Spesifisitas adalah sifat dari enzim dan menjelaskan bagaimana membatasi enzim dalam pilihan substrat; enzim yang benar-benar spesifik hanya akan memiliki satu substrat. Spesifisitas protease serin biasanya tidak terlalu tinggi karena mereka memiliki situs aktif yang serupa dan bekerja melalui mekanisme proteolitik yang sama.