Αr14 RNA
αr14 হল ব্যাকটেরিয়ার ছোট নন-কোডিং আর. এন. এ-র একটি পরিবার যা α-প্রোটিওব্যাকটেরিয়ার একটি বিস্তৃত গোষ্ঠীর প্রতিনিধি। এই পরিবারের প্রথম সদস্য (এস. এম. আর. 14সি2) ক্রোমোজোমের (সি) মধ্যে অবস্থিত একটি সিনোরহিজবিয়াম মেলিলোটি 1021 লোকাসে পাওয়া গেছে। পরে এর নাম পরিবর্তন করে এন. এফ. ই. আর1 (নোডুল ফরমেশন এফিশিয়েন্সি আর. এন. এ) রাখা হয় এবং লবণের চাপ এবং শুঁটিমূলের উপর সহজীবি মিথস্ক্রিয়ার সময় এটি অত্যন্ত প্রকাশ পায়। আরও সমসংস্থান এবং কাঠামো সংরক্ষণ বিশ্লেষণ আরও 2টি ক্রোমোজোমাল অনুলিপি এবং 3টি প্লাজমিডিক অনুলিপি চিহ্নিত করেছে। উপরন্তু, বেশ কয়েকটি নাইট্রোজেন-ফিক্সিং সিম্বায়োটিক রাইজোবিয়ায় পূর্ণ দৈর্ঘ্যের এস. এম. আর. 14সি হোমোলগ চিহ্নিত করা হয়েছে। আর. লেগুমিনোসারাম bv.viciae, আর. লেগুমিনোসারাম বিভি। ট্রাইফোলি, আর. এটলি এবং বেশ কয়েকটি মেসোরিজবিয়াম প্রজাতি), এগ্রোব্যাকটেরিয়াম প্রজাতির (অর্থাৎ। এ. টিউমেফ্যাসিয়েন্স, এ. ভিটিস, এ. রেডিওব্যাকটার এবং অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম এইচ13) এবং ব্রুসেলা প্রজাতির বিস্তৃত বর্ণালীতে (বি. ওভিস, বি. ক্যানিস, বি. অ্যাবোর্টাস এবং বি. মাইক্রোটিস এবং বি. মেলিট্যান্সিসের বেশ কয়েকটি বায়োভার)। αr14C RNA প্রজাতিগুলি 115-125 nt লম্বা (সারণি 1) এবং একটি সুনির্দিষ্ট সাধারণ গৌণ কাঠামো ভাগ করে নেয় (চিত্র 1)। বেশিরভাগ αr14 প্রতিলিপিগুলি α-প্রোটিওব্যাকটেরিয়াল জিনোমের আন্তঃজেনিক অঞ্চলের (আই. জি. আর) মধ্যে স্বাধীন প্রতিলিপি ইউনিটগুলির সু-সংজ্ঞায়িত প্রবর্তক অঞ্চলগুলি থেকে প্রকাশিত ট্রান্স-অ্যাক্টিং এস. আর. এন. এ হিসাবে তালিকাভুক্ত করা যেতে পারে (চিত্র 5)। ডেল ভ্যাল এবং অন্যান্যরা আবিষ্কার এবং কাঠামো এস. এম. আর. 14সি2 এস. আর. এন. এ-কে বর্ণনা করেছেন, একটি গণনামূলক তুলনামূলক জিনোমিক পদ্ধতির ফলস্বরূপ যা পরিপূরক কৌশলগুলির সংহতকরণের সমন্বয়ে গঠিত, যা রেফারেন্স এস. মেলিলোটি 1021 স্ট্রেনের (http://iant.toulouse.inra.fr/bacteria/annotation/cgi/rhime.cgi) আন্তঃজেনিক অঞ্চলে (আই. জি. আর) নতুন এস. আর. এন. এ-এনকোডিং জিন অনুসন্ধানের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। উত্তরাঞ্চলীয় সংকরায়ন পরীক্ষাগুলি নিশ্চিত করেছে যে পূর্বাভাসকৃত এস. এম. আর. 14সি2 লোকাস প্রত্যাশিত আকারের একটি একক প্রতিলিপি প্রকাশ করেছে, যা মুক্ত-জীবন্ত এবং এন্ডোসিম্বায়োটিক ব্যাকটেরিয়ায় পৃথকভাবে জমা হয়েছে। টিএপি-ভিত্তিক 5 '-রেস পরীক্ষাগুলি এস. মেলিলোটি 1021 জিনোম (http://iant.toulouse.inra.fr/bacteria/annotation/cgi/rhime.cgi)-এ 1,667,613 এনটি অবস্থানে পূর্ণ দৈর্ঘ্যের এসএমআর14সি প্রতিলিপির ট্রান্সক্রিপশন স্টার্ট সাইট (টিএসএস)-কে ম্যাপ করেছে যেখানে 3'-প্রান্তটি 1,667,491 এনটি অবস্থানে অবস্থিত বলে ধরে নেওয়া হয়েছিল যা একটি সত্যিকারের রো-স্বাধীন টার্মিনেটর (চিত্র 5)-এর ইউএস-এর পরপর প্রসারিত শেষ অবশিষ্টাংশের সাথে মিলে যায়। সমান্তরাল এবং পরবর্তী গবেষণায় যেখানে এস. এম. আর14সি2 প্রতিলিপিটিকে এস. আর. এ38 বা এস. এম. 7 'হিসাবে উল্লেখ করা হয়েছে, স্বাধীনভাবে এস. মেলিলোটি এবং এর ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত স্ট্রেন 2011-এ এই এস. আর. এন. এ অভিব্যক্তিটি নিশ্চিত করেছে। এস. মেলিলোটি 2011-এর ছোট আরএনএ ভগ্নাংশের (50-350 এনটি) সাম্প্রতিক গভীর ক্রম-ভিত্তিক বৈশিষ্ট্যায়ন এস. এম. আর14সি2-এর অভিব্যক্তি আরও নিশ্চিত করেছে (এখানে স্মেলসি397 হিসাবে উল্লেখ করা হয়েছে), এবং এস. মেলিলোটি 1021 জিনোমের একই অবস্থানে পূর্ণ দৈর্ঘ্যের প্রতিলিপির 5 '-এবং 3'-প্রান্তগুলি ম্যাপ করেছে। এস. এম. আর. 14সি2-এর নিউক্লিওটাইড ক্রমটি প্রাথমিকভাবে আর. এফ. এ. এম ডাটাবেসের (সংস্করণ 10; http://www.sanger.ac.uk/Software/Rfam) বিরুদ্ধে অনুসন্ধানের জন্য অনুসন্ধান হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। এই সমতাত্ত্বিক অনুসন্ধানটি এই ডাটাবেসে পরিচিত ব্যাকটেরিয়াল এস. আর. এন. এ-র সাথে কোনও মিল খুঁজে পায়নি। বর্তমানে উপলব্ধ সমস্ত ব্যাকটেরিয়াল জিনোমের (20 এপ্রিল 2011-এ 1,615 ক্রম; https://www.ncbi.nlm.nih.gov;) বিপরীতে ডিফল্ট প্যারামিটারগুলির সঙ্গে পরবর্তী সময়ে এস. এম. আর. 14সি2-কে ব্লাস্ট করা হয়। ইনফার্নাল (version1.0) (চিত্র 2) ব্যবহার করে বীজ বিন্যাস থেকে একটি কোভ্যারিয়েন্স মডেল (সিএম) তৈরি করার জন্য অনুসন্ধানের ক্রমের (78-89% সাদৃশ্য) উল্লেখযোগ্য সমরূপতা প্রদর্শনকারী অঞ্চলগুলি বের করা হয়েছিল। এই সিএমটি বিদ্যমান ব্যাকটেরিয়াল জিনোমিক ডাটাবেসে αr9 পরিবারের নতুন সদস্যদের জন্য আরও অনুসন্ধানে ব্যবহার করা হয়েছিল এবং নিম্নলিখিত টেবিল 2-এ পুনরায় শুরু করা হয়েছিলঃ পরিবারের জন্য একটি ঐকমত্য গৌণ কাঠামো অনুমান করার জন্য ফলাফলগুলি ম্যানুয়ালি পরিদর্শন করা হয়েছিল (চিত্র 1 এবং চিত্র 2)। সর্বসম্মত কাঠামোটিও খুব অনুরূপ ভবিষ্যদ্বাণী সহ প্রোগ্রাম লোকার্নেটের সাথে স্বাধীনভাবে পূর্বাভাস দেওয়া হয়েছিল। ইনফার্নাল ব্যবহার করে সি. এম-এর সাথে পাওয়া ক্রমগুলির ম্যানুয়াল পরিদর্শন 101 টি হোমোলগ সিকোয়েন্স খুঁজে পাওয়ার অনুমতি দেয়। এস. এম. আর. 14সি2-এর কাছাকাছি 36টি হোমোলগকে এনকোড করা রাইজোবিয়াল প্রজাতিগুলি ছিলঃ এস. মেডিকে এবং এস. ফ্রেডি, দুটি আর. লেগুমিনোসারাম ট্রাইফোলি স্ট্রেন (ডব্লিউ. এস. এম2304 এবং ডব্লিউ. এস. এম1325), দুটি আর. এটলি স্ট্রেন সি. এফ. এন 42 এবং সি. আই. এ. টি 652, রেফারেন্স আর. লেগুমিনোসারাম বি. ভি। ভিসিয়া 3841 প্রজাতি, এবং অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম প্রজাতি এ. ভিটিস, এ। টিউমেফ্যাসিয়েন্স, এ. রেডিওব্যাক্টর এবং এ. এইচ13। এই সমস্ত ক্রমগুলি উল্লেখযোগ্য ইনফার্নাল ই-মান (5.63E-29-8.16E-18) এবং বিট-স্কোর দেখায়। মডেলের সাথে পাওয়া বাকি ক্রমগুলি (1.33E-17 এবং 8.79E-03) এর মধ্যে উচ্চ ই-মান দেখায় তবে কম বিট-স্কোর দেখায় এবং ব্রুসেলা প্রজাতি (বি. ওভিস, বি. ক্যানিস, বি. অ্যাবোর্টাস, বি. মাইক্রোটিস এবং বি. মেলিট্যান্সিসের বেশ কয়েকটি বায়োবার), ব্রুসেলা অ্যানথ্রোপি এবং মেসোরিজোবাম প্রজাতি লোটি, এম. সিসেরি এবং এম. বি. এন. সি দ্বারা এনকোড করা হয়। মডেলটি এস. মেলিলোটি জিনোমে পাঁচটি অতিরিক্ত অনুলিপি চিহ্নিত করে, যার মধ্যে দুটি একই আইজিআর (এসএমআর14সি2, এসএমআর14সি3)-এ সনাক্ত করে। এস. মেডিকে (স্মেডর14সি1, স্মেডর14সি2), এস. ফ্রেডি (স্ফেডর14সি1, স্ফেডর14সি2), এম. লোটি (এম্. এল. আর14সি1, এম্. এল. আর14সি2) এবং এম. সিসেরির (এম্. সি. আর14সি1, এম্. সি. আর14সি2) ক্ষেত্রেও একই ফলাফল পাওয়া গেছে। এস. মেলিলোটি জিনোমে পাওয়া অতিরিক্ত অনুলিপি সম্পর্কে, পাঁচটি অনুলিপির মধ্যে চারটি প্রকাশের বিষয়টি সাম্প্রতিক গবেষণায় স্বাধীনভাবে নিশ্চিত করা হয়েছেঃ এস. এম. আর. 14সি3 হিসাবে উল্লেখ করা হয়েছেঃ এস. এম. আর. 38, এস. এম. 7 বা এস. এম. আর. সি 398 এস. এম. আর. 14এ1 হিসাবে উল্লেখ করা হয়েছেঃ এস. এম. এ8 বা এস. এম. আর. এ075 এস. এম. আর. 14এ2 হিসাবে উল্লেখ করা হয়েছেঃ এস. এম. আর. এ099 এস. এম. আর. 14বি হিসাবে উল্লেখ করা হয়েছেঃ এস. এম. আর. বি. 161 ভবিষ্যদ্বাণীকৃত অনুলিপির জন্য এখন পর্যন্ত কোনও পরীক্ষামূলক প্রমাণ নেই এস. এম. আর. 14সি1। অভিব্যক্তি তথ্য সমান্তরাল গবেষণায় বিভিন্ন জৈবিক অবস্থার অধীনে এস. মেলিলোটি 1021-এ এস. এম. আর. 14সি অভিব্যক্তি মূল্যায়ন করা হয়েছে; অর্থাৎ। টিওয়াই-তে ব্যাকটেরিয়ার বৃদ্ধি, ন্যূনতম মাঝারি (এমএম) এবং লুটোলিন-এমএম ঝোল এবং এন্ডোসিম্বায়োটিক ব্যাকটেরিয়া (অর্থাৎ। পরিপক্ক সিম্বায়োটিক আলফালফা নোডুল) এবং উচ্চ লবণ চাপ, জারণ চাপ এবং ঠান্ডা এবং গরম শক চাপ। মুক্ত-জীবন্ত ব্যাকটেরিয়ায় এস. এম. আর. 14সি2-এর অভিব্যক্তি বৃদ্ধি-নির্ভর বলে দেখা গেছে, ব্যাকটেরিয়া যখন স্থির পর্যায়ে প্রবেশ করে তখন জিনটি দৃঢ়ভাবে নিয়ন্ত্রিত হয়। মুক্ত-জীবন্ত ব্যাকটেরিয়া (লগ ফেজ টিওয়াই বা এমএম কালচার)-এর তুলনায় এস. এম. আর. 14সি2-এর অভিব্যক্তি নোডুলগুলিতে ~ 5 গুণ বৃদ্ধি পেয়েছে, যা ব্যাকটেরিয়া সংক্রমণ এবং/অথবা ব্যাকটেরয়েড পার্থক্যের সময় এই এস. আর. এন. এ-গুলির প্রবর্তনের পরামর্শ দেয়। সাম্প্রতিক গভীর সিকোয়েন্সিং তথ্য প্লাজমিক অনুলিপিগুলির ডিফারেনশিয়াল অভিব্যক্তি খুঁজে পেয়েছে। এস. এম. আর. 14এ1 ডিফারেনশিয়াল এক্সপ্রেশন শর্ত দেখিয়েছে, জটিল মাধ্যমে খুব কম এক্সপ্রেশন স্তর এবং হ্রাস তাপমাত্রায় একই মাধ্যমে। যাইহোক, এটি তাপ-শক চাপ দ্বারা দৃঢ়ভাবে নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল। এস. এম. আর. 14বি স্থির পর্যায়ে এর অভিব্যক্তি 8 গুণের বেশি বৃদ্ধি দেখিয়েছে। উপরন্তু, অ্যাসিডিক, বেসিক এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রোমোটার বিশ্লেষণের উপর এক সপ্তাহের আপ রেগুলেশন (<8 গুণ) দেখানো হয়েছে αr14 পরিবারের সদস্যদের সমস্ত প্রোমোটার অঞ্চলগুলি এখনও পর্যন্ত পরীক্ষা করা হয়েছে যা এসআরএনএ-র ট্রান্সক্রিপশন স্টার্ট সাইটের উজানে 120 বিপি পর্যন্ত প্রসারিত একটি ক্রমানুসারে খুব সংরক্ষিত। সমস্ত নিকটতম হোমোলগ লোকিতে স্বীকৃত σ70-নির্ভর প্রোমোটার রয়েছে যা-35/- 10 সর্বসম্মত মোটিফ সিটিটিএজিএসি-এন17-সিটিএটিএটি দেখায়, যা পূর্বে প্রোটিওব্যাকটেরিয়ার α-উপগোষ্ঠীর অন্যান্য বেশ কয়েকটি গণের মধ্যে ব্যাপকভাবে সংরক্ষিত বলে দেখানো হয়েছে। অন্যান্য পরিচিত প্রতিলিপি কারণগুলির জন্য বাঁধাই সাইটগুলি সনাক্ত করতে আমরা রেগপ্রেডিকশন (http://regpredict.lbl.gov/regpredict/help.html) দ্বারা প্রদত্ত ফাস্টা সিকোয়েন্সগুলি ব্যবহার করেছি এবং রেগুলেনডিবি (http://regulondb.ccg.unam.mx) দ্বারা প্রদত্ত অবস্থান ওজন ম্যাট্রিক্সগুলি (পিএসডাব্লুএম) ব্যবহার করেছি। আমরা কনসেনসাস/প্যাটসার প্রোগ্রাম ব্যবহার করে রেগপ্রেডিকশন সিকোয়েন্স থেকে প্রতিটি ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টরের জন্য পিএসডাব্লুএম তৈরি করেছি, প্রতিটি ম্যাট্রিক্সের জন্য 14 থেকে 30 এর মধ্যে মোটিফ দৈর্ঘ্যের জন্য সেরা চূড়ান্ত ম্যাট্রিক্স বেছে নিয়ে একটি প্রান্তিক গড় ই-মান <10ই-10 প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল, (http://gps-tools2.its.yale.edu-এ "থ্রেশহোল্ডড কনসেনসাস" দেখুন)। উপরন্তু, আমরা এমইএমই (http://meme.sdsc.edu/meme4_6_1/intro.html) ব্যবহার করে সংরক্ষিত অজানা মোটিফগুলি অনুসন্ধান করেছি এবং শিথিল নিয়মিত অভিব্যক্তিগুলি ব্যবহার করেছি (অর্থাৎ। প্যাটার্ন ম্যাচিং) সমস্ত এস. এম. আর. 14সি2 হোমোলগ প্রোমোটারদের উপর। এই গবেষণায় লোকির দুটি সুনির্দিষ্ট গোষ্ঠী প্রকাশিত হয়েছে, প্রথমটি নিকটতম হোমোলগ দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয়েছে (চিত্র 5) যা-40 এবং-75 অবস্থানের মধ্যে একটি 26 বিপি দীর্ঘ অঞ্চল উপস্থাপন করেছে, যা সংরক্ষিত এমইএমই মোটিফ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে (চিত্র 5), তবে পরিচিত ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর বাইন্ডিং সাইট ম্যাট্রিক্সের সাথে কোনও উল্লেখযোগ্য মিল প্রতিষ্ঠিত করা যায়নি। αr14 পরিবারের এত ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত নয় এমন সদস্যদের একটি গোষ্ঠী সংরক্ষিত প্রবর্তকদের দ্বিতীয় গোষ্ঠী গঠন করেছিল (চিত্র 6)। তারা একটি ভিন্ন প্রবর্তক অঞ্চল উপস্থাপন করেছে, যা সমস্ত সদস্যদের মধ্যে খুব ভালভাবে সংরক্ষিত এবং একটি অতিরিক্ত অজানা 20 বিপি মোটিফ। জিনোমিক প্রেক্ষাপট αr14 পরিবারের বেশিরভাগ সদস্য ক্রোমোজোমাল আই. জি. আর-এ স্বাধীন প্রবর্তকদের থেকে প্রতিলিপি করা ট্রান্স-এনকোডেড এস. আর. এন. এ। বীজ সারিবদ্ধকরণের সদস্যদের অনেক প্রতিবেশী জিনকে ব্যাখ্যা করা হয়নি এবং এইভাবে আরও ম্যানুয়ালি কিউরেট করা হয়েছিল। সিনোরহিজবিয়াম গ্রুপের জিনোমের ট্যান্ডেম অনুলিপিগুলি (এস. এম. আর. 14সি2, এস. এম. আর. 14সি3, এস. এম. আর. 14সি1, এস. এম. আর. 14সি2, এস. এফ. আর. 14সি1, এস. এফ. আর. 14সি2) একটি সংরক্ষিত জিনোমিক প্রসঙ্গ উপস্থাপন করে। জিনটি আপস্ট্রিম একটি অজানা প্রোটিনের জন্য কোড করা হয়েছে যার মধ্যে DUF1127 ডোমেন রয়েছে এবং জিনটি ডাউনস্ট্রিম একটি ট্রিগার ফ্যাক্টরের জন্য কোড করা হয়েছে। আংশিকভাবে সংরক্ষিত জিনোমিক প্রসঙ্গ, ডিইউএফ1127 প্রোটিন আপস্ট্রিম এবং 5-কেটো-4-ডিঅক্সিউরোনেট আইসোমেরেজ ডাউনস্ট্রিম, রাইজোবিয়াম গ্রুপ আরএলটি1325আর14পি02, আরএলভিআর14পি11, আরএলটি2304আর14পি02, এবং আরইসিআইএটিআর14এ-এর প্লাজমিডিক অনুলিপিগুলির জন্য পাওয়া গেছে। আংশিক জিনোমিক সংরক্ষণের অনুরূপ একটি ঘটনা, ডিইউএফ1127 প্রোটিন আপস্ট্রিম এবং টিআরএনএ (ইউরাসিল-5-)-মিথাইলট্রান্সফেরেজ ডাউনস্ট্রিম, মেসোরিজবিয়াম প্রজাতির ক্ষেত্রে পাওয়া গেছে, যা এম. লোটি (এমএলআর14সি1, এমএলআর14সি2) এবং এম. সিসেরি (এমসিআর14সি1, এমসিআর14সি2)-এর ট্যান্ডেম কপিও উপস্থাপন করেছে। ব্রুসেলা অ্যানথ্রোপি (ওয়ার14সিআইআই2)-এর দ্বিতীয় ক্রোমোজোমের দ্বিতীয় অনুলিপি এবং ব্রুসেলা গ্রুপের প্রথম ক্রোমোজোমের দ্বিতীয় অনুলিপি (বোর14সিআই2, বিসিআর14সিআই2, বিমির14সিআই2, বিএস1330আর14সিআই2, বিএম16এমআর14সিআই1, বিএএস19আর14সিআই2, বিএম23457আর14সিআই1, বিএমইএ _ এ0934, ব্রুএব1 _ 0906, বিএ19941আর14সিআই2)-এর ক্ষেত্রেও একই প্রসঙ্গ পাওয়া গেছে। এই সমস্ত ক্ষেত্রে এস. আর. এন. এ তাদের আই. জি. আর-এ একক অনুলিপি হিসাবে উপস্থিত হয়েছিল। বিএস23445আর14সিআই2, বিমার14সিআই2, এবং আরএলভিআর14সি2 নিম্নমুখী টিআরএনএ (ইউরাসিল-5-)-মিথাইলট্রান্সফেরেজের জন্য জিন কোডিং ভাগ করে নিয়েছে, তবে উপরের দিকে জিন কোডিং ভাগ করে নেয়নি। ফলাফলগুলি আরও দুটি সু-সংরক্ষিত জিনোমিক প্রসঙ্গ দেখিয়েছে। একটি নিকোটিনিক অ্যাসিড মনোনিউক্লিওটাইড অ্যাডেনিলিলট্রান্সফেরেজ আপস্ট্রিমের জন্য জিন কোডিং এবং একটি মলিবডেনাম এ. বি. সি ট্রান্সপোর্টর ডাউনস্ট্রিমের জন্য জিন কোডিং সহ, যা এ. রেডিওব্যাক্টর জিনোম (এ. আর. 14. সি. আই 3) এবং রাইজোবিয়াম গ্রুপের জিনোম (আর. ই. সি. এফ. এন. আর 14. সি 3, আর. এল. টি 1325. আর 14. সি 3, আর. এল. ভি. আর 14. সি 3, আর. এল. টি 2304. আর 14. সি 3)-এ এ. আর 14 পরিবারের তৃতীয় অনুলিপি দ্বারা ভাগ করা হয়। দ্বিতীয় গ্রুপটি ব্রুসেলাস জিনোমের প্রথম ক্রোমোজোমের প্রথম অনুলিপি দ্বারা গঠিত হয় যা একটি এল. আর. জি. বি ঝিল্লি প্রোটিনের জন্য জিন আপস্ট্রিম কোডিং ভাগ করে এবং জিনটি একটি আলফা/বিটা হাইড্রোলেজের জন্য একটি কোডিং ডাউনস্ট্রিম করে। অতিরিক্ত ফাইলঃ অতিরিক্ত ফাইল 1 অতিরিক্ত ফাইল 2 অতিরিক্ত ফাইল 3 অতিরিক্ত ফাইল 4 অতিরিক্ত ফাইল 5 অতিরিক্ত ফাইল 6 অতিরিক্ত ফাইল 7 অতিরিক্ত ফাইল 8 অতিরিক্ত ফাইল 9 অতিরিক্ত ফাইল 10 অতিরিক্ত ফাইল 11 রেফারেন্স আরএনএ