Sono tutte fasi della PCR TRANNE:
Denaturazione
Ricottura
Estensione
Trasformazione
RISPOSTA: (D) TrasformazioneRIF: Harper's 28 ed capitolo 39La reazione a catena della polimerasi (PCR) è un metodo per amplificare una sequenza bersaglio di DNA. La PCR fornisce un mezzo sensibile, selettivo ed estremamente rapido per amplificare qualsiasi sequenza di DNA desiderata. La specificità si basa sull'uso di due primer oligonucleotidici che si ibridano in sequenze complementari su filamenti opposti del DNA e fiancheggiano la sequenza bersaglio. Il campione di DNA viene prima riscaldato per separare i due filamenti del DNA modello contenente la sequenza target; i primer, aggiunti in grande eccesso, possono ricomporsi al DNA; e ciascun filamento viene copiato da una DNA polimerasi, a partire dai siti dei primer in presenza di tutti e 4 i dXTP. Ciascuno dei due filamenti di DNA funge da modello per la sintesi di nuovo DNA dai due primer. Cicli ripetuti di denaturazione termica, ricottura dei primer nelle loro sequenze complementari ed estensione dei primer ricotti con la DNA polimerasi determinano l'amplificazione esponenziale di segmenti di DNA di lunghezza definita (un raddoppio ad ogni ciclo). Le prime reazioni PCR utilizzavano una DNA polimerasi di E coli che veniva distrutta da ogni ciclo di denaturazione termica. La sostituzione con una DNA polimerasi termostabile del Thermusaquaticus (o la corrispondente DNA polimerasi di altri batteri termofili), un organismo che vive e si replica a 70-80°C, ovvia a questo problema e ha reso possibile l'automazione della reazione, poiché le reazioni della polimerasi possono essere eseguito a 70°C. Ciò ha anche migliorato la specificità e la resa del DNA.
Molecular Biology Techniques