1 Rubisco, enzim yang bertanggung jawab untuk fiksasi karbon (menggabungkan CO2 dengan RuBP), juga dapat menambahkan O2 ke RuBP. 2 Ketika konsentrasi O2 dalam daun menjadi lebih besar dari konsentrasi CO2, rubisco akan menambahkan O2 ke RuBP, bukan CO2. Molekul yang dihasilkan tidak dapat digunakan dalam siklus Calvin.