Tutte le seguenti affermazioni sulla tecnologia dell'ibridoma sono vere tranne aEUR'
Le cellule produttrici di anticorpi specifici sono integrate con le cellule del mieloma
Le cellule di mieloma con percorso di salvataggio della mutazione crescono bene nel mezzo HAT.
L’aminopterina, un antagonista dei folati, inibisce la via denovo
L'HGPasi e la timidilato sintetasi sono necessarie per la via di salvataggio
Le cellule di mieloma con mutazione nella via di salvataggio crescono bene nel terreno HAT Hvbridomi Gli ibridomi sono cellule che sono state progettate per produrre un anticorpo specifico in grandi quantità. Per raggiungere questo obiettivo, le qualità di due tipi di cellule devono essere combinate insieme, ad es. i) Cellule che possono produrre grandi quantità di anticorpi puri. e ii) Cellule che hanno la capacità di crescere continuamente. Questi due tipi di cellule vengono poi fusi insieme per formare un ibridoma. Procedura Le cellule secernenti anticorpi pure vengono prodotte iniettando l'antigene specifico in un topo e ottenendo le plasmacellule specifiche dell'antigene (cellule produttrici di anticorpi) dalla milza del topo. Le cellule che possono crescere indefinitamente in coltura sono le cellule del mieloma (cellule cancerose). Queste due linee cellulari sono fuse insieme. La cellula ibrida così prodotta può essere clonata per produrre un gran numero di cloni figli identici. Queste cellule clone figlie producono quindi anticorpi. Poiché questi anticorpi provengono da un solo tipo di cellula (cellula dell'ibridoma), sono chiamati anticorpi monoclonali. Il terreno HAT (ipoxantina, aminopterina e timidina) viene utilizzato per la preparazione di anticorpi monoclonali perché consente la crescita solo di cellule ibridonza fuse. Non consente la crescita del mieloma non fuso e delle cellule anticorpali infuse. Quindi il terreno HAT è un terreno selettivo che consente (che consente la crescita selettiva dell'ibridoma fuso). Come avviene ciò? Prima di proseguire con la discussione, ricordiamo questi pochi punti sulla sintesi delle purine. La sintesi delle purine è essenziale per la sopravvivenza delle cellule. La purina può essere sintetizzata in due modi, ovvero: - Sintesi de novo (per questa via è richiesto l'enzima diidrofolato reduttasi) - - Via di salvataggio (per le vie di salvataggio è necessario un enzima ipoxantina-guanina fosforibosil transferasi) Le cellule di mieloma sono prive dell'enzima HGPasi, pertanto non possono sintetizzare la purina attraverso percorsi di salvataggio. Le cellule anticorpali hanno l'enzima HGPasi in modo che possano utilizzare le vie di salvataggio. L'amminopterina inibisce la diidrofolato reduttasi, un enzima utilizzato nella sintesi denovo della purina. Quando due linee cellulari, ovvero cellule produttrici di anticorpi e cellule di mieloma, vengono coltivate nel mezzo HAT, sopravvivono solo le cellule di ibridoma fuse. -Le cellule del mieloma muoiono perché mancano dell'enzima HGPasi e quindi non possono utilizzare le vie di salvataggio per la sintesi delle purine. Inoltre, non possono utilizzare la via de-novo, poiché l'aminopterina presente nel mezzo HAT inibisce la diidrofolato reduttasi (un enzima essenziale per la sintesi denovo delle purine). Le cellule produttrici di anticorpi non fusi muoiono poiché non possono crescere indefinitamente a causa della loro durata di vita limitata. Solo le cellule di ibridoma fuse crescono indefinitamente perché il paner cellulare dell'anticorpo fornisce HGPasi e il paner del mieloma le conferisce immoalità. (poiché è una cellula cancerosa)