Il movimento delle proteine ​​dal nucleo al citoplasma può essere visto da:
PESCARE
FRAP
Microscopia confocale
Microscopio elettronico
Ris. B. FRAP Il movimento delle proteine ​​dal nucleo al citoplasma può essere osservato mediante il recupero della fluorescenza dopo il fotosbiancamento (FRAP). Il FRAP si basa sul principio di osservare la velocità di recupero della fluorescenza in un'area fotosbiancata della cellula, a causa del movimento della un marcatore fluorescente nell'area. Il metodo consiste nel marcare un componente cellulare specifico (ad esempio proteine, lipidi, carboidrati) con una molecola afluorescente, fotografare una piccola porzione della cellula e quindi visualizzare il recupero della fluorescenza nel tempo il recupero della fluorescenza nella porzione fotosbiancata avviene a causa della diffusione o del movimento attivo delle molecole marcate con fluoroforo all'interno della cellula, sostituendo il fluoroforo sbiancato con molecole non sbiancate. Il FRAP viene utilizzato per studiare la diffusione e il movimento delle macromolecole biologiche, compreso il movimento dentro e fuori dal nucleo e il movimento laterale all'interno delle membrane. FRA P è stato utilizzato per valutare la struttura delle membrane artificiali e biologiche. FRA P è stato utilizzato per definire il modello a mosaico fluido delle membrane cellulari. Recupero della fluorescenza dopo il fotosbiancamento (FRAP)* È possibile mostrare la diffusione laterale. sperimentalmente attaccando sonde fluorescenti alle teste dei lipidi.' proteine ​​e utilizzo della microscopia a fluorescenza per seguire le sonde nel tempo.* Due tecniche prevedono: Etichettatura mediante fluorescenza della superficie della membrana Tracciamento di singole particelle* I lipidi {proteine ​​ecc.) sul lembo esterno (strato) della membrana sono etichettati mediante reazione con una membrana fluorescente impermanente sonda, in modo che la superficie venga etichettata in modo uniforme se osservata con il microscopio a fluorescenza. Una piccola area (5 mm2) di una superficie cellulare con lipidi marcati fluorescenti viene fotosbiancata da un'intensa radiazione laser in modo che il cerotto irradiato non emetta più fluorescenza (emette luce fluorescente) se osservato con un microscopio a fluorescenza. luce meno intensa (non sbiancante) nel microscopio a fluorescenza.* Tuttavia, la regione della membrana fotosbiancata recupera la sua fluorescenza in pochi millisecondi mentre le molecole lipidiche non sbiancate si diffondono nel cerotto sbiancato e le molecole lipidiche sbiancate si diffondono lontano da esso mediante una rapida diffusione laterale.* La velocità di il recupero della fluorescenza dopo il fotosbiancamento o FRAP è una misura della velocità di diffusione laterale dei lipidi* Il FRAP può essere utilizzato per valutare la struttura delle membrane (sia biologiche che artificiali), definire il modello di mosaico fluido e studiare la diffusione (movimento) delle macromolecole biologiche comprese quelle laterali movimenti di diffusione nel piano delle membrane e movimenti dentro e fuori dal nucleo.* Il movimento (movimento) di una singola molecola lipidica marcata in modo fluorescente (proteina, ecc.) nella membrana cellulare viene registrato su video mediante microscopia a fluorescenza in un tempo molto più breve scala (ad esempio 50 ms = 2250 fotogrammi con risoluzione temporale di 25ps = 40000 fotogrammi/s).* Lo schema di movimento conferma una rapida diffusione laterale all'interno di una regione confinata (piccola e discreta) con salti occasionali in una regione adiacente. Ciò suggerisce che i lipidi sono rinchiusi da recinti molecolari che possono occasionalmente saltare attraverso la diffusione del luppolo. Le profene di membrana (come la glicoforina e lo scambiatore Cl-HCO2 nei globuli rossi) immobilizzate dalla loro associazione con la spettrina (una proteina filamentosa del citoscheletro) formano i recinti che definiscono il regioni di movimento lipidico relativamente illimitato. Diffusione nel luppolo di una singola molecola lipidica
Miscellaneous (Structure & Function of Proteins)