La cromatografia di affinità si occupa di
Legame specifico di un costituente proteico per un'altra molecola
Interazione proteina-proteina
Interazione proteine-carboidrati
Nessuna delle precedenti
Metodi per separare e purificare le biomolecole1 Frazionamento del sale (ad es. precipitazione di proteine ​​con solfato di ammonio) Cromatografia: carta, scambio ionico, affinità, strato sottile, gas-liquido, liquido ad alta pressione, filtrazione su gel Elettroforesi: carta, alta tensione, agarosio, acetato di cellulosa, gel di amido, gel di poliacrilammide, gel SDS-poliacrilammide. Ultracentrifugazione La cromatografia di affinità sfrutta l'elevata selettività della maggior parte delle proteine ​​per i loro ligandi. Gli enzimi possono essere purificati mediante cromatografia di affinità utilizzando substrati, prodotti, coenzimi o inibitori immobilizzati. In teoria aderiscono solo le proteine ​​che interagiscono con il ligando immobilizzato. Le proteine ​​legate vengono quindi eluite per competizione con il ligando libero e solubile o, in modo meno selettivo, interrompendo le interazioni proteina-ligando utilizzando urea, guanidina cloridrato, pH leggermente acido o elevate concentrazioni saline. Le matrici di fase stazionaria disponibili in commercio contengono ligandi come analoghi NAD+ o ATP. La purificazione delle proteine ​​espresse in modo ricombinante è spesso facilitata modificando il gene clonato per aggiungere un nuovo dominio di fusione progettato per interagire con uno specifico ligando legato alla matrice
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