Lo strumento enzimatico più comune nell'ingegneria genetica:
Alicasi
Topoisomerasi
DNALigasi
Endonucleasi di restrizione
Ris. è 'd' cioè endonucleasi di restrizione o Al cuore dell'ingegneria genetica c'è la capacità di tagliare molecole di DNA in siti precisamente definiti, o Questo di solito viene fatto con un enzima batterico purificato, l'endonucleasi di restrizione.o Le endonucleasi di restrizione erano chiamate enzimi di restrizione perché la loro la presenza in un dato batterio ha limitato la crescita di DNA estraneo (non batterico), ad es. batteriofagi, o L'endonucleasi di restrizione (chiamata anche enzima di restrizione) taglia il DNA in una sequenza specifica di DNA all'interno della molecola in modo sequenza-specifico. Il sito tagliato dall'endonucleasi di restrizione è chiamato sito di restrizioneo Questi enzimi riconoscono alcune sequenze palindromiche nel DNA, ad es. la sequenza breve (4-7 paia di basi) che ha una doppia simmetria rotazionale. In un linguaggio semplice, una breve sequenza (4-7 bp) di DNA duplex che è la stessa quando due filamenti vengono letti in direzione opposta è chiamata palindromo.o Il palindromo funge da bersaglio per la maggior parte delle endonucleasi di restrizione. Ciascun enzima di restrizione (endonucleasi di restrizione) riconosce una sequenza nucleotidica specifica, ad es. ciascun enzima di restrizione ha una sequenza palindromica specifica da riconoscereo Le endonucleasi di restrizione tagliano (tagliano) entrambi i filamenti di DNA.o Alcuni enzimi di restrizione tagliano entrambi i filamenti allo stesso livello, in modo da non lasciare basi spaiate su entrambe le estremità. Queste estremità sono chiamate estremità smussate.o D'altra parte, alcuni enzimi di restrizione tagliano due filamenti in modo sfalsato, lasciando da due a quattro nucleotidi di un filamento spaiati a ciascuna estremità. Queste estremità sono chiamate estremità coesive (o estremità adesive o estremità sfalsate).o Le estremità appiccicose sono particolarmente utili nella costruzione di molecole di DNA ibride (o chimeriche). I frammenti di restrizione di DNA diversi possono appaiarsi tra loro se hanno estremità appiccicose che sono complementari. Pertanto due frammenti di DNA non correlati possono appaiarsi tra loro, se vengono tagliati dalle stesse endonucleasi di restrizione (perché ciascuna endonucleasi di restrizione taglia la stessa e specifica sequenza palindromica su DNA diversi).
Molecular Biology Techniques