La reazione di Nagler è di tipo
Reazione di neutralizzazione
Test di fissazione del complemento
Prova di agglutinazione
Reazione di precipitazione
Cl. perfrigens viene coltivato su un terreno contenente il 6% di agar, il 5% di digerito peptico di sangue di pecora Fildes e il 20% di siero umano o il 5% di tuorlo d'uovo in una piastra. 
È possibile aggiungere neomicina solfato al terreno per renderlo più selettivo inibendo i portatori di spore aerobici e i coliformi. 
A metà del piatto viene distribuita l'antitossina sulla superficie. 
La piastra di coltura inoculata viene incubata a 37°C per 24 ore. 
Le colonie sulla metà della piastra senza antitossina saranno circondate da opacità mentre le colonie sull'altra metà con antitossina non mostreranno opacità, a causa della specifica neutralizzazione della tossina alfa.
La tossina alfa (lecitinasi C) divide la lecitina in fosforilcolina e un digliceride (lipide). 
I depositi lipidici attorno alle colonie determinano opacità.

Rif: libro di testo di microbiologia, CP Baveja 5a edizione pag no:228