Chất lưỡng tính là các phân tử lưỡng tính có chứa cả nhóm axit và nhóm cơ bản và sẽ tồn tại chủ yếu dưới dạng zwitterions trong một phạm vi pH nhất định. Độ pH tại đó điện tích trung bình bằng 0 được gọi là điểm đẳng điện của phân tử. Ampholyte được sử dụng để thiết lập một gradient pH ổn định để sử dụng trong tập trung đẳng điện.