Vero riguardo RFLP: (PGI dicembre 2006)
Rileva la mutazione
Riconosce la ripetizione trinucleotidica
Rileva la cancellazione
Vengono prodotte estremità smussate
Risposta: A (Rileva la mutazione); B (Riconosce le ripetizioni del tribnucleotide); C (rileva la cancellazione) e D (estremità smussate prodotte) Polimorfismo della lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP)# RFLP è una variazione nella sequenza del DNA di un genoma che può essere rilevata rompendo il DNA in pezzi con enzimi di restrizione'' e analizzando le dimensioni dei frammenti risultanti mediante elettroforesi su gelQ.# L'endonucleasi di restrizione (RE) scinde il ds-DNA in frammenti più piccoli e gestibili, in siti specifici. RE può produrre estremità "appiccicose" e "smussate".# L'analisi della variazione RFLP è uno strumento importante nella mappatura genomica, nella localizzazione di malattie genetiche, nella determinazione del rischio di una malattia, nell'impronta genetica e nei test di paternità.# È la sequenza che rende DNA diverso, ottenuto da fonti diverse, e l'analisi RFLP è una tecnica in grado di identificare le differenze nella sequenza (quando si verificano in un sito di restrizione).# La tecnica di base per rilevare RFLP prevede la frammentazione di un campione di DNA da parte di enzimi di restrizione, che possono riconoscere e tagliare il DNA ovunque si verifichi una breve sequenza specifica, mediante un processo noto come digest di restrizione. I frammenti di DNA risultanti vengono quindi separati per lunghezza attraverso un processo noto come elettroforesi su gel di agarosio e trasferiti sulla membrana tramite la procedura Southern blot. L'ibridazione della membrana su una sonda di DNA marcata determina quindi la dimensione dei frammenti che sono complementari alla sonda. Un RFLP si verifica quando la dimensione di un frammento rilevato varia da individuo a individuo. Ciascuna dimensione del frammento è considerata un allele e può essere utilizzata nell'analisi genetica. Tabella (Harrison 17th/406): Metodi utilizzati per il rilevamento delle mutazioni Metodo Principio Tipo di mutazione Detexted Tecniche comunemente utilizzate Analisi citogenetica Aspetto visivo unico di vari cromosomi Anomalie numeriche o strutturali nei cromosomi Ibridazione in situ fluorescente ( FISH) Ibridazione su cromosomi con sonde marcate in modo fluorescente Anomalie numeriche o strutturali nei cromosomi Southern blot Ibridazione con sonda genomica o sonda cDNA dopo digestione di DNA ad alto peso molecolareGrandi delezioni, inserzioni, riarrangiamenti, espansioni di ripetizioni di triplette, amplificazione Principio metodologicoTipo di mutazione rilevataTecniche comunemente utilizzateReazione a catena della polimerasi (PCR) Amplificazione del segmento del DNAEspansione di ripetizioni di triplette, numero variabile di ripetizioni in tandem (VNTR), riarrangiamenti genici, traslocazioni; preparare il DNA per altri metodi di mutazione PCR con trascrittasi inversa (RT-PCR)QTrascrizione inversa, amplificazione del segmento di DNA - assenza o riduzione della trascrizione dell'mRNAAnalizzare la sequenza dell'mRNA espresso (cDNA); rilevamento della perdita di espressioneSequenziamento del DNASequenziamento diretto dei prodotti della PCRMutazioni puntiformi, piccole delezioni e inserzioniSequenziamento di segmenti di DNA clonati in vettori plasmidiciPolimorfismo dei frammenti di restrizione [RFLP) QRilevamento del modello di restrizione alterato del DNA genomico (Southern blot) o dei prodotti della PCRMutazioni puntiformi, piccole delezioni e inserzioni - zioniQ
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