GAL4/UAS system
ಜಿ. ಎ. ಎಲ್. 4-ಯು. ಎ. ಎಸ್. ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಹಣ್ಣಿನ ನೊಣದಂತಹ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಬಳಸುವ ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. 1988ರಲ್ಲಿ ಹಿತೋಶಿ ಕಾಕಿದಾನಿ ಮತ್ತು ಮಾರ್ಕ್ ಪ್ಯಾಷ್ನೆ ಮತ್ತು ನಿಕೋಲಸ್ ವೆಬ್ಸ್ಟರ್ ಮತ್ತು ಪಿಯರೆ ಚಾಂಬನ್ ಅವರು ಕಂಡುಹಿಡಿದ ಪ್ರಕಾರ, ಯು. ಎ. ಎಸ್ ಅನುಕ್ರಮಗಳಿಗೆ ಗ್ಯಾಲ್ 4 ಬಂಧಿಸುವಿಕೆಯು ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು 1993 ರಲ್ಲಿ ಆಂಡ್ರಿಯಾ ಬ್ರಾಂಡ್ ಮತ್ತು ನಾರ್ಬರ್ಟ್ ಪೆರ್ರಿಮೋನ್ ನೊಣಗಳಲ್ಲಿ ಪರಿಚಯಿಸಿದರು ಮತ್ತು ವಂಶವಾಹಿಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಇದನ್ನು ಪ್ರಬಲ ತಂತ್ರವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಎರಡು ಭಾಗಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆಃ ಗಾಲ್ 4 ಜೀನ್, ಯೀಸ್ಟ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಗಾಲ್ 4 ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಯುಎಎಸ್ (ಅಪ್ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಆಕ್ಟಿವೇಶನ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್), ಇದು ಜೀನ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಜಿಎಎಲ್ 4 ಅನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಯಾವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಜೀನ್ ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಕಾರರು ಈ ಜ್ಞಾನದೊಂದಿಗೆ ಏನು ಮಾಡಲು ಬಯಸುತ್ತಾರೆ ಎಂಬುದನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸುವ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಗಾಲ್ 4 ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ. ಜೆನೆಟಿಸಿಸ್ಟ್ಗಳು ಮಾದರಿ ಜೀವಿಗಳ ಆನುವಂಶಿಕ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಹಣ್ಣಿನ ನೊಣಗಳು) ರಚಿಸಿದ್ದಾರೆ, ಇದನ್ನು GAL4 ರೇಖೆಗಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇವುಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಕೆಲವು ಉಪವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ GAL4 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಕೆಲವು ಸಾಲುಗಳು ಸ್ನಾಯು ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ GAL4 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಬಹುದು, ಅಥವಾ ನರಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ, ಅಥವಾ ಆಂಟೆನಾಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ, ಮತ್ತು ಹೀಗೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹಣ್ಣಿನ ನೊಣಗಳಿಗೆ, ಅಂತಹ ಹತ್ತಾರು ಸಾವಿರ ಸಾಲುಗಳಿವೆ, ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಉಪವಿಭಾಗದಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ GAL4 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು ಅತ್ಯಂತ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ-ಬಹುಶಃ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ನೊಣದ ಮೆದುಳಿನ ಎರಡು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸುವ ನ್ಯೂರಾನ್ಗಳು ಮಾತ್ರ. ಈ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ವತಃ GAL4 ಇರುವಿಕೆಯು ಕಡಿಮೆ ಅಥವಾ ಯಾವುದೇ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ, ಏಕೆಂದರೆ GAL4ನ ಮುಖ್ಯ ಪರಿಣಾಮವೆಂದರೆ ಒಂದು UAS ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸುವುದು, ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಯಾವುದೇ (ಅಥವಾ ನಿರುಪದ್ರವಿ) UAS ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ. ಗ್ಯಾಲ್ 4 ಸ್ವತಃ ಗೋಚರಿಸುವುದಿಲ್ಲವಾದ್ದರಿಂದ, ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳ ಮೇಲೆ ಕಡಿಮೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದರಿಂದ, ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಇತರ ಅಗತ್ಯ ಭಾಗವೆಂದರೆ "ವರದಿಗಾರರ ಸಾಲುಗಳು". ಇವು ಅಪೇಕ್ಷಿತ ವಂಶವಾಹಿಯ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ವಿಶೇಷ ಯು. ಎ. ಎಸ್ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನೊಣಗಳ ತಳಿಗಳಾಗಿವೆ. ಈ ಆನುವಂಶಿಕ ಸೂಚನೆಗಳು ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಜೀವಕೋಶದಲ್ಲೂ ಸಂಭವಿಸುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಆ ಜೀವಕೋಶವು GAL4 ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸದ ಕಾರಣ ಹೆಚ್ಚಿನ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಏನೂ ಆಗುವುದಿಲ್ಲ. ಜಿ. ಎ. ಎಲ್. 4 ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ, ಆದಾಗ್ಯೂ, ಯು. ಎ. ಎಸ್. ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅದರ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದು ಅದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುತ್ತದೆ. ಇದು ಯಾವ ಜೀವಕೋಶಗಳು GAL4 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತನಿಖಾಧಿಕಾರಿಗೆ ವರದಿ ಮಾಡಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ "ವರದಿಗಾರರ ಸಾಲು" ಎಂಬ ಪದವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಜೀವಕೋಶದ ನಡವಳಿಕೆಯನ್ನು ಕುಶಲತೆಯಿಂದ ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಉದ್ದೇಶಿಸಲಾದ ಜೀನ್ಗಳನ್ನು ಸಹ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ವಿಶಿಷ್ಟ ವರದಿಗಾರ ಜೀನ್ಗಳು ಸೇರಿವೆಃ ಹಸಿರು (ಜಿಎಫ್ಪಿ) ಅಥವಾ ಕೆಂಪು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು (ಆರ್ಎಫ್ಪಿ) ನಂತಹ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು, ಯಾವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಗಾಲ್ 4 ಚಾನೆಲ್ಹೋಡೋಪ್ಸಿನ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಿಗೆ ನೋಡಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ, ಇದು ನರ ಕೋಶಗಳ ಹ್ಯಾಲೊರಹೋಡೋಪ್ಸಿನ್ ಅನ್ನು ಬೆಳಕು-ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪ್ರಚೋದಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ, ಇದು ನ್ಯೂರಾನ್ಗಳನ್ನು ಮುಚ್ಚುವ ಶಿಬೈರ್ ನ್ಯೂರಾನ್ಗಳ ದಹನವನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸಲು ಬೆಳಕನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ (30 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್ ಮತ್ತು ಅದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು) ಮಾತ್ರ. ಈ ವಂಶವಾಹಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನೊಣಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ನರಕೋಶಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ವರ್ತಿಸುವ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಮೇಲಕ್ಕೆತ್ತಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಬಹುದು. ನಂತರ ನೊಣಗಳ ದೇಹದ ಉಷ್ಣಾಂಶವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು (ಅವು ಶೀತ-ರಕ್ತದ ಕಾರಣ), ಮತ್ತು ಈ ನರಕೋಶಗಳು ಆಫ್ ಆಗುತ್ತವೆ. ನೊಣದ ನಡವಳಿಕೆಯು ಬದಲಾದರೆ, ಆ ನರಕೋಶಗಳು ಏನು ಮಾಡುತ್ತವೆ ಎಂಬುದರ ಬಗ್ಗೆ ಇದು ಬಲವಾದ ಸುಳಿವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಜಿಇಸಿಐ (ಜೆನೆಟಿಕಲಿ ಎನ್ಕೋಡೆಡ್ ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಇಂಡಿಕೇಟರ್), ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಜಿಸಿಎಎಂಪಿ ಕುಟುಂಬದ ಸದಸ್ಯ. ಈ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡಾಗ ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ನರಕೋಶವು ಉರಿಯುವಾಗ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ. ಇದು ನರಮಂಡಲವು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತಿರುವುದನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಅಥವಾ ಚಲನಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲು ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಿಗೆ ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಮೊದಲು ನ್ಯೂರಾನ್ಗಳ ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ GAL4 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ GAL4 ರೇಖೆಯಿಂದ ನೊಣವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು GFP ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ವರದಿಗಾರರ ರೇಖೆಯೊಂದಿಗೆ ಅದನ್ನು ದಾಟುವ ಮೂಲಕ ನ್ಯೂರಾನ್ಗಳ ವರ್ಗವನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಬಹುದು. ಸಂತತಿಯಲ್ಲಿ, ಬಯಸಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಉಪವಿಭಾಗವು GAL4 ಅನ್ನು ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಈ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ GAL4 ಯು. ಎ. ಎಸ್. ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು GFP ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಬಯಸಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಉಪವಿಭಾಗವು ಈಗ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಹಸಿರು ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ತಿರುಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದೊಂದಿಗೆ ಅನುಸರಿಸಬಹುದು. ಮುಂದೆ, ಈ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಏನು ಮಾಡಬಹುದು ಎಂಬುದನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು, ಪ್ರಯೋಗಕಾರರು ಚಾನೆಲ್-ರೋಡಾಪ್ಸಿನ್ ವರದಿಗಾರರ ಸಾಲಿನೊಂದಿಗೆ ಅದೇ GAL4 ರೇಖೆಯನ್ನು ದಾಟುವ ಮೂಲಕ ಈ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಚಾನೆಲ್-ರೋಡಾಪ್ಸಿನ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಬಹುದು. ಸಂತತಿಯಲ್ಲಿ ಆಯ್ದ ಜೀವಕೋಶಗಳು, ಮತ್ತು ಆ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮಾತ್ರ ಚಾನೆಲ್ ರೋಡೋಪ್ಸಿನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ಬೆಳಕಿನಿಂದ ಪ್ರಚೋದಿಸಬಹುದು. ಈಗ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಈ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಇಚ್ಛೆಯಂತೆ ಪ್ರಚೋದಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಈ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಏನು ಮಾಡಬಹುದೆಂದು ನೋಡಲು ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಬರುವ ನಡವಳಿಕೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಬಹುದು. ಆಪರೇಷನ್ ಗಾಲ್ 4 ಎಂಬುದು ಡಿಎನ್ಎ-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡೊಮೇನ್ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ವಿಶಾಲವಾಗಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಮಾಡ್ಯುಲರ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದೆ. ಜಿಎಎಲ್4 ಬಂಧಿಸುವ ಯುಎಎಸ್ ಸಿಜಿಜಿ-ಎನ್11-ಸಿಸಿಜಿ ಆಗಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಎನ್ ಯಾವುದೇ ಬೇಸ್ ಆಗಿರಬಹುದು. GAL4 ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಇತರ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ ಇಲ್ಲದ ಯೀಸ್ಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದ್ದರೂ, ಇದು ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾ ಮತ್ತು ಮಾನವ ಜೀವಕೋಶಗಳಂತಹ ವಿವಿಧ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ವಂಶವಾಹಿ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಅದೇ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ವಿಕಾಸದ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಎತ್ತಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾದಲ್ಲಿ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕಾಗಿ, ಜಿಎಎಲ್4 ವಂಶವಾಹಿಯನ್ನು ಸ್ಥಳೀಯ ವಂಶವಾಹಿ ಪ್ರವರ್ತಕ ಅಥವಾ ಚಾಲಕ ವಂಶವಾಹಿಯ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಯುಎಎಸ್ ಗುರಿ ವಂಶವಾಹಿಯ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ. ಚಾಲಕ ವಂಶವಾಹಿಯು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ GAL4 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿಯಾಗಿ, ಜಿ. ಎ. ಎಲ್. 4 ಯು ಯು. ಎ. ಎಸ್ ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಿದ ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಜೀನ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬೇಕು. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಜಿ. ಎಫ್. ಪಿ. (ಗ್ರೀನ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್) ನಂತಹ ಗೋಚರ ಮಾರ್ಕರ್ ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಬೆಸೆಯುವ ಮೂಲಕ ಚಾಲಕ ಜೀನ್ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದು. ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾದಲ್ಲಿ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಜಿ. ಎ. ಎಲ್. 4 ಮತ್ತು ಯು. ಎ. ಎಸ್. ಬಹಳ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿವೆ ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಇರುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯು ಜೀವಕೋಶದಲ್ಲಿನ ಇತರ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಅಡ್ಡಿಯಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾದಲ್ಲಿನ ಜಿ. ಎ. ಎಲ್. 4/ಯು. ಎ. ಎಸ್-ನಿಯಂತ್ರಿತ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಜೀನ್ಗಳನ್ನು ವರ್ಣದ್ರವ್ಯ ಪ್ರಸರಣ ಅಂಶ (ಪಿ. ಡಿ. ಎಫ್) ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುವ ಪರಿಚಿತ ಲಯಬದ್ಧ ಸಿರ್ಕಾಡಿಯನ್ ಔಟ್ಪುಟ್ನಲ್ಲಿ ಆರ್ಹೆಥ್ಮಿಕ್ ನಡವಳಿಕೆಯನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಗ್ಲಿಯಲ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾದಲ್ಲಿ GAL4ನ ಅತಿಯಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯು ಅಡ್ಡಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ಕೆಲವು ಸಂಶೋಧನೆಗಳು ಸೂಚಿಸಿವೆ, ಇದು ಬಹುಶಃ ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಅನ್ಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿರುವ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಮತ್ತು ಒತ್ತಡದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿರಬಹುದು. ಆಫ್ರಿಕಾದ ಪಂಜದ ಕಪ್ಪೆ ಜೆನೋಪಸ್ ಮತ್ತು ಜೀಬ್ರಾಫಿಶ್ನಂತಹ ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾ ಜೊತೆಗೆ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು GAL4-UAS ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಜಿ. ಎ. ಎಲ್. 4/ಯು. ಎ. ಎಸ್. ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಎರಡು ಹೈಬ್ರಿಡ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ನಲ್ಲಿಯೂ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಎರಡು ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಅಥವಾ ಡಿ. ಎನ್. ಎ. ಯೊಂದಿಗಿನ ಪ್ರೋಟೀನಿನ ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುವ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ವಿಸ್ತರಣೆಗಳಾದ ಗ್ಯಾಲ4 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು "ಇಂಟರ್ಸೆಕ್ಷನಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಟಜಿಗಳ" ಮೂಲಕ ಇನ್ನಷ್ಟು ನಿರ್ದಿಷ್ಟಗೊಳಿಸಬಹುದು. ಇವುಗಳು ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ GAL4 ರೇಖೆಗಳನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು-ಉದಾಹರಣೆಗೆ, A ಮತ್ತು B-GAL4 ಅನ್ನು A ರೇಖೆಯಲ್ಲಿರುವ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಆದರೆ B ರೇಖೆಯಲ್ಲ, ಅಥವಾ A ಮತ್ತು B ಎರಡೂ ರೇಖೆಗಳಲ್ಲಿರುವ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆಂತರಿಕವಾಗಿ ವಿರಳವಾದ GAL4 ರೇಖೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಿದಾಗ, ಇದು ಬಹಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಆಯ್ಕೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಒಂದೇ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರಕ್ಕೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಅನನುಕೂಲವೆಂದರೆ ಕನಿಷ್ಠ ಮೂರು ಸ್ವತಂತ್ರ ಅಳವಡಿಕೆ ತಾಣಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಸಾಲುಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಮತ್ತು ಸ್ವತಂತ್ರ ಅಳವಡಿಕೆ ತಾಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಬೇಕು, ಮತ್ತು ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಅಂತಿಮ ಜೀವಿಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಒಂದೇ ಶಿಲುಬೆಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಇದು ಸಂಶೋಧನೆಯ ಅತ್ಯಂತ ಸಕ್ರಿಯ ಕ್ಷೇತ್ರವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಅಂತಹ ಅನೇಕ ಇಂಟರ್ಸೆಕ್ಷನಲ್ ತಂತ್ರಗಳಿವೆ, ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಎರಡನ್ನು ಕೆಳಗೆ ಚರ್ಚಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎ ಸಾಲಿನಲ್ಲಿರುವ ಆದರೆ ಬಿ ರೇಖೆಯಲ್ಲದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಜಿಎಎಲ್4 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ರಚಿಸಲು ಒಂದು ಮಾರ್ಗವೆಂದರೆ, ಜಿಎಎಲ್4 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು ಎ ರೇಖೆಯನ್ನು ಮಾಡಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜಿಎಎಲ್4 ಪ್ರತಿರೋಧಕವಾದ ಜಿಎಎಲ್80 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು ಬಿ ರೇಖೆಯನ್ನು ಮಾಡಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಎ ನಲ್ಲಿರುವ ಆದರೆ ಬಿ ಅಲ್ಲದ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮಾತ್ರ ಸಕ್ರಿಯ ಜಿಎಎಲ್ 4 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಅದು ನಂತರ ವರದಿಗಾರ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಚಾಲನೆ ಮಾಡಬಹುದು. ಎ ಮತ್ತು ಬಿ ಎರಡರಲ್ಲೂ ಇರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಜಿಎಎಲ್ 4 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು, "ಸ್ಪ್ಲಿಟ್-ಜಿಎಎಲ್ 4" ಎಂಬ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಸ್ವತಃ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯವಾಗಿರುವ GAL4 ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಅರ್ಧವನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು ಲೈನ್ ಎ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಂತೆಯೇ, GAL4 ನ ಉಳಿದ ಅರ್ಧವನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು B ರೇಖೆಯನ್ನು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಅದು ಸ್ವತಃ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯವಾಗಿದೆ. ಎರಡೂ ಸಾಲುಗಳಲ್ಲಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮಾತ್ರ ಎರಡೂ ಭಾಗಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸುತ್ತವೆ, ಇವು ಲ್ಯೂಸಿನ್ ಜಿಪ್ಪರ್ನಿಂದ GAL4 ಆಗಿ ಸ್ವಯಂ-ಜೋಡಿಸಲ್ಪಡುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ವರದಿಗಾರ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಜೆನೆಟಿಕ್ಸ್