Mẫu có một lượng kháng nguyên không xác định được cố định trên giá đỡ rắn (thường là đĩa vi phân polystyrene) hoặc không đặc hiệu (thông qua sự hấp phụ lên bề mặt) hoặc đặc biệt (thông qua việc bắt giữ bởi một kháng thể khác đặc hiệu với cùng một kháng nguyên, trong một ELISA kẹp. ). kháng thể này được liên kết với một enzym và ở bước cuối cùng, một chất có chứa cơ chất của enzym được thêm vào. Phản ứng sau đó tạo ra một tín hiệu có thể phát hiện được, phổ biến nhất là sự thay đổi màu sắc của chất nền. Thực hiện ELISA liên quan đến ít nhất một kháng thể có tính đặc hiệu cho một kháng nguyên cụ thể.