I passaggi della PCR in sequenza sono?
Estendi il DNA, ricottura i primer, DNA della protesi
Ricottura dei primer, estensione del DNA, denaturazione del DNA
Denatura il DNA, ricottura i primer, estende il DNA
Denaturazione del DNA, estensione del DNA, ricottura dei primer
PCR - metodo per amplificare una sequenza target di DNA* Sviluppato da Karry Mullis nel 1984* Requisito essenziale: 1 DNA mirato 2 Due primer (oligonucleotidi sintetici di 17-30 nucleotidi di lunghezza) complementari al DNA target.3 Quattro deossiribonucleotidi4 DNA polimerasi TERMOSTABILE * Ogni ciclo è composto da tre fasi (1) Denaturazione: il campione di DNA viene prima denaturato a caldo (>90°C) per separare i due filamenti del DNA modello contenente la sequenza target(2) Rinaturazione o ricottura: i primer, aggiunti in eccesso, vengono lasciato ricotturare al DNA (tipicamente a 50-75°C) per generare il complesso modello-primer richiesto.(3) Sintesi/estensione - L'inizio della sintesi del DNA avviene all'estremità 3'-idrossile di ciascun primer. I primer vengono estesi unendo le basi complementari ai filamenti di DNA * Ogni ciclo di PCR dura circa 3-5 minuti Tre fasi di ogni ciclo in relazione alla temperatura e al tempo
FMGE 2018