Procedura utilizzata per l'analisi dell'RNA
Northern blot
Macchia del sud
Macchia occidentale
Macchia orientale
Ris. a (Northern blot) (Ref. Harper biochemistry 27th ed., Fig. 39-5).# Northern blot = Simile al Southern blot, tranne per il fatto che un campione di RNA viene sottoposto a elettroforesi. Utile per studiare i livelli di mRNA, che riflettono l'espressione genica.# *Southern = DNA# **Northern = RNA# ***Western = Protein.SOUTHERN BLOT# Il Southern blotting viene utilizzato per analizzare se i geni sono stati cancellati o riarrangiati. Viene utilizzato anche per rilevare i polimorfismi della lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP).# Il DNA genomico viene digerito con endonucleasi di restrizione e separato mediante elettroforesi su gel. I singoli frammenti possono quindi essere trasferiti su una membrana e rilevati dopo l'ibridazione con specifiche sonde di DNA radioattivo. NORTHERN BLOT# I Northern blot vengono utilizzati per analizzare modelli e livelli di espressione genica in diversi tessuti.# In un Northern blot, l'mRNA viene separato su un gel e trasferiti su una membrana, e le trascrizioni specifiche vengono rilevate utilizzando il DNA radiomarcato come sonda. Questa tecnica è stata ampiamente soppiantata da metodi più sensibili e completi come la PCR con trascrittasi inversa (RT) e gli array di espressione genica su chip di DNA.# Le tecniche di trasferimento Northern e Western blot vengono utilizzate rispettivamente per dimensionare e quantificare specifiche molecole di RNA e proteine .# Una quarta tecnica di ibridazione, il Southwestern blot, esamina le interazioni proteina-DNA. Le proteine ​​vengono separate mediante elettroforesi, rinaturate e analizzate per un'interazione mediante ibridazione con una sonda di DNA marcata specifica. Western blot# La proteina del campione viene separata tramite elettroforesi su gel e trasferita a un filtro. L'anticorpo marcato viene utilizzato per legarsi alla proteina rilevante. Test di conferma per l'HIV dopo + ELISA.Southwestern blot# Identifica le proteine ​​che legano il DNA (ad esempio, fattori di trascrizione) utilizzando sonde oligonucleotidiche marcate.
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