Cycloheximide chase
ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಚೇಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು ಸ್ಥಿರ ಸ್ಥಿತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಆಣ್ವಿಕ ಮತ್ತು ಕೋಶ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ. ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಒಂದು ಔಷಧವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನುವಾದದಲ್ಲಿ ಉದ್ದನೆಯ ಹಂತವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ಕಾಲಾನಂತರದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅವನತಿಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲು ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ ಅನೇಕ ಸಮಯದ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಲೈಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಅರ್ಧ-ಜೀವಿತಾವಧಿಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಇದನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಮೃದ್ಧಿಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಅನುಸರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇಮೇಜ್ ಜೆ ನಂತಹ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಸಾಧನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬಹುದು. ಯೀಸ್ಟ್ ಮತ್ತು ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಗಳಂತಹ ವಿವಿಧ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಚೇಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ. ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಬಳಸುವ ಜೀವಕೋಶ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ, ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಅನ್ವಯ ಮತ್ತು ಸಮಯದ ಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಬದಲಾಗಬಹುದು. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ತಲಾಧಾರವನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ಯೀಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ವಹಿವಾಟು ಸಂಭವಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡಲು 90 ನಿಮಿಷಗಳವರೆಗೆ ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಬೆನ್ನಟ್ಟುವಿಕೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತವಾಗುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಸ್ಥಿರ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು 3 ರಿಂದ 8 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಬೆನ್ನಟ್ಟುವ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಸಂಕೀರ್ಣತೆ ಮತ್ತು ಅದು ಮಾದರಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಅತಿಯಾಗಿ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತವಾಗಿದೆಯೇ ಅಥವಾ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕವಾಗಿದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ, ಬೆನ್ನಟ್ಟುವಿಕೆಯ ಅಗತ್ಯ ಉದ್ದವು ಬದಲಾಗಬಹುದು. ಇಡೀ ಬೆನ್ನಟ್ಟುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ತಡೆಯಲಾಗಿದೆಯೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿ ಕೆಲವು ಗಂಟೆಗಳಿಗೊಮ್ಮೆ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಯೀಸ್ಟ್ನಲ್ಲಿ, ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಬೆನ್ನಟ್ಟುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಕಾಲಾನಂತರದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಅಳಿಸುವ ತಳಿಗಳನ್ನು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಚಾಪೆರೋನ್ಗಳು, ಇ3 ಲಿಗೇಸ್ಗಳು ಮತ್ತು ವ್ಯಾಕ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಂತಹ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಅವನತಿ ಯಂತ್ರೋಪಕರಣಗಳಿಲ್ಲದ ಯೀಸ್ಟ್ ತಳಿಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ತಲಾಧಾರದ ಅವನತಿಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಔಷಧಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳನ್ನು (ಎಂಜಿ132 ನಂತಹ) ಅವನತಿಯ ಹಂತಗಳನ್ನು ತಡೆಯಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರ ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಚೇಸ್ ಅನ್ನು ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಮೇಲೆ ಹೇಗೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಯೀಸ್ಟ್ ಅಳಿಸುವಿಕೆಯ ತಳಿಗಳ ಬದಲಿಗೆ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ನಾಕ್ ಡೌನ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳ ಅನುಷ್ಠಾನದೊಂದಿಗೆ ಸಸ್ತನಿ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಬಹುದು. ವಿಭಿನ್ನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಮೇಲೆ ಹೇಗೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಬೆನ್ನಟ್ಟುವಿಕೆಗಳು ಸಹ ಮೌಲ್ಯಯುತವಾಗಿವೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಾದ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ರೋಗ-ಸಂಬಂಧಿತ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಜೀವಕೋಶದೊಳಗಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅರ್ಧ-ಜೀವಿತಾವಧಿಯ ಮೇಲೆ ಹೇಗೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಯೀಸ್ಟ್ ಮತ್ತು ಸಸ್ತನಿ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಡಿಸುವಿಕೆಯ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರಗಳು ಅವುಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ರೋಗಗಳ ರೋಗಕಾರಕಕ್ಕೆ ಹೇಗೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಈ ಮಾಹಿತಿಯು ಮೌಲ್ಯಯುತವಾಗಿದೆ. ಪ್ರಯೋಜನಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸುವ ಇತರ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಚೇಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದರಿಂದ ಅನೇಕ ಪ್ರಯೋಜನಗಳಿವೆ. ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಚೇಸ್ಗಳನ್ನು ವಿವಿಧ ಮಾದರಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಬಹುತೇಕ ಯಾವುದೇ ಪ್ರೋಟೀನ್ ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಕಾರ್ಯಗತಗೊಳಿಸಬಹುದು. ಇತರ ಔಷಧಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಅಗ್ಗದ ಸಂಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಅಲ್ಪಾವಧಿಗೆ ಬಳಸಿದಾಗ ಇದು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿದೆ. ಪಲ್ಸ್ ಚೇಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಚೇಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಿಗೆ ಪರ್ಯಾಯ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೊಸದಾಗಿ ಅನುವಾದಿಸಲಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ವಿಕಿರಣಶೀಲ ಲೇಬಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಇದೇ ರೀತಿಯ "ಚೇಸ್" ಅವಧಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನವು ಮಾಹಿತಿಯುಕ್ತವಾಗಿದ್ದರೂ ಮತ್ತು ನವಜಾತ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಮೃದ್ಧಿಯನ್ನು ಗಮನಿಸುವುದರ ಪ್ರಯೋಜನವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆಯಾದರೂ, ಇದಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ವಿಕಿರಣಶೀಲ ವಸ್ತುವು ಕಡಿಮೆ ಶೆಲ್ಫ್-ಲೈಫ್ನೊಂದಿಗೆ ದುಬಾರಿಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ಗಿಂತ ಬಳಸಲು ಹೆಚ್ಚು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯನ್ನು ಬಯಸುತ್ತದೆ. ಅನಾನುಕೂಲಗಳು ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಚೇಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸುವ ಕೆಲವು ಅನಾನುಕೂಲಗಳು ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ನ ವಿಷಕಾರಿ ಸ್ವರೂಪವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ. ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಿದಾಗ, ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಜೀವಕೋಶದೊಳಗಿನ ಡಿಎನ್ಎಗೆ ಹಾನಿಯನ್ನುಂಟು ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಜೀವಕೋಶದ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಕಾರಣಕ್ಕಾಗಿ, ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಬೆನ್ನಟ್ಟುವಿಕೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 12 ಗಂಟೆಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಉಳಿಯುವುದಿಲ್ಲ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಸ್ಥಿರವಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ವಹಿವಾಟನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುತ್ತಿದ್ದರೆ ಇದು ಮಿತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಸೈಕ್ಲೋಹೆಕ್ಸಿಮೈಡ್ ಬೆನ್ನಟ್ಟುವಿಕೆಯು ಪಲ್ಸ್ ಚೇಸ್ನಂತಹ ಹೊಸದಾಗಿ ಅನುವಾದಿಸಲಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಟ್ಟಗಳಿಗೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ ಸ್ಥಿರ ಸ್ಥಿತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನೋಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಮಾತ್ರ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪಕ್ವತೆಯಲ್ಲದೇ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅವನತಿಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ಗಮನಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಪ್ರಯೋಗಗಳು ಆಣ್ವಿಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಜೀವಕೋಶ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು