A uno dei tuoi pazienti è stato diagnosticato un retinoblastoma. Ha un solo tumore a un occhio. Il paziente è preoccupato se i suoi figli potrebbero soffrire della stessa condizione. Quale test potrebbe essere utilizzato per determinare se si tratta di un tumore ereditario o sporadico?
Impronta del DNA
Soing cellulare attivato dalla fluorescenza (FACS)
Macchia Nohern
PCR
La metà dei retinoblastomi sono ereditari; il bambino eredita un allele mutante attraverso la linea germinale e si verifica una mutazione somatica nell'altro allele, con conseguente perdita della funzione di quel gene. Ciò porta allo sviluppo del tumore, spesso con tumori multipli in entrambi gli occhi. La penetranza, tuttavia, non è completa, poiché la seconda mutazione è un evento casuale. Il 60% dei retinoblastomi sono sporadici; entrambi gli alleli vengono inattivati ​​dalla mutazione somatica. Poiché si tratta di un evento raro, i tumori solitamente colpiscono un solo occhio e si presentano in età avanzata. Per rilevare una mutazione nel gene Rb e differenziare tra casi ereditari e sporadici di retinoblastoma, la PCR è la tecnica più appropriata tra le scelte possibili. Utilizzando i primer appropriati, una delezione può essere rilevata come un cambiamento nella dimensione della banda di DNA amplificata. Nei casi ereditari, un cromosoma mostrerà la lunghezza alterata dalla delezione o dalla traslocazione in qualsiasi cellula del corpo. Nel retinoblastoma sporadico, i campioni isolati da qualsiasi luogo diverso dal tumore dovrebbero avere due alleli normali. L'impronta del DNA è un protocollo utilizzato per rilevare il legame specifico delle proteine ​​alle molecole di DNA confrontando i modelli di frammentazione del DNA legato alla proteina di interesse rispetto al DNA non legato dopo la digestione con DNasi I. Se la proteina legata protegge dalla digestione con DNasi I, la posizione di la proteina presente sul DNA si può dedurre dalla perdita del frammento caratteristico. Il FACS utilizza anticorpi accoppiati a marcatori fluorescenti per determinare le molecole della superficie cellulare su cellule intere. È molto utile per determinare lo stadio di sviluppo o di attivazione delle cellule, ma non fornisce alcuna visione del DNA. Il Nohern blotting, l'alternativa dell'RNA al Southern blotting, determinerà la dimensione e l'abbondanza dell'mRNA di un gene specifico in un dato campione di RNA. L'RNA non può essere tagliato dagli enzimi di restrizione come può fare il DNA; tuttavia, le molecole di RNA per proteine ​​diverse hanno lunghezze diverse. Il campione viene separato mediante elettroforesi su gel di agarosio, trasferito su una membrana di nitrocellulosa e analizzato con una sonda specifica marcata. Questo verrà esposto alla pellicola e appariranno le bande, rivelando la dimensione e l'abbondanza di mRNA specifici.