Các mẫu cấy dự trữ Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyÃƒâ € šÃ‚Âticus, và Vibrio vulnificus, ban đầu được phân lập và duy trì trong điều kiện hiếu khí, được nuôi cấy kỵ khí bằng cách sử dụng môi trường khử trùng kỵ khí (PRAS) đã được khử trùng trước và môi trường mạ được bảo quản kỵ khí. Các chủng này được chuyển giao kỵ khí ba lần.