Nel trasferimento del DNA i vettori utilizzati sono dal più piccolo al più grande
Cosmidi, Plasmidi, Batteriofagi
Plasmidi, Batteriofagi, Cosmidi
Batteriofago, Cosmidi, Plasmidi
Cosmidi, Batteriofagi, Plasmidi
I plasmidi batterici sono piccole molecole di DNA circolari, duplex, la cui funzione naturale è conferire resistenza agli antibiotici alla cellula ospite. I plasmidi hanno diverse proprietà che li rendono estremamente utili come vettori di clonazione. Esistono come copie singole o multiple all'interno del batterio e si replicano indipendentemente dal DNA batterico. È disponibile la posizione precisa dei siti di scissione degli enzimi di restrizione per l'inserimento del DNA estraneo. I plasmidi sono più piccoli del cromosoma ospite e sono quindi facilmente separati da quest'ultimo, e il DNA seminato dal plasmide desiderato viene facilmente rimosso tagliando il plasmide con l'enzima specifico per il sito di restrizione in cui era inserito il pezzo originale di DNA. I fagi solitamente hanno molecole di DNA lineari in cui il DNA estraneo può essere inserito in diversi siti degli enzimi di restrizione. Il DNA chimerico viene raccolto dopo che il fago ha proceduto attraverso il suo ciclo litico e ha prodotto pacchetti fagici maturi e infettivi. Uno dei principali vantaggi dei vettori fagici è che mentre i plasmidi accettano pezzi di DNA lunghi circa 6-10 kb, i fagi possono accettare frammenti di DNA lunghi 10-20 kb, una limitazione imposta dalla quantità di DNA che può essere imballata nella testa del fago. Frammenti più grandi di DNA possono essere clonati nei cosmidi, che combinano le migliori caratteristiche dei plasmidi e dei fagi. I cosmidi sono plasmidi che contengono le sequenze di DNA, i cosiddetti siti cos, necessari per confezionare il DNA lambda nel paicolo fagico. Questi vettori crescono sotto forma di plasmide nei batteri, ma poiché gran parte del DNA lambda non necessario è stato rimosso, più DNA chimerico può essere impacchettato nella testa del paicolo. Non è insolito che i cosmidi portino nuclei di DNA chimerico lunghi 35-50 kb. Pezzi di DNA ancora più grandi possono essere incorporati nel cromosoma artificiale batterico (BAC), nel cromosoma artificiale del lievito (YAC) o nei vettori basati sul batteriofago P1 di E. coli (PAC).
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