HAT medium
এইচএটি মিডিয়াম (হাইপোক্সান্থাইন-অ্যামিনোপটেরিন-থাইমাইডিন মিডিয়াম) স্তন্যপায়ী কোষ সংস্কৃতির জন্য একটি নির্বাচন মাধ্যম, যা অ্যামিনোপটেরিন সংমিশ্রণের উপর নির্ভর করে, একটি ওষুধ যা ডাইহাইড্রোফোলেট রিডাক্টেজকে বাধা দিয়ে একটি শক্তিশালী ফোলেট বিপাক প্রতিরোধক হিসাবে কাজ করে, হাইপোক্সান্থাইন (একটি পিউরিন ডেরিভেটিভ) এবং থাইমাইডিন (একটি ডিওক্সিন্যুক্লিওসাইড) যা ডিএনএ সংশ্লেষণের মধ্যস্থতাকারী। কৌশলটি হ 'ল অ্যামিনোপটেরিন ডিএনএ ডি নোভো সংশ্লেষণকে বাধা দেয়, যা কোষ বিভাজন এগিয়ে যাওয়ার জন্য একেবারে প্রয়োজনীয়, তবে হাইপোক্সান্থাইন এবং থাইমাইডিন কোষগুলিকে বাধা ("উদ্ধার পথ") এড়াতে কাঁচামাল সরবরাহ করে, তবে শর্ত থাকে যে তাদের সঠিক এনজাইম রয়েছে, যার অর্থ জিনের কার্যকরী অনুলিপি রয়েছে যা তাদের এনকোড করে। ডাইহাইড্রোফোলেট রিডাক্টেজ উৎসেচক, যা ডাইহাইড্রোফোলেট হ্রাস করে টেট্রাহাইড্রোফোলেট (টি. এইচ. এফ) তৈরি করে, বিশেষ করে অ্যামিনোপটেরিন দ্বারা অবরুদ্ধ। টি. এইচ. এফ, নির্দিষ্ট প্রোটিনের সহযোগিতায় কাজ করে, একক কার্বন ইউনিট গ্রহণ করতে পারে যা তারপর নির্দিষ্ট লক্ষ্যে স্থানান্তরিত হয়। কোষীয় প্রজননের অন্যতম গুরুত্বপূর্ণ লক্ষ্য হল থাইমাইডাইলেট সিনথেস, যা ডিঅক্সিউরিডিন মনোফসফেট (ডিইউএমপি) থেকে থাইমাইডিন মনোফসফেট (টিএমপি) তৈরি করে। অতিরিক্ত ফসফোরিলেশন প্রতিক্রিয়া দ্বারা, টিএমপি থাইমিডিন ট্রাইফসফেট (টিটিপি) তৈরি করতে ব্যবহার করা যেতে পারে, যা ডিএনএ পলিমারেজ দ্বারা ডিএনএ তৈরি করতে ব্যবহৃত চারটি নিউক্লিওটাইড অগ্রদূতের মধ্যে একটি। ডি. ইউ. এম. পি রূপান্তর করার জন্য প্রয়োজনীয় টি. এইচ. এফ ছাড়া কোনও টি. টি. পি হতে পারে না এবং ডি. এন. এ সংশ্লেষণ এগিয়ে যেতে পারে না, যদি না অন্য কোনও উৎস থেকে টি. এম. পি তৈরি করা যায়। বিকল্প উৎস হল এইচ. এ. টি মাধ্যমে উপস্থিত থাইমাইডিন যা কোষ দ্বারা শোষিত হতে পারে এবং থাইমাইডিন কাইনেজ (টি. কে) দ্বারা টি. এম. পি-তে ফসফোরিলেটেড হতে পারে। আইএমপি সংশ্লেষণের জন্য (জিএমপি এবং জিটিপি, এবং এএমপি এবং এটিপি-র অগ্রদূত) টিএইচএফ-এর প্রয়োজন হয়, এবং এটিকে বাইপাসও করা যেতে পারে। এই ক্ষেত্রে হাইপোক্সান্থাইন-গুয়ানিন ফসফোরিবোসিলট্রান্সফেরেজ (এইচ. জি. পি. আর. টি) মাধ্যম থেকে শোষিত হাইপোক্সান্থাইনকে পি. আর. পি. পি-র সাথে বিক্রিয়া করে, পাইরোফসফেটকে মুক্ত করে, একটি উদ্ধার পথের মাধ্যমে আই. এম. পি তৈরি করে। অতএব, কোষ সংস্কৃতির জন্য এইচ. এ. টি মাধ্যমের ব্যবহার হল কার্যকরী টি. কে এবং এইচ. জি. পি. আর. টি ধারণকারী কোষগুলির জন্য কৃত্রিম নির্বাচনের একটি রূপ। কোষগুলিকে মেরে ফেলার বিষের মাধ্যমে এই পরিকল্পনায় অনেক দরকারী সংশোধন সম্ভব হয়, তবে এই জিনের অভাব থাকলে এগুলির প্রতিরোধ ক্ষমতা থাকে। সুতরাং, টি. কে-এর অভাবযুক্ত একটি কোষ ব্রোমোডিওক্সিউরিডিন (বি. আর. ডি. ইউ)-এর বিরুদ্ধে প্রতিরোধী এবং এইচ. জি. পি. আর. টি-র অভাবযুক্ত একটি কোষ 6-থিয়োগুয়ানিন (6-টি. জি) এবং 8-আজাগুয়ানিন-এর বিরুদ্ধে প্রতিরোধী। সুতরাং, পরবর্তী দুটি ওষুধের মধ্যে একটির সাথে নির্বাচন, তারপরে এইচ. এ. টি মাধ্যম, বিপরীতমুখী উপনিবেশ তৈরি করবে। অ্যাপ্লিকেশন এইচ. এ. টি মাধ্যম মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি প্রস্তুতির জন্য ব্যবহৃত হয়। এই প্রক্রিয়াকে হাইব্রিডোমা প্রযুক্তি বলা হয়। পরীক্ষাগারের প্রাণীরা (যেমন, ইঁদুর) প্রথমে একটি অ্যান্টিজেনের সংস্পর্শে আসে যার বিরুদ্ধে আমরা একটি অ্যান্টিবডি পৃথক করতে আগ্রহী। একবার স্তন্যপায়ী প্রাণী থেকে স্প্লেনোসাইট পৃথক হয়ে গেলে, বি কোষগুলি পলিথিলিন গ্লাইকোল বা সেন্ডাই ভাইরাস ব্যবহার করে এইচ. জি. পি. আর. টি নেতিবাচক, অমর মায়েলোমা কোষের সাথে সংযুক্ত হয়। সংযুক্ত কোষগুলি এইচ. এ. টি মাধ্যমে ইনকিউবেট করা হয়। মাঝারি অ্যামিনোপটেরিন ডি নোভো পথকে অবরুদ্ধ করে। অতএব, অব্যবহৃত মায়েলোমা কোষগুলি মারা যায়, কারণ তারা ডি নোভো বা উদ্ধার পথ দ্বারা নিউক্লিওটাইড তৈরি করতে পারে না। অব্যবহৃত বি কোষগুলি অল্প আয়ু থাকার কারণে মারা যায়। এইভাবে, শুধুমাত্র বি কোষ-মায়েলোমা সংকর বেঁচে থাকে। এই কোষগুলি অ্যান্টিবডি তৈরি করে (বি কোষের একটি বৈশিষ্ট্য) এবং অমর (মায়েলোমা কোষের একটি বৈশিষ্ট্য)। ইনকিউবেটেড মাধ্যমটি তখন মাল্টিওয়েল প্লেটে এতটাই পাতলা করা হয় যে প্রতিটি কুয়ায় মাত্র 1টি কোষ থাকে। তারপর প্রতিটি কূপের সুপারনেট্যান্ট পছন্দসই অ্যান্টিবডির জন্য পরীক্ষা করা যেতে পারে। যেহেতু একটি কূপের অ্যান্টিবডিগুলি একই বি কোষ দ্বারা উত্পাদিত হয়, তাই সেগুলি একই এপিটোপের দিকে পরিচালিত হবে এবং মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি হিসাবে পরিচিত। মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি উৎপাদন প্রথম সিজার মিলস্টাইন এবং জর্জেস জে. এফ. কোলার দ্বারা উদ্ভাবিত হয়েছিল, যা তাদের 1984 সালে ফিজিওলজি বা মেডিসিনে নোবেল পুরস্কার অর্জন করেছিল, নিলস কাজ জার্নের সাথে ভাগ করে নিয়েছিল। রেফারেন্স সেল কালচার মিডিয়া