associated with a twofold risk of postoperative complications. Random surgery and extension of surgery influenced the length of stay. The mean length of stay, adjusted for extension of surgery, was 13.8 days for subtotal gastrectomy and 15.4 days for total gastrectomy. CONCLUSIONS Our data show that subtotal and total gastrectomies, with second-level lymphadenectomy, performed as an elective procedure have a similar postoperative complication rate and surgical outcome. A conclusive long-term evaluation of the two operations and an accurate estimate of the oncologic impact of surgery on long-term survival, not penalized by excess surgical risk of one of the two operations, are consequently feasible. | MỤC TIÊU Mục đích của nghiên cứu này là phân tích tỷ lệ mắc và tử vong sau mổ của các bệnh nhân trong thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên so sánh cắt toàn bộ dạ dày và cắt bán phần dạ dày. |
OBJECTIVE This study was conducted to determine whether the perioperative administration of octreotide decreases the incidence of pancreatic anastomotic leak after pancreaticoduodenectomy for malignancy. SUMMARY BACKGROUND DATA Three multicenter, prospective, randomized trials concluded that patients who receive octreotide during and after pancreatic resection have a reduction in the total number of complications or a decreased incidence of pancreatic fistula. However, in the subset of patients who underwent pancreaticoduodenectomy for malignancy, either no analysis was performed or no benefit from octreotide could be demonstrated. METHODS A single-institution, prospective, randomized trial was conducted between June 1991 and December 1995 involving 120 patients who were randomized to receive octreotide (150 microg subcutaneously every 8 hours through postoperative day 5) or no further treatment after pancreaticoduodenectomy for malignancy. The surgical technique was standardized, and the pancreaticojejunal anastomosis was created using the duct-to-mucosa or invagination technique. RESULTS The two patient groups were similar with respect to patient demographics, treatment variables, and histologic diagnoses. The rate of clinically significant pancreatic leak was 12% in the octreotide group and 6% in the control group (p = 0.23). Perioperative morbidity was 30% and 25%, respectively. Patients who underwent reoperative pancreaticoduodenectomy had an increased incidence of pancreatic anastomotic leak, whereas those who received preoperative chemoradiation had a decreased incidence of pancreatic anastomotic leak. CONCLUSIONS The routine use of octreotide after pancreaticoduodenectomy for malignancy cannot be recommended. | MỤC TIÊU: Nghiên cứu này được thực hiện nhằm xác định sử dụng octreotide trong phẫu thuật cắt khối tá tụy để điều trị bệnh lý ác tính. Ba nghiên cứu đa trung tâm, tiến cứu, ngẫu nhiên kết luận bệnh nhân được sử dụng octreotide trong và sau phẫu thuật cắt khối tá tụy làm giảm tổng số biến chứng hoặc giảm tỷ lệ rò tụy. Tuy nhiên, ở nhóm bệnh nhân được phẫu thuật cắt khối tá tụy để điều trị bệnh lý ác tính, hoặc không có phân tích hoặc không có lợi ích từ việc sử dụng octreotide. Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu được tiến hành từ tháng 6 năm 1991 đến tháng 12 năm 1995 trên 120 bệnh nhân được chọn ngẫu nhiên để điều trị bằng octreotide (150 microg dưới da 8 giờ sau mổ) hoặc không điều trị tiếp sau cắt khối tá tụy để điều trị bệnh lý ác tính. Kỹ thuật phẫu thuật đã được chuẩn hóa, kỹ thuật nối tụy-tuyến tụy bằng ống thông nối tụy-tuyến tụy hoặc nối tụy bằng phương pháp xâm nhập. Kết quả: Hai nhóm bệnh tương đồng về đặc điểm bệnh nhân, biến số điều trị và chẩn đoán mô bệnh học. Tỷ lệ rò tụy có ý nghĩa lâm sàng ở nhóm dùng octreotide là 12% và ở nhóm chứng là 6% ( p = 0,23 ). Tỷ lệ biến chứng sau phẫu thuật lần lượt là 30% và 25 %. Bệnh nhân sau phẫu thuật cắt khối tá tụy có tỷ lệ rò tụy tăng, trong khi đó bệnh nhân được hóa xạ trị trước phẫu thuật có tỷ lệ rò tụy giảm. Kết luận: Không khuyến cáo sử dụng octreotide thường quy sau phẫu thuật cắt khối tá tụy để điều trị bệnh lý ác tính. |
OBJECTIVE To determine whether division of the short gastric vessels (SGVs) and full mobilization of the gastric fundus is necessary to reduce the incidence of postoperative dysphagia and other adverse sequelae of laparoscopic Nissen fundoplication. SUMMARY BACKGROUND DATA Based on historical and uncontrolled studies, division of the SGVs has been advocated during laparoscopic Nissen fundoplication to improve postoperative clinical outcomes. However, this modification has not been evaluated in a large prospective randomized trial. METHODS One hundred two patients with proven gastroesophageal reflux disease presenting for laparoscopic Nissen fundoplication were prospectively randomized to undergo fundoplication with (52 patients) or without (50 patients) division of the SGVs. Patients with esophageal motility disorders, patients requiring a concurrent abdominal procedure, and patients who had undergone previous antireflux surgery were excluded. Patients were blinded to the postoperative status of their SGVs. Clinical assessment was performed by a blinded independent investigator who used multiple standardized clinical grading systems to assess dysphagia, heartburn, and patient satisfaction 1, 3, and 6 months after surgery. Objective measurement of lower esophageal sphincter pressure, esophageal emptying time, and distal esophageal acid exposure and radiologic assessment of postoperative anatomy were also performed. RESULTS Operating time was increased by 40 minutes (median 65 vs. 105) by vessel division. Perioperative outcomes and complications, postoperative dysphagia, relief of heartburn, and overall satisfaction were not improved by dividing the SGVs. Lower esophageal sphincter pressure, acid exposure, and esophageal emptying times were similar for the two groups. CONCLUSION Division of the SGVs during laparoscopic Nissen fundoplication did not improve any clinical or objective postoperative outcome. | MỤC TIÊU: Phân chia mạch máu ngắn thực quản (TMTQ) và huy động tối đa quỹ dạ dày (MQT) có cần thiết để giảm tỷ lệ khó nuốt sau mổ và các di chứng khác sau mổ hay không. TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢP TỔNG HỢ |
Sabin type 3 polio vaccine virus is the most common cause of poliovaccine associated paralytic poliomyelitis. Vaccine associated paralytic poliomyelitis cases have been associated with Sabin type 3 revertants containing a single U to C substitution at bp 472 of Sabin type 3. A rapid method of identification of Sabin type 3 bp 472 mutants is described. An enterovirus group-specific probe for use in a chemiluminescent dot blot hybridization assay was developed to identify enterovirus positive viral lysates. A reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay producing a 319 bp PCR product containing the Sabin type 3 bp 472 mutation site was then employed to identify Sabin type 3 isolates. Chemiluminescent nucleic acid cycle sequencing of the purified 319 bp PCR product was then employed to identify nucleic acid sequences at bp 472. The enterovirus group probe hybridization procedure and isolation of the Sabin type 3 PCR product were highly sensitive and specific; nucleic acid cycle sequencing corresponded to the known sequence of stock Sabin type 3 isolates. These methods will be used to identify the Sabin type 3 reversion rate from sequential stool samples of infants obtained after the first and second doses of oral poliovirus vaccine. | Virus vắc xin bại liệt Sabin type 3 là nguyên nhân thường gặp nhất gây ra bệnh bại liệt do thuốc chống bại liệt. Các trường hợp vắc xin vắc xin bại liệt do thuốc chống bại liệt có liên quan đến thuốc chống bại liệt Sabin type 3 có chứa một gen U đến C thay thế tại bp 472 của Sabin type 3. Phương pháp xác định nhanh đột biến Sabin type 3 bp 472 được mô tả. Một đầu dò đặc hiệu nhóm enterovirus sử dụng trong lai hóa học chấm blot phát quang được phát triển để xác định các phân lập virus enterovirus dương tính. Một phản ứng sao chép ngược chuỗi polymerase (RT-PCR) tạo ra sản phẩm PCR 319 bp chứa vị trí đột biến Sabin type 3 bp 472 được sử dụng để xác định các phân lập Sabin type 3. Trình tự acid nucleic phát quang của sản phẩm PCR 319 bp tinh khiết được sử dụng để xác định trình tự acid nucleic tại bp 472. Quy trình lai nhóm enterovirus và phân lập sản phẩm PCR Sabin type 3 có độ nhạy và độ đặc hiệu cao; trình tự acid nucleic tương ứng với trình tự acid nucleic đã biết của các chủng Sabin type 3 dự trữ. Các phương pháp này sẽ được sử dụng để xác định tỷ lệ đảo ngược Sabin type 3 từ mẫu phân của trẻ sơ sinh thu được sau khi tiêm liều đầu tiên và liều thứ hai vắc xin bại liệt dạng uống. |
Immunoglobulin (Ig) G was purified from soluble and membrane fractions of postmortem subacute sclerosing panencephalitis (SSPE) brain, multiple sclerosis (MS) brain plaque-periplaque white matter, and normal human brain (NHB) white matter. After homogenization in 0.32 M sucrose and removal of cell debris and nuclei by low-speed centrifugation, soluble and crude membrane fractions were separated by ultracentrifugation. After removal of sucrose by dialysis, IgG was isolated from the soluble fraction by protein A affinity chromatography. IgG was obtained from the membrane fraction by elution at low pH and purification from the eluate by protein A chromatography. Whereas very little IgG was in NHB white matter, significant levels of IgG were recovered from both SSPE and MS brain. Both immunocytochemical staining of measles virus-infected cells in tissue culture and protein immunoblotting of virus-infected cell lysates showed that the IgG from SSPE brain contained activity specific for measles virus protein. The abundance, purity and functional activity of IgG extracted from SSPE and MS brain indicate that IgG extracted from the brain of humans with an inflammatory disease of unknown etiology can be used to identify its corresponding antigen. | Globulin miễn dịch (Ig) G được tinh sạch từ các phân đoạn màng và hòa tan của não bộ bệnh xơ cứng bán cấp sau khi chết, chất trắng periplaque và não người bình thường (NHB ). Sau khi đồng nhất trong phân đoạn 0,32 M sucrose và tách các mảnh tế bào và nhân bằng ly tâm tốc độ chậm, các phân đoạn màng hòa tan và thô được tách bằng phương pháp siêu ly tâm. Sau khi lọc máu, IgG được phân lập từ phân đoạn hòa tan bằng phương pháp sắc ký ái lực protein A. Trong khi IgG có rất ít trong chất trắng NHB, thì hàm lượng IgG thu được từ cả hai loại tế bào SSPE và MS đều cao hơn đáng kể. Cả hai quá trình nhuộm hóa mô miễn dịch của tế bào não nhiễm virus sởi trong nuôi cấy mô và immunoblotting protein của các tế bào nhiễm virus đều cho thấy IgG được tách ra từ não của người mắc bệnh viêm không rõ nguyên nhân có thể được sử dụng để xác định kháng nguyên tương ứng của nó. |
Two techniques for simultaneous detection and typing of plum pox potyvirus (PPV) isolates belonging to the D or M serotypes, heminested PCR (H-PCR) and PCR-ELISA, have been developed. Ten PPV isolates typed using PPV-D and PPV-M specific monoclonal antibodies by ELISA-DASI were used to validate these two methods. The results obtained show a complete coincidence of the nucleic acid-based techniques with the serological data. When serial dilutions of infected plant extracts were assayed, H-PCR and PCR-ELISA were found to be 100 times more sensitive than the more conventional immunocapture-PCR (IC-PCR) assay. Testing of 228 PPV-infected fruit tree samples coming from different hosts and locations indicated that so far only PPV type D appears to be present in Spain and in Chile. Coupled with print-capture sample preparation (Olmos et al., Nucl. Acids Res. 24, 2192-2193, 1996) the increased sensitivity provided by heminested-PCR allowed the detection of PPV targets of D and M types, in wingless individuals of the aphid vector Aphis gossypii. | Hai kỹ thuật phát hiện và định danh đồng thời các chủng vi rút gây bệnh đậu mùa mận thuộc các kiểu huyết thanh D hoặc M, heminested PCR (H-PCR) và PCR-ELISA, đã được phát triển. Mười chủng PPV được định danh bằng kháng thể đơn dòng đặc hiệu PPV-D và PPV-M bằng ELISA-DASI được sử dụng để xác định hai phương pháp này. Kết quả cho thấy sự trùng hợp hoàn toàn giữa kỹ thuật dựa trên acid nucleic với các dữ |
A new method for rapid screening of high-yielding reassortants of influenza virus, as candidates for vaccine production, is described. Oligonucleotide probes specific for all the parent genes of A/PR/8/34 (PR8), except the HA and the NA were designed based on database information available for different influenza strains. Digoxigenin labelled probes were tested by slot-blot hybridizations to purified RNA from a panel of A/PR/8/34 wild type and A/PR/8/34 reassortant viruses. The results show that the vast majority of reassortants selected for their high growth yield had acquired the non-structural (NS), matrix (M) and RNA polymerase 2 (PB2) genes from the PR8 parent. It is proposed that probes for these genes provide the potential for a simple and rapid procedure for selection of candidate high-yield reassortants for vaccine production. | Mô tả một phương pháp mới để sàng lọc nhanh các chất tái tổ hợp có năng suất cao của virus cúm là ứng cử viên cho sản xuất vắc xin. Các đầu dò Oligonucleotide đặc hiệu cho tất cả các gen mẹ của A/PR/8/34 (PR8) ngoại trừ HA và NA được thiết kế dựa trên thông tin cơ sở dữ liệu sẵn có cho các chủng cúm khác nhau. Các đầu dò có nhãn Digoxigenin đã được thử nghiệm bằng lai tạo khe RNA tinh khiết từ một nhóm virus hoang dại A/PR/8 |
The complementation of adenoviral vectors with large deletions in the viral genome was studied. The helper adenovirus used to complement these vectors contains a partial deletion of the packaging signal and the E1 region substituted by the lacZ gene. The effect of vector size on packaging efficiency was analysed in 293 cells using decreasingly shorter vectors expressing GFP from a CMV enhancer-beta-actin promoter. Vectors with longer genomes propagated more efficiently than shorter ones. Vectors containing only the packaging signal and the ITRs of Ad5, having all the viral genes replaced with unrelated sequences packaged as efficiently as vectors of the same size containing adenoviral DNA instead of exogenous DNA. The amounts of helper and vector produced in coinfected 293 cells exhibited the typical cycling fluctuation observed during serial propagation of a virus with defective interfering particles. | Nghiên cứu bổ sung vector adenovirus với sự tiêu diệt lớn trong bộ gen virus. Adenovirus hỗ trợ được sử dụng để bổ sung cho các vector này có chứa sự tiêu diệt một phần tín hiệu đóng gói và vùng E1 được thay thế bởi gen lacZ. Ảnh hưởng của kích thước vector lên hiệu quả đóng gói được phân tích trong 293 tế bào sử dụng các vector ngắn hơn giảm dần biểu hiện GFP từ promoter CMV-beta-actin. Vector có bộ gen dài hơn được nhân lên hiệu quả hơn các vector ngắn hơn. Vector chỉ chứa tín |
Non-radioactive probes that can detect specifically North American and European isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) in formalin-fixed paraffin-embedded tissues by in situ hybridization were developed. These probes allow the differentiation between North American and European genotypes of the PRRS virus as well as the detection of both genotypes. Two amplified cDNA products generated by polymerase chain reaction (PCR), one from the cDNA of the Canadian PRRSV LHVA-93-3 isolate and the second one from the European Lelystad isolate, and labelled with digoxigenin were utilized as probes. The LHVA-93-3 derived probe was found to detect Canadian and USA PRRSV isolates in infected cells, while the Lelystad derived probe hybridized only with European isolates. The specificity of both probes was also demonstrated on formalin-fixed tissues collected from PRRSV infected pigs. Furthermore, by combining the LHVA-93-3 (North American) probe and the Lelystad (European) probe, successful detection of both PRRSV genotypes in fixed tissues could be achieved. | Các thiết bị thăm dò không phóng xạ có thể phát hiện đặc hiệu các chủng vi rút PRRSV gây hội chứng hô hấp và sinh sản ở lợn (PRRSV) từ Bắc Mỹ và châu Âu bằng cách lai tại chỗ. Các thiết bị này cho phép phân biệt các kiểu gen của vi rút PRRS từ Bắc Mỹ và châu Âu cũng như phát hiện cả hai kiểu gen. Hai sản phẩm cDNA khuếch đại được tạo ra bởi phản ứng chuỗi polymerase (PCR ), một từ cDNA của chủng PRRSV LHV |
Sensitive methods are required to study the early pathogenesis of swine vesicular diseases (SVD). Therefore, two new methods, immunohistochemistry (IHC) and in-situ hybridization (ISH), were developed and tested for their specificity and sensitivity. With these methods the SVD virus (SVDV) infection in cytospins of primary porcine kidney cells and in frozen skin sections was investigated. Both IHC and the ISH showed a specific cytoplasmic staining, but the IHC detected more infected cells than the ISH. Furthermore, both IHC and ISH were able to detect SVDV in skin sections 4.5 h after infection. It is concluded that IHC is the most suitable and simplest method to identify cells and tissues that support the initial replication of swine vesicular disease virus. However, IHC can only be applied to frozen sections, whereas ISH can also be used in paraformaldehyde-fixed tissues. | Các phương pháp nhạy cảm là cần thiết để nghiên cứu bệnh sinh sớm của bệnh túi mủ lợn (SVD). |
An adaptation of the conventional procedure for fixation of brain impressions prior to rabies testing was developed using a microwave oven to fix slides in less than 1 min. A total of 2394 routine specimens were examined to evaluate the efficacy of microwave fixation of brain impressions as an aid to shortening the turnaround time for reporting. Slides were fixed for 55-60 s in a standard household microwave oven at 50%, power using phosphate buffered saline supplemented with 3% Tween 20 as a fixative medium. They were then stained using the standard rabies immunofluorescent staining procedure with minor modifications. This process potentially could allow results to be reported to submitters within 1.5 h after specimens arrive in the laboratory. Microwave fixation was in complete agreement with conventional acetone fixation for detection of positive rabies specimens. | Đã phát triển một quy trình thích ứng với phương pháp cố định dấu ấn não thông thường trước xét nghiệm bệnh dại bằng lò vi sóng để cố định slide trong vòng chưa đầy 1 phút. Tổng cộng 2.394 mẫu bệnh phẩm được kiểm tra để đánh giá hiệu quả của phương pháp cố định dấu ấn não bằng lò vi sóng như một cách giúp rút ngắn thời gian quay vòng báo cáo. Slides được cố định trong khoảng 55-60 giây trong lò vi sóng gia dụng tiêu chuẩn ở mức 50 %, sử dụng nước muối đệm phốt phát có bổ sung 3% Tween 20 làm môi |
Several monoclonal antibodies (mAbs) were produced against feline immunodeficiency virus (FIV) p24 capsid antigen. One of these, F2710, reacted strongly, not only with viral p24 and recombinant p24, but also with p50 Gag precursor protein in Western blot. Epitope mapping analysis revealed that mAb F2710 recognizes a heptapeptide, SFIDRLF, in the FIV p24 amino acid sequence. As this portion of FIV p24 is highly conserved among various FIV strains, the mAb seems to be a useful tool for detecting FIV p24 antigen in various samples. By means of this mAb and rabbit anti-p24 polyclonal antibody, an antigen capture ELISA was developed. The ELISA detected viral p24 antigen with good linearity. The lower detection limit of this assay is 40 pg/ml of recombinant p24 antigen, which is at least as sensitive as the reverse transcriptase assay in detecting FIV virion. Thus, this system is valuable for monitoring FIV replication in vitro. | Một số kháng thể đơn dòng (mAb) được tạo ra để chống lại kháng nguyên gây suy giảm miễn dịch ở mèo (FIV) p24 capsid. Một trong số đó, F2710, phản ứng mạnh không chỉ với p24 và p24 tái tổ hợp, mà còn với protein tiền chất p50 Gag trong Western blot. Phân tích ánh xạ biểu hiện cho thấy mAb F2710 nhận ra một heptapeptide, SFIDRLF, trong chuỗi amino acid FIV p24. Vì |
Murine cytomegalovirus (MCMV) can only be propagated effectively in mouse embryo fibroblast (MEF) cells. We demonstrate that MCMV replicates significantly better in M2-10B4 cells, a continuous line of murine bone marrow stromal cells. M2-10B4 cells were also comparable to MEF cells for detection of small amounts of MCMV reactivating from latently infected spleen explants. M2-10B4 cells will be very useful for studies of MCMV pathogenesis. | Cytomegalovirus (MCMV) trong tế bào nguyên bào sợi phôi chuột chỉ có thể nhân lên hiệu quả. Chúng tôi chứng minh rằng MCMV nhân lên tốt hơn đáng kể trong tế bào M2-10B4, một dòng tế bào mô đệm tủy xương chuột liên tục. Các tế bào M2-10B4 cũng có thể so sánh với tế bào MEF để phát hiện một lượng nhỏ MCMV hoạt hóa từ mẫu lá lách tiềm ẩn bị nhiễm bệnh. Các tế bào M2-10B4 sẽ rất hữu ích cho các |
This study describes the development and evaluation of a cost effective test rationale for the detection of anti-HCV in dried blood spots. Samples were screened using an 'in house' IgG ELISA that incorporated the recombinant proteins c22-3, c200 and NS5. Confirmation of specific antibody to HCV was by a modification of the immunoblot RIBA 3.0. An extensive panel of well evaluated anti-HCV positive and negative samples from the UK and South Africa were used to assess the sensitivity and specificity of the two tests. One third of the anti-HCV positive samples had been typed. All anti-HCV positive samples were detected by the 'in house' screening EIA. Test/negative optical density ratios showed that more than 95% of reactive samples produced values greater than 5.0. Antibodies to HCV could be detected in a wide range of samples derived from asymptomatic and symptomatic patients and of different genotypes, with similar sensitivity. The presence of anti-HCV could be confirmed by RIBA 3.0 in samples with low reactivity but not in anti-HCV negative samples. Furthermore the immunoblot assay successfully increased specificity by screening out false reactive EIA samples that might occur in an epidemiological survey of a multi-ethnic population. | Nghiên cứu này mô tả việc xây dựng và đánh giá một xét nghiệm hiệu quả về chi phí trong phát hiện kháng thể kháng HCV tại các đốm máu khô. Các mẫu được sàng lọc bằng IgG ELISA 'nội bộ ' kết hợp với các protein tái tổ hợp c22-3, c200 và NS5. Xác định kháng thể đặc hiệu cho HCV bằng cách sửa đổi immunoblot RIBA 3.0. Sử dụng bảng đánh giá rộng rãi các mẫu kháng thể kháng HCV dương tính và âm tính từ Anh và Nam Phi để đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu của hai xét nghiệm. 1/3 mẫu dương tính với HCV được đánh giá bằng xét nghiệm EIA sàng lọc 'nội bộ '. Tỷ số mật độ quang âm tính cho thấy trên 95% mẫu phản ứng tạo ra giá trị lớn hơn 5.0. Kháng thể kháng HCV có thể được phát hiện ở nhiều mẫu có nguồn gốc từ bệnh nhân không triệu chứng và có triệu chứng, thuộc nhiều kiểu gen khác nhau, có độ nhạy tương tự nhau. Sự hiện diện của kháng thể kháng HCV có thể được xác nhận bằng xét nghiệm RIBA 3.0 ở các mẫu có phản ứng thấp nhưng không có ở các mẫu có phản ứng âm tính. Hơn nữa, xét nghiệm immunoblot đã làm tăng độ đặc hiệu thành công bằng cách sàng lọc các mẫu phản ứng giả có thể xảy ra trong một cuộc điều tra dịch tễ học đa dân tộc. |
Hepatitis B e antigen (HBeAg) polypeptide in the circulation (p17e) is composed of ten amino acids (aa) coded for by the precore region and 149 aa by the core gene of hepatitis B virus. A monoclonal antibody (Y0583A) was raised against the N-terminal ten amino acids (SKLCLGWLWG) encoded by the precore region. The binding of Y0583A with a panel of 203 decapeptides on multipins, which covered the precursor of HBeAg polypeptide made of 212 aa shifting by one aa, recognized an epitope sequenced LGWLWG representing the C-terminal six aa coded for by the precore region. This HBeAg epitope was not readily accessible on HBeAg in serum, but it became exposed and bound with Y0583A by treatment with 0.2 N NaOH. Using Y0583A, an enzyme-linked immunosorbent assay was developed for specific determination of HBeAg. The test sample was incubated with the monoclonal antibody to an HBeAg determinant encoded by the core gene (904) that had been immobilized on a solid support. Captured HBeAg was treated with 0.2 N NaOH, neutralized and released into the fluid phase. The reactant was then tested for a sandwich between monoclonal antibody (C33) to the C-terminus of the HBeAg polypeptide immobilized on a solid support and Y0583A labeled with horseradish peroxidase. | Kháng nguyên viêm gan B e (HBeAg) trong tuần hoàn (p17e) gồm 10 amino acid (aa) được mã hóa bởi vùng tiền thân và 149 aa bởi gen lõi của virus viêm gan B. Một kháng thể đơn dòng (Y0583A) được nuôi cấy chống lại 10 amino acid đầu N (SKLCLGWLWG) được mã hóa bởi vùng tiền thân. Sự gắn kết của Y0583A với một bảng gồm 203 decapeptide trên các nhân, trong đó bao phủ tiền chất của polypeptide HBeAg được tạo thành từ 212 aa chuyển đổi bởi một aa, đã nhận ra một epitope LGWLWG đại diện cho 6 aa đầu C được mã hóa bởi vùng tiền thân. Biểu hiện HBeAg này không dễ dàng tiếp cận trên HBeAg trong huyết thanh, nhưng nó đã bị phơi bày và liên kết với Y0583A bằng cách điều trị bằng NaOH 0,2 N. Sử dụng Y0583A, một xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme đã được phát triển để xác định cụ thể HBeAg. Mẫu thử nghiệm được ủ với kháng thể đơn dòng với một chất quyết định HBeAg được mã hóa bởi gen lõi (904) đã được cố định trên một nền cứng. HBeAg bị bắt được xử lý bằng NaOH 0,2 N, được trung hòa và giải phóng vào pha lỏng. Chất phản ứng sau đó được thử nghiệm cho một sự sandwich giữa kháng thể đơn dòng (C33) với điểm cuối C của polypeptide HBeAg cố định trên nền cứng và Y0583A được dán nhãn peroxidase cải ngựa. |
The 'long PCR' was used for amplification of hepatitis C virus (HCV) subgenomic fragments from liver. After testing several commercially available systems, it was found that Tth as the major enzyme is superior to using Taq. Employing a mixture of Tth and Vent polymerase (rTth polymerase, XL, Perkin Elmer) it was possible to amplify 4.6-kb and 9-kb fragments from biological samples containing as little as 10(2) and 10(4) viral copies, respectively. It was also demonstrated that 'long PCR' is useful for joining together large size amplification products. | Kỹ thuật realtime PCR khuếch đại các đoạn gen phụ của virus viêm gan C (HCV) từ gan bằng kỹ thuật realtime PCR kéo dài. Sau khi thử nghiệm một số hệ thống thương mại, người ta nhận thấy Tth là enzyme chính vượt trội so với sử dụng Taq. Sử dụng hỗn hợp Tth và Vent polymerase (rTth polymerase, XL, Perkin Elmer) có thể khuếch đại các đoạn 4,6-kb và 9-kb từ các mẫu sinh học chứa ít nhất 10 (2) và 10 (4 |
A point mutation assay was developed to detect the quantitative prevalence of mutations at codons 460 (M to I; M to V), 520 (H to Q), 594 (A to V) and 595 (L to F; L to S) within the UL97 gene of human cytomegalovirus which segregate with ganciclovir resistance. Synthetic mixtures of wild-type and mutant plasmids containing the UL97 gene were amplified by nested polymerase chain reaction and the 700 base pair amplicon subsequently subjected to the point mutation assay. In plasmid reconstruction experiments, there was a high correlation between experimentally derived percentage mutant with the theoretical values. The assay was then used to assess the changes in the genetic composition of the UL97 gene in three patients on prolonged ganciclovir therapy. All three patients developed genotypic resistance against ganciclovir involving mutation at codon L595S, L595F and double mutation at codons L595F and M460I. In one patient, alteration of therapy to foscarnet did not affect the composition of UL97 and virus remained genotypically resistant to ganciclovir. In contrast, in two patients whose therapy was altered to cidofovir (HPMPC), repopulation with cytomegalovirus strains carrying the wild-type (ganciclovir-sensitive) codon at positions 595 and 460 occurred. The potential use of this assay for the rapid detection of cytomegalovirus resistance in patients on long-term ganciclovir therapy is discussed. | Nghiên cứu được thực hiện nhằm xác định tỷ lệ các đột biến ở codon 460 (M đến I; M đến V), 520 (H đến Q), 594 (A đến V) và 595 (L đến F; L đến S) trong gen UL97 của vi rút gây u tế bào ung thư (cytomegalovirus) người tách biệt với ganciclovir. Các plasmid tổng hợp kiểu dại và đột biến có chứa gen UL97 được khuếch đại bằng phản ứng chuỗi polymerase lồng nhau và cặp base 700 amplicon sau đó được khảo sát đột biến điểm. Trong các thí nghiệm tái tạo plasmid, có mối tương quan giữa các đột biến có nguồn gốc thực nghiệm với giá trị lý thuyết. Sau đó, nghiên cứu được sử dụng để đánh giá sự thay đổi thành phần di truyền của gen UL97 ở ba bệnh nhân điều trị ganciclovir kéo dài. Cả ba bệnh nhân đều phát triển đề kháng với ganciclovir liên quan đến đột biến ở codon L595S, L595F và đột biến kép ở codon L595F và M460I. Ở một bệnh nhân, việc chuyển sang foscarnet không ảnh hưởng đến thành phần của gen UL97 và vi rút vẫn đề kháng với ganciclovir. Ngược lại, ở hai bệnh nhân đã điều trị bằng cidofovir (HPMPC ), việc tái sinh ở các chủng mang gen UL97 (nhạy cảm với ganciclovir) ở vị trí 595 và 460 đã xảy ra. Khả năng sử dụng của nghiên cứu này để phát hiện nhanh sự đề kháng của cytomegalovirus ở những bệnh nhân điều trị ganciclovir dài hạn được đề cập. |
Aminoguanidine, a nucleophilic hydrazine, has been shown to be capable of blocking the formation of advanced glycation end products. It reduces the development of atherosclerotic plaques and prevents experimental diabetic nephropathy. We have found that aminoguanidine is also quite potent at inhibiting semicarbazide-sensitive amine oxidase (SSAO) both in vitro and in vivo. The inhibition is irreversible. This enzyme catalyses the deamination of methylamine and aminoacetone, which leads to the production of cytotoxic formaldehyde and methylglyoxal, respectively. Serum SSAO activity was reported to be increased in diabetic patients and positively correlated with the amount of plasma glycated haemoglobin. Increased SSAO has also been demonstrated in diabetic animal models. Urinary excretion of methylamine is substantially increased in the rats following acute or chronic treatment with aminoguanidine. Urinary methylamine levels were substantially increased in streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats following administration of aminoguanidine. The non-hydrazine SSAO inhibitor (E)-2-(4-fluorophenethyl)-3-fluoroallylamine hydrochloride (MDL-72974A) has been shown to reduce urinary excretion of lactate dehydrogenase (an indicator of nephropathy) in STZ-induced diabetic rats. Formaldehyde not only induces protein crosslinking, but also enhances the advanced glycation of proteins in vitro. The results support the hypothesis that increased SSAO-mediated deamination may be involved in structural modification of proteins and contribute to advanced glycation in diabetes. The clinical implications for the use of aminoguanidine to prevent glycoxidation have been discussed. | Aminoguanidine là một hydrazine ái nhân, đã được chứng minh là có khả năng ngăn chặn sự hình thành các sản phẩm cuối cùng glycation tiên tiến. Nó làm giảm sự phát triển của các mảng xơ vữa động mạch và ngăn ngừa bệnh thận đái tháo đường thực nghiệm. Chúng tôi đã phát hiện aminoguanidine cũng khá mạnh trong việc ức chế semicarbazide nhạy cảm với amine oxidase (SSAO) cả in vitro và in vivo. Sự ức chế là không thể đảo ngược. Enzyme này xúc tác quá trình khử amin methylamine và aminoacetone, dẫn đến sản sinh ra formaldehyd gây độc tế bào và methylglyoxal tương ứng. Hoạt tính SSAO huyết thanh được báo cáo là tăng ở bệnh nhân đái tháo đường và có tương quan thuận với lượng hemoglobin glycated huyết tương. SSAO tăng cũng đã được chứng minh trên mô hình động vật gây đái tháo đường. Bài tiết methylamine qua nước tiểu tăng đáng kể ở chuột sau điều trị cấp tính hoặc mãn tính với aminoguanidine. Methylamine qua nước tiểu tăng đáng kể ở chuột gây đái tháo đường do streptozotocin (STZ) sau khi dùng aminoguanidine. Chất ức chế SSAO khônghydrazine (E) - 2-( 4-fluorophenethyl) - 3-fluoroallylamine hydrochloride (MDL-72974A) đã được chứng minh làm giảm bài tiết lactate dehydrogenase qua nước tiểu ở chuột đái tháo đường gây ra bởi STZ. Formaldehyde không chỉ gây liên kết chéo protein mà còn tăng cường sự tăng đường huyết ở chuột đái tháo đường. Các kết quả lâm sàng đã hỗ trợ giả thuyết rằng việc tăng SSAO qua trung gian có thể liên quan đến sự biến đổi cấu trúc protein và góp phần gây ra đường huyết tiến triển ở chuột đái tháo đường. Các kết quả lâm sàng đã được thảo luận về việc sử dụng aminoguanidine để ngăn chặn sự tăng đường huyết. |
Hepatic glucose output is decreased by hyperglycaemia through an unknown mechanism. We hypothesize that free radicals generated by hyperglycaemic pseudohypoxia might cause glucose output to decrease by inhibiting glucose 6-phosphatase - a key enzyme of gluconeogenesis. To prove this a model experiment was performed on a microsome fraction of rat liver. One of the characteristic features of pseudohypoxia due to hyperglycaemia is an increase in the ratio of NADH/NAD+, so in the present study the changes in NADH - induced glucose 6-phosphatase activity were investigated as related to the release of inorganic phosphate (Pi) derived from glucose 6-phosphate. After incubation for 50 min, Pi release was significantly reduced by NADH (4.026 +/- 0.189 vs 2.696 +/- 0.429 micromol x l(-1) x mg protein(-1), control vs NADH samples, p < 0.01). The decrease in the activity of glucose 6-phosphatase generated by NADH was prevented by using desferrioxamine, an irreversible ferric chelator, butylated hydroxytoluene and Trolox, two agents which inhibit lipid peroxidation, and reduced glutathione, a non-specific radical scavenger. Superoxide dismutase, catalase and the hydroxyl radical scavenger dimethyl sulphoxide proved to be ineffective. When the above investigations were carried out in the presence of a ferric-EDTA complex the inhibition of glucose 6-phosphatase was found to be inducible by hydrogen peroxide and/or hydroxyl free radicals. These investigations seem to indicate that pseudohypoxia due to hyperglycaemia can inhibit the activity of glucose 6-phosphatase both by lipid peroxidation and by inducing hydrogen peroxide and/or hydroxyl free radicals and thus it may play a part in the glucose-induced decrease of hepatic glucose output. | Tăng glucose huyết có thể làm giảm glucose huyết ở gan thông qua một cơ chế chưa được biết rõ. Chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng các gốc tự do tạo ra bởi tăng glucose huyết pseudohypoxia có thể làm giảm glucose huyết bằng cách ức chế glucose 6-phosphatase-một enzyme chủ chốt của gluconeogenesis. Để chứng minh điều này, một thí nghiệm mô hình đã được thực hiện trên một phần nhỏ của gan chuột. Một trong những đặc điểm đặc trưng của pseudohypoxia do tăng glucose huyết là sự gia tăng tỷ lệ NADH/NAD +, vì vậy trong nghiên cứu này, những thay đổi trong hoạt động glucose 6-phosphatase gây ra bởi NADH đã được nghiên cứu liên quan đến việc giải phóng phosphate vô cơ (Pi) có nguồn gốc từ glucose 6-phosphate. Sau khi ủ trong 50 phút, giải phóng Pi đã bị giảm đáng kể bởi NADH (4,026 +/- 0,189 so với 2,696 +/- 0,429 micromol x l (-1) x mg protein (-1), đối chứng so với mẫu NADH, p < 0,01). Sự giảm hoạt động của glucose 6-phosphatase tạo ra bởi NADH đã được ngăn chặn bằng desferrioxamine, một chất tạo chelator sắt không thể đảo ngược, butylated hydroxytoluene và Trolox, hai chất ức chế peroxy hóa lipid và làm giảm glutathione, một chất tẩy gốc không đặc hiệu. Superoxide dismutase, catalase và các gốc tự do hydroxyl dimethyl sulphoxide đã chứng tỏ là không hiệu quả. Khi các nghiên cứu trên được thực hiện với sự có mặt của phức hợp sắt-EDTA, sự ức chế glucose 6-phosphatase đã được tìm thấy bằng cách kích thích bởi các gốc tự do hydro peroxide và/hoặc hydroxyl. Những nghiên cứu này dường như chỉ ra rằng pseudohypoxia do tăng glucose huyết có thể ức chế hoạt động của glucose 6-phosphatase bằng cả peroxy hóa lipid và tạo ra các gốc tự do hydro peroxide và/hoặc hydroxyl và do đó nó có thể đóng vai trò trong việc làm giảm glucose huyết do |
Multiple injections of low-dose streptozotocin induce lymphocytic insulitis and autoimmune diabetes in male CD-1 mice. Prior to the onset of insulitis, macrophages infiltrate the islets (single cell insulitis) and presumably help initiate the lymphocytic response directed at streptozotocin-induced neoantigens on islet beta cells. Essential fatty acid deficiency ameliorates the lymphocytic insulitis and prevents diabetes in this model. We hypothesize that essential fatty acid deficiency, which perturbs eicosanoid pathways and blocks the production of inflammatory mediators such as leukotriene B4, might prevent or diminish the single cell insulitis and, thus, abrogate the lymphocytic response. The purpose of the study was to determine whether essential fatty acid deficiency causes any differences in the immunophenotype or the time course of single cell insulitis or insulitis after low-dose streptozotocin. Three to five essential fatty acid deficient and 3-5 control mice were treated with low-dose streptozotocin and killed on days 0, 3, 5, 8, 10, 12 and 15. Frozen sections of the pancreata were stained using an immunoperoxidase method with antibodies against mouse macrophages, CD4T-lymphocytes and CD8 T-lymphocytes. Sections were assessed for the presence and severity of single cell insulitis and insulitis. Based on cell counts in the most severely involved islet from each pancreas, there was no difference in the single cell insulitis in control and essential fatty acid deficient mice. Islets from control pancreata had a higher mean grade of lymphocytic insulitis. These findings suggest that autoimmune diabetes following low-dose streptozotocin in control mice is the result of both lymphocytic and histiocytic infiltrates with subsequent beta-cell destruction. Our results do not support the hypothesis that the protective effect of essential fatty acid deficiency is due to diminished influx of macrophages into the islets. It is, however, possible that essential fatty acid deficiency deleteriously affects macrophage function and, thus, blunts the lymphocytic response. | Tiêm nhiều lần streptozotocin liều thấp đã gây viêm loét đại thực bào và đái tháo đường tự miễn ở chuột nhắt trắng đực mang gen CD-1. Trước khi viêm loét đại thực bào xuất hiện, đại thực bào xâm nhập vào tiểu đảo (viêm loét tiểu bào đơn) và có thể giúp khởi động đáp ứng lymphocytic với neoantigens gây bởi streptozotocin trên tế bào beta tiểu đảo. Sự thiếu hụt acid béo thiết yếu làm cải thiện viêm loét đại thực bào và ngăn ngừa bệnh đái tháo đường trên mô hình này. Chúng tôi giả thiết rằng sự thiếu hụt acid béo thiết yếu, gây rối loạn đường dẫn truyền eicosanoid và ngăn chặn sự sản sinh các chất trung gian gây viêm như leukotriene B4, có thể ngăn chặn hoặc làm giảm viêm loét tiểu bào đơn và do đó làm mất đáp ứng lymphocytic. Mục đích của nghiên cứu là xác định sự thiếu hụt acid béo thiết yếu gây ra sự khác biệt về kiểu hình miễn dịch hay thời gian bị viêm loét tiểu bào đơn hoặc sau tiêm streptozotocin liều thấp. Chuột bị viêm loét tiểu đảo tụy nặng nhất được điều trị bằng streptozotocin liều thấp và bị tiêu diệt vào các ngày 0,3,5,8,10,12 và 15. Các đoạn của tụy bị đông lạnh được nhuộm màu bằng phương pháp immunoperoxidase với kháng thể chống lại đại thực bào, CD4T-lymphocytes và T-lymphocytes CD8. Các đoạn được đánh giá sự hiện diện và mức độ nặng của viêm loét tiểu đảo tụy. Dựa trên số lượng tế bào ở chuột bị viêm loét tiểu đảo tụy nặng nhất, không có sự khác biệt về viêm loét tiểu đảo tụy đơn bào và viêm loét tiểu đảo tụy. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi không ủng hộ giả thuyết cho rằng sự thiếu hụt acid béo thiết yếu có tác dụng bảo vệ do đại thực bào xâm nhập vào tiểu đảo tụy. Tuy nhiên, có thể sự thiếu hụt acid béo thiết yếu ảnh hưởng nghiêm trọng đến chức năng đại thực bào và làm giảm đáp ứng lymphocytic. |
Neuropeptide Y in the hypothalamus is a potent physiological stimulator of feeding, and may contribute to the characteristic metabolic defects of obesity when hypothalamic levels remain chronically elevated. Since corticosterone and insulin are important regulators of fuel metabolism, the longitudinal effects of chronic (6 days) intracerebroventricular infusion of neuropeptide Y in normal rats on the hypothalamo-pituitary-adrenal axis and on insulin secretion were studied. Neuropeptide Y-infused rats were either allowed to eat ad libitum, or were pair-fed with normophagic control rats. Neuropeptide Y increased the basal plasma concentrations of adrenocorticotropic hormone and corticosterone during the first 2 days of its intracerebroventricular infusion and increased cold stress-induced plasma adrenocorticotropic hormone concentrations. After 4-6 days of central neuropeptide Y infusion, however, basal plasma adrenocorticotropic hormone and corticosterone concentrations were no different from control values (except in ad libitum-fed rats in which corticosteronaemia remained elevated), they were unaffected by the stress of cold exposure, and the hypothalamic content of corticotropin-releasing factor immunoreactivity was significantly decreased. A state of hyperinsulinaemia was present throughout the 6 days of intracerebroventricular neuropeptide Y infusion, being more marked in the ad libitum-fed than in the pair-fed group. The proportions of insulin, proinsulin, and conversion intermediates in plasma and pancreas were unchanged. Hyperinsulinaemia of the pair-fed neuropeptide Y-infused rats was accompanied by muscle insulin resistance and white adipose tissue insulin hyperresponsiveness, as assessed by the in vivo uptake of 2-deoxyglucose. Finally, bilateral subdiaphragmatic vagotomy prevented both the basal and the marked glucose-induced hyperinsulinaemia of animals chronically infused with neuropeptide Y, demonstrating that central neuropeptide Y-induced hyperinsulinaemia is mediated by the parasympathetic nervous system. | Neuropeptide Y ở vùng dưới đồi là một chất kích thích sinh lý mạnh trong việc nuôi dưỡng, và có thể góp phần gây ra các khiếm khuyết về chuyển hóa đặc trưng của béo phì khi nồng độ vùng dưới đồi tăng cao mãn tính. Vì corticosterone và insulin là chất điều hòa quan trọng trong chuyển hóa nhiên liệu, nên tác dụng theo chiều dọc của truyền Neuropeptide Y trong 6 ngày đầu ở chuột bình thường trên trục hạ đồi-tuyến yên-tuyến chậu và trên bài tiết insulin đã được nghiên cứu. Chuột được truyền Neuropeptide Y hoặc được cho ăn ad libitum, hoặc được cho ăn cặp với chuột đối chứng bình thường. Neuropeptide Y làm tăng nồng độ hormone tuyến thượng thận và corticosterone trong 2 ngày đầu truyền nội thất và làm tăng nồng độ hormone tuyến thượng thận do stress gây ra. Tuy nhiên, sau 4-6 ngày truyền neuropeptide Y trung tâm, nồng độ hormone tuyến thượng thận và corticosterone huyết tương không khác biệt so với nhóm đối chứng (ngoại trừ chuột nuôi ad libitum mà corticosterona vẫn tăng cao) và hàm lượng miễn dịch do yếu tố giải phóng corticotropin giảm đáng kể. Tình trạng tăng sán lá gan bé xuất hiện trong 6 ngày truyền neuropeptide Y trung ương, đặc biệt ở nhóm nuôi cặp với neuropeptide Y. Tỷ lệ insulin, proinsulin và chất trung gian chuyển hóa trong huyết tương và tụy không thay đổi. Tăng sán lá gan bé ở chuột nuôi cặp với neuropeptide Y được tăng cường kháng insulin cơ và tăng phản ứng insulin mô mỡ trắng, được đánh giá bằng cách hấp thu in vivo 2-deoxyglucose. Cuối cùng, mở phế vị hai bên cơ hoành đã ngăn chặn cả tăng sán lá gan bé và tăng sán lá gan bé do glucose gây ra ở động vật truyền Neuropeptide Y trung gian, chứng tỏ rằng tăng sán lá gan bé do neuropeptide Y trung gian được trung gian bởi hệ thần kinh đối giao cảm. |
The effects of 4 weeks' administration of pramlintide, an analogue of the human hormone amylin, on blood glucose control in 215 patients with insulin-dependent diabetes mellitus were examined in a 4-week, randomized, double-blind, placebo-controlled, parallel-group trial. Pramlintide was administered subcutaneously prior to meals in four dosing regimens: 30 microg four times per day (breakfast, lunch, dinner, and evening snack), 30 microg three times per day (breakfast, lunch and dinner [BLD]), 30 microg three times per day (breakfast, dinner and evening snack [BDS]), and 60 microg twice per day (breakfast and dinner). After 4 weeks of pramlintide 30 microg four times per day administration, there was a statistically significant reduction in the mean 24 h plasma glucose concentration when compared to placebo (-1.4 +/- 0.5 vs 0.3 +/- 0.5 micromol/l, p = 0.009). Serum fructosamine concentrations were reduced 62 +/- 10 micromol/l in the pramlintide 30 mg four times per day group, 43 +/- 7 micromol/l in the pramlintide 30 microg three times per day (BLD) group, 47 +/- 6 micromol/l in the pramlintide 30 microg three times per day (BDS) group, 46 +/- 7 micromol/l in the pramlintide 60 microg twice per day group, and 29 +/- 8 micromol/l by placebo. The incidence of hypoglycaemia was not different in any pramlintide group compared to the placebo group. Nausea, the most frequent adverse event, subsided after the first week of treatment in the majority of patients. In conclusion, pramlintide improved blood glucose control over a 4-week period without increased hypoglycaemia and was well tolerated. Future studies using a longer period of pramlintide administration with assessment of HbA1c as the measurement of glycaemic control are warranted. | Tác dụng của pramlintid, một chất tương tự hormon amylin ở người, kiểm soát đường huyết trên 215 bệnh nhân đái tháo đường phụ thuộc insulin được khảo sát trong 4 tuần, thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên, mù đôi, có đối chứng, nhóm song song. Pramlintid được tiêm dưới da trước bữa ăn với 4 phác đồ: 30 microg 4 lần/ngày (sáng, trưa, tối và bữa ăn nhẹ buổi tối) 30 microg 3 lần/ngày (sáng, trưa và bữa ăn nhẹ buổi tối [BLD]) 30 microg 3 lần/ngày (sáng, tối và bữa ăn nhẹ buổi tối [BDS]) và 60 microg 2 lần/ngày (sáng và tối). |
In order to evaluate the role of portal insulin in the modulation of hepatic glucose production (HGP), measurements of plasma glucose and insulin concentrations and both HGP and peripheral glucose disappearance rates were made following an infusion of a dose of tolbutamide (0.74 mg x m(-2) x min[-1]) in healthy volunteers that does not result in an increase in peripheral vein insulin concentrations or metabolic clearance rate of glucose. The results showed that the infusion of such a dose of tolbutamide was associated with a significant and rapid decline in both HGP (from 9.0 +/- 0.5 to 7.7 +/- 0.5 micromol x kg(-1) x min(-1) or delta = -13.8 +/- 4.5%; p < 0.001 compared to saline) and plasma glucose concentration (from 5.1 +/- 0.2 to 4.4 +/- 0.1 mmol/l or delta = -13.0 +/- 2.1%; p < 0.01 compared to saline). Since neither HGP nor fasting glucose fell when tolbutamide-stimulated insulin secretion was inhibited by the concurrent administration of somatostatin, it indicated that tolbutamide by itself, does not directly inhibit HGP. Finally, HGP fell by 26.3 +/- 6.0% at 10 min after a dose of tolbutamide that elevated both peripheral and portal insulin concentrations, at a time when HGP had barely increased (delta = +6.9 +/- 5.3%). The difference in the magnitude of the two responses was statistically significant (p < 0.03), providing further support for the view that insulin can directly inhibit HGP, independent of any change in flow of substrates from periphery to liver. | Nghiên cứu này nhằm đánh giá vai trò của insulin cửa trong điều hòa sản xuất glucose ở gan (HGP) bằng cách truyền tolbutamide liều 0,74 mg x m (-2) x min (-1) ở người khoẻ mạnh, không làm tăng nồng độ insulin tĩnh mạch ngoại biên hoặc tốc độ thanh thải glucose. Kết quả cho thấy, truyền tolbutamide liều 0,74 mg x m (-2) x min (-1) ở người khoẻ mạnh không làm giảm nồng độ insulin tĩnh mạch ngoại biên hoặc tốc độ thanh thải glucose. Kết quả cho thấy, khi truyền tolbutamide liều này, nồng độ glucose huyết tương (từ 5,1 +/- 0,2 đến 4,4 +/- 0,1 mmol/l hoặc delta = -13,0 +/- 2,1%; p < 0,01 so với nước muối) giảm nhanh và đáng kể ở cả hai nồng độ HGP (từ 9,0 +/- 0,5 đến 7,7 +/- 0,5 micromol x kg (-1) x min (-1) hoặc delta = -13,8 +/- 4,5%; p < 0,001 so với nước muối) và nồng độ glucose huyết tương (từ 5,1 +/- 0,2 đến 4,4 +/- 0,1 mmol/l hoặc delta = -13,0 +/- 2,1%; p < 0,01 so với nước muối). |
Little is known about the epidemiology of cardiac disease in diabetic end-stage renal disease. We therefore prospectively followed a cohort of 433 patients who survived 6 months after the inception of dialysis therapy for an average of 41 months. Clinical and echocardiographic data were collected yearly. At baseline, diabetic patients (n = 116) had more echocardiographic concentric left ventricular hypertrophy (50 vs 38%, p = 0.04), clinically diagnosed ischaemic heart disease (32 vs 18%, p = 0.003) and cardiac failure (48 vs 24%, p < 0.00001) than non-diabetic patients (n = 317). After adjusting for age and sex, diabetic patients had similar rates of progression of echocardiographic disorders, and de novo cardiac failure, but higher rates of de novo clinically diagnosed ischaemic heart disease (RR 3.2, p = 0.0002), overall mortality (RR 2.3, p < 0.0001) and cardiovascular mortality (RR 2.6, p < 0.0001) than non-diabetic patients. Mortality was higher in diabetic patients following admission for clinically diagnosed ischaemic heart disease (RR 1.7, p = 0.05) and cardiac failure (RR 2.2, p = 0.0003). Among diabetic patients older age, left ventricular hypertrophy, smoking, clinically diagnosed ischaemic heart disease, cardiac failure and hypoalbuminaemia were independently associated with mortality. The excessive cardiac morbidity and mortality of diabetic patients seem to be mediated via ischaemic disease, rather than progression of cardiomyopathy while on dialysis therapy. Potentially remediable risk factors include smoking, left ventricular hypertrophy, and hypoalbuminaemia. | Hiện nay có ít thông tin về dịch tễ tim mạch ở bệnh nhân đái tháo đường (ĐTĐ) giai đoạn cuối. Do đó chúng tôi tiến hành nghiên cứu tiền cứu một đoàn hệ gồm 433 bệnh nhân sống thêm 6 tháng sau khi bắt đầu điều trị lọc máu, trung bình 41 tháng. Các số liệu lâm sàng và siêu âm tim được thu thập hàng năm. Thời điểm ban đầu, bệnh nhân ĐTĐ (n = 116) có sự gia tăng của phì đại tâm thất trái đồng tâm (50 so với 38% p = 0,04) và bệnh thiếu máu cục bộ (32 so với 18% p = 0,003) và suy tim (48 so với 24% p < 0,00001) so với bệnh nhân không ĐTĐ (n = 317 ). Sau khi điều chỉnh theo tuổi và giới tính, bệnh nhân ĐTĐ có sự tiến triển của rối loạn tâm thu và suy tim tái phát tương đương nhau (RR 3,2, p = 0,0002) nhưng tỷ lệ bệnh tim tái phát được chẩn đoán thiếu máu cục bộ (RR 2,3, p < 0,0001) và tử vong do bệnh tim mạch (RR 2,6, p < 0,0001) cao hơn so với bệnh nhân không ĐTĐ. Tỷ lệ tử vong sau khi nhập viện đối với bệnh thiếu máu cục bộ (RR 1,7, p = 0,05) và suy tim (RR 2,2, p = 0,0003). |
The absolute glucose concentrations in subcutaneous adipose tissue and skeletal muscle were determined with microdialysis in 10 normal-weight, healthy subjects during a standardized hyperinsulinaemic hypoglycaemic clamp. The concentration of tissue dialysate glucose was measured in 15-min fractions and compared with that in arterialized venous plasma. Insulin (0.15 U x kg(-1) x h[-1]) was infused i.v. to lower the plasma glucose level to 2.5 mmol/l over 30 min. This level was maintained for 30 min by using a variable glucose infusion. Thereafter, the insulin infusion was stopped and the plasma glucose level was gradually increased to baseline levels over 120 min. During a 60-min basal period, the glucose levels in muscle were 0.6 mmol/l lower than those in plasma (p = 0.002), whereas the levels in adipose tissue and plasma were similar. The glucose nadirs in muscle (1.6 +/- 0.1 mmol/l) and adipose tissue (2.0 +/- 0.1 mmol/l) were significantly lower than that in plasma (2.4 +/- 0.1 mmol/l) (p = 0.001 and 0.02, respectively), and the time-to-nadir was substantially longer in muscle (69 +/- 5 min) and adipose tissue (57 +/- 2 min) than in plasma (39 +/- 3 min) (p = 0.0004). When the insulin infusion was stopped, the increases in adipose tissue and muscle glucose concentrations were delayed by approximately 25 and 45 min, respectively, as compared to the increase in plasma glucose. Thus, it seems that glucose measurements in adipose tissue and muscle more adequately reflect overall tissue homeostasis than do measurements in blood and that clinically relevant tissue glucopenia may be overlooked by conventional blood glucose measurements. | Nồng độ glucose tuyệt đối của mô mỡ dưới da và cơ xương được xác định bằng phương pháp microdialysis ở 10 đối tượng bình thường, khỏe mạnh trong thời gian kẹp glucose máu. Nồng độ glucose dialysate mô được đo bằng phân số 15 phút và so sánh với nồng độ glucose huyết tương động mạch. Insulin (0,15 U x kg (-1) x h (-1) ) được truyền tĩnh mạch để hạ glucose huyết tương xuống 2,5 mmol/l trong 30 phút. Nồng độ này duy trì trong 30 phút bằng cách truyền glucose thay đổi. Sau đó, dừng truyền insulin và tăng dần lên mức ban đầu trong 120 phút. Trong thời gian cơ bản 60 phút, nồng độ glucose trong cơ thấp hơn so với huyết tương (p = 0,002) trong khi đó nồng độ glucose trong mô mỡ và huyết tương tương đương nhau. Các nadir glucose trong cơ (1,6 +/- 0,1 mmol/l) và mô mỡ (2,0 +/- 0,1 mmol/l) thấp hơn đáng kể so với huyết tương (2,4 +/- 0,1 mmol/l) (p = 0,001 và 0,02) và thời gian đến noãn dài hơn đáng kể ở mô mỡ (69 +/- 5 phút) và mô mỡ (57 +/- 2 phút) so với huyết tương (39 +/- 3 phút) ( p = 0,0004). Khi dừng truyền insulin, sự gia tăng glucose trong mô mỡ và cơ bắp đã bị trì hoãn tương ứng khoảng 25 phút và 45 phút so với sự gia tăng glucose trong máu. Như vậy, có vẻ như các phép đo glucose trong mô mỡ và cơ phản ánh đầy đủ hơn về cân bằng nội môi mô so với trong máu và giảm glucose ở mô liên quan có thể bị bỏ qua bởi các phép đo glucose máu thông thường. |
Patients with insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) possess antibodies to the cytoplasmic domains of two closely related tyrosine phosphatase-like proteins, IA-2 and phogrin, previously detected as 40 kDa and 37 kDa tryptic fragments, respectively. A higher proportion of IDDM patients possess antibodies to IA-2 than to phogrin, and autoimmunity to phogrin might arise through cross-reactivity with the highly homologous IA-2. In this study, we have investigated the major regions of IA-2 recognized by antibodies in IDDM patients and examined the ability of phogrin to block antibody binding to these regions as a measure of cross-reactivity. Analysis of antibody binding to in vitro transcribed and translated polypeptides representing different regions of the cytoplasmic domain of IA-2 identified five different patterns of reactivity with antibodies in IDDM. Protein footprinting analysis, whereby polypeptide fragments generated on protease treatment of immune complexes are studied, indicated considerable heterogeneity in antibody recognition of IA-2, even between sera with similar reactivity to deletion mutants. Blocking studies with recombinant phogrin indicated that IA-2 antibodies recognize epitopes that are both unique to IA-2 and shared with phogrin. The amino-terminal 150 amino acids of the cytoplasmic domain of IA-2 encompass epitopes that are not represented on phogrin, whereas shared epitopes are localized within the carboxy-terminal 220 amino acids. The results demonstrate considerable heterogeneity between IDDM patients in autoantibody recognition of IA-2 in IDDM, whereas antibody recognition of phogrin is restricted in most patients to epitopes also present on IA-2. | Bệnh nhân đái tháo đường phụ thuộc insulin có kháng thể với các miền tế bào chất của hai protein giống tyrosine phosphatase là IA-2 và phogrin, trước đây được phát hiện lần lượt là 40 kDa và 37 kDa. Tỷ lệ bệnh nhân đái tháo đường phụ thuộc insulin có kháng thể với IA-2 cao hơn so với phogrin và tự miễn dịch với phogrin có thể phát sinh thông qua phản ứng chéo với IA-2 tương đồng cao. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã nghiên cứu các vùng chính của IA-2 được kháng thể công nhận ở bệnh nhân đái tháo đường và khảo sát khả năng của phogrin trong việc ức chế kháng thể liên kết với các vùng khác nhau của miền tế bào chất của IA-2. Phân tích các kháng thể liên kết với các polypeptide in vitro đại diện cho các vùng khác nhau của miền tế bào chất của IA-2 đã xác định năm kiểu phản ứng khác nhau với kháng thể ở bệnh nhân đái tháo đường phụ thuộc insulin. Phân tích in chân protein, theo đó các đoạn polypeptide sinh ra trên điều trị protease của các phức hệ miễn dịch được nghiên cứu, cho thấy sự khác biệt đáng kể trong nhận diện kháng thể của IA-2, ngay cả giữa các huyết thanh có phản ứng tương tự với các đột biến xóa. Nghiên cứu ức chế bằng phogrin tái tổ hợp cho thấy kháng thể IA-2 nhận diện được các epitope vừa là duy nhất của IA-2 và có chung với phogrin. Các amino acid đầu cuối amino của miền tế bào chất của IA-2 bao gồm các epitope không có trên phogrin, trong khi các epitope chung được định vị trong 220 amino acid đầu carboxy. Kết quả cho thấy sự khác biệt đáng kể giữa các bệnh nhân đái tháo đường phụ thuộc insulin trong nhận diện tự kháng thể của IA-2 ở IDDM, trong khi nhận diện kháng thể của phogrin bị hạn chế ở hầu hết các bệnh nhân với các epitope cũng có trên IA-2. |
This report describes the social distribution of central obesity and the metabolic syndrome at the Whitehall II study phase 3 examination, and assesses the contribution of health related behaviours to their distribution. Cross-sectional analyses were conducted utilising data collected in 1991-1993 from 4978 men and 2035 women aged 39-63 years who completed an oral glucose tolerance test. There was an inverse social gradient in prevalence of the metabolic syndrome. The odds ratio (95% confidence interval) for having the metabolic syndrome comparing lowest with highest employment grade was: men 2.2 (1.6-2.9), women 2.8 (1.6-4.8). Odds ratios for occupying the top quintile of the following variables, comparing lowest with highest grade, were, for waist-hip ratio: men 2.2 (1.8-2.8), women 1.6 (1.1-2.4); post-load glucose: men 1.4 (1.1-1.8), women 1.8 (1.2-2.6); triglycerides: men 1.6 (1.2-2.0), women 2.2 (1.5-3.3); fibrinogmen 1.7 (1.4-2.3), women 1.9 (1.2-2.8). Current smoking status, alcohol consumption and exercise level made a small contribution (men 11%, women 9%) to the inverse association between socioeconomic status and metabolic syndrome prevalence. In conclusion, central obesity, components of the metabolic syndrome and plasma fibrinogen are strongly and inversely associated with socioeconomic status. Our findings suggest the metabolic syndrome may contribute to the biological explanation of social inequalities in coronary risk. Health related behaviours appear to account for little of the social patterning of metabolic syndrome prevalence. | Nghiên cứu mô tả sự phân bố xã hội của béo phì trung ương và hội chứng chuyển hóa ở bệnh nhân mắc hội chứng chuyển hóa ở giai đoạn 3 tại bệnh viện Whitehall, và đánh giá sự đóng góp của các hành vi liên quan đến sức khỏe. Nghiên cứu mô tả cắt ngang được tiến hành từ 4978 nam và 2035 nữ giới tuổi từ 39-63 đã hoàn thành xét nghiệm dung nạp glucose. Có sự chênh lệch tỷ lệ xã hội nghịch với tỷ lệ mắc hội chứng chuyển hóa. Tỷ lệ chênh (khoảng tin cậy 95% ) khi mắc hội chứng chuyển hóa so với điểm nghề nghiệp cao nhất là: nam 2,2 (1,6-2,9); nữ 2,8 (1,6-4,8); tỷ lệ glucose sau nạp: nam 1,4 (1,1-1,8); nữ 1,8 (1,2-2,6); triglyceride: nam 1,6 (1,2-2,0); nữ 2,2 (1,5-3,3); fibrinogen: nam 1,7 (1,4-2,3); nữ 1,9 (1,2-2,8). |
We have recently shown that leptin mimicks insulin effects on glucose transport and glycogen synthesis through a phosphatidylinositol-3 (PI) kinase dependent pathway in C2C12 myotubes. The aim of the present study was to identify the signalling path from the leptin receptor to the PI-3 kinase. We stimulated C2C12 myotubes with insulin (100 nmol/l, 5 min) or leptin (0.62 nmol/l, 10 min) and determined PI-3 kinase activity in immunoprecipitates with specific non-crossreacting antibodies against insulin-receptor substrate (IRS 1/IRS 2) and against janus kinase (JAK 1 and JAK 2). While insulin-stimulated PI-3 kinase activity is detected in IRS-1 and IRS-2 immunoprecipitates, leptin-stimulated PI-3 kinase activity is found only in IRS-2 immunoprecipitates, suggesting that the leptin signal to PI-3 kinase occurs via IRS-2 and not IRS-1. Leptin-, but not insulin-stimulated PI-3 kinase activity is also detected in immunoprecipitates with antibodies against JAK-2, but not JAK-1. The data suggest that JAK-2 and IRS-2 couple the leptin signalling pathway to the insulin signalling chain. Since we have also detected leptin-stimulated tyrosine phosphorylation of JAK-2 and IRS-2 in C2C12 myotubes it can be assumed that leptin activates JAK-2 which induces tyrosine phosphorylation of IRS-2 leading to activation of PI-3 kinase. As we could not detect the long leptin receptor isoform in C2C12 myotubes we conclude that this signalling pathway is activated by a short leptin receptor isoform. | Gần đây chúng tôi đã chứng minh leptin có tác dụng bắt chước insulin đối với quá trình vận chuyển glucose và tổng hợp glycogen thông qua con đường phụ thuộc phosphatidylinositol-3 (PI) kinase trong ống cơ C2C12. Mục đích của nghiên cứu này là xác định đường dẫn tín hiệu từ thụ thể leptin đến kinase PI-3. Chúng tôi kích thích ống cơ C2C12 bằng insulin (100 nmol/l, 5 phút) hoặc leptin (0,62 nmol/l, 10 phút) và xác định hoạt tính của kinase PI-3 trong các thụ thể miễn dịch với các kháng thể đặc hiệu chống lại chất nền thụ thể insulin (IRS 1/IRS 2) và chống lại janus kinase (JAK 1 và JAK 2 ). Hoạt tính của leptin kích thích PI-3 kinase cũng được phát hiện trong các thụ thể miễn dịch IRS-2 chứ không phải IRS-1. Do chúng tôi cũng đã phát hiện sự kích thích tyrosine của JAK-2 và IRS-2 trong các ống cơ C2C12 nên có thể giả định leptin kích hoạt JAK-2 gây ra sự phosphoryl hóa tyrosine của IRS-2 dẫn đến sự hoạt hóa PI-3 kinase. Do không phát hiện được đồng phân thụ thể leptin dài trong ống cơ C2C12 nên chúng tôi kết luận rằng con đường dẫn tín hiệu này được kích hoạt bởi một đồng phân thụ thể leptin ngắn. |
By providing rapid measurements of cellular fluorescence in addition to morphometric analysis, the novel microscope-based multiparameter laser scanning cytometer (LSC) combines advantages of flow and image cytometry. Analysis of the integrated fluorescence intensity (IF) versus peak fluorescence intensity (maximal fluorescence per pixel; FP) versus fluorescence area (FA) of the cells stained with the DNA intercalating fluorochrome propidium iodide (PI) made it possible to discriminate lymphocytes, monocytes, and granulocytes in samples of peripheral blood of normal individuals. Lymphocytes, characterized by maximally condensed chromatin, had the highest FP and lowest values of FA. Granulocytes had the lowest FP and the highest FA. They also had increased IF compared to lymphocytes and monocytes. The difference in IF between granulocytes and monocytes/lymphocytes was abolished after exposure of cells to 0.1 M HCl at 0-4 degrees C, which is known to dissociate histones from DNA in chromatin. Monocytes were characterized by intermediate values of peak and area fluorescence intensity compared to lymphocytes and granulocytes. Thus, although all three classes of white blood cells have the same DNA content, they can be distinguished based on differences in structure of their chromatin after staining with PI. Discrimination of these cells by LSC is similar to that provided by flow cytometry based on differences in forward and side light scatter properties. | Với việc cung cấp các số đo nhanh về huỳnh quang tế bào cùng với phân tích hình thái, máy quét tế bào bằng laser đa đường (LSC) kết hợp ưu thế của dòng chảy và đếm tế bào hình ảnh. Phân tích cường độ huỳnh quang tích hợp (IF) so với cường độ huỳnh quang đỉnh (FP) so với diện tích huỳnh quang (FA) của các tế bào nhuộm DNA propanidium (PI) giúp phân biệt tế bào lympho, bạch cầu đơn nhân và bạch cầu hạt trong mẫu máu ngoại vi của người bình thường. Tế bào lympho, đặc trưng bởi chất nhiễm sắc thể đậm đặc tối đa (MSR ), có FP cao nhất và FA thấp nhất. Chúng cũng có IF tăng lên so với tế bào lympho và bạch cầu đơn nhân. Sự khác biệt về IF giữa bạch cầu hạt và bạch cầu đơn nhân/tế bào lympho đã bị loại bỏ sau khi tế bào tiếp xúc với 0,1 M HCl ở 0-4 độ C, điều này được biết là phân tách histone khỏi DNA trong chất nhiễm sắc. Bạch cầu đơn nhân được đặc trưng bởi các giá trị trung gian của cường độ huỳnh quang đỉnh và diện tích so với tế bào lympho và bạch cầu hạt. Như vậy, mặc dù cả ba loại tế bào bạch cầu có cùng hàm lượng DNA, chúng có thể được phân biệt dựa trên sự khác biệt về cấu trúc của chất nhiễm sắc sau nhuộm PI. Phân biệt các tế bào này bằng LSC tương tự như phân biệt bằng phương pháp đếm tế bào theo dòng chảy dựa trên sự khác biệt về đặc tính tán xạ ánh sáng về phía trước và phía. |
We investigated the fluorescence emission from three fluorophores commonly used for labeling cells in flow cytometry. We have demonstrated that the fluorescence emission from cells labeled with fluorescein-isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE), and allophycocyanin (APC) is considerably saturated and bleached in standard flow cytometric conditions. Therefore, for optimization of fluorescence detection in a flow cytometer, it is important to know the emission kinetics in detail. We made a mathematical model of the optical processes involved: absorption, fluorescence emission, nonradiative decay, photodestruction, and triplet state occupation. The validity of the model was experimentally tested with a set of averaged fluorescence pulses, measured in a large range of intensities and illumination times. The fluorescence of APC could be completely described by the model and produced the following rate constants: photodestruction rate kb1 = 6 x 10(3) s(-1), triplet state population rate k12 = 2 x 10(5) s(-1), and depopulation rate k20 = 5 x 10(4) s(-1). The fluorescence kinetics of FITC- and PE-labeled cells could not be fitted with only three parameters over the entire range, indicating that other optical processes are involved. We used the model to determine the sensitivity of our flow cytometer and to calculate the optimum conditions for the detection of APC. The results show that in principle a single APC molecule on a cell can be detected in the presence of background, i.e., autofluorescence and Raman scattering by water. | Chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu phát huỳnh quang từ 3 tế bào thực vật lưu huỳnh thường được sử dụng để đánh dấu tế bào trong đếm tế bào dòng chảy. Chúng tôi đã chứng minh rằng phát huỳnh quang từ các tế bào được đánh dấu bằng fluorescein-isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE) và allophycocyanin (APC) bị bão hòa và tẩy trắng đáng kể trong điều kiện đo tế bào học dòng chảy tiêu chuẩn. Do đó, để tối ưu hóa phát hiện huỳnh quang trong tế bào học dòng |
In hippocampal neurons of ground squirrels and neuroblastoma culture the ribosome state was analyzed by staining with acridine orange (AO), labeling with radioactive amino acids, and electron microscopy. Electron microscopy indicated that the extent to which ribosomes associated in polysomes varied from 25% in brain cells of torpid ground squirrels up to 93% in growing neuroblastoma cells. In control rat neurons, it was 75%. The fluorescence of the AO-rRNA complex in ribosomes changed with the polysome/monosome ratio. The red fluorescence of AO-single-stranded rRNA complex as well as ribosome association in polysomes decreased greatly as a function of the shift from polysomes to monosomes. The green fluorescence of AO intercalated in the double-stranded rRNA changed insignificantly. As a result, the ratio of red to green fluorescence intensity, Kalpha, changed more than 3-fold with the changing polysome/monosome ratio. Protein labeling also showed strong positive correlation with Kalpha. Thus, rRNA showed different accessibility for AO binding in active and inactive ribosomes. A possible mechanism of partial rRNA shielding with proteins is proposed. AO fluorescence in the cytoplasm, i.e., AO binding to rRNA in ribosomes, is presumed to reflect adequately the profound changes in the state of cell protein synthesizing system that can be regulated by both functional activity and stress factors. | Ở tế bào thần kinh hải mã và tế bào nguyên bào thần kinh nuôi cấy, trạng thái ribosome được phân tích bằng nhuộm cam acridine (AO ), ghi nhãn bằng axit amin phóng xạ và bằng kính hiển vi điện tử. Kính hiển vi điện tử chỉ ra rằng mức độ liên kết ribosome trong đa bào thay đổi từ 25% ở tế bào não của sóc đất hình xuyến đến 93% ở tế bào u nguyên bào thần kinh đang phát triển. Ở tế bào thần kinh chuột kiểm soát, tỷ lệ này là 75 %. Sự phát huỳnh quang của phức hợp AO-rRNA trong ribosome thay đổi theo tỷ lệ đa phần/monosome. Sự phát huỳnh quang đỏ của phức hợp rRNA sợi đơn AO cũng như sự liên kết ribosome trong đa bào giảm đi đáng kể khi chức năng chuyển từ đa bào sang đơn bào. Sự phát huỳnh quang xanh lá cây của AO xen kẽ trong rRNA sợi kép thay đổi không đáng kể. Kết quả là, tỷ lệ cường độ huỳnh quang đỏ so với xanh lá cây, Kalpha, thay đổi hơn 3 lần theo tỷ lệ đa phần/monosome thay đổi. Việc ghi nhãn protein cũng cho thấy mối tương quan thuận mạnh mẽ với Kalpha. Như vậy, rRNA cho thấy khả năng liên kết AO khác nhau ở các ribosome hoạt động và không hoạt động. Một cơ chế khả thi của việc che chắn rRNA một phần bằng protein được đề xuất. Sự phát huỳnh quang AO trong tế bào chất, tức là AO liên kết với rRNA trong ribosome, được cho là phản ánh đầy đủ những thay đổi sâu sắc trong trạng thái tổng hợp protein của tế bào có thể được điều chỉnh bởi cả các yếu tố hoạt động chức năng và các yếu tố stress. |
We describe a direct way to use flow cytometric data for measuring the growth curve of a cell population. The starting point is analysis of the intrinsic informative content of the time course, after bromodeoxyuridine (BrdUrd) labeling, of the percentages of cells detected within four windows of biparametric BrdUrd-DNA histograms. We did not introduce a particular cell cycle model or use the hypothesis of exponential growth. We obtained a simple formal proof of the existence of four independent formulae connecting the flow cytometric data and the relative growth curve of the cell population. The formulae were then challenged in a number of simulated kinetic scenarios, moving away from their expected limits of validity. The results suggest additional uses of the formulae and a way of estimating cell-cycle-phase durations. Considering exponential growth in the presence of cell loss, the formulae were used to estimate the potential doubling time from a single flow cytometric measure vs. other procedures that additionally require an estimate of the duration of the phase S. The theoretical precision of the procedures may differ depending on how cell loss occurs. | Chúng tôi mô tả một cách trực tiếp để sử dụng dữ liệu đo tế bào học dòng chảy để đo đường cong tăng trưởng của quần thể tế bào. Điểm xuất phát là phân tích hàm lượng thông tin nội tại của dòng thời gian, sau khi ghi nhãn bromodeoxyuridine (BrdUrd ), của tỷ lệ phần trăm số tế bào được phát hiện trong bốn cửa sổ của biểu đồ BDNA hai chiều. Chúng tôi không giới thiệu một mô hình chu kỳ tế bào cụ thể nào hoặc sử dụng giả thuyết tăng trưởng theo cấp số nhân. Chúng tôi đã có được một bằng chứng |
Flow cytometric multiparameter analysis of two proliferation associated antigens, Ki-67 and p120, was combined with cell cycle kinetic analysis, achieved by continuous labeling with 5-Bromodeoxyuridine (BrdUrd), followed by staining with Hoechst 33258 and 7-Aminoactinomycin D (7AAD). Exponential and plateau phase monolayer cultures of the human bladder carcinoma cell line J82 were examined. Resting cells, characterized by their absent BrdUrd incorporation, showed no reactivity with the MIB1 antibody, which was used for the detection of the Ki-67 antigen. Proliferating cells revealed a cell cycle phase dependent Ki-67 staining intensity, which was partially related to the time period spent in G1 after mitosis. In contrast to the Ki-67 antigen expression, no decrease in p120 immunofluorescence staining intensity of non-cycling cells could be observed. We could demonstrate that a dissection of the history of cell replication, obtained by the BrdUrd/Hoechst technique combined with a simultaneous immunofluorescence staining reveals detailed information, on a single cell level, about time dependent expression of proliferation associated antigens in all cell cycle compartments. | Phân tích đa thông số dòng tế bào của hai kháng nguyên liên quan đến tăng sinh là Ki-67 và p120 được kết hợp với phân tích động học chu kỳ tế bào bằng cách liên tục dán nhãn với 5-Bromodeoxyuridine (BrdUrd ), sau đó nhuộm với Hoechst 33258 và 7-Aminoactinomycin D (7AAD ). Tế bào nghỉ, đặc trưng bởi sự vắng mặt của BrdUrd, không phản ứng với kháng thể MIB1 được sử dụng để phát hiện kháng |
Annexin V binding to phosphatidylserine was evaluated by flow cytometry to examine apoptosis in different lymphocyte subsets of peripheral blood mononuclear cells after a 24 h in vitro culture period. We also applied a 2 Gy dose gamma-irradiation prior to incubation to evaluate the additional apoptogenic effect of radiation on the lymphocyte subsets. Overall, B lymphocytes showed the highest number of apoptotic cells, followed by T lymphocytes. Within the T lymphocytes, CD4-positive and CD45RA-negative cells were more prone to apoptosis than the CD8-positive and CD45RA-positive cells. Natural killer cells turned out to be most apoptosis-resistant. In the irradiated samples about twice as many apoptotic cells were found and the differences between lymphocyte subpopulations remained. Backgating of the annexin V-positive cells showed that these cells had a clearly decreased forward scatter signal. The antibody binding capacity (ABC) of lymphocyte membrane antigens was determined with CD3-fluorescein isothiocyanate (FITC), CD45RA-FITC, CD4-phycoerythrin (PE), CD8-PE, CD56-PE, and CD20-PE in viable and apoptotic cells. In the apoptotic cells a decrease of ABC was found for all antigens, except for CD20. There was no significant cell loss in the cultures. We conclude that the change in scatter and in ABC must be considered in immunophenotyping experiments on cells kept in culture for 24 h. If these changes are taken into account, percentages of subpopulations or the numbers of cells that stain positive for the studied markers do not significantly change. | Phụ lục V gắn với phosphatidylserine được đánh giá bằng phương pháp đếm tế bào theo dòng chảy để khảo sát chết rụng tế bào ở các nhóm tế bào lympho khác nhau của tế bào đơn nhân máu ngoại vi sau 24 giờ nuôi cấy in vitro. Chúng tôi cũng đã chiếu xạ gamma liều 2 Gy trước khi ủ để đánh giá tác dụng chết rụng tế bào của bức xạ lên các nhóm tế bào lympho. Nhìn chung, tế bào lympho B cho số lượng tế bào chết theo chương trình cao nhất, tiếp theo là tế bào lympho T. Trong các tế bào lympho T, tế bào CD4 dương tính và CD45RA âm tính dễ bị chết rụng hơn so với tế bào CD8 dương tính và CD45RA dương tính. Các tế bào giết tự nhiên là tế bào kháng chết theo chương trình. Trong các mẫu được chiếu xạ, số lượng tế bào chết theo chương trình cao gấp đôi so với các tế bào chết theo chương trình và sự khác biệt giữa các tiểu quần thể tế bào lympho vẫn còn. Việc chống đỡ các tế bào phụ V dương tính cho thấy các tế bào này có tín hiệu phân tán về phía trước giảm rõ rệt. Khả năng kháng thể (ABC) của các kháng nguyên màng tế bào lympho được xác định bằng các phương pháp CD3-fluorescein isothiocyanate (FITC); CD45RA-FITC; CD4-phycoerythrin (PE); CD8-PE; CD56-PE và CD20-PE ở các tế bào sống và tế bào chết theo chương trình. Ở các tế bào chết theo chương trình, tất cả các kháng nguyên đều giảm ABC, ngoại trừ CD20. Không có sự mất tế bào đáng kể trong các mẫu nuôi cấy. Chúng tôi kết luận rằng sự thay đổi về phân tán và ABC phải được xem xét trong các thí nghiệm tạo kiểu hình miễn dịch trên tế bào nuôi cấy trong 24 giờ. Nếu tính đến những thay đổi này, tỷ lệ các tiểu quần thể hoặc số lượng tế bào nhuộm dương tính với các marker nghiên cứu không thay đổi đáng kể. |
The nuclear DNA content of seven mouse laboratory strains has been measured by flow cytometry. The differences observed between strains as well as those between sexes within the strain were all statistically significant. The highest DNA content (approximately 6.4 pg/female nucleus) was found in the Balb/c strain; the lowest (approximately 5.7 pg/male nucleus) in the C3H/he strain. The difference between sexes varied from 1.6% (in CD-1 mice) to 6.3% (in nude mice). The interest of these results is twofold. First, the mouse can now be used to study the adaptive significance of genome size variation, so far studied only in plants. Second, DNA content analysis can become a quick method for mouse strain identification. | Hàm lượng ADN nhân của 7 chủng chuột thí nghiệm đã được đo bằng phương pháp đếm tế bào học dòng chảy. Sự khác biệt giữa các chủng cũng như giữa các giới tính trong chủng đều có ý nghĩa thống kê. Hàm lượng ADN cao nhất (khoảng 6,4 pg/nhân cái) được tìm thấy ở chủng Balb/c; thấp nhất (khoảng 5,7 pg/nhân đực) được tìm thấy ở chủng C3H/he. Sự khác biệt giữa các giới tính dao động từ 1,6% ( ở chuột CD-1) đến 6,3% |
An in vitro model for flow cytometric detection of heterogeneous drug response in exponentially growing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae was studied to evaluate the potential of this technology for rapid antibiotic susceptibility testing in polymicrobial samples. The cells, which exhibited 80-fold difference in in ampicillin susceptibility, were cultivated in the presence of ampicillin at a concentration equaling 1 MIC of the low-susceptibility strain (E. coli). Prior to flow cytometric analysis, the cells were fixed in 70% ethanol and stained with a DNA-specific dye. After 1 h of ampicillin incubation, the light scattering and fluorescence intensities of the susceptible cells increased 4.3-fold and 5-fold, respectively, but remained about constant for the resistant cells. The corresponding cell number increase for the resistant and the susceptible cells was 9.4 and 1.7, respectively. The two strains could be distinguished in the histograms on the basis of their light scattering and fluorescence intensities and by cell number. With an incubation of up to 3 h, the light scattering and fluorescence intensities of the susceptible cells grew stronger, at the expense of cell number. By combination of histograms, the discrimination of different cell populations could be improved. The results demonstrate the ability of flow cytometry to discriminate between species in heterogeneous cultures and suggest the potential of the technique for rapid assessment of bacterial susceptibility. However, the present results are preliminary, and the application to biological liquids and clinical samples has to be demonstrated further. | Nghiên cứu mô hình in vitro phát hiện phản ứng không đồng nhất của hai chủng Escherichia coli và Klebsiella pneumoniae trên mẫu đa vi khuẩn nhằm đánh giá khả năng ứng dụng kỹ thuật này trong việc xác định tính nhạy cảm nhanh của kháng sinh. Tế bào biểu hiện sự khác biệt gấp 80 lần về tính nhạy cảm với ampicillin được nuôi cấy với nồng độ tương đương 1 MIC của chủng E. coli có tính nhạy cảm thấp. Trước khi tiến hành phân tích tế bào học, tế bào được nuôi cấy trong môi trường ethanol 70% và nhuộm màu đặc hiệu DNA. Sau 1 giờ nuôi cấy, cường độ tán xạ ánh sáng và huỳnh quang của tế bào nhạy cảm tăng gấp 4,3 lần và 5 lần, nhưng không đổi ở tế bào kháng. Số lượng tế bào tương ứng tăng lên ở tế bào kháng và tế bào nhạy cảm lần lượt là 9,4 và 1,7. Có thể phân biệt hai chủng E. coli trên biểu đồ dựa trên cường độ tán xạ ánh sáng và huỳnh quang và dựa theo số lượng tế bào. Với thời gian nuôi cấy lên đến 3 giờ, cường độ tán xạ ánh sáng và huỳnh quang của tế bào nhạy cảm tăng mạnh hơn, nhưng không ảnh hưởng đến số lượng tế bào. Kết hợp với biểu đồ, sự phân biệt giữa các quần thể tế bào khác nhau có thể được cải thiện. Kết quả cho thấy khả năng phân biệt các loài trong nuôi cấy không đồng nhất của phương pháp này và tiềm năng của kỹ thuật này trong việc xác định tính nhạy cảm nhanh của vi khuẩn. Tuy nhiên, kết quả này chỉ mới ở giai đoạn sơ bộ, và việc ứng dụng kỹ thuật này vào các mẫu dịch lỏng sinh học và lâm sàng cần được tiếp tục nghiên cứu. |
In colorectal cancer, tumoral kinetic parameters could influence the therapeutic strategy. The aim of this study was to test the validity of a preoperative assessment of tumoral kinetics on biopsies obtained from endoscopic sampling. After infusion of 250 mg of bromodeoxyuridine (BrdUrd), tumor samples were taken. The following kinetic parameters were evaluated by Begg's method: labeling index (LI) of BrdUrd, duration of the S phase (Ts), and potential doubling time (Tpot). We compared the findings in preoperative endoscopic samples (t1), endoscopic samples (t2), and macrobiopsies of the tumor after surgical resection (t3) to test the effect of time, surgical procedures, and sampling mode on results. Eight diploid and 11 aneuploid colorectal cancers were studied. In diploid tumors, no difference in Tpot, Ts, or LI values was found among the three time intervals. In aneuploid tumors, Tpot value at t1 was lower than t3: 2.9 +/- 1.2 versus 4.5 +/- 1.4 days (P = 0.02). This difference seemed to be independent of sampling type but related instead to the time interval between BrdUrd infusion and biopsy and to the changes due to the surgical condition. On the other hand, LI seemed to be the most stable kinetic parameter. With a cutoff value of 4 days for Tpot and of 10% for LI to differentiate slow and fast growing tumors, the positive predictive values of LI were 90% at t1, 80% at t2, and 50% at t3 in aneuploid tumors. | Trong ung thư đại trực tràng, các thông số động học của khối u có thể ảnh hưởng đến chiến lược điều trị. Mục đích của nghiên cứu này là để kiểm tra tính hợp lệ của một đánh giá động học trước phẫu thuật trên sinh thiết lấy từ mẫu bệnh phẩm nội soi. Sau khi truyền 250 mg bromodeoxyuridine (BrdUrd) mẫu u được lấy. Các thông số động học sau được đánh giá theo phương pháp Begg: chỉ số ghi nhãn (LI) của BrdUrd, thời gian pha S (Ts) và thời gian tăng gấp đôi (Tpot ). Chúng tôi so sánh các phát hiện trong mẫu nội soi (t1) và mẫu nội soi (t2) và đại sinh thiết khối u sau phẫu thuật (t3) để kiểm tra hiệu quả của thời gian, quy trình phẫu thuật và phương thức lấy mẫu. Tám bệnh nhân ung thư đại trực tràng lưỡng bội và 11 bệnh nhân ung thư đại trực tràng lưỡng bội được nghiên cứu. Không có sự khác biệt về các giá trị Tpot, Ts, LI giữa ba khoảng thời gian: t1 thấp hơn t3: 2,9 +/- 1,2 so với 4,5 +/- 1,4 ngày (P = 0,02 ). Sự khác biệt này dường như không phụ thuộc vào loại mẫu lấy mà liên quan đến khoảng thời gian giữa truyền BrdUrd và sinh thiết và sự thay đổi do điều kiện phẫu thuật. Mặt khác, LI dường như là thông số động học ổn định nhất. Với thời gian cắt 4 ngày cho Tpot và 10% cho LI để phân biệt khối u phát triển chậm và nhanh, giá trị dự báo dương tính của LI là 90% ở t1, 80% ở t2 và 50% ở t3 cho khối u lưỡng bội. |
Two novel mouse genes, Ebf2 and Ebf3, have been identified which show high similarity to the rodent Ebf/Olf-1 and the Drosophila collier genes. The strong conservation of the protein regions corresponding to the DNA binding and dimerisation domains previously defined in Ebf strongly suggests that Ebf2 and Ebf3 also constitute DNA sequence-specific transcription factors. Determination of the chromosomal locations of the two genes indicated that the different members of this novel mouse multigene family are not clustered. A detailed analysis of the expression of each of the three Ebf genes in the developing central nervous system revealed partially overlapping patterns with two salient features: 1) In the region extending from the midbrain to the spinal cord, the expression of the three genes correlated with neuronal maturation, with a general activation in early post-mitotic cells, followed by specific patterns of extinction also consistent with the neurogenic gradient. 2) In the forebrain area, although the patterns of expression of the Ebf genes also reflected neuronal maturation, they appeared in addition to be region specific. These data suggest that Ebf genes may be involved in the control of neuronal differentiation in the CNS and in enforcing regional diversity in populations of post-mitotic forebrain neurons. | Hai gen mới ở chuột là Ebf2 và Ebf3 có sự tương đồng cao với các gen thuộc loài gặm nhấm Ebf/Olf-1 và ruồi giấm collier. Sự bảo tồn mạnh các vùng protein tương ứng với các domain liên kết DNA và các domain làm giảm DNA đã được định nghĩa ở Ebf gợi ý mạnh mẽ rằng Ebf2 và Ebf3 cũng tạo thành các nhân tố phiên mã trình tự DNA đặc trưng. Việc xác định vị trí nhiễm sắc thể của hai gen này cho thấy các thành viên khác nhau của họ chuột mới đa gen này không được tập hợp lại thành một cụm. Phân tích chi tiết sự biểu hiện của mỗi gen Ebf trong hệ thần kinh trung ương đang phát triển cho thấy các kiểu hình tương quan với nhau theo từng phần với hai đặc điểm nổi bật: 1) Ở vùng kéo dài từ trung não đến tủy sống, sự biểu hiện của ba gen này tương quan với sự trưởng thành tế bào thần kinh, với sự kích hoạt chung ở các tế bào hậu nguyên bào thần kinh, tiếp theo là các kiểu hình tuyệt chủng đặc trưng cũng phù hợp với gradient của gen thần kinh. 2) Ở vùng não trước, mặc dù các kiểu biểu hiện của gen Ebf cũng phản ánh sự trưởng thành tế bào thần kinh, nhưng chúng xuất hiện thêm nữa với tính đặc trưng cho từng vùng. Những dữ liệu này gợi ý rằng các gen Ebf có thể liên quan đến sự kiểm soát sự biệt hóa tế bào thần kinh ở HTKTW và trong việc tăng cường tính đa dạng theo vùng ở các quần thể tế bào thần kinh não trước hậu nguyên bào thần kinh. |
Basement membranes of the developing tooth have been previously shown to contain laminins, but the nature of the laminins have not been described. We here studied the distribution of five different laminin alpha chains during tooth development. We show that both epithelial and mesenchymal cells produce laminin alpha chains. The mRNAs of three laminin alpha chains, alpha1, alpha2, and alpha4, were expressed in the tooth mesenchyme, whereas two, the alpha3 and alpha5 chain mRNAs, were found in epithelium. Drastic changes in the expression patterns of the two epithelial chains were found during development. The alpha5 mRNA was widely expressed in tooth epithelia, and the corresponding protein was evenly distributed along the tooth basement membrane throughout embryonic development. This suggests a role for alpha5 as a major laminin alpha chain in tooth basement membrane during embryonic stages. The subsequent disappearance of alpha5 and the drastic increase in alpha3A mRNA expression during terminal ameloblast differentiation and enamel secretion suggest that alpha3A acts as an important chain in the enamel matrix after degradation of tooth basement membrane. These studies show that laminin networks in tooth epithelia form as a result of epithelial-mesenchymal interactions and that the molecular composition of the laminin networks varies drastically during development of tooth. | Tầng hầm màng của răng đang phát triển trước đây đã được chứng minh là có chứa laminin nhưng bản chất của laminin vẫn chưa được mô tả. Ở đây chúng tôi nghiên cứu sự phân bố của năm chuỗi laminin alpha khác nhau trong quá trình phát triển răng. Chúng tôi cho thấy cả tế bào biểu mô và tế bào trung mô đều tạo ra chuỗi laminin alpha. Các mRNA của ba chuỗi laminin alpha là alpha1, alpha2 và alpha4 biểu hiện ở vùng trung mô răng, trong khi hai chuỗi mRNA alpha3 và alpha5 lại được |
The identification of the axial levels of metameric elements along the rostro-caudal axis of vertebrates until now was not possible before late, fetal development, when the vertebral anlagen first appear. We developed a new system for the exact axial identification of somites and their derivatives from early, embryonic stages of mouse development on (Theiler stages (TS) 15 to TS18-19). The initial axial identification of the somites was performed by relating them to the rostral-most two cervical spinal ganglia (SG), that exhibited characteristic morphologies (SG-C1: bar-like, SG-C2: triangular). At all stages of somitic development, the most prominent somite along the rostro-caudal axis correlated with the bar-like SG-C1, and, therefore, we named it the first cervical somite (SO-C1). The next step, the axial identification of the somites independently from the SG, was based on the observation that after in situ hybridization to Myf5, Pax3, Pax1, and Mox1 riboprobes, a distinct and characteristic morphology of the last occipital somite (SO-O5) and the first two cervical somites (SO-C1, SO-C2) can be observed. From TS15 on, these three somites formed a triad of the most prominent somites along the rostro-caudal axis. Also, the dermomyotomal, myotomal, and sclerotomal derivatives of this somite triad were the most prominent in later somitic development. Furthermore, SG-C1 and SG-C2 exhibited a transient bipartite anlagen in their early development, suggesting a "resegmentation" during SG formation. Later, when somites started to dissolve, the caudal moiety of the bar-like SG-C1 anlagen fused to the anlagen of SG-C2. | Việc xác định các mức độ theo trục của các yếu tố metameric dọc theo trục rostro-caudal của động vật có xương sống cho đến nay vẫn chưa thể thực hiện được trước khi quá muộn, sự phát triển của bào thai, khi anlagen xuất hiện lần đầu tiên. Chúng tôi đã phát triển một hệ thống mới để xác định chính xác các soma và các dẫn xuất của chúng từ giai đoạn phôi, giai đoạn đầu của sự phát triển của chuột nhắt trắng (giai đoạn Theiler (TS) 15 đến TS18-19). |
Even though previous studies have shown that transcripts encoding the murine retinoid X receptor gamma (RXRgamma) are present in skeletal muscle of mouse embryos and that cultured myoblasts are induced to differentiate upon retinoid treatment, a function for RXRgamma and retinoids in mammalian myogenesis has not yet been identified. To begin to understand the possible role of RXRgamma during mammalian myogenesis we isolated novel rat RXRgamma cDNA sequences and examined in detail the spatio-temporal expression pattern of RXRgamma transcripts in relation to skeletal muscle differentiation in rat embryos and cultured myoblasts. We show that the onset of RXRgamma expression coincides with the differentiation of limb myoblasts in vivo. In vitro, RXRgamma is expressed in differentiating myoblasts, but not in proliferating myoblasts. In the myotome, however, RXRgamma is first expressed after myoblast differentiation, with RXRgamma transcripts being confined initially to its ventral region. Subsequently, RXRgamma becomes expressed throughout limb and myotome-derived muscle masses, and by the end of the primary myogenic wave, RXRgamma transcripts are mainly confined to their periphery. This dynamic expression pattern of RXRgamma during myogenesis suggests its possible involvement in the differentiation of limb myoblasts but excludes a role in the differentiation of early myotomal myoblasts. | Mặc dù các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng các bản phiên mã mã hóa cho thụ thể X retinoid của chuột (RXRgamma) hiện diện trong cơ xương của phôi chuột và các myoblasts nuôi cấy được tạo ra để biệt hóa khi điều trị bằng retinoid, một chức năng của RXRgamma và retinoid trong quá trình sinh cơ ở động vật có vú vẫn chưa được xác định. Để bắt đầu hiểu vai trò có thể có của RXRgamma trong quá trình sinh cơ ở động vật có vú, chúng tôi đã phân lập trình tự cDNA mới của chuột RXRgamma và nghiên cứu chi tiết mô hình biểu hiện không-thời gian của RXRgamma trong mối quan hệ với sự biệt hóa cơ xương ở phôi chuột và các myoblasts nuôi cấy. Chúng tôi cho thấy sự khởi đầu của biểu hiện RXRgamma trùng khớp với sự biệt hóa của các myoblasts chi trong cơ thể sống. Trong ống nghiệm, RXRgamma được biểu hiện trong việc biệt hóa các myoblasts, nhưng không phải trong việc sinh sôi nảy nở myoblasts. Tuy nhiên, trong myotome, RXRgamma được biểu hiện lần đầu tiên sau khi biệt hóa myoblast, với bản phiên mã RXRgamma được giới hạn ban đầu ở vùng bụng của nó. Sau đó, RXRgamma được biểu hiện trong toàn bộ các khối cơ có nguồn gốc từ chi và cơ có nguồn gốc từ myotome, và vào cuối sóng sinh cơ sơ cấp, bản phiên mã RXRgamma chủ yếu được giới hạn ở ngoại vi của chúng. Mô hình biểu hiện động của RXRgamma trong quá trình sinh cơ cho thấy khả năng của nó trong việc biệt hóa các myoblasts chi nhưng loại trừ vai trò trong việc biệt hóa các myoblasts đầu tiên. |
Cell fate of the blastomeres at the 32-cell stage in the Pleurodeles waltl embryo was analyzed by injection of rhodamine or fluorescein lysinated-dextran (RLDx or FLDx). At the tailbud stage, the progeny of each blastomere contributed to more than one germ layer with unequal distribution along the anteroposterior and dorsoventral axis. Such a regionalized positioning of the descendants of the 32-cell blastomeres was found in the neuroectoderm, the epidermis, the notochord, the somites, the lateral plate, and the endoderm, but not in the head mesenchyme, the pronephros, or the blood islands. Results of double labeling of juxtaposed blastomeres showed that cell mixing and rearrangement take place during organ formation. Results are compared with those of the 32-cell stage fate map in Xenopus and Rana and reveal the more restricted fate of 32-cell stage blastomeres in Pleurodeles germ layers. | Số phận tế bào của phôi phôi ở giai đoạn 32 tế bào ở phôi Pleurodeles waltl được phân tích bằng cách tiêm rhodamin hoặc fluorescein lysin-dextran (RLDx hoặc FLDx ). Ở giai đoạn đuôi, con cháu của mỗi phôi phôi đóng góp vào nhiều hơn một lớp mầm với sự phân bố không đồng đều dọc theo trục trước và trục sau. Vị trí phân vùng của các hậu duệ của phôi phôi 32 tế bào được tìm thấy ở lớp da thần kinh, lớp biểu bì, dây sống, lớp soma, lớp |
Chondrocytes in specific areas of the chick sternum have different developmental fates. Cephalic chondrocytes become hypertrophic and secrete type X collagen into the extracellular matrix prior to bone deposition. Middle and caudal chondrocytes remain cartilaginous throughout development and continue to secrete collagen types II, IX, and XI. The interaction of integrin receptors with extracellular matrix molecules has been shown to affect cytoskeleton organization, proliferation, differentiation, and gene expression in other cell types. We hypothesized that chondrocyte survival and differentiation including the deposition into interstitial matrix of type X collagen may be integrin receptor mediated. To test this hypothesis, a serum-free organ culture sternal model that recapitulates normal development and maintains the three-dimensional relationships of the tissue was developed. We examined chondrocyte differentiation by five parameters: type X collagen deposition into interstitial matrix, sternal growth, actin distribution, cell shape, and cell diameter changes. Additional sterna were analyzed for apoptosis using a fragmented DNA assay. Sterna were organ cultured with blocking antibodies specific for integrin subunits (alpha2, alpha3, or beta1). In the presence of anti-beta1 integrin (25 microg/ml, clone W1B10), type X collagen deposition into interstitial matrix and sternal growth were significantly inhibited. In addition, all chondrocytes were significantly smaller, the actin was disrupted, and there was a significant increase in apoptosis throughout the specimens. Addition of anti-alpha2 (10 microg/ml, clone P1E6) or anti-alpha3 (10 microg/ml, clone P1B5) integrin partially inhibited type X collagen deposition into interstitial matrix; however, sternal growth and cell size were significantly decreased. These data are the first obtained from intact tissue and demonstrate that the interaction of chondrocytes with extracellular matrix is required for chondrocyte survival and differentiation. | Tế bào sụn ở một số vùng đặc trưng của xương ức gà có số phận phát triển khác nhau. Tế bào sụn của gà trở nên phì đại và tiết collagen type X vào trong ma trận ngoại bào trước khi hình thành xương. Tế bào sụn ở vùng giữa và đuôi vẫn là sụn trong suốt quá trình phát triển và tiếp tục tiết collagen type II, IX, và XI. Sự tương tác của các thụ thể integrin với các phân tử ma trận ngoại bào đã được chứng minh là có ảnh hưởng đến tổ chức, tăng sinh, biệt hóa và biểu hiện gen ở các loại tế bào khác. Chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng sự sống sót và biệt hóa của tế bào sụn bao gồm cả sự lắng đọng thành ma trận kẽ của collagen type X có thể là qua trung gian thụ thể integrin. Để kiểm chứng giả thuyết này, một mô hình nuôi cấy cơ quan không có huyết thanh ở xương ức tóm tắt sự phát triển bình thường và duy trì các mối quan hệ ba chiều của mô đã được phát triển. Chúng tôi đã kiểm tra sự biệt hóa của tế bào sụn bằng năm thông số: sự lắng đọng collagen type X thành ma trận kẽ, sự phát triển của xương ức, sự phân bố actin, hình dạng tế bào và sự thay đổi đường kính tế bào. Xương ức bổ sung được phân tích để chết rụng bằng một xét nghiệm DNA phân mảnh. Sterna được nuôi cấy với kháng thể ngăn chặn đặc hiệu cho tiểu đơn vị integrin (alpha2, alpha3 hoặc beta1). Với sự có mặt của kháng thể anti-beta1 integrin (25 microg/ml, nhân bản W1B10) thì sự lắng đọng collagen type X thành ma trận kẽ và sự tăng trưởng của xương ức bị ức chế đáng kể. Ngoài ra, tất cả các tế bào sụn đều nhỏ hơn đáng kể, actin bị phá vỡ và sự tăng trưởng tế bào và kích thước tế bào giảm đáng kể. Việc bổ sung kháng thể anti-alpha2 (10 microg/ml, nhân bản P1E6) hoặc anti-alpha3 (10 microg/ |
We have investigated molecular mechanisms of the embryonic development of an ascidian, a primitive chordate which shares features of both invertebrates and vertebrates, with a view to identifying genes involved in development and metamorphosis. We isolated 12 partial cDNA sequences which were expressed in a stage-specific manner using differential display. We report here the isolation of a full-length cDNA sequence for one of these genes which was specifically expressed during the tailbud and larval stages of ascidian development. This cDNA, 1213 bp in length, is predicted to encode a protein of 337 amino acids containing four epidermal growth factor (EGF)-like repeats and three novel cysteine-rich repeats. Characterization of its spatial expression pattern by in situ hybridisation in late tailbud and larval embryos demonstrated strong expression localised throughout the papillae and anteriormost trunk and weaker expression in the epidermis of the remainder of the embryo. As recent evidence indicates that the signal for metamorphosis originates in the anterior trunk region, these results suggest that this gene may have a role in signalling the initiation of metamorphosis. | Chúng tôi đã nghiên cứu cơ chế phân tử của sự phát triển phôi của một cá thể kinh giới (C ascidian ), một loài dây sống nguyên thủy có chung đặc điểm của cả động vật không xương sống và động vật có xương sống, nhằm xác định các gen liên quan đến sự phát triển và biến thái. Chúng tôi đã phân lập được 12 trình tự cDNA bán phần biểu hiện theo từng giai đoạn cụ thể bằng cách sử dụng biểu hiện vi phân. Ở đây chúng tôi báo cáo về sự phân lập trình tự cDNA toàn phần của một trong các gen này, biểu hiện |
We studied the expression of two distantly clustered Hox genes which could, respectively, be involved in specification of dorsal feather- and foot scale-forming skin in the chick embryo: cHoxc-8, a median paralog, and cHoxd-13, located at the 5' extremity of the HoxD cluster. The cHoxc-8 transcripts are present at embryonic day 3.5 (E3.5) in the somitic cells, which give rise to the dorsal dermis by E5, and at E6.5-8.5 in the dorsal dermal and epidermal cells during the first stages of feather morphogenesis. The cHoxd-13 transcripts are present at E4.5-9.5 in the autopodial mesenchyme and at E10.5-12.5 in the plantar dermis during the initiation of reticulate scale morphogenesis. Both the cHoxc-8 and cHoxd-13 transcripts are no longer detectable after the anlagen stage of cutaneous appendage morphogenesis. Furthermore, heterotopic dermal-epidermal recombinations of dorsal, plantar, and apteric tissues revealed that the epidermal ability or inability to form feathers is already established by the time of skin formation. Retinoic acid (RA) treatment at E11 induces after 12 hr an inhibition of cHoxd-13 expression in the plantar dermis, followed by the formation of feather filaments on the reticulate scales. When E7.5 dorsal explants are treated with RA for 6 days, they form scale-like structures where the Hox transcripts are no more detectable. Protein analysis revealed that the plantar filaments, made up of feather beta-keratins, corresponded to a homeotic transformation, whereas the scale-like structures, composed also of feather beta-keratins, were teratoid. These results strengthen the hypothesis that different homeobox genes play a significant role in specifying the regional identity of the different epidermal territories. | Chúng tôi đã nghiên cứu sự biểu hiện của hai gen Hox nhóm xa, tương ứng có thể tham gia vào đặc điểm hình thành da tạo vảy lưng và da chân ở phôi gà: cHoxc-8, một paralog trung vị, và cHoxd-13, nằm ở cực 5 của cụm HoxD. Các phiên mã cHoxc-8 có mặt ở ngày phôi 3,5 (E3,5) trong các tế bào soma, các tế bào này làm phát sinh lớp hạ bì lưng vào E5, và ở E6,5-8,5 |
Hepatocyte nuclear factor-3beta (HNF-3beta), a nuclear protein of the winged helix family of transcription factors, is known to play a critical role in the formation of the embryonic node, notochord, and foregut endoderm. HNF-3beta influences the expression of a number of target genes in the respiratory epithelium, activating transcription of thyroid transcription factor-1, surfactant protein-B and clara cell secretory protein. In order to discern the role of HNF-3beta in differentiation and gene expression in the lung, HNF-3beta was expressed in developing respiratory epithelial cells of transgenic mice, under the control of the human surfactant protein C gene promoter. Pulmonary abnormalities were observed in the lungs of fetal mice bearing the HNF-3beta transgene. Differentiation of distal respiratory epithelial cells was arrested in the early pseudoglandular stage. Branching morphogenesis and vasculogenesis were markedly disrupted in association with decreased E-cadherin and vascular endothelial growth factor expression. HNF-3beta limits cellular diversity of developing respiratory epithelium and alters lung morphogenesis in vivo, suggesting that precise temporal-spatial regulation of HNF-3beta expression is critical for respiratory epithelial cell differentiation and lung morphogenesis. | Yếu tố nhân tế bào gan 3beta (HNF-3beta) là một protein nhân của họ xoắn có cánh của các yếu tố phiên mã, được biết là đóng vai trò quan trọng trong việc hình thành nút phôi, dây sống và da đầu trước. HNF-3beta ảnh hưởng đến sự biểu hiện của một số gen đích trong biểu mô hô hấp, kích hoạt phiên mã của yếu tố phiên mã tuyến giáp 1, protein hoạt động bề mặt-B và protein tiết tế bào clara. Để phân biệt vai trò của HNF-3beta trong sự biệt hóa và |
The adhesive core of the desmosome is composed of cadherin-like glycoproteins of 2 families, desmocollins and desmogleins. The desmosomal cadherins show distinct patterns of expression in adult epidermis, and we have suggested that the desmocollins have a functional role in regulating the differentiation and/or morphogenesis of that epithelium (North et al. [1996] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7701-7705.). To examine this hypothesis, we cloned murine desmocollins and examined the induction patterns of desmocollins 1 and 3 during skin and skin appendage development. Desmocollins 3 and 1 were first expressed in epidermis in highly regional patterns at embryonic days 13.0 and 13.5, respectively, and both were up-regulated in general body epidermis at day 14.5. At this stage, epidermis is undifferentiated and the desmocollins showed an unexpected expression pattern. However, by day 18.5 when skin had undergone terminal differentiation, desmocollin 1 and 3 expression resembled that found in the adult. Thus, the establishment of the adult pattern of desmocollin expression corresponds to the adult pattern of epidermal stratification. We suggest that it is the ratio of desmocollin 1 to desmocollin 3 expression at different levels in the epidermis that is fundamental in establishing this pattern of differentiation. | Nhân dính của thể liên kết gồm các glycoprotein giống cadherin thuộc 2 họ, desmocollin và desmoglein. Các cadherin của thể liên kết cho thấy các kiểu biểu hiện khác biệt ở lớp biểu bì da trưởng thành, và chúng tôi đã gợi ý rằng desmocollin có vai trò chức năng điều hòa sự biệt hóa và/hoặc hình thái của biểu mô đó (North et al. [1996] Proc Natl. Acad. Sci, 93: 7701-7705.) Để kiểm chứng giả thuyết này, chúng tôi đã nhân bản vô tính các desmocollin chuột và khảo sát các kiểu biểu hiện của desmocollin 1 và 3 trong quá trình phát triển da và phần phụ của da. Desmocollin 3 và 1 lần đầu tiên biểu hiện ở lớp biểu bì da theo các kiểu vùng cao ở các ngày thứ 13,0 và 13,5 của phôi, và cả hai đều được điều hòa ở lớp biểu bì cơ thể nói chung vào ngày thứ 14,5. Ở giai đoạn này, lớp biểu bì không biệt hóa và các desmocollin thể hiện một kiểu biểu hiện không mong đợi. Tuy nhiên, vào ngày thứ 18,5 khi da trải qua giai đoạn biệt hóa cuối cùng, biểu hiện của desmocollin 1 và 3 giống với biểu hiện của người trưởng thành. Như vậy, sự hình thành kiểu biểu hiện của desmocollin ở người trưởng thành tương ứng với sự phân tầng của lớp biểu bì ở người trưởng thành. Chúng tôi gợi ý rằng tỷ lệ biểu hiện của desmocollin 1 so với desmocollin 3 ở các mức độ khác nhau ở lớp biểu bì là yếu tố cơ bản trong việc hình thành kiểu biểu hiện này. |
Cardiac progenitor cells in avian and amphibian embryos are known to commit to cardiac lineage during gastrulation or early neurulation. These cells require cell interaction with anterior endoderm for their differentiation into cardiomyocytes. However, little is known about cell interaction in mammalian cardiogenesis. We investigated the staging of murine cardiomyocyte commitment and the role of cell interaction in differentiation of cardiac progenitor cells into cardiomyocytes, using cultures of various embryonic regions at 7.25 and 7.5 days post coitum (p.c.), respectively. To evaluate the terminal differentiation of cardiac progenitor cells, we employed three parameters; expression of spontaneous beating, myosin heavy chain (MHC) protein, and cardiac-specific genes (alpha myosin heavy chain, Csx/Nkx2.5 and myosin light chain 2V genes). mRNAs of cardiac-specific genes were detected in 7.25-day p.c. mesoderm by RT-PCR, suggesting that the genetic specification to cardiac lineage initiated in the mesoderm by 7.25 days p.c. The 7.25-day p.c. isolated mesoderm in 48 hr culture, however, failed to differentiate into spontaneous beating cardiomyocytes and exhibited non-organized MHC protein in 19% of these culture. In contrast, all of the 7.5-day p.c. isolated mesoderm differentiated into beating cardiomyocytes even in 24 hr culture. The 7.25-day p.c. mesoderm associated with primitive streak increased MHC protein expression in 93% of these cultures, although they formed beating foci in 3%. The 7.25-day p.c. explants containing both visceral embryonic endoderm and primitive streak succeeded in terminal differentiation into spontaneous beating cardiomyocytes. Our study suggests that cardiac progenitor cells obtain the potency to complete terminal differentiation autonomously at 7.5 days p.c., as a consequence of the multistep induction by cell interactions with both the primitive streak and visceral embryonic endoderm, following the genetic specification to cardiac lineage in the early gastrula stage. | Các tế bào tiền thân tim ở phôi chim và lưỡng cư được biết là đã tiến hóa thành dòng tim trong giai đoạn phôi dạ dày hoặc giai đoạn phôi thần kinh sớm. Các tế bào này đòi hỏi phải có tương tác tế bào với lớp mô nội bì trước để biệt hóa thành tế bào cơ tim. Tuy nhiên, chúng ta biết rất ít về tương tác tế bào trong quá trình phát sinh tế bào tim ở động vật có vú. Chúng tôi đã nghiên cứu giai đoạn tiến hóa của tế bào cơ tim ở chuột và vai trò của tương tác tế bào trong biệt hóa tế bào tiền thân tim thành tế bào cơ tim, sử dụng nuôi cấy các vùng phôi khác nhau ở thời điểm 7,25 và 7,5 ngày sau khi sinh (c.). |
Archaeoglobus fulgidus is the first sulphur-metabolizing organism to have its genome sequence determined. Its genome of 2,178,400 base pairs contains 2,436 open reading frames (ORFs). The information processing systems and the biosynthetic pathways for essential components (nucleotides, amino acids and cofactors) have extensive correlation with their counterparts in the archaeon Methanococcus jannaschii. The genomes of these two Archaea indicate dramatic differences in the way these organisms sense their environment, perform regulatory and transport functions, and gain energy. In contrast to M. jannaschii, A. fulgidus has fewer restriction-modification systems, and none of its genes appears to contain inteins. A quarter (651 ORFs) of the A. fulgidus genome encodes functionally uncharacterized yet conserved proteins, two-thirds of which are shared with M. jannaschii (428 ORFs). Another quarter of the genome encodes new proteins indicating substantial archaeal gene diversity. | Archaeoglobus fulgidus là sinh vật chuyển hóa lưu huỳnh đầu tiên được xác định trình tự bộ gen. Bộ gen của nó gồm 2.178.400 cặp base chứa 2.436 khung đọc mở (ORFs ). Các hệ thống xử lý thông tin và các con đường tổng hợp sinh học cho các thành phần thiết yếu (nucleotide, amino acid và cofactor) có mối tương quan rộng với các đối tác của chúng ở vi khuẩn cổ Methanococcus jannaschii. Bộ gen của hai vi khuẩn cổ này cho |
Many natural polymeric materials (particularly structural proteins) display a hierarchy of structure over several length scales. Block copolymers are able to self-assemble into ordered nanostructures, but the random-coiled nature of their polymer chains usually suppresses any further levels of organization. The use of components with regular structures, such as rigid-rod polymers, can increase the extent of spatial organization in self-assembling materials. But the synthesis of such polymeric components typically involves complicated reaction steps that are not suitable for large-scale production. Proteins form hierarchically organized structures in which the fundamental motifs are generally alpha-helical coils and beta-sheets. Attempts to synthesize polypeptides with well-defined amino-acid sequences, which might adopt similar organized structures, have been plagued by unwanted side reactions that give rise to products with a wide range of molecular weights, hampering the formation of well-defined peptide block copolymers. Here I describe a polymerization strategy that overcomes these difficulties by using organonickel initiators which suppress chain-transfer and termination side reactions. This approach allows the facile synthesis of block copolypeptides with well-defined sequences, which might provide new peptide-based biomaterials with potential applications in tissue engineering, drug delivery and biomimetic composite formation. | Nhiều vật liệu polyme tự nhiên (đặc biệt là các protein cấu trúc) thể hiện một hệ thống thứ bậc về cấu trúc ở nhiều thang chiều dài. Các chất đồng trùng hợp khối có khả năng tự lắp ráp thành những cấu trúc nano có trật tự, nhưng bản chất cuộn ngẫu nhiên của các chuỗi polymer của chúng thường ngăn chặn bất cứ mức độ tổ chức nào ở các cấp độ cao hơn. Việc sử dụng các thành phần có cấu trúc đều đặn, chẳng hạn như các polyme lõi cứng, có thể làm tăng mức độ tổ chức không gian ở các vật liệu tự lắp ráp. Nhưng quá trình tổng hợp những thành phần polyme như vậy thường đòi hỏi những bước phản ứng phức tạp không thích hợp cho việc sản xuất ở quy mô lớn. Các protein hình thành nên những cấu trúc được tổ chức theo thứ bậc trong đó những motif cơ bản thường là các cuộn dây alpha-hệ vỏ và các bản beta. Nỗ lực tổng hợp các polypeptide với những chuỗi axit amin được xác định rõ, vốn có thể có những cấu trúc tương tự, đã bị cản trở bởi những phản ứng phụ không mong muốn, vốn làm phát sinh những sản phẩm có khối lượng phân tử rất lớn, gây cản trở sự hình thành những chất đồng trùng hợp khối peptide đã được xác định rõ. Ở đây tôi mô tả một chiến lược trùng hợp nhằm khắc phục những khó khăn này bằng cách sử dụng những chất khởi đầu là organonickel (chất khởi đầu) ngăn chặn những phản ứng phụ chuyển mạch và kết thúc chuỗi. Phương pháp này cho phép sự tổng hợp dễ dàng các chuỗi đồng trùng hợp khối với những chuỗi đã được xác định rõ, có thể cung cấp những vật liệu sinh học mới dựa trên peptide có tiềm năng ứng dụng trong kỹ thuật mô, trong việc phân phối thuốc và trong việc hình thành những hỗn hợp mô phỏng sinh học. |
Identifying the forces responsible for the origin and maintenance of sexuality remains one of the greatest unsolved problems in biology. The mutational deterministic hypothesis postulates that sex is an adaptation that allows deleterious mutations to be purged from the genome; it requires synergistic interactions, which means that two mutations would be more harmful together than expected from their separate effects. We generated 225 genotypes of Escherichia coli carrying one, two or three successive mutations and measured their fitness relative to an unmutated competitor. The relationship between mutation number and average fitness is nearly log-linear. We also constructed 27 recombinant genotypes having pairs of mutations whose separate and combined effects on fitness were determined. Several pairs exhibit significant interactions for fitness, but they are antagonistic as often as they are synergistic. These results do not support the mutational deterministic hypothesis for the evolution of sex. | Việc xác định các lực tác động lên nguồn gốc và duy trì hoạt động tính dục vẫn là một trong những vấn đề lớn nhất chưa được giải quyết trong sinh học. Giả thuyết tất định đột biến đưa ra giả thuyết rằng tính giao là một sự thích nghi cho phép loại bỏ những đột biến có hại ra khỏi bộ gene; nó đòi hỏi những tương tác hiệp lực, có nghĩa là hai đột biến sẽ cùng nhau gây hại nhiều hơn dự kiến từ những tác động riêng rẽ của chúng. Chúng tôi đã tạo ra 225 kiểu gene của vi khuẩn Escherichia coli mang một, hai hoặc ba đột biến liên tiếp và đo lường sự thích nghi của chúng so với một đối thủ cạnh tranh không bị đột biến. Mối quan hệ giữa số đột biến và sự thích nghi trung bình gần như là log-linear. Chúng tôi cũng tạo ra 27 kiểu gene tái tổ hợp có các cặp đột biến mà những tác động riêng biệt và kết hợp của chúng lên sự thích nghi đã được xác định. Một số cặp thể hiện sự tương tác đáng kể đối với sự thích nghi, nhưng chúng thường là đối kháng cũng như hiệp lực. Những kết quả này không ủng hộ giả thuyết tất định đột biến đối với sự tiến hóa của tính giao. |
The voluntary control of gaze implies the ability to make saccadic eye movements specified by abstract instructions, as well as the ability to repress unwanted orientating to sudden stimuli. Both of these abilities are challenged in the antisaccade task, because it requires subjects to look at an unmarked location opposite to a flashed stimulus, without glancing at it. Performance on this task depends on the frontal/prefrontal cortex and related structures, but the neuronal operations underlying antisaccades are not understood. It is not known, for example, how excited visual neurons that normally trigger a saccade to a target (a prosaccade) can activate oculomotor neurons directing gaze in the opposite direction. Visual neurons might, perhaps, alter their receptive fields depending on whether they receive a pro- or antisaccade instruction. If the receptive field is not altered, the antisaccade goal must be computed and imposed from the top down to the appropriate oculomotor neurons. Here we show, using recordings from the supplementary eye field (a frontal cortex oculomotor centre) in monkeys, that visual and movement neurons retain the same spatial selectivity across randomly mixed pro- and antisaccade trials. However, these neurons consistently fire more before antisaccades than prosaccades with the same trajectories, suggesting a mechanism through which voluntary antisaccade commands can override reflexive glances. | Sự kiểm soát ánh nhìn một cách chủ động hàm ý khả năng thực hiện những chuyển động bất thường của mắt được xác định bởi những chỉ dẫn trừu tượng, cũng như khả năng kiềm chế những định hướng không mong muốn trước những kích thích đột ngột. Cả hai khả năng này đều bị thách thức trong nhiệm vụ chống lại sự tiêm thuốc, bởi vì nó đòi hỏi đối tượng tham gia phải nhìn vào một vị trí không được đánh dấu đối nghịch với một kích thích chớp lóe mà không được liếc nhìn nó. Việc thực hiện nhiệm vụ này phụ thuộc vào vỏ não trước/vỏ não trước trán và những cấu trúc liên quan, nhưng người ta vẫn chưa hiểu được những hoạt động thần kinh nằm dưới những sự tiêm thuốc. Chẳng hạn, người ta vẫn chưa biết làm thế nào mà những tế bào thần kinh thị giác vốn thường kích hoạt một cuộc vận động đột xuất (một cuộc vận động đột xuất) lại có thể kích hoạt những tế bào thần kinh vận động mắt điều khiển ánh nhìn đi theo hướng ngược lại. Có lẽ, những tế bào thần kinh thị giác có thể thay đổi trường tiếp nhận của chúng, tùy thuộc vào việc chúng nhận được chỉ dẫn ủng hộ hay phản kháng. Nếu trường tiếp nhận không thay đổi, thì mục tiêu chống xâm lấn phải được tính toán và áp đặt từ trên xuống cho tới những tế bào thần kinh vận động mắt thích hợp. Ở đây, bằng cách sử dụng những bản ghi âm từ trường vận động bổ sung (vỏ não trước của trung tâm vận động mắt) ở khỉ, chúng tôi thấy rằng những tế bào thần kinh thị giác và vận động vẫn giữ được tính chọn lọc không gian giống nhau ở những thử nghiệm phối hợp ngẫu nhiên có tính ủng hộ và phản kháng. Tuy nhiên, những tế bào thần kinh này liên tục bắn nhiều hơn trước khi bị tiêm thuốc so với khi bị tiêm với cùng một quỹ đạo, điều này gợi ra một cơ chế mà thông qua đó những mệnh lệnh chống xâm lấn chủ động có thể lấn át những cái liếc nhìn phản xạ. |
Tobacco use in developed countries is estimated to be the single largest cause of premature death. Nicotine is the primary component of tobacco that drives use, and like other addictive drugs, nicotine reinforces self-administration and place preference in animal studies. Midbrain dopamine neurons normally help to shape behaviour by reinforcing biologically rewarding events, but addictive drugs such as cocaine can inappropriately exert a reinforcing influence by acting upon the mesolimbic dopamine system. Here we show that the same concentration of nicotine achieved by smokers activates and desensitizes multiple nicotinic receptors thereby regulating the activity of mesolimbic dopamine neurons. Initial application of nicotine can increase the activity of the dopamine neurons, which could mediate the rewarding aspects of tobacco use. Prolonged exposure to even these low concentrations of nicotine, however, can cause desensitization of the nicotinic receptors, which helps to explain acute tolerance to nicotine's effects. The effects suggest a cellular basis for reports that the first cigarette of the day is the most pleasurable, whereas the effect of subsequent cigarettes may depend on the interplay between activation and desensitization of multiple nicotinic receptors. | Việc sử dụng thuốc lá ở các nước phát triển được cho là nguyên nhân lớn nhất gây ra cái chết sớm. Nicotine là thành phần chủ yếu của thuốc lá thúc đẩy việc sử dụng, và giống như các loại thuốc gây nghiện khác, nicotine củng cố việc tự dùng và đặt ưu tiên cho nó trong các nghiên cứu trên động vật. Các nơron dopamine ở trung não thường giúp định hình hành vi bằng cách tăng cường những sự kiện mang lại phần thưởng về mặt sinh học, nhưng các thuốc gây nghiện như cocaine có thể gây ảnh hưởng tăng cường một cách không thích hợp bằng cách tác động lên hệ dopamine ở trạng thái mesolimbic. Ở đây chúng ta chứng minh rằng cùng một nồng độ nicotine mà người hút thuốc đạt được sẽ kích hoạt và làm giảm nhiều thụ thể nicotinic, từ đó điều tiết hoạt động của các nơron dopamine ở trạng thái mesolimbic. Việc sử dụng nicotine ban đầu có thể làm tăng hoạt động của các nơron dopamine, vốn có thể làm trung gian cho các khía cạnh mang lại phần thưởng của việc hút thuốc. Tuy nhiên, việc tiếp xúc lâu dài với ngay cả những nồng độ nicotine thấp như vậy cũng có thể gây ra sự làm giảm nhạy cảm của các thụ thể nicotinic, điều này giải thích cho khả năng dung nạp cấp tính đối với các tác động của nicotin. Những tác động này cho thấy một cơ sở tế bào để báo cáo rằng điếu thuốc đầu tiên trong ngày là thú vị nhất, trong khi tác động của những điếu thuốc tiếp theo có thể phụ thuộc vào sự tương tác giữa việc kích hoạt và làm giảm nhiều thụ thể nicotinic. |
Acquired drug resistance is a major problem in the treatment of cancer. Of the more than 500,000 annual deaths from cancer in the United States, many follow the development of resistance to chemotherapy. The emergence of resistance depends in part on the genetic instability, heterogeneity and high mutational rate of tumour cells. In contrast, endothelial cells are genetically stable, homogeneous and have a low mutational rate. Therefore, antiangiogenic therapy directed against a tumour's endothelial cells should, in principle, induce little or no drug resistance. Endostatin, a potent angiogenesis inhibitor, was administered to mice bearing Lewis lung carcinoma, T241 fibrosarcoma or B16F10 melanoma. Treatment was stopped when tumours had regressed. Tumours were then allowed to re-grow and endostatin therapy was resumed. After 6, 4 or 2 treatment cycles, respectively, no tumours recurred after discontinuation of therapy. These experiments show that drug resistance does not develop in three tumour types treated with a potent angiogenesis inhibitor. An unexpected finding is that repeated cycles of antiangiogenic therapy are followed by prolonged tumour dormancy without further therapy. | Nhận được sự kháng thuốc là một vấn đề lớn trong điều trị ung thư. Trong số hơn 500.000 ca tử vong hàng năm do ung thư ở Hoa Kỳ, nhiều người có sự phát triển của sự đề kháng với hóa trị liệu. Sự xuất hiện của sự đề kháng phụ thuộc một phần vào sự bất ổn di truyền, tính không đồng nhất và tỷ lệ đột biến cao của các tế bào khối u. Ngược lại, các tế bào nội mô ổn định về mặt di truyền, đồng nhất và có tỷ lệ đột biến thấp. Do đó, về nguyên tắc, liệu pháp chống tạo mạch chống lại các tế bào nội mô của khối u nên ít hoặc không có sự đề kháng thuốc. Endostatin, một chất ức chế tạo mạch mạnh, được dùng cho chuột mang ung thư biểu mô phổi Lewis, T241 fibrosarcoma hoặc B16F10. Điều trị đã bị dừng lại khi khối u đã thoái triển trở lại. Sau đó khối u được phép phát triển trở lại và liệu pháp endostatin được tiếp tục điều trị. Sau 6,4 hoặc 2 chu kỳ điều trị tương ứng, không có khối u tái phát sau khi ngừng điều trị. Những thí nghiệm này cho thấy sự đề kháng thuốc không phát triển ở ba loại khối u được điều trị bằng thuốc ức chế tạo mạch mạnh. Một phát hiện bất ngờ là sau các chu kỳ lặp lại của liệu pháp chống tạo mạch, khối u sẽ ngủ đông kéo dài mà không cần điều trị thêm. |
Parasites of the phylum Apicomplexa include many important human and veterinary pathogens such as Plasmodium (malaria), Toxoplasma (a leading opportunistic infection associated with AIDS and congenital neurological birth defects), and Eimeria (an economically significant disease of poultry and cattle). Recent studies have identified an unusual organelle in these parasites: a plastid that appears to have been acquired by secondary endosymbiosis of a green alga. Here we show that replication of the apicomplexan plastid (apicoplast) genome in Toxoplasma gondii tachyzoites can be specifically inhibited using ciprofloxacin, and that this inhibition blocks parasite replication. Moreover, parasite death occurs with peculiar kinetics that are identical to those observed after exposure to clindamycin and macrolide antibiotics, which have been proposed to target protein synthesis in the apicoplast. Conversely, clindamycin (and functionally related compounds) immediately inhibits plastid replication upon drug application-the earliest effect so far described for these antibiotics. Our results directly link apicoplast function with parasite survival, validating this intriguing organelle as an effective target for parasiticidal drug design. | Ký sinh trùng ngành Apicomplexa bao gồm nhiều tác nhân gây bệnh quan trọng ở người và thú y như Plasmodium (malaria ), Toxoplasma (một bệnh nhiễm trùng cơ hội hàng đầu liên quan đến AIDS và dị tật bẩm sinh về thần kinh) và Eimeria (một bệnh có ý nghĩa kinh tế ở gia cầm và gia súc ). Các nghiên cứu gần đây đã xác định được một cơ quan khác thường ở các loài ký sinh trùng này: một plastid dường như đã mắc phải do sự nội cộng sinh thứ cấp của một loài tảo lục |
In Drosophila, members of the frizzled family of tissue-polarity genes encode proteins that are likely to function as cell-surface receptors of the type known as Wnt receptors, and to initiate signal transduction across the cell membrane, although how they do this is unclear. We show here that the rat protein Frizzled-2 causes an increase in the release of intracellular calcium which is enhanced by Xwnt-5a, a member of the Wnt family. This release of intracellular calcium is suppressed by an inhibitor of the enzyme inositol monophosphatase and hence of the phosphatidylinositol signalling pathway; this suppression can be rescued by injection of the compound myo-inositol, which overcomes the decrease in this intermediate caused by the inhibitor. Agents that inhibit specific G-protein subunits, pertussis toxin, GDP-beta-S and alpha-transducin also inhibit the calcium release triggered by Xwnt-5a and rat Frizzled-2. Our results indicate that some Wnt proteins work through specific Frizzled homologues to stimulate the phosphatidylinositol signalling pathway via heterotrimeric G-protein subunits. | Ở ruồi giấm, các thành viên của họ gen phân cực mô bị quăn (Theory of Confucianism) mã hóa các protein có khả năng hoạt động như các thụ thể bề mặt tế bào thuộc loại thụ thể Wnt và bắt đầu truyền tín hiệu qua màng tế bào, mặc dù cách thức thực hiện điều này vẫn chưa rõ ràng. Ở đây, chúng tôi chỉ ra rằng protein chuột bị Frizzled-2 gây ra sự gia tăng giải phóng canxi nội bào, do Xwnt-5a, một thành viên thuộc họ Wnt, tăng cường. Sự giải phóng canxi nội bào này |
Spinal muscular atrophy (SMA) is a motor neuron disease characterized by degeneration of the anterior horn cells of the spinal cord. It is a common fatal autosomal recessive disorder and linkage studies have identified two candidate genes, SMN and NAIP, both on chromosome 5q13. Although NAIP protein is known to have an anti-apoptotic function, the function of SMN has been unclear and it shows no significant sequence similarity to any other protein. The SMN gene is deleted or interrupted on both chromosomes in nearly all SMA patients. Here we show that SMN interacts with Bcl-2, another anti-apoptotic protein, and that co-expression of SMN with Bcl-2 confers a synergistic preventive effect against Bax-induced or Fas-mediated apoptosis, although SMN itself has only a weak anti-apoptotic activity. SMN(Y272C), which carries a missense mutation and was found in an SMA patient who exceptionally retained SMN on one allele, exerts no synergism with Bcl-2. Furthermore, the product of a truncated transcript lacking exon 7, which was derived from an SMN gene carrying an intragenic mutation or from the SMN copy gene cBCD541 retained in all SMA patients, had no synergistic activity but instead had a dominant-negative effect on full-length SMN. Our results indicate that an absent or decreased anti-apoptotic activity of SMN in concert with Bcl-2 underlies the pathogenesis of SMA. | GÂY TÊN CƠ THỂ TRƯỚC SƯU TRÚ TRƯỚC THẦN KINH TRÊN TRUNG TÂM THẦN KINH TRƯỜNG Cột sống (Tạp chí Dược liệu, tập 23, số 6/2017) Là một bệnh lý thần kinh vận động đặc trưng bởi sự thoái hóa của tế bào sừng trước của tuỷ sống. Đây là một bệnh lý thường gặp gây tử vong do rối loạn lặn nhiễm sắc thể thường và các nghiên cứu liên quan đã xác định được hai gen ứng cử viên, SMN và NAIP, cả hai đều trên nhiễm sắc thể 5q13. Mặc dù protein NAIP được biết là có chức năng chống apoptotic, chức năng của SMN vẫn chưa rõ ràng và nó cho thấy không có sự tương đồng về trình tự đáng kể với bất kỳ protein nào khác. Gen SMN bị xóa hoặc gián đoạn trên cả hai nhiễm sắc thể ở hầu hết bệnh nhân SMA. Ở đây chúng tôi chỉ ra rằng SMN tương tác với Bcl-2, một protein chống apoptotic khác và sự đồng biểu hiện của SMN với Bcl-2 có tác dụng dự phòng hiệp đồng chống lại sự chết rụng tế bào do Bax hoặc Fas qua trung gian, mặc dù bản thân SMN chỉ có hoạt tính chống apoptotic yếu. SMN (Y272C) mang đột biến sai nghĩa và được tìm thấy ở một bệnh nhân SMA giữ lại đặc biệt SMN trên một alen, không có tác dụng hiệp đồng với Bcl-2. Hơn nữa, sản phẩm của bảng điểm cắt ngắn thiếu exon 7, có nguồn gốc từ một gen SMN mang đột biến xâm nhập hoặc từ gen sao chép SMN cBCD541 giữ lại ở tất cả bệnh nhân SMA, không có hoạt tính hiệp đồng mà thay vào đó có tác dụng chi phối âm tính với SMN toàn bộ chiều dài. Kết quả của chúng tôi chỉ ra rằng sự vắng mặt hoặc giảm hoạt tính chống apoptotic của SMN phối hợp với Bcl-2 là cơ sở cho sự sinh bệnh học của SMA. |
A volume-regulated chloride current (ICl.vol) is ubiquitously present in mammalian cells, and is required for the regulation of electrical activity, cell volume, intracellular pH, immunological responses, cell proliferation and differentiation. However, the molecule responsible for ICl.vol has yet to be determined. Although three putative chloride channel proteins expressed from cloned genes (P-glycoprotein, pICln and ClC-2 ) have been proposed to be the molecular equivalent of ICl.vol, neither P-glycoprotein nor pICln is thought to be a chloride channel or part thereof, and the properties of expressed ClC-2 channels differ from native ICl.vol. Here we report that functional expression in NIH/3T3 cells of a cardiac clone of another member of the ClC family, ClC-3, results in a large basally active chloride conductance, which is strongly modulated by cell volume and exhibits many properties identical to those of ICl.vol in native cells. A mutation of asparagine to lysine at position 579 at the end of the transmembrane domains of ClC-3 abolishes the outward rectification and changes the anion selectivity from I- > Cl- to Cl- > I- but leaves swelling activation intact. Because ClC-3 is a channel protein belonging to a large gene family of chloride channels, these results indicate that ClC-3 encodes ICl.vol in many native mammalian cells. | Dòng clorua điều hòa thể tích (ICl.vol) hiện diện phổ biến trong các tế bào động vật có vú và cần thiết cho sự điều hòa hoạt động điện, thể tích tế bào, pH nội bào, phản ứng miễn dịch, tăng sinh và biệt hóa tế bào. Tuy nhiên, phân tử chịu trách nhiệm cho ICl.vol vẫn chưa được xác định. Mặc dù ba protein kênh clorua giả định biểu hiện từ các gen nhân bản vô tính (P-glycoprotein, pICln và ClC-2) đã được đề xuất là tương đương về mặt phân tử của ICl.vol, nhưng cả P-glycoprotein và pICln đều không được cho là một kênh clorua hoặc một phần của chúng, và các đặc tính của kênh ClC-2 biểu hiện khác với ICl.vol tự nhiên. Ở đây chúng tôi báo cáo rằng biểu hiện chức năng trong tế bào NIH/3T3 của một bản sao tim của một thành viên khác trong họ ClC, ClC-3, dẫn đến một độ dẫn clorua hoạt động cơ bản lớn, được điều biến mạnh bởi thể tích tế bào và thể hiện nhiều đặc tính giống hệt với ICl.vol tự nhiên trong các tế bào. Đột biến của asparagine thành lysine ở vị trí 579 ở cuối miền xuyên màng của ClC-3 đã làm thay đổi tính chỉnh sửa bên ngoài và thay đổi tính chọn lọc anion từ I-> Cl-thành Cl-> I-nhưng vẫn để nguyên sự kích hoạt sưng. Vì ClC-3 là một protein kênh thuộc họ gen clorua lớn, các kết quả này cho thấy ClC-3 mã hóa ICl.vol trong nhiều tế bào động vật có vú tự nhiên. |
The purpose of the present study is to characterize Na+ current activated by GH-releasing hormone (GHRH) and to investigate the effect of somatostatin (SRIF) on that current, because the Na+ current has been suggested to play a pivotal role in the process of GHRH-induced GH secretion. Primary-cultured pituitary somatotrophs were prepared from male Wistar rats. Whole-cell membrane currents were recorded and analyzed by a perforated patch clamp system. To isolate Na+ current, K+ and Ca2+ were replaced with Cs+ and Mg2+, respectively, in the extracellular solution, and cesium aspartate was used for the pipette solution. Furthermore, tetrodotoxin and nifedipine were added to the extracellular solution to eliminate the voltage-gated currents. Under these conditions, GHRH activated a mean inward Na+ current (-1.86 +/- 0.33 pA, mean +/- SE) at potentials between -50 and -20 mV and a smaller current (-0.59 +/- 0.13 pA) at potentials between -100 and -80 mV, which were completely blocked by protein kinase A blocker (H-89). In addition, SRIF (1-10 nM) partially suppressed these Na+ currents, which were not affected by phosphatase inhibitors (okadaic acid and calyculin A). These results suggest that GHRH activates the Na+ current through phosphorylation by protein kinase A and that SRIF partially suppressed this current and that the current was larger at more positive potentials than at more negative potentials. | Nghiên cứu này nhằm mô tả đặc điểm dòng Na+ được hoạt hóa bởi hormone giải phóng GH (GHRH) và khảo sát tác dụng của somatostatin (SRIF) lên dòng Na+, bởi vì dòng Na+ được đề xuất đóng vai trò chủ đạo trong quá trình tiết GHRH. Sinh vật soma tuyến yên nuôi cấy ban đầu được điều chế từ chuột cống trắng đực. Dòng màng toàn tế bào được ghi lại và phân tích bằng hệ thống kẹp vá đục lỗ. Để phân lập dòng Na+, K+ và Ca2+ được thay thế bằng Cs+ và Mg2+ tương ứng trong dung dịch ngoại bào, và cesium aspartate được sử dụng cho dung dịch pipet. Hơn nữa, tetrodotoxin và nifedipine được thêm vào dung dịch ngoại bào để loại bỏ dòng điện áp. Trong điều kiện này, GHRH đã hoạt hóa dòng Na+ vào trung bình (-1,86 +/- 0,33 pA, +/- SE) ở điện thế từ -50 đến -20 mV và dòng điện nhỏ hơn (-0,59 +/- 0,13 pA) ở điện thế từ -100 đến -80 mV, bị chặn hoàn toàn bởi chất ức chế phosphatase A (H-89 ). Ngoài ra, SRIF (1-10 nM) đã ức chế một phần dòng Na+, dòng này không bị ảnh hưởng bởi chất ức chế phosphatase (axit okadaic và calyculin A ). Kết quả này cho thấy GHRH kích hoạt dòng Na+ thông qua quá trình phosphoryl hóa bởi protein kinase A và SRIF đã ức chế một phần dòng này và dòng này có điện thế dương lớn hơn nhiều so với điện thế âm. |
Bioactive peptides are usually synthesized as inactive precursor proteins that yield bioactive products only after specific biosynthetic processing events. Large dense core vesicles (LDCV) are usually the site of storage of mature peptides. Atrial myocyte LDCV are rather unique in their storage of intact prohormone, proatrial natriuretic factor (pro-ANF), with no storage of cleaved products. To investigate whether the lack of intracellular cleavage of pro-ANF is due to the absence of prohormone convertases (PCs) from the atrial granules or to other factors, we expressed PC1 in atrial myocyte cultures using a recombinant adenovirus vector. Pro-PC1 protein was processed to mature PC1 and to the COOH-terminally shortened neuroendocrine-specific form of PC1 and rapidly secreted. Integral membrane forms of peptidylglycine alpha-amidating monooxygenase (PAM) were processed by PC1, and two primary products were secreted: a monofunctional monooxygenase and a larger bifunctional form. The cleaved PAM products were stored in LDCV, as secretion of PAM-derived products was stimulatable. In addition, pro-ANF was processed to ANF within PC1-expressing cells. In primary atrial myocytes, virally encoded PC1 is active on three substrates; lack of cleavage of pro-ANF and PAM in atrial myocytes is not due to a fundamental inability of atrial LDCV to support endoproteolytic processing. | Các peptide hoạt tính sinh học thường được tổng hợp như các protein tiền thân không hoạt tính và chỉ tạo ra các sản phẩm có hoạt tính sinh học sau các sự kiện xử lý sinh tổng hợp cụ thể. Các túi lõi có mật độ lớn (LDCV) thường là nơi lưu trữ các peptide trưởng thành. LDCV tế bào cơ nhĩ là duy nhất trong việc lưu trữ các prohormone nguyên vẹn, yếu tố proat natriuretic (pro-ANF) không có sản phẩm bị cắt. Để điều tra sự thiếu phân cắt nội bào của pro-ANF là do sự thiếu các chuyển đổi prohormone (PC) từ hạt cơ nhĩ hoặc các yếu tố khác, chúng tôi biểu hiện PC1 trong nuôi cấy tế bào cơ nhĩ bằng vector adenovirus tái tổ hợp. Protein pro-PC1 được xử lý thành PC1 trưởng thành và thành dạng đặc hiệu thần kinh COOH của PC1 và được tiết ra nhanh chóng. Các dạng màng tích hợp của peptidylglycine alpha-amidating monooxygenase (PAM) được xử lý thành PC1 trưởng thành và thành dạng đặc hiệu thần kinh COOH và được tiết ra nhanh chóng. Các sản phẩm PAM bị cắt được lưu trữ trong LDCV, dưới dạng sản phẩm có nguồn gốc từ PAM được kích thích. Ngoài ra, pro-ANF được xử lý thành ANF trong các tế bào có PC1. Trong tế bào cơ nhĩ nguyên sinh, PC1 được mã hóa bởi virus có tính chất virus hoạt động trên ba cơ chất; sự thiếu phân cắt của pro-ANF và PAM trong tế bào cơ nhĩ không phải do sự bất lực cơ bản của LDCV trong việc hỗ trợ xử lý nội protein. |
Farnesylation of p21Ras by farnesyltransferase (FTase) is obligatory for anchoring p21Ras to the plasma membrane, where it can be activated by growth factors. Insulin significantly stimulates the phosphorylation of the alpha-subunit of FTase (4-fold) and the enzymatic activity of FTase in 3T3-L1 fibroblasts and adipocytes. FTase activity was assessed by the amount of [3H] mevalonate (a precursor of farnesyl) incorporated into p21Ras in vivo and by quantitating the amount of farnesylated p21Ras before and after insulin administration. Insulin-stimulated phosphorylation of the alpha-subunit of FTase in 3T3-L1 fibroblasts and adipocytes was blocked by the mitogen-activated protein/extracellular-signal regulated kinase-kinase inhibitor, PD98059, but not by wortmannin or bisindolylmaleimide. Additionally, PD98059 blocked insulin-stimulated [3H]mevalonic incorporation and farnesylation of unprocessed p21Ras in both cell lines. Furthermore, expression of the dominant negative mutant of p21Ras precluded insulin-stimulated phosphorylation of the FTase alpha-subunit and activation of its enzymatic activity. In contrast, 3T3-L1 fibroblasts, expressing the constitutively active Raf-1, exhibited enhanced phosphorylation of the FTase alpha-subunit. It seems that insulin's effect on the phosphorylation and activation of FTase in both fibroblasts and adipocytes is mediated via the Ras pathway, resulting in a positive feedback augmentation of the cellular pool of farnesylated p21Ras. | Quá trình farnesyl hóa p21Ras bằng farnesyltransferase (FTase) bắt buộc phải gắn p21Ras vào màng sinh chất, nơi nó có thể được kích hoạt bởi các yếu tố tăng trưởng. Insulin kích thích đáng kể quá trình phosphoryl hóa tiểu đơn vị alpha của FTase (gấp 4 lần) và hoạt tính enzyme của FTase ở nguyên bào sợi và tế bào mỡ 3T3-L1. Hoạt tính của FTase được đánh giá bằng lượng mevalonate (tiền chất của farnesyl) tích hợp vào p21 |
Mammalian type I iodothyronine deiodinase (D1) activates and inactivates thyroid hormone by outer ring deiodination (ORD) and inner ring deiodination (IRD), respectively, and is potently inhibited by propylthiouracil (PTU). Here we describe the cloning and characterization of a complementary DNA encoding a PTU-insensitive D1 from teleost fish (Oreochromis niloticus, tilapia). This complementary DNA codes for a protein of 248 amino acids, including a putative selenocysteine (Sec) residue, encoded by a TGA triplet, at position 126. The 3' untranslated region contains two putative Sec insertion sequence (SECIS) elements. Recombinant enzyme expressed in COS-1 cells catalyzes both ORD of T4 and rT3 and IRD of T3 and T3 sulfate with the same substrate specificity as native tilapia D1 (tD1), i.e. rT3 >> T4 > T3 sulfate > T3. Native and recombinant tD1 show equally low sensitivities to inhibition by PTU, iodoacetate, and gold thioglucose compared with the potent inhibitions observed with mammalian D1s. Because the residue 2 positions downstream from Sec is Pro in tD1 and in all (PTU-insensitive) type II and type III iodothyronine deiodinases but Ser in all PTU-sensitive D1s, we prepared the Pro128Ser mutant of tD1. The mutant enzyme showed strongly decreased ORD and somewhat increased IRD activity, but was still insensitive to PTU. These results provide new information about the structure-activity relationship of D1 concerning two characteristic properties, i.e. catalysis of both ORD and IRD, and inhibition by PTU. | Iodothyronine deiodinase (D1) ở động vật có vú kích hoạt và làm bất hoạt hormone tuyến giáp bằng cách khử iốt vòng ngoài (ORD) và khử iốt vòng trong (IRD) và bị ức chế mạnh bởi propylthiouracil (PTU ). Ở đây, chúng tôi mô tả sự nhân bản và đặc điểm của một DNA bổ sung mã hóa cho D1 không nhạy cảm với PTU từ cá xương (Oreochromis niloticus, cá rô phi). |
To evaluate GH's role in cardiac physiology and its interrelationship with the beta-adrenergic system, we studied GH-deficient dwarf (dw/dw) and control rats in 4 groups of 20 each: dwarf group receiving placebo, dwarf-GH group receiving 2 mg/kg GH, dwarf-GH-propranolol group receiving 2 mg/kg GH and 750 mg/liter propranolol, and a control group of Lewis rats receiving placebo. Dwarf rats showed reduced left ventricular weight and myocyte cross-sectional area, and impaired cardiac performance in vitro. Left ventricular pressure-volume curves showed a shift upward and leftward, indicating reduced distensibility. These abnormalities reversed after GH treatment regardless of concomitant propranolol administration. Although isoproterenol responsiveness was reduced in dwarf rats, there were no differences in beta-adrenergic receptor density, affinity, Na+,K+-adenosine triphosphatase activity, or adenylyl cyclase activity. In summary, myocyte size, cardiac structure, myocardial contractility, and distensibility are abnormal in GH deficiency. The effects of GH are not mediated by the beta-adrenergic pathway, which, in turn, is unaffected by changes in the GH-insulin-like growth factor I axis. Thus, GH plays a regulatory role in normal cardiac physiology that is independent of the beta-adrenergic system. | Để đánh giá vai trò của GH trong sinh lý tim mạch và mối liên quan của nó với hệ thống beta-adrenergic, chúng tôi nghiên cứu chuột lùn thiếu hụt GH (dw/dw) và chuột đối chứng ở 4 nhóm, mỗi nhóm 20: nhóm lùn nhận giả dược, nhóm lùn-GH nhận 2 mg/kg GH, nhóm lùn-GH-propranolol nhận 2 mg/kg GH và 750 mg/lít propranolol và nhóm Lewis nhận giả dược. Chuột lùn cho thấy giảm trọng lượng thất trái và diện tích mặt cắt ngang của bạch cầu và suy giảm chức năng tim trong ống nghiệm. Đường cong áp suất-thể tích thất trái cho thấy sự dịch chuyển lên và sang trái cho thấy giảm khả năng co bóp. Những bất thường này đã được đảo ngược sau điều trị GH bất kể dùng đồng thời propranolol. Mặc dù đáp ứng isoproterenol đã giảm ở chuột lùn, nhưng không có sự khác biệt về mật độ thụ thể beta-adrenergic, ái lực, hoạt động Na+, K+-adenosine triphosphatase hoặc hoạt động cyclase adenylyl. Tóm lại, kích thước tế bào cơ, cấu trúc tim, khả năng co bóp cơ tim và khả năng co bóp là bất thường trong thiếu hụt GH. Tác động của GH không qua trung gian của con đường beta-adrenergic, do đó không bị ảnh hưởng bởi sự thay đổi trục I yếu tố tăng trưởng giống Insulin-I. Do đó, GH đóng vai trò điều hòa trong sinh lý tim mạch bình thường độc lập với hệ thống beta-adrenergic. |
Calcium receptor proteins are an essential link between hormones that alter intracellular calcium levels and the generation of cellular responses. However, there is no information available regarding the role of calcium receptor proteins, in particular the S100 family, in insulin action and/or diabetes. This study examines the effects of streptozotocin-induced type I diabetes on the expression of the individual S100A1 and S100B isoforms as well as their binding proteins. Diabetes did not increase (or initiate) S100B expression in any non-S100B-expressing tissue (skeletal muscle, heart, kidney, liver, spleen, and pancreas). In all S100B-expressing tissues examined (brain, white fat, and testes), S100B protein levels increased approximately 2-fold while steady state S100B messenger RNA (mRNA) levels decreased. S100A1-expressing tissues exhibited increased (kidney and lung), decreased (skeletal muscle), and unchanged (brain and heart) S100A1 protein levels. While noncoordinate changes in S100A1 protein and steady state mRNA levels were observed in heart, other S100A1-expressing tissues (brain, slow twitch skeletal muscle, and kidney) exhibited coordinate changes in S100A1 protein and steady state mRNA levels. Altogether, these results suggest that the effects of diabetes on S100 expression are isoform as well as tissue-specific. Gel overlay analysis of the S100-binding protein profile revealed both increases and decreases in binding proteins in all tissues examined. In summary, changes in the expression of S100A1, S100B, and S100-binding proteins occur in type I diabetes and represent important molecular events in the effects of insulin/insulin insufficiency on cell function. | Protein thụ thể calci là một liên kết quan trọng giữa các hormone làm thay đổi nồng độ canxi nội bào và sự hình thành phản ứng của tế bào. Tuy nhiên, vẫn chưa có thông tin về vai trò của các protein thụ thể calci, đặc biệt là họ S100, trong hoạt động của insulin và/hoặc bệnh đái tháo đường. Nghiên cứu này khảo sát ảnh hưởng của streptozotocin gây ra bệnh đái tháo đường týp I đến sự biểu hiện của các đồng dạng S100A1 và S100B cũng như các protein liên kết của chúng. Bệnh đái tháo đường không làm tăng (hoặc khởi đầu) sự biểu hiện của S100B ở bất kỳ mô nào không có S100B (cơ xương, tim, thận, gan, lá lách, và tuyến tụy ). Trong tất cả các mô có S100B được khảo sát (não, mỡ trắng, và tinh hoàn) thì nồng độ protein S100B tăng xấp xỉ 2 lần trong khi đó nồng độ protein thông tin S100B trạng thái ổn định (mRNA) giảm. Các mô có S100A1 biểu hiện tăng (thận và phổi) và giảm (cơ xương) và không thay đổi (não và tim) nồng độ protein S100A1. Trong khi các mô khác có S100A1 biểu hiện ở tim (não, cơ xương và thận) biểu hiện sự thay đổi tọa độ của protein S100A1 và nồng độ mRNA trạng thái ổn định. Nhìn chung, các kết quả này cho thấy tác động của bệnh đái tháo đường lên sự biểu hiện của S100 là đồng dạng cũng như tác động đặc hiệu của mô. Phân tích gel protein liên kết S100 cho thấy sự tăng giảm biểu hiện của các protein liên kết S100A1, S100B và S100A ở tất cả các mô được khảo sát. Tóm lại, sự thay đổi biểu hiện của các protein liên kết S100A1 và S100B xảy ra ở bệnh đái tháo đường týp I và biểu hiện ở các sự kiện phân tử quan trọng ảnh hưởng của sự suy giảm insulin/insulin lên chức năng tế bào. |
Spot 14 (S14) is a nuclear protein that is abundant only in lipogenic tissues (liver, adipose, lactating mammary), where its expression is rapidly regulated by hormones and dietary constituents. We recently showed that S14 acts at the transcriptional level in the transduction of signals for increased expression of genes encoding lipogenic enzymes. To better understand the mechanism of the regulation of gene transcription by S14, we employed a yeast two-hybrid system to identify hepatic proteins that physically interact with S14. We found that S14 has a strong propensity for homodimerization, as is the case for many transcription factors. Relevance of this finding to mammalian cells was established by transient cotransfection of S14 constructs bearing two different epitope tags. Glutathione-S-transferase-S14 and hemagglutinin-S14 fusions copurified from the transfected cells by glutathione-affinity chromatography, indicating their association in vivo. Analysis of S14 deletion mutants in the yeast system showed that an evolutionarily conserved hydrophobic heptad repeat (zipper) near the carboxyl terminus was necessary for homodimerization. In parallel studies, we observed a 36-kDa protein that specifically coimmunoprecipitated with S14 from extracts of radiolabeled rat hepatocytes. We propose that S14 is an acidic transcriptional activator that acts as a homodimer to modulate gene expression as a component of a tripartite complex with a 36-kDa hepatic protein. | Đốm 14 (S14) là một protein hạt nhân chỉ có nhiều trong các mô mỡ (gan, mỡ, tuyến sữa) nơi biểu hiện của nó được điều hòa nhanh chóng bởi các hormone và thành phần dinh dưỡng. Gần đây chúng tôi đã chứng minh rằng S14 hoạt động ở mức độ phiên mã trong quá trình chuyển tín hiệu làm tăng biểu hiện của các gen mã hóa các enzyme mỡ. Để hiểu rõ hơn về cơ chế điều hòa phiên mã gen bằng S14, chúng tôi sử dụng hai hệ thống lai với nấm men để nhận diện các protein gan tương tác vật lý với S14. Chúng tôi nhận thấy S14 có xu hướng đồng hóa, giống như trường hợp của nhiều yếu tố phiên mã khác. Sự liên quan của phát hiện này với các tế bào động vật có vú được xác lập bằng sự chuyển hóa tạm thời cấu trúc S14 mang hai biểu hiện khác nhau. Sự kết hợp glutathione-S-transferase-S14 và hemagglutinin-S14 được đồng hóa từ các tế bào bị biến nạp bằng sắc ký ái lực glutathione, cho thấy mối liên hệ của chúng trên cơ thể. Phân tích các đột biến xóa S14 trong hệ thống nấm men cho thấy cần có một quá trình đồng hóa. Trong các nghiên cứu song song, chúng tôi quan sát thấy một protein 36-kDa có đặc tính đồng hóa với S14 từ dịch chiết tế bào gan chuột phóng xạ. Chúng tôi đề xuất rằng S14 là một chất kích hoạt phiên mã có tính axit hoạt động như một đồng hóa để điều chỉnh biểu hiện gen như một thành phần của một phức hợp ba bên với protein gan 36-kDa. |
Regulation of the number of pituitary vasopressin (VP) receptors plays an important role in controlling pituitary responsiveness during alterations of the hypothalamic pituitary adrenal axis. The mechanisms regulating these VP receptors were studied by analysis of the effects of adrenalectomy and glucocorticoid administration on V1b receptor (V1b-R) messenger RNA (mRNA) by Northern blot and by in situ hybridization in the rat. Adrenalectomy transiently decreased V1b-R mRNA levels by 18 h (77% and 62% for the 3.7-kb and 3.2-kb bands in the Northern blots, and 50% by in situ hybridization), returning to basal levels after 6 days. The decrease in V1b-R mRNA after 18 h adrenalectomy was fully prevented by dexamethasone (100 microg s.c.) but not by elimination of hypothalamic CRH and VP by paraventricular nucleus lesions or median eminence deafferentation. In sham-operated rats, dexamethasone increased receptor mRNA by 50% after 6 days. In contrast to Sprague-Dawley rats, in Brattleboro rats (di/di), which lack hypothalamic VP, adrenalectomy caused a sustained decrease in V1b-R mRNA levels (<50% of controls by 6 days). The data show that pituitary V1b-R mRNA is positively regulated by glucocorticoids and that the recovery of V1b-R mRNA levels after prolonged adrenalectomy is probably mediated by VP. In addition, the data suggest that the down-regulation of VP binding after long-term adrenalectomy is due to posttranscriptional events rather than to changes in V1b-R mRNA. | Điều hòa số lượng thụ thể vận mạch tuyến yên (VP) đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm soát đáp ứng tuyến yên trong quá trình thay đổi trục thượng thận tuyến yên vùng dưới đồi. Cơ chế điều hòa các thụ thể VP này được nghiên cứu bằng cách phân tích ảnh hưởng của phẫu thuật cắt tuyến thượng thận và sử dụng glucocorticoid lên thụ thể V1b (V1b-R) thông tin RNA (mRNA) bằng blot Bắc và lai tại chỗ trên chuột cống trắng. Mức V1b-R mRNA giảm thoáng qua trong 18 giờ (77% và 62% ở dải 3,7-kb và 3,2-kb ở blot Bắc, 50% bằng lai tại chỗ) trở về mức cơ sở sau 6 ngày. Sự giảm V1b-R mRNA sau 18 giờ được ngăn chặn hoàn toàn bằng dexamethasone (100 microg s. c.) nhưng không phải bằng cách loại bỏ CRH và VP vùng dưới đồi bằng các tổn thương nhân trung gian hoặc sự giảm dẫn truyền trung vị. Ở chuột giả phẫu thuật, dexamethasone làm tăng 50% mRNA thụ thể sau 6 ngày. Trái ngược với chuột Sprague-Dawley, ở chuột Brattleboro (di/di) không có VP vùng dưới đồi, phẫu thuật cắt tuyến thượng thận làm giảm nồng độ V1b-R mRNA kéo dài (< 50% các trường hợp kiểm soát sau 6 ngày ). Dữ liệu cho thấy sự giảm gắn kết VP của tuyến yên sau phẫu thuật dài hạn có lẽ là do các sự kiện hậu chuyển gen chứ không phải do sự thay đổi nồng độ V1b-R mRNA. Ngoài ra, dữ liệu cho thấy sự điều hòa giảm gắn kết VP sau phẫu thuật dài hạn là do các sự kiện sau chuyển gen chứ không phải do sự thay đổi của VP. |
ErbB3 is an epidermal growth factor receptor-related type I tyrosine kinase receptor capable, in conjunction with ErbB2 or epidermal growth factor receptor, of transmitting proliferative and differentiative signals in a variety of cell types. We previously showed that ErbB3 messenger RNA and protein increase in cultured hepatocytes during the first 12 h in culture, as does the binding of heregulin beta1, a ligand for ErbB3. Insulin inhibits the increase in heregulin beta1 binding, as well as the increase in ErbB3 messenger RNA and protein. Two models of insulin deficiency in vivo (diabetes and fasting) demonstrated elevated levels of hepatic ErbB3 protein, strengthening the relevance of our observations in vitro. Using chemical activators or antagonists, we sought to identify the signaling pathways that link insulin to ErbB3 expression. The PI-3 kinase inhibitors, wortmannin and LY294002, completely blocked the inhibition of ErbB3 protein expression by insulin, suggesting a role for PI-3 kinase in the regulation of this growth factor receptor. Rapamycin, an inhibitor of p70 S6 kinase, an enzyme downstream of PI-3 kinase, failed to block the effect of insulin on ErbB3 expression. These results suggest a complex regulatory paradign for ErbB3 that includes PI-3 kinase and may be linked, via insulin, to the metabolic status of the animal. | ErbB3 là một thụ thể tyrosine kinase loại I liên quan đến yếu tố tăng trưởng biểu bì, có khả năng truyền tín hiệu sinh sôi nảy nở và biệt hóa ở nhiều loại tế bào. Trước đây, chúng tôi đã chứng minh rằng RNA thông tin ErbB3 và protein tăng lên ở tế bào gan nuôi cấy trong 12 giờ đầu tiên khi nuôi cấy, cũng như sự gắn kết của heregulin beta1, một phối tử của ErbB3. Insulin ức chế sự gia tăng liên kết với heregulin beta1 cũng như sự gia tăng RNA thông tin ErbB3 và protein. Hai mô hình thiếu hụt insulin trên thực nghiệm (đái tháo đường và nhịn ăn) cho thấy mức độ protein ErbB3 ở gan tăng cao, tăng cường sự phù hợp của các quan sát của chúng tôi trong ống nghiệm. Sử dụng các chất kích hoạt hóa học hoặc chất đối kháng, chúng tôi tìm cách xác định con đường truyền tín hiệu liên kết insulin với biểu hiện ErbB3. Các chất ức chế PI-3 kinase, wortmannin và LY294002 đã hoàn toàn ngăn chặn sự ức chế biểu hiện protein ErbB3 của insulin, cho thấy vai trò của PI-3 kinase trong việc điều hòa thụ thể yếu tố tăng trưởng này. Rapamycin, một chất ức chế p70 S6 kinase, một enzyme ở hạ nguồn của enzyme PI-3 kinase, đã không ngăn chặn được tác động của insulin lên biểu hiện ErbB3. Kết quả này cho thấy một sự điều hòa phức tạp của ErbB3 bao gồm cả enzyme PI-3 kinase và có thể liên kết với tình trạng trao đổi chất của động vật thông qua insulin. |
Insulin-like growth factors (IGFs) stimulate both proliferation and differentiation of myogenic cell lines, and these actions are mostly mediated through the type I IGF receptor (type I IGF-R). To further investigate the role of this receptor in phenotypic characteristics of C2 murine myoblasts, we overexpressed the human type I IGF-R in the inducible clone of C2 cells, which requires IGFs in the differentiation medium to undergo terminal differentiation. Inducible myoblasts were transfected with either the eukaryotic expression vector pNTK or pNTK containing the human type I IGF-R complementary DNA, and we isolated two clones named Ind-Neo and Ind-R, respectively. Binding and autophosphorylation experiments indicate that Ind-R cells express about 10 times as much type I IGF-R compared with Ind-Neo control cells and that the transfected type I IGF-R is functional in Ind-R cells. We show that overexpression of the human type I IGF-R makes inducible myoblasts able to differentiate spontaneously, as assessed by expression of the myogenic transcription factors MyoD and myogenin, detection of the muscle-specific protein troponin T, and myotube formation. Moreover, when exposed to IGF-I, Ind-R cells lose contact inhibition, grow in the presence of a low level of growth factors and form colonies in soft agar, which is characteristic of a ligand-dependent transformed phenotype. It emerges from this study that 1) the type I IGF-R is strongly involved in the phenotypic differences between inducible and permissive cells with respect to the differentiation program; and 2) overexpression causes this receptor to act as a ligand-dependent transforming protein in muscle cells. We suggest that type I IGF-R abundance and level of activation may determine the efficiency of the autocrine mode of action of IGFs and discriminate their biological functions. | Các nhân tố tăng trưởng giống Insulin (IGFs) kích thích sự tăng sinh và biệt hóa của các dòng tế bào tạo cơ và các hoạt động này chủ yếu được trung gian thông qua thụ thể IGF type I (loại IGF-R ). Để tìm hiểu thêm về vai trò của thụ thể này trong các đặc điểm kiểu hình của nguyên bào cơ chuột C2, chúng tôi đã biểu hiện quá mức IGF-R type I ở người trong các dòng tế bào C2 nhân bản, điều này đòi hỏi IGF trong môi trường biệt hóa phải trải qua quá trình biệt hóa cuối cùng. Các nguyên bào cơ thể có thể cảm ứng được chuyển hóa với vector biểu hiện nhân thực pNTK hoặc pNTK chứa DNA bổ sung IGF-R type I ở người và chúng tôi đã phân lập được hai dòng vô tính lần lượt có tên Ind-Neo và Ind-R. Các thí nghiệm liên kết và tự động hóa cho thấy các tế bào Ind-R biểu hiện nhiều gấp 10 lần IGF-R type I so với các tế bào đối chứng Ind-Neo và IGF-R được chuyển hóa có chức năng trong các tế bào Ind-R. Chúng tôi đã chứng minh rằng sự biểu hiện quá mức của IGF-R type I ở người làm cho các nguyên bào cơ thể cảm ứng có khả năng biệt hóa tự phát, được đánh giá bằng sự biểu hiện của các nhân tố phiên mã myogenin và myoD, phát hiện protein đặc hiệu của cơ troponin T và sự hình thành ống cơ. Hơn nữa, khi tiếp xúc với IGF-I, các tế bào Ind-R mất khả năng ức chế tiếp xúc, phát triển khi có sự hiện diện của các nhân tố tăng trưởng ở mức độ thấp và hình thành các cụm trong môi trường thạch mềm, đặc trưng của kiểu hình biến đổi phụ thuộc phối tử. Từ nghiên cứu này, chúng tôi nhận thấy rằng 1) IGF-R type I có liên quan chặt chẽ đến sự khác biệt kiểu hình giữa các tế bào cảm ứng và cho phép đối với chương trình biệt hóa; và 2) sự biểu hiện quá mức của IGF-R type I có thể quyết định hiệu quả của chế độ hoạt động tự tiết của IGF và phân biệt các chức năng sinh học của chúng. |
Because interferon-gamma (IFN gamma) is present in the central nervous system during neurologic diseases associated with inflammation, its effect on endotoxin-induced cytokines was studied. Cerebrospinal fluid (CSF) and serum levels of interleukin (IL)-1beta, IL-6, and tumor necrosis factor-alpha (TNF alpha), their messenger RNA expression in brain areas (hypothalamus, hippocampus, and striatum) and in spleen were evaluated 2 and 8 h after endotoxin [lipopolysaccharide (LPS), 25 microg/rat i.c.v.], IFN gamma (2.5 microg/rat i.c.v.) or after their coadministration in rats. CSF and serum IL-1beta levels were increased by LPS alone and IFN gamma coadministration did not furtherly increase them. IFN gamma potentiated LPS effect on IL-6 and TNF alpha levels in both CSF and serum. LPS and IFN-gamma coadministration did not alter IL-1beta messenger RNA expression induced by LPS in brain areas and in spleen, but it potentiated that of IL-6 and TNF alpha. The present in vivo data show that i.c.v. coadministration of LPS and IFN gamma results in a potentiation of cytokine production (IL-6 and TNF alpha) which may trigger a cascade of events relevant to neurodegenerative processes. This action is independent of IL-1beta because the production of this cytokine is not altered by IFN gamma treatment. | interferon gamma (IFN gamma) có mặt trong hệ thần kinh trung ương trong các bệnh lý thần kinh liên quan đến viêm, do đó tác dụng của interferon gamma lên các cytokine do nội độc tố gây ra đã được nghiên cứu. Dịch não tủy (CSF) và nồng độ interleukin (IL) - 1beta, IL-6 và yếu tố hoại tử khối u-alpha (TNF alpha) trong huyết thanh được đánh giá sau 2 và 8 giờ sau khi nội độc tố (lipopolysaccharide |
Previously, we have shown that intermittent calcium (Ca2+) stimuli increase alpha, LHbeta, and FSHbeta messenger RNAs (mRNAs), and only LHbeta mRNA was increased by continuous Ca2+. As gonadotropin subunit and GnRH receptor (GnRH-R) mRNAs are differentially regulated by alterations in GnRH pulse interval, we aimed to determine whether changes in the frequency of Ca2+ signals play a role in this effect. Cultured adult female rat pituitary cells in perifusion were given pulses of the Ca2+ channel activator BayK 8644 (10 microM; with 10 mM KCl in the injectate), at intervals of 16, 60, or 180 min for 24 h (vehicle pulses or 100 pM GnRH to controls). Pulsatile Ca2+ influx stimulated a rise in all mRNAs examined (P < 0.05 vs. vehicle controls); however, optimal pulse intervals differed. Alpha and LHbeta mRNAs were maximally stimulated by 16- or 60-min pulses (57% and 74% increases, respectively), with 180-min pulses being less effective. In contrast, FSHbeta and GnRH-R mRNAs were selectively stimulated by 180-min pulses (51% and 41% increases, respectively). Pulsatile GnRH produced similar increases in GnRH-R and subunit mRNAs (53-78% vs. controls). These results reveal that alterations in the frequency of Ca2+ signals can regulate gonadotrope gene expression in a differential manner, producing effects similar to previous findings for GnRH. Thus, intermittent increases in intracellular Ca2+ may be an important step in the transmission of GnRH pulse signals from the plasma membrane to the gene. | Trước đây, chúng tôi đã chứng minh rằng các kích thích canxi (Ca2+) gián đoạn làm tăng alpha, LHbeta và RNA thông tin FSHbeta (mRNA) và chỉ có MRNA LHbeta tăng lên bởi Ca2+ liên tục. Do các tiểu đơn vị gonadotropin và thụ thể GnRH (GnRH-R) được điều hòa khác biệt bởi sự thay đổi khoảng xung GnRH, chúng tôi muốn xác định liệu sự thay đổi tần số tín hiệu Ca2+ có ảnh hưởng đến hiệu ứng này hay không. Tế bào tuyến yên cái trưởng thành nuôi cấy trong quá trình tiêm được cho xung của chất kích hoạt kênh Ca2+ BayK 8644 (10 microM; với 10 mM KCl trong ống tiêm) với khoảng thời gian 16,60 hoặc 180 phút trong 24 giờ (tia phương tiện hoặc 100 pM GnRH điều khiển). Dòng Ca2+ xung kích thích sự tăng lên trong tất cả các mRNA được kiểm tra (P < 0,05 so với điều khiển phương tiện); tuy nhiên, khoảng xung tối ưu khác nhau. Các mRNA Alpha và LHbeta được kích thích tối đa bởi xung 16 hoặc 60 phút (tương ứng 57% và 74% ), với xung 180 phút kém hiệu quả hơn. Ngược lại, GnRH FSHbeta và GnRH-R được kích thích chọn lọc bởi xung 180 phút (tương ứng 51% và 41% ). GnRH xung kích thích tương tự GnRH-R và mRNA tiểu đơn vị (tương ứng 53-78% so với điều khiển). |
The type 2 5'-deiodinase (D2) appears to play an important role in maintaining the intracerebral T3 content relatively constant during changes in thyroidal state. Previous studies have demonstrated that the regulation of this enzyme by thyroid hormone and its analogs occurs at a posttranslational level. The availability of the rat D2 complementary DNA now allows an assessment of whether pretranslational regulation of this enzyme also occurs in the cerebral cortex. In rats rendered hypothyroid by the addition of methimazole to the drinking water, D2 messenger RNA (mRNA) is increased 70% (P = 0.03). Treatment with L-T3 (50 microg/100 g BW) for 4 days results in an 80% decrease in D2 mRNA compared with that in euthyroid controls (P < 0.001). Administration of lower doses of L-T3 (0.25-3 microg/100 g BW x day) is associated with a dose-dependent decrease in cortical D2 mRNA, but little or no change in D2 activity. The decrease in D2 mRNA in response to T3 treatment can be demonstrated within 4 h. Treatment of hypothyroid rats for 2 weeks with graded doses of L-T4 (0.1-1.5 microg/100 g BW x day) results in a significant decrease in cortical D2 activity, but not mRNA. The association between D2 activity and D2 mRNA in euthyroid, hypothyroid, and hormone-treated rats across a full range of thyroidal states suggests that L-T4 treatment is associated with greater changes in cortical D2 activity (via posttranslational effects) than mRNA, whereas L-T3 treatment has a greater effect on decreasing D2 mRNA (i.e. pretranslational effects). In conclusion, these studies demonstrate both pre- and posttranslational regulation of cortical D2 expression. The relative contribution of each mechanism depends on the ambient thyroid hormone concentration. | Enzyme D2 loại 2 đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì hàm lượng T3 trong não tương đối ổn định trong quá trình thay đổi trạng thái tuyến giáp. Các nghiên cứu trước đây đã chứng minh rằng sự điều hòa của enzyme này bởi hormone tuyến giáp và các chất tương tự của nó xảy ra ở mức độ sau chuyển dịch. DNA bổ sung D2 của chuột hiện nay cho phép đánh giá liệu sự điều hòa trước chuyển dịch của enzyme này có xảy ra ở vỏ não hay không. Ở chuột bị hạ huyết áp khi bổ sung methimazole vào nước uống, D2 thông tin RNA (mRNA) tăng 70% ( P = 0,03). Điều trị bằng L-T3 (50 microg/100 g BW) trong 4 ngày cho kết quả giảm 80% D2 mRNA so với đối chứng euthyroid (P < 0,001 ). Điều trị bằng L-T3 (0,25-3 microg/100 g BW x ngày) có liên quan đến sự giảm phụ thuộc liều D2 mRNA vỏ não, nhưng ít hoặc không thay đổi hoạt động của D2. Sự giảm D2 mRNA để đáp ứng với điều trị T3 có thể được chứng minh trong vòng 4 giờ. Điều trị chuột hạ huyết áp trong 2 tuần với liều L-T4 (0,1-1,5 microg/100 g BW x ngày) cho kết quả giảm đáng kể hoạt động của D2 mRNA, nhưng không có sự thay đổi của mRNA. Mối liên quan giữa hoạt động của D2 và D2 mRNA ở chuột bị hạ huyết áp và chuột bị điều trị bằng hormone trong toàn bộ các trạng thái tuyến giáp cho thấy điều trị bằng L-T4 có liên quan đến sự thay đổi lớn hơn trong hoạt động của vỏ não D2 (thông qua tác dụng sau chuyển dịch) so với mRNA, trong khi điều trị bằng L-T3 có tác dụng lớn hơn trong việc giảm biểu hiện của D2 mRNA (tức là tác dụng trước chuyển dịch). |
To study the transcriptional regulation of the vasopressin gene in vitro, 3 kb of the 5' regulatory region of the rat vasopressin gene was isolated and subcloned, along with a series of various deletion mutants, into vectors containing the luciferase reporter gene. After transfecting these genes transiently into the human choriocarcinoma cell line JEG-3 along with a glucocorticoid receptor (GR) expression vector, transcriptional activity was quantitated using the luciferase assay. Forskolin, 8-bromo-cAMP, and protein kinase A catalytic subunit expression all markedly increased transcription from the 3-kb promoter. Analyses with deletion mutants of the promoter showed that two cAMP-responsive element (CRE)-like sequences (-227 to -220 bp and -123 to -116 bp) contribute to this positive regulation. Expression of KCREB, a dominant negative mutant of the cAMP-responsive element binding protein (CREB), suggested the involvement of CREB. Transfection of the activator protein 2 (AP2) DNA consensus sequence partially blocked transcription. Dexamethasone suppressed forskolin-stimulated expression. The negative effect of glucocorticoid was GR dependent and may be mediated by a mechanism not involving GR binding to DNA because it was independent of the putative glucocorticoid-responsive element previously reported in the vasopressin promoter (-622 to -608 bp) and was preserved in the shorter promoter constructs in which no glucocorticoid-responsive element-like sequence was found. Our data suggest that several trans-acting factors including CREB, AP2, and GR are likely to be involved in vasopressin gene transcription and that the positive and negative regulation of vasopressin gene transcription is complex. | Nghiên cứu điều hòa phiên mã gen vasopressin in vitro, vùng điều hòa 3km của gen vasopressin chuột được phân lập và nhân bản cùng với một loạt các đột biến xóa khác nhau thành các vector chứa gen phóng viên luciferase. Sau khi truyền các gen này tạm thời vào dòng tế bào ung thư biểu mô tuyến JEG-3 cùng với vector biểu hiện glucocorticoid (GR ), hoạt tính phiên mã được định lượng bằng xét nghiệm luciferase. Biểu hiện tiểu đơn vị xúc tác Forskolin, 8-bromo-cAM |
Androgen receptor-positive LNCaP cells were stably transfected with a rat glucocorticoid receptor (GR) expression plasmid. Ligand-binding studies in the generated cell lines revealed high-affinity binding of the cognate ligands to their receptors. Transfection experiments with the newly derived cell lines showed that, like androgen receptor, GR can induce activity of a prostate-specific antigen promoter fragment linked to the luciferase gene. Similarly, dexamethasone can stimulate expression of endogenous prostate-specific antigen messenger RNA. Cell proliferation could be induced by R1881. In contrast, dexamethasone treatment of the GR-positive sublines had no stimulatory effect on cell growth. Using the differential display technique, a so far unknown complementary DNA fragment, designated 21.1, specifically induced by androgens and not by glucocorticoids, has been identified. In conclusion, the newly generated cell lines, together with the parental LNCaP cell line, form an attractive system with which to study the mechanism of specificity of steroid hormone regulation of gene expression. | Các tế bào LNCaP dương tính với thụ thể androgen đã được chuyển hóa ổn định bằng plasmid biểu hiện glucocorticoid (GR) ở chuột. Các nghiên cứu liên kết Ligand trên các dòng tế bào được tạo ra cho thấy các phối tử nhận thức có ái lực cao với các thụ thể của chúng. Các thí nghiệm chuyển hóa với các dòng tế bào mới cho thấy, giống như thụ thể androgen, GR có thể gây ra hoạt động của một đoạn promoter kháng nguyên đặc hiệu tuyến tiền liệt liên kết với gen luciferase. Tương tự, dex |
Complementary DNAs for two mutant thyroid hormone alpha1 receptors (TR alpha1) were isolated from hepatocellular carcinomas of two patients. Sequence analyses of the complementary DNAs showed a single Val390Ala and double Pro398Ser/Glu350Lys mutations in mutants H and L, respectively. We characterized their hormone-binding, DNA-binding, and dominant negative activities. Mutants H and L did not bind the hormone T3. Their DNA-binding activities were analyzed using three types of thyroid hormone response elements (TREs) in which the half-site binding motifs are arranged in an everted repeat (Lys), an inverted repeat (Pal), or a direct repeat separated by four nucleotides (DR4). Compared with wild-type TR alpha1 (w-TR alpha1), which bound these TREs with different homodimer/monomer ratios, binding of mutant L to the three TREs as homodimers was reduced by approximately 90%. However, binding of mutant H to these TREs was more complex. Although it bound normally to DR4 as homodimers, its binding to Lys as homodimers was reduced by approximately 80%. Surprisingly, its binding to Pal was markedly enhanced compared with w-TR alpha1. The binding of these two mutants to the three TREs as heterodimers with retinoid X receptors (RXR alpha and -beta) was not significantly affected. Consistent with the lack of T3-binding activity, both mutants had lost their trans-activation capacity. Mutants H and L exhibited dominant negative activity, but differed in their TRE dependency. The dominant negative potency of mutant H was in the rank order of Pal > DR4 > Lys, whereas no TRE dependency was observed for mutant L. The present study indicates that mutations of the TR alpha gene do occur in patients and that these novel TR alpha1 mutants provide a valuable tool to further understand the molecular basis of the dominant negative action of mutant TRs. | Bổ sung DNA cho hai đột biến thụ thể hormone tuyến giáp alpha1 (TR alpha1) được phân lập từ ung thư biểu mô tế bào gan của hai bệnh nhân. Phân tích trình tự các DNA bổ sung cho thấy một đột biến Val390Ala đơn và hai đột biến Pro398Ser/Glu350Lys ở hai đột biến H và L, tương ứng. Chúng tôi mô tả đặc điểm liên kết hormone, liên kết DNA và hoạt động âm tính chủ yếu của chúng. Các đột biến H và L không liên kết với hormone T3. Các hoạt động liên kết DNA của chúng được phân tích bằng cách sử dụng ba loại yếu tố đáp ứng hormone tuyến giáp (TREs) trong đó các mô típ liên kết nửa vị trí được sắp xếp lặp lại (Lys), lặp lại đảo ngược (Pal) hoặc lặp lại trực tiếp được phân tách bằng bốn nucleotide (DR4). So với TR alpha1 hoang dại (w-TR alpha1) liên kết các TRE này với các tỷ lệ homodimer/monome khác nhau, liên kết của L với ba TRE với tư cách đồng nhất bị giảm khoảng 90%. |
Subsets and Splits