Indagine più sensibile per la diagnosi di infezione da clamidia asintomatica:aEUR'
Cultura
Amplificazione degli acidi nucleici
Sierologia
Esame microscopico diretto del raschiamento dei tessuti
Amplificazione degli acidi nucleici Le infezioni da clamidia sono spesso asintomatiche. - La conferma dell'infezione da clamidia dipende solitamente dal prelievo di un campione clinico appropriato dal paziente, seguito dal rilevamento diretto dell'organismo utilizzando un idoneo test diagnostico di laboratorio. La dimostrazione degli anticorpi anti-clamidia (sierologia) in un individuo è raramente diagnostica. Per molti anni il metodo ottimale per confermare la presenza di un'infezione da clamidia è stato la crescita dell'organismo infettante in colture cellulari e la dimostrazione delle caratteristiche inclusioni da clamidia. - Tuttavia, questo metodo richiedeva la disponibilità di buone strutture di trasporto e di conservazione a freddo per mantenere la bilità dell'organismo prima dell'inoculazione. - Inoltre la crescita e l'isolamento degli organismi nella coltura cellulare erano relativamente noiosi e difficili da controllare. - Colture cellulari di clamidia, le strutture erano disponibili per relativamente pochi centri clinici. - È ormai ampiamente riconosciuto che le tecniche di coltura cellulare erano, nella migliore delle ipotesi, sensibili solo dal 60 all'80%. Un progresso fondamentale nella diagnosi di laboratorio delle infezioni da clamidia è stato lo sviluppo di test non dipendenti dalla bilità che richiedono meno trasporto del campione. Il primo di questi test erano i test per la rilevazione dell'antigene della clamidia, che si basavano sul rilevamento diretto dei corpi elementari della clamidia nel materiale clinico utilizzando anticorpi monoclonali specifici per la clamidia marcati con fluorocromo. Immunofluorescenza diretta - Cattura e rilevamento dell'antigene della clamidia in un estratto di materiale clinico utilizzando procedure basate su test immunoenzimatici. Questi metodi sono ancora appropriati in alcuni contesti e rimangono ampiamente utilizzati. Tuttavia, vengono gradualmente sostituiti da metodi più nuovi basati sulla rilevazione dell'acido nucleico della clamidia, mediante - Ibridazione diretta o mediante - Amplificazione dell'acido nucleico. Questi ultimi utilizzano una varietà di reazioni di amplificazione tra cui: ? - Reazione a catena della polimerasi - Reazione a catena della ligasi - Amplificazione dello spostamento del filamento o amplificazione mediata dalla trascrizione. I metodi basati sugli acidi nucleici generalmente offrono sensibilità e specificità superiori ai test di rilevamento dell'antigene, ma a costi maggiori e con una maggiore necessità di personale addestrato. Un secondo importante progresso è stato il riconoscimento che i campioni cervicali o uretrali che richiedono un campionamento genitale invasivo non sono affatto essenziali per la diagnosi di laboratorio dell’infezione da clamidia. I campioni non invasivi e/o raccolti autonomamente che possono essere adeguati includono urina maschile e femminile, vari campioni vulvo-introitali o fluido vaginale espresso da un tampone. Maggiori informazioni sulla diagnosi della clamidia La clamidia è un parassita intracellulare obbligato. Non può sopravvivere al di fuori del suo ospite, cioè non può crescere su terreni privi di cellule. - Fino all'inizio degli anni '80, il metodo principale per confermare una diagnosi di infezione da clamidia era l'inoculazione di materiale clinico negli animali, uova di gallina embrionate o (di solito) cellule di coltura tissutale e la dimostrazione delle caratteristiche inclusioni della clamidia. In generale, sono state dimostrate inclusioni in colture cellulari? - Mediante colorazione con iodio - Mediante colorazione con Giemsa - Anticorpo poli o monoclonale marcato con fluorocromo - Immunoistochimica enzimatica Le cellule in coltura tissutale usuali erano - - HeLa 229, - fibroblasti di topo L434 o C'. trachomatis e C. psittaci; - Cellule McCoy - Cellule renali di Buffalo Green Monkey (C. psittaci e - Cellule HL o Hep2 C. pneumoniae) La crescita degli organismi è stata facilitata dall'uso di ? - Antimetaboliti diretti contro la cellula ospite (cicloexitnide; emetina o ntitomicina C) o, - Mediante l'uso di polimeri anionici carichi come la poli - L - lisina o DEAR destrano per C trachomatis TRIO biovar. Anche composti come il polietilenglicole o il glucosio 6 fosfato ad alto contenuto energetico hanno aiutato la crescita di alcune clamidie.