Per quale delle seguenti operazioni viene utilizzato il FISH?
Mappatura genetica
Studio dell'organizzazione cromosomica 3D nei nuclei interfasici
Monitoraggio del successo del trapianto di midollo osseo
Tutto quanto sopra
Ris. D. Tutto quanto sopra Ibridazione in situ fluorescente (FISH): qualsiasi locus clonato può essere mappato nella sua posizione su un cromosoma in metafase mediante ibridazione in situ fluorescente (FISH). Un campione di cellule arrestate nel processo di divisione viene posto su un vetrino da microscopio, i cromosomi vengono fissati e il DNA viene accuratamente denaturato pur conservando la sua organizzazione cromosomica fondamentale. Una sonda marcata preparata da un frammento di DNA clonato viene quindi posizionata sul vetrino e incubata per consentire l'ibridazione sul cromosoma in situ. Dopo aver rimosso la sonda non ibridata, il cromosoma può essere visualizzato sotto la luce UV con un microscopio in modo che le regioni fluorescenti e i punti di riferimento delle bande cromosomiche possano essere correlati. La risoluzione di questa tecnica, tuttavia, è buona quanto la risoluzione delle bande del cariotipo. Frammenti standard di DNA clonato di circa 100 kb ciascuno da utilizzare come sonde FISH sono disponibili presso molti centri di risorse genetiche in tutto il mondo come cromosomi artificiali batterici (BAC). Esempi di applicazioni FISH Ricerca diagnostica L'identificazione di anomalie cromosomiche specifiche L'identificazione di nuove anomalie non casuali (mediante M- FISH o SKY) La caratterizzazione dei cromosomi marcatori Mappatura genica FISH interfase per anomalie specifiche in caso di citogenetica fallita Identificazione di regioni di amplificazione o delezione mediante CGH Monitoraggio della progressione della malattia L'identificazione dei breakpoint di traslocazione Monitoraggio del successo del trapianto di midollo osseo Lo studio dell'organizzazione cromosomica 3D nei nuclei interfase
Molecular Genetics