L'RNA produce il DNA mediante l'uso di quale enzima?
Trascrittasi inversa
DNA polimerasi sintasi
RNA polimerasi sintasi
DNA topoisomerasi
RISPOSTA: (A) Trascrittasi inversa RIF: Lippincott s biochemistry 4th Ed Pagina 408, Harper 29th ed Tabella 39-3 CLASSI DI PROTEINE COINVOLTE NELLA REPLICAZIONE Funzione proteica-DNA polimerasi Polimerizzazione del deossinudeotide Casi Heli Svolgimento progressivo del DNA Topoisomerasi Alleviare la tensione torsionale che risulta dallo svolgimento indotto dall'elicasi Primasi del DNA Iniziati sintesi di primer di RNASingolo -proteine ​​leganti il ​​filamento Prevengono la ricottura prematura della dsDNADNA ligasi Sigilla l'incisione del filamento singolo tra la catena nascente e i frammenti di Okazaki sul filamento in ritardo ALCUNI ENZIMI UTILIZZATI NELLA RICERCA DEL DNA RICOMBINANTE Reazione enzimatica Uso primario Fosfatasi alcalina Defosforila le estremità 5' di RNA e DNA Rimozione di gruppi 5 -PO4 prima della marcatura con chinasi ; utilizzato anche per prevenire la seif-ligasiBAL31 nudeasiDegrada entrambe le estremità 3' e 5' del DNA Accorciamento progressivo delle molecole di DNADNA ligasiCatalizza i legami tra le molecole di DNAUnione di molecole di DNADNA polimerasi ISintetizza DNA a doppio filamento da DNA a filamento singoloSintesi di cDNA a doppio filamento; nick traduzione; generazione di estremità smussate da estremità appiccicoseDNasi IIn condizioni appropriate, produce intaccature a filamento singolo nella traduzione DNANick; mappatura dei siti ipersensibili; mappatura delle interazioni proteina-DNAEsonucleasi IIIRimuove i nucleotidi dalle estremità 3' del DNASequenziamento del DNA; mappatura delle interazioni DNA-proteineX EsonucleasiRimuove i nucleotidi dalle estremità 5' del DNASequenziamento del DNAPolinucleotide chinasiTrasferisce il fosfato terminale (posizione g) dall'ATP ai gruppi 5'-OH del DNA o dell'RNAEtichettatura terminale 32P del DNA o dell'RNATrascrittasi inversaSintetizza il DNA dal modello di RNASintesi del cDNA dall'mRNA; Studi di mappatura dell'RNA (estremità 5')Nucleasi SIDegrada il DNA a filamento singoloRimozione della "forcina" nella sintesi del cDNA; Studi di mappatura dell'RNA (entrambe le estremità 5' e 3')Transferasi terminaleAggiunge nucleotidi alle estremità 3' del DNACoda di omopolimeroUna trascrittasi inversa è coinvolta nella replicazione dei retrovirus, come il virus dell'immunodeficienza umana (HIV). Questi virus trasportano il loro genoma sotto forma di molecole di ssRNA. Dopo l'infezione di una cellula ospite, l'enzima virale, la trascrittasi inversa, utilizza l'RNA virale come modello per la sintesi 5'-3' del DMA virale, che viene poi integrato nei cromosomi dell'ospite. L'attività della trascrittasi inversa è osservata anche con i trasposoni, elementi del DNA che possono spostarsi nel genoma. Negli eucarioti, tali elementi vengono trascritti in RNA, l'RNA viene utilizzato come modello per la sintesi del DNA da una trascrittasi inversa codificata dal trasposone e il DNA viene inserito casualmente nel genoma. Le trascrittasi inverse, quindi, sono DNA polimerasi dirette dall'RNA. Librerie cDNA: se un gene di interesse è espresso a un livello molto elevato in un particolare tessuto, è probabile che l'RNA messaggero (mRNA) corrispondente a quel gene sia presente anche a livello elevate concentrazioni nella cellula. Ad esempio, l’mRNA dei reticolociti è composto in gran parte da molecole che codificano per le catene a-globina e b-globina dell’emoglobina. Questo mRNA può essere utilizzato come modello per creare una molecola complementare di dsDNA (cDNA) utilizzando l'enzima trascrittasi inversa. Il cDNA risultante è quindi una copia a doppio filamento dell'mRNA. Il cDNA può essere amplificato mediante clonazione o mediante reazione a catena della polimerasi. Può essere utilizzato come sonda per individuare il gene che codifica per l'mRNA originale (o frammenti del gene) in miscele contenenti molti frammenti di DNA non correlati. Se l'mRNA utilizzato come modello è una miscela di molte specie di dimensioni diverse, il cDNA risultante sarà eterogeneo. Queste miscele possono essere clonate per formare una libreria di cDNA. Poiché il cDNA non ha sequenze intermedie, può essere clonato in un vettore di espressione per la sintesi delle proteine ​​eucariotiche da parte dei batteri. Questi speciali plasmidi contengono un promotore batterico per la trascrizione del cDNA e una sequenza Shine-Dalgamo che consente al ribosoma batterico di avviare la traduzione della molecola di mRNA risultante.
DNA Replication 