Un enzima che riconosce una sequenza specifica (palindromica) e taglia all'interno di una molecola di DNA è?
Esonucleasi
Metilasi
Enzima di modifica
Endonucleasi di restrizione
RISPOSTA: (D) Endonucleasi di restrizione RIF: Genetica di base: libro di testo e attività di Ahmed Abouelmagd, Hussein M. Ageely pagina 117 Una sequenza palindromica è una sequenza di acido nucleico {DNA o RNA) che è la stessa sia che venga letta 5' (cinque primi) a 3' (tre primi) su un filamento o da 5' a 3' sul filamento complementare con cui forma una doppia elica. Un enzima di restrizione (o endonucleasi di restrizione) è un enzima che taglia il DNA in specifiche sequenze nucleotidiche di riconoscimento (con Tipo II enzimi di restrizione che tagliano il DNA a doppio filamento) noti come siti di restrizione. Si ritiene che tali enzimi, presenti nei batteri e negli archaea, si siano evoluti per fornire un meccanismo di difesa contro i virus invasori. All'interno di un ospite batterico, gli enzimi di restrizione tagliano selettivamente il DNA estraneo in un processo chiamato restrizione; Il DNA ospite viene metilato da un enzima di modificazione (una metilasi) per proteggerlo dall'attività dell'enzima di restrizione. Collettivamente, questi due processi formano il sistema di modificazione della restrizione. Gli enzimi di restrizione riconoscono una sequenza specifica di nucleotidi e producono un taglio a doppio filamento nel DNA. Sebbene le sequenze di riconoscimento varino tra 4 e 8 nucleotidi, molte di esse sono palindromiche, che corrispondono a sequenze di basi azotate che leggono la stessa cosa avanti e indietro. In teoria, ci sono due tipi di sequenze palindromiche che possono essere possibili nel DNA. Il palindromo a specchio è simile a quelli che si trovano nel testo ordinario, in cui una sequenza si legge allo stesso modo in avanti e all'indietro su un singolo filamento di DNA, come in GTAATG. Anche il palindromo ripetuto invertito è una sequenza che legge la stessa cosa in avanti e all'indietro, ma le sequenze in avanti e all'indietro si trovano in filamenti di DNA complementari (cioè di DNA a doppio filamento), come in GTATAC (GTATAC è complementare a CATATG ). I palindromi ripetuti invertiti sono più comuni e hanno una maggiore importanza biologica rispetto ai palindromi a specchio. Le endonucleasi di restrizione naturali sono classificate in quattro gruppi (Tipi I, II, III e IV) in base alla loro composizione e ai requisiti dei cofattori enzimatici, alla natura del loro bersaglio sequenza e la posizione del sito di clivaggio del DNA rispetto alla sequenza targetCategoriaFunzioneCofattori richiestiClivaggioTipo IProteina multifunzionale con attività sia di restrizione che di modificazione del DNA (metilasi)Mg2+, ATP SAM (S-adenosilmetionina)Cliva il DNA in siti non specifici solitamente distanti dal sito di riconoscimentoTipo IISingolo enzimi con funzione (restrizione) indipendenti dalla metilasiSolo Mg2+Site specific 8t si scindono all'interno o a brevi distanze specifiche dal sito di riconoscimentoTipo IIICombina l'attività di restrizione e modificazione del DNA (metilasi) in un singolo complesso enzimatico con diverse subunitàMg2+, SAM stimola la reazione ma non è richiestoSi scinde in siti a breve distanza dal sito di riconoscimentoEcco alcuni enzimi di restrizione e le sequenze palindromiche che riconoscono. CCTAGG5'---G GATCC---3'3'---CCTAG G---5'Taq1Thermus acquatico5'TCGA3'AGCT5'---T CGA--3'3'---AGC T--- 5'Alul*Arthrobacter luteus5'AGCT3'TCGA5'---AG CT---3'3'---TC GA---5'* = estremità smussate
Genetics