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abstract:<为了克隆甜菜单体附加系M14无融合生殖相关基因,采用cDNA文库快速构建法制备了M14花蕾cDNA文库.根据甜菜单体附加系M14无融合生殖的细胞胚胎学研究结果,提取甜菜M14花蕾三个关键时期的RNA,分离纯化mRNA,以Oligo(dT)为引物,在逆转录酶的作用下,合成第一链cDNA,进而合成第二链cDNA.含有EcoRⅠ和Not Ⅰ粘性末端的双链cDNA在T4DNA连接酶的作用下与载体λZAP臂相连,并对连接产物进行体外包装,得到噬菌体颗粒,即甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库.经大肠杆菌寄主菌株XL1-blue MRF'平板检测,三个文库滴度分别为2.8×105pfu·mL-1、1.6×105pfu·mL-1和3.5×105pfu·mL-1,克隆重组率为83%、78%和81%.cDNA文库可直接用于目的基因的筛选.>
{"CATEGORY":"理学"}