Quá trình nhân đôi ADN ở sinh vật nhân thực chỉ xảy ra ở pha S của chu kỳ tế bào. Tuy nhiên, tiền khởi đầu xảy ra trong giai đoạn G1. Do đó, sự tách biệt giữa khởi tạo trước và kích hoạt đảm bảo rằng nguồn gốc chỉ có thể kích hoạt một lần trong mỗi chu kỳ tế bào.