title: Vigesimotercera Directiva 98/62/CE de la Comisión de 3 de septiembre de 1998 por la que se adaptan al progreso técnico los anexos II, III, VI y VII de la Directiva 76/768/CEE del Consejo relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros en materia de productos cosméticos (Texto pertinente a los fines del EEE)

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approximation of laws
cosmetic product
marketing
product safety
technological change

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text: L 253/20 ES Diario Oficial de las Comunidades Europeas 15. 9. 98 VIGESIMOTERCERA DIRECTIVA 98/62/CE DE LA COMISI(cid:222)N de 3 de septiembre de 1998 por la que se adaptan al progreso t(cid:130)cnico los anexos II, III, VI y VII de la Directiva 76/768/CEE del Consejo relativa a la aproximaci(cid:155)n de las legislaciones de los Estados miembros en materia de productos cosm(cid:130)ticos (Texto pertinente a los fines del EEE) LA COMISI(cid:222)N DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS, Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Europea, Vista la Directiva 76/768/CEE del Consejo, de 27 de julio de 1976, relativa a la aproximaci(cid:155)n de las legislaciones de los Estados miembros en materia de productos cosm(cid:130)- ticos (1), cuya (cid:156)ltima modificaci(cid:155)n la constituye la Direc- tiva 98/16/CE de la Comisi(cid:155)n (2), y, en particular, el apar- tado 2 de su art(cid:146)culo 8, Previa consulta al Comit(cid:130) cient(cid:146)fico de cosmetolog(cid:146)a, Considerando que, a falta de nuevos datos cient(cid:146)ficos sobre, en particular, la toxicidad a largo plazo, el Comit(cid:130) cient(cid:146)fico de cosmetolog(cid:146)a ha recomendado que se proh(cid:146)ba el uso de los almizcles muscado y tibetano en los productos cosm(cid:130)ticos, ya que pueden presentar un riesgo para la salud; Considerando que una nueva evaluaci(cid:155)n toxicol(cid:155)gica basada en los nuevos datos sobre el cloruro de estroncio facilitados por la industria pone de manifiesto que el uso de esta sustancia puede ampliarse sin riesgo para la segu- ridad a los champ(cid:156)s y a los productos de cuidado de la cara siempre y cuando se respete una concentraci(cid:155)n m(cid:145)xima; Considerando que, seg(cid:156)n los (cid:156)ltimos datos cient(cid:146)ficos; el uso del cloruro, del bromuro y del sacarinato de benzal- conio como conservante en los productos cosm(cid:130)ticos puede admitirse en las condiciones fijadas por la Direc- tiva; Considerando que, seg(cid:156)n las (cid:156)ltimas investigaciones y los (cid:156)ltimos datos cient(cid:146)ficos, que el uso como conservante del 3-yodo-2-propinil butilcarbamato (butilcarbamato de yodopropinilo) debe respetar desde este momento deter- minadas condiciones de concentraci(cid:155)n y utilizaci(cid:155)n; Considerando que, seg(cid:156)n los (cid:156)ltimos datos cient(cid:146)ficos, en los productos cosm(cid:130)ticos puede admitirse el uso como filtro UV del fenol-2 (2H-benzotriazol-2-il)-4-metil-6- (2-metil-3-(1,3,3,3-tetrametil-1-(trimetilsilil)oxi)-disiloxanil) propilo) (cid:130)n las condiciones fijadas por la Directiva; (1) DO L 262 de 27. 9. 1976, p. 169. (2) DO L 77 de 14. 3. 1998, p. 44. Considerando que, seg(cid:156)n los (cid:156)ltimos datos cient(cid:146)ficos, en los productos cosm(cid:130)ticos puede admitirse el uso como filtro UV del benzoato de 4,4-((6-(((1,1-dimetiletil) amino)carbonil)fenil)amino) 1,3,5-triazina-2,4-diil)diimino) bis-,bis(2-etilhexilo)(cid:130)ster); Considerando que, seg(cid:156)n las (cid:156)ltimas investigaciones y los (cid:156)ltimos datos cient(cid:146)ficos, en los productos cosm(cid:130)ticos puede admitirse el uso como filtro UV del etil-4-amino- benzoato etoxilado, del isopentil-4-metoxicinamato y de la 2,4,6-trianilino-(p-carbo-2’-etilhexil-1’oxi)-1,3,5-triazina y del salicilato de 2-etilhexilo en las condiciones fijadas por la Directiva; Considerando que, seg(cid:156)n las (cid:156)ltimas investigaciones y los (cid:156)ltimos datos cient(cid:146)ficos, en los productos cosm(cid:130)ticos puede admitirse el uso como filtro UV de las sustancias 3-(4’-metilbencilideno)-d-1 alcanfor y 3-bencilideno al- canfor; Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se ajustan al dictamen del Comit(cid:130) de adaptaci(cid:155)n al progreso t(cid:130)cnico de las directivas cuyo objeto es suprimir los obst(cid:145)culos t(cid:130)cnicos al comercio en el sector de los productos cosm(cid:130)ticos, HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA: Art(cid:146)culo 1 La Directiva 76/768/CEE quedar(cid:145) modificada seg(cid:156)n el anexo de la presente Directiva. Art(cid:146)culo 2 1. Los Estados miembros tomar(cid:145)n las medidas necesa- rias para que, a partir del 1 de julio de 1999, ni los fabricantes ni los importadores establecidos en la Comu- nidad comercialicen productos que contengan las sustan- cias que figuran en el anexo si no cumplen las disposi- ciones de la presente Directiva. 2. Los Estados miembros tomar(cid:145)n las medidas necesa- rias para que, con posterioridad al 30 de junio de 2000, los productos a que se refiere el apartado anterior que contengan las sustancias que figuran en el anexo no puedan ser vendidos o cedidos al consumidor final. 15. 9. 98 ES Diario Oficial de las Comunidades Europeas L 253/21 Art(cid:146)culo 3 Art(cid:146)culo 4 1. Los Estados miembros adoptar(cid:145)n las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas necesarias para cumplir la presente Directiva a m(cid:145)s tardar el 30 de junio de 1999 e informar(cid:145)n inmediatamente de ello a la Comi- si(cid:155)n. Cuando los Estados miembros adopten dichas dispo- siciones, (cid:130)stas har(cid:145)n referencia a la presente Directiva o ir(cid:145)n acompa(cid:157)adas de dicha referencia en su publicaci(cid:155)n oficial. Los Estados miembros establecer(cid:145)n las modali- dades de la mencionada referencia. Los Estados miembros comunicar(cid:145)n a la Comisi(cid:155)n el 2. texto de las disposiciones de Derecho interno que adopten en el (cid:145)mbito regulado por la presente Directiva. La presente Directiva entrar(cid:145) en vigor el tercer d(cid:146)a siguiente al de su publicaci(cid:155)n en el Diario Oficial de las Comunidades Europeas. Art(cid:146)culo 5 Los destinatarios de la presente Directiva ser(cid:145)n Estados miembros. Hecho en Bruselas, el 3 de septiembre de 1998. Por la Comisi(cid:155)n Martin BANGEMANN Miembro de la Comisi(cid:155)n L 253/22 ES Diario Oficial de las Comunidades Europeas 15. 9. 98 ANEXO Los anexos de la Directiva 76/768/CEE quedar(cid:145)n modificados de la manera siguiente: 1) En el anexo II Se a(cid:157)adir(cid:145)n los siguientes n(cid:156)meros de referencia: «421. 1,1,3,3,5-pentametil-4,6-dinitroindano (almizcle muscado) 422. 5-ter-butil-1,2,3-trimetil-4,6-dinitrobenceno (almizcle tibetano)». 2) En el anexo III El n(cid:156)mero de referencia 57 se modificar(cid:145) de la forma siguiente: «57 Cloruro de estroncio (hexahidratado) a) Dent(cid:146)fricos 3,5 % expresado en estroncio. En caso de mezcla con otros compuestos de estroncio autorizados por este anexo, la concentraci(cid:155)n m(cid:145)xima de estroncio queda fijada en 3,5 %. Contiene cloruro de estroncio. Se desa- conseja su uso en ni(cid:157)os» b) Champ(cid:156) y pro- ductos de cuidado de la cara 2,1 % expresado en estroncio. En caso de mezcla con otros compuestos de estroncio autorizados por este anexo, la concentraci(cid:155)n m(cid:145)xima de estroncio queda fijada en 2,1 %. 3) En el anexo VI a) p a r t e I : Se a(cid:157)adir(cid:145) el siguiente n(cid:156)mero de referencia: a b c d e «54 Cloruro, bromuro y sacarinato de benzalconio (+) 0,1 % expresado en cloruro de benzalconio Evitar el contacto con los ojos» b) p a r t e I I : Se suprimir(cid:145) el n(cid:156)mero de referencia 16 En los n(cid:156)meros de referencia 21 y 29 «30. 6. 1998» se sustituir(cid:145) por «30. 6. 1999». El n(cid:156)mero de referencia 29 quedar(cid:145) asimismo modificado de la manera siguiente: a b c d e «29 3-Yodo-2-propinyl butilcarbamato (Butilcarbamato de yodopropinilo) 0,05 % No usar para la higiene bucal ni en productos para los labios» 15. 9. 98 ES Diario Oficial de las Comunidades Europeas L 253/23 4) En el anexo VII a) p a r t e I : Se a(cid:157)adir(cid:145)n los siguientes n(cid:156)meros de referencia a b c d e «13 Etil-4-aminobenzoato etoxilado (PEG-25 PABA) 14 15 16 17 18 19 20 Isopentil-4-metoxicinamato (Isoamyl p-Methoxycinnamate) 2,4,6-Trianilino-p-carbo-2’-etilhexil-1’oxi)-1,3,5-triazina (Octyl Triazone) Fenol, 2-(2H-benzotriazol-2-il)-4-metil-6-(2-metil-3-(1,3,3,3-tetrametil-l- (trimetilsilil)oxi)-disiloxani)propilo) (Drometrizole Trisiloxane) Benzoato de 4,4-((6-(((1,1-dimetiletil)amino)carbonil)fenil)amino)1,3,5- triazina-2,4-dii)diimino)bis-,bis(2-etilhexilo) 3-(4’-Metilbencilideno)-d-l alcanfor (4-Methylbenzylidene Camphor) 3-Bencilideno alcanfor (3-Benzylidene Camphor) salicilato de 2-etilhexilo (octyl-salicylate)) 10 % 10 % 5 % 15 % 10 % 4 % 2 % 5 %» b) p a r t e I I : Se suprimir(cid:145)n los n(cid:156)meros de referencia 2, 6, 12, 25, 26 y 32. En los n(cid:156)meros de referencia 5, 17 y 29 «30. 6. 1998» se sustituir(cid:145) por «30. 6. 1999»


title: Directiva 98/64/CE da Comissão de 3 de Setembro de 1998 que fixa métodos de análise comunitários para a determinação dos aminoácidos, das matérias gordas em bruto e do olaquindox nos alimentos para animais e altera a Directiva 71/393/CEE (Texto relevante para efeitos do EEE)

eurovoc_concepts:
analytical chemistry
animal nutrition
fats
food inspection
organic acid

text: L 257/14 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 19. 9. 98 DIRECTIVA 98/64/CE DA COMISS(cid:212)O de 3 de Setembro de 1998 que fixa m(cid:130)todos de an(cid:145)lise comunit(cid:145)rios para a determina(cid:135)(cid:209)o dos amino(cid:145)cidos, das mat(cid:130)rias gordas em bruto e do olaquindox nos alimentos para animais e altera a Directiva 71/393/CEE (Texto relevante para efeitos do EEE) A COMISS(cid:212)O DAS COMUNIDADES EUROPEIAS, Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Europeia, Tendo em conta a Directiva 70/373/CEE do Conselho, de 20 de Julho de 1970, relativa (cid:133) introdu(cid:135)(cid:209)o de modos de colheita de amostras e de m(cid:130)todos de an(cid:145)lise comunit(cid:145)- rios para o controlo oficial dos alimentos para animais (1), com a (cid:156)ltima redac(cid:135)(cid:209)o que lhe foi dada pelo Acto de Ades(cid:209)o da (cid:214)ustria, da Finl(cid:131)ndia e da Su(cid:130)cia, e, nomeada- mente, o seu artigo 2º, Considerando que a Directiva 70/373/CEE prev(cid:136) que os controlos oficiais dos alimentos para animais, destinados a verificar a observ(cid:131)ncia das condi(cid:135)(cid:210)es estabelecidas de acordo com as disposi(cid:135)(cid:210)es legislativas, regulamentares ou administrativas quanto (cid:133) qualidade e composi(cid:135)(cid:209)o dos alimentos para animais, sejam efectuados segundo modos de colheita de amostras e m(cid:130)todos de an(cid:145)lise comunit(cid:145)- rios; Considerando que a Directiva 79/373/CEE do Conselho, de 2 de Abril de 1979, relativa (cid:133) comercializa(cid:135)(cid:209)o de alimentos compostos para animais (2), com a (cid:156)ltima redac(cid:135)(cid:209)o que lhe foi dada pela Directiva 97/47/CE da Comiss(cid:209)o (3), e a Directiva 93/74/CEE do Conselho, de 13 de Setembro de 1993, relativa aos alimentos para animais com objectivos nutricionais espec(cid:146)ficos (4), com a (cid:156)ltima redac(cid:135)(cid:209)o que lhe foi dada pela Directiva 96/25/CE (5), prev(cid:136)em que os amino(cid:145)cidos e as mat(cid:130)rias gordas em bruto sejam declarados na etiqueta dos alimentos; Considerando que, al(cid:130)m disso, a Directiva 70/524/CEE do Conselho, de 23 de Novembro de 1970, relativa aos aditivos na alimenta(cid:135)(cid:209)o para animais (6), com a (cid:156)ltima redac(cid:135)(cid:209)o que lhe foi dada pela Directiva 97/72/CE da Comiss(cid:209)o (7), estabelece que o teor do olaquindox deve ser indicado aquando da etiquetagem, sempre que esta subst(cid:131)ncia for acrescentada aos alimentos compostos para animais; Considerando que a segunda Directiva 71/393/CEE da Comiss(cid:209)o, de 18 de Novembro de 1971, que fixa os m(cid:130)todos de an(cid:145)lise comunit(cid:145)rios para o controlo oficial (1) JO L 170 de 3. 8. 1970, p. 2. (2) JO L 86 de 6. 4. 1979, p. 30. (3) JO L 211 de 5. 8. 1997, p. 45. (4) JO L 237 de 22. 9. 1993, p. 23. (5) JO L 125 de 23. 5. 1996, p. 35. (6) JO L 270 de 14. 12. 1970, p. 1. (7) JO L 96 de 28. 3. 1998, p. 39. dos alimentos para animais (8), com a (cid:156)ltima redac(cid:135)(cid:209)o que lhe foi dada pela Directiva 84/4/CEE (9), fixou m(cid:130)todos de an(cid:145)lise para, inter alia, a determina(cid:135)(cid:209)o das mat(cid:130)rias gordas em bruto; que (cid:130) conveniente alterar o m(cid:130)todo descrito; Considerando que devem ser fixados m(cid:130)todos de an(cid:145)lise comunit(cid:145)rios para o controlo daquelas subst(cid:131)ncias; Considerando que as medidas previstas na presente direc- tiva est(cid:209)o em conformidade com o parecer do Comit(cid:130) Permanente dos Alimentos para Animais, ADOPTOU A PRESENTE DIRECTIVA: Artigo 1º Os Estados-membros ordenar(cid:209)o que as an(cid:145)lises previstas para os controlos oficiais dos alimentos para animais, no que diz respeito ao teor de amino(cid:145)cidos, de mat(cid:130)rias gordas em bruto e de olaquindox, sejam efectuadas segundo os m(cid:130)todos correspondentes descritos no anexo. Artigo 2º No anexo da Directiva 71/393/CEE da Comiss(cid:209)o, o ponto «4. Doseamento das mat(cid:130)rias gordas brutas» (cid:130) substitu(cid:146)do pela parte B do anexo da presente directiva. Artigo 3º 1. Os Estados-membros adoptar(cid:209)o e publicar(cid:209)o as disposi(cid:135)(cid:210)es legislativas, regulamentares e administrativas necess(cid:145)rias para dar cumprimento (cid:133) presente directiva o mais tardar em 31 de Dezembro de 1998. Do facto infor- mar(cid:209)o imediatamente a Comiss(cid:209)o. Os Estados-membros aplicar(cid:209)o as referidas disposi(cid:135)(cid:210)es a partir de 1 de Janeiro de 1999. Quando os Estados-membros adoptarem tais disposi(cid:135)(cid:210)es, estas devem incluir uma refer(cid:136)ncia (cid:133) presente directiva ou ser acompanhadas dessa refer(cid:136)ncia aquando da sua publi- ca(cid:135)(cid:209)o oficial. As modalidades dessa refer(cid:136)ncia ser(cid:209)o adop- tadas pelos Estados-membros. (8) JO L 279 de 20. 12. 1971, p. 7. (9) JO L 15 de 18. 1. 1984, p. 28. 19. 9. 98 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 257/15 2. Os Estados-membros comunicar(cid:209)o (cid:133) Comiss(cid:209)o o texto das principais disposi(cid:135)(cid:210)es de direito interno que adoptarem no dom(cid:146)nio regido pela presente directiva. Artigo 5º Os Estados-membros s(cid:209)o os destinat(cid:145)rios da presente directiva. Artigo 4º Feito em Bruxelas, em 3 de Setembro de 1998. A presente directiva entra em vigor no vig(cid:130)simo dia seguinte ao da sua publica(cid:135)(cid:209)o no Jornal Oficial das Comunidades Europeias. Pela Comiss(cid:209)o Franz FISCHLER Membro da Comiss(cid:209)o L 257/16 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 19. 9. 98 ANEXO PARTE A DETERMINAÇ(cid:212)O DO TEOR DE AMINO(cid:214)CIDOS 1. Objectivo e campo de aplica(cid:135)(cid:209)o O presente m(cid:130)todo destina-se (cid:133) determina(cid:135)(cid:209)o do teor de amino(cid:145)cidos livres (naturais e de s(cid:146)ntese) e amino(cid:145)cidos totais (ligados e livres) em alimentos para animais, utilizando um analisador de amino(cid:145)cidos. O m(cid:130)todo (cid:130) aplic(cid:145)vel ao doseamento dos seguintes amino(cid:145)cidos: cistina/ciste(cid:146)na, metionina, lisina, treonina, alanina, arginina, (cid:145)cido asp(cid:145)rtico, (cid:145)cido glut(cid:131)mico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, fenilalanina, prolina, serina, tirosina e valina. O m(cid:130)todo n(cid:209)o permite distinguir as formas D e L, nem os sais de amino(cid:145)cidos. N(cid:209)o (cid:130) aplic(cid:145)vel ao doseamento de tript(cid:155)fano nem de derivados hidroxilados de amino(cid:145)cidos. 2. Resumo do processo 2. 1. Amino(cid:145)cidos livres Os amino(cid:145)cidos livres s(cid:209)o extra(cid:146)dos com (cid:145)cido clor(cid:146)drico dilu(cid:146)do. As macromol(cid:130)culas azotadas extra(cid:146)das como subprodutos, s(cid:209)o precipitadas com (cid:145)cido sulfosalic(cid:146)lico e removidas por filtra(cid:135)(cid:209)o. O pH do filtrado (cid:130) ajustado a 2. 20. Os amino(cid:145)cidos s(cid:209)o separados por cromatografia de troca i(cid:155)nica e determinados fotometricamente a 570 nm, ap(cid:155)s reac(cid:135)(cid:209)o com ninidrina. 2. 2. Amino(cid:145)cidos totais O procedimento a adoptar depende dos amino(cid:145)cidos a dosear. A cistina/ciste(cid:146)na e a metionina necessitam de oxida(cid:135)(cid:209)o a (cid:145)cido cisteico e a metionina sulfona respectivamente, antes da hidr(cid:155)lise. A tirosina (cid:130) determinada nos hidrolisados de amostras n(cid:209)o oxidadas. Todos os restantes amino(cid:145)cidos referidos em 1 podem ser determinados a partir de amostras oxidadas ou n(cid:209)o oxidadas. A oxida(cid:135)(cid:209)o (cid:130) realizada a 0 (cid:190)C, com uma mistura (cid:145)cido perf(cid:155)rmico/fenol. O excesso de reagente de oxida(cid:135)(cid:209)o (cid:130) destru(cid:146)do com bissulfito de s(cid:155)dio. A amostra, oxidada ou n(cid:209)o, (cid:130) hidrolisada com (cid:145)cido clor(cid:146)drico 6 mol/l durante 23 horas. O pH do hidrolisado (cid:130) ajustado a 2. 20. Os amino(cid:145)cidos s(cid:209)o separados por cromatografia de troca i(cid:155)nica e determinados fotometricamente a 570 nm (440 nm no caso da prolina), ap(cid:155)s reac(cid:135)(cid:209)o com ninidrina. 3. Reagentes Todos os reagentes devem ser pr(cid:155)-an(cid:145)lise. Deve utilizar-se (cid:145)gua bidestilada ou de qualidade equivalente (condutividade inferior a 10 lS). 3. 1. 3. 2. 3. 3. 3. 4. 3. 5. 3. 6. 3. 7. 3. 8. 3. 9. Per(cid:155)xido de hidrog(cid:130)nio, 30 % (m/m). (cid:214)cido f(cid:155)rmico, 98-100 % (m/m). Fenol. Bissulfito de s(cid:155)dio. Hidr(cid:155)xido de s(cid:155)dio. (cid:214)cido 5-sulfosalic(cid:146)lico di-hidratado. (cid:214)cido clor(cid:146)drico (r20«» 1. 18 g/ml). Citrato triss(cid:155)dico di-hidratado. 2,2Y-Etanoditiol (ditioglicol). 3. 10. Cloreto de s(cid:155)dio. 3. 11. Ninidrina. 3. 12. (cid:144)ter de petr(cid:155)leo (P. E. 40-60 (cid:190)C). 3. 13. Norleucina ou outro composto adequado, para ser usado como padr(cid:209)o interno. 3. 14. Azoto gasoso (teor de oxig(cid:130)nio inferior a 10 ppm). 19. 9. 98 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 257/17 3. 15. 1-Octanol. 3. 16. Amino(cid:145)cidos. 3. 16. 1. Subst(cid:131)ncias-padr(cid:209)o referidas em 1. Os produtos devem ser puros e n(cid:209)o conter (cid:145)gua de cristaliza(cid:135)(cid:209)o. Secar sob v(cid:145)cuo, com P2 O 5 ou H SO 2 , durante uma semana, antes de usar. 4 3. 16. 2. (cid:214)cido cisteico. 3. 16. 3. Metionina sulfona. 3. 17. Solu(cid:135)(cid:209)o de hidr(cid:155)xido de s(cid:155)dio 7,5 mol/l. Dissolver 300 g de NaOH (3. 5) em (cid:145)gua, completando a 1 litro. 3. 18. Solu(cid:135)(cid:209)o de hidr(cid:155)xido de s(cid:155)dio 1 mol/l. Dissolver 40 g de NaOH (3. 5) em (cid:145)gua, e completar a 1 litro. 3. 19. Solu(cid:135)(cid:209)o de (cid:145)cido f(cid:155)rmico/fenol. Misturar 889 g de (cid:145)cido f(cid:155)rmico (3. 2) com 111 g de (cid:145)gua e adicionar 4,73 g de fenol (3. 3). 3. 20. Mistura de hidr(cid:155)lise (HCl 6 mol/l contendo 1 g de fenol/l). Adicionar 1 g de fenol (3. 3) a 492 ml de HCl (3. 7) e completar com (cid:145)gua a 1 litro. 3. 21. Mistura de extrac(cid:135)(cid:209)o (HCl 0,1 mol/l contendo 2 % de ditioglicol). Misturar 8,2 ml de HCl (3. 7) com cerca de 900 ml de (cid:145)gua, adicionar 20 ml de tiodiglicol (3. 9) e completar com (cid:145)gua at(cid:130) 1 litro (n(cid:209)o misturar directamente os reagentes 3. 7 e 3. 9). 3. 22. (cid:214)cido 5-sulfosalic(cid:146)lico, 6 % (m/v). Dissolver 60 g de (cid:145)cido 5-sulfosalic(cid:146)lico (3. 6) em (cid:145)gua, completando a 1 litro. 3. 23. Mistura oxidante ((cid:145)cido perf(cid:155)rmico/fenol). Misturar, num pequeno matraz, 0,5 ml de per(cid:155)xido de hidrog(cid:130)nio (3. 1) com 4,5 ml de solu(cid:135)(cid:209)o de (cid:145)cido f(cid:155)rmico/fenol (3. 19). Tapar e manter a 20-30 (cid:190)C durante 1 hora, de modo a obter (cid:145)cido perf(cid:155)rmico. Arrefecer num banho de gelo (15 minutos) e adicionar (cid:133) amostra. Cuidado: evitar o contacto com a pele e utilizar vestu(cid:145)rio de protec(cid:135)(cid:209)o. 3. 24. Tamp(cid:209)o citrato (0,2 mol/l; pH = 2. 20). Dissolver 19,61 g de citrato de s(cid:155)dio (3. 8), 5 ml de ditioglicol (3. 9), 1 g de fenol (3. 3) e 16,5 ml HCl (3. 7) em cerca de 800 ml de (cid:145)gua. Ajustar o pH a 2. 20. Completar com (cid:145)gua a 1 litro. 3. 25. Tamp(cid:210)es de elui(cid:135)(cid:209)o, preparados em fun(cid:135)(cid:209)o do aparelho utilizado (4. 9). 3. 26. Reagente de ninidrina, preparado em fun(cid:135)(cid:209)o do aparelho utilizado (4. 9). 3. 27. Solu(cid:135)(cid:210)es-padr(cid:209)o de amino(cid:145)cidos. Estas solu(cid:135)(cid:210)es devem ser armazenadas a uma temperatura inferior a 5 (cid:190)C. 3. 27. 1. Solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e padr(cid:209)o de amino(cid:145)cidos (3. 16. 1), c = 2,5 lmol/ml de cada amino(cid:145)cido em (cid:145)cido clor(cid:146)drico (dispon(cid:146)vel no com(cid:130)rcio). 3. 27. 2. Solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e padr(cid:209)o de (cid:145)cido cisteico e metionina sulfona, c = 1,25 lmol/ml. Dissolver, num bal(cid:209)o aferido de 1 l, 0,2115 g de (cid:145)cido cisteico (3. 16. 2) e 0,2265 g de metionina sulfona (3. 16. 3) em tamp(cid:209)o ci-trato (3. 24), completando o volume com o mesmo tamp(cid:209)o. Armazenar a uma temperatura inferior a 5 (cid:190)C, por um per(cid:146)odo n(cid:209)o superior a 12 meses. NOTA: Esta solu(cid:135)(cid:209)o n(cid:209)o (cid:130) necess(cid:145)ria no caso de a solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e padr(cid:209)o (3. 27. 1) conter (cid:145)cido cisteico e metionina sulfona. 3. 27. 3. Solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e de padr(cid:209)o interno, por exemplo norleucina (c = 20 lmol/ml). Dissolver num bal(cid:209)o aferido de 250 ml 0,6560 g de norleucina (3. 13) em tamp(cid:209)o citrato (3. 24), completando o volume com o mesmo tamp(cid:209)o. Armazenar a uma temperatura inferior a 5 (cid:190)C, por um per(cid:146)odo n(cid:209)o superior a 6 meses. 3. 27. 4. Solu(cid:135)(cid:209)o de calibra(cid:135)(cid:209)o de amino(cid:145)cidos-padr(cid:209)o para uso com os hidrolisados (c = 5 nmol/50 ll de (cid:145)cido cisteico e metionina sulfona; c = 10 nmol/50 ll dos restantes amino(cid:145)cidos). L 257/18 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 19. 9. 98 Dissolver, num matraz de 100 ml, 2,2 g de cloreto de s(cid:155)dio (3. 10) em 30 ml de tamp(cid:209)o citrato (3. 24). Adicionar 4,00 ml de solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e padr(cid:209)o de amino(cid:145)cidos (3. 27. 1), 4,00 ml de solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e padr(cid:209)o de solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e padr(cid:209)o de amino(cid:145)cidos (3. 27. 1), 4,00 ml de solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e padr(cid:209)o de (cid:145)cido cisteico e de metionina sulfona (3. 27. 2) e 0. ,50 ml de solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e padr(cid:209)o de padr(cid:209)o interno (3. 27. 3), se for caso disso. Ajustar o pH a 2. 20 com solu(cid:135)(cid:209)o de hidr(cid:155)xido de s(cid:155)dio (3. 18). Transferir quantitativamente para um bal(cid:209)o aferido de 50 ml, completar o volume com tamp(cid:209)o citrato (3. 24) e misturar. Armazenar a uma temperatura inferior a 5 (cid:190)C, por um per(cid:146)odo n(cid:209)o superior a 3 meses. Ver igualmente o ponto 9. 1 das observa(cid:135)(cid:210)es. 3. 27. 5. Solu(cid:135)(cid:209)o de calibra(cid:135)(cid:209)o de amino(cid:145)cidos-padr(cid:209)o para uso com os hidrolisados obtidos de acordo com 5. 3. 3. 1, bem como com os extractos referidos em 5. 2. A solu(cid:135)(cid:209)o de calibra(cid:135)(cid:209)o (cid:130) preparada em conformidade com 3. 27. 4, suprimindo o cloreto de s(cid:155)dio. Armazenar a uma temperatura inferior a 5 (cid:190)C, por um per(cid:146)odo n(cid:209)o superior a 3 meses. 4. Aparelhos e utens(cid:146)lios 4. 1. 4. 2. 4. 3. Material corrente de laborat(cid:155)rio, e nomeadamente: Bal(cid:209)o de fundo redondo de 100 ml ou 250 ml equipado com um condensador de refluxo. Frasco de vidro de borosilicato de 100 ml munido de tampa de rosca com revestimento de borracha ou teflon (por exemplo, Duran, Schott), para uso em estufa. Estufa munida de um sistema de ventila(cid:135)(cid:209)o e de um sistema de regula(cid:135)(cid:209)o de temperatura com exactid(cid:209)o superior a 5 2 (cid:190)C. 4. 4. Medidor de pH (com leitura (cid:133)s mil(cid:130)simas). 4. 5. Filtro de membrana (porosidade 0,2 lm). 4. 6. Centrifuga. 4. 7. Evaporador rotativo de v(cid:145)cuo. 4. 8. Agitador mec(cid:131)nico ou magn(cid:130)tico. 4. 9. Analisador de amino(cid:145)cidos ou aparelho para HPLC munido de uma coluna de troca i(cid:155)nica, derivatiza(cid:135)(cid:209)o p(cid:155)s-coluna com ninidrina e detector fotom(cid:130)trico. O enchimento da coluna (cid:130) de resinas de poliestireno sulfonado que permitem separar os amino(cid:145)cidos entre si, bem como de outros produtos com reac(cid:135)(cid:209)o positiva (cid:133) ninidrina. A estabilidade do fluxo das bombas que controlam o caudal do tamp(cid:209)o de elui(cid:135)(cid:209)o e do reagente de ninidrina deve ser de cerca de 5 0,5 %, quer durante o ensaio de calibra(cid:135)(cid:209)o quer durante a execu(cid:135)(cid:209)o da an(cid:145)lise. Em alguns analisadores de amino(cid:145)cidos (cid:130) poss(cid:146)vel utilizar produtos de hidr(cid:155)lise que contenham uma concentra(cid:135)(cid:209)o de s(cid:155)dio superior a 0,8 mol/l, bem como o (cid:145)cido f(cid:155)rmico residual do processo de oxida(cid:135)(cid:209)o. Noutros analisadores, a separa(cid:135)(cid:209)o de determinados amino(cid:145)cidos n(cid:209)o (cid:130) satisfat(cid:155)ria caso os produtos de hidr(cid:155)lise contenham um excesso de (cid:145)cido f(cid:155)rmico e/ou uma concentra(cid:135)(cid:209)o elevada de i(cid:209)o s(cid:155)dio. Nestes casos, o volume de (cid:145)cido (cid:130) reduzido, por evapora(cid:135)(cid:209)o, a cerca de 5 ml, ap(cid:155)s a hidr(cid:155)lise e antes do ajuste de pH. A evapora(cid:135)(cid:209)o deve ser realizada sob v(cid:145)cuo, a uma temperatura n(cid:209)o superior a 40 (cid:190)C. 5. Modo operat(cid:155)rio 5. 1. Prepara(cid:135)(cid:209)o da amostra A amostra (cid:130) mo(cid:146)da a uma granulometria inferior a 0,5 mm. (As amostras com elevado teor de humidade devem ser secas em estufa, a uma temperatura n(cid:209)o superior a 50 (cid:190)C, ou liofilizadas, antes da moagem). As amostras com elevado teor de gordura devem ser desengorduradas com (cid:130)ter de petr(cid:155)leo (3. 12) antes da moagem. 5. 2. Determina(cid:135)(cid:209)o de amino(cid:145)cidos livres em alimentos para animais e pr(cid:130)-misturas Com aproxima(cid:135)(cid:209)o a 0,2 mg, pesar num matraz uma quantidade adequada (1-5 g) de amostra preparada de acordo com 5. 1 e adicionar 100,0 ml de mistura de extrac(cid:135)(cid:209)o (3. 21). Agitar durante 60 minutos em agitador mec(cid:131)nico ou magn(cid:130)tico (4. 8). Deixar sedimentar e pipetar 10,0 ml de solu(cid:135)(cid:209)o sobrenadante para um matraz de 100 ml. 19. 9. 98 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 257/19 Adicionar, sob agita(cid:135)(cid:209)o, 5,0 ml de solu(cid:135)(cid:209)o de (cid:145)cido sulfosalic(cid:146)lico (3. 22), mantendo a agita(cid:135)(cid:209)o durante 5 minutos. Filtrar ou centrifugar o sobrenadante, de modo a remover qualquer precipitado. Colocar 10,0 ml da solu(cid:135)(cid:209)o num matraz de 100 ml e ajustar o pH a 2. 20 com solu(cid:135)(cid:209)o de hidr(cid:155)xido de s(cid:155)dio (3. 18). Transferir para um bal(cid:209)o aferido de volume adequado e completar at(cid:130) (cid:133) marca com tamp(cid:209)o citrato (3. 24). Caso se utilize um padr(cid:209)o interno, adicionar 1,00 ml (3. 27. 3) por cada 100 ml de solu(cid:135)(cid:209)o final, antes de completar (cid:133) marca com tamp(cid:209)o (3. 24). Efectuar a an(cid:145)lise cromatogr(cid:145)fica de acordo com 5. 4. Se os extractos n(cid:209)o forem sujeitos a cromatografia no mesmo dia, devem ser armazenados a uma temperatura inferior a 5 (cid:190)C. 5. 3. Determina(cid:135)(cid:209)o dos amino(cid:145)cidos totais 5. 3. 1. O x i d a (cid:135) (cid:209) o Pesar, com aproxima(cid:135)(cid:209)o a 0,2 mg, 1 g de amostra preparada (5. 1): — num bal(cid:209)o de fundo redondo de 100 ml (4. 1), no caso de hidr(cid:155)lise em sistema aberto (5. 3. 2. 3), — num bal(cid:209)o de fundo redondo de 250 ml (4. 1), caso seja necess(cid:145)rio um teor de s(cid:155)dio reduzido (5. 3. 3. 1), — num frasco de 100 ml munido de tampa de rosca (4. 2), no caso de hidr(cid:155)lise em sistema fechado (5. 3. 2. 4). A toma de amostra para ensaio deve ter um teor aproximado de azoto de 10 mg e um teor de humidade n(cid:209)o superior a 100 mg. Colocar o bal(cid:209)o ou o frasco num banho de gelo, arrefecer a 0 (cid:190)C, adicionar 5 ml de mistura oxidante (3. 23) e misturar com uma vareta de vidro de ponta recurva. Tapar o bal(cid:209)o ou o frasco contendo a vareta com pel(cid:146)cula imperme(cid:145)vel ao ar, e colocar o conjunto constituido pelo recipiente tapado e o banho de gelo no frigor(cid:146)fico, a 0 (cid:190)C, durante 16 horas. Ap(cid:155)s este per(cid:146)odo, retirar do frigor(cid:146)fico e destruir o excesso de oxidante por adi(cid:135)(cid:209)o de 0,84 g de bissulfito de s(cid:155)dio (3. 4). Continuar de acordo com 5. 3. 2. 1. 5. 3. 2. H i d r (cid:155) l i s e 5. 3. 2. 1. Hidr(cid:155)lise de amostras oxidadas: Adicionar 25 ml de mistura de hidr(cid:155)lise (3. 20) (cid:133) amostra oxidada de acordo com 5. 3. 1, removendo quaisquer res(cid:146)duos de amostra das paredes do recipiente e da vareta. Proceder em conformidade com 5. 3. 2. 3 ou 5. 3. 2. 4, em fun(cid:135)(cid:209)o do tipo de hidr(cid:155)lise. 5. 3. 2. 2. Hidr(cid:155)lise de amostras n(cid:209)o oxidadas: Pesar num bal(cid:209)o de fundo redondo de 100 ml ou 250 ml (4. 1) ou num frasco munido de tampa de rosca (4. 2), com aproxima(cid:135)(cid:209)o a 0,2 mg, 0,1 a 1 g de amostra preparada (5. 1). A quantidade pesada de amostra deve possuir um teor de cerca de 10 mg de azoto. Adicionar cuidadosamente 25 ml da mistura de hidr(cid:155)lise (3. 20) e misturar. Proceder de acordo com 5. 3. 2. 3 ou 5. 3. 2. 4. 5. 3. 2. 3. Hidr(cid:155)lise em sistema aberto: Juntar 3 p(cid:130)rolas de vidro como reguladores de ebuli(cid:135)(cid:209)o (cid:133) mistura preparada de acordo com 5. 3. 2. 1 ou 5. 3. 2. 2 e manter em ebuli(cid:135)(cid:209)o cont(cid:146)nua, sob refluxo, durante 23 horas. Ap(cid:155)s a hidr(cid:155)lise, lavar o refrigerante, com 5 ml de tamp(cid:209)o citrato (3. 24), pelo topo. Desmontar o conjunto e arrefecer o bal(cid:209)o num banho de gelo. Proceder de acordo com 5. 3. 3. 5. 3. 2. 4. Hidr(cid:155)lise em sistema fechado: Colocar o frasco que cont(cid:130)m a mistura preparada de acordo com 5. 3. 2. 1 ou 5. 3. 2. 2, numa estufa (4. 3) a 110 (cid:190)C. Durante a primeira hora, colocar a tampa de rosca no topo do frasco sem contudo o vedar, de modo a evitar um aumento da press(cid:209)o devido aos gases libertados e o consequente risco de explos(cid:209)o. Em seguida, vedar o frasco com a tampa de rosca e manter em estufa (4. 3) durante 23 horas. Ap(cid:155)s a hidr(cid:155)lise, remover o frasco da estufa, abri-lo cuidadosamente e coloc(cid:145)-lo num banho de gelo, at(cid:130) arrefecer. Com o aux(cid:146)lio de tamp(cid:209)o de citratos (3. 2. 4), transferir quantitativamente o conte(cid:156)do do frasco para um matraz ou um bal(cid:209)o de fundo redondo de 250 ml, em fun(cid:135)(cid:209)o do procedimento de ajuste do pH a utilizar. Proceder de acordo com 5. 3. 3. 5. 3. 3. A j u s t e d o p H Para o ajuste do pH, proceder de acordo com 5. 3. 3. 1 ou 5. 3. 3. 2, em fun(cid:135)(cid:209)o da toler(cid:131)ncia do analisador de amino(cid:145)cidos ao s(cid:155)dio (4. 9). 5. 3. 3. 1. Sistemas cromatogr(cid:145)ficos que necessitem de um teor reduzido de s(cid:155)dio: (cid:144) aconselh(cid:145)vel utilizar uma solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e de padr(cid:209)o interno (3. 27. 3), no caso de analisadores de amino(cid:145)cidos que necessitem de um teor reduzido de s(cid:155)dio (uma vez que o volume de (cid:145)cido deve ser reduzido). L 257/20 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 19. 9. 98 Adicionar 2,00 ml de solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e de padr(cid:209)o interno (3. 27. 3) ao hidrolisado, antes ou ap(cid:155)s a evapora(cid:135)(cid:209)o. Adicionar 2 gotas de 1-octanol (3. 15) ao hidrolisado obtido de acordo com 5. 3. 2. 3 ou 5. 3. 2. 4. Em evaporador rotativo (4. 7), reduzir o volume a 5-10 ml, sob v(cid:145)cuo, a 40 (cid:190)C. Se, acidentalmente, o volume for reduzido a menos de 5 ml, o produto deve ser rejeitado e a an(cid:145)lise recome(cid:135)ada. Ajustar o pH a 2. 20 com solu(cid:135)(cid:209)o de hidr(cid:155)xido de s(cid:155)dio (3. 18), e proceder de acordo com 5. 3. 4. 5. 3. 3. 2. Restantes analisadores de amino(cid:145)cidos: Neutralizar parcialmente o hidrolisado obtido de acordo com 5. 3. 2. 3 ou 5. 3. 2. 4 mediante a adi(cid:135)(cid:209)o cuidadosa, sob agita(cid:135)(cid:209)o, de 17 ml de solu(cid:135)(cid:209)o de hidr(cid:155)xido de s(cid:155)dio (3. 17), mantendo a temperatura inferior a 40 (cid:190)C. Ajustar o pH a 2. 20, (cid:133) temperatura ambiente, com as solu(cid:135)(cid:210)es de hidr(cid:155)xido de s(cid:155)dio (3. 17) e (3. 18). Proceder de acordo com 5. 3. 4. 5. 3. 4. S o l u (cid:135) (cid:209) o d e a m o s t r a p a r a c r o m a t o g r a f i a Com o aux(cid:146)lio de tamp(cid:209)o citrato (3. 24), transferir quantitativamente o produto de hidr(cid:155)lise com o pH ajustado (5. 3. 3. 1 ou 5. 3. 3. 2) para um bal(cid:209)o aferido de 200 ml, completando at(cid:130) (cid:133) marca com o mesmo tamp(cid:209)o. No caso de n(cid:209)o se ter adicionado ainda um padr(cid:209)o interno, juntar 2,00 ml da solu(cid:135)(cid:209)o-m(cid:209)e de padr(cid:209)o interno (3. 27. 3) e completar at(cid:130) (cid:133) marca com tamp(cid:209)o citrato (3. 24). Misturar. Efectuar a an(cid:145)lise cromatogr(cid:145)fica de acordo com 5. 4. Se os hidrolisados das amostras n(cid:209)o forem analisadas no mesmo dia, devem ser conservadas a uma temperatura inferior a 5 (cid:190)C. 5. 4. Cromatografia Antes de iniciar a an(cid:145)lise cromatogr(cid:145)fica, deixar estabelizar o extracto (5. 2) ou o produto de hidr(cid:155)lise (5. 3. 4) (cid:133) temperatura ambiente. Agitar a mistura e filtrar uma quantidade adequada por filtro de membrana (4. 5). A solu(cid:135)(cid:209)o l(cid:146)mpida resultante (cid:130) sujeita a cromatografia de troca i(cid:155)nica no analisador de amino(cid:145)cidos (4. 9). A injec(cid:135)(cid:209)o pode ser manual ou autom(cid:145)tica. A quantidade de solu(cid:135)(cid:209)o utilizada na an(cid:145)lise dos padr(cid:210)es e das amostras deve ser constante, com uma aproxima(cid:135)(cid:209)o de 5 0,5 %, excepto no caso de se utilizar um padr(cid:209)o interno; a raz(cid:209)o entre as concentra(cid:135)(cid:210)es de s(cid:155)dio e de amino(cid:145)cidos na solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o e na amostra deve ser t(cid:209)o pr(cid:155)xima quanto poss(cid:146)vel. A frequ(cid:136)ncia dos ensaios de calibra(cid:135)(cid:209)o depende da estabilidade do reagente de ninidrina e do sistema anal(cid:146)tico em geral. O padr(cid:209)o ou a amostra s(cid:209)o dilu(cid:146)dos com tamp(cid:209)o citrato (3. 24), de modo a que a (cid:145)rea dos picos de amino(cid:145)cidos produzidos pelo padr(cid:209)o seja de 30-200 % da (cid:145)rea dos correspondentes picos dos amino(cid:145)cidos da amostra. A cromatografia dos amino(cid:145)cidos varia ligeiramente em fun(cid:135)(cid:209)o do tipo de analisador e da resina utilizada. O sistema escolhido deve permitir a separa(cid:135)(cid:209)o dos amino(cid:145)cidos entre si, bem como dos restantes produtos com reac(cid:135)(cid:209)o positiva (cid:133) ninidrina. Al(cid:130)m disso, o sistema dever(cid:145) dar uma resposta linear (cid:133) altera(cid:135)(cid:209)o das quantidades de amino(cid:145)cidos injectadas, na gama das concentra(cid:135)(cid:210)es utilizadas. Durante a cromatografia, a solu(cid:135)(cid:209)o equimolar de amino(cid:145)cidos deve conter, pelo menos, 30 % da quantidade m(cid:145)xima de cada amino(cid:145)cido que pode ser determinada com exactid(cid:209)o no analisador de amino(cid:145)cidos (4. 9). No caso dos picos correspondentes (cid:133) treonina e a serina estarem parcialmente sobrepostos, a raz(cid:209)o entre a altura do vale e a altura do menor dos dois picos sobrepostos no cromatograma n(cid:209)o deve exceder 2: 10. Caso se pretenda determinar apenas a cistina/ciste(cid:146)na, a metionina, a treonina e a lisina, a m(cid:145) resolu(cid:135)(cid:209)o de dois picos adjacentes afecta a quantifica(cid:135)(cid:209)o. No que respeita aos restantes amino(cid:145)cidos, a separa(cid:135)(cid:209)o deve ser superior a 1: 10. O sistema deve assegurar a separa(cid:135)(cid:209)o da lisina das subst(cid:131)ncias afins, e da ornitina. 6. C(cid:145)lculo dos resultados Procede-se (cid:133) determina(cid:135)(cid:209)o da (cid:145)rea do pico correspondente a cada amino(cid:145)cido presente na amostra e no padr(cid:209)o, sendo o respectivo teor, expresso em g por kg de amostra, calculado pela f(cid:155)rmula: = g de amino(cid:145)cido por kg de amostra A (cid:253) c (cid:253) M (cid:253) V B (cid:253) m (cid:253) 1 000 Caso tenha sido utilizado um padr(cid:209)o interno, multiplicar pelo factor D C. 19. 9. 98 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 257/21 A = (cid:145)rea do pico do hidrolisado ou do extracto B = (cid:145)rea do pico da solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o de calibra(cid:135)(cid:209)o C = (cid:145)rea do pico do padr(cid:209)o interno, no hidrolisado ou no extracto D = (cid:145)rea do pico do padr(cid:209)o interno, na solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o de calibra(cid:135)(cid:209)o M = massa molecular c = concentra(cid:135)(cid:209)o da solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o, expressa em lmol/ml m = massa da amostra, corrigida em caso de secagem ou desengorduramento, expressa em g V = volume do hidrolisado (5. 3. 4) ou volume de dilui(cid:135)(cid:209)o total do extracto (6. 1), expressos em ml A cistina e a ciste(cid:146)na s(cid:209)o determinadas na forma de (cid:145)cido cisteico, no hidrolisado da amostra oxidada, , M = 240,30), considerando M = 120,15 (0,5 (cid:253) 240,30). sendo expressas em cistina (C6 N 2 O 4 H S 12 2 A metionina (cid:130) determinada na forma da respectiva metionina sulfona, no hidrolisado da amostra oxidada, sendo expressa em metionina, considerando M = 149,21. A metionina livre adicionada (cid:130) determinada na forma de metionina, ap(cid:155)s extrac(cid:135)(cid:209)o, utilizando o mesmo valor de massa molecular. 6. 1. O volume total de dilui(cid:135)(cid:209)o dos extractos (V), para a determina(cid:135)(cid:209)o dos amino(cid:145)cidos livres (5. 2), (cid:130) calculado do seguinte modo: F = 100 ml (cid:253) (10 ml + 5ml) 10 ml (cid:253) Vml 10 ml em que v representa o volume do extracto final. 7. Avalia(cid:135)(cid:209)o do m(cid:130)todo O m(cid:130)todo foi ensaiado num estudo internacional de compara(cid:135)(cid:209)o interlaboratorial realizado em 1990 com base em quatro tipos de alimentos para animais (alimento misto para su(cid:146)nos, alimento composto para frangos, concentrado proteico e pr(cid:130)-mistura). Ap(cid:155)s elimina(cid:135)(cid:209)o dos valores isolados, obtiveram-se para a m(cid:130)dia os valores que se apresentam no quadro seguinte: M(cid:130)dias, expressas em g/kg Material de refer(cid:136)ncia Alimento misto para su(cid:146)nos Alimento composto para frangos Concentrado proteico Pr(cid:130)-mistura Amino(cid:145)cido Treonina Cistina/Ciste(cid:146)na Metionina Lisina 6,94 n=15 9,31 n=16 22,32 n=16 58,42 n=16 3,01 n=17 3,92 n=18 5,06 n=17 — 3,27 n=17 5,08 n=18 12,01 n=17 90,21 n=16 9,55 n=13 13,93 n=16 47,74 n=15 98,03 n=16 n= n(cid:156)mero de laborat(cid:155)rios participantes. 7. 1. Repetibilidade Apresentam-se de seguida os valores relativos (cid:133) repetibilidade, expressos em termos de desvio-padr(cid:209)o intralaboratorial, obtidos na intercompara(cid:135)(cid:209)o mencionada, para os amino(cid:145)cidos em estudo: L 257/22 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 19. 9. 98 Desvio-padr(cid:209)o intralaboratorial (Sr), expresso em g/kg Material de refer(cid:136)ncia Alimento misto para su(cid:146)nos Alimento composto para frangos Concentrado proteico Pr(cid:130)-mistura Amino(cid:145)cido Treonina Cistina/Ciste(cid:146)na Metionina Lisina 0,13 n=15 0,20 n=16 0,48 n=16 1,30 n=16 0,10 n=17 0,11 n=18 0,13 n=17 — 0,11 n=17 0,16 n=18 0,27 n=17 2,19 n=16 0,26 n=13 0,28 n=16 0,99 n=15 2,06 n=16 n= n(cid:156)mero de laborat(cid:155)rios participantes. Coeficiente de varia(cid:135)(cid:209)o, expresso em percentagem, do desvio-padr(cid:209)o intralaboratorial (Sr) Material de refer(cid:136)ncia Alimento misto para su(cid:146)nos Alimento composto para frangos Concentrado proteico Pr(cid:130)-mistura Amino(cid:145)cido Treonina Cistina/Ciste(cid:146)na Metionina Lisina 1,9 n=15 2,1 n=16 2,7 n=16 2,2 n=16 3,3 n=17 2,8 n=18 2,6 n=17 — 3,4 n=17 3,1 n=18 2,2 n=17 2,4 n=16 2,8 n=13 2,1 n=16 2,4 n=15 2,1 n=16 n= n(cid:156)mero de laborat(cid:155)rios participantes. 7. 2. Reprodutibilidade Apresentam-se no quadro seguinte os valores do desvio-padr(cid:209)o interlaboratorial obtidos na intercompara(cid:135)(cid:209)o mencionada; Desvio-padr(cid:209)o interlaboratorial (S ), empresso em g/kg r Material de refer(cid:136)ncia Alimento misto para su(cid:146)nos Alimento composto para frangos Concentrado proteico Pr(cid:130)-mistura Amino(cid:145)cido Treonina Cistina/Ciste(cid:146)na Metionina Lisina 0,28 n=15 0,48 n=16 0,85 n=16 2,49 n=16 0,30 n=17 0,34 n=18 0,62 n=17 — 0,23 n=17 0,55 n=18 1,57 n=17 6,20 n=16 0,30 n=13 0,75 n=16 1,24 n=15 6,62 n=16 n= n(cid:156)mero de laborat(cid:155)rios participantes. 19. 9. 98 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 257/23 Coeficiente de varia(cid:135)(cid:209)o, expresso em percentagem, do desvio-padr(cid:209)o interlaboratorial (Sr) Material de refer(cid:136)ncia Alimento misto para su(cid:146)nos Alimento composto para frangos Concentrado proteico Pr(cid:130)-mistura Amino(cid:145)cido Treonina Cistina/Ciste(cid:146)na Metionina Lisina 4,1 n=15 5,2 n=16 3,8 n=16 4,3 n=16 9,9 n=17 8,8 n=18 12,3 n=17 — 7,0 n=17 10,9 n=18 13,0 n=17 6,9 n=16 3,2 n=13 5,4 n=16 3,0 n=15 6,7 n=16 n= n(cid:156)mero de laborat(cid:155)rios participantes. 8. Utiliza(cid:135)(cid:209)o de materiais de refer(cid:136)ncia Deve verificar-se a aplica(cid:135)(cid:209)o correcta do m(cid:130)todo mediante a realiza(cid:135)(cid:209)o de ensaios em duplicado com materiais de refer(cid:136)ncia quando dispon(cid:146)veis. Recomenda-se a calibra(cid:135)(cid:209)o com solu(cid:135)(cid:210)es de calibra(cid:135)(cid:209)o de amino(cid:145)cidos certificadas. 9. 9. 1. 9. 2. 9. 3. Observa(cid:135)(cid:210)es Em virtude das diferen(cid:135)as entre os analisadores de amino(cid:145)cidos, deve tomar-se como orienta(cid:135)(cid:209)o a concentra(cid:135)(cid:209)o final das solu(cid:135)(cid:210)es de calibra(cid:135)(cid:209)o dos amino(cid:145)cidos-padr(cid:209)o (3. 27. 4 e 3. 27. 5) e do hidrolisado (5. 3. 4). Determina-se a zona de resposta linear do aparelho para todos os amino(cid:145)cidos. Dilui-se a solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o com tamp(cid:209)o citrato de modo que os picos surjam no meio dessa zona. Quando se utilizar um aparelho para HPLC para an(cid:145)lise dos hidrolisados, as condi(cid:135)(cid:210)es experimentais devem ser optimizadas de acordo com as recomenda(cid:135)(cid:210)es do fabricante. A aplica(cid:135)(cid:209)o do m(cid:130)todo a alimentos para animais com mais de 1 % de cloretos (concentrados, minerais, suplementos) pode originar uma subestima(cid:135)(cid:209)o da metionina, sendo por isso necess(cid:145)rio um tratamento especial. PARTE B DOSEAMENTO DAS MAT(cid:144)RIAS GORDAS BRUTAS 1. Objecto e dom(cid:146)nio de aplica(cid:135)(cid:209)o Este m(cid:130)todo tem por objectivo o doseamento do teor das mat(cid:130)rias gordas brutas dos alimentos para animais. N(cid:209)o diz respeito (cid:133) an(cid:145)lise das sementes e frutos oleaginosos definidos no Regulamento nº 136/66/CEE do Conselho, de 22 de Setembro de 1966. A utiliza(cid:135)(cid:209)o dos processos a seguir descritos depende da natureza e composi(cid:135)(cid:209)o do alimento e da raz(cid:209)o pela qual a an(cid:145)lise (cid:130) realizada. 1. 1. Processo A — Mat(cid:130)rias gordas brutas extra(cid:146)veis directamente Este m(cid:130)todo (cid:130) aplic(cid:145)vel a materiais simples de origem vegetal, com excep(cid:135)(cid:209)o daqueles a que (cid:130) aplic(cid:145)vel o processo B. 1. 2. Processo B — Mat(cid:130)rias gordas brutas totais Este m(cid:130)todo (cid:130) aplic(cid:145)vel a materiais simples de origem animal e a todos os alimentos compostos para animais. Deve ser utilizado para todos os materiais dos quais as mat(cid:130)rias gordas n(cid:209)o podem ser completamente extra(cid:146)das sem hidr(cid:155)lise pr(cid:130)via, como, por exemplo, gl(cid:156)ten, leveduras, prote(cid:146)nas de batata e produtos submetidos a processos como a extrus(cid:209)o, descama(cid:135)(cid:209)o e aquecimento. L 257/24 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 19. 9. 98 1. 3. Interpreta(cid:135)(cid:209)o dos resultados Sempre que pelo processo B for obtido um resultado de valor mais elevado do que o obtido pelo processo A, o resultado obtido com o processo B ser(cid:145) considerado como o verdadeiro valor. 2. Princ(cid:146)pio 2. 1. Processo A A amostra (cid:130) extra(cid:146)da pelo (cid:130)ter de petr(cid:155)leo. O solvente (cid:130) destilado e o res(cid:146)duo seco e pesado. 2. 2. Processo B A amostra (cid:130) tratada a quente pelo (cid:145)cido clor(cid:146)drico. A mistura (cid:130) arrefecida e filtrada. Depois de ter sido lavado e seco, o res(cid:146)duo (cid:130) submetido a an(cid:145)lise segundo o processo A. 3. 3. 1. Reagentes (cid:144)ter de petr(cid:155)leo, intervalo de ebuli(cid:135)(cid:209)o: 40 a 60 (cid:190)C. O (cid:146)ndice de bromo deve ser inferior a 1 e o res(cid:146)duo ap(cid:155)s evapora(cid:135)(cid:209)o inferior a 2 mg/100 ml. 3. 2. Sulfato de s(cid:155)dio, anidro. 3. 3. (cid:214)cido clor(cid:146)drico 3 M. 3. 4. Adjuvante de filtra(cid:135)(cid:209)o, por exemplo, terra de diatom(cid:145)ceas, Hyflo-supercel. 4. 4. 1. Aparelhos Extractor. Se o dispositivo for munido de um sif(cid:209)o (aparelho Soxhlet), o d(cid:130)bito do refluxo deve ser regulado de maneira a obter cerca de 10 ciclos por hora. Se se tratar de um aparelho sem sif(cid:209)o, o d(cid:130)bito do l(cid:146)quido reflu(cid:146)do deve ser de cerca de 10 ml por minuto. 4. 2. Filtros de extrac(cid:135)(cid:209)o em forma de dedal, isentos de mat(cid:130)rias sol(cid:156)veis no (cid:130)ter de petr(cid:155)leo, com uma porosidade compat(cid:146)vel com as exig(cid:136)ncias do ponto 4. 1. 4. 3. Estufa de desseca(cid:135)(cid:209)o, quer pelo v(cid:145)cuo a 75 (cid:190)C 5 3 (cid:190)C, quer pela press(cid:209)o atmosf(cid:130)rica a 100 (cid:190)C 5 3 (cid:190)C. 5. Modo operat(cid:155)rio 5. 1. Processo A (ver ponto 8. 1) Pesar 5 g de amostra, com a aproxima(cid:135)(cid:209)o de 1 mg, introduzi-los num filtro de extrac(cid:135)(cid:209)o (4. 2) e cobri-los com um tamp(cid:209)o de algod(cid:209)o desengordurado. Colocar o filtro de extrac(cid:135)(cid:209)o num extractor (4. 1) e extrair durante 6 horas pelo (cid:130)ter de petr(cid:155)leo (3. 1). Recolher o extracto de (cid:130)ter de petr(cid:155)leo num bal(cid:209)o seco, contendo fragmentos de pedra pomes (1) e pesado. Eliminar o solvente por destila(cid:135)(cid:209)o. Secar o res(cid:146)duo, colocando o bal(cid:209)o durante uma hora e meia numa estufa de desseca(cid:135)(cid:209)o (4. 3). Deixar arrefecer num exsicador e pesar. Secar de novo durante 30 minutos para ter a certeza de que o peso da mat(cid:130)ria gorda permanece constante (a perda de peso entre duas pesagens sucessivas deve ser inferior a 1 mg). 5. 2. Processo B Pesar, com 1 mg de aproxima(cid:135)(cid:209)o, 2,5 g da amostra (ver ponto 8. 2), introduzi-los num copo de 400 ml ou num bal(cid:209)o volum(cid:130)trico de 300 ml e juntar 100 ml de (cid:145)cido clor(cid:146)drico 3 M (3. 3) e alguns fragmentos de pedra pomes. Cobrir o copo com um vidro de rel(cid:155)gio ou munir o bal(cid:209)o volum(cid:130)trico de um condensador de refluxo. Deixar ferver suavemente durante uma hora, (cid:133) chama fraca ou sobre uma placa de aquecimento. Evitar que o produto adira (cid:133)s paredes do recipiente. Arrefecer e adicionar uma quantidade de adjuvante de filtra(cid:135)(cid:209)o (3. 4) suficiente para evitar qualquer perda de mat(cid:130)ria gorda na filtra(cid:135)(cid:209)o. Filtrar com papel de filtro duplo, humidificado e isento de mat(cid:130)rias gordas. Lavar o res(cid:146)duo com (cid:145)gua fria at(cid:130) (cid:133) neutraliza(cid:135)(cid:209)o do filtrado. Verificar que o filtro n(cid:209)o cont(cid:130)m mat(cid:130)rias gordas. A presen(cid:135)a destas indica que antes da hidr(cid:155)lise deve ser efectuada uma extrac(cid:135)(cid:209)o da amostra pelo (cid:130)ter de petr(cid:155)leo segundo o processo A. Colocar o papel de filtro duplo contendo o res(cid:146)duo num vidro de rel(cid:155)gio e secar durante uma hora e meia na estufa a 100 (cid:190)C 5 3 (cid:190)C. Introduzir o papel de filtro duplo contendo o res(cid:146)duo seco num filtro de extrac(cid:135)(cid:209)o (4. 2) e cobrir com um tamp(cid:209)o de algod(cid:209)o desengordurado. Colocar o filtro de extrac(cid:135)(cid:209)o num extractor (4. 1) e prosseguir como indicado nos segundo e terceiro par(cid:145)grafos do ponto 5. 1. (1) Substituir os fragmentos de pedra pomes por p(cid:130)rolas de vidro sempre que a mat(cid:130)ria gorda deva ser objecto de exames qualitativos posteriores. 19. 9. 98 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 257/25 6. Express(cid:209)o dos resultados Exprimir o peso do res(cid:146)duo em percentagem da amostra. 7. Repetibilidade A diferen(cid:135)a entre os resultados de duas determina(cid:135)(cid:210)es paralelas efectuadas na mesma amostra pelo mesmo analista n(cid:209)o deve ultrapassar: — 0,2 %, em valor absoluto, para teores de mat(cid:130)rias gordas brutas inferiores a 5 %, — 4,0 % do resultado mais elevado para os teores de 5 a 10 %, — 0,4 % em valor absoluto para teores superiores a 10 %. 8. Observa(cid:135)(cid:210)es 8. 1. Para produtos de elevado teor de mat(cid:130)rias gordas, dif(cid:146)ceis de triturar ou inadequados para a colheita de uma amostra reduzida e homog(cid:130)nea, proceder como se segue: Pesar, com a aproxima(cid:135)(cid:209)o de 1 mg, 20 g de amostra e mistur(cid:145)-los com 10 g ou mais de sulfato de s(cid:155)dio anidro (3. 2). Extra(cid:146)r pelo (cid:130)ter de petr(cid:155)leo (3. 1), como indicado em 5. 1. Completar o extracto obtido com (cid:130)ter de petr(cid:155)leo (3. 1) at(cid:130) perfazer 500 ml e misturar. Introduzir 50 ml de solu(cid:135)(cid:209)o num pequeno bal(cid:209)o seco, contendo alguns fragmentos de pedra pomes (1) e pesado. Eliminar o solvente por destila(cid:135)(cid:209)o, secar e prosseguir como indicado no (cid:156)ltimo par(cid:145)grafo do ponto 5. 1. Eliminar o solvente do res(cid:146)duo de extrac(cid:135)(cid:209)o que se encontra no filtro de extrac(cid:135)(cid:209)o, triturar o res(cid:146)duo at(cid:130) ao calibre de 1 mm, coloc(cid:145)-lo novamente no filtro de extrac(cid:135)(cid:209)o (n(cid:209)o adicionar sulfato de s(cid:155)dio) e prosseguir como indicado nos segundo e terceiro par(cid:145)grafos do ponto 5. 1. O teor de mat(cid:130)rias gordas brutas em percentagem da amostra (cid:130) dado pela f(cid:155)rmula: (10 a + b) (cid:253) 5 em que: a = massa, em gramas, do res(cid:146)duo da primeira extrac(cid:135)(cid:209)o (al(cid:146)quota do extracto), b = massa, em gramas, do res(cid:146)duo da segunda extrac(cid:135)(cid:209)o. 8. 2. A amostra de ensaio de produtos pobres em mat(cid:130)rias gordas pode ser elevada a 5 g. 8. 3. Os alimentos para animais de companhia com um elevado teor de (cid:145)gua podem ter que ser misturados com sulfato de s(cid:155)dio anidro antes da hidr(cid:155)lise e extrac(cid:135)(cid:209)o como atrav(cid:130)s do processo B. 8. 4. No ponto 5. 2, pode ser mais eficaz utilizar (cid:145)gua quente em vez de fria para lavar o res(cid:146)duo ap(cid:155)s filtra(cid:135)(cid:209)o. 8. 5. Para alguns alimentos para animais, o tempo de secagem de 1 hora e 30 minutos pode ter que ser aumentado. A secagem excessiva deve ser evitada pois pode levar a resultados baixos. Pode tamb(cid:130)m ser utilizado um forno de microndas. 8. 6. A pr(cid:130)-extrac(cid:135)(cid:209)o pelo processo A antes da hidr(cid:155)lise e a re-extrac(cid:135)(cid:209)o pelo processo B s(cid:209)o recomendadas quando o teor de mat(cid:130)ria gorda bruta for superior a 15 %. Em certa medida, isto depende da natureza do alimento e da mat(cid:130)ria gorda do alimento. PARTE C DOSEAMENTO DO OLAQUINDOX N1,N4-di(cid:155)xido de 2-(N-2’-(hidroxietil)carbamoil)-3-metilquinoxalina 1. Objectivo e dom(cid:146)nio de aplica(cid:135)(cid:209)o O presente m(cid:130)todo permite dosear o olaquindox nos alimentos para animais. O limite inferior de doseamento (cid:130) de 5 mg/kg. 2. Princ(cid:146)pio A amostra (cid:130) submetida a uma extrac(cid:135)(cid:209)o por uma mistura de (cid:145)gua e de metanol. O teor de olaquindox (cid:130) determinado por cromatografia l(cid:146)quida de alta resolu(cid:135)(cid:209)o (HPLC) de fase inversa, com detector de UV. (1) Substituir os fragmentos de pedra pomes por p(cid:130)rolas de vidro sempre que a mat(cid:130)ria gorda deva ser objecto de exames qualitativos posteriores. L 257/26 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 19. 9. 98 3. Reagentes 3. 1. Metanol. 3. 2. Metanol para HPLC. 3. 3. (cid:214)gua para HPLC. 3. 4. Fase m(cid:155)vel para HPLC. Mistura de (cid:145)gua (3. 3) e de metanol (3. 2), 900 + 100 (V + V). 3. 5. Subst(cid:131)ncia-padr(cid:209)o: metilquinoxalina], E851. olaquindox puro. [N1,N4-di(cid:155)xido de 2-(N-2’-(hidroxietil)carbamoil)-3- 3. 5. 1. Solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o m(cid:209)e de olaquindox, 250 lg/ml: Pesar com uma aproxima(cid:135)(cid:209)o de 0,1 mg, 50 mg de olaquindox (3. 5) num bal(cid:209)o aferido de 200 ml e acrescentar aproximadamente 190 ml de (cid:145)guia. Colocar o bal(cid:209)o num banho de ultra-sons (4. 1) durante 20 minutos. Depois do tratamento ultra-s(cid:155)nico, levar a solu(cid:135)(cid:209)o (cid:133) temperatura ambiente, encher com (cid:145)gua at(cid:130) ao tra(cid:135)o e misturar. Envolver o bal(cid:209)o com uma folha de alum(cid:146)nio e coloc(cid:145)-lo no frigor(cid:146)fico. Esta solu(cid:135)(cid:209)o deve ser renovada mensalmente. 3. 5. 2. Solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o interm(cid:130)dia de olaquindox, 25 lg/ml: Transferir 10,0 ml de solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o m(cid:209)e (3. 5. 1) para um bal(cid:209)o aferido de 100 ml, encher com a fase m(cid:155)vel at(cid:130) ao tra(cid:135)o e misturar. Envolver o bal(cid:209)o com uma folha de alum(cid:146)nio e coloc(cid:145)-lo no frigor(cid:146)fico. Esta solu(cid:135)(cid:209)o deve ser renovada diariamente. 3. 5. 3. Solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o de trabalho: Transferir para bal(cid:210)es aferidos de 50 ml: 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 e 20,0 ml da solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o interm(cid:130)dia (3. 5. 2). Encher com a fase m(cid:155)vel (3. 4) at(cid:130) ao tra(cid:135)o e misturar. Envolver o bal(cid:209)o com uma folha de alum(cid:146)nio. Estas solu(cid:135)(cid:210)es correspondem, respectivamente, a 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 e 10,0 lg de olaquindox por ml. Estas solu(cid:135)(cid:210)es devem ser renovadas diariamente. 4. Aparelhagem 4. 1. Banho de ultra-sons. 4. 2. Agitador mec(cid:131)nico 4. 3. Equipamento HPLC com detector de UV de comprimento de onda vari(cid:145)vel ou um detector por d(cid:146)odos. 4. 3. 1. Coluna de cromatografia de 250 mm (cid:253) 4 mm, C18, part(cid:146)culas de 10 lm, ou equivalente. 4. 4. Filtro de membrana de 0,45 lm. 5. Procedimento Nota: o olaquindox (cid:130) sens(cid:146)vel (cid:133) luz. Efectuar todas as opera(cid:135)(cid:210)es sob luz difusa ou utilizar material de vidro ambarizado. 5. 1. Generalidades 5. 1. 1. Analisar um branco (alimento de refer(cid:136)ncia) para verificar a aus(cid:136)ncia de olaquindox ou de subst(cid:131)ncias interferentes. 5. 1. 2. Efectuar um teste de recupera(cid:135)(cid:209)o, analisando um branco (alimento de refer(cid:136)ncia) a que se tenha adicionado uma certa quantidade de olaquindox, semelhante (cid:133) que est(cid:145) presente na amostra. Para obter uma concentra(cid:135)(cid:209)o de 50 mg/kg, transferir 10,0 ml da solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o m(cid:209)e (3. 5. 1) para um Erlenmayer de 250 ml e concentrar a solu(cid:135)(cid:209)o por evapora(cid:135)(cid:209)o at(cid:130) cerca de 0,5 ml. Acrescentar 50 g do branco (alimento de refer(cid:136)ncia), misturar cuidadosamente e esperar 10 minutos misturando do novo v(cid:145)rias vezes antes de proceder (cid:133) extrac(cid:135)(cid:209)o (5. 2). Nota: No caso do presente m(cid:130)todo, o branco (alimento de refer(cid:136)ncia), deve ser de um tipo semelhante ao da amostra, n(cid:209)o devendo ser nele detectada a presen(cid:135)a de olaquindox. 5. 2. Extrac(cid:135)(cid:209)o Pesar, com uma aproxima(cid:135)(cid:209)o de 0,01 g, cerca de 50 g da amostra. Transferir para um Erlenmayer de 1 000 ml, acrescentar 100 ml de metanol (3. 1) e colocar o bal(cid:209)o durante 5 minutos num banho de ultrasons (4. 1). Acrescentar 410 ml de (cid:145)gua e deixar no banho de ultrasons durante mais 15 minutos. Retirar o Erlenmayer do banho de ultrasons, agit(cid:145)-lo durante 30 minutos no agitador (4. 2) e filtrar atrav(cid:130)s de um filtro dobrado. Transferir 10,0 ml do filtrado para um bal(cid:209)o aferido de 20 ml, encher at(cid:130) ao tra(cid:135)o com (cid:145)gua e misturar. Filtrar uma al(cid:146)quota atrav(cid:130)s de um filtro de membrana (4. 4. ) (ver ponto 9). Proceder ao doseamento por HPLC (5. 3). 19. 9. 98 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 257/27 5. 3. Doseamento por HPLC 5. 3. 1. P a r (cid:131) m e t r o s : As condi(cid:135)(cid:210)es seguintes s(cid:209)o propostas a t(cid:146)tulo indicativo, podendo ser aplicadas outras desde que forne(cid:135)am resultados equivalentes. Coluna anal(cid:146)tica (4. 3. 1) Fase m(cid:155)vel (3. 4): Fluxo: Comprimento de onda de detec(cid:135)(cid:209)o: Volume da injec(cid:135)(cid:209)o: mistura de (cid:145)gua (3. 3. ) e de metanol (3. 2), 900+100 (V+V) 1,5 a 2 ml/minuto 380 nm 20 ll-100 ll Verificar a estabilidade do sistema cromatogr(cid:145)fico, injectando v(cid:145)rias vezes a solu(cid:135)(cid:209)o-padr(cid:209)o de trabalho (3. 5. 3) contendo 2,5 lg/ml at(cid:130) se obterem alturas de pico e tempos de reten(cid:135)(cid:209)o constantes. 5. 3. 2. C u r v a d e c a l i b r a (cid:135) (cid:209) o Injectar cada solu(cid:135)(cid:209)o de trabalho (3. 5. 3) v(cid:145)rias vezes e determinar as alturas (superf(cid:146)cies) de pico m(cid:130)dias para cada concentra(cid:135)(cid:209)o. Estabelecer uma curva de calibra(cid:135)(cid:209)o, utilizando as alturas (superf(cid:146)cies) de pico m(cid:130)dias das solu(cid:135)(cid:210)es de trabalho como ordenadas e as concentra(cid:135)(cid:210)es correspondentes em lg/ml como abcissas. 5. 3. 3. S o l u (cid:135) (cid:209) o d a a m o s t r a Injectar o extracto da amostra (5. 2) v(cid:145)rias vezes, utilizando o mesmo volume que o usado no caso das solu(cid:135)(cid:210)es de trabalho, e determinar a altura (superf(cid:146)cie) m(cid:130)dia dos picos do olaquindox. 6. C(cid:145)lculo dos resultados A partir da altura (superf(cid:146)cie) m(cid:130)dia dos picos do olaquindox da solu(cid:135)(cid:209)o da amostra, determinar a concentra(cid:135)(cid:209)o da solu(cid:135)(cid:209)o da amostra em lg/ml por refer(cid:136)ncia (cid:133) curva de calibra(cid:135)(cid:209)o (5. 3. 2). O teor de olaquindox, expresso em mg/kg da amostra, (cid:130) dado pela f(cid:155)rmula seguinte: T = c (cid:253) 1 000 m em que: c = concentra(cid:135)(cid:209)o de olaquindox no extracto da amostra (5. 2) em lg/ml m = massa da toma para an(cid:145)lise em g. 7. Valida(cid:135)(cid:209)o dos resultados 7. 1. Identidade A identidade do analito pode ser confirmada por co-cromatografia ou pela utiliza(cid:135)(cid:209)o de um detector por d(cid:146)odos que permita comparar os espectros do extracto da amostra (5. 2) e da solu(cid:135)(cid:209)o de trabalho (3. 5. 3) contendo 5,0 lg/ml. 7. 1. 1. C o - c r o m a t o g r a f i a Adiciona-se uma quantidade apropriada da solu(cid:135)(cid:209)o de trabalho (3. 5. 3) a um extracto da amostra (5. 2). A quantidade de olaquindox acrescentada deve ser semelhante (cid:133) quantidade de olaquindox encontrada no extracto da amostra. Apenas deve aumentar a altura do pico de olaquindox, de acordo com a quantidade acrescentada e a dissolu(cid:135)(cid:209)o do extracto. A largura do pico a meio da sua altura n(cid:209)o deve diferir mais de 10 % da largura inicial do pico de olaquindox do extracto da amostra n(cid:209)o suplementada. 7. 1. 2. D e t e c (cid:135) (cid:209) o p o r d (cid:146) o d o s Avaliar os resultados de acordo com os seguintes crit(cid:130)rios: a) O comprimento de onda de absor(cid:135)(cid:209)o m(cid:145)xima dos espectros da amostra e do padr(cid:209)o, registado no v(cid:130)rtice do pico do cromatograma, deve estar contido dentro de uma margem determinada pelo poder de resolu(cid:135)(cid:209)o do sistema de detec(cid:135)(cid:209)o. No caso da detec(cid:135)(cid:209)o por d(cid:146)odos, (cid:130) geralmente de 5 2 nm; L 257/28 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 19. 9. 98 b) Entre 220 e 400 nm, os espectros da amostra e do padr(cid:209)o, registados no v(cid:130)rtice do pico do cromatograma, n(cid:209)o devem ser diferentes, para as partes do espectro situadas entre 10 e 100 % da observ(cid:131)ncia relativa. Este crit(cid:130)rio (cid:130) preenchido quando est(cid:209)o presentes os mesmos m(cid:145)ximos e quando, em nenhum ponto observado, o desvio entre os espectros (cid:130) superior a 15 % da densidade (cid:155)ptica do espectro no v(cid:130)rtice do pico; c) Entre 220 e 400 nm da curva ascendente, do v(cid:130)rtice e da curva descendente do pico, os espectros produzidos pelo extracto da amostra n(cid:209)o devem ser diferentes uns dos outros para as partes do espectro situadas entre 10 e 100 % da absorv(cid:131)ncia relativa. Este crit(cid:130)rio (cid:130) preenchido quando est(cid:209)o presentes os mesmos m(cid:145)ximos e quando, em todos os pontos observados, o desvio entre os espectros n(cid:209)o (cid:130) superior a 15 % da absorv(cid:131)ncia do espectro no v(cid:130)rtice do pico. Se nenhum destes crit(cid:130)rios for preenchido, a presen(cid:135)a do analito n(cid:209)o ter(cid:145) sido confirmada. 7. 2. Repetibilidade A diferen(cid:135)a entre os resultados de dois doseamentos paralelos efectuados na mesma amostra n(cid:209)o deve exceder 15 % do resultado superior para teores de olaquindox entre 10 e 200 mg/kg. 7. 3. Recupera(cid:135)(cid:209)o Para uma amostra de branco suplementada, a recupera(cid:135)(cid:209)o deve ser pelo menos de 90 %. 8. Resultados de um estudo interlaborat(cid:155)rios Foi organizado um estudo interlaborat(cid:155)rios comunit(cid:145)rio, no decurso do qual foram analisados, em 13 laborat(cid:155)rios, quatro amostras de alimento para leit(cid:210)es, incluindo um branco (alimento de refer(cid:136)ncia). Os resultados desse estudo s(cid:209)o apresentados em seguida: L N m(cid:130)dia (mg/kg) Sr (mg/kg) (mg/kg) S R CVr (%) (%) CV R conte(cid:156)do nominal (mg/kg) Recupera(cid:135)(cid:209)o % Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Amostra 4 13 40 — — — — — — — 10 40 14,6 0,82 1,62 5,6 11,1 15 97,3 11 44 48,0 2,05 4,28 4,3 8,9 50 96,0 11 44 95,4 6,36 8,42 6,7 8,8 100 95,4 : n(cid:156)mero de laborat(cid:155)rios L : n(cid:156)mero de valores individuais n S : desvio-padr(cid:209)o da repetibilidade r : desvio-padr(cid:209)o da reprodutibilidade SR CV : coeficiente de varia(cid:135)(cid:209)o do desvio-padr(cid:209)o da repetibilidade CVR : coeficiente de varia(cid:135)(cid:209)o do desvio-padr(cid:209)o da reprodutibilidade. r 9. Observa(cid:135)(cid:209)o Embora n(cid:209)o tenha sido validado em alimentos para animais com teores de olaquindox superiores a 100 mg/kg, o m(cid:130)todo pode ser utilizado satisfatoriamente, mediante uma redu(cid:135)(cid:209)o da toma de ensaio e/ou dilui(cid:135)(cid:209)o do extracto da amostra (5. 2), de forma a obter uma concentra(cid:135)(cid:209)o no intervalo da curva de calibra(cid:135)(cid:209)o (5. 3. 2)


title: Kommissionens förordning (EG) nr 1890/98 av den 3 september 1998 om ändring av förordning (EG) nr 1780/97 om tillämpningsföreskrifter för rådets förordning (EG) nr 723/97 om genomförande av medlemsstaternas åtgärdsprogram på området för kontroll av utgifterna för EUGFJ:s garantisektion

eurovoc_concepts:
Community budget
EAGGF Guarantee Section
EU Member State
action programme
agricultural expenditure
aid to agriculture

text: L 245/28 SV Europeiska gemenskapernas officiella tidning 4. 9. 98 KOMMISSIONENS F(cid:153)RORDNING (EG) nr 1890/98 av den 3 september 1998 om (cid:132)ndring av f(cid:148)rordning (EG) nr 1780/97 om till(cid:132)mpningsf(cid:148)reskrifter f(cid:148)r r(cid:134)dets f(cid:148)rordning (EG) nr 723/97 om genomf(cid:148)rande av medlemsstaternas (cid:134)tg(cid:132)rdspro- gram p(cid:134) omr(cid:134)det f(cid:148)r kontroll av utgifterna f(cid:148)r EUGFJ:s garantisektion EUROPEISKA GEMENSKAPERNAS KOMMISSION HAR ANTAGIT DENNA F(cid:153)RORDNING med beaktande av F(cid:148)rdraget om uppr(cid:132)ttandet av Euro- peiska gemenskapen, med beaktande av r(cid:134)dets f(cid:148)rordning (EG) nr 723/97 av den 22 april 1997 om genomf(cid:148)rande av medlemsstaternas (cid:134)tg(cid:132)rdsprogram p(cid:134) omr(cid:134)det f(cid:148)r kontroll av utgifterna f(cid:148)r EUGFJ:s garantisektion (1), s(cid:132)rskilt artikel 6 i denna, och av f(cid:148)ljande sk(cid:132)l: f(cid:148)r I artiklarna 2 och 3 i kommissionens f(cid:148)rordning (EG) nr 1780/97 (2) om till(cid:132)mpningsf(cid:148)reskrifter f(cid:148)rordning (EG) nr 723/97 f(cid:148)reskrivs bland annat p(cid:134) vilket s(cid:132)tt och inom vilken tidsram gemenskapens finansiella bidrag skall betalas till medlemsstaterna. Det f(cid:148)reslagna betal- ningss(cid:132)ttet med en enda (cid:134)rlig betalning som omfattar restbeloppet fr(cid:134)n det f(cid:148)reg(cid:134)ende (cid:134)ret och f(cid:148)rskottet f(cid:148)r det p(cid:134)f(cid:148)ljande (cid:134)ret har visat sig sv(cid:134)rt att till(cid:132)mpa i praktiken och det tar inte h(cid:132)nsyn till de anslag som budgetmyndig- heten har beviljat f(cid:148)r det p(cid:134)f(cid:148)ljande (cid:134)ret. f(cid:148)rordning (EG) nr 296/96 (3), F(cid:148)r att f(cid:148)rb(cid:132)ttra administrationen av (cid:134)tg(cid:132)rderna b(cid:148)r de f(cid:148)rskott som betalas till medlemsstaterna enligt artikel 7 i senast kommissionens (cid:132)ndrad genom f(cid:148)rordning (EG) nr 1391/97 (4) inte f(cid:134) dras av fr(cid:134)n de oanv(cid:132)nda beloppen fr(cid:134)n det f(cid:148)reg(cid:134)ende (cid:134)ret utan fr(cid:134)n det f(cid:148)rrf(cid:148)rra (cid:134)ret och det maximala beloppet f(cid:148)r gemenskapens finansiella bidrag b(cid:148)r inte f(cid:134) fastst(cid:132)llas f(cid:148)rr(cid:132)n budgetmyndigheten har beviljat anslagen. De (cid:134)tg(cid:132)rder som f(cid:148)reskrivs i denna f(cid:148)rordning (cid:132)r f(cid:148)renliga med yttrandet fr(cid:134)n EUGFJ-kommitt(cid:130)n. ”1. Medlemsstaterna skall l(cid:132)gga fram de (cid:134)tg(cid:132)rdspro- gram som avser det f(cid:148)rsta och andra (cid:134)ret d(cid:134) f(cid:148)rordning (EG) nr 723/97 skall till(cid:132)mpas f(cid:148)re slutet av den andra ikrafttr(cid:132)dandet av denna m(cid:134)naden efter dagen f(cid:148)r som (cid:134)tagits efter den f(cid:148)rordning. Endast utgifter samfinansiering av till 1 januari 1997 ber(cid:132)ttigar gemenskapen. F(cid:148)r p(cid:134)f(cid:148)ljande (cid:134)r skall (cid:134)tg(cid:132)rdspro- grammen l(cid:132)mnas in enligt f(cid:148)rfarandet i artikel 2. 1 och 2. 2 i n(cid:132)mnda f(cid:148)rordning. Ber(cid:132)kningarna skall g(cid:148)ras enligt tabellen i bilagan. Inom en m(cid:134)nad efter det att Europeiska gemen- 2. skapernas allm(cid:132)nna budget har antagits f(cid:148)r det aktuella budget(cid:134)ret skall kommissionen p(cid:134) grundval av de uppgifter som medlemsstaterna l(cid:132)mnat in fastst(cid:132)lla det maximala beloppet finansiella bidrag uttryckt i varje medlemsstats valuta. f(cid:148)r gemenskapens Kommissionen skall underr(cid:132)tta de ber(cid:148)rda medlems- staterna om eventuella utgifter som inte beviljas gemenskapsfinansiering och orsakerna till detta. 3. Senast den 31 maj varje (cid:134)r skall varje medlemsstat l(cid:132)gga fram en redog(cid:148)relse f(cid:148)r kommissionen f(cid:148)r de f(cid:148)reg(cid:134)ende kalen- utgifter som betalats under det der(cid:134)ret. F(cid:148)r dessa utgifter skall gemenskapens finansi- ella bidrag maximalt uppg(cid:134) till den andel som anges i artikel 4. 2 i ovann(cid:132)mnda f(cid:148)rordning och den skall begr(cid:132)nsas till de belopp som presenteras i (cid:134)tg(cid:132)rdspro- grammen och som kommissionen anser st(cid:148)dber(cid:132)tti- gande. F(cid:148)r (cid:134)r 1997 skall sista betalningsdag f(cid:148)r utgif- terna emellertid f(cid:148)rl(cid:132)ngas till den 31 augusti 1998 och redog(cid:148)relsen f(cid:148)r betalda utgifter skall vara kommis- sionen till handa den 31 oktober 1998. H(cid:142)RIGENOM F(cid:153)RESKRIVS F(cid:153)LJANDE. Denna redog(cid:148)relse skall utarbetas enligt bilagan. ” tabellen i Artikel 1 2) Artikel 3 skall ers(cid:132)ttas med f(cid:148)ljande: F(cid:148)rordning (EG) nr 1780/97 (cid:132)ndras p(cid:134) f(cid:148)ljande s(cid:132)tt: ”Artikel 3 1) I artikel 2 skall punkterna 1, 2 och 3 ers(cid:132)ttas med f(cid:148)ljande: (1) EGT L 108, 25. 4. 1997, s. 6. (2) EGT L 252, 16. 9. 1997, s. 20. (3) EGT L 39, 17. 2. 1996, s. 5. (4) EGT L 190, 19. 7. 1997, s. 20. Det maximala beloppet enligt artikel 4. 2 i f(cid:148)rordning (EG) nr 723/97, med avdrag f(cid:148)r eventuella oanv(cid:132)nda belopp utbetalda med avseende p(cid:134) f(cid:148)rrf(cid:148)rra (cid:134)ret, skall betraktas som de utgifter som avses i artikel 7 i f(cid:148)rord- ning (EG) nr 296/96 den m(cid:134)nad d(cid:134) detta belopp fast- st(cid:132)lls av kommissionen. ” 4. 9. 98 SV Europeiska gemenskapernas officiella tidning L 245/29 3) F(cid:148)ljande artikel skall l(cid:132)ggas till som artikel 3 a: ”Artikel 3 a F(cid:148)r de tv(cid:134) senaste (cid:134)rens till(cid:132)mpning av denna f(cid:148)rord- in till skall det oanv(cid:132)nda beloppet betalas ning, EUGFJ till juni m(cid:134)nads utgifter f(cid:148)r det budget(cid:134)r som f(cid:148)ljer p(cid:134) genomf(cid:148)ran- de(cid:134)ret. ” l(cid:132)mplig budgetpost f(cid:148)r 4) I sista stycket i punkt 5 i bilagan till den h(cid:132)r f(cid:148)rord- ”uppstod/kommer att uppst(cid:134)” ers(cid:132)ttas ningen skall med ”betalades/kommer att betalas”. Artikel 2 Denna f(cid:148)rordning tr(cid:132)der i kraft den tredje dagen efter det att den har offentliggjorts i Europeiska gemenskapernas officiella tidning. Denna f(cid:148)rordning (cid:132)r till alla delar bindande och direkt till(cid:132)mplig i alla medlemsstater. Utf(cid:132)rdad i Bryssel den 3 september 1998. P(cid:134) kommissionens v(cid:132)gnar Franz FISCHLER Ledamot av kommissionen


title: Vingt-troisième directive 98/62/CE de la Commission du 3 septembre 1998 portant adaptation au progrès technique des annexes II, III, VI et VII de la directive 76/768/CEE du Conseil concernant le rapprochement des législations des États membres relatives aux produits cosmétiques (Texte présentant de l'intérêt pour l'EEE)

text: L 253/20 FR Journal officiel des Communaut(cid:130)s europ(cid:130)ennes 15. 9. 98 VINGT-TROISI(cid:221)ME DIRECTIVE 98/62/CE DE LA COMMISSION du 3 septembre 1998 portant adaptation au progr(cid:138)s technique des annexes II, III, VI et VII de la directive 76/768/CEE du Conseil concernant le rapprochement des l(cid:130)gislations des (cid:144)tats membres relatives aux produits cosm(cid:130)tiques (Texte pr(cid:130)sentant de l’int(cid:130)r(cid:136)t pour l’EEE) LA COMMISSION DES COMMUNAUT(cid:144)S EUROP(cid:144)ENNES, vu le trait(cid:130) instituant la Communaut(cid:130) europ(cid:130)enne, vu la directive 76/768/CEE du Conseil du 27 juillet 1976 concernant le rapprochement des l(cid:130)gislations des (cid:144)tats membres relatives aux produits cosm(cid:130)tiques (1), modifi(cid:130)e en dernier lieu par la directive 98/16/CE de la Commis- sion (2), et notamment son article 8, paragraphe 2, vu la consultation du comit(cid:130) scientifique de cosm(cid:130)tologie, consid(cid:130)rant que, en l’absence de nouvelles donn(cid:130)es scientifiques, notamment dans le domaine de la toxicit(cid:130) (cid:133) long terme, le Comit(cid:130) scientifique de cosm(cid:130)tologie recommande que l’usage des muscs mosk(cid:138)ne et tib(cid:130)t(cid:138)ne soit interdit dans les produits cosm(cid:130)tiques dans la mesure o(cid:151) ils pr(cid:130)sentent un risque pour la sant(cid:130) des consomma- teurs; consid(cid:130)rant qu’une nouvelle (cid:130)valuation toxicologique du chlorure de strontium, fond(cid:130)e sur de nouvelles donn(cid:130)es transmises par l’industrie, montre que l’utilisation de cette substance peut (cid:136)tre (cid:130)tendue sans risque pour la s(cid:130)curit(cid:130) aux shampooings et aux produits de soin pour le visage pourvu que soit respect(cid:130)e une concentration maximale; consid(cid:130)rant que, sur la base des derni(cid:138)res donn(cid:130)es scienti- fiques, l’usage du chlorure, du bromure et du saccharinate de benzalkonium comme conservateur peut (cid:136)tre admis dans les produits cosm(cid:130)tiques dans le respect des condi- tions fix(cid:130)es par la directive; consid(cid:130)rant que, sur la base des derni(cid:138)res recherches et donn(cid:130)es scientifiques, le 3-iodo-2-propynyl butylcarba- mate (iodopropynyl butylcarbamate) peut (cid:136)tre utilis(cid:130) provisoirement comme conservateur (cid:133) condition de respecter certaines conditions de concentration et d’utili- sation; consid(cid:130)rant, sur la base des derni(cid:138)res donn(cid:130)es scienti- fiques, que peut (cid:136)tre admis dans les produits cosm(cid:130)tiques l’usage comme filtre UV du ph(cid:130)nol 2-(2H-benzotria- zol-2-yl)-4-m(cid:130)thyl-6-(2-m(cid:130)thyl-3-(1,3,3,3-t(cid:130)tram(cid:130)thyl-1- (trim(cid:130)thylsilyl)oxy)-disiloxanyl)propyl) dans le respect des conditions fix(cid:130)es par la directive; (1) JO L 262 du 27. 9. 1976, p. 169. (2) JO L 77 du 14. 3. 1998, p. 44. consid(cid:130)rant, sur la base des derni(cid:138)res donn(cid:130)es scienti- fiques, que peut (cid:136)tre admis dans les produits cosm(cid:130)tiques l’usage comme filtre UV de l’acide benzo(cid:139)que,4,4-((6-(((1,1- dim(cid:130)thyl(cid:130)thyl)amino)carbonyl)ph(cid:130)nyl)amino)1,3,5-triazine- 2,4-diyl)diimino)bis-,bis(2-(cid:130)thylhexyl)ester); sur la base des derni(cid:138)res consid(cid:130)rant, recherches et donn(cid:130)es scientifiques, que peut (cid:136)tre admis dans les produits cosm(cid:130)tiques l’usage comme filtre UV de l’(cid:130)thyl- 4-aminobenzoate (cid:130)thoxyl(cid:130), de l’isopentyl-4-m(cid:130)thoxycin- namate, 2,4,6-trianilino-(p-carbo-2’-(cid:130)thylhexyl- 1’oxy)-1,3,5-triazine et du 2-(cid:130)thylhexyl salicylate dans le respect des conditions fix(cid:130)es par la directive; de la sur la base des derni(cid:138)res consid(cid:130)rant, recherches et donn(cid:130)es scientifiques, que peut (cid:136)tre admis dans les produits cosm(cid:130)tiques l’usage comme filtre UV du 3-(4Y- et du 3-benzylid(cid:138)ne m(cid:130)thylbenzylid(cid:138)ne)-d-1camphre camphre; consid(cid:130)rant que les mesures pr(cid:130)vues dans la pr(cid:130)sente directive sont conformes (cid:133) l’avis du comit(cid:130) pour l’adapta- tion au progr(cid:138)s technique des directives visant (cid:133) l’(cid:130)limina- tion des entraves techniques aux (cid:130)changes dans le secteur des produits cosm(cid:130)tiques, A ARR(cid:219)T(cid:144) LA PR(cid:144)SENTE DIRECTIVE: Article premier La directive 76/768/CEE est modifi(cid:130)e conform(cid:130)ment (cid:133) l’annexe. Article 2 1. Les (cid:144)tats membres prennent les mesures n(cid:130)cessaires pour que, (cid:133) partir du 1er juillet 1999, pour les substances figurant en annexe, ni les fabricants ni les importateurs (cid:130)tablis dans la Communaut(cid:130) ne mettent sur le march(cid:130) des produits qui ne satisfont pas aux dispositions de la pr(cid:130)sente directive. 2. Les (cid:144)tats membres prennent les mesures n(cid:130)cessaires pour que, apr(cid:138)s le 30 juin 2000, les produits vis(cid:130)s au paragraphe 1 et contenant les substances figurant en annexe ne puissent (cid:136)tre vendus ou c(cid:130)d(cid:130)s au consomma- teur final. 15. 9. 98 FR Journal officiel des Communaut(cid:130)s europ(cid:130)ennes L 253/21 Article 3 Article 4 1. Les (cid:144)tats membres mettent en vigueur les disposi- tions l(cid:130)gislatives, r(cid:130)glementaires et administratives n(cid:130)ces- saires pour se conformer (cid:133) la pr(cid:130)sente directive au plus tard le 30 juin 1999. Ils en informent imm(cid:130)diatement la Commission. Lorsque les (cid:144)tats membres adoptent ces dispositions, celles-ci contiennent une r(cid:130)f(cid:130)rence (cid:133) la pr(cid:130)sente directive ou sont accompagn(cid:130)es d’une telle r(cid:130)f(cid:130)- rence lors de leur publication officielle. Les modalit(cid:130)s de cette r(cid:130)f(cid:130)rence sont arr(cid:136)t(cid:130)es par les (cid:144)tats membres. La pr(cid:130)sente directive entre en vigueur le troisi(cid:138)me jour suivant celui de sa publication au Journal officiel des Communaut(cid:130)s europ(cid:130)ennes. Article 5 Les (cid:144)tats membres sont destinataires de la pr(cid:130)sente direc- tive. Fait (cid:133) Bruxelles, le 3 septembre 1998. Les (cid:144)tats membres communiquent (cid:133) la Commission 2. le texte des dispositions de droit interne qu’ils adoptent dans le domaine r(cid:130)gi par la pr(cid:130)sente directive. Par la Commission Martin BANGEMANN Membre de la Commission L 253/22 FR Journal officiel des Communaut(cid:130)s europ(cid:130)ennes 15. 9. 98 ANNEXE Les annexes de la directive 76/768/CEE sont modifi(cid:130)es comme suit: 1) (cid:211) l’annexe II Les num(cid:130)ros d’ordre suivants sont ajout(cid:130)s: «421. 1,1,3,3,5-pentam(cid:130)thyl-4,6-dinitroindane (mosk(cid:138)ne) 422. 5-tert-butyl-1,2,3-trim(cid:130)thyl-4,6-dinitrobenz(cid:138)ne (musc tib(cid:130)t(cid:138)ne)». 2) (cid:211) l’annexe III Le num(cid:130)ro d’ordre 57 est modifi(cid:130) comme suit: «57 Chlorure de strontium (hexahydrat(cid:130)) a) Dentifrices avec de m(cid:130)lange 3,5 % exprim(cid:130)s en strontium. En d’autres cas compos(cid:130)s de strontium autoris(cid:130)s par cette concentration la maximale en strontium reste fix(cid:130) (cid:133) 3,5 %. annexe, Contient du chlorure de strontium. Usage d(cid:130)conseill(cid:130) aux enfants. » b) Shampooings et produits de soins du visage 2,1 % calcul(cid:130)s en strontium. En cas de m(cid:130)lange avec d’autres compos(cid:130)s de concentration la maximale en strontium reste fix(cid:130)e (cid:133) 2,1 %. strontium, 3) (cid:211) l’annexe VI a) P r e m i (cid:138) r e p a r t i e Le num(cid:130)ro d’ordre suivant est ajout(cid:130): a b c d e «54 Chlorure, bromure et saccharinate de benzalkonium (+) 0,1 % calcul(cid:130) benzalkonium. en chlorure de (cid:144)viter le contact avec les yeux. » b) D e u x i (cid:138) m e p a r t i e Le num(cid:130)ro d’ordre 16 est supprim(cid:130). «30. 6. 1998» est remplac(cid:130) par «30. 6. 1999» pour les num(cid:130)ros d’ordre 21 et 29. Le num(cid:130)ro d’ordre 29 est ainsi modifi(cid:130): a b c d e «29 3-Iodo-2-propynyl butylcarbamate (iodopropynyl butylcarbamate) 0,05 % Ne pas utiliser dans les produits pour l’hygi(cid:138)ne buccale et pour les l(cid:138)vres. » 15. 9. 98 FR Journal officiel des Communaut(cid:130)s europ(cid:130)ennes L 253/23 4) (cid:211) l’annexe VII a) P r e m i (cid:138) r e p a r t i e Les num(cid:130)ros d’ordre suivants sont ajout(cid:130)s: a b c d e «13 (cid:144)thyl-4-aminobenzoate (cid:130)thoxyl(cid:130) (PEG-25 PABA) 14 15 16 17 18 19 20 Isopentyl-4-m(cid:130)thoxycinnamate (Isoamyl p-Methoxycinnamate) 2,4,6-Trianilino-p-carbo-2’-(cid:130)thylhexyl-1’oxy)-1,3,5-triazine (Octyl Triazone) Ph(cid:130)nol,2-(2H-benzotriazol-2-yl)-4-m(cid:130)thyl-6-(2-m(cid:130)thyl-3-(1,3,3,3-t(cid:130)tram(cid:130)thyl-1- (trim(cid:130)thylsilyl)oxy)-disiloxanyl)propyl)) (Drometrizole Trisiloxane) Acide 1,3,5-triazine-2,4-diyl)diimino)bis-,bis(2-(cid:130)thylhexyl)ester) benzo(cid:139)que, 4,4-((6-(((1,1-dim(cid:130)thyl(cid:130)thyl)amino)carbonyl)ph(cid:130)nyl)amino) 3-(4’-M(cid:130)thylbenzylid(cid:138)ne)-d-1 camphre (4-Methylbenzylidene Camphor) 3-Benzylid(cid:138)ne camphre (3-Benzylidene Camphor) 2-(cid:144)thylhexyl salicylate (octyl-salicylate) 10 % 10 % 5 % 15 % 10 % 4 % 2 % 5 %» b) D e u x i (cid:138) m e p a r t i e Les num(cid:130)ros d’ordre 2, 6, 12, 25, 26 et 32 sont supprim(cid:130)s. «30. 6. 1998» est remplac(cid:130) par «30. 6. 1999» pour les num(cid:130)ros d’ordre 5, 17 et 29