Ở người và hầu hết các động vật có xương sống khác, testosterone chủ yếu được tiết ra bởi tinh hoàn của con đực và ở mức độ thấp hơn là buồng trứng của con cái. Một lượng nhỏ cũng được tiết ra bởi tuyến thượng thận. Trung bình, ở nam giới trưởng thành, mức độ testosterone cao gấp khoảng 7 lần so với nữ giới trưởng thành.