Nella produzione di anticorpi monoclonali, le cellule monoclonali vengono differenziate da?
Cellule B sensibilizzate
Cellule T sensibilizzate
Linee cellulari di mieloma
Nessuna di queste
RISPOSTA: (C) Linee cellulari di mielomaRIF:Applicazioni e ingegneria degli anticorpi monoclonali di David J. King pagina 17, Una guida pratica agli anticorpi monoclonali di J. Eryl Liddell, Anthony Cryer Pagina 69"Una cellula di mieloma è classicamente definita come un plasma neoplastico cellula nella mielomatosi che produce una paraproteina (monoclonale) strutturalmente ed elettroforeticamente omogenea. La fusione delle cellule del mieloma e delle cellule B raccolte viene solitamente eseguita utilizzando il glicole polietilenico (PEG) come agente per indurre la fusione della membrana (metodo economico, affidabile e più comunemente usato) . In alternativa è possibile utilizzare l'elettrofusione o il virus Sendai. Dopo la fusione è presente una miscela di cellule della milza, cellule di mieloma e cellule di ibridoma e il passaggio successivo è la selezione delle cellule di ibridoma rispetto ad altre cellule. SELEZIONE POST FUSIONE: le cellule di mieloma sono carenti di HGPRT e non sono in grado di utilizzare la via di salvataggio per la sintesi dell'RNA. Per ottenere la selezione viene utilizzato il terreno HAT (ipoxantina, aminopterina, timidina). L'aminopterina è un inibitore della sintesi del DNA e dell'RNA e quindi blocca le cellule del mieloma. Le cellule di ibridoma tuttavia hanno HGPRT e quindi possono aggiungere ipoxantina e timidina per produrre RNA e quindi possono sopravvivere. Tipo di cellula Sintesi del DNA Sopravvivenza nel mezzo HAT Via di salvataggio Via De Novo Mieloma HGPRT-sensibile all'aminopterina Muore (nessuna sintesi del DNA) Milza HGPRT + sensibile all'aminopterina Muore (sopravvivenza finita in vitro) Mieloma ibrido di milzaHGPRT +AminopterinsensitiveLiveIbrido di mieloma mielomaHGPRT-AminopterinsensitiveDie (nessuna sintesi del DNA)Ibrido di milzaHGPRT +AminopterinsensitiveDie (sopravvivenza finita in vitro)In alternativa, le cellule di mieloma possono essere selezionate per essere carenti di enzima timidina chinasi (TK) mediante crescita in bromodeossiuridina.
Miscellaneous (Structure & Function of Proteins)