La stima del DNA può essere effettuata mediante:
Spirometro
Spettrofotometro
misuratore di acidita `
Sfigmomanometro
Ris. B. Spettrofotometro (Rif: Laboratory Protocols. ClMMYT Applied Biotechnology Center, 2a edizione; http: //en. wikipedia. org/wiki/ Spectrophotometer_ for_Nucleic_ Acid_ Measurements) La stima del DNA può essere eseguita mediante spettrofotometro. Quantificazione del DNA e analisi della qualità Dopo l'isolamento del DNA. la quantificazione e l'analisi della qualità sono necessarie per accertare la quantità approssimativa di DNA ottenuto e l'idoneità del campione di DNA per ulteriori analisi. Ciò è importante per molte applicazioni, inclusa la digestione del DNA mediante enzimi di restrizione o l'amplificazione PCR del DNA target. Le metodologie più comunemente utilizzate per quantificare la quantità di acido nucleico in una preparazione sono:Elettroforesi su gelAnalisi spettrofotometricaDeterminazione spettrofotometricaL'analisi dell'assorbimento UV da parte dei nucleotidi fornisce una stima semplice e accurata della concentrazione di acidi nucleici in un campioneQ.Componenti dello spettrofotometroSpettrofotometroLe biomolecole assorbono la luce a lunghezze d'onda caratteristiche, proprio come il triptofano , tirosina e, in misura molto minore, fenilalanina assorbono la luce ultravioletta vicino a una lunghezza d'onda di 280 nmQ. La frazione di luce incidente assorbita dalla soluzione a una determinata lunghezza d'onda dipende dallo spessore dello strato assorbente (lunghezza del percorso) e dalla concentrazione delle specie assorbenti. Legge di Lambart Beer Assorbanza = log Ideg/I = eClDove e è il coefficiente di estinzione molare e si è assunto che la luce incidente sia parallela, monocromatica (di lunghezza d'onda singola) e che il solvente e il soluto siano orientati in modo casuale. Pertanto ogni successivo percorso millimetrico della soluzione assorbente assorbe non un quantità costante ma frazione costante di luce. Tuttavia, con lo strato assorbente a lunghezza fissa, l'assorbanza è direttamente proporzionale alla concentrazione del soluto assorbenteQ. Quindi può essere utilizzato nella stima quantitativa di DNA, RNA o aminoacidiQ.
Molecular Biology Techniques