title: Proposal for a European Parliament and Council Directive on action to be taken against the emission of gaseous and particulate pollutants by engines intended to power agricultural or forestry tractors and amending Council Directive 74/150/EEC

eurovoc_concepts:
Community certification
air quality
approximation of laws
technical regulations
tractor

formats: html pdf print

text: COMMISSION OF THE EUROPEAN COMMUNITIES ft^ft ft ft ft ft ft ft ft^ft Brussels, 03. 09. 1998 COM(1998) 472 final 98/0247 (COD) Proposal for a EUROPEAN PARLIAMENT AND COUNCIL DIRECTIVE on action to be taken against the emission of gaseous and particulate pollutants by engines intended to power agricultural or forestry tractors and amending Council Directive 74/150/EEC (presented by the Commission) EXPLANATORY MEMORANDUM Road traffic has long been recognized as being a major source of air pollution by substances such as carbon monoxide (CO), unburned hydrocarbons (HC), nitrogen oxides (Nox) and particulates (PT). Recent Commission studies show fairly clearly that emissions from mobile machinery, essentially operating off the road, and agricultural or forestry tractors, are also significant. The first European measures in this area were intended to reduce road-vehicle emissions in successive stages. More recently Parliament and the Council adopted Directive 97/68/EC, which applies to off-road mobile machinery, in order also to reduce the emissions by this in stages. The sixth recital of that Directive states that emissions control legislation on agricultural and forestry tractors with requirements analogous to those laid down for off-road mobile machinery so as to ensure an equivalent level of environmental protection should also be introduced as soon as possible. This proposal covers those requirements. They concern, in particular, the definition of the component type-approval procedures applying to engines intended to be fitted to tractors and thus also the definition of the type-approval procedures for such vehicles in terms of their pollutant emissions. At the request of the Member States and interested circles it was agreed, in order to achieve economic consistency and industrial logic, to adopt for the component type-approval of engines and the type-approval of tractors the same test requirements as have been adopted for off-road mobile machinery, together with the corresponding limit values for the emission levels. In addition, the equivalence between the technical requirements set out in this proposal concerning stage 1 and those of UN/ECE Regulation No 96 is recognized with that same industrial logic in mind in order to make it easier to enter third-country markets. Finally, in order to add flexibility to the engine market it is planned, for the first stage, also to recognize the technical requirements set out in Council Directive 88/77/IWC concerning emissions by diesel engines for use in vehicles. The European type-approval of tractors that has gradually been built up since 1974 is based on framework Directive 74/150/EEC, as last amended by Directive 97/54/EC, and on 22 separate directives. The aim is to create a single approval system that guarantees free movement within the Union. For the moment implementation of the Directives and full-vehicle approval remain optional. Each manufacturer may thus decide freely whether to use them or not. However, Where a choice is made to certify either an engine that is intended to power tractors or else a tractor in accordance with those Directives, the Member States are required to authorize the free movement of these. Those 22 separate Directives include Council Directive 77/537/EEC relating to the measures to be taken against the emission of pollutants from diesel engines for use in tractors, but which only deals with the opacity of the exhaust gases. This proposal supplements that Directive 77/537/EEC by drawing a distinction between the four pollutant chemical components (CO, Nox , HC and PT). It is therefore necessary to amend framework Directive 74/15 0/EEC in order to add a further heading to Annex II which mentions the subject covered by this proposal, together with the code SD (separate Directive. ). Proposal for a EUROPEAN PARLIAMENT AND COUNCIL DIRECTIVE on action to be taken against the emission of gaseous and particulate pollutants by engines intended to power agricultural or forestry tractors and amending Council Directive 74/150/EEC THE EUROPEAN PARLIAMENT AND THE COUNCIL OF THE EUROPEAN UNION, Having regard to the Treaty establishing the European Community, and in particular Article 100a thereof, Having regard to the proposal from the Commission1, Having regard to the opinion of the Economic and Social Committee2, Acting in accordance with the procedure laid down in Article 189b of the Treaty3, 1. 2. to ensure the proper functioning of Whereas, internal market. Directive 74/150/EEC of 4 March 1974 on the approximation of the laws of the Member States relating to the type-approval of wheeled agricultural or forestry and Council Directive 97/54/EC5 and the 22 separate Directives adopted between 1974 and 1989 harmonized the technical specifications in this field; by European Parliament tractors4, amended last the as Whereas, in order to further safeguard the environment, it is necessary to supplement the measures already adopted, as regards the opacity of exhaust gases, by Council Directive 77/537/EEC of 28 June 1977 on the approximation of the laws of the Member States relating to the measures to be taken against the emission of pollutants from diesel engines for use in wheeled agricultural or forestry tractors6, as last amended by Directive 97/54/EC, by adding measures relating, in particular, to physico-chemical emissions; whereas, by referring to the provisions of European Parliament and Council Directive 97/68/EC o\' 16 December 1997 on the approximation of the laws of the Member States relating to measures against the emission of gaseous and particulate pollutants from internal combustion engines to be installed in non-road mobile machinery7, this Directive should lay down the limit values for emissions of gaseous and particulate ' OJC 2 OJC 3 Opinion of the European Parliament of decision of the European Parliament of 4 O JL 84, 28. 3. 1974, p. 10. 5 O JL 277, 10. 10. 1997, p. 24. '' OJ L 220, 29. 8. 1977, p. 38. 7 O JL 59, 27. 2. 1998, p. I. (OJ C. ), Council common position of and pollutants to be applied in successive stages, and the test procedure for internal combustion engines intended to power agricultural or forestry tractors; whereas compliance with the provisions of Council Directive 88/77/EEC of 3 December 1987 on the approximation of the laws of the Member States relating to the measures to be taken against the emission of gaseous pollutants from diesel engines for use in vehicles8, as last amended by European Parliament and Council Directive 96/1/EC9, can also be accepted on the same basis as compliance with the requirements of this Directive; Whereas, in order to facilitate access to third-country markets, it is necessary to establish equivalence between the requirements of this Directive for the first stage and the requirements laid down in United Nations Economic Commission for Europe (UN/ECE) Regulation No 96 concerning the component type-approval of compression ignition engines intended to be fitted to agricultural or forestry tractors in terms of their pollutant emissions10; Whereas, in order to maximize the benefits to the European environment and, at the same time, to ensure the unity of the market, it is necessary to adopt very strict mandatory standards at regular intervals; whereas any further reduction in the limit values and any changes to the test procedure can be adopted only on the basis of studies and research to be conducted into existing and foreseeable technological potential and into the cost-effectiveness of the options, in order to allow production on an industrial scale of agricultural or forestry tractors that are capable of meeting these more stringent limits; whereas the decision regarding any such subsequent reduction should be taken by Parliament and the Council by the end of 2006; Whereas the Member States should be allowed to grant fiscal incentives to promote the introduction of engines intended to be fitted to agricultural or forestry tractors which meet in advance the requirements adopted at Community level concerning action to counter pollutant emissions; Whereas, in accordance with the principles of subsidiarity and proportionality as set out in Article 3b of the Treaty, the objectives of the Community measures envisaged by this Directive cannot be sufficiently achieved by the Member States and can therefore be better achieved by the Community; whereas this Directive confines itself to the minimum required in order to achieve those objectives and does not go beyond what is necessary for that purpose; Whereas technical progress requires rapid adaptation of the technical requirements set out in the Annexes to this Directive; whereas, with the exception of the limit values for pollutants, it is appropriate to delegate this task to the Commission, with the aim of simplifying and accelerating the procedure; whereas, wherever Parliament and the Council empower the Commission to implement the rules drawn up for agricultural or forestry tractors, a prior consultation procedure should 3. 4. 5. 6. 7. 8 OJL36, 9. 2. 1988, p. 33. l) OJ L 40, 17. 2. 1996, p. 1. 10 Doc. E/ECE/TRANS/505/Rev. I/Add. 95. be introduced whereby the Commission and the Member States meet within the committee established by Directive 74/150/EEC; 8. the Whereas Council Directive 77/537/EEC, which Directive 74/150/EEC; whereas Directive 74/150/EEC thus needs to be amended, those in Annex II this Directive requirements referred of to is of to « supplement HAVE ADOPTED THIS DIRECTIVE: Article 1 For the purposes of this Directive: "agricultural or forestry tractor" (hereinafter referred to as "tractor") means any vehicle as defined in Article 1(1) of Directive 74/150/EEC; "engine" means any internal combustion engine intended to power tractors, as defined in Annex I to this Directive; "component type-approval of an engine type or family in respect of pollutant emissions" means the instrument whereby a Member State certifies that an engine type or family intended to power tractors meets the technical requirements of this Directive; "type-approval of a tractor type in respect of pollutant emissions" means the instrument whereby a Member State certifies that a tractor type equipped with an engine as defined in Annex I meets the technical requirements of this Directive; "family of engines" means two or more types of engine that are similar in design and which, therefore, could display characteristics that are comparable in terms of pollutant emissions. Article 2 The procedure for granting component type-approval for an engine type or family in respect of pollutant emissions, the procedure for granting type-approval for tractors in respect of pollutant emissions, and the conditions for the unrestricted placing on the market of such engines and tractors, shall be as laid down in Directive 74/150/EEC. Article 3 1. 2. Any engine type or family shall meet the requirements of Annex I in respect of pollutant emissions. Any tractor type shall meet the requirements of Annex II in respect of pollutant emissions. 1. As from 1 January 2001, Member States may not: Article 4 refuse to grant EC component type-approval or national component type-approval in respect of an engine type or family, or prohibit the sale of such engines, if the pollutants emitted by those engines meet the requirements of this Directive, or refuse to grant EC type-approval or national type-approval of tractors, or prohibit the initial entry into service of tractors, if the pollutants emitted by the engine fitted to those tractors meet the requirements of this Directive. 2. As from 1 October 2001, Member States: may no longer grant EC type-approval for a tractor type, shall refuse to grant national type-approval for a tractor type, where the pollutants emitted by the engine fitted to that tractor type do not meet the requirements of this Directive. 3. As from 1 October 2003, Member States shall prohibit the initial entry into service of tractors where the pollutants emitted by their engines do not meet the requirements of this Directive. Article 5 The authorities of Member States granting EC component type-approval for a type or family of engines or EC type-approval for a type of tractor shall recognize the component type-approvals or type-approvals granted in accordance with the provisions of section 3 of Annex I and section 3 of Annex II and the corresponding component type-approval or type-approval marks. Article 6 On the basis of a proposal which the Commission shall, if need be, put forward by the end of 2004, the European Parliament and the Council shall decide on a further reduction in emission limit values by the end of 2006. In its proposal, drawn up on the basis of research and cost/efficiency assessments of the application of more stringent limit values, the Commission will propose measures that are proportional and reasonable with regard to the targets set, taking account of the overall availability of techniques for controlling air-polluting emissions from engines and the incorporation of new engine systems and accessories into tractors, and of the air-quality situation. Article 7 1. 2. Member States may provide tax incentives for tractors and engines that are intended to power such tractors only where they comply with the anti-pollution measures laid down in this Directive. The incentives referred to in paragraph 1 shall comply with the provisions of the Treaty and fulfil the following conditions: they shall be valid for all new tractors and engines sold on the market of a Member State which meet the requirements of this Directive in advance; they shall end with the mandatory application of the limit values laid down in this Directive; they shall, for each type of tractor and engine, be lower than the extra cost of the technical solutions introduced and of fitting the engine to the tractor in such a way that the values laid down are not exceeded. 3. The Commission shall be informed of any plans to introduce or change any of the tax incentives referred to in the first paragraph sufficiently early for it to comment thereon. Article 8 Any amendments needed in order to adapt the requirements of the Annexes to technical progress shall be adopted in accordance with the procedure laid down in Article 13 of Directive 74/150/EEC. Article 9 In Annex II to Directive 74/150/EEC, the following item 2. 8. 2 is inserted: "2. 8. 2. Emissions of gaseous pollutants and particulate pollutants by engines: SD". Article 10 Member States shall bring into force the laws, regulations and administrative provisions necessary to comply with this Directive by 31 December 2000. They shall forthwith inform the Commission thereof. They shall apply these provisions from 1 October 2001. When Member States adopt those provisions, they shall contain a reference to this Directive or be accompanied by such a reference on the occasion of their official publication. Member States shall determine how such reference is to be made. Article 11 This Directive shall enter into force on the twentieth day following that of its publication in the Official Journal of the European Communities. This Directive is addressed to the Member States. Article 12 Done at Brussels, For the European Parliament The President For the Council The President ANNEXI REQUIREMENTS FOR THE EC COMPONENT TYPE-APPROVAL OF A TRACTOR ENGINE TYPE OR FAMILY IN TERMS OF THE POLLUTANTS EMITTED 1. 1. 1 1. 2 2. 2. 1 2. 2 DEFINITIONS Type of tractor engine in terms of the pollutants emitted. "Type of tractor engine in terms of the pollutants emitted" means compression ignition engines which display no essential differences with regard to the characteristics defined in Appendix 1 to this Annex. Pollutants emitted "Pollutants emitted" means gaseous pollutants (carbon monoxide, hydrocarbons, and nitrogen oxides) and polluting particulates. REQUEST FOR COMPONENT TYPE-APPROVAL Any request for the component type-approval of an engine type or family in terms of the pollutants emitted shall be made by the manufacturer or his agent. It shall be accompanied by the information document, completed in triplicate, a specimen for which is provided in Appendix 1. 3. TEST REQUIREMENTS 3. 1. The test requirements and limit values set out in Directive 97/68/EC, as in force on the date of entry into force of this Directive, must be met. Alternatively, until the end of the first stage laid down in Directive 97/68/EC, the following shall also be accepted: 3. 1. 1. the test requirements and limit values set out in Directive 88/77/EEC; 3. 1. 2. the test requirements and limit values set out in United Nations Economic Commission for Europe Regulation No 96. 4. COMPONENT TYPE-APPROVAL An EC type-approval certificate conforming to the specimen provided in Appendix 2 to this Annex shall be issued. 10 5. 5. 1 5. 2 6. 6. 1 ENGINE MARKING The engine shall be marked in accordance with the requirements of Appendix 3 to this Annex. The identification number must comply with the provisions of Appendix 4 to this Annex. The marks and identification as required by Directive 97/68/EC and by United Nations ECE Regulation No 96 shall also be accepted. CONFORMITY OF PRODUCTION Without prejudice to the requirements of Article 8 of Directive 74/150/EEC, conformity of production shall be checked in accordance with the provisions of section 5 of Annex I to Directive 97/68/EC, or, where applicable, in accordance with section 8 of Annex I to Directive 88/77/EEC and on the basis of the description given in the EC component type-approval certificate in Appendix 2 to this Annex. II ANNEX I APPENDIX I INFORMATION DOCUMENT CONCERNING THE EC COMPONENT TYPE-APPROVAL OF A TRACTOR ENGINE TYPE OR FAMILY, IN TERMS OF THE POLLUTANTS EMITTED The information set out below shall, where appropriate, be supplied in triplicate and be accompanied by a list of enclosures. Any drawings needed shall be supplied to an appropriate scale and with sufficient details in A4 format or in a folder of this format. Photographs shall, where needed, show sufficient detail. SECTION 1 GENERAL 1. 1. 1 1. 2 1. 3 1. 3. 1 1. 4 1. 5 ENGINE TYPE/PARENT ENGINE OF THE FAMILY1'3 Make (name of manufacturer): Type and trade description(s) of the engine or, where appropriate, of the family's parent engine1 Manufacturer's type coding as marked on the engine(s) Location Name and address of manufacturer: Address(es) of assembly plant(s): SECTION 2 ENGINE TYPE 2. 2. 1 ESSENTIAL CHARACTERISTICS OF THE ENGINE TYPE Description of the compression ignition engine Manufacturer: Manufacturer's engine code as affixed to engines: Cycle: four stroke/two stroke1 Bore: Stroke: Number and arrangement of cylinders: Swept volume: Rated speed: Peak torque speed: Compression ratio": Combustion system: Drawing(s) of combustion chamber and piston crown Minimum cross sectional area of inlet and outlet ports: Cooling system Coolant 2. 1. 1 2. 1. 2 2. 1. 3 2. 1. 4 2. 1. 5 2. 1. 6 2. 1. 7 2. 1. 8 2. 1. 9 2. 1. 10 2. 1. 11 2. 1. 12 2. 1. 13 2. 1. 14 2. 1. 14. 1 2. 1. 14. 1. 1 Nature of coolant: 2. 1. 14. 1. 2 Circulating pump(s): yes/no1 2. 1. 14. 1. 3 Characteristics or make(s) and type(s) (if applicable): 2. 1. 14. 1. 4 Drive ratio(s) (if applicable): 12 mm mm cm3 m in"1 min"1 2. 1. 14. 2 Air 2. 1. 14. 2. 1 Blower: yes/no1 2. 1. 14. 2. 2 Characteristics or make(s) and type(s) (if applicable): 2. 1. 14. 2. 3 Drive ratio(s) (if applicable): 2. 1. 15 2. 1. 15. 1 2. 1. 15. 2 Temperature permitted by the manufacturer: Liquid cooling: Maximum temperature at outlet: Air cooling: Reference point: Maximum temperature at reference point: 2. 1. 15. 3 Maximum charge-air temperature at the intercooler outlet (if applicable): 2. 1. 15. 4 Maximum exhaust temperature at the point in the exhaust pipe(s) 2. 1. 15. 5 adjacent to the outer flange(s) of the exhaust manifold(s): Lubricant temperature: min. : max. : Pressure charger: yes/no1 2. 1. 16 2. 1. 16. 1 Make: Type: 2. 1. 16. 2 Description of the system (e. g. max. charge pressure, waste-gate, 2. 1. 16. 3 if applicable): Intercooler: yes/no1 Intake system: maximum allowable intake depression at rated engine speed 2. 1. 16. 4 2. 1. 17 K K K K K K 2. 1. 18 min ': kPa Exhaust system: Maximum permissible exhaust back pressure at rated engine speed kPa kPaandat 100% load: kPaandat 100% load: min*1: 2. 2 Additional anti-pollution devices (if any, and if not covered by another heading) mm32 per stroke or cycle at pump speed of: min"' min*1 (max. torque) respectively, or characteristic diagram. Description and/or diagram(s): Fuel feed 2. 3 2. 3. 1 Feedpump Pressure2 or characteristic diagram: Injection system Pump and 2. 3. 2 2. 3. 2. 1 2. 3. 2. 1. 1 Make(s): Type(s): 2. 3. 2. 1. 2 Delivery: 2. 3. 2. 1. 3 (rated) and State which method used: On engine/on pump bench1 Injection advance Injection advance curve2 Injection piping Length Internal diameter Injectors) 2. 3. 2. 1. 4 2. 3. 2. 4. 4. 1 2. 3. 2. 1. 4. 2 Timing2 2. 3. 2. 2 2. 3. 2. 2. 1 2. 3. 2. 2. 2 2. 3. 2. 3 2. 3. 2. 3. 1 Make(s): Type(s): 2. 3. 2. 3. 2 2. 3. 2. 3. 3 Opening pressure2 or characteristic diagram1: 2. 3. 2. 4 2. 3. 2. 4. 1 Make(s): 2. 3. 2. 4. 2 Type(s): 2. 3. 2. 4. 3 Cut-off initiation speed under full load2: Governors) ,. 13 kPa mm mm. min*1 2. 3. 2. 4. 4 Maximum no-load speed2: Idling speed2: 2. 3. 2. 4. 5 Cold start system 2. 3. 3 Make(s): 2. 3. 3. 1 Type(s): 2. 3. 3. 2 Description: 2. 3. 3. 3 min"1 min"1 2. 4 2. 4. 1 2. 4. 2 2. 5 Valve timing Maximum lift and opening and closing angles in relation to top dead centre or equivalent data: Reference clearances and/or setting ranges1 Electronic command functions If the engine features electronically controlled functions, information concerning their performance must be provided. SECTION 3 COMPRESSION-IGNITION ENGINE FAMILY 3. 3. 1 3. 1. 1 3. 1. 2 3. 1. 3 3. 1. 4 3. 1. 5 3. 1. 6 3. 1. 7 ESSENTIAL CHARACTERISTICS OF THE ENGINE FAMILY Common parameters defining the engine family The engine family may be defined by basic design parameters which must be common to all engines within the family. In some cases there may be interaction of parameters. These effects must also be taken into consideration in order to ensure that only engines with similar exhaust emission characteristics are included within an engine family. For engines to be considered to belong to the same engine family, the following list of basic parameters must be common: Combustion cycle: 2 stroke/4 stroke1 Cooling medium: air/water/oil1 Swept volume: - swept volumes to be within a total spread of 15% - the number of cylinders for engines with after-treatment device must be identical Method of air aspiration: naturally aspirated/pressure charged1 Combustion chamber type/design - pre-chamber - swirl chamber - open chamber Valve and porting - configuration, size and number - cylinder head - cylinder wall -crankcase Fuel system - pump-linc-injector - in-line pump - distributor pump - single element - unit injector 14 3. 1. 8 3. 1. 9 3. 1. 10 3. 1. 11 3. 1. 12 3. 1. 13 3. 1. 14 3. 1. 15 3. 2. 3. 2. 1 3. 2. 2 3. 3 3. 3. 1 3. 3. 2 Exhaust gas recirculation Water injection/emulsion1 Air injection Charge cooling system Oxidation catalyst Reduction catalyst Thermal reactor Particulates trap Choice of the parent engine The parent engine of the family shall be selected using the primary criterion of the highest fuel delivery per stroke at the declared maximum torque speed. If two or more engines share this primary criterion, the parent engine shall be selected using the secondary criterion of highest fuel delivery per stroke at rated speed. Under certain circumstances, the approval authority may conclude that the worst-case emission rate of the family can best be characterized by testing a second engine. Thus, the approval authority may select an additional engine for tests based upon features which indicate that it may have the highest emission levels of the engines within that family. If engines within the family incorporate other variable features which could be considered to affect exhaust emissions, these features must also be identified and taken into account in the selection of the parent engine. List of engine types within a family Name of engine family: Specification of engine types within this family: 15 Engine type Number of cylinders Rated speed (min1) Fuel delivery per stroke (mm3) Rated net power (kW) Max. torque speed (min*1) Fuel delivery per stroke (mm3) Max. torque (Nm) Low idle speed (min*1) Piston travel (mm) as % of parent engine Parent engine 100 SECTION 4 ENGINE TYPE WITHIN THE FAMILY 4. 4. 1 4. 1. 1 4. 1. 2 4. 1. 3 4. 1. 4 4. 1. 5 4. 1. 6 4. 1. 7 4. 1. 8 4. 1. 9 4. 1. 10 4. 1. 11 4. 1. 12 4. 1. 13 ESSENTIAL CHARACTERISTICS OF THE FAMILY'S PARENT ENGINE3 Description of the compression ignition engine Manufacturer: Manufacturer's engine code as affixed to engines: Cycle: four stroke/two stroke1 Bore: Stroke: Number and layout of cylinders: Swept volume: Rated speed: Peak-torque speed: Compression ratio2: Combustion system description: Drawing(s) of combustion chamber and piston crown Minimum cross sectional area of inlet and outlet ports: 16 mm mm cm3 in in"1 m in"1 Cooling system Coolant 4. 1. 14 4. 1. 14. 1 4. 1. 14. 1. 1 Nature of coolant: 4. 1. 14. 1. 2 Circulating pump(s): yes/no1 4. 1. 14. 1. 3 Characteristics or make(s) and type(s) (if applicable): 4. 1. 14. 1. 4 Drive ratio(s) (if applicable): 4. 1. 14. 2 Air 4. 1. 14. 2. 1 Blower: yes/no1 4. 1. 14. 2. 2 Characteristics or make(s) and type(s) (if applicable): 4. 1. 14. 2. 3 Drive ratio(s) (if applicable): 4. 1. 15 4. 1. 15. 1 4. 1. 15. 2 Temperature permitted by the manufacturer: Liquid cooling: Maximum temperature at outlet: Air cooling: Reference point: Maximum temperature at reference point: 4. 1. 15. 3 Maximum charge air temperature at the intercooler outlet (if applicable): 4. 1. 15. 4 Maximum exhaust temperature at the point in the exhaust pipe(s) adjacent to the 4. 1. 15. 5 outer flange(s) of the exhaust manifold(s): Lubricant temperature: min. : max. : K. K K Pressure charger: yes/no ' 4. 1. 16 4. 1. 16. 1 Make: Type: 4. 1. 16. 2 Description of the system (e. g. max. charge pressure, waste-gate, if applicable):. 4. 1. 16. 3 Intercooler: yes/no1 4. 1. 16. 4 Intake system: maximum allowable intake depression at rated engine speed 4. 1. 17 4. 1. 18 min"1: kPa Exhaust system: Maximum permissible exhaust back pressure at rated engine speed kPa kPaandat 100% load: kPaandat 100% load: min"1: 4. 2 Additional anti-pollution devices (if any, and if not covered by another heading) - Description and/or1 diagram(s): Fuel feed Feedpump Pressure2 or characteristic diagram Injection system Pump 4. 3 4. 3. 1 4. 3. 2 4. 3. 2. 1 4. 3. 2. 1. 1 Make(s): Type(s): 4. 3. 2. 1. 2 Delivery: 4. 3. 2. 1. 3 mm3 2 per stroke or cycle at pump speed of: min"1 (rated) and min"1 (maximum torque), respectively, or characteristic diagram. State which method is used: On engine/on pump bench Injection advance Injection advance curve2 4. 3. 2. 1. 4 4. 3. 2. 1. 4. 1 4. 3. 2. 1. 4. 2 Timing2 4. 3. 2. 2 4. 3. 2. 2. 1 4. 3. 2. 2. 2 4. 3. 2. 3 4. 3. 2. 3. 1 Make(s): Type(s): 4. 3. 2. 3. 2 Opening pressure2 or characteristic diagram: 4. 3. 2. 3. 3 Injection piping Length Internal diameter !njcctor(s) 17 mm mm K K K kPa 4. 3. 2. 4 Governor 4. 3. 2. 4. 1 Make (s): Type(s): 4. 3. 2. 4. 2 Cut-off initiation speed under full load2: 4. 3. 2. 4. 3 4. 3. 2. 4. 4 Maximum no-load speed2; Idling speed2; 4. 3. 2. 4. 5 Cold Start System 4. 3. 3 Make(s): 4. 3. 3. 1 Type(s): 4. 3. 3. 2 Description: 4. 3. 3. 3 min"1 min"1 min"1 4. 4 4. 4. 1 4. 4. 2 4. 5 Valve timing Maximum lift and angles of opening and closing in relation to top dead centre or equivalent data: Reference clearances and/or setting ranges ' Electronic control functions If the engine features electronically controlled functions, the information concerning their performance must be provided. 1 Delete where inappropriate. 2 Specify tolerance. Where applications are made for several representative engines a separate form must be filled in for each of these. Where appropriate. 18 ANNEXI APPENDIX 2 Specimen (Maximum format A4 (210 x 297 mm)) EC COMPONENT TYPE-APPROVAL CERTIFICATE Stamp of administration Communication concerning the component type-approval* extension of component type-approval1 refusal of component type-approval1 withdrawal of component type-approval, ' pursuant to Directive. /. /EC of a compression-ignition engine type or family that is intended to power tractors, in terms of the pollutants emitted. EC component type-approval N°: Extension No2: Reason for extension21 SECTION 1 0. 0. 1 0. 2 0. 3 0. 4 0. 5 0. 6 General Make (name of undertaking): Name and address of the manufacturer (or where appropriate of his agent) of the parent-engine type and (where appropriate) of the engine types within the family1: Manufacturer's type coding as marked on the engine(s): Location: Method of affixing: Location, coding and method of affixing of (he engine identification number: Location and method of affixing of the EC component type-approval mark: Address(es) of assembly plant(s): 19 SECTION II 1. 1. 1 1. 1. 1 1. 1. 2 2. 2. 1 2. 1. 1 2. 1. 2 2. 2 2. 2. 1 2. 2. 2 2. 2. 3 2. 2. 4 Restriction on use (if any): Particular conditions to be met when fitting the engine (s) to the tractor Maximum permissible intake depression Maximum permissible back pressure The engine has been subjected to specific component type-approval YES/NO1 If YES Reference regulations: 97/68/EC / 88/77/EEC / UN-ECE Regulation No 96' Component type-approval No: and attach the component type-approval certificate for the engine type or family concerned IfNO Testing body responsible for carrying out the type-approval tests: kPa kPa Date of test report: Number of test report: Test results Measured in accordance with the requirements of Directive 97/68/EC; Directive 88/77/EEC; UNECE Regulation No 96. l CO (g/kWh) HC(g/kWh) NOx(g/kWh) Particulates (g/kWh) 3. The undersigned hereby certifies the accuracy of the manufacturer's description of the engine type/parent engine within the family1 given above and that the test results set out in the type-approval file are correct. Component type-approval is granted/refused/withdrawn1 Place: Date: Signature: Annex: Component type-approval file: Delete where inappropriate. Where appropriate. 20 ANNEXI APPENDIX 3 MARKING OF ENGINES 1. Any engine approved as a separate technical unit must bear: 1. 1 the trademark or trade name of the engine's manufacturer; 1. 2 the engine type, and if applicable engine family, and a unique engine identification number; 1. 3 the EC component type-approval number in accordance with Annex II. 2. 3. These marks must last throughout the useful life of the engine and remain clearly legible and indelible. If labels or plates are used, they must be affixed in such a way that they too last throughout the useful life of the engine, and the labels/plates cannot be removed without destroying or defacing them. These marks must be secured to an engine part that is necessary for normal engine operation and not normally requiring replacement during engine life. These marks must be located so as to be readily visible to the average person once the engine has been fitted to the tractor, together with all the accessories needed for engine operation. If a bonnet is to be removed in order to make the mark visible, this requirement shall be considered to have been met if removal of that bonnet is simple and does not require the use of a tool. In case of doubt concerning the meeting of this requirement, it shall be considered to have been met if an additional mark containing at least the engine identification number and the name, trade name or logo of the manufacturer has been added. That additional mark shall be affixed to, or next to, a major component that would not normally have to be replaced during the service life of the engine, and be easily accessible, without the assistance of tools, during routine maintenance operations; otherwise, it must be located at a distance from the original mark on the engine crankcase. The original mark and, where appropriate, the additional mark shall both be clearly visible once all of the accessories needed for the operation of the engine have been fitted. A bonnet meeting the requirements set out in the above paragraph shall be authorized. The additional mark shall be affixed in a durable manner directly to the topside of the engine, for example by means of an engraving, or a sticker or plate that meets the requirements of item 2. 4. The engines must be classified by means of their identification numbers in such a way that the production sequence can be determined unambiguously. 21 5. 6. Before leaving the production line, the engines must bear all of the required marks. The exact location of the engine marks shall be declared in the information document, in accordance with Annexes I and II. 22 ANNEX I APPENDIX 4 NUMBERING The identification of the EC component type-approval shall consist of: a rectangle containing: a lower-case letter "e" followed by the distinguishing number or Ietter(s) of the Member State which has granted the component type- approval: "1" for Germany "2" for France "3" for Italy "4" for the Netherlands "5" for Sweden "6" for Belgium "9" for Spain "11" for the United Kingdom "12" for Austria "13" for Luxembourg "17" for Finland "18" for Denmark "21" for Portugal "23" for Greece "IRL" for Ireland below this, an EC component type-approval number located close to the right-hand corner and corresponding to the number of the EC component type-approval certificate for the engine type or family in question. 23 Example of an EC component type-approval mark a > 30 mm 66 - 2405 Legend: The engine bearing the above component type-approval mark was component type approved in Germany (el) under number 66-2405. 24 ANNEX II REQUIREMENTS FOR THE EC TYPE-APPROVAL OF A TRACTOR EQUIPPED WITH A COMPRESSION IGNITION ENGINE IN RESPECT OF THE POLLUTANTS EMITTED 1. 1. 1 1. 2 2. 2. 1 2. 2 DEFINITIONS Type of tractor in terms of the pollutants emitted. "Type of tractor in terms of the pollutants emitted" means tractors which display no essential differences with regard to the characteristics as defined in Appendix 1 to this Annex. Pollutants emitted "Pollutants emitted" means gaseous pollutants (carbon monoxide, hydrocarbons, and nitrogen oxides) and polluting particulates. REQUEST FOR TYPE-APPROVAL Any request for the type-approval of a tractor type in terms of the pollutants emitted shall be made by the manufacturer or his agent. It shall be accompanied by the information document, completed in triplicate, a specimen for which is provided in Appendix 1 to this Annex. 3. TEST REQUIREMENTS 3. 1. The test requirements and limit values set out in Directive 97/68/EC, as in force on the date of entry into force of this Directive, must be met. Alternatively, until the end of the first stage laid down in Directive 97/68/EC, the following shall also be accepted: 3. 1. 1. the test requirements and limit values set out in Directive 88/77/EEC; 3. 1. 2. the test requirements and limit values set out in United Nations Economic Commission for Europe Regulation No 96. 3. 2 Those tractor components which may affect the pollutants emitted shall be designed, built and assembled in such a way as to meet the technical requirements of this Directive under the tractor's normal operating conditions and despite any vibrations to which it could be subjected. 4. APPROVAL An EC type-approval certificate conforming to the specimen provided in Appendix 2 to this Annex shall be issued. 25 5. 5. 1 5. 2 6. 6. 1 ENGINE MARKING The engine shall be marked in accordance with the requirements of Appendix 3 to Annex I. The identification number must meet the requirements of Appendix 4 to Annex I. The marks and identification as required by Directives 97/68/EC and 88/77/EEC and United Nations ECE Regulation No 96 shall also be accepted. CONFORMITY OF PRODUCTION Without prejudice to the requirements of Article 8 of Directive 74/150/EEC, conformity of production shall be checked in accordance with the provisions of section 5 of Annex I to Directive 97/68/EC, or, where applicable, in accordance with section 8 of Annex I to Directive 88/77/EEC and on the basis of the description given in the EC type-approval certificate in Appendix 2 to this Annex. 26 ANNEX II APPENDIX 1 INFORMATION DOCUMENT CONCERNING THE EC TYPE-APPROVAL OF A TYPE OF TRACTOR EQUIPPED WITH A COMPRESSION-IGNITION ENGINE IN TERMS OF THE POLLUTANTS EMITTED The information set out below shall, where appropriate, be supplied in triplicate and be accompanied by a list of enclosures. Any drawings needed shall be supplied to an appropriate scale and with sufficient details in A4 format or in a folder of this format. Photographs shall, where needed, show sufficient detail SECTION 1 GENERAL 1. 1. 1 1. 2 1. 3 1. 3. 1 1. 4 1. 5 TRACTOR TYPE Make (name of manufacturer): Type and commercial description of the tractor Manufacturer's type codes if marked on the tractor Location Name and address of manufacturer: Address(es) of assembly plant(s): SECTION 2 TRACTOR TYPE 2. 2. 1 ESSENTIAL CHARACTERISTICS OF THE TRACTOR TYPE Description of the compression ignition engine Manufacturer: 2. 1. 1 Manufacturer's code as affixed to engine: 2. 1. 2 Cycle: four stroke/two stroke1 2. 1. 3 Bore: 2. 1. 4 Stroke: 2. 1. 5 Number and arrangement of cylinders: 2. 1. 6 Swept volume: 2. 1. 7 Rated speed: 2. 1. 8 Peak torque speed: 2. 1. 9 Compression ratio2: 2. 1. 10 Combustion system: 2. 1. 11 Drawing(s) of combustion chamber and piston crown 2. 1. 12 Minimum cross sectional area of inlet and outlet ports: 2. 1. 13 Cooling system 2. 1. 14 2. 1. 14. 1 Coolant 2. 1. 14. 1. 1 Nature of coolant: 2. 1. 14. 1. 2 Circulating pump(s): yes/no1 27 mm mm cm3 min"1 min"1 2. 1. 14. 1. 3 Characteristics or make(s) and type(s) (if applicable): 2. 1. 14. 1. 4 Drive ratio(s) (if applicable): 2. 1. 14. 2 Air 2. 1. 14. 2. 1 Blower: yes/no1 2. 1. 14. 2. 2 Characteristics or make(s) and type(s) (if applicable): 2. 1. 14. 2. 3 Drive ratio(s) (if applicable): 2. 1. 15 2. 1. 15. 1 2. 1. 15. 2 Temperature permitted by the manufacturer: Liquid cooling: Maximum temperature at outlet: Air cooling: Reference point: Maximum temperature at reference point: 2. 1. 15. 3 Maximum charge air temperature at the intercooler outlet (if applicable): 2. 1. 15. 4 Maximum exhaust temperature at the point in the exhaust pipe(s) adjacent to 2. 1. 15. 5 the outer flange(s) of the exhaust manifold(s): Lubricant temperature: min. : max. : K K K K. K K. Pressure charger: yes/no1 2. 1. 16 2. 1. 16. 1 Make: Type: 2. 1. 16. 2 Description of the system (e. g. max. charge pressure, waste-gate, if applicable):. 2. 1. 16. 3 Intercooler: yes/no1 2. 1. 16. 4 Intake system: maximum permissible intake depression at rated engine 2. 1. 17 speed Exhaust system: Maximum permissible exhaust back pressure at rated engine speed kPaand at 100% load: min"1: 2. 1. 18 kPa ". min"1: kPaandat 100% load: kPa 2. 2 Additional anti-pollution devices (if any, and if not covered by another heading) kPa - Description and/or diagram(s): Fuel feed Feedpump Pressure2 or characteristic diagram: Injection system Pump 2. 3 2. 3. 1 2. 3. 2 2. 3. 2. 1 2. 3. 2. 1. 1 Make(s): Type(s): 2. 3. 2. 1. 2 Delivery: 2. 3. 2. 1. 3 and min'1 (rated) and mm3 2 per stroke or cycle at pump speed of: min"1 (max. torque) respectively, or characteristic diagram. State which method used: On engine/on pump bench1 Injection advance Injection advance curve2 Injection piping Length Internal diameter Injector(s) 2. 3. 2. 1. 4 2. 3. 2. 4. 4. 1 2. 3. 2. 1. 4. 2 Timing2 2. 3. 2. 2 2. 3. 2. 2. 1 2. 3. 2. 2. 2 2. 3. 2. 3 2. 3. 2. 3. 1 Make(s): 2. 3. 2. 3. 2 Type(s): 2. 3. 2. 3. 3 Opening pressure2 or characteristic diagram1: 2. 3. 2. 4 Governor 2. 3. 2. 4. 1 Make(s): Type(s): 2. 3. 2. 4. 2 28 mm mm Cut-off initiation speed under full load2: 2. 3. 2. 4. 3 2. 3. 2. 4. 4 Maximum no-load speed2: Idling speed2: 2. 3. 2. 4. 5 Cold start system 2. 3. 3 Make(s): 2. 3. 3. 1 Type(s): 2. 3. 3. 2 Description: 2. 3. 3. 3 min'1 min"1 min"1 2. 4 2. 4. 1 2. 4. 2 Valve timing Maximum lift and angles of opening and closing in relation to top dead centre or equivalent data: Reference clearances and/or setting ranges' 2. 5 Electronic command functions If the engine features electronically controlled functions, the information concerning their performance should be provided. Delete where inappropriate. Specify the tolerance. 29 ANNEX II APPENDIX 2 Specimen (Maximum format A4 (210 x 297 mm)) EC TYPE-APPROVAL CERTIFICATE Stamp of administration Communication concerning the type-approval1 extension of type-approval1 refusal of type-approval1 withdrawal of type-approval, ' of a type of tractor equipped with a compression ignition engine pursuant to Directive. '. TV. on pollutant emissions. EC type-approval No: Extension No2: Reason for extension2' SECTION 1 0. 0. 1 0. 2 03 0. 4 0. 5 0. 6 General Make (name of manufacturer): Name and address of the manufacturer (or if appropriate of his agent) of the type of tractor: Manufacturer's type code as marked on the tractor: Location:. ; Method of affixing: Location, code and method of affixing of the tractor identification number: Location and method of affixing of the EC type-approval mark: Name(s) and address(cs) of assembly plant(s): SECTION II Restrictions on use of engine (if any): Particular conditions to be met when fitting the engine(s) to the tractor 1. 1. 1 1. 1. 1 Maximum permissible intake depression: 1. 1. 2 Maximum permissible back pressure: kPa. kPa 30 2. 2. 1 2. 1. 1 2. 1. 2 2. 2 2. 2. 1 2. 2. 2 2. 2. 3 2. 2. 4 2. 3 3. The engine or tractor has been subjected to specific component type-approval YES/NO If YES Reference regulations: 97/68/EC / 88/77/EEC / UN-ECE Regulation No 96' Component component type-approval certificate for the engine type or family concerned. IF NO Testing body responsible for carrying out the component type-approval No: type-approval attach and the tests: Date of test report: Number of test report: Test results Measured in accordance with the requirements of Directive 97/68/EC; Directive 88/77/KIÎC; UNECE Regulation No 96. ' CO (g/kWh) HC(g/kWh) NOx (g/kWh) Particulates (g/kWh) or attach the component type-approval certificate for the engine type or family concerned. Tractor (indicate, if relevant, the nature of effect): components which may affect the pollutants emitted The undersigned hereby certifies the accuracy of the manufacturer's description of the tractor type given above and that the test results mentioned in the type-approval file are correct. Type-approval is granted/refused/withdrawn1 Place: Date: Signature: Annex: Type-approval file: Delete where inappropriate. Where appropriate. 31 ISSN 0254-1475 COM(98) 472 final DOCUMENTS EN 03 06 14 15 Catalogue number : CB-C0-98-485-EN-C ISBN 92-78-38529-8 Office for Official Publications of the European Communities L-2()85 Luxembourg 32


title: 98/554/EC: Commission Decision of 3 September 1998 accepting undertakings in connection with the anti-dumping proceeding concerning imports of flat pallets of wood originating in the Republic of Poland (notified under document number C(1998) 2553)

eurovoc_concepts:
Poland
anti-dumping duty
anti-dumping legislation
import
wood product

text: L 266/82 EN Official Journal of the European Communities 1. 10. 98 II (Acts whose publication is not obligatory) COMMISSION COMMISSION DECISION of 3 September 1998 accepting undertakings in connection with the anti-dumping proceeding concerning imports of flat pallets of wood originating in the Republic of Poland (notified under document number C(1998) 2553) (98/554/EC) THE COMMISSION OF THE EUROPEAN COMMUNITIES, Having regard to the Treaty establishing the European Community, Having regard to Council Regulation (EC) No 384/96 of 22 December 1995 on protection against dumped imports from countries the European Community (1), as amended by Regulation (EC) No 905/ 98 (2), and in particular Article 8(1) thereof, not members of Having regard to Commission Regulation (EC) No 1023/ 97 (3), as amended by Regulations (EC) No 1632/97 (4) and 1633/97 (5), and in particular Article 2 thereof, After consulting the Advisory Committee, Whereas: A. PREVIOUS PROCEDURE (1) The Commission, by Regulation (EC) No 1023/97 (hereinafter referred to as ‘the provisional Regula- tion'), imposed provisional anti-dumping duties on certain imports of flat pallets of wood falling within CN code ex 4415 20 20 originating in the Republic of Poland and accepted undertakings offered from (1) OJ L 56, 6. 3. 1996, p. 1. (2) OJ L 128, 30. 4. 1998, p. 18. (3) OJ L 150, 7. 6. 1997, p. 4. (4) OJ L 225, 15. 8. 1997, p. 11. (5) OJ L 225, 15. 8. 1997, p. 13. certain exporting producers. These undertakings concerned only one pallet type, i. e. the EUR pallet. Since sampling was used in the investigation, requests for reviews under Article 11(4) could not be accepted. However, in order to ensure equal treatment between new exporters and the co- operating companies not included in the sample during the original investigation, by Regulation (EC) No 1632/97, the provisional Regulation was amended. Article 2 of Regulation (EC) No 1632/97 stipulated that new Polish exporting producers could have undertakings accepted with regard to exports of EUR pallets, provided they satisfied the criteria set out therein. By Regulation (EC) No 2334/97 (6), the Council imposed a definitive anti-dumping duty on certain imports of flat pallets of wood originating in the Republic of Poland. B. NEW EXPORTERS’ REQUEST Following the adoption of Regulation (EC) No 2334/97, 10 further new Polish exporting producers have requested that Article 2 of Regulation (EC) No 1023/97 be applied to them and they have offered (2) (3) (4) (6) OJ L 324, 27. 11. 1997, p. 1. 1. 10. 98 EN Official Journal of the European Communities L 266/83 undertakings with regard to the EUR pallet. They have also provided sufficient evidence pursuant to Article 2 of Regulation (EC) No 1023/97 showing that they are genuine new exporting producers. In application of Article 2 of Regulation (EC) No 1023/97, the undertakings offered by these 10 Polish exporting producers with regard to the EUR pallet should therefore be accepted, HAS ADOPTED THIS DECISION: Article 1 The undertakings offered with regard to the EUR-pallet by: (cid:190) Euro-Handels Sp. zo. o, Szczecin, (cid:190) PPH ‘Paletex' Sibinski Jaroslaw, Klonowa, (cid:190) Firma ‘KIKO' S. C. , Poznan, (cid:190) ‘Enkel' Waldemar Wnuk, Pulawy, (cid:190) Sliwka Lucyna, Klodzko, (cid:190) Firma Borkowski S. C. Export-Import, Grabow n. Prosna, (cid:190) Produkcja-Skup Elementow I Palet, Stanislaw Gorecki, Czajkow, (cid:190) ‘Bilusa' Sp. zo. o, Klodawa, (cid:190) P. P. U. H PAL-POL S. C. , Prabuty, (cid:190) Firma ‘A. C. S. ' S. C. , Kamien, in connection with the anti-dumping proceeding concerning import of flat pallets of wood originating in Poland and falling within CN code ex 4415 20 20 10 are hereby accepted. Article 2 This acceptance shall take effect on the day following publication of this Decision in the Official Journal of the European Communities. Done at Brussels, 3 September 1998. For the Commission Leon BRITTAN Vice-President


title: Komisjoni direktiiv 98/64/EÜ, 3. september 1998, millega kehtestatakse ühenduse analüüsimeetodid aminohapete, toorõli ja -rasva ja olakvindoksi määramiseks söödas ning muudetakse direktiivi 71/393/EMÜEMPs kohaldatav tekst

eurovoc_concepts:
analytical chemistry
animal nutrition
fats
food inspection
organic acid

text: 03/23. kd ET Euroopa Liidu Teataja 433 31998L0064 L 257/14 EUROOPA ÜHENDUSTE TEATAJA 19. 9. 1998 KOMISJONI DIREKTIIV 98/64/EÜ, 3. september 1998, millega kehtestatakse ühenduse analüüsimeetodid aminohapete, toorõli ja -rasva ja olakvindoksi määramiseks söödas ning muudetakse direktiivi 71/393/EMÜ (EMPs kohaldatav tekst) EUROOPA ÜHENDUSTE KOMISJON, kõnealuste ainete kontrollimiseks tuleb kehtestada ühenduse analüüsimeetodid; võttes arvesse Euroopa Ühenduse asutamislepingut, käesolevas direktiivis ettenähtud meetmed on kooskõlas alalise söödakomitee arvamusega, juuli 1970. arvesse nõukogu 20. võttes aasta direktiivi 70/373/EMÜ ühenduse söötade ametlikuks kontrollimiseks analüüsimeetodite kehtestamise ettenähtud proovivõtu- kohta, (1) viimati muudetud Austria, Soome ja Rootsi ühinemis- aktiga, eriti selle artiklit 2, ja ning arvestades, et: direktiivis 70/373/EMÜ on ette nähtud, et söötade ametlik kontroll selle kindlakstegemiseks, kas need vastavad söötade kvaliteeti ja koostist reguleerivate õigusnormide nõuetele, tuleb läbi viia ühenduse proovivõtu- ja analüüsimeetodite abil; nõukogu 2. aprilli 1979. aasta direktiivis 79/373/EMÜ (sega- sööda turustamise kohta, (2) viimati muudetud komisjoni direk- tiiviga 97/47/EÜ (3)) ning nõukogu 13. septembri 1993. aasta direktiivis söötade kohta, (4) viimati muudetud direktiiviga 96/25/EÜ (5)) nähakse ette, et aminohapped ning toorõlid ja -rasvad tuleb märkida sööda etiketile; 93/74/EMÜ (eritoitmiseks ettenähtud nõukogu 23. novembri 1970. aasta direktiivis 70/524/EMÜ söödalisandite kohta, (6) viimati muudetud komisjoni direktii- viga 98/19/EÜ, (7) nähakse ette, et kui segasöödale on lisatud olakvindoksit, peab kõnealuse aine sisaldus olema märgitud etiketile; aasta 18. novembri komisjoni direktiiviga 1971. 71/393/EMÜ, millega kehtestatakse ühenduse analüüsimeetodid kontrollimiseks, (8) söötade viimati muudetud komisjoni direktiiviga 84/4/EMÜ, (9) sätestatakse analüüsimee- todid muu hulgas ka toorõlide ja -rasvade määramiseks; on asjakohane kõnealust meetodit muuta; ametlikuks teise (1) EÜT L 170, 3. 8. 1970, lk 2. (2) EÜT L 86, 6. 4. 1979, lk 30. (3) EÜT L 211, 5. 8. 1997, lk 45. (4) EÜT L 237, 22. 9. 1993, lk 23. (5) EÜT L 125, 23. 5. 1996, lk 35. (6) EÜT L 270, 14. 12. 1970, lk 1. (7) EÜT L 96, 28. 3. 1998, lk 39. (8) EÜT L 279, 20. 12. 1971, lk 7. (9) EÜT L 15, 18. 1. 1984, lk 28. ON VASTU VÕTNUD KÄESOLEVA DIREKTIIVI: Artikkel 1 Liikmesriigid sätestavad, et analüüsid aminohapete, toorõlide ja -rasvade ning olakvindoksi sisalduse ametlikuks kontrollimiseks söötades tehakse käesoleva direktiivi lisas ettenähtud meetodeid kasutades. Artikkel 2 Komisjoni direktiivi 71/393/EMÜ lisa punkt “4. Toorõli -rasva määramine” B osaga. asendatakse käesoleva direktiivi ja lisa Artikkel 3 Liikmesriigid jõustavad käesoleva direktiivi järgimiseks 1. vajalikud õigusnormid 31. detsembriks 1998. Liikmesriigid teatavad sellest viivitamata komisjonile. Liikmesriigid kohaldavad sätestatud meetmeid alates 1. rist 1999. jaanua- liikmesriigid need meetmed vastu võtavad, lisavad nad Kui nendesse meetmetesse või nende ametliku avaldamise korral nende juurde viite käesolevale direktiivile. Kõnealuse viitamise viisi näevad ette liikmesriigid. 434 ET Euroopa Liidu Teataja 03/23. kd 2. Liikmesriigid edastavad komisjonile käesoleva direktiiviga reguleeritavas valdkonnas nende poolt vastuvõetud põhiliste siseriiklike õigusnormide teksti. Käesolev direktiiv on adresseeritud liikmesriikidele. Artikkel 5 Artikkel 4 Brüssel, 3. september 1998 Käesolev direktiiv jõustub kahekümnendal päeval pärast selle avaldamist Euroopa Ühenduste Teatajas. Komisjoni nimel komisjoni liige Franz FISCHLER 03/23. kd ET Euroopa Liidu Teataja 435 LISA A OSA AMINOHAPETE MÄÄRAMINE 1. Eesmärk ja rakendusala Käesolev meetod võimaldab aminohappeanalüsaatoriga määrata söödas vabu aminohappeid (sünteetilisi ja looduslikke) ning üldaminohappeid (peptiidsidemetega ja vabu). Seda saab kasutada järgmiste aminohapete puhul: tsüst(e)iin, metioniin, lüsiin, treoniin, alaniin, arginiin, asparagiinhape, glutamiinhape, glütsiin, histidiin, isoleutsiin, leutsiin, fenüülalaniin, proliin, seriin, türosiin ja valiin. Meetod ei erista aminohapete sooli ega aminohapete D- ja L-vorme. See ei sobi trüptofaani ega aminohapete hüdroksüanaloogide määramiseks. 2. Põhimõte 2. 1. Vabad aminohapped Vabad aminohapped ekstraheeritakse lahjendatud soolhappega. Kaasa ekstraheerunud lämmastikku sisaldavad makromolekulid sadestatakse sulfosalitsüülhappega ning eemaldatakse filtreerides. Filtreeritud lahuse pH regulee- ritakse 2,20-le. Aminohapped eraldatakse ioonivahetuskromatograafia teel ning määratakse fotomeetrilise määramise teel reaktsioonis ninhüdriiniga lainepikkusel 570 nm. 2. 2. Üldaminohapped Valitav protseduur sõltub uuritavatest aminohapetest. Tsüst(e)iin ja metioniin tuleb enne hüdrolüüsi oksüdeerida vastavalt tsüsteiinhappeks ja metioniinsulfooniks. Türosiin tuleb määrata oksüdeerimata proovide hüdrolüsaa- tides. Kõiki teisi lõikes 1 osutatud aminohappeid saab määrata kas oksüdeeritud või oksüdeerimata proovides. Oksüdeerimine viiakse läbi persipelghappe ja fenooli seguga 0 °C juures. Ülemäärane oksüdatsioonireaktiiv lagundatakse naatriumdisulfitiga. Oksüdeeritud või oksüdeerimata proovi hüdrolüüsitakse soolhappega (c = 6 mol/l) 23 tundi. Hüdrolüsaadi pH reguleeritakse 2,20-le. Aminohapped eraldatakse ioonivahetuskromatograafia teel ning määratakse fotomeetrilise määramise teel reaktsioonis ninhüdriiniga lainepikkusel 570 nm (440 nm proliini puhul). 3. Reaktiivid Kasutada tuleb bidestilleeritud vett või samaväärse kvaliteediga vett (elektrijuhtivus < 10 µS). 3. 1. 3. 2. 3. 3. 3. 4. 3. 5. 3. 6. 3. 7. 3. 8. 3. 9. Vesinikperoksiid, w = 30 %. Sipelghape, w = 98–100 %. Fenool. Naatriumdisulfit. Naatriumhüdroksiid. 5-sulfosalitsüülhappe dihüdraat. Soolhape, tihedus ligikaudu 1,18 g/ml. Trinaatriumtsitraatdihüdraat. 2,2’–tiodietanool (tiodiglükool). 3. 10. Naatriumkloriid. 3. 11. Ninhüdriin. 3. 12. Petrooleeter, keemistemperatuur 40–60 °C. 3. 13. Norleutsiin või muu sisestandardina kasutamiseks sobiv ühend. 3. 14. Gaasiline lämmastik (< 10 ppm hapnikku). 436 ET Euroopa Liidu Teataja 03/23. kd 3. 15. 1-oktanool. 3. 16. Aminohapped. 3. 16. 1. Lõikes 1 loetletud standardühendid. Kasutada võib üksnes puhtaid ühendeid ilma kristallisatsiooniveeta. Kuiva- tatakse vaakumis P2O5 või H2SO4 kohal nädal aega enne kasutamist. 3. 16. 2. Tsüsteiinhape. 3. 16. 3. Metioniinsulfoon. 3. 17. Naatriumhüdroksiidi lahus, c = 7,5 mol/l: lahustatakse 300 g NaOH (3. 5) vees ja täiendatakse 1 liitrini. 3. 18. Naatriumhüdroksiidi lahus, c = 1 mol/l: lahustatakse 40 g NaOH (3. 5) vees ja täiendatakse 1 liitrini. 3. 19. Sipelghappe-fenoolilahus: segatakse 889 g sipelghapet (3. 2) 111 g veega ja lisatakse 4,73 g fenooli (3. 3). 3. 20. Hüdrolüüsisegu, c = 6 mol HCl/l, mis sisaldab 1 g fenooli liitri kohta: 492 ml HCl-le (3. 7) lisatakse 1 g fenooli (3. 3) ja täiendatakse veega 1 liitrini. 3. 21. Ekstraheerimissegu, c = 0,1 mol HCl/l, mis sisaldab 2 % tiodiglükooli: 8,2 ml HCl (3. 7) lahustatakse ligikaudu 900 ml veega, lisatakse 20 ml tiodiglükooli (3. 9) ja täiendatakse veega 1 liitrini (ei segata vahetult 3. 7 ja 3. 9). 3. 22. 5-sulfosalitsüülhape, ß = 6 %: lahustatakse 60 g 5-sulfosalitsüülhapet (3. 6) vees ja täiendatakse veega 1 liitrini. 3. 23. Oksüdatsioonisegu (persipelghape-fenool): väikeses keeduklaasis segatakse 0,5 ml vesinikperoksiidi (3. 1) ja 4,5 ml sipelghappe-fenoolilahust (3. 19). Inku- beeritakse persipelghappe saamiseks 20–30 °C juures tund aega, seejärel jahutatakse jääveevannis (15 min) ning lisatakse proovile. Ettevaatust: vältige kokkupuudet nahaga ning kandke kaitseriietust. 3. 24. Tsitraadi puhverlahus, c = 0,2 mol Na+/l, pH = 2,20: lahustatakse 19,61 g naatriumtsitraati (3. 8), 5 ml tiodiglükooli (3. 9), 1 g fenooli (3. 3) ja 16,50 ml HCl (3. 7) ligikaudu 800 ml vees. Reguleeritakse pH 2,20-le. Täiendatakse veega 1 liitrini. 3. 25. Elutsiooni puhverlahused, valmistatakse vastavalt kasutatava analüsaatori (4. 9) tingimustele. 3. 26. Ninhüdriinreaktiiv, valmistatakse vastavalt kasutatava analüsaatori (4. 9) tingimustele. 3. 27. Aminohapete standardlahused. Lahuseid tuleks hoida temperatuuril alla 5 °C. 3. 27. 1. Aminohapete põhistandardlahused (3. 16. 1), c = 2,5 µmol/ml iga aminohapet soolhappes. Lahuseid on võimalik osta. 3. 27. 2. Tsüsteiinhappe ja metioniinsulfooni põhistandardlahused, c = 1,25 µmol/ml. 1-liitrises mõõtekolbis ja 0,2 265 g metioniinsulfooni (3. 16. 3) ning täiendatakse tsitraadi puhverlahusega kuni tähiseni. Hoitakse tempe- ratuuril alla 5 °C mitte kauem kui 12 kuud. Seda lahust ei kasutata, kui põhistandardlahus (3. 27. 1) sisaldab tsüsteiinhapet ja metioniinsulfooni. lahustatakse tsitraadi puhverlahuses (3. 24) 0,2 115 g tsüsteiinhapet (3. 16. 2) 3. 27. 3. Sisestandardi põhistandardlahus, nt norleutsiin, c = 20 µmol/ml. Mõõtekolbis lahustatakse tsitraadi puhverlahuses (3. 24) 0,6 560 g norleutsiini (3. 13) ja täiendatakse tsitraadi puhverlahusega 250 ml-ni. Hoitakse temperatuuril alla 5 °C mitte kauem kui 6 kuud. 3. 27. 4. Standardaminohapete kalibreerimislahus kasutamiseks hüdrolüsaatidega, c = 5 nmol/50 µl tsüsteiinhappe ja metioniinsulfooni puhul ning c = 10 nmol/50 µl teiste aminohapete puhul. 03/23. kd ET Euroopa Liidu Teataja 437 2,2 g naatriumkloriidi (3. 10) lahustatakse 30 ml tsitraadi puhverlahusega (3. 24) 100 ml keeduklaasis. Lisatakse 4,00 ml aminohapete põhistandardlahust (3. 27. 1), 4,00 ml tsüsteiinhappe ja metioniinsulfooni põhistandardla- hust (3. 27. 2) ja (kui seda kasutatakse) 0,50 ml sisestandardi põhistandardlahust (3. 27. 3). Naatriumhüdroksiidiga (3. 18) reguleeritakse pH 2,20-le. Kantakse kvantitatiivselt 50 ml mõõtekolbi, täiendatakse tsitraadi puhverlahusega (3. 24) kuni tähiseni ja sega- takse. Hoitakse temperatuuril alla 5 °C kuni 3 kuud. Vaadake ka tähelepanekuid 9. 1. 3. 27. 5. Standardaminohapete kalibreerimislahus, kasutamiseks vastavalt punktile 5. 3. 3. 1 valmistatud hüdrolüsaatidega ja ekstraktidega (5. 2). Kalibreerimislahus valmistatakse vastavalt punktile 3. 27. 4, naatriumkloriid jäetakse välja. Hoitakse temperatuuril alla 5 °C kuni 3 kuud. 4. Seadmed 4. 1. 100 või 250 ml püstjahutiga ümarkolb. 4. 2. 100 ml boorsilikaatklaasist pudel, millel on keermega ja kummi- või teflontihendiga kuumakindel kork (nt Duran, Schott). 4. 3. Sundventilatsiooniga ahi, mille termoregulaatori täpsus on suurem kui ± 2 °C. 4. 4. pH-meeter (kolm kümnendkohta). 4. 5. Membraanfilter (0,2 µm). 4. 6. Tsentrifuug. 4. 7. Vaakumpöördaurusti. 4. 8. Mehaaniline loksuti või magnetsegur. 4. 9. Aminohappeanalüsaator või HPLC-seade, millel on ioonivahetuskolonn, seade kolonnijärgseks ninhüdriiniga derivatiseerimiseks ja fotomeetriline detektor. Kolonn täidetakse sulfoonitud polüstüreenvaikudega, mis on võimelised eraldama aminohappeid üksteisest ning muudest ninhüdriiniga reageerivatest materjalidest. Puhverlahuse ja ninhüdriini voolu tagavad pumbad, mille voolustabiilsus on ± 0,5 % nii standardkalibreerimise kui ka proovi analüüsi ajal. Mõnede aminohappeanalüsaatoritega saab kasutada hüdrolüüsimeetodeid, mille puhul hüdrolüsaadi naatriumisi- saldus on c = 0,8 mol/l ning hüdrolüsaat sisaldab kõiki oksüdatsioonietapi jääke. Teised analüsaatorid ei suuda teatavaid aminohappeid rahuldavalt eraldada, kui hüdrolüsaadi sipelghappe ja/või naatriumiioonide kontsentrat- sioon on liiga suur. Sel juhul vähendatakse happekogust pärast hüdrolüüsi ja enne pH reguleerimist aurustamise teel ligikaudu 5 ml-ni. Aurustada tuleks vaakumis maksimaalselt 40 °C juures. 5. Analüüsi käik 5. 1. Proovi ettevalmistamine Proov peenestatakse, nii et see läbib 0,5 mm avadega sõela. Suure niiskusesisaldusega proovid tuleb enne peenestamist õhkkuivatada maksimaalselt 50 °C juures või külmkuivatada. Suure rasvasisaldusega proovid tuleks enne peenestamist ekstraheerida petrooleetriga (3. 12). 5. 2. Vabade aminohapete määramine söödas ja eelsegudes Ettevalmistatud proovi (5. 1) sobiva koguse (1–5 g) kaalutis 0,2 mg täpsusega pannakse Erlenmeyeri kolbi ja lisatakse 100,0 ml ekstraheerimissegu (3. 21). Segu loksutatakse 60 minutit mehhaanilise loksuti või magnetse- gaja (4. 8) abil. Sademel lastakse settida ning pipetitakse 10,0 ml supernatanti 100 ml keeduklaasi. 438 ET Euroopa Liidu Teataja 03/23. kd Segades lisatakse 5,0 ml sulfosalitsüülhappe lahust (3. 22) ning segatakse magnetsegajaga veel 5 minutit. Sademe eraldamiseks supernatant filtreeritakse või tsentrifuugitakse. 10,0 ml saadud lahust pannakse 100 ml keeduklaasi, pH reguleeritakse naatriumhüdroksiidi lahusega (3. 18) 2,20-le, lahus kantakse tsitraadi puhverla- hust (3. 24) kasutades sobiva suurusega mõõtekolbi ning täiendatakse tsitraadi puhverlahusega (3. 24) kuni tähi- seni. Kui kasutatakse sisestandardit, lisatakse 1,00 ml sisestandardit (3. 27. 3) 100 ml lõpplahuse kohta ning täienda- takse puhverlahusega (3. 24) kuni tähiseni. Jätkatakse kromatograafiaetapiga vastavalt punktile 5. 4. Kui ekstrakte ei uurita samal päeval, tuleb neid hoida temperatuuril alla 5 °C. 5. 3. Üldaminohapete määramine 5. 3. 1. Oksü de e ri mi ne Ligikaudu 0,1–1 g ettevalmistatud proovi (5. 1) kaalutis 0,2 mg täpsusega pannakse: — 100 ml ümarkolbi (4. 1) hüdrolüüsiks avatud anumas (5. 3. 2. 3) või — 250 ml ümarkolbi (4. 1), kui on nõutav naatriumi madal kontsentratsioon (5. 3. 3. 1), või — 100 ml keermega korgiga pudelisse (4. 2) hüdrolüüsiks suletud anumas (5. 3. 2. 4). Kaalutise lämmastikusisaldus peaks olema ligikaudu 10 mg ja niiskusesisaldus kuni 100 mg. Kolb/pudel asetatakse jääveevanni ja jahutatakse 0 °C-ni, lisatakse 5 ml oksüdatsioonisegu (3. 23) ja segatakse painutatud otsaga klaasspaatliga. Kolb/pudel, milles on spaatel, suletakse õhukindla kilega ning jääveevann õhukindlalt suletud nõuga asetatakse 16 tunniks külmikusse temperatuuril 0 °C. 16 tunni möödudes võetakse nõu külmikust ning lagundatakse üleliigne oksüdatsioonireaktiiv, lisades 0,84 g naatriumdisulfitit (3. 4). Jätkatakse vastavalt punktile 5. 3. 2. 1. 5. 3. 2. H üdr olüü s 5. 3. 2. 1. Oksüdeeritud proovide hüdrolüüs Punkti 5. 3. 1 kohaselt ettevalmistatud oksüdeeritud proovile lisatakse 25 ml hüdrolüüsisegu (3. 20), pestes ära kõik proovijäägid nõu ja spaatli küljest. Kasutatavast hüdrolüüsimeetodist sõltuvalt jätkatakse vastavalt punktile 5. 3. 2. 3 või 5. 3. 2. 4. 5. 3. 2. 2. Oksüdeerimata proovide hüdrolüüs Ligikaudu 0,1–1 g ettevalmistatud proovi (5. 1) kaalutis 0,2 mg täpsusega pannakse 100 ml või 250 ml ümar- kolbi (4. 1) või 100 ml keermega korgiga pudelisse (4. 2). Kaalutise lämmastikusisaldus peaks olema ligikaudu 10 mg. Ettevaatlikult lisatakse 25 ml hüdrolüüsisegu (3. 20) ja segatakse prooviga. Jätkatakse vastavalt punktile 5. 3. 2. 3 või 5. 3. 2. 4. 5. 3. 2. 3. Hüdrolüüs avatud anumas Punkti 5. 3. 2. 1 või 5. 3. 2. 2 kohaselt ettevalmistatud segule kolvis lisatakse 3 klaaskuuli ja keedetakse püstjahuti all katkematult 23 tundi. Pärast hüdrolüüsi lõppu uhutakse kondensaator 5 ml tsitraadi puhverlahusega (3. 24). Kolb ühendatakse lahti ja jahutatakse jäävannis. Jätkatakse vastavalt punktile 5. 3. 3. 5. 3. 2. 4. Hüdrolüüs suletud anumas Punkti 5. 3. 2. 1 või 5. 3. 2. 2 kohaselt ettevalmistatud seguga pudel asetatakse ahju (4. 3) temperatuuril 110 °C. Rõhu suurenemise takistamiseks (gaaside tekkimise tõttu) ja plahvatuse vältimiseks asetatakse esimeseks tunniks ajaks keermega kork nõu peale. Nõud ei tohi korgiga sulgeda. Tunni aja möödudes suletakse nõu korgiga ja jäetakse ahju (4. 3) 23 tunniks. Pärast hüdrolüüsi lõppu võetakse pudel ahjust, avatakse ettevaatlikult kork ning asetatakse pudel jääveevanni. Jahutatakse. Sõltuvalt pH reguleerimise meetodist (5. 3. 3) kantakse pudeli sisu tsitraadi puhverlahust (3. 24) kasutades kvanti- tatiivselt 250 ml keeduklaasi või 250 ml ümarkolbi. Jätkatakse vastavalt punktile 5. 3. 3. 5. 3. 3. pH r eg u le er i mi n e Sõltuvalt aminohappeanalüsaatori 5. 3. 3. 1 või 5. 3. 3. 2. (4. 9) naatriumitaluvusest jätkatakse pH reguleerimisega vastavalt punktile 5. 3. 3. 1. Kromatograafiasüsteemid (4. 9), mis nõuavad naatriumi madalat kontsentratsiooni Naatriumi madalat kontsentratsiooni nõudvate aminohappeanalüsaatorite puhul (kui happekogust tuleb vähen- dada) on soovitatav kasutada sisestandardi põhistandardlahust (3. 27. 3). 03/23. kd ET Euroopa Liidu Teataja 439 Sel juhul lisatakse hüdrolüsaadile enne aurustamist 2,00 ml sisestandardi põhistandardlahust (3. 27. 3). Punkti 5. 3. 2. 3 või 5. 3. 2. 4 kohaselt saadud hüdrolüsaadile lisatakse 2 tilka 1-oktanooli (3. 15). Vaakumpöördaurustit (4. 7) kasutades vähendatakse kogust 40 °C juures 5–10 ml-ni. Kui kogust vähendatakse kogemata vähem kui 5 ml-ni, tuleb hüdrolüsaat ära visata ja analüüs uuesti teha. Naatriumhüdroksiidi lahusega (3. 18) reguleeritakse pH 2,20-le ja jätkatakse vastavalt punktile 5. 3. 4. 5. 3. 3. 2. Kõik muud aminohappeanalüsaatorid (4. 9) Punkti 5. 3. 2. 3 või 5. 3. 2. 4 kohaselt saadud hüdrolüsaadid neutraliseeritakse osaliselt, lisades neile ettevaatlikult segades 17 ml naatriumhüdroksiidi lahust (3. 17), samal ajal tagades temperatuuri alla 40 °C. Toatemperatuuril reguleeritakse pH 2,20-le naatriumhüdroksiidi lahusega (3. 17) ning lõpuks naatriumhüdrok- siidi lahusega (3. 18). Jätkatakse vastavalt punktile 5. 3. 4. 5. 3. 4. Kr oma tog ra a fi a p roov i l a hu s Reguleeritud pH-ga hüdrolüsaat (5. 3. 3. 1 või 5. 3. 3. 2) kantakse tsitraadi puhverlahusega (3. 24) kvantitatiivselt 200 ml mõõtekolbi ning täiendatakse tsitraadi puhverlahusega (3. 24) kuni tähiseni. Kui sisestandardit ei ole veel kasutatud, lisatakse 2,00 ml sisestandardit (3. 27. 3) ning täiendatakse tsitraadi puhverlahusega (3. 24) kuni tähiseni. Segatakse hoolikalt. Jätkatakse kromatograafiaetapiga (5. 4). Kui proovilahuseid ei uurita samal päeval, tuleb neid hoida temperatuuril alla 5 °C. 5. 4. Kromatograafia Enne kromatograafiat tuuakse ekstrakt (5. 2) või hüdrolüsaat (5. 3. 4) toatemperatuurile. Segu loksutatakse ja filtreeritakse sobiv kogus läbi 0,2 µm membraanfiltri (4. 5). Saadud selge lahus analüüsitakse aminohappeanalü- saatorit (4. 9) kasutades ioonivahetuskromatograafia abil. Lahust võib injekteerida käsitsi või automaatselt. On oluline, et kolonni lisataks analüüsiks iga kord sama kogus standard- või proovilahust ± 0,5 %, välja arvatud sisestandardi kasutamisel, ning et standard- ja proovilahuste naatriumi- ja aminohappesisalduste suhe oleks võimalikult sarnane. Üldiselt sõltub kaliibrimiste sagedus ninhüdriinreaktiivi ja analüsaatorisüsteemi tasakaalustatusest. Standard- või proovilahus lahjendatakse tsitraadi puhverlahusega (3. 24), et standardlahuse piigipindala oleks 30–200 % aminohappe proovi piigipindalast. Aminohapete kromatograafia varieerub veidi, sõltuvalt kasutatava analüsaatori tüübist ja kasutatavast vaigust. Valitud süsteem peab olema võimeline eraldama aminohappeid üksteisest ning ninhüdriiniga reageerivatest materjalidest. Töövahemikus peaks kromatograafiasüsteem reageerima lineaarselt kolonni lisatava aminohappe- koguse muutumisele. Kui analüüsitakse määratavate aminohapete ekvimolaarset lahust, kohaldatakse kromatograafiaetapis allpool nimetatud suhteid miinimumi ja piigi kõrguse vahel. Kõnealune ekvimolaarne lahus peab sisaldama vähemalt 30 % iga aminohappe maksimumkogusest, mida on võimalik aminohappeanalüsaatoriga (4. 9) täpselt mõõta. Treoniini ja seriini eraldamisel ei tohiks kahest kromatogrammil kattuvast aminohappest madalama piigiga happe miinimumi ja piigi kõrguse suhe olla suurem kui 2:10 (üksnes tsüst(e)iini, metioniini, treoniini ja lüsiini määramisel häirib naaberpiikide ebapiisav eraldamine määramist). Kõigi teiste aminohapete puhul peab eraldu- mine olema parem kui 1:10. Süsteem peab võimaldama eraldada lüsiini “lüsiini artefaktidest” ja ornitiinist. 6. Tulemuste arvutamine Iga aminohappe puhul mõõdetakse proovi- ja standardlahuse piigipindala ning arvutatakse aminohappe kogus grammides proovi kilogrammi kohta: A ×E × MW × F B × W × 1 000 ¼ aminohapet ðgÞ proovi ðkgÞ kohta Kui kasutatakse sisestandardit, korrutatakse tulemus liikmega D C 440 ET A B C D Euroopa Liidu Teataja 03/23. kd = hüdrolüsaadi või ekstrakti piigi pindala = kaliibrimise standardlahuse piigi pindala = sisestandardi piigi pindala hüdrolüsaadis või ekstraktis = sisestandardi piigi pindala kaliibrimislahuses MW = määratava aminohappe molekulmass E = standardi kontsentratsioon (µmol/ml) W = proovi mass grammides (kohandatakse esialgseks massiks, kui proov on kuivatatud või rasvatustatud) F = hüdrolüsaadi koguruumala (5. 3. 4) või ekstrakti lahjenduse arvutatud koguruumala (6. 1) milliliitrites. Tsüstiin ja tsüsteiin määratakse mõlemad tsüsteiinhappena oksüdeeritud proovide hüdrolüsaatides, kuid arvuta- takse tsüstiiniks (C6H12N2O4S2, MW 240,30), kasutades molekulmassi 120,15 (= 0,5 × 240,30). Metioniin määratakse metioniinsulfoonina oksüdeeritud proovi hüdrolüsaatides, kuid arvutatakse metioniiniks, kasutades molekulmassi 149,21. Lisatud vaba metioniin määratakse pärast ekstraheerimist metioniinina, arvutamisel kasutatakse sama molekul- massi. 6. 1. Ekstraktide lahjenduse koguruumala (F) vabade aminohapete (5. 2) määramiseks arvutatakse järgmiselt: F ¼ 100 ml × ð Þ 10 ml þ 5 ml 10 ml × Vml 10 ml V = lõppekstrakti ruumala 7. Meetodi hindamine Meetodit on testitud rahvusvahelises võrdluskatses 1990. aastal, kasutades nelja erinevat sööta (sigade segasööt, broilerite segasööt, valgukontsentraat, eelsegu). Tulemuste keskväärtused ja standardhälbed pärast võõrväärtuste elimineerimist on esitatud järgnevas tabelis. Keskväärtused g/kg Etalonaine Sigade segasööt Broilerite segasööt Valgukontsentraat Eelsegu n = osalenud laborite arv Aminohape Treoniin Tsüst(e)iin Metioniin Lüsiin 6,94 n = 15 9,31 n = 16 22,32 n = 16 58,42 n = 16 3,01 n = 17 3,92 n = 18 5,06 n = 17 — 3,27 n = 17 5,08 n = 18 12,01 n = 17 90,21 n = 16 9,55 n = 13 13,93 n = 16 47,74 n = 15 98,03 n = 16 7. 1. Korratavus Eespool nimetatud võrdluskatse korratavus on väljendatud laborisisese standardhälbena ja esitatud järgmistes tabelites. 03/23. kd ET Euroopa Liidu Teataja 441 Laborisisene standardhälve (Sr) (g/kg) Etalonaine Aminohape Treoniin Tsüst(e)iin Metioniin Lüsiin Sigade segasööt Broilerite segasööt Valgukontsentraat Eelsegu n = osalenud laborite arv 0,13 n = 15 0,20 n = 16 0,48 n = 16 1,30 n = 16 0,10 n = 17 0,11 n = 18 0,13 n = 17 — 0,11 n = 17 0,16 n = 18 0,27 n = 17 2,19 n = 16 0,26 n = 13 0,28 n = 16 0,99 n = 15 2,06 n = 16 Laborisisese standardhälbe (Sr) variatsioonikordaja ( %) Etalonaine Aminohape Treoniin Tsüst(e)iin Metioniin Lüsiin 1,9 n = 15 2,1 n = 16 2,7 n = 16 2,2 n = 16 3,3 n = 17 2,8 n = 18 2,6 n = 17 — 3,4 n = 17 3,1 n = 18 2,2 n = 17 2,4 n = 16 2,8 n = 13 2,1 n = 16 2,4 n = 15 2,1 n = 16 Sigade segasööt Broilerite segasööt Valgukontsentraat Eelsegu n = osalenud laborite arv 7. 2. Reprodutseeritavus Eespool nimetatud võrdluskatse laboritevahelise standardhälbe tulemused on esitatud järgmises tabelis: Laboritevaheline standardhälve (SR) (g/kg) Etalonaine Aminohape Treoniin Tsüst(e)iin Metioniin Lüsiin Sigade segasööt Broilerite segasööt Valgukontsentraat Eelsegu n = osalenud laborite arv 0,28 n = 15 0,48 n = 16 0,85 n = 16 2,49 n = 16 0,30 n = 17 0,34 n = 18 0,62 n = 17 — 0,23 n = 17 0,55 n = 18 1,57 n = 17 6,20 n = 16 0,30 n = 13 0,75 n = 16 1,24 n = 15 6,62 n = 16 442 ET Euroopa Liidu Teataja 03/23. kd Laboritevahelise standardhälbe (SR) variatsioonikordaja ( %) Etalonaine Aminohape Treoniin Tsüst(e)iin Metioniin Lüsiin 4,1 n = 15 5,2 n = 16 3,8 n = 16 4,3 n = 16 9,9 n = 17 8,8 n = 18 12,3 n = 17 — 7,0 n = 17 10,9 n = 18 13,0 n = 17 6,9 n = 16 3,2 n = 13 5,4 n = 16 3,0 n = 15 6,7 n = 16 Sigade segasööt Broilerite segasööt Valgukontsentraat Eelsegu n = osalenud laborite arv 8. Etalonainete kasutamine Meetodi õige kohaldamise kontrollimiseks tehakse korduvaid mõõtmisi sertifitseeritud etalonainetega, kui need ained on kättesaadavad. Soovitatav on kaliibrida aminohapete sertifitseeritud kaliibrimislahusega. 9. Tähelepanekud 9. 1. Aminohappeanalüsaatorite erinevustest tingituna tuleks standardaminohapete kaliibrimislahuste (vt 3. 27. 4 ja 3. 27. 5) ja hüdrolüsaadi (vt 5. 3. 4) lõppkontsentratsioone vaadelda suunistena. Kõigi aminohapete puhul tuleb kontrollida aparatuuri lineaarse ala vahemikku. Standardlahus lahjendatakse tsitraadi puhverlahusega, et piigialad oleksid vahemiku keskel. 9. 2. 9. 3. Kui hüdrolüsaatide analüüsiks kasutatakse kõrgefektiivse vedelikkromatograafia aparatuuri, tuleb katsetingi- mused optimeerida vastavalt tootja soovitustele. Meetodi kohaldamisel söötade suhtes, mille kloriidisisaldus on suurem kui 1 % (kontsentraadid, mineraalsöödad, täiendsöödad), võib tulemuseks olla tegelikust väiksem metioniinisisaldus ning tuleb kasutada erimeetodit. B OSA TOORÕLI JA -RASVA MÄÄRAMINE 1. Eesmärk ja rakendusala Käesolev meetod on toorõli ja -rasva määramiseks söötades. See ei hõlma nõukogu 22. septembri 1966. aasta määrusega 136/66/EMÜ hõlmatud õliseemnete ja õliviljade analüüsi. Allpool kirjeldatud kahe meetodi kasutamine sõltub sööda laadist ja koostisest ning analüüsi tegemise põhjusest. 1. 1. Meetod A – Otse ekstraheeritav toorõli ja -rasv Seda meetodit kohaldatakse taimsete söödatoorainete puhul, välja arvatud meetodiga B hõlmatud ainete puhul. 1. 2. Meetod B – Kogu toorõli ja -rasv Seda meetodit kohaldatakse loomsete söödatoorainete ja kõigi segasöötade puhul. Seda kasutatakse kõigi ainete puhul, millest ei ole ilma eelneva hüdrolüüsita võimalik õli ja rasva ekstraheerida (nt gluteenid, pärm, kartuli- valgud ning tooted, mille puhul kasutatakse muu hulgas pressimist, helvestamist või kuumutamist). 03/23. kd ET Euroopa Liidu Teataja 443 1. 3. Tulemuste tõlgendamine juhtudel, kui meetodiga B saadakse suurem tulemus kui meetodiga A, Kõigil tulemus õigeks väärtuseks. loetakse meetodiga B saadud 2. Põhimõte 2. 1. Meetod A Proov ekstraheeritakse petrooleetriga. Solvent destilleeritakse välja ning jääk kuivatatakse ja kaalutakse. 2. 2. Meetod B Proovi töödeldakse kuumalt soolhappega. Segu jahutatakse ja filtreeritakse. Jääk pestakse, kuivatatakse ja määra- takse vastavalt meetodile A. Reaktiivid Petrooleeter, keemistemperatuur 40–60 °C. Broomiarv peab olema väiksem kui 1 ja aurustamise jääk alla 2 mg/100 ml. Veevaba naatriumsulfaat. Soolhape, c = 3 mol HCl/l. Filteraine, nt Kieselguhr, Hyflo-supercel. Seadmed Ekstraheerimisaparaat. Kui kasutatakse sifooni (Soxhlet’i aparaat), peaks tagasijooksu kiirus tekitama ligikaudu 10 tsüklit tunnis; ilma sifoonita peaks tagasijooksu kiirus olema ligikaudu 10 ml minutis. Ekstraheerimishülsid, milles ei ole petrooleetris lahustuvaid aineid ning mille poorsus vastab punkti 4. 1 nõuetele. Kuivatuskapp: vaakumkuivatuskapp temperatuuriga 75 °C ± 3 °C või ventileeritav kuivatuskapp temperatuu- riga 100 °C ± 3 °C. 3. 3. 1. 3. 2. 3. 3. 3. 4. 4. 4. 1. 4. 2. 4. 3. 5. Analüüsi käik 5. 1. Meetod A (vt punkt 8. 1) 5 g proovi kaalutis 1 mg täpsusega pannakse ekstraheerimishülssi (4. 2) ja kaetakse rasvavaba vatiga. Hülss asetatakse ekstraheerimisaparaati ekstrakt kogutakse kuiva tareeritud kolbi, milles on pimsskivitükid. (1) (4. 1) ja ekstraheeritakse petrooleetriga (3. 1) kuus tundi. Petrooleetri Solvent destilleeritakse välja. Jääk koos kolviga asetatakse poolteiseks tunniks kuivatuskappi (4. 3) kuivama. Lastakse eksikaatoris jahtuda ning kaalutakse. Kuivatatakse veel 30 minutit, et veenduda, et õli ja rasva mass jääb samaks (massikadu kahe järjestikuse kaalumise vahel peab olema väiksem kui 1 mg). 5. 2. Meetod B 2,5 g proovi kaalutis 1 mg täpsusega (vt punkt 8. 2) pannakse 400 ml keeduklaasi või 300 ml Erlenmeyeri kolbi ning lisatakse 100 ml soolhapet (3. 3) ja pimsskivitükke. Keeduklaas kaetakse kellaklaasiga või pannakse Erlenmeyeri kolbi külge püstjahuti. Segu kuumutatakse madala leegi või kuumutusplaadi kohal keemiseni ja keedetakse nõrgalt tund aega. Tuleb vältida toote sadestumist nõu seinte külge. Jahutatakse ja lisatakse selline kogus filterainet (3. 4), mis on piisav õli- ja rasvakao vältimiseks filtreerimisel. Lahus filtreeritakse läbi niisutatud rasvavaba kahekordse filterpaberi. Jääki pestakse külmas vees kuni filtraadi neutraalse reaktsioonini. Kontrollitakse, et filtraat ei sisalda õli ega rasva. Kui filtraat sisaldab õli või rasva, tuleb proov enne hüdrolüüsi petrooleetriga ekstraheerida, kasutades meetodit A. Kahekordne filterpaber koos jäägiga asetatakse kellaklaasile ja kuivatatakse poolteist tundi ventileeritavas kuiva- tuskapis (4. 3) 100 °C ± 3 °C juures. Kahekordne filterpaber koos kuivjäägiga asetatakse ekstraheerimishülssi (4. 2) ja kaetakse rasvavaba vatiga. Hülss asetatakse ekstraheerimisaparaati (4. 1) ja jätkatakse vastavalt punkti 5. 1 teisele ja kolmandale lõigule. (1) Kui hiljem tuleb kontrollida õli või rasva kvaliteeti, asendatakse pimsskivitükid klaashelmestega. 444 ET Euroopa Liidu Teataja 03/23. kd 6. Tulemuste väljendamine Jäägi mass väljendatakse protsendimäärana proovist. 7. Korratavus Sama analüüsija poolt sama prooviga tehtud kahe paralleelse määramise tulemuste erinevus ei tohiks ületada: — 0,2 %, kui toorõli ja -rasva sisaldus on alla 5 %, — 4,0 % suuremast tulemusest, kui toorõli ja -rasva sisaldus on 5–10 %. — 0,4 %, kui toorõli ja -rasva sisaldus on üle 10 %. 8. Tähelepanekud 8. 1. Suure õli- ja rasvasisaldusega toodete puhul, mida on keeruline peenestada või millest ei saa võtta homogeenset vähendatud proovi, toimitakse järgmiselt: 1 mg täpsusega võetud 20 g proovi kaalutis segatakse vähemalt 10 g veevaba naatriumsulfaadiga (3. 2). Segu ekstraheeritakse petrooleetriga (3. 1) vastavalt punktile 5. 1. Saadud ekstrakti täiendatakse petrooleetriga (3. 1) 500 ml-ni ja segatakse. 50 ml lahust pannakse väiksesse kuiva tareeritud kolbi, milles on pimsskivitükid. (1) Solvent destilleeritakse välja, segu kuivatatakse ja jätkatakse vastavalt punkti 5. 1 viimasele lõigule. Hülssi jäänud ekstraheerimisjäägist eemaldatakse solvent, peenestatakse jääk 1 mm osakesteks, pannakse see tagasi ekstraheerimishülssi teisele ja kolmandale lõigule. lisamata) ning jätkatakse vastavalt punkti 5. 1. (ilma naatriumsulfaati Õli- ja rasvasisaldus arvutatakse protsendimäärana proovist järgmise valemi abil: (10 a + b) × 5 kus: a = jäägi mass grammides pärast esimest ekstraheerimist (alikvootne osa ekstraktist), b = jäägi mass grammides pärast teist ekstraheerimist. 8. 2. Väikese õli- ja rasvasisaldusega toodete puhul võib uuritava proovi massi suurendada 5 grammini. 8. 3. Suure veesisaldusega lemmikloomatoite võib olla vaja segada veevaba naatriumsulfaadiga enne hüdrolüüsi ja ekstraheerimist vastavalt meetodile B. 8. 4. Punktis 5. 2 võib olla tõhusam kasutada jäägi pesemiseks pärast filtreerimist külma vee asemel sooja vett. 8. 5. 8. 6. Mõnede söötade puhul võib olla vaja pikendada 1,5 tunnist kuivamisaega. Tuleks vältida liigset kuivatamist, kuna see võib põhjustada madalaid tulemusi. Kasutada võib ka mikrolaineahju. Kui toorõli ja -rasva sisaldus on üle 15 %, on soovitatav proov enne hüdrolüüsi eelnevalt ekstraheerida meetodi A järgi ning uuesti ekstraheerida meetodi B järgi. Mingil määral sõltub see sööda ja selles leiduva õli ning rasva laadist. C OSA OLAKVINDOKSI MÄÄRAMINE (2-[N-2’-(hüdroksüetüül)karbamoüül]-3-metüülkinoksaliin-N1, N4-dioksüüd) 1. Eesmärk ja rakendusala Käesolev meetod on olakvindoksi määramiseks söötades. Alumine määramispiir on 5 mg/kg. 2. Põhimõte Proov ekstraheeritakse metanooli vesilahuses. Olakvindoksisisaldus määratakse pöördfaasilise kõrgefektiivse vedelikkromatograafia (HPLC) abil, kasutades ultraviolettdetektorit. (1) Kui hiljem tuleb kontrollida õli või rasva kvaliteeti, asendatakse pimsskivitükid klaashelmestega. 03/23. kd ET Euroopa Liidu Teataja 445 3. 3. 1. 3. 2. 3. 3. 3. 4. 3. 5. Reaktiivid Metanool. Metanool, HPLC-puhas. Vesi, HPLC-puhas. HPLC liikuv faas: Vesi (3. 3) + metanool (3. 2), 900 + 100 (ruumala järgi). Standardaine: puhas olakvindoks 2-[N-2’-(hüdroksüetüül)karbamoüül]-3-metüülkinoksaliin-N1, N4-dioksüüd, E 851. 3. 5. 1. Olakvindoksi põhistandardlahus, 250 µg/ml. 50 mg olakvindoksi ja lisatakse ligikaudu (3. 5) kaalutis täpsusega 0,1 mg asetatakse 200 ml mõõtekolbi 190 ml vett. Kolb asetatakse 20 minutiks ultrahelivanni (4. 1). Pärast ultraheliga mõjutamist viiakse lahuse temperatuur toatemperatuurini, täidetakse kolb veega kuni märgini ja segatakse. Kolb mähitakse alumiiniumfoo- liumi ja säilitatakse külmikus. See lahus tuleb igal kuul uuesti valmistada. 3. 5. 2. Olakvindoksi vahestandardlahus, 25 µg/ml. Valatakse 10,0 ml põhistandardlahust (3. 5. 1) 100 ml mõõtekolbi, täidetakse see liikuva faasiga (3. 4) kuni ja segatakse. Kolb mähitakse alumiiniumfooliumi ja säilitatakse külmikus. See lahus tuleb iga päev märgini uuesti valmistada. 3. 5. 3. Kaliibrimislahused. 50 ml mõõtekolbidesse pannakse 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 ja 20,0 ml vahestandardlahust (3. 5. 2). Täidetakse kolvid liikuva faasiga (3. 4) kuni märgini ja segatakse. Kolb mähitakse alumiiniumfooliumi. Nende lahuste olakvindoksisisaldus on vastavalt 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 ja 10,0 µg/ml. Need lahused tuleb iga päev uuesti valmistada. 4. 4. 1. 4. 2. 4. 3. Seadmed Ultrahelivann. Mehaaniline loksuti. HPLC seade muudetava lainepikkusega ultraviolettdetektoriga või dioodireadetektoriga. 4. 3. 1. Vedelikkromatograafiakolonn 250 mm × 4 mm, vahatihend C18, 10 µm või samaväärne. 4. 4. Membraanfiltrid 0,45 µm. 5. Analüüsi käik Märkus: Olakvindoks on valgustundlik. Kõik protseduurid tehakse nõrgas valguses või kasutatakse tumedaid anumaid. 5. 1. Üldsätted 5. 1. 1. Tuleb analüüsida võrdlussööta veendumaks, et selles ei ole ei olakvindoksit ega segavaid aineid. 5. 1. 2. Saagisekatses analüüsitakse võrdlussööta, millele on lisatud proovis oleva kogusega ligilähedane kogus olakvin- doksit. Et saada kontsentratsiooni 50 mg/kg, kantakse 10,0 ml põhistandardlahust (3. 5. 1) 250 ml Erlenmeyeri kolbi ja aurustatakse lahus ligikaudu 0,5 milliliitrini. Lisatakse 50 g võrdlussööta, segatakse hoolikalt ja jäetakse 10 minutiks seisma, segades enne ekstraheerima (5. 2) asumist veel mitu korda. Märkus: Selle meetodi puhul peab võrdlussööt olema prooviga samalaadne ja olakvindoksit ei tohi selles olla avastataval määral. 5. 2. Ekstraheerimine Võetakse ligikaudu 50 g proovi kaalutis 0,01 g täpsusega. Kaalutis kantakse 1 000 ml Erlenmeyeri kolbi, lisa- takse 100 ml metanooli (3. 1) ja asetatakse kolb 5 minutiks ultrahelivanni (4. 1). Lisatakse 410 ml vett ja hoitakse kolbi ultrahelivannis veel 15 minutit. Kolb võetakse ultrahelivannist välja, loksutatakse 30 minutit loksutil (4. 2) ja filtreeritakse läbi kurdfiltri. Kallatakse 10,0 ml filtraati 20 ml mõõtekolbi, täiendatakse veega kuni märgini ja segatakse. Alikvoot filtreeritakse läbi membraanfiltri (4. 4) (vt 9. Tähelepanek). Seejärel alusta- takse HPLC–määramist (5. 3). 446 ET Euroopa Liidu Teataja 03/23. kd 5. 3. HPLC–määramine 5. 3. 1. Pa r a m ee tr i d: Soovitatakse juhinduda järgmistest tingimustest, muid tingimusi võib kasutada juhul, kui need tagavad sama- väärsed tulemused. Analüüsikolonn (4. 3. 1) Liikuv faas (3. 4): vesi (3. 3) + metanool (3. 2), 900 + 100 (ruumala järgi) Voolukiirus: 1,5–2 ml/min. Avastamise lainepikkus: 380 nm Injekteeritav ruumala: 20 µl – 100 µl Kromatograafiaseadme tasakaalustatust kontrollitakse, injekteerides korduvalt kaliibrimislahust (3. 5. 3) kontsent- ratsiooniga 2,5 µg/ml, kuni saavutatakse reprodutseeritavad piigikõrgused ja retentsiooniajad. 5. 3. 2. Ka li i br i mi sg r a a f i k Iga kaliibrimislahust (3. 5. 3) injekteeritakse korduvalt ja määratakse igale kontsentratsioonile vastavad keskmised piigi kõrgused (pindalad). Ehitatakse kaliibrimisgraafik, kandes ordinaatteljele kaliibrimislahuste keskmised piigi kõrgused (pindalad) ja abstsissteljele vastavad kontsentratsioonid (µg/ml). 5. 3. 3. Pr oov i la h u s Prooviekstrakti olakvindoksipiikide keskmine kõrgus (pindala). (5. 2) injekteeritakse mitu korda samas mahus mis kaliibrimislahuste puhul ja määratakse 6. Tulemuste arvutamine Proovilahuse olakvindoksipiikide keskmise kõrguse (pindala) alusel leitakse kaliibrimisgraafiku (5. 3. 2) abil proo- vilahuse kontsentratsioon (µg/ml). Proovi olakvindoksisisaldus w (mg/kg) arvutatakse järgmise valemi alusel: w ¼ c × 1 000 m kus: c = prooviekstrakti (5. 2) olakvindoksikontsentratsioon (µg/ml) m = uuritava proovi kaalutis grammides (5. 2). 7. Tulemuste kontrollimine 7. 1. Samasus Uuritava aine samasust saab kinnitada täiendava kromatograafiakatse abil või kasutades dioodireadetektorit, mille puhul võrreldakse prooviekstrakti (5. 2) ja 5,0 µg/ml sisaldusega kaliibrimislahuse (3. 5. 3) spektreid. 7. 1. 1. Tä i e nda v kr oma tog r a a fi a ka tse Prooviekstraktile (5. 2) lisatakse vajalik kogus kaliibrimislahust (3. 5. 3). Lisatud olakvindoksikogus peab olema ligikaudu sama suur nagu prooviekstraktist leitud olakvindoksikogus. Lisatud koguse ja ekstrakti lahjenduse arvessevõtmise tulemusena peaks tõusma üksnes olakvindoksipiigi kõrgus. Piigi laius selle poolel kõrgusel ei tohi erineda rohkem kui ± 10 % kontsentreerimata prooviekstrakti olakvin- doksipiigi laiusest. 7. 1. 2. Kon trolli mi ne di oodi r ea de te ktor i a bi l Tulemusi hinnatakse järgmiste kriteeriumide kohaselt: a) proovi ja standardi kromatogrammidel oleva piigi tipu spektri suurima neeldumise lainepikkused peavad jääma analüüsiseadme lahutusvõime piiridesse. Dioodireadetektori lahutusvõime on tavaliselt ± 2 nm; 03/23. kd ET Euroopa Liidu Teataja 447 b) lainepikkustel 220–400 nm ning suhtelise neeldumise vahemikus 10–100 % peavad kromatogrammil oleva proovi ja standardi piigi tipu spektrid ühte langema. Seda nõuet käsitatakse täidetuna, kui nimetatud spekt- rites esinevad ühed ja samad maksimumid ning erinevused kahe spektri kõigis uuritud punktides ei ületa 15 % standardainele vastavatest neeldumistest; c) lainepikkustel 220–400 nm ning suhtelise neeldumise vahemikus 10–100 % peavad prooviekstrakti piigi tõusva osa, tipu ja alaneva osa spektrid ühte langema. Seda nõuet käsitatakse täidetuna, kui nimetatud spekt- rites esinevad ühed ja samad maksimumid ning erinevused kõigis uuritud punktides ei ületa 15 % piigi tipu spektri vastavatest neeldumistest. Kui mõni nendest nõuetest ei ole täidetud, ei peeta otsitava aine olemasolu tõestatuks. 7. 2. Korratavus Kui olakvindoksisisaldus on 10–20 mg/kg, ei tohi sama prooviga tehtud kahe paralleelse määramise tulemuste erinevus ületada 15 % suuremast tulemusest. 7. 3. Saagis Suurendatud kontsentratsiooniga võrdlusproovi puhul peab saagis olema vähemalt 90 %. 8. Ühisuuringu tulemused Korraldati EÜ ühisuuring, mille käigus analüüsisid kuni 13 laborit nelja põrsasööda proovi, millest üks oli pime- katse. Tulemused olid järgmised: Proov 1 Proov 2 Proov 3 Proov 4 L n keskväärtus (mg/kg) Sr (mg/kg) SR (mg/kg) CVr ( %) CVR ( %) Nominaalsisaldus (mg/kg) saagis ( %) 13 40 — — — — — — — 10 40 14,6 0,82 1,62 5,6 11,1 15 97,3 11 44 48,0 2,05 4,28 4,3 8,9 50 96,0 11 44 95,4 6,36 8,42 6,7 8,8 100 95,4 L : laborite arv n : üksikväärtuste arv Sr : korratavuse standardhälve SR : reprodutseeritavuse standardhälve : korratavuse variatsioonikordaja CVr CVR : reprodutseeritavuse variatsioonikordaja 9. Tähelepanek Kuigi söötade puhul, mille olakvindoksisisaldus on üle 100 mg/kg, ei ole meetodi valiidsus kontrollitud, võib saavutada rahuldavaid tulemusi, kasutades väiksema massiga proove ja/või lahjendades ekstrakti (5. 2) kaliibri- misgraafiku (5. 3. 2) vahemikku jääva kontsentratsiooni saamiseks