Le verità sulla reazione a catena della polimerasi sono tutte tranne...
Enzima termostabile
Denaturazione del DNA, seguita da ricottura
Sono necessari primer specifici
Enzimi termolabili
Ris. è 'd' cioè enzimi Thermolab* La reazione a catena della polimerasi è l'amplificazione in vitro di un frammento desiderato di DNA* L'amplificazione specifica di un frammento desiderato di DNA è possibile solo perché questo processo utilizza primer specifici che sono complementari alle sequenze fiancheggianti del frammento desiderato .* Implica tre fasi in ogni ciclo# Denaturazione a 94 o 95°C# Ricottura a (Tm - 5)°C# Allungamento a 72°C* In questo modo se la reazione a catena della polimerasi può passare attraverso n numero di cicli, alla fine otteniamo 2n prodotti. Si tratta quindi di una tecnica sensibile.* Quindi comporta la denaturazione del DNA seguita dalla ricottura.* Poiché la DNA polimerasi utilizzata in questo processo dovrebbe essere in grado di resistere a cicli ripetuti di 94 o 95°C, l'enzima dovrebbe essere termostabile. Quindi la DNA polimerasi utilizzata nella reazione a catena della polimerasi viene estratta da un organismo che vive nelle sorgenti termali. Quell'organismo è Thermus acquatico e quindi la DNA polimerasi è Taq DNA polimerasi* La temperatura ottimale richiesta per questo enzima per l'allungamento è 75°C. Quindi l'allungamento viene effettuato a 72°C
Molecular Genetics