La verità sulla PCR è
Amplificazione di una sequenza bersaglio di DNA
Utilizza l'enzima termolabile
Tecnica meno sensibile
Utilizza un primer
La PCR è un metodo per amplificare una sequenza bersaglio di DNA. La PCR fornisce un mezzo sensibile, selettivo ed estremamente rapido per amplificare qualsiasi sequenza di DNA desiderata. La specificità si basa sull'uso di due primer oligonucleotidici che si ibridano in sequenze complementari su filamenti opposti del DNA e fiancheggiano la sequenza bersaglio. La sintesi del DNA è catalizzata da una DNA polimerasi termostabile purificata da uno dei numerosi batteri termofili diversi, organismi che crescono a temperature comprese tra 70°C e 80°C. Le DNA polimerasi termostabili resistono a incubazioni sho a oltre 90 gradi, temperature necessarie per denaturare completamente il DNA. Queste DNA polimerasi termostabili hanno reso possibile l'automazione della PCR. Sequenze di DNA da 50 a 100 bp e fino a 10 kb possono essere amplificate mediante PCR. Venti cicli forniscono un'amplificazione di 106 (cioè 220) e 30 cicli, 109 (230). Ogni ciclo dura da <=5 a 10 minuti in modo che anche le molecole di DNA di grandi dimensioni possano essere amplificate rapidamente. La PCR consente di amplificare e analizzare il DNA di una singola cellula, follicolo pilifero o spermatozoo. La PCR viene utilizzata anche (1) per rilevare agenti infettivi, in particolare virus latenti; (2) effettuare diagnosi genetiche prenatali; (3) per rilevare polimorfismi allelici; (4) stabilire tipi di tessuti precisi per i trapianti; e (5) studiare l'evoluzione, utilizzando il DNA proveniente da campioni archeologici (6) per analisi quantitative dell'RNA dopo la copia dell'RNA e la quantificazione dell'mRNA mediante il cosiddetto metodo -PCR (copie di cDNA dell'mRNA generate da una trascrittasi inversa retrovirale) o (7) per valutare l'occupazione del DNA-proteina in vivo utilizzando test di immunoprecipitazione della cromatina.Rif: HArper's Biochemistry; 30a edizione; Pagina n.: 459
Metabolism of nucleic acids