Tahap oksidasi piruvat. Piruvat diproduksi oleh glikolisis di sitoplasma, tetapi oksidasi piruvat terjadi di matriks mitokondria (pada eukariota). Jadi, sebelum reaksi kimia dapat dimulai, piruvat harus memasuki mitokondria, melintasi membran bagian dalam dan tiba di matriks.