Il monitoraggio della denaturazione del DNA in vitro viene effettuato da ?
Centrifugazione
Assorbimento UV
Cromatografia
HPLC
Ris. è "b", cioè assorbimento UVDenaturazione (fusione) del DNALa denaturazione (fusione) si riferisce alla separazione dei due filamenti del DNA in due filamenti componenti. Quando la temperatura del mezzo aumenta, i legami idrogeno che collegano la coppia di basi complementari tendono a rompersi. Di conseguenza, si verifica la separazione di due filamenti. La temperatura di fusione (Tm) indica la temperatura alla quale si perde metà della struttura a doppio filamento. Normalmente, Tm è compreso tra 85°C e 95°C. Poiché G e C sono collegati più fortemente da tre legami idrogeno, a differenza di due legami idrogeno che collegano A e T, il collegamento G e C fornisce termostabilità al DNA. Pertanto, le molecole di DNA con un contenuto di GC più elevato hanno una Tm relativamente più alta. Per ogni aumento del 10% del contenuto di GC, la temperatura di fusione aumenta di 5°C. La formula semplice è -Tm (gradiC) = 2 (numero di coppie di basi AT) + 4 (numero di coppie di basi GC) Oltre al calore, anche il trattamento con alcali e la diminuzione della concentrazione di sale causano la denatruazione. La diminuzione della concentrazione di sale diminuisce la Tm. Pertanto, l'aumento della concentrazione di sale aumenta la stabilità del duplex del DNA. La denaturazione influisce sulle proprietà del DNA e queste possono essere utilizzate per monitorare la separazione dei filamenti -i) Iperchomicità (effetto ipercromico): le basi del DNA (purine e pirimidine) assorbono la luce UV di 260 nm. Dopo la denaturazione, questa assorbanza ottica aumenta e viene chiamata ipercromicità di denaturazione o effetto ipercromico.ii) Viscosità: la viscosità della soluzione di DNA diminuisce con la fusione (denaturazione) perché i singoli filamenti sono più flessibili della doppia elica rigida e resiliente. I filamenti separati di DNA denaturato possono ricongiungersi mediante raffreddamento graduale. Questo si chiama rinaturazione o ricottura.