Quale delle seguenti tecniche di purificazione delle proteine ​​può essere resa specifica per una data proteina?
Dialisi
Cromatografia di affinità
Cromatografia con filtrazione su gel
Cromatografia a scambio ionico
Ris. B. Cromatografia di affinitàa. Ciascuna delle tecniche elencate separa le proteine ​​le une dalle altre e da altre molecole biologiche in base a caratteristiche quali dimensione, solubilità e carica. Tuttavia, solo la cromatografia di affinità può utilizzare l'elevata affinità delle proteine ​​per gruppi chimici specifici o la specificità degli anticorpi immobilizzati per proteine ​​uniche.b. Nella cromatografia di affinità, un composto specifico che si lega alla proteina desiderata, ad esempio un anticorpo, un recettore polipeptidico o un substrato, è legato in modo covalente al materiale della colonna.c. Una miscela di proteine ​​viene aggiunta alla colonna in condizioni ideali per legare la proteina desiderata, quindi la colonna viene lavata con tampone per rimuovere le proteine ​​non legate.d. La proteina viene eluita aggiungendo un'elevata concentrazione del materiale legante originale o rendendo le condizioni sfavorevoli per il legame (ad esempio, modificando il pH).e. Le altre tecniche sono meno specifiche del legame di affinità per isolare le proteine. La dialisi separa le proteine ​​di grandi dimensioni dalle piccole molecole, la cromatografia a scambio ionico separa le proteine ​​con una carica complessiva di un tipo dalle proteine ​​con una carica opposta (ad esempio, negativa da positiva). La cromatografia con filtrazione su gel separa in base alla dimensione.f. L'elettroforesi separa le proteine ​​in base al principio che la carica netta influenza la velocità di migrazione in un campo elettrico.
Structure & Function of Protein