La tecnica dell'ibridoma viene utilizzata per ottenere:
Antigene specifico
Complemento
Anticorpo specifico
Interleuchine
Ris. è 'c' cioè anticorpo specifico o Gli ibridomi sono cellule che sono state progettate per produrre un anticorpo specifico in grandi numeri.Hvbridomaso Gli ibridomi sono cellule che sono state progettate per produrre un anticorpo specifico in grandi numerio Per raggiungere questo obiettivo, qualità di due tipi di le cellule devono essere combinate insieme Le.Cellule che possono produrre grandi quantità di anticorpi puri eCellule che hanno la capacità di crescere continuamente.o Questi due tipi di cellule vengono poi fusi insieme per formare ibridomi.Procedurao Vengono prodotte le cellule che secernono anticorpi puri iniettando l'antigene specifico in un topo e ottenendo le plasmacellule specifiche dell'antigene (cellule produttrici di anticorpi) dalla milza del topo,o Le cellule che possono crescere indefinitamente in coltura sono le cellule di mieloma (cellule cancerose).o Queste due linee cellulari sono fuse insieme. La cellula ibrida così prodotta può essere clonata per produrre un gran numero di cloni figli identici.o Queste cellule clone figlie producono quindi anticorpi. Poiché questi anticorpi provengono da un solo tipo di cellula (cellula di ibridoma), sono chiamati anticorpi monoclonali.o Il terreno HAT (ipoxantina, aminopterina e timidina) viene utilizzato per la preparazione di anticorpi monoclonali perché consente la crescita solo di cellule di ibridoma fuse. Non consente la crescita del mieloma non fuso e delle cellule anticorpali non fuse. Quindi il terreno HAT è un terreno selettivo che consente (che consente la crescita selettiva dell'ibridoma fuso)Come avviene questo?o Prima di proseguire con la discussione, ricorda questi pochi punti sulla sintesi delle purine.o La sintesi delle purine è essenziale per la sopravvivenza delle cellule. La purina può essere sintetizzata in due modi, ad esempio mediante sintesi de novo (per questa via è necessario l'enzima diidrofolato reduttasi). Via di salvataggio (per le vie di salvataggio è necessario un enzima ipoxantina - guanina fosforibosil transferasi).o Le cellule del mieloma sono prive dell'enzima HGPRTasi, pertanto non possono sintetizzare la purina mediante vie di salvataggio,o Le cellule anticorpali hanno l'enzima HGPRTasi in modo che possano utilizzare le vie di salvataggio,o L'amminopterina inibisce la diidrofolato reduttasi, un enzima utilizzato nella sintesi denovo del purineo Quando due linee cellulari, ovvero cellule produttrici di anticorpi e cellule di mieloma, vengono coltivate nel terreno HAT, solo l'ibridoma fuso le cellule sopravvivono. Le cellule del mieloma muoiono perché mancano dell'enzima HGPRTasi, quindi non possono utilizzare le vie di salvataggio per la sintesi delle purine. Inoltre, non possono utilizzare la via denovo, perché l'amminopterina presente nel mezzo HAT inibisce la diidrofolato reduttasi (un enzima essenziale per la sintesi denovo della purina).o Le cellule produttrici di anticorpi non fusi muoiono poiché non possono crescere indefinitamente a causa della loro durata di vita limitata,o Solo le cellule di ibridoma fuso crescono indefinitamente perché la cellula partner dell'anticorpo fornisce HGPRTasi e la cellula partner del mieloma le conferisce l'immortalità (poiché è una cellula cancerosa)
Immunology