Thrombin được tạo ra bởi sự phân cắt của enzym hai vị trí trên prothrombin bởi Yếu tố X (Xa) được hoạt hóa. Hoạt động của yếu tố Xa được tăng cường đáng kể bằng cách liên kết với Yếu tố V (Va) được hoạt hóa, được gọi là phức hợp prothrombinase. Prothrombin được sản xuất trong gan và được đồng chuyển dịch trong một phản ứng phụ thuộc vào vitamin K, chuyển đổi mười axit glutamic trên prothrombin thành axit gamma-cacboxyglutamic (Gla).