Le endonucleasi di restrizione sono gli enzimi
Utilizzato per unire il DNA al vettore
Fendono il DNA in una sequenza specifica
Tagliano il DNA in modo casuale
Diagnostica la molecola del DNA dalle malattie
Ris. b (fendono il DNA in una sequenza specifica) (Ref. Harper's Illustrated Biochemistry, 26lh/57, 397; Tabella 40-2)ENDONUCLEASI DI RESTRIZIONE# Enzima di restrizione: un'endodeossinucleasi che causa la scissione di entrambi i filamenti di DNA in siti altamente specifici dettati da la sequenza di basi.# Il rilevamento dei polimorfismi della lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP) facilita il rilevamento prenatale di disturbi ereditari quali:- tratto falciforme,- beta talassemia,- fenilchetonuria e- malattia di Huntington.# Il rilevamento di RFLP comporta la scissione del doppio- DNA intrecciato mediante endonucleasi di restrizione, che possono rilevare sottili alterazioni nel DNA che influenzano i loro siti riconosciuti. Gli enzimi capaci di degradare gli acidi nucleici (nucleasi) possono essere classificati in diversi modi:# Quelli che mostrano specificità per l'acido desossiribonucleico sono indicati come desossiribonucleasi.# Quelli che idrolizzano specificamente gli acidi ribonucleici sono le ribonucleasi.# All'interno di entrambe queste classi vi sono enzimi capaci di scindere i legami fosfodiesterici interni per produrre terminali 3'-idrossile e 5'-fosforile oppure terminali 5'-idrossile e 3'-fosforile. Queste vengono chiamate endonucleasi.# Esistono classi di endonucleasi che riconoscono sequenze specifiche nel DNA; la maggior parte di queste sono endonucleasi di restrizione, che negli ultimi anni sono diventate strumenti importanti nella genetica molecolare e nelle scienze mediche.# Alcune nucleasi sono capaci di idrolizzare un nucleotide solo quando è presente all'estremità di una molecola; queste sono chiamate esonucleasi.- Le esonucleasi agiscono solo in una direzione (3-5 o 5-3). Nei batteri, un'esonucleasi 3-5 è parte integrante del meccanismo di replicazione del DNA e serve a modificare, o correggere, il deossinucleotide aggiunto più recentemente per errori di accoppiamento delle basi. Punti educativi: # Gli enzimi di restrizione tagliano il DNA di qualsiasi fonte in brevi pezzi in modo sequenza-specifico, a differenza della maggior parte degli altri metodi enzimatici, chimici o fisici, che rompono il DNA in modo casuale.# Gli enzimi di restrizione e la DNA ligasi vengono utilizzati anche per preparare molecole di DNA chimerico.
Molecular Genetics