La papaina scinde la molecola dell'immunoglobina in:
1 Fc e 1 Fab
1Fc e 2Fab
2 Fc e 1 Fab
2Fc e 2Fab
Ris. (b) Frammentazione degli anticorpi 1 Fc e 2 Fab Le prestazioni delle procedure di immunodosaggio ceain vengono migliorate utilizzando frammenti di anticorpi, come Fab e F(a13'). La frammentazione degli anticorpi viene effettuata utilizzando agenti riducenti e proteasi che digeriscono o scindono i veleni della struttura proteica dell'immunoglobulina. I frammenti anticorpali di interesse primario sono: Frammenti che legano l'antigene come Fab e b. Frammenti che definiscono la classe come Fc che non si legano all'antigene. Tecnica di frammentazione degli anticorpi Digestione della papaina: una tiolo-endopeptidasi non specifica deframmenta le molecole IgG in tre frammenti di dimensioni simili: due frammenti Fab e un frammento Fc. Digestione della pepsina: un'endopeptidasi non specifica produce un frammento F(ab')2 e numerosi piccoli peptidi del veleno Fc. Il frammento F(ab')2 risultante è composto da due unità Fab collegate tramite disolfuro. Digestione della ficina Una tiolo proteasi in grado di digerire l'IgG1 monoclonale di topo in frammenti F(ab')2 o Fab, a seconda della concentrazione di cisteina inclusa. Tipi di frammenti anticorpali Frammenti F(ab')2: i frammenti F(ab')2 (110.000 dalton) contengono due regioni leganti l'antigene unite alla cerniera tramite disolfuri. Questo frammento è privo della maggior parte, ma non di tutta, la regione Fc. Frammenti Fab': i frammenti Fab' (55.000 dalton) possono essere formati dalla riduzione di frammenti F(ab')2. Il frammento Fab' contiene un gruppo solfidrilico libero che può essere alchilato o utilizzato in coniugazione con un enzima, una tossina o un'altra proteina di interesse. Fab' deriva da F(ab')2. Frammenti Fab: Fab (50.000 dalton) è un frammento monovalente prodotto da IgG e IgM, costituito dalle regioni VH, CH1 e VL, CL, collegate da un legame disolfuro intramolecolare. Frammenti Fv: Fv (25.000 dalton) è il frammento più piccolo prodotto da IgG e IgM che contiene un sito di legame dell'antigene completo. I frammenti Fv hanno le stesse proprietà di legame e caratteristiche di legame tridimensionale simili di Fab. Frammenti Fc: i frammenti Fc (50.000 dalton) contengono la regione CH2 e CH3 e pa della regione cerniera tenuti insieme da uno o più disolfuri e interazioni non covalenti. I frammenti Fc e Fc5jt sono prodotti rispettivamente dalla frammentazione di IgG e IgM. Il termine Fc deriva dalla capacità di questi frammenti anticorpali di cristallizzare. Il frammento Fc non può legare l'antigene, ma è responsabile delle funzioni effettrici degli anticorpi, come la fissazione del complemento.