Karena kadar kortisol berubah sepanjang hari, waktu tes kortisol penting. Tes darah kortisol biasanya dilakukan dua kali sehari - sekali di pagi hari ketika kadar kortisol berada pada level tertinggi, dan lagi sekitar jam 4 sore, ketika kadarnya jauh lebih rendah. Kortisol juga dapat diukur dalam tes urin atau air liur. Untuk tes urin kortisol, penyedia layanan kesehatan Anda mungkin meminta Anda untuk mengumpulkan semua urin selama periode 24 jam. Ini disebut tes sampel urin 24 jam. Ini digunakan karena kadar kortisol bervariasi sepanjang hari.