Vero sull'ibridoma: (PGI dicembre 2008)
Immortala la cellula del mieloma
Cellula di ibridoma prodotta dalla fusione di cellule T e mieloma
La cellula è di origine umana
Viene effettuata l'immunizzazione preventiva
Risposta: A (Immortalare la cellula del mieloma); D (L'immunizzazione precedente è stata effettuata) ed E (Produrre monospecifico..) I Lineage cellulare nell'ibridoma-Harper27th/604Le cellule del mieloma sono immortalizzate, non producono Ab e sono HGPRT (ipoxantina-guanina fosforibosil transferasi) che rendono la via di salvataggio delle purine sintesi inattivaLe cellule B non sono immortalizzate, ciascuna produce uno specifico j Ab St, sono HGPRT*Le cellule di ibridoma risultanti vengono immortalizzate (tramite le cellule j del mieloma parentale), producono Ab St HGPRT* (entrambe queste ultime | proprietà acquisite dalle cellule B parentali )B celti moriranno perché non saranno immortalati. In presenza di HAT (ipoxantina, aminopterina St timidina), | anche le cellule del mieloma moriranno, poiché l'aminopterina contenuta nell'HAT sopprime la sintesi delle purine attraverso la via de novo inibendo il riutilizzo del tetraidrofolato. Tuttavia, le cellule dell'ibridoma sopravviveranno, cresceranno (perché sono HGPRT*) e, se clonate, produrranno Ab monoclonali. Tecnica dell'ibridomaÈ stato sviluppato da Kohler & MilsteinI celt QB sono ottenuti dalla Milza di topo (o altro animale adatto) precedentemente iniettata con un Ag o una miscela di antigeni (es. cellule estranee)In questa grande quantità è possibile un singolo Ab monoclonale specifico9 per un epitopo essere ottenutoIl metodo prevede la fusione cellulare in presenza di polietilenglicole. La linea cellulare permanente risultante è chiamata ibridoma. Le cellule di ibridoma possono essere congelate e conservate. Successivamente scongelate quando è necessaria una maggiore quantità di Ab, questo ne garantisce la fornitura a lungo termine. La cellula di ibridoma può anche essere coltivata in l'addome dei topi che fornisce una quantità relativamente ampia di Ab. Applicazione della tecnica dell'ibridoma: per determinare la natura dell'agente infettivoQPossono essere utilizzati per misurare singole proteine ​​(ad es. proteine ​​plasmatiche)Per sottoclassificare sia le cellule normali (ad es. linfociti) che quelle tumorali (ad es. cellule leucemiche)Utilizzato nelle malattie autoimmuni (ad es. Artrite reumatoide)Utilizzato per la classificazione del sangueQPer accelerare la rimozione dei farmaci dalla circolazione quando raggiungono livelli tossici (ad es. digossina) * Proliferazione -ve* Secrezione di Igs+* Resistente all'HAT* HGPRTasi+ (cellule normali non fuse)Cellule spleniche di topo immunizzate con antigene specifico Cellule di mieloma di topo* Proliferazione+* Secrezione di Igs -ve* Sensibili all'HAT* HGPRTasi-ve- - Fusione cellulare in PEG-1500, r| - Celle fuse | Piastre per microtitolazione in terreno selettivo HAT Le cellule vengono colonizzate e subclonate in piastre contenenti piccoli pozzetti ||Tempo da 8 a 10 giorni ||-Linfociti si sviluppano ibridi (cellule hvbridoma) Terreno supematent testato per lo specifico anticorpo monolconale desiderato
Immunology