title: Ehdotus: neuvoston asetus tiettyihin teollisuus- ja maataloustuotteisiin sovellettavien yhteisen tullitariffin autonomisten tullien väliaikaisesta suspendoimisesta annetun asetuksen (EY) N:o 1255/96 muuttamisesta

eurovoc_concepts:
CCT duties
agricultural product
industrial product
suspension of customs duties

formats: html pdf

text: EUROOPAN YHTEISÖJEN KOMISSIO Bryssel 25. 04. 2000 KOM(2000) 238 lopullinen Ehdotus NEUVOSTON ASETUS tiettyihin teollisuus- ja maataloustuotteisiin sovellettavien yhteisen tullitariffin autonomisten tullien väliaikaisesta suspendoimisesta annetun asetuksen (EY) N:o 1255/96 muuttamisesta (komission esittämä) PERUSTELUT tullitaloutta Komissio on tämän vuoden ensimmäisen neljänneksen aikana tarkastellut käsittelevän työryhmän avustamana kaikkia esittämiä yhteisen tullitariffin autonomisten tullien väliaikaista suspendoimista koskevia hakemuksia, myös hakemuksia tällä hetkellä voimassa olevien suspensioiden jatkamisesta. jäsenvaltioiden sille Liitteenä oleva ehdotus koskee tiettyjä teollisuus- ja maataloustuotteita. Edellä mainittuja tuotteita koskevia suspensiohakemuksia on tarkasteltu yksipuolisista tullisuspensioista ja autonomisista tariffikiintiöistä annetussa komission tiedonannossa esitettyjen perusteiden mukaisesti (vrt. EYVL C 128, 25. 4. 1998, s. 2). Kyseisen tarkastelun seurauksena komissio katsoo, että tullien suspendointi tai niiden alentaminen on perustelua liitteenä olevan asetusehdotuksen liitteessä I olevien tuotteiden osalta. tuotteet, Tietyt joiden osalta suspension jatkaminen ei ole enää perusteltua yhteisön taloudellisten etujen vuoksi tai jotka on vapautettu tulleista GATT-sopimuksen perusteella, on poistettu ja ne on lueteltu liitteessä II. Tähän asetukseen kuuluu kaksi liitettä, joista toinen on luettelo niistä tuotteista, joiden osalta ehdotetaan suspendoimista tai joiden nimiketekstin (sekä nimikkeistökoodin) muuttaminen on tarpeen, ja toinen niistä tuotteista, jotka on poistettu asetuksen (EY) N:o 1255/96 liitteestä. Asetuksen (EY) N:o 1255/96 liitteessä olevien tiettyjen tuotteiden tavaran kuvauksen muutokset on otettu huomioon seuraavalla tavalla: – – asetuksen nimikkeistökoodin lisääminen liitteeseen II, (EY) N:o 1255/96 liitteessä olevaan tuotteeseen viittaavan muutetun tavarankuvauksen lisääminen liitteeseen I. Ehdotetun toimenpiteen kesto on rajoittamaton, sillä sen tavoitteena on muuttaa neuvoston asetuksen (EY) N:o 1255/96 liite, ja itse asetus on voimassa rajoittamattoman ajan. 2 Ehdotus NEUVOSTON ASETUS tiettyihin teollisuus- ja maataloustuotteisiin sovellettavien yhteisen tullitariffin autonomisten tullien väliaikaisesta suspendoimisesta annetun asetuksen (EY) N:o 1255/96 muuttamisesta EUROOPAN UNIONIN NEUVOSTO, joka ottaa huomioon Euroopan yhteisön perustamissopimuksen ja erityisesti sen 26 artiklan, ottaa huomioon komission ehdotuksen1, sekä katsoo seuraavaa: (1) (2) On yhteisön edun mukaista suspendoida kokonaan tai osittain yhteisen tullitariffin autonomiset tullit asetuksen (EY) N:o 1255/962 liitteeseen kuulumattomien tiettyjen uusien tuotteiden osalta. Tämän asetuksen liitteessä olevasta luettelosta on poistettava tässä asetuksessa tarkoitetut tuotteet, joiden osalta ei enää ole yhteisön edun mukaista jatkaa yhteisen jotka ovat GATT-sopimuksen tullitariffin autonomisten tullien suspendoimista, mukaisesti joiden tavaran kuvausta on tarpeen muuttaa teknisen kehityksen vuoksi. tullittomia tai (3) Selkeyden vuoksi on myös suotavaa pitää uusina tuotteina tuotteita, joiden tavaran kuvausta on tarpeen muuttaa, ON ANTANUT TÄMÄN ASETUKSEN: Muutetaan asetuksen (EY) N:o 1255/96 liite seuraavasti: 1 artikla 1) 2) 1 2 Lisätään tämän asetuksen liitteessä I luetellut tuotteet. Poistetaan tuotteet, joiden koodit luetellaan tämän asetuksen liitteessä II. EYVL L EYVL L 158, 29. 6. 1996, s. 1, asetus sellaisena kuin se on viimeksi muutettuna asetuksella (EY) N:o 20/2000 (EYVL L 8, 12. 1. 2000, s. 1). 3 2 artikla Tämä asetus tulee voimaan kolmantena päivänä sen jälkeen, kun se on julkaistu Euroopan yhteisöjen virallisessa lehdessä. Sitä sovelletaan 1 päivänä heinäkuuta 2000. Tämä asetus on kaikilta osiltaan velvoittava, jäsenvaltioissa. ja sitä sovelletaan sellaisenaan kaikissa Tehty Brysselissä […] päivänä […]kuuta […]. Neuvoston puolesta Puheenjohtaja 4 LIITE I CN-koodi & TARIC Tavaran kuvaus Autonominen tulli (%) 0010 ex0603 90 00 10 ex0604 99 90 10 Kukat, kukannuput, leikkovihreä, lehdet ja muut kasvinosat, ei enempää valmistetut kuin kuivatut, värjätyt tai valkaistut, tarkoitettu käytettäväksi alanimikkeen 3307 49 00 potpuri valmistuksessa (a) 0021 ex1511 90 19 10 ex1511 90 91 10 ex1513 11 10 10 ex1513 19 30 10 ex1513 21 11 10 ex1513 29 30 10 Palmuöljy, käytettäväksi: kookosöljy (kopraöljy), palmunydinöljy, tarkoitettu alanimikkeen 3823 19 10 teollisten monokarboksyylirasvahappojen valmistukseen, alanimikkeen 3824 90 95 rasvahappojen metyyliesterien seosten valmistukseen, nimikkeen 2915 tai 2916 rasvahappojen metyyliesterien valmistukseen tai alanimikkeen 3823 11 00 steariinihapon valmistukseen (a) 0022 ex2837 19 00 20 Kuparisyanidi 0058 ex2907 29 00 60 4,4'-(1,3-Fenyleenidiisopropyyliideeni)difenoli 0064 ex2908 20 00 30 ex3824 90 95 74 6-Hydroksinaftaleeni-2-sulfonihappo ja sen suolat 0130 ex2921 19 80 30 Allyyliamiini 5 0 0 0 0 0 0 - - - - CN-koodi & TARIC Tavaran kuvaus Autonominen tulli (%) 0175bi ex2923 90 00 30 Tetrametyyliammoniumhydroksidipentahydraatti, joka sisältää: enintään 500 mg/kg karbonaattia, enintään 200 mg/kg kloridia ja enintään 5 mg/kg kaliumia 0214 ex2930 90 70 75 4,4'-[Metyleenibis(oksietyleenitio)]difenoli 0215 ex2930 90 70 80 Kaptaani (ISO) 0272 ex2933 69 80 50 1,3,5-Tris(2,3-dibromipropyyli)-1,3,5-triatsinaani-2,4,6-trioni 0300 ex2934 90 96 55 Naft[1,2-d][1,2,3]oksadiatsoli-5-sulfonihappo 0301 ex2934 90 96 60 ex3824 90 95 41 7-Nitronaft[1,2-d][1,2,3]oksadiatsoli-5-sulfonihappo, puhtausaste vähintään 60 painoprosenttia 0333 ex3215 90 80 20 Lämpöherkkä muste kiinnitetty muovikalvolle 0409 ex3824 90 95 75 2,2-Bis[2-(perfluorialkyyli)etyylitiometyyli]propaani-1,3-diolien seoksesta 6 0 0 0 0 0 0 0 0 - - - 0 0 0 0 0 0 CN-koodi & TARIC Tavaran kuvaus Autonominen tulli (%) 0491 ex3904 30 00 20 Vinyylikloridin, polyvinyylikloridi-metalli lämpöliisterin valmistukseen tarkoitettu (a) vinyyliasetaatin maleiinihapon ja kopylomeeri, 0527 ex3907 30 00 40 ex3926 90 99 70 Epoksihartsi, joka sisältää vähintään 70 painoprosenttia piidioksidia, tarkoitettu nimikkeisiin 8533, 8535, 8536, 8541, 8542 tai 8548 kuuluvien tavaroiden kotelointiin (a) 0575 ex3920 42 91 94 Polyvinyylikloridilevyt, joissa on painettu kohokuvio, jollaisia käytetään tekstiilipainotelojen valmistukseen 0590 ex3920 62 19 62 0597 ex3920 62 19 85 0579 ex3920 62 19 88 Polyeteenitereftalaattikalvo, jonka paksuus on enintään 12 µ m, päällystetty puolelta alumiinioksidikerroksella enintään toiselta 35 nm joka on paksuisella Kalvo, jonka kokonaispaksuus on 4,5 µ m (± 0,16 µm) ja joka koostuu biaksiaalisesti jonka kimmokerroin (konesuunnassa) on 12 kg/mm2 (± 2 kg/mm2) ja vetolujuus (konesuunnassa) enemmän kuin 28 kg/mm2, estävästä päällyksestä polyeteenitereftalaattikalvosta, ja tarttumista orientoidusta toiselta Laminaattikalvo, biaksiaalisesti orientoidusta polyeteenitereftalaattikalvosta puolilta koostuva, polyeteenitereftalaattikerroksella tarkoitettu henkilöllisyystodistusten, luottokorttien ja niiden kaltaisten tuotteiden (mukaan lukien “toimikortit”) valmistukseen (a) tai päällystetty, molemmilta puolelta 7 CN-koodi & TARIC Tavaran kuvaus Autonominen tulli (%) 0636 ex4811 21 00 10 Kyllästetty paperi, päällystetty tai peitetty puristusherkällä itseliimautuvalla kerroksella: vetolujuus konesuunnassa on vähintään 2 700 N/m, mutta enintään 3 700 N/m (EN ISO 1924-2 ja ISO 3781 -menetelmällä määritettynä), murtovenymä konesuunnassa on vähintään 1,5 %, mutta enintään 3,0 % (EN ISO 1924-2 ja ISO 3781 -menetelmällä määritettynä) 0673 ex5603 12 90 60 ex5603 13 90 60 Polyeteenikehruukuitukangas, jonka paino on suurempi kuin 60 g/m2 mutta enintään 80 g/m2 ja jonka ilmanläpäisyvastus (Gurley) on vähintään 8 s mutta enintään 36 s (ISO 5636/5-menetelmällä määritettynä) 0689 ex6813 90 90 10 Kitkamateriaali, vaihdelaatikoissa kitkakomponenttityyppien valmistukseen tarkoitettu (a) kuin automaattikytkimissä paksuus ja pienempi 20 mm, asentamaton, käytettyjen 0702 ex7011 20 00 80 Lasikupu yksiväristä katodisädeputkea varten, diagonaalin pituus on vähintään 3,8 cm mutta enintään 51 cm ja jonka kaulan nimellishalkaisija on 13 mm, 20 mm, 29 mm tai 37 mm 0723 ex7613 00 00 20 ex8708 99 98 10 Alumiinisäiliö, saumaton, tiivistettyjä luonnonkaasuja tai tiivistettyä vetyä varten, täysin epoksihiilikuitukomposiitista koostuvan päällysteen peittämä, vetävät 172 l (± 10 %), omapaino enintään 64 kg 0730 ex8104 90 00 20 Profiilit, ekstrudoitua magnesiumia, joiden pituus on vähintään 800 mm mutta enintään 2 900 mm ja leveys on vähintään 15 mm mutta enintään 70 mm 0095 ex8536 50 15 32 Pyörän muotoinen pyörivä kytkin, jonka läpimitta on 1516 mm ja jossa on koskettimia virtapiirin katkaisemista varten, 12 voltin nimellisjännitettä varten ja 50 mA:n virralla 8 0 0 0 0 0 0 0 - - CN-koodi & TARIC Tavaran kuvaus Autonominen tulli (%) 0146 ex8543 89 95 57 Taajuusmuunnin ja joka toimii vähintään 11 V:n mutta enintään 20 V:n syöttöjännitteellä, vähintään 10,7 GHz:n mutta enintään 12,75 GHz:n taajuuksien muuntamiseen vähintään 950 MHz:n mutta enintään 3 GHz:n taajuuksiksi 0167 ex9002 11 00 50 Objektiivi, jonka polttoväli on vähintään 25 mm, mutta enintään 150 mm, ja joka koostuu läpimitaltaan 60 — 190 mm:n lasi- tai muovilinsseistä (a) Erityiskäyttöä on valvottava asiaa koskevien yhteisön säännösten nojalla. 0 0 9 CN-koodi Taric LIITE II ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex 0603 90 00 0604 99 10 0604 99 90 0713 33 90 1511 10 10 1511 90 19 1511 90 91 1513 11 10 1513 19 30 1513 21 11 1513 29 30 2924 10 00 2928 00 90 2934 90 96 2934 90 96 3824 90 95 3905 91 00 3907 30 00 3920 42 91 3920 62 19 3920 62 19 4811 21 00 5002 00 00 8543 89 95 9002 11 00 9002 90 90 10 10 10 20 10 10 10 10 10 10 10 30 30 55 60 41 93 40 94 62 85 10 57 50 10 10 RAHOITUSSELVITYS 1. TOIMENPITEEN NIMI Ehdotus neuvoston asetus tiettyihin teollisuus- ja maataloustuotteisiin sovellettavien yhteisen tullitariffin autonomisten tullien väliaikaisesta suspendoimisesta annetun asetuksen (EY) N:o 1255/96 muuttamisesta. 2. BUDJETTIKOHTA / -KOHDAT Yleisen talousarvion 12 luvun 120 momentti. 3. OIKEUSPERUSTA Euroopan yhteisön perustamissopimuksen 26 artikla. 4. TOIMENPITEEN KUVAUS Yhteisen tullitariffin tullien suspendoiminen kyseisten tuotteiden osalta. 7. RAHOITUSVAIKUTUKSET Aiemmin voimassa olleiden asetusten voimassaoloon liittyneiden taloudellisten ongelmien vähentämiseksi nyt voimassa olevassa neuvoston asetuksessa (EY) N:o 1255/96 ei säädetä sen voimassaolon päättymispäivästä. Tähän ehdotukseen neuvoston asetukseksi sisällytetään ainoastaan ne muutokset, jotka on tehtävä asetuksen liitteeseen, jotta voidaan ottaa huomioon: 1. 2. esitetyt ja hyväksytyt uudet suspendointihakemukset, tuotteiden tekninen kehitys, markkinoiden taloudelliset muutokset ja GATT- sopimus, on tietyt lakkautettava, joiden vaikutuksesta suspensiot voimassa olevat 3. nimikkeistön koodien muutokset. Ainoastaan 1 ja 2 alakohdassa mainituilla muutoksilla on ilmeisiä taloudellisia vaikutuksia. Lisäys: Tässä liitteessä on CN-koodin muutoksesta johtuvien muutosten lisäksi 17 uutta tuotetta. Vastaavista suspensioista syntyy kantamattomien tullien määrä, jonka on hakemuksen esittäneen jäsenvaltion vuoden 2000 arvioidun tuonnin perusteella laskettu olevan 1,5 MEUR. Kuitenkin edeltäviltä vuosilta käytettävissä olevien tilastojen perusteella on käynyt ilmi, että tätä määrää on suurennettava keskiarvoa ilmaisevalla kertoimella, jonka 11 voidaan arvioida olevan 1,8, jotta voitaisiin ottaa huomioon samoja suspensioita soveltavien muiden jäsenvaltioiden tuonti. Toisin sanoen kyseessä on noin 2,7 MEUR suuruinen tulojen menetys. Poisto: Tässä liitteessä poistetaan 6 tuotetta, jotka vastaavat uudelleen kannettuja tulleja ja varojen lisääntymistä 3,1 MEUR suspensiohakemusten tai käytettävissä olevien tilastojen (1998) perusteella määritettynä. Tämänhetkisen toimenpiteen arvioidut kustannukset Tämän asetuksen aiheuttaman vaikutuksen tulojen menetykseen voidaan siis arvioiden ja käytettävissä olevien tilastojen (1998) perusteella olettaa olevan noin 2,7 - 3,1 = -0,4 MEUR, jolloin kokonaismenetys vuonna 2000 olisi arviolta 597,1 - 0,4 = 596,7 MEUR. toisin sanoen tulojen menetys pienenee, Jäsenvaltioiden on rahoitettava perinteisistä omista varoista puuttuvia määriä lisäämällä BKTL-varojen osuutta. 8. PETOSTEN TORJUNTATOIMET neuvoston Tässä yhteisön käyttötarkoitusta komission asetuksen (ETY) N:o 2454/93 291- 304 artiklan mukaisesti. tuotteiden soveltamisesta tullikoodeksin tarkoitettujen asetuksessa valvotaan tiettyjen erityistä annetun 12


title: Smernica Komisie č. 2000/33/ES z 25. apríla 2000, ktorou sa po 27-krát prispôsobuje technickému pokroku smernica Rady č. 67/548/EHS o aproximácii zákonov, iných právnych predpisov a správnych opatrení týkajúcich sa klasifikácie, balenia a označovania nebezpečných látokText s významom pre EHP.

eurovoc_concepts:
analytical chemistry
approximation of laws
chemical product
cytology
toxicology

formats: html pdf print

text: 242 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 32000L0033 8. 6. 2000 ÚRADNÝ VESTNÍK EURÓPSKYCH SPOLOČENSTIEV L 136/90 SMERNICA KOMISIE č. 2000/33/ES z 25. apríla 2000, ktorou sa po 27-krát prispôsobuje technickému pokroku smernica Rady č. 67/548/EHS o aproximácii zákonov, iných právnych predpisov a správnych opatrení týkajúcich sa klasifikácie, balenia a označovania nebezpečných látok (*) (Text s významom pre EHP) KOMISIA EURÓPSKYCH SPOLOČENSTIEV, PRIJALA TÚTO SMERNICU: so zreteľom na Zmluvu o založení Európskeho spoločenstva, Článok 1 so zreteľom na smernicu Rady 67/548/EHS z 27. júna 1967 o aproximácii zákonov, iných právnych predpisov a správnych opatrení týkajúcich sa klasifikácie, balenia a označovania nebez- pečných látok (1), naposledy zmenenú a doplnenú smernicou Európskeho parlamentu a Rady 1999/33/ES (2), najmä na jej člá- nok 28, Príloha V k smernici č. 67/548/EHS stanovuje metódy určovania fyzikálno-chemických vlastností, toxicity a eko- toxicity látok a prípravkov. Túto prílohu je nevyhnutné prispôsobiť technickému pokroku. Podľa článku 7 ods. 2 smernice Rady č. 86/609/EHS z 24. novembra 1986 o aproximácii zákonov, iných práv- nych predpisov a správnych opatrení členských štátov, týkajúcich sa ochrany zvierat, používaných na experimen- tálne a iné vedecké účely (3), experiment na zvieratách sa nevykoná, ak je reálne a prakticky dostupná iná vedecky uspokojivá metóda na dosiahnutie zamýšľaného cieľa. Texty v prílohách I a II k tejto smernici sa pridávajú k časti B prílohy V k smernici č. 67/548/EHS. Článok 2 1. Členské štáty uvedú do účinnosti zákony, iné právne predpisy a správne opatrenia nevyhnutné na dosiahnutie súladu s touto smernicou najneskôr do 1. októbra 2001. Budú o tom bezod- kladne informovať Komisiu. Ustanovenia prijaté členskými štátmi budú obsahovať odkaz na túto smernicu, alebo budú sprevádzané takýmto odkazom pri príležitosti ich úradného uverejnenia. Spôsob vytvorenia takéhoto odkazu určia členské štáty. 2. Členské štáty oznámia Komisii znenie hlavných ustanovení vnútroštátnych právnych predpisov, ktoré prijmú v oblasti pôsob- nosti tejto smernice, a s korelačnou tabuľkou medzi touto smer- nicou a prijatými vnútroštátnymi právnymi predpismi. Článok 3 Táto smernica nadobúda účinnosť tretí deň po jej uverejnení v Úradnom vestníku Európskych spoločenstiev. Komisia má v úmysle zaviesť do prílohy V k smernici č. 67/548/EHS niektoré alternatívne testovacie metódy, nevyžadujúce použitie zvierat pre testovanie chemikálií podľa článku 3 ods. 1 smernice č. 67/548/EHS. Táto smernica je adresovaná členským štátom. Článok 4 V Bruseli 25. apríla 2000 Opatrenia uvedené v tejto smernici sú v súlade so stanovi- skom Výboru pre prispôsobovanie technickému pokroku smerníc, určených na odstraňovanie technických prekážok obchodu s nebezpečnými látkami a prípravkami, Za Komisiu Margot WALLSTRÖM členka Komisie keďže: (1) (2) (3) (4) (*) Prijaté pred 26. úpravou. (1) Ú. v. ES 196, 16. 8. 1967, s. 1. (2) Ú. v. ES L 199, 30. 7. 1999, s. 57. (3) Ú. v. ES L 358, 18. 12. 1986, s. 1. 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 243 PRÍLOHA I „B. 40. LEPTANIE KOŽE 1. METODIKA 1. 1. Úvod Dva in vitro testy na leptanie kože, skúška cezkožného elektrického odporu (TER) na potkanej koži a test s použitím modelu ľudskej pokožky, boli Európskym strediskom pre overovanie alternatívnych metód (ECVAM, Spoločné výskumné stredisko, Európska Komisia) schválené ako vedecky prijateľné (1) (2) (3). Overovacia štúdia ECVAM preukázala, že oba testy dokázali spoľahlivo odlíšiť známe látky leptajúce kožu od neleptajúcich látok. Okrem toho, testovací postup založený na modeli ľudskej pokožky umožnil správne rozlíšenie jednotlivých stupňov žieravých účinkov (známe látky silne leptajúce pokožku s ozna- čením špecifického rizika R35 a iné látky leptajúce pokožku s označením špecifického rizika R34) (2). Sú uvedené popisy a postupy pre oba testy; voľba testu závisí od konkrétnych požiadaviek a preferencií užívateľa. Pozri tiež všeobecný úvod, časť B. 1. 2. Definície Leptanie kože: vznik nezvratného poškodenia kožného tkaniva po aplikácii testovaného materiálu. 1. 3. Referenčné látky Žiadne nie sú určené, ale pozri odseky 1. 5. 3. 4 a 1. 7. 2. 3. 1. 4. Princíp testovacej metódy — skúška TER na potkanej koži Testovaný materiál je aplikovaný na dobu až 24 hodín na epidermálny povrch kožných kotúčov, odo- bratých z kožušín mladých potkanov, usmrtených humánnym spôsobom. Žieraviny sa vyznačujú svo- jou schopnosťou spôsobiť stratu normálnej integrity a ochrannej funkcie rohovitej vrstvy, čo sa pri meraní prejavuje ako zníženie vnútornej TER pod prahovú úroveň (5 kΩ) (4) (5). Dráždivé a nedráždivé materiály neznižujú TER pod túto prahovú úroveň. Pre povrchovo aktívne látky a neutrálne organické látky (definícia pozri (6)) môže byť do testovacieho postupu zahrnutá skúška viazania farbiva na zníže- nie počtu falošných pozitívnych výsledkov získaných špeciálne pri týchto typoch chemikálií (2) (7). 1. 5. Popis testovacej metódy — skúška TER na potkanej koži 1. 5. 1. Zvieratá Na prípravu kožných kotúčov sú potrebné mladé (20-23 dní) potkany (Wistar alebo porovnateľné ple- meno). Dorzálna a bočná srsť je opatrne odstránená malými zvieracími nožnicami. Zvieratá sa následne umyjú opatrným utieraním, pri súčasnom ponorení danej oblasti do antibiotického roztoku (obsahujú- ceho napríklad streptomycín, penicilín, chloramfenikol a amfotericín pri koncentráciách účinných pri potláčaní bakteriálneho rastu). Na tretí alebo štvrtý deň po prvom umytí sa zvieratá opäť umyjú antibio- tikami a do 3 dní sa použijú (zvieratá na prípravu kože nesmú byť staršie ako 31 dní). 1. 5. 2. Príprava kožných kotúčov Zvieratá sa usmrtia humánnym spôsobom. Následne sa odoberie dorzálna koža každého zvieraťa a opatr- ným šúchaním sa zbaví nadbytočného tuku. Kožou sa prekryje koniec polytetrafluoretylénovej (PTFE) trubice, pričom epidermálny povrch musí byť v kontakte s trubicou. Gumený tesniaci krúžok sa zatlačí na koniec trubice, aby držal kožu na mieste, a nadbytočné tkanivo sa odstrihne. Rozmery trubice a tes- niaceho krúžku sú uvedené na obrázku 1. Gumený tesniaci krúžok sa následne vazelínou dôkladne utesní ku koncu PTFE trubice. Trubica je pružinovou svorkou pridržiavaná vo vnútri receptorovej komory, obsahujúcej roztok síranu horečnatého (154 mM) (obrázok 2). 1. 5. 3. Testovací postup 1. 5. 3. 1. A p l i k o v a n i e t e s t o v a n é h o m a t e r i á l u Kvapalné testované látky (150 μl) sa aplikujú na epidermálny povrch vo vnútri trubice (obrázok 2). Pri testovaní tuhých materiálov sa na kožný kotúč aplikuje dostatočné množstvo tuhej látky, aby bol pokrytý celý povrch epidermy. Následne sa k tuhej látke pridá deionizovaná voda (150 μl) a trubicami je potrebné jemne zatriasť. Testované látky by mali mať s kožou maximálny kontakt. Pri niektorých tuhých látkach je možné to dosiahnuť zahriatím na 30 °C, aby sa testovaná látka roztopila, alebo rozdrvením, aby vzni- kol zrnitý materiál alebo prášok. 244 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 Pre každú testovanú látku sa použijú tri kožné kotúče. Testované látky sa aplikujú na 24 hodín (pozri tiež 1. 5. 3. 4). Testovaná látka sa odstráni umytím prúdom vodovodnej vody do 30 °C, až kým nie je možné odstrániť žiaden ďalší materiál. Pri odstraňovaní testovaných látok, ktoré stuhli v trubici, je možné použiť prúd teplej vody približne 30 °C. 1. 5. 3. 2. M e r a n i a T E R TER sa meria s použitím nízkonapäťového zariadenia využívajúceho striedavý prúd (napr. AIM 401 alebo 6401, alebo ekvivalentné). Pred meraním elektrického odporu sa povrchové napätie kože zníži prida- ním dostatočného objemu 70 % etanolu tak, aby bola pokrytá celá epiderma. Po niekoľkých sekundách sa etanol odstráni obrátením trubice. Tkanivo sa následne hydratuje pridaním 3 ml roztoku síranu horeč- natého (154 mM). Elektródy zariadenia sa umiestní na obe strany kožného kotúča s cieľom zmerania odporu v kΩ/kožný kotúč (obrázok 2). Rozmery elektród a dĺžka elektródy, umiestnená pod krokodí- limi svorkami, sú uvedené na obrázku 1. Svorka vnútornej (hrubej) elektródy počas merania odporu spo- číva na vrchu PTFE trubice, aby bolo zaistené, že do roztoku síranu horečnatého je ponorená stále rov- naká dĺžka elektródy. Vonkajšia (tenká) elektróda sa umiestni do vnútra receptorovej komory tak, aby spočívala na dne komory. Vzdialenosť medzi spodkom pružinovej svorky a spodkom PTFE trubice sa zachováva ako konštanta (obrázok 1), pretože vzdialenosť má vplyv na získané hodnoty odporu. Je dôležité uvedomiť si, že ak je nameraná hodnota odporu vyššia ako 20 kΩ, môže to byť spôsobené povlakom testovanej látky na epidermálnom povrchu kožných kotúčov. Je možné pokúsiť sa odstrániť tento povlak napríklad utesnením PTFE trubice palcom chráneným rukavicou a pretrasením trubice asi na 10 sekúnd; roztok síranu horečnatého sa odstráni a meranie odporu sa opakuje s novým roztokom síranu horečnatého. Stredné hodnoty výsledkov TER sú akceptované, ak zároveň platí, že pozitívne aj negatívne kontrolné hodnoty sú v prijateľnom rozpätí pre túto metódu. Odporúčané kontrolné látky a im prislúchajúce pri- jateľné rozpätie odporu pre popísanú metodológiu a prístrojový aparát sú nasledovné: Kontrola Látka Pozitívna Negatívna 10 M kyselina chlorovodíková (36 %) Destilovaná voda Rozpätie odporu (kΩ) 0,5-1,0 10-25 1. 5. 3. 3. U p r a v e n ý p o s t u p p r e p o v r c h o v o a k t í v n e l á t k y a n e u t r á l n e o r g a n i c k é l á t k y Ak hodnoty TER pre testované látky, ktoré sú povrchovo aktívne látky alebo neutrálne organické látky menšie alebo rovnajúce sa 5 kΩ, tkanivá je možné podrobiť skúške prenikania farbiva. Tento postup sta- noví, či pozitívne výsledky sú falošné (2). 1. 5. 3. 3. 1. Aplikácia a odstránenie farbiva sulforodamín B Po úvodnej úprave testovanou látkou sa na epidermálny povrch každého kožného kotúča na dobu 2 hodín aplikuje 150 μl 10 % (w/v) roztoku farbiva sulforodamín B v destilovanej vode. Kožné kotúče sa potom umyjú prúdom vodovodnej vody izbovej teploty alebo nižšej po dobu asi 10 sekúnd, aby sa odstránilo nadbytočné/nenaviazané farbivo. Každý kožný kotúč sa opatrne odoberie z PTFE trubice a umiestni sa do nádobky (napr. 20 ml sklenená scintilačná nádobka), obsahujúcej deionizovanú vodu (8 ml). Nádobky je potrebné opatrne pretriasť po dobu 5 minút, aby sa odstránilo akékoľvek ďalšie nadbytočné/nenaviazané farbivo. Tento premývací postup sa potom opakuje, kožné kotúče sa vyberú a umiestnia do nádobiek, obsahujúcich 5 ml 30 % (w/v) natrium dodecylsulfátu (SDS) v destilovanej vode a cez noc sa inkubujú pri teplote 60 °C. Po inkubácii sa každý kožný kotúč vyberie a odstráni a zostá- vajúci roztok sa na 8 minút umiestni do odstredivky pri teplote 21 °C (relatívna odstredivá sila ˜ 175). Vzorka získaného kalu s objemom 1 ml sa zriedi v pomere 1: 5 (v/v) (napr. 1 ml + 4 ml) s 30 % (w/v) SDS v destilovanej vode. Pri približne 565 nm sa odmeria optická hustota (OD) roztoku. 1. 5. 3. 3. 2. Výpočet obsahu farbiva Obsah farbiva sulforodamín B v kožnom kotúči sa vypočíta z hodnôt OD (molárny koeficient extinkcie farbiva sulforodamín B pri 565 nm = 8,7 × 104; molekulová hmotnosť = 580). Obsah farbiva sulforo- damín B sa určí pre každý kožný kotúč a následne sa pre replikáty vypočíta stredná hodnota obsahu far- biva. Stredné hodnoty výsledkov viazania farbiva sú akceptované, ak zároveň platí, že pozitívne aj nega- tívne kontrolné hodnoty spadajú do prijateľného rozpätia tejto metódy. Odporúčané prijateľné rozpätia obsahu farbiva pre kontrolné látky pre popísanú metodológiua prístrojové vybavenie je nasledovné: 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 245 Kontrola Látka Pozitívna Negatívna 10 M kyselina chlorovodíková (36 %) destilovaná voda Rozpätie obsahu far- biva (μg/kotúč) 40-100 15-35 1. 5. 3. 4. D o d a t o č n é i n f o r m á c i e Testované látky sa môžu aplikovať na kožné kotúče aj na kratší čas (napr. na dve hodiny), čím je možné odlíšiť silne žieravé materiály. V priebehu overovacej štúdie sa však vo viacerých prípadoch zistilo, že pri aplikácii testovaných chemikálií na kožné kotúče na dobu dvoch hodín výsledok skúšky TER nadhod- notil ich žieravosť (2), hoci po 24 hodinovej aplikácii test umožnil správne odlíšenie žieravých a nežie- ravých látok. Vlastnosti a rozmery testovacieho prístroja a použitý experimentálny postup môžu mať vplyv na zís- kané hodnoty TER. Prahová hodnota 5 kΩ na odlíšenie žieravín bola stanovená na základe údajov zís- kaných konkrétnym špecifickým aparátom a postupom, ktoré sú popísané v tejto metóde. Pri podstatnej zmene testovacích podmienok môžu platiť iné prahové a kontrolné hodnoty. Preto sa odporúča meto- dológiu a prahovú hodnotu odporu kalibrovať otestovaním série referenčných štandardných látok z che- mikálií použitých pri overovacej štúdii (3). 1. 6. Princíp testovacej metódy — skúška s modelom ľudskej pokožky Testovaný materiál je zvyčajne aplikovaný až na 4 hodiny na trojrozmernú vzorku ľudskej pokožky obsa- hujúcu rekonštruovanú epidermu s funkčnou rohovitou vrstvou. Žieraviny sa vyznačujú schopnosťou spôsobiť pokles životaschopnosti buniek (ktorá je určovaná napríklad skúškou redukcie MTT) pod defi- nované prahové hodnoty pri stanovených dobách vystavenia. Princíp skúšky je v súlade s hypotézou, že žieravé chemikálie sú tie, ktoré sú schopné preniknúť rohovitou vrstvou (rozpustením alebo rozlepta- ním) a sú dostatočne cytotoxické, aby spôsobili odumretie buniek v podkladových vrstvách buniek. 1. 7. Popis testovacej metódy — skúška s modelom ľudskej pokožky 1. 7. 1. Vzorky ľudskej pokožky Vzorky ľudskej pokožky môžu pochádzať z rôznych zdrojov, musia ale spĺňať isté kritériá. Vzorka musí mať funkčnú rohovitú vrstvu s podkladovou vrstvou živých buniek. Ochranná funkcia rohovitej vrstvy musí byť primeraná. Toto je možné preukázať demonštrovaním odolnosti vzorky voči cytotoxicite po aplikovaní látok, o ktorých je známe, že sú voči bunkám cytotoxické, ale normálne nepreniknú rohovi- tou vrstvou. Musí sa preukázať, že pri definovaných experimentálnych podmienkach sa na vzorke dosa- hujú reprodukovateľné výsledky. Životaschopnosť živých buniek vzorky musí byť dostatočne vysoká, aby bolo možné rozlíšiť pozitívne a negatívne kontrolné látky. Životaschopnosť buniek (meraná napríklad veľkosťou redukcie MTT, t. j. hodnotou OD) po expozícii negatívnou kontrolnou látkou musí byť v rámci prijateľného intervalu pre konkrétnu vzorku. Podobne hodnoty životaschopnosti buniek po expozícii pozitívnou kontrolnou lát- kou (relatívne k hodnotám pre negatívnu kontrolu) musia byť v rámci určeného intervalu. Najdôležitej- ším je, aby použitá predikčná vzorka preukázateľne vyhovovala medzinárodnému overovaciemu štan- dardu (2). 1. 7. 2. Testovací postup 1. 7. 2. 1. Aplikovanie testovaného materiálu Pri kvapalných materiáloch je nutné aplikovať dostatočné množstvo testovanej látky, aby bol pokrytý povrch kože (minimálne 25 μl/cm2. Pri tuhých materiáloch sa musí aplikovať dostatočné množstvo testo- vanej látky, aby bola koža pokrytá a následne je potrebné testovanú látku navlhčiť, aby sa zaistil dobrý kontakt s kožou; kde je to vhodné, tuhé látky by sa mali pred aplikáciou rozomlieť na prášok. Musí sa preukázať, že metóda aplikácie je primeraná pre širokú škálu typov chemikálií (2). Po uplynutí doby expozície testovanou látkou sa testovaný materiál musí opatrne umyť z povrchu kože soľným rozto- kom. 1. 7. 2. 2. M e r a n i e ž i v o t a s c h o p n o s t i b u n i e k Na meranie životaschopnosti buniek sa môže použiť akákoľvek overená kvantitatívna metóda. Najpou- žívanejšou skúškou je redukcia MTT, u ktorej sa v rôznych laboratóriách preukázalo, že poskytuje pre- sné a reprodukovateľné výsledky (2). Kožný kotúč sa umiestni do roztoku MTT 0,3 mg/ml pri 20-28 °C na dobu 3 hodín. Zrazený modrý formazánový produkt sa potom extrahuje (extrakcia rozpúšťadlom) a koncentrácia formazánu sa odmeria stanovením OD pri vlnovej dĺžke medzi 545 nm a 595 nm. 246 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 1. 7. 2. 3. D o d a t o č n é i n f o r m á c i e Použitá kožná vzorka a presná doba expozície a postupy umývania atď. budú mať zásadný dopad na výsledky životaschopnosti buniek. Odporúča sa metodológiu a predikčnú vzorku kalibrovať otesto- vaním série referenčných štandardných látok zvolených z chemikálií použitých pri overovacej štúdii ECVAM (3). Je rozhodujúce, aby sa preukázalo, že použitá metóda je v rámci laboratórií reprodukova- teľná pre širokú škálu chemikálií v súlade s medzinárodnými normami. Metóda by minimálne mala vyho- vovať kritériám pre uvedenú definíciu vedeckej prijateľnosti (2) a výsledky takejto overovacej štúdie sa musia uverejniť v odbornom časopise s odbornou revíziou. 2. ÚDAJE 2. 1. Spracovanie výsledkov 2. 1. 1. Skúška TER na potkanej koži Hodnoty odporu (kΩ) pre testovaný materiál, pozitívne a negatívne kontroly a akékoľvek štandardné refe- renčné chemikálie by sa mali zaznamenávať v tabuľkovej podobe, vrátane údajov pre replikáty/opakované experimenty, stredných hodnôt a odvodenej klasifikácie. 2. 1. 2. Skúška so vzorkou ľudskej pokožky Hodnoty OD a vypočítané percentuálne údaje životaschopnosti buniek pre testovaný materiál, pozitívne a negatívne kontroly, a akékoľvek štandardné referenčné chemikálie, by sa mali zaznamenávať v tabuľ- kovej podobe, vrátane údajov pre replikáty/opakované experimenty, stredných hodnôt a odvodenej kla- sifikácie. 2. 2. Vyhodnocovanie a interpretácia výsledkov 2. 2. 1. Skúška TER na potkanej koži Ak získaná stredná hodnota TER pre testovanú látku je vyššia ako 5 kΩ, látka nie je žieravina. Ak hod- nota TER sa rovná alebo je menšia ako 5 kΩ a testovaná látka nie je povrchovo aktívna látka alebo neutrálna organická látka, ide o žieravinu. Pri povrchovo aktívnych látkach alebo neutrálnych organických látkach, pri ktorých sú získané hodnoty TER 5 kΩ a menšie, je možné uskutočniť skúšku prenikania farbiva. Ak stredný obsah farbiva v kožnom kotúči sa rovná alebo je väčší ako stredný obsah farbiva v kožnom kotúči pri súbežne vykonanej pozi- tívnej kontrole s 36 %-nou HCl, testovaná látka je skutočne pozitívna a teda je žieravá. Ak stredný obsah farbiva v kožnom kotúči je menší ako stredný obsah farbiva v kožnom kotúči pri súbežne vykonanej pozitívnej kontrole s 36 %-nou HCl, testovaná látka je falošne pozitívna a teda nie je žieravá. 2. 2. 2. S k ú š k a s o v z o r k o u ľ u d s k e j p o k o ž k y Hodnota OD negatívnej kontroly predstavuje 100 % životaschopnosť buniek; teda hodnoty OD získané pre každú testovaciu vzorku je možné použiť na výpočet percentuálnej životaschopnosti vo vzťahu voči negatívnej kontrole. Hraničná percentuálna hodnota životaschopnosti buniek slúžiaca na odlíšenie žie- ravých testovaných materiálov od nežieravých (alebo na rozlíšenie medzi jednotlivými triedami žieravín) musí byť v predikčnej vzorke jasne definovaná pred overením metódy a následná overovacia štúdia musí preukázať, že táto hraničná hodnota je primeraná (2). 3. VYKAZOVANIE VÝSLEDKOV Správa z testu Správa z testu musí obsahovať aspoň nasledovné informácie: Testovaná látka: — identifikačné údaje, fyzikálna povaha a kde je to relevantné, fyzikálno-chemické vlastnosti. Podobné informácie by mali byť uvedené pre referenčné látky, ak sú použité. Testovacie podmienky: — podrobnosti o použitom testovacom postupe, — popis a zdôvodnenie akýchkoľvek úprav. 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 247 Výsledky: — tabuľkovo upravené hodnoty odporu (skúška TER) alebo percentuálne hodnoty životaschopnosti buniek (skúška so vzorkou ľudskej kože) pre testovaný materiál, pozitívne a negatívne kontroly a aké- koľvek štandardné referenčné chemikálie, vrátane údajov pre replikáty/opakované experimenty a stredných hodnôt, — popis akýchkoľvek iných pozorovaných účinkov. Diskusia výsledkov. Závery. 4. LITERATÚRA (1) ECVAM (1998), ECVAM News & Views (Novinky a názory ECVAM), ATLA 26, s. 275-280. (2) Fentem, J. H. , Archer, G. E. B. , Balls, M. , Botham, P. A. , Curren, R. D. , Earl, L. K. , Esdaile, D. J. , Holz- hutter, H-G. a Liebsch, M. (1998), The ECVAM international validation study on in vitro tests for skin corrosivity. 2. Results and evaluation by the Management Team (Medzinárodná overovacia štúdia ECVAM pre in vitro testy pre leptanie kože. 2. Výsledky a vyhodnotenie riadiacim tímom), Toxicology in Vitro 12, s. 483-524. (3) Barrat, M. D. , Brantom, P. G. , Fentem, J. H. , Gerner, I. , Walker, A. P. a Worth, A. P. (1998), The ECVAM international validation study on in vitro tests for skin corrosivity. 1. Selection and distribu- tion of the test chemicals (Medzinárodná overovacia štúdia ECVAM pre in vitro testy leptania kože. 1. Výber a rozdelenie testovaných chemikálií), Toxicology in Vitro 12, s. 471-482. (4) Oliver, G. J. A. , Pemberton, M. A. a Rhodes, C. (1986), An in vitro skin corrosivity test — modifica- tions and validation (In vitro test pre leptanie kože — úpravy a overenie), Food & Chemical Toxicology 24, s. 507-512. (5) Botham, P. A. , Hall, T. J. , Dennett, R. , McCall, J. C. , Basketter, D. A. , Whittle, E. , Cheeseman, M. , Esdaile, D. J. a Gardner, J. (1992), The skin corrosivity test in vitro: results of an interlaboratory trial (Test leptania kože in vitro: výsledky medzilaboratórnej skúšky), Toxicology in Vitro 6, s. 191-194. (6) Worth, A. P. , Fentem, J. H. , Balls, M. , Botham, P. A. , Curren, R. D. , Earl, L. K. , Esdaile, D. J. a Liebsch, M. (1998), An evaluation of the proposed OECD testing strategy for skin corrosion (Vyhodnotenie navrhovanej testovacej stratégie OECD pre leptanie kože), ATLA 26, s. 709-720. (7) Botham, P. A. , Chamberlain, M. , Barrat, M. D. , Curren, R. D. , Esdaile, D. J. , Gardner, J. R. , Gordon, V. C. , Hildebrand, B. , Lewis, R. W. , Liebsch, M. , Logemann, P. , Osborne, R. , Ponec, M. , Regnier, J. F. , Stei- ling, W. , Walker, A. P. a Balls, M. (1995). A prevalidation study on in vitro skin corrosivity testing. The report and recommendations of ECVAM workshop 6 (Predbežná overovacia štúdia in vitro tes- tovania leptania kože. Správa a odporúčania seminára ECVAM 6), ATLA 23, s. 219-255. 248 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 Figure 1 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 249 Figure 2 250 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 PRÍLOHA II „B. 41. FOTOTOXICITA –IN VITRO TEST FOTOTOXICITY 3T3 NRU 1. METODIKA 1. 1. Úvod Fototoxicita je definovaná ako toxická reakcia, ktorá je vyvolaná po prvom vystavení kože určitým che- mikáliám a následnej expozícii svetla, alebo ktorá je podobným spôsobom vyvolaná ožiarením kože po systematickom podávaní chemikálie. Informácie získané z in vitro testu fototoxicity 3T3 NRU slúžia na rozpoznanie fototoxického potenciálu testovanej látky, t. j. existencie alebo neprítomnosti možných nebezpečenstiev, ktoré testovaná látka pravdepodobne vyvolá v spojení s vystavením UV a viditeľnému svetlu. Keďže toxikologickým výstupom tohto in vitro testu je určenie fotocytotoxicity, vyvolanej kombinova- ným pôsobením chemikálie a svetla, testom je možné rozpoznať zlúčeniny, ktoré sú fototoxické in vivo po systematickej aplikácii a distribúcii do kože, ako aj zlúčeniny, ktoré sa správajú ako fotodráždivé látky po lokálnej aplikácii na kožu. Tento in vitro test fototoxicity 3T3 NRU bol vyvinutý a overený v spoločnom projekte EU/COLIPA v rokoch 1992-1997 (1) (2) (3), s cieľom vytvoriť prijateľnú in vitro alternatívu k rôznym používaným in vivo testom. V roku 1996 seminár OECD odporučil na stanovovanie fototoxicity testovací prístup in vitro (4). z tohto in vitro testu fototoxicity 3T3 NRU boli porovnávané Výsledky akútnymi fototoxickými/fotodráždivými účinkami in vivo na zvieratách a ľuďoch a bolo preukázané, že test má výbornú predikčnú schopnosť pre tieto účinky. Test nie je určený na predikciu iných nepriaznivých účin- kov, ktoré môžu byť vyvolané kombinovaným pôsobením chemikálie a svetla, napr. fotogenotoxicity, fotoalergie a fotokarcinogénnosti, hoci mnohé chemikálie, vyznačujúce sa týmito konkrétnymi vlastno- sťami, budú v tomto in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU reagovať pozitívne. Okrem toho je potrebné uviesť, že tento test nie je určený na stanovovanie stupňa sily fototoxicity. s Sekvenčný prístup k testovaniu fototoxicity chemikálií je znázornený v dodatku. 1. 2. Definície Intenzita ožiarenia: intenzita ultrafialového (UV) alebo viditeľného svetla dopadajúceho na povrch, meraná vo W/m2 alebo mW/cm2. Dávka svetla: množstvo (= intenzita × čas) ultrafialového (UV) alebo viditeľného žiarenia dopadajúceho na povrch, vyjadrené v jouloch (= W × s) na povrchovú plochu, napr. J/m2 alebo J/cm2. Vlnové pásma UV svetla: vymedzenia odporúčané CIE (Commission Internationale de L’Eclairage) sú nasle- dovné: UVA (315-400 nm), UVB (280-315 nm) a UVC (100 až 280 nm). Používajú sa aj iné vymedze- nia: hranica medzi UVB a UVA sa často nachádza na 320 nm, a UVA je možné rozdeliť na UV-A1 a UV- A2 s hranicou približne na 340 nm. Životaschopnosť buniek: parameter, ktorý meria celkovú aktivitu bunkovej populácie (napr. absorbovanie vitálneho farbiva neutrálna červeň do bunečných lyzozómov), ktorá v závislosti od meraného koneč- ného výsledku a použitej úpravy testu je v korelačnom vzťahu s celkovým počtom a/alebo vitálnosťou buniek. Relatívna životaschopnosť buniek: životaschopnosť buniek, vyjadrená vo vzťahu k negatívnym kontrolám (rozpúšťadlo), ktoré boli robené počas celého testovacieho postupu (buď + UV alebo –UV), ale bez apli- kovania testovanej chemikálie. Predikčná vzorka: algoritmus, slúžiaci na prevod výsledkov testu toxicity do predikcie toxického poten- ciálu. Podľa testovacieho postupu, na prevod výsledkov tohto in vitro testu fototoxicity 3T3 NRU do predikcie fototoxického potenciálu je možné použiť PIF a MPE. PIF (photo irritation factor — koeficient svetelnej dráždivosti): koeficient získaný porovnaním dvoch rovnako účinných cytotoxických koncentrácií (EC50) testovanej chemikálie, zistených za neprítomnosti (-UV) a za prítomnosti (+ UV) necytotoxického ožiarenia UVA/viditeľným svetlom. MPE (mean photo effect — stredný svetelný účinok): nová miera odvodená z matematickej analýzy úplného tvaru dvoch kriviek koncentrácia/účinok, získaných za neprítomnosti (-UV) a za prítomnosti (+ UV) necy- totoxického ožiarenia UVA/viditeľným svetlom. 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 251 Fototoxicita: akútna toxická reakcia, ktorá je vyvolaná po prvej expozícii kože určitými chemikáliámi a následnej expozícii svetlom, alebo ktorá je podobným spôsobom vyvolaná ožiarením kože po syste- matickom podávaní chemikálie. Fotodráždivosť: podmnožina pojmu ‚fototoxicita‘, ktorá sa používa na označenie len tých fototoxických reakcií, ktoré vzniknú po expozícii chemikáliami (lokálne alebo orálne) na koži. Tieto fototoxické reak- cie vždy vedú k nešpecifikovanému poškodeniu buniek (reakcie podobné spáleniu slnkom). Fotoalergia: získaná imunologická reaktivita, ktorá sa neprejavuje po prvej expozícii chemikáliou a svet- lom a pred možnou demonštráciou reaktivity kože je potrebná indukčná doba jeden alebo dva týždne. Fotogenotoxicita: genotoxická reakcia pozorovaná s konečným genetickým výsledkom, ktorá je vyvolaná po expozícii buniek negenotoxickou dávkou UV/viditeľného svetla a negenotoxickou chemikáliou. Fotokarcinogénnosť: karcinogénnosť, spôsobená opakovaným aplikovaním svetla a chemikálie. Výraz ‚foto ko-karcinogenéza‘ sa používa, ak tvorba nádoru vyvolaná UV žiarením je podporená chemikáliou. 1. 3. Referenčné látky Okrem pozitívnej kontrolnej chemikálie chlorpromazín, ktorá by sa mala súbežne testovať pri každej skúške, pri novom zavádzaní testu fototoxicity 3T3 NRU sa odporúča použiť ako referenčné chemikálie podmnožinu chemikálií použitých pri medzilaboratórnych skúškach tohto testu (1) (3) (13). 1. 4. Úvodné úvahy Fototoxické účinky boli zistené u mnohých typov chemikálií (5) (6) (7) (8). Jedinou spoločnou vlastno- sťou je ich schopnosť absorbovať svetelnú energiu v oblasti slnečného svetla. Podľa prvého zákona foto- chémie (Grotthaus-Draperov zákon) si fotoreakcia vyžaduje dostatočnú absorpciu svetelných kvánt. Teda pred prípadným pristúpením k biologickému testovaniu podľa tohto testovacieho postupu by sa malo určiť absorpčné spektrum UV/viditeľného svetla testovanej chemikálie (napr. podľa testovacieho postupu OECD č. 101). Ak molárny koeficient extinkcie/absorpcie činí menej ako 10 litrov × mol-1 × cm-1, che- mikália nemá fotoreaktívny potenciál a nie je potrebné ju testovať týmto in vitro testom fototoxicity 3T3 NRU, ani žiadnym iným biologickým testom na nepriaznivé fotochemické účinky (Dodatok). 1. 5. Princíp testovacej metódy Boli zistené štyri mechanizmy, prostredníctvom ktorých môže absorpcia svetla chromofórom (umelým) mať za následok fototoxickú reakciu (7). Všetky z nich majú za následok poškodenie buniek. Preto in vitro test fototoxicity 3T3 NRU je založený na porovnávaní cytotoxicity chemikálie pri otestovaní za prítom- nosti a za neprítomnosti expozície necytotoxickou dávkou UVA/viditeľného svetla. Cytotoxicita je v tomto teste vyjadrená ako zníženie prenikania vitálneho farbiva neutrálna červeň (NR), v závislosti od koncentrácie testovanej chemikálie (9), 24 hodín po aplikovaní chemikálie a ožiarenia. Bunky Balb/c 3T3 sa udržiavajú v kultúre po dobu 24 hodín, aby sa vytvorili monomolekulové vrstvy. Dve 96-otvorové doštičky na každú testovanú chemikáliu sa potom predinkubujú s ôsmimi rôznymi koncentráciami chemikálie po dobu jednej hodiny. Následne sa jedna z dvoch doštičiek vystaví necyto- toxickej dávke UVA/viditeľného svetla 5 J/cm2 UVA (+ experimentálne UV), zatiaľ čo druhá doštička je uchovávaná v tme (- experimentálne UV). Potom sa v oboch doštičkách testovacie médium nahradí kul- tivačným médiom a po ďalších 24 hodinách inkubácie sa stanoví životaschopnosť buniek prostredníc- tvom prenikania neutrálnej červene (neutral red uptake — NRU) po dobu 3 h Pre každú z ôsmich testo- vaných koncentrácií sa vypočíta relatívna životaschopnosť buniek vyjadrená ako percento negatívnych kontrol. Na predikciu fototoxického potenciálu je potrebné porovnať reakcie koncentrácií za prítomno- sti (+ UV) a za neprítomnosti (-UV) ožiarenia, zvyčajne na úrovni EC50, t. j. pri koncentrácii, ktorá zni- žuje životaschopnosť buniek o 50 % v porovnaní s kontrolnými vzorkami nevystavenými pôsobeniu che- mikálie. 1. 6. Kvalitatívne kritériá UVA citlivosť buniek, historické údaje: mala by sa pravidelne kontrolovať citlivosť buniek voči UVA. Bunky sa nasadia v hustote, aká sa používa pri in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU, ďalší deň sa ožiaria UVA v dávkach 1-9 J/cm2 a o deň neskôr sa určí životaschopnosť buniek s použitím skúšky NRU. Bunky spĺ- ňajú kvalitatívne kritériá, ak ich životaschopnosť po ožiarení 5 J/cm2 UVA nie je nižšia ako 80 % živo- taschopnosti kontrolných vzoriek v tme. Pri najvyššej dávke UVA 9 J/cm2 by životaschopnosť nemala byť nižšia ako 50 % životaschopnosti kontrolných vzoriek v tme. Táto skúška by sa mala opakovať vždy asi po 10 prechodoch buniek. UVA citlivosť negatívnych kontrolných buniek, bežný test: test spĺňa kvalitatívne kritériá, ak negatívne kon- trolné bunky (bunky v Earlovom tlmivom soľnom roztoku (EBSS) s alebo bez 1 % dimetylsulfoxidu (DMSO) alebo 1 % etanolu (EtOH)) pri experimente + UVA nevykazujú životaschopnosť nižšiu ako 80 % životaschopnosti neožiarených buniek v rovnakom roztoku pri súbežnom experimente v tme (-UVA). 252 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 Životaschopnosť negatívnych kontrolných buniek: absolútna optická hustota (OD540 NRU) meraná v extrakte NR negatívnych kontrolných buniek ukazuje, či 1 × 104 buniek nasadených do každého otvoru rástlo s dvojnásobkom času počas dvoch dní skúšky. Test spĺňa akceptačné kritériá, ak stredná hodnota OD540 NRU pre kontrolné bunky nevystavené pôsobeniu chemikálie, činí ≥ 0,2. Pozitívna kontrola: súbežne s každým in vitro testom fototoxicity 3T3 NRU sa otestuje známa fototoxická chemikália. Pri overovacej štúdii EU/COLIPA sa ako pozitívna kontrolná látka použil chlorpromazín (CP- Z), a preto sa odporúča jeho použitie. Pre CPZ testovaný in vitro testom fototoxicity 3T3 NRU pri štan- dardnom testovacom postupe boli stanovené nasledovné akceptačné kritériá: CPZ ožiarený (+ UVA): EC50 = 0,1 až 2,0 μg/ml, CPZ neožiarený (-UVA): EC50 = 7,0 až 90,0 μg/ml. Koeficient svetelnej dráž- divosti (PIF), t. j. posun EC50 by mal byť aspoň 6. Pre súbežné pozitívne kontroly je namiesto CPZ možné použiť aj iné známe fototoxické chemikálie vhodné pre triedu chemikálie alebo charakteristiku rozpustnosti vyhodnocovanej testovacej chemikálie. V tomto prípade by sa na základe historických údajov mali primerane definovať rozpätia hodnôt EC50 a PIF alebo MPE (stredný svetelný účinok) ako akceptačné kritériá pre test. 1. 7. Popis testovacej metódy 1. 7. 1. Prípravy 1. 7. 1. 1. B u n k y Pri overovacej štúdii bola použitá permanentná bunková línia myšacích fibroblastov — Balb/c 3T3, klon 31 — buď z ATCC alebo ECACC a preto sa odporúča jeho použitie. Pri tom istom testovacom postupe je možné úspešne použiť aj iné bunky alebo bunkové línie, ak sú podmienky kultúry prispôsobené špe- cifickým potrebám buniek, je nutné ale preukázať ekvivalentnosť. Bunky by mali byť pravidelne kontrolované na neprítomnosť mykoplazmovej kontaminácie a mali by byť použité len ak sú výsledky takejto kontroly uspokojivé. Keďže UVA citlivosť buniek môže s počtom prechodom stúpnuť, vždy by mali byť použité bunky Balb/c 3T3 s najnižším možným počtom prechodov, podľa možnosti menším ako 100. Je dôležité pravidelne kontrolovať UVA citlivosť buniek Balb/c 3T3 podľa postupu kontroly kvality, popísaného v tejto smer- nici. 1. 7. 1. 2. M é d i á a k u l t i v a č n é p o d m i e n k y Na rutinný prechod buniek a počas testovacieho postupu by sa mali použiť vhodné kultivačné médiá a inkubačné podmienky. Pre bunky Balb/c 3T3 je to DMEM doplnené 10 % sérom z novonarodeného teľaťa, 4 mM glutamínom, penicilínom a streptomycínom; a zvlhčovaná inkubácia pri 37 °C/7,5 % CO2. Zvlášť dôležité je, aby kultivačné podmienky zabezpečili dobu bunkového cyklu v rámci normálneho historického rozpätia pre použité bunky alebo bunkovú líniu. 1. 7. 1. 3. P r í p r a v a k u l t ú r Bunky zo zmrazených zásob kultúr sa nasadia do kultivačného média v primeranej hustote a pred pou- žitím v in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU sa aspoň raz subkultivujú. Na test fototoxicity sa bunky nasadia v kultivačnom médiu v takej hustote, že kultúry nedosiahnu zhluk do konca testu, t. j. do stanovenia životaschopnosti buniek 48 h po nasadení buniek. Pre bunky Balb/c 3T3 v 96-otvorových doštičkách sa odporúča hustota buniek 1 × 104 na každý otvor. Pre každú testovanú chemikáliu sa bunky nasadia rovnakým spôsobom do dvoch samostatných 96-otvorových doštičiek, ktoré sa potom súbežne podrobia celému testovaciemu postupu za rovnakých kultivačných podmienok okrem časového úseku, keď jedna z doštičiek sa ožiari (+ UVA/viditeľné svetlo) a druhá sa uchováva v tme (-UVA/viditeľné svetlo). 1. 7. 1. 4. M e t a b o l i c k á a k t i v á c i a Kedže používanie metabolizujúcich systémov je všeobecnou požiadavkou pre všetky in vitro testy na predikciu genotoxického a karcinogénneho potenciálu, v prípade fototoxikológie nie je zatiaľ známa chemikália, pri ktorej by bola potrebná metabolická premena na to, aby sa správala ako fototoxín in vivo alebo in vitro. Uskutočňovanie tohto testu so systémom metabolickej aktivácie sa teda nepovažuje za potrebné a nie je ani vedecky opodstatnené. 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 253 1. 7. 1. 5. T e s t o v a n á c h e m i k á l i a / p r í p r a v o k Testované chemikálie musia byť čerstvo pripravené tesne pred použitím, s výnimkou prípadov, keď údaje o stabilite dokazujú prijateľnosť skladovania. Ak existuje pravdepodobnosť rýchlej fotodegradácie, je potrebná príprava pri červenom svetle. Testované chemikálie by mali byť rozpustené v tlmivých soľných roztokoch, napríklad v Earlovom tlmi- vom soľnom roztoku (EBSS) alebo v tlmivom soľnom roztoku fosforečnanu (PBS), ktoré musia byť bez proteínových zložiek a indikátorových farbív na určenie pH absorbujúcich svetlo, aby sa predišlo inter- ferencii počas ožarovania. Testované chemikálie s obmedzenou rozpustnosťou vo vode by sa mali rozpustiť vo vhodných rozpú- šťadlách pri 100-násobku požadovanej výslednej koncentrácie a potom zriediť v pomere 1:100 s tlmi- vým soľným roztokom. Ak sa použije rozpúšťadlo, musí byť prítomné vo všetkých kultúrach, t. j. v nega- tívnych kontrolách ako aj vo všetkých koncentráciách testovanej chemikálie v konštantnom objeme 1 % (v/v). Odporúčané rozpúšťadlá sú dimetylsulfoxid (DMSO) a etanol (EtOH). Vhodné môžu byť aj iné rozpú- šťadlá s nízkou cytotoxicitou (napr. acetón), dôsledne by sa však mali posúdiť ich špecifické vlastnosti, napr. reakcia s testovanou chemikáliou, tlmenie fototoxického účinku, zadržiavanie radikálov. Na podporu rozpustnosti je v prípade potreby možné použiť vírivé miešanie a/alebo ultrazvukové vibrá- cie a/alebo zahriatie na 37 °C. 1. 7. 1. 6. U V o ž a r o v a n i e / p r í p r a v a Svetelný zdroj: pri testovaní fototoxicity je najkritickejším faktorom výber vhodného svetelného zdroja a vhodného filtrovania. S fotosenzibilizáciou sa zvyčajne spájajú oblasti UVA a viditeľného svetla (7) (10), zatiaľ čo UVB má menší význam a je priamo vysoko cytotoxické, keď v oblasti 313 až 280 nm sa jeho cytotoxicita zvyšuje až 1 000-násobne (11). Kritériá na výber vhodného svetelného zdroja by mali obsa- hovať základnú požiadavku, že svetelný zdroj vysiela vlnové dĺžky absorbované testovacou chemikáliou, a že dávka svetla (dosiahnuteľná v priebehu primeraného časového úseku) by mala byť dostatočná na roz- poznanie známych fotosenzibilizátorov. Okrem toho, použité vlnové dĺžky a dávky by nemali byť príliš škodlivé pre testovaciu sústavu, čo zahŕňa aj vyžarovanie tepla (infračervená oblasť). Za optimálny svetelný zdroj sa považuje simulácia slnečného svetla solárnymi simulátormi. V solárnych simulátoroch sa používajú xenónové oblúky i (legované) ortuťovo-kovové halogenidové oblúky. Posledné majú tú výhodu, že vyžarujú menej tepla a sú lacnejšie, avšak zhoda so slnečným svetlom nie je doko- nalá. Keďže všetky solárne simulátory vyžarujú nezanedbateľné množstvá UVB, mali by sa vhodne fil- trovať, aby tlmili vysoko cytotoxické vlnové dĺžky UVB. Pri in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU by sa malo použiť spektrum žiarenia prakticky neobsahujúce UVB (UVA:UVB ˜ 1:20). Príklad rozdelenia spektra žiarenia filtrovaného solárneho simulátora použitého pri overovacej štúdii in vitro testu fototoxicity 3T3 NRU bol publikovaný (3). Dozimetria: intenzita svetla (žiarenia) by sa mala pravidelne kontrolovať pred každým testom fototoxicity použitím vhodného širokopásmového UV-merača. Tento UV-merač musí byť kalibrovaný na príslušný zdroj. Fungovanie UV-merača by malo byť kontrolované, a na tento účel sa odporúča používanie dru- hého, referenčného UV-merača rovnakého typu a s rovnakou kalibráciou. V ideálnom prípade by sa v dlhších intervaloch mal na meranie spektrálneho žiarenia filtrovaného svetelného zdroja a na kontrolu kalibrácie širokopásmového UV-merača využívať spektrorádiometer, avšak takéto prístroje si vyžadujú odbornú obsluhu náležite vyškolenými osobami. Pri overovacej štúdii bola dávka 5 J/cm2 (UVA) určená ako necytotoxická pre bunky Balb/c 3T3, a dosta- točne silná na vybudenie aj slabo fototoxických chemikálií. Na dosiahnutie 5 J/cm2 v priebehu 50 minút musí byť žiarenie nastavené na 1,666 MW/cm2. Pri použití inej bunkovej línie alebo iného svetelného zdroja môže byť potrebná dávka UVA mierne upravená pri dodržaní podmienky, že dávka nesmie byť škodlivá pre bunky a musí byť dostatočná na rozpoznanie štandardných fototoxínov. Doba expozície svetlom sa vypočíta nasledovným spôsobom: 1. 7. 2. Testovacie podmienky Maximálna koncentrácia testovanej chemikálie by nemala prekročiť 100 μg/ml, nakoľko všetky fototo- xické chemikálie boli rozpoznané pri nižších koncentráciách, zatiaľ čo pri vyšších koncentráciách sa zvy- šuje výskyt falošne pozitívnych výsledkov (nadhodnotených predpovedí) (13). Hodnota pH najvyššej koncentrácie testovanej chemikálie by mala byť uspokojivá (rozpätie pH: 6,5 — 7,8). 254 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 Rozpätie koncentrácií chemikálie testovanej za prítomnosti (+ UVA) a za neprítomnosti (-UVA) svetla, by sa malo vopred primerane stanoviť v predchádzajúcich experimentoch. Rozpätie postupnosti kon- centrácií a skoky medzi jednotlivými koncentráciami sa upravia tak, aby krivky koncentrácia/účinok boli dostatočne podložené experimentálnymi údajmi. Mal by sa použiť geometrický rad koncentrácií (s kon- štantným koeficientom riedenia). 1. 7. 3. Testovací postup (1) 1. 7. 3. 1. P r v ý d e ň Pripravte bunkovú suspenziu 1 × 1005 buniek/ml v kultivačnom médiu a nadávkujte po 100 μl kulti- vačného média len do okrajových otvorov 96-otvorovej mikrotitračnej doštičky na tkanivové kultúry (= slepé pokusy). Do zostávajúcich otvorov nadávkujte po 100 μl bunkovej suspenzie 1 × 105 buniek/ml (= 1 × 104 buniek/otvor). Pre každú testovanú chemikáliu pripravte dve doštičky: jednu na stanovenie cytotoxicity (-UVA), druhú na stanovenie fotocytotoxicity (+ UVA). Inkubujte bunky po dobu 24 h (7,5 % CO2, 37 °C), až kým nevytvoria polosplývajúcu monomolekulovú vrstvu. Táto doba inkubácia umožňuje obnovu buniek, ich adhéziu a exponenciálny rast. 1. 7. 3. 2. D r u h ý d e ň Po inkubácii odlejte kultivačné médium z buniek a dvakrát omyte so 150 μl EBSS/PBS na každý otvor. Pridajte 100 μl EBSS/PBS obsahujúcich príslušnú koncentráciu testovanej chemikálie alebo len rozpú- šťadlo (negatívna kontrola). Aplikujte osem rôznych koncentrácií testovanej chemikálie. Inkubujte bunky s testovanou chemikáliou v tme po dobu 60 minút (7,5 % CO2, 37 °C). Na uskutočnenie (+ UVA) časti skúšky ožarujte bunky s 1,7 MW/cm2 UVA (= 5 J/cm2 pri izbovej teplote po dobu 50 minút cez veko 96-otvorovej doštičky. Používajte ventilátor, aby sa zabránilo kondenzácii H2O pod vekom. Druhú doštičku (-UVA) uchovajte pri izbovej teplote v tmavej škatuli po dobu 50 min. (= doba expozície UVA). Odlejte testovaný roztok a dvakrát omyte so 150 μl EBSS/PBS. Nahraďte EBSS/PBS kultivačným médiom a inkubujte (7,5 % CO2, 37 °C) cez noc (18-22 h). 1. 7. 3. 3. T r e t í d e ň Mikroskopické vyhodnotenie Preskúmajte bunky pod mikroskopom s fázovým kontrastom. Zaznamenajte zmeny v morfológii buniek vyvolané cytotoxickými účinkami testovanej chemikálie. Táto kontrola sa odporúča na vylúčenie expe- rimentálnych chýb, ale tieto záznamy sa nepoužijú na vyhodnotenie cytotoxicity alebo fotocytotoxicity. Test prenikania neutrálnej červene Omyte bunky so 150 μl predhriateho EBSS/PBS. Odstráňte premývací roztok jemným poklepaním. Pri- dajte 100 μl média NR (neutrálna červeň) a inkubujte pri 37 °C vo zvlhčovanej atmosfére so 7,5 % CO2 po dobu 3 h. Po inkubácii odstráňte médium NR a omyte bunky so 150 μl EBSS/PBS. Odlejte a úplne vysajte EBSS/PBS. (Voliteľné: odstreďujte obrátenú doštičku). Pridajte presne 150 μl roztoku desorbujúceho NR (čerstvo pripravený etanol/kyselina octová). Prudko pretrepte mikrotitračnú doštičku na trepačke mikrotitračných doštičiek po dobu 10 min. , až kým sa NR extrahuje z buniek a vytvorí homogénny roztok. Zmerajte optickú hustotu extraktu NR pri 540 nm v spektrofotometri, s použitím slepých pokusov ako referenčných. Uchovajte údaje na neskoršiu analýzu vo vhodnom formáte súboru (napr. ASCII). 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 255 2. 2. 1. ÚDAJE Kvalita a kvantita údajov Údaje by mali umožňovať zmysluplný rozbor vzťahu koncentrácia/účinok, pozorovaného za prítomno- sti a za neprítomnosti UVA/viditeľného žiarenia. Ak sa zistí cytotoxicita, rozpätie koncentrácií aj skoky medzi jednotlivými koncentráciami by sa mali zvoliť tak, aby umožňovali zostrojenie krivky na základe experimentálnych údajov. Vzhľadom na skutočnosť, že testovaná chemikália nemusí byť pri experimente za tmy (-UVA) až do stanovenej hraničnej koncentrácie 100 μg/ml cytotoxická, avšak po ožiarení (+ UVA) môže byť vysoko cytotoxická, rozpätia koncentrácií určených na otestovanie v oboch častiach experi- mentu sa možno budú musieť rádovo odlišovať, aby sa splnila požiadavka primeranej kvality údajov. Ak sa v oboch častiach pokusu (-UVA a + UVA) nezistí žiadna cytotoxicita, postačujúce je testovanie s veľ- kými skokmi medzi jednotlivými dávkami až po najvyššiu koncentráciu. Overovanie jednoznačného pozitívneho výsledku opakovaným experimentom sa nevyžaduje. Nie je tiež potrebné overovať jednoznačné negatívne výsledky za predpokladu, že chemikália bola testovaná pri dostatočne vysokých koncentráciách. V takýchto prípadoch je postačujúci jeden hlavný experiment podporený jedným alebo viacerými pred- bežnými experimentmi na určenie rozpätia. Testy s hraničnými výsledkami v blízkosti hraničnej hodnoty predikčnej vzorky by sa mali pre overenie zopakovať. Ak je potrebné opakované testovanie, zmena podmienok experimentu môže byť dôležitá na dosiahnutie jednoznačného výsledku. Kľúčovou regulovateľnou veličinou v tomto teste je príprava roztokov testo- vanej chemikálie. Zmena týchto podmienok (pomocné rozpúšťadlo, rozdrvenie, ultrazvukové vibrácie) môže mať teda pri opakovaní testu najväčší význam. Alternatívou je prípadná zmena doby inkubácie pred ožiarením. Pre chemikálie nestále vo vode môže byť vhodná kratšia doba. 2. 2. Spracovanie výsledkov Ak je to možné, stanovuje sa koncentrácia testovanej chemikálie, spôsobujúca 50 % zníženie bunko- vého NRU (EC50). To je možné docieliť použitím vhodného postupu nelineárnej regresie (prednostne Hil- lova funkcia alebo logaritmická regresia) s údajmi o vzťahu koncentrácia/účinok, alebo použitím iných štatistických postupov (14). Pred použitím EC50 v ďalších výpočtoch by sa mala kvalita súladu štatistic- kých pozorovaní s príslušnými hodnotami primerane skontrolovať. Na výpočet EC50 je možné použiť aj grafické štatistické metódy. V takom prípade sa odporúča použitie pravdepodobnostného papiera (stup- nica x: log, stupnica y: probit (= jednotka štatistickej pravdepodobnosti)), keďže v mnohých prípadoch funkcia reakcie na koncentráciu nadobúda po tejto transformácii takmer lineárnu podobu. 2. 3. Vyhodnocovanie výsledkov predikčných vzoriek 2. 3. 1. Predikčná vzorka, verzia 1: koeficient svetelnej dráždivosti (PIF) Po získaní oboch úplných kriviek vzťahu koncentrácia/účinok, teda za prítomnosti (+ UVA) a za neprí- tomnosti (-UVA) svetla, sa pomocou nasledovného vzorca vypočíta koeficient svetelnej dráždivosti (PIF): Hodnota PIF < 5 naznačuje neprítomnosť fototoxického potenciálu, kdežto PIF ≥ 5 naznačuje jeho prí- tomnosť. Ak je chemikália cytotoxická len pri teste + UVA a pri teste –UVA nie je cytotoxická, PIF nie je možné vypočítať, hoci takýto výsledok naznačuje fototoxický potenciál. V takýchto prípadoch je možné vypo- čítať hodnotu ‚> PIF‘. Ak sa test cytotoxicity (-UV) robí až po najvyššiu testovanú koncentráciu (Cmax), táto hodnota sa použije na výpočet ‚> PIF‘: Ak je možné získať len hodnotu ‚> PIF‘, akákoľvek hodnota > 1 naznačuje fototoxický potenciál. Ak ani jednu z hodnôt EC50 (-UV) a EC50 (+ UV) nie je možné vypočítať, nakoľko chemikália až do naj- vyššej testovanej koncentrácie nevykazuje žiadnu cytotoxicitu, naznačuje to neprítomnosť fototoxického potenciálu. V takýchto prípadoch sa na charakterizovanie výsledku použije formálna hodnota ‚PIF = *1‘: 256 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 Ak je možné získať len hodnotu ‚PIF = *1‘, naznačuje to neprítomnosť fototoxického potenciálu. V prípadoch b) a c) by sa koncentrácie, dosiahnuté v in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU, mali pri pred- povedaní fototoxického potenciálu dôsledne vziať do úvahy. 2. 3. 2. Predikčná vzorka, verzia 2: stredný svetelný účinok (MPE) Alternatívou je použitie novej verzie vzorky na predpoveď fototoxického potenciálu, ktorá bola vyvi- nutá s použitím údajov overovacej štúdie EU/COLIPA (15) a testovaná pri slepých pokusoch v následnej štúdii in vitro fototoxicity UV filtračných chemikálií (13). Táto vzorka prekonáva obmedzenie vzorky PIF v prípadoch, kde nie je možné získať EC50. Vzorka používa ‚stredný svetelný účinok‘ (MPE), veličinu zalo- ženú na porovnaní úplných kriviek koncentrácia/účinok. Na aplikovanie vzorky MPE bol na Humbold- tovej univerzite (Berlín) vyvinutý špeciálny počítačový software, ktorý je možné získať bezplatne. 2. 4. Interpretácia výsledkov Pozitívny výsledok v in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU (PIF ≥ 5 alebo MPE ≥ 0,1) naznačuje, že testo- vaná látka má fototoxický potenciál. Ak sa tento výsledok získa pri koncentráciách menších ako 10 μg/ml, testovaná chemikália sa pravdepodobne bude správať ako fototoxín aj za rôznych podmienok ožiarenia in vivo. Ak sa pozitívny výsledok dosiahne len pri najvyššej testovanej koncentrácii 100 μg/ml, na posúdenie rizika alebo nebezpečnosti fototoxicity budú možno potrebné ďalšie informácie. Sem môžu spadať údaje o prenikaní, absorpcii a možnej akumulácii chemikálie v koži, alebo otestovanie chemikálie alternatívnym testom, napr. s použitím in vitro modelu ľudskej pokožky. Negatívny výsledok v in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU (PIF < 5 alebo MPE < 0,1) svedčí o tom, že testo- vaná látka nebola pri použitých podmienkach fototoxická pre kultivované bunky cicavca. V prípadoch, kde sa chemikália mohla testovať až do najvyššej koncentrácie 100 μg/ml, negatívny výsledok naznaču- je, že chemikália nemá fototoxický potenciál, a fototoxicitu in vivo je možné pokladať za nepravdepo- dobnú. V prípadoch, kde boli pri nižších koncentráciách zistené totožné vzťahy medzi koncentráciou a toxicitou (EC50 +UV a EC50 –UV), bude interpretácia údajov rovnaká. Naopak, ak nebola preukázaná žiadna cytotoxicita (+ UV a –UV) a ak rozpustnosť vo vode obmedzila koncentrácie na hodnoty menšie ako 100 μg/ml, kompatibilita testovanej látky a tejto skúšky môže byť spochybniteľná a malo by sa zvá- žiť otestovanie na potvrdenie výsledku (napr. s použitím in vitro vzorky kože, alebo ex vivo vzorky kože, alebo testom in vivo). 3. VYKAZOVANIE VÝSLEDKOV Správa z testu Správa z testu musí obsahovať nasledovné informácie: Testovaná chemikália: — identifikačné údaje a číslo CAS, ak je známe, — fyzikálna povaha a čistota, — fyzikálnochemické vlastnosti, relevantné pre uskutočnenie štúdie, — stabilita a fotostabilita, ak je známa. Rozpúšťadlo: — zdôvodnenie výberu rozpúšťadla, — rozpustnosť testovanej chemikálie v tomto rozpúšťadle, — percentuálny obsah rozpúšťadla v pôsobiacom médiu (EBSS alebo PBS). Bunky: — typ a zdroj buniek, — neprítomnosť mykoplazmy, — počet prechodov buniek, ak je známy, — UVA citlivosť buniek, stanovená ožarovacím vybavením, použitým v in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU. Testovacie podmienky a) — inkubácia pred a po expozícii chemikáliou: — typ a zloženie kultivačného média, — inkubačné podmienky (koncentrácia CO2, teplota, vlhkosť), — doba trvania inkubácie (predúprava, dodatočná úprava). 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 257 Testovacie podmienky b) — pôsobenie chemikálie: — zdôvodnenie výberu koncentrácií testovanej chemikálie, použitých za prítomnosti aj za neprítom- nosti UV/viditeľného žiarenia, — v prípade obmedzenej rozpustnosti testovanej chemikálie a neprítomnosti cytotoxicity, zdôvodne- nie najvyššej testovanej koncentrácie, — typ a zloženie testovacieho média (tlmivý soľný roztok), — doba pôsobenia chemikálie. Testovacie podmienky c) — ožiarenie: — zdôvodnenie výberu použitého svetelného zdroja, — spektrálna charakteristika žiarenia svetelného zdroja, — transmisná/absorpčná charakteristika použitého filtra (filtrov), — charakteristika rádiometra a podrobnosti o jeho kalibrácii, — vzdialenosť svetelného zdroja od testovacej sústavy, — ožiarenie UVA pri tejto vzdialenosti, vyjadrené v mW/cm2, — doba vystavenia UV/viditeľnému svetlu, — dávka UVA (ožiarenie × čas), vyjadrená v J/cm2, — teplota bunkových kultúr počas ožarovania, a bunkových kultúr súbežne uchovávaných v tme. Testovacie podmienky d) — test NRU: — zloženie média NR, — doba inkubácie NR, — inkubačné podmienky (koncentrácia CO2, teplota, vlhkosť), — podmienky extrakcie NR (extrahovaná látka, doba trvania), — vlnová dĺžka použitá na spektrofotometrické zistenie optickej hustoty NR, — druhá vlnová dĺžka (referenčná), ak sa použije, — slepý pokus spektrofotometra, ak sa použije. Výsledky: — hodnoty životaschopnosti buniek, zistené pri každej koncentrácii testovanej chemikálie, vyjadrené v percentách zo strednej životaschopnosti kontrolných buniek, — krivky koncentrácia/účinok (koncentrácia testovanej chemikálie v závislosti od relatívnej životaschop- nosti buniek), získané pri súbežných experimentoch (+ UVA) a (–UVA), — rozbor údajov kriviek koncentrácia/účinok: ak je to možné, odhad/výpočet EC50 (+ UVA) a EC50 (-UVA), — porovnanie oboch kriviek koncentrácia/účinok, získaných za prítomnosti a za neprítomnosti UVA/viditeľného žiarenia, buď vypočítaním koeficientu svetelnej dráždivosti (PIF), alebo vypočíta- ním stredného svetelného účinku (MPE), — klasifikácia fototoxického potenciálu, — akceptačné kritériá testu a) — súbežná negatívna kontrola: — absolútna životaschopnosť (optická hustota extraktu NR) ožiarených a neožiarených buniek, — historické údaje negatívnej kontroly, stredná hodnota a štandardná odchýlka. — akceptačné kritériá testu b) — súbežná pozitívna kontrola: — EC50 (+ UVA) a EC50 (-UVA) a PIF pozitívnej kontrolnej chemikálie, — historické údaje pozitívnej kontrolnej chemikálie: EC50 (+ UVA) a EC50 (-UVA) a PIF, stredná hod- nota a štandardná odchýlka Diskusia výsledkov. Závery. 258 SK Úradný vestník Európskej únie 13/zv. 25 4. LITERATÚRA (1) Spielmann, H. , Balls, M. , Döring, B. , Holzhütter, H. G. , Kalweit, S. , Klecak, G. , L’Eplattenier, H. , Liebsch, M. , Lovell, W. W. , Maurer, T. , Moldenhauer, F. , Moore, L. , Pape, W. , Pfannbecker, U. , Potthast, J. , De Silva, O. , Steiling, W. a Willshaw, A. (1994), EEC/COLIPA project on in vitro phototoxicity testing: First results obtained with a Balb/c 3T3 cell phototoxicity assay (Projekt EHS/COLIPA v oblasti tes- tovania fototoxicity in vitro: Prvé výsledky získané so skúškou fototoxicity na bunkách Balb/c 3T3), Toxicology in Vitro 8, s. 793-796. (2) Anon (1998), Statement on the scientific validity of the 3T3 NRU PT test (an in vitro test for photo- toxicity) (Správa o vedeckej prijateľnosti testu 3T3 NRU PT (in vitro test na zisťovanie fototoxicity)), Európska Komisia, Spoločné výskumné stredisko: ECVAM a DGXI/E/2, 3. november 1997, ATLA 26, s. 7-8. (3) (4) (5) (6) (7) Spielmann, H. , Balls, M. , Dupuis, J. , Pape, W. J. W. , Pechovitch, G. , De Silva, O. , Holzhütter, H. G. , Clothier, R. , Desolle, P. , Gerberick, F. , Liebsch, M. , Lovell, W. W. , Maurer, T. , Pfannenbecker, U. , Potthast, J. M. , Csato, M. , Sladowski, D. , Steiling, W. a Brantom, P. (1998), EU/COLIPA ‚In vitro pho- totoxicity‘ validation study, results of phase II (blind trial), part 1: the 3T3 NRU phototoxicity test (Overovacia štúdia EU/COLIPA ‚Fototoxicita in vitro‘, výsledky fázy II (slepá skúška), časť 1: test foto- toxicity 3T3 NRU), Toxicology in Vitro 12, s. 305-327. Program OECD pre testovacie postupy, ENV/MC/CHEM/TG(96)9: Final Report of the OECD Works- hop on Harmonisation of Validation and Acceptance Criteria of Alternative Toxicological Test Methods (Záverečná správa seminára OECD o harmonizácii overovania a akceptačných kritérií alter- natívnych toxikologických testovacích metód), OECD Publications Office, Paríž, 1996. Lovell, W. W. (1993), A scheme for in vitro screening of substances for photoallergical potential (Po- stup pre in vitro skúmanie látok z hľadiska fotoalergického potenciálu, Toxicology in Vitro 7, s. 95- 102. Santamaria, L. a Prino, G. (1972), List of the photodynamic substances, Research progress in organic, biological and medicinal chemistry (Zoznam fotodynamických látok, Napredovanie výskumu v obla- sti organickej, biologickej a lekárskej chémie) zväzok 3, časť 1, North Holland Publishing Co, Amster- dam, s. XI-XXXV. Spielmann, H. , Lovell, W. W. , Hölzle, E. , Johnson, B. E. , Maurer, T. , Miranda, M. A. , Pape, W. J. W. , Sapora, O. a Sladowski, D. (1994), In vitro phototoxicity testing: The report and recommendations of ECVAM workshop 2 (Testovanie fototoxicity in vitro: Správa a odporúčania seminára ECVAM č. 2), ATLA 22, s. 314-348. (8) Spikes, J. D. (1989), Photosensitization, The science of photobiology, edited by KC Smith (Fotosenzibi- lizácia, Fotobiológia, redigované KC Smithom), Plenum Press, New York, 2. vydanie, s. 79-110. (9) Borenfreund, E. a Puerner, J. A. (1985), Toxicity determination in vitro by morphological alterations and neutral red absorption (Stanovovanie toxicity in vitro pomocou morfologických zmien a absorp- cie neutrálnej červene), Toxicology Letters 24, s. 119-124. (10) Lambert, L. A. , Warner, W. G. a Kornhauser, A. (1996), Animal models for phototoxicity testing, Der- matotoxicology, edited by FN Marzulli and HI Maibach (Živočíšne modely na testovanie fototoxicity, Dermatotoxikológia, redigované FN Marzullim a HI Maibachom), Taylor & Francis, Washington DC, 5. vydanie, s. 515-530. (11) Tyrell, R. M. a Pidoux, M. (1987), Action spectra for human skin cells: estimates of the relative cyto- toxicity of the middle ultraviolet, near ultraviolet and violet regions of sunlight on epidermal kerati- nocytes (Spektrá vplyvu na bunky ľudskej kože: odhady relatívnej cytotoxicity strednej ultrafialovej, blízkoultrafialovej a fialovej oblasti slnečného svetla na epidermálne keratínocyty), Cancer Research 47, s. 1825-1829. (12) ZEBET/ECVAM/COLIPA, Standard Operating Procedure: Balb/c 3T3 NRU Phototoxicity Test (Štan- dardný pracovný postup: Test fototoxicity Balb/c 3T3 NRU), vypracované 23. decembra 1997 M. Liebschom a schválené 6. marca 1998 riadiacim tímom projektu EU/COLIPA ‚In vitro Photoirritati- on‘. (13) Spielmann, H. , Balls, M. , Dupuis, J. , Pape, W. J. W. , De Silva, O. , Holzhütter, H. G. , Gerberick, F. , Liebsch, M. , Lovell, W. W. a Pfannenbecker (1998), A Study on the Phototoxic Potential of UV Filter Chemicals from Annex VII of the EU Directive 76/768/EEC in the 3T3 NRU In vitro Phototoxicity Test (Štúdia o fototoxickom potenciále UV filtračných chemikálií z Prílohy VII smernice EU 76/768/EHS v in vitro teste fototoxicity 3T3 NRU), ATLA 26, s. 679-708. (14) Holzhütter, H. G. a Quedenau, J. (1995), Mathematical modelling of cellular responses to external sig- nals (Matematické modelovanie reakcií buniek na externé podnety), Journal of Biological Systems 3, s. 127-138. (15) Holzhütter, H. G. (1997), A general measure of in vitro phototoxicity derived from pairs of dose- response curves and its use for predicting the in vivo phototoxicity of chemicals (Všeobecná miera fototoxicity in vitro, odvodená z dvojíc kriviek dávka/účinok, a jej použitie na predikciu fototoxicity chemikálií in vivo), ATLA 25, s. 445-462. 13/zv. 25 SK Úradný vestník Európskej únie 259 PRÍLOHA II (1) Prijaté pred 26. úpravou. “


title: Vorschlag für eine Verordnung des Rates zur Änderung der Verordnung (EG) Nr. 603/1999 des Rates zur Einführung eines endgültigen Antidumpingzolls auf die Einfuhren von Binde- oder Pressegarnen aus Polypropylen mit Ursprung in Polen, der Tschechischen Republik und Ungarn und zur endgültigen Vereinnahmung des vorläufigen Zolls

eurovoc_concepts:
anti-dumping duty
import
manufactured goods
originating product
plastics

text: KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN Brüssel, den 25. 04. 2000 KOM(2000) 235 endgültig Vorschlag für eine VERORDNUNG DES RATES zur Änderung der Verordnung (EG) Nr. 603/1999 des Rates zur Einführung eines endgültigen Antidumpingzolls auf die Einfuhren von Binde- oder Pressegarnen aus Polypropylen mit Ursprung in Polen, der Tschechischen Republik und Ungarn und zur endgültigen Vereinnahmung des vorläufigen Zolls (von der Kommission vorgelegt) 1. 2. 3. 4. BEGRÜNDUNG Mit der Verordnung (EG) Nr. 603/1999 führte der Rat endgültige Antidumpingzölle auf die Einfuhren von Binde- oder Pressengarnen aus Polypropylen mit Ursprung unter anderem in Polen ein; die Zölle galten nicht für die von dem Unternehmen WKI Isoliertechnik Spolka z. o. o hergestellten, direkt an einen Einführer in der Gemeinschaft ausgeführten und diesem in Rechnung gestellten Waren, da die Kommission mit dem Beschluß Nr. 1999/215/EG eine individuelle Preisverpflichtung dieses Unternehmens annahm. jetzt wegen Das Unternehmen Schwierigkeiten bei der Erfüllung bestimmter darin festgelegter Auflagen zurück. diese Verpflichtung nahm jedoch Daher wird vorgeschlagen, die diesem Unternehmen gewährte Befreiung von den Antidumpingzöllen mit der beigefügten Verordnung aufzuheben. Übermittelt wird parallel zu dieser Verordnung auch ein Vorschlag für einen Beschluß über die Änderung der Liste der Unternehmen, von denen in dem genannten Verfahren Verpflichtungsangebote angenommen wurden. 2 Vorschlag für eine VERORDNUNG DES RATES zur Änderung der Verordnung (EG) Nr. 603/1999 des Rates zur Einführung eines endgültigen Antidumpingzolls auf die Einfuhren von Binde- oder Pressegarnen aus Polypropylen mit Ursprung in Polen, der Tschechischen Republik und Ungarn und zur endgültigen Vereinnahmung des vorläufigen Zolls DER RAT DER EUROPÄISCHEN UNION - gestützt auf den Vertrag zur Gründung der Europäischen Gemeinschaft, gestützt auf die Verordnung (EG) Nr. 384/96 des Rates vom 22. Dezember 1995 über den Schutz gegen gedumpte Einfuhren aus nicht zur Europäischen Gemeinschaft gehörenden Ländern1, zuletzt geändert mit der Verordnung (EG) Nr. 905/982 vom 27. April 1998, insbesondere auf Artikel 8 Absatz 9 und Artikel 9, auf Vorschlag der Kommission nach Konsultationen im Beratenden Ausschuß, in Erwägung nachstehender Gründe: A. VORAUSGEGANGENES VERFAHREN (1) (2) (3) 1 2 3 4 5 Im Rahmen eines Verfahrens, das durch die Veröffentlichung einer Europäischen entsprechenden Bekanntmachung Gemeinschaften3 eingeleitet wurde, führte der Rat mit der Verordnung (EG) Nr. 603/19994 endgültige Antidumpingzölle auf die Einfuhren von Binde- oder Pressengarne aus Polypropylen mit Ursprung in Polen, der Tschechischen Republik und Ungarn ein. im Amtsblatt der Im Rahmen dieses Verfahrens nahm außerdem die Kommission mit dem Beschluß Nr. 1999/215/EG vom 16. März 19995 eine unter anderem von dem Isoliertechnik Spolka z. o. o (nachstehend polnischen Unternehmen WKI "Unternehmen" genannt) angebotene Preisverpflichtung an. B. RÜCKNAHME DER VERPFLICHTUNG Das Unternehmen Schwierigkeiten bei Anforderungen zurück. nahm jedoch diese Verpflichtung der Erfüllung bestimmter darin jetzt wegen festgelegter ABl. L 56 vom 6. 3. 1996, S. 1. ABl. L 128 vom 30. 4. 1998, S. 18. ABl. C 1 vom 3. 1. 1998, S. 10. ABl. L 75 vom 20. 3. 1999, S. 1. ABl. L 75 vom 20. 3. 1999, S. 34. 3 (4) (5) (6) (7) (8) Deshalb sollte die diesem Unternehmen gewährte Befreiung von den Antidumpingzöllen aufgehoben werden, und es sollten gemäß Artikel 8 Absatz 9 und Artikel 9 der Verordnung (EG) Nr. 384/96 endgültige Zölle eingeführt werden. C. ENDGÜLTIGE ZÖLLE Die Untersuchung, die zu dem Verpflichtungsangebot des Unternehmens führte, wurde mit einer endgültigen Feststellung über das Vorliegen von Dumping und Schädigung durch die Verordnung (EG) Nr. 603/1999 beendet. Gemäß Artikel 8 Absatz 9 der Verordnung (EG) Nr. 384/96 ist daher der Antidumpingzoll, der nun für das Unternehmen eingeführt wird, auf der Grundlage der Feststellungen im Rahmen der Untersuchung festzusetzen, die zu der Verpflichtung geführt hat. Angesichts der Feststellungen unter den Randnummern 15, 71 und 75 der Verordnung (EG) Nr. 603/1999 wird daher ein Wertzoll von 15,7 % als angemessen angesehen. D. ÄNDERUNG DER VERORDNUNG (EG) Nr. 603/1999 Aus diesen Gründen sollte die Verordnung (EG) Nr. 603/1999 dahingehend geändert werden, daß das Unternehmen aus der Liste der Unternehmen gestrichen wird, die von dem Antidumpingzoll auf die Einfuhren von Binde- oder Pressengarnen aus Polypropylen mit Ursprung unter anderem Polen befreit sind, und daß für dieses Unternehmen ein endgültiger Antidumpingzoll von 15,7 % eingeführt wird. Parallel zu dieser Verordnung ändert die Kommission den Beschluß Nr. 1999/215/EG mit das Unternehmen denen Verpflichtungsangebote angenommen wurden - dem Beschluß Liste /EG6 Unternehmen, streicht von 2000/ der (cid:1)(cid:1)(cid:1) von und der HAT FOLGENDE VERORDNUNG ERLASSEN: Artikel 1 Artikel 1 Absatz 2 der Verordnung (EG) Nr. 603/1999 erhält folgende Fassung: 2. Auf den Nettopreis frei Grenze der Gemeinschaft, unverzollt, der von den nachstehend aufgeführten Unternehmen hergestellten Waren finden folgende endgültige Zollsätze Anwendung: Land Unternehmen Zollsatz (%) 17,2 16,3 Polen BZLP Bezalin PAT Defalin s. a. 6 ABl. L [Nummer] vom [Datum], S. [Seite]. 4 Taric- Zusatzcode 8450 8569 Industrial Chemistry Research Institute Terplast sp z. o. o. WKI Isoliertechnik Spolka z. o. o. Alle anderen Unternehmen Tschechische Republik Alle Unternehmen Ungarn Alle Unternehmen 12,8 6,1 15,7 20,3 24,8 32,9 8578 8579 A091 8900 8900 8900 Artikel 2 Artikel 2 Absatz 2 der Verordnung (EG) Nr. 603/1999 erhält folgende Fassung: Die Einfuhren im Rahmen der angenommenen Verpflichtungsangebote 2. werden unter folgenden Taric-Zusatzcodes angemeldet: Land Unternehmen Tschechische Republik Juta a. s. Lanex a. s. Ungarn Partium ’70 Rt Tiszai Vegyi Kombinat Rt Elso Magyar Kenderfono Rt Artikel 3 Taric- Zusatzcode 8596 8580 8581 8582 8583 Diese Verordnung tritt am Tag nach ihrer Veröffentlichung im Amtsblatt der Europäischen Gemeinschaften in Kraft. Diese Verordnung ist in allen ihren Teilen verbindlich und gilt unmittelbar in jedem Mitgliedstaat. Geschehen zu Brüssel am Im Namen des Rates Der Präsident 5


text: COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE Bruxelles, 25. 04. 2000 COM(2000) 238 definitivo Proposta di REGOLAMENTO DEL CONSIGLIO che modifica il regolamento (CE) n. 1255/96 recante sospensione temporanea dei dazi autonomi della tariffa doganale comune per taluni prodotti industriali e agricoli (presentata dalla Commissione) RELAZIONE Durante il primo trimestre di quest’anno, la Commissione, coadiuvata dal Gruppo “Economia tariffaria”, ha esaminato tutte le richieste di sospensione temporanea dei dazi autonomi della tariffa doganale comune presentate dagli Stati membri, comprese le richieste di rinnovo delle sospensioni attualmente in vigore. La proposta allegata riguarda determinati prodotti industriali e agricoli. Le richieste di sospensione relative ai prodotti di cui sopra sono state esaminate in base ai criteri indicati nella comunicazione della Commissione in materia di sospensioni e di contingenti tariffari autonomi (cfr. GU C 128 del 25. 4. 1998, pag. 2). In seguito a detto esame, la Commissione ritiene giustificata la sospensione o la riduzione dei dazi per i prodotti indicati nell’allegato I della presente proposta di regolamento. Taluni prodotti, per i quali il mantenimento della sospensione non sia più giustificato nei confronti degli interessi economici della Comunità o che sono esenti da dazi a seguito dell'accordo GATT, sono stati eliminati e sono elencati nell’allegato II. Il presente regolamento, infatti, comporta due allegati che contengono, rispettivamente, l’elenco dei prodotti per i quali si propone una sospensione, o la cui designazione (compreso il codice della nomenclatura) è stata modificata, e l’elenco dei prodotti eliminati dall’allegato del regolamento (CE) n. 1255/96. Si è tenuto conto nel modo seguente delle modifiche, rivelatesi necessarie, della designazione di alcuni prodotti indicati in allegato al regolamento n. 1255/96: – – aggiunta del codice della nomenclatura del prodotto (indicato in allegato al regolamento n. 1255/96) nell’allegato II, aggiunta della nuova descrizione modificata del prodotto nell’allegato I. La durata della misura proposta è indeterminata in quanto modifica l’allegato del regolamento (CE) n. 1255/96 del Consiglio, anch’esso valido a tempo indeterminato. 2 Proposta di REGOLAMENTO DEL CONSIGLIO che modifica il regolamento (CE) n. 1255/96 recante sospensione temporanea dei dazi autonomi della tariffa doganale comune per taluni prodotti industriali e agricoli IL CONSIGLIO DELL'UNIONE EUROPEA, visto il trattato che istituisce la Comunità europea, in particolare l'articolo 26, vista la proposta della Commissione1, considerando quanto segue: (1) (2) i dazi E nell’interesse della Comunità sospendere, autonomi della tariffa doganale comune per un certo numero di prodotti nuovi, che non figurano nell’allegato del regolamento (CE) n. 1255/962. totalmente o parzialmente, I prodotti oggetto di detto regolamento, per i quali la Comunità non ha più interesse a mantenere la sospensione dei dazi autonomi della tariffa doganale comune, che sono esenti da dazi a seguito dell'accordo GATT o di cui occorre modificare la designazione in funzione degli sviluppi tecnici, devono essere eliminati dall’elenco ad esso allegato. (3) Per motivi di chiarezza, si devono quindi considerare nuovi i prodotti di cui occorre modificare la designazione. HA ADOTTATO IL PRESENTE REGOLAMENTO: Articolo 1 L’allegato del regolamento (CE) n. 1255/96 è modificato come segue: 1) 2) i prodotti elencati nell’allegato I del presente regolamento sono inseriti. i prodotti i cui codici sono elencati nell’allegato II del presente regolamento sono soppressi. Il presente regolamento entra in vigore il giorno terzo successivo alla pubblicazione nella Gazzetta ufficiale delle Comunità europee. Articolo 2 1 2 GU L GU L 158 del 29. 6. 1996, pag. 1 Regolamento modificato da ultimo dal regolamento (CE) n. 20/2000 (GU L 8 del 12. 1. 2000, pag. 1). 3 Esso è applicabile a decorre dal 1° luglio 2000. Il presente regolamento è obbligatorio in tutti i suoi elementi e direttamente applicabile in ciascuno degli Stati membri. Fatto a Bruxelles, il […] Per il Consiglio Il Presidente 4 ALLEGATO I Codice NC & TARIC Designazione delle merci Aliquota dei dazi autonomi (%) 0010 ex0603 90 00 10 ex0604 99 90 10 Fiori, boccioli di fiori, fogliame, foglie e altre parti di piante, non altrimenti preparati che essiccati, tinti o imbianchiti, destinati ad essere utilizzati nella fabbricazione di pot-pourri della sottovoce 3307 49 00 (a) 0021 ex1511 90 19 10 ex1511 90 91 10 ex1513 11 10 10 ex1513 19 30 10 ex1513 21 11 10 ex1513 29 30 10 Olio di palma, olio di cocco (olio di copra), olio di palmisti, destinati alla fabbricazione di: acidi grassi monocarbossilici industriali della sottovoce 3823 19 10, miscele di esteri metilici di acidi grassi della sottovoce 3824 90 95, esteri metilici di acidi grassi delle voci 2915 o 2916 o acido stearico della sottovoce 3823 11 00 (a) 0022 ex2837 19 00 20 Cianuro di rame 0058 ex2907 29 00 60 4,4'-(1,3-Fenilendiisopropiliden)difenolo 0064 ex2908 20 00 30 ex3824 90 95 74 Acido 6-idrossinaftalen-2-solfonico e suoi sali 0130 ex2921 19 80 30 Allilammina 0 0 0 0 0 0 5 - - - - Codice NC & TARIC Designazione delle merci Aliquota dei dazi autonomi (%) 0175bi ex2923 90 00 30 Idrossido di tetrametilammonio pentaidrato, contenente: 500 mg/kg o meno di carbonato, 200 mg/kg o meno di cloruro e 5 mg/kg o meno di potassio 0214 ex2930 90 70 75 4,4'-[Metilenbis(ossietilentio)]difenolo 0215 ex2930 90 70 80 Captano (ISO) 0272 ex2933 69 80 50 1,3,5-Tris(2,3-dibromopropil)-1,3,5-triazinan-2,4,6-trione 0300 ex2934 90 96 55 Acido nafto[1,2-d][1,2,3]ossadiazol-5-solfonico 0301 ex2934 90 96 60 ex3824 90 95 41 Acido 7-nitronafto[1,2-d][1,2,3]ossadiazol-5-solfonico di purezza, in peso, di 60 % o più 0333 ex3215 90 80 20 Inchiostro termosensibile fissato su un foglio di materia plastica 0409 ex3824 90 95 75 Miscela di 2,2-bis[2-(perfluoroalchil)etiltiometil]propan-1,3-dioli 0 0 0 0 0 0 0 0 6 - - - Codice NC & TARIC Designazione delle merci Aliquota dei dazi autonomi (%) 0491 ex3904 30 00 20 Copolimero di cloruro di vinile, di acetato di vinile e di acido maleico, destinato ad essere utilizzato nella fabbricazione di adesivo a caldo policloruro di vinile-metallo (a) 0527 ex3907 30 00 40 ex3926 90 99 70 Resina epossidica, contenente, in peso, 70 % o più di diossido di silicio, destinata al incapsulamento di prodotti delle voci 8533, 8535, 8536, 8541, 8542 o 8548 (a) 0575 ex3920 42 91 94 Foglio di policloruro di vinile, che presenta delle impressioni in rilievo, del tipo utilizzato nelle sagome per la stampa di tessuti 0590 ex3920 62 19 62 Foglio di polietilene tereftalato, di spessore uguale o inferiore a 12 µ m, rivestito su un lato da uno strato di ossido di alluminio uguale o inferiore a 35 nm 0597 ex3920 62 19 85 Pellicola di spessore totale di 4,5 µ m (± 0,16 µm), costituita da una pellicola di polietilene tereftalato biassialmente orientata, di un modulo elastico (nella direzione della macchina) di 12 kg/mm2 (± 2 kg/mm2) e di una resistenza alla rottura (nella direzione della macchina) di più di 28 kg/mm2, e di un rivestimento antiaderente 0579 ex3920 62 19 88 Foglio stratificato, costituito da un foglio biassialmente orientato di polietilene tereftalato, ricoperto su un lato o su entrambi i lati da uno strato di polietilene tereftalato, destinato ad essere utilizzato nella fabbricazione di documenti d'identità, carte di credito e manufatti simili (comprese le “schede intelligenti”) (a) 0 0 0 0 0 0 7 Codice NC & TARIC Designazione delle merci Aliquota dei dazi autonomi (%) 0636 ex4811 21 00 10 Carta impregnata, pressione, il tutto avente: rivestita di uno strato autoadesivo sensibile alla una resistenza alla rottura per trazione di 2 700 N/m o più ed uguale o inferiore a 3 700 N/m nella direzione della macchina (secondo il metodo EN ISO 1924-2 e ISO 3781), un allungamento di 1,5 % o più ed uguale o inferiore a 3,0 % nella direzione della macchina (secondo il metodo EN ISO 1924-2 e ISO 3781) 0673 ex5603 12 90 60 ex5603 13 90 60 Stoffe non tessute di polietilene ottenute mediante filatura diretta (spunbonded), di peso superiore a 60 g/m2 ed inferiore o uguale a 80 g/m2 e di resistenza all'aria (Gurley) di 8 s o più ed inferiore o uguale a 36 s (secondo il metodo ISO 5636/5) 0689 ex6813 90 90 10 Guarnizioni di frizione, di spessore inferiore a 20 mm, non montati, destinati alla fabbricazione di componenti di frizione dei tipi utilizzati in cambi e frizioni automatici (a) 0702 ex7011 20 00 80 Bulbo di vetro per tubo catodico monocromo, di diagonale di 3,8 cm o più ed uguale o inferiore a 51 cm e di diametro del collo nominale di 13 mm, 20 mm, 29 mm o 37 mm 0723 ex7613 00 00 20 ex8708 99 98 10 Recipiente di alluminio, senza saldatura, per gas naturale compresso o idrogeno compresso, interamente inguainato da una copertura di composito epossi-fibre di carbonio, di capacità di 172 l (± 10 %) e di peso a vuoto non superiore a 64 kg 0730 ex8104 90 00 20 Profilati, di magnesio estruso, di lunghezza di 800 mm o più ed uguale o inferiore a 2 900 mm e di larghezza di 15 mm o più ed uguale o inferiore a 70 mm 0 0 0 0 0 0 8 - - Codice NC & TARIC Designazione delle merci Aliquota dei dazi autonomi (%) 0095 ex8536 50 15 32 Commutatore rotante a forma di ruota avente un diametro da 15 a 16 mm e contatti per la chiusura dei circuiti elettrici, con tensione nominale di 12 V e intensità di 50 mA 0146 ex8543 89 95 57 Convertitore di frequenza che permette la conversione di frequenze di 10,7 GHz o più ma non superiore a 12,75 GHz in frequenze di 950 MHz o più ma non superiori a 3 GHz e operante a un tensione di alimentazione di 11 V o più ma non superiore a 20 V 0167 ex9002 11 00 50 Obiettivo di lunghezza focale uguale o superiore a 25 mm ed inferiore o uguale a 150 mm, costituito da lenti di vetro o di materia plastica, aventi un diametro uguale o superiore a 60 mm ed inferiore o uguale a 190 mm 0 0 0 (a) Il controllo dell'utilizzazione per questa destinazione particolare avviene attraverso l'applicazione delle disposizioni comunitarie in materia. 9 Codice NC Taric ALLEGATO II ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex ex 0603 90 00 0604 99 10 0604 99 90 0713 33 90 1511 10 10 1511 90 19 1511 90 91 1513 11 10 1513 19 30 1513 21 11 1513 29 30 2924 10 00 2928 00 90 2934 90 96 2934 90 96 3824 90 95 3905 91 00 3907 30 00 3920 42 91 3920 62 19 3920 62 19 4811 21 00 5002 00 00 8543 89 95 9002 11 00 9002 90 90 10 10 10 20 10 10 10 10 10 10 10 30 30 55 60 41 93 40 94 62 85 10 57 50 10 10 SCHEDA FINANZIARIA 1. DENOMINAZIONE DELL'AZIONE Proposta di regolamento del Consiglio che modifica il regolamento (CE) n. 1255/96 recante sospensione temporanea dei dazi autonomi della tariffa doganale comune per taluni prodotti industriali e agricoli. 2. LINEA/E DI BILANCIO INTERESSATA/E Cap. 12, art. 120. 3. BASE GIURIDICA Art. 26 del trattato CE. 4. DESCRIZIONE DELL'AZIONE Sospensione dei dazi della tariffa doganale comune per i summenzionati prodotti. 7. INCIDENZA FINANZIARIA Nel regolamento (CE) n. 1255/96 del Consiglio, attualmente in vigore, non si è indicata una data di scadenza onde ridurre i problemi economici dovuti alla durata dei regolamenti precedenti. La presente proposta di regolamento del Consiglio riprende solo le modifiche dell’allegato del regolamento indispensabili per tener conto: 1. 2. delle nuove richieste di sospensioni presentate e accettate; degli sviluppi tecnici dei prodotti, dell’evoluzione economica del mercato e dell'accordo GATT che impongono di eliminare alcune delle sospensioni esistenti; 3. delle modifiche dei codici della nomenclatura. Ovviamente, solo le modifiche di cui al punto 1. e 2. hanno un’incidenza finanziaria. Aggiunta Oltre alle modifiche dovute a un cambiamento del codice NC, questo allegato comprende 17 nuovi prodotti. Le sospensioni corrispondenti generano un importo di dazi non riscossi pari a 1,5 MEUR, calcolato in base alle importazioni previste nello Stato membro richiedente per il 2000. Dalle statistiche degli anni precedenti, tuttavia, risulta che detto importo deve essere maggiorato di un fattore medio stimato a 1,8 per tener conto delle importazioni 11 effettuate negli altri Stati membri che applicano le stesse sospensioni. Ne consegue una perdita di entrate di circa 2,7 MEUR. Eliminazione Il presente allegato prevede l’eliminazione di 6 prodotti corrispondenti a dazi nuovamente riscossi e quindi ad un aumento delle risorse di 3,1 MEUR, determinati sulla base di domande di sospensione o delle statistiche disponibili (1998). Costo previsionale della presente azione Il presente regolamento dovrebbe quindi comportare, sulla base delle statistiche disponibili (1998), una perdita di risorse proprie valutata, a 2,7 - 3,1 = -0,4 MEUR circa e cioè una diminuzione di perdita di risorse, per una perdita complessiva per il 2000 stimata a 597,1 - 0,4 = 596,7 MEUR. La corrispondente diminuzione di profitto delle risorse proprie tradizionali dovrà essere finanziata dagli Stati membri attraverso un ricorso supplementare al PNL. 8. DISPOSIZIONI ANTIFRODE PREVISTE Il controllo della destinazione particolare di alcuni dei prodotti di cui al presente regolamento del Consiglio avverrà in conformità degli articoli 291-304 del regolamento (CEE) n. 2454/93 della Commissione che fissa le disposizioni di applicazione del codice doganale comunitario. 12