TCEP
A TCEP (trisz(2-karboxietil)foszfin)  egy tiolmentes (-SH atomcsoportot nem tartalmazó), szagtalan, stabil, hatékony diszulfidkötés redukálószer. Gyakran alkalmazzák biokémiai és molekuláris biológiai laboratóriumi munkák során.

Előnyei
A fehérjékben és peptidekben található diszulfid kötések redukciójára használják, a DTT, DTE, és β-merkapto-etanol redukálószerekhez hasonlóan. A többiekhez képest a TCEP stabilabb, hatékonyabb és alkalmazható alacsonyabb pH tartományban is. A közel 100%-os hatáshoz szobahőmérsékleten néhány perc is elég. Képes redukálni még a legstabilabb vízoldható alkil-diszulfidokat is. A levegő oxigénjével nem lép reakcióba, nem illékony és a fehérjékben található egyéb funkciós csoportokkal nem reagál. Ezen kívül a TCEP-nek az is előnye, hogy nem tud bejutni a fehérjék hidrofób magjába, így csak a felszínen található, a levegő oxigénje által összeoxidált diszulfid hidakat redukálja.

Általában hidrokloridjával dolgoznak (TCEP-hidroklorid), ami nagyon jól oldódik vízben és pufferekben. Mivel erősen hidrofil, nagyon rosszul oldódik szerves oldószerekben, valamint etanolban és metanolban is korlátozottan oldódik. A TCEP-hidrokloridból 100-200 mM koncentrációjú törzsoldatot készítenek, amit megfelelő oldattal vagy pufferrel alkalmazás előtt 10-100-szorosan hígítanak. Minden vizes alapú pufferoldatban használható, azonban foszfát-pufferekben nem túl stabil. A törzsoldat pH értéke savas (2 és 3 között van), ezért használat előtt (5M koncentrációjú) NaOH oldattal közel semlegesre állítják a pH-ját. A törzsoldat -20 °C-on sokáig (évekig) eltartható. Kihígított puffer oldata több napig is eltartható anélkül, hogy elbomlana vagy reagálna a levegő oxigénjével.

Általános reakció mechanizmusa diszulfid kötést tartalmazó vegyületekkel 

A reakció első lépéseként a TCEP foszforatomjának nemkötő elektronpárja (ami részlegesen negatív töltésű) nukleofil támadást indít az alkil-szulfid kénatomja ellen. Ennek hatására felszakad a kén-kén kötés, egy negatív töltésű alkil-szulfid távozócsoport, és egy pozitív töltésű alkil-szulfid-foszfin kation keletkezik.

A reakció második lépésében a szulfid csoportot tartalmazó negatív töltésű anion támadja meg a pozitív töltésű foszfin származékot. A redukálószer irreverzibilisen elreagál, így biztosítani kell, hogy a fehérje / polipeptidlánc koncentrációjához képest feleslegben legyen. Tömény fehérje oldatokban magasabb, 5-50 mM koncentrációban kell használni.

Alkalmazása
 Biokémiai és molekuláris biológiai pufferekben a fehérjékben található cisztein oldalláncok oxidációjának a megakadályozására, és a nem megfelelő intra- és intermolekuláris S-S kötések felszakítására. A fehérjék biológiai aktivitásához megfelelő harmadlagos és negyedleges szerkezetre van szükség. Ennek létrejöttében nagy szerepet töltenek be a megfelelő helyen lévő diszulfidhidak, amelyeknek kialakulása a sejten belül biztosított. In vitro körülmények között levegőn létrejönnek olyan diszulfidhidak, amelyek gátolják a fehérje biológiai funkcióját; ezeket redukcióval szét kell választani.
 Ciszteinek jelölése malein-imidekkel. A TCEP nem lép reakcióba a reagenssel, ellentétben a DTT és a β-merkapto-etanol redukálószerekkel.
 Gélelektroforézis (SDS-PAGE) során a mintafelvivő pufferben redukálószerként. Ugyanakkor nem használható izoelektromos fókuszáláshoz, mivel vizes közegben töltéssel rendelkezik.
 A DTT-vel, DTE-vel és a β-merkapto-etanollal ellentétben használható fém affinitás kromatográfiában.

Források
 Angol Wikipédia 
 Német Wikipédia 

Foszforvegyületek
A TCEP ( trisz ( 2-karboxietil ) foszfin ) egy tiolmentes ( -SH atomcsoportot nem tartalmazó ) , szagtalan , stabil , hatékony diszulfidkötés redukálószer . Gyakran alkalmazzák biokémiai és molekuláris biológiai laboratóriumi munkák során . Előnyei A fehérjékben és peptidekben található diszulfid kötések redukciójára használják , a DTT , DTE , és β-merkapto-etanol redukálószerekhez hasonlóan . A többiekhez képest a TCEP stabilabb , hatékonyabb és alkalmazható alacsonyabb pH tartományban is . A közel-os hatáshoz szobahőmérsékleten néhány perc is elég . Képes redukálni még a legstabilabb vízoldható alkil-diszulfidokat is . A levegő oxigénjével nem lép reakcióba , nem illékony és a fehérjékben található egyéb funkciós csoportokkal nem reagál . Ezen kívül a TCEP-nek az is előnye , hogy nem tud bejutni a fehérjék hidrofób magjába , így csak a felszínen található , a levegő oxigénje által összeoxidált diszulfid hidakat redukálja . Általában hidrokloridjával dolgoznak ( TCEP-hidroklorid ) , ami nagyon jól oldódik vízben és pufferekben . Mivel erősen hidrofil , nagyon rosszul oldódik szerves oldószerekben , valamint etanolban és metanolban is korlátozottan oldódik . A TCEP-hidrokloridbólmM koncentrációjú törzsoldatot készítenek , amit megfelelő oldattal vagy pufferrel alkalmazás előttszorosan hígítanak . Minden vizes alapú pufferoldatban használható , azonban foszfát-pufferekben nem túl stabil . A törzsoldat pH értéke savasésközött van ) , ezért használat előtt koncentrációjú ) NaOH oldattal közel semlegesre állítják a pH-ját . A törzsoldat°C-on sokáig ( évekig ) eltartható . Kihígított puffer oldata több napig is eltartható anélkül , hogy elbomlana vagy reagálna a levegő oxigénjével . Általános reakció mechanizmusa diszulfid kötést tartalmazó vegyületekkel A reakció első lépéseként a TCEP foszforatomjának nemkötő elektronpárja ( ami részlegesen negatív töltésű ) nukleofil támadást indít az alkil-szulfid kénatomja ellen . Ennek hatására felszakad a kén-kén kötés , egy negatív töltésű alkil-szulfid távozócsoport , és egy pozitív töltésű alkil-szulfid-foszfin kation keletkezik . A reakció második lépésében a szulfid csoportot tartalmazó negatív töltésű anion támadja meg a pozitív töltésű foszfin származékot . A redukálószer irreverzibilisen elreagál , így biztosítani kell , hogy a fehérje / polipeptidlánc koncentrációjához képest feleslegben legyen . Tömény fehérje oldatokban magasabb,mM koncentrációban kell használni . Alkalmazása Biokémiai és molekuláris biológiai pufferekben a fehérjékben található cisztein oldalláncok oxidációjának a megakadályozására , és a nem megfelelő intra- és intermolekuláris S-S kötések felszakítására . A fehérjék biológiai aktivitásához megfelelő harmadlagos és negyedleges szerkezetre van szükség . Ennek létrejöttében nagy szerepet töltenek be a megfelelő helyen lévő diszulfidhidak , amelyeknek kialakulása a sejten belül biztosított . In vitro körülmények között levegőn létrejönnek olyan diszulfidhidak , amelyek gátolják a fehérje biológiai funkcióját ; ezeket redukcióval szét kell választani . Ciszteinek jelölése malein-imidekkel . A TCEP nem lép reakcióba a reagenssel , ellentétben a DTT és a β-merkapto-etanol redukálószerekkel . Gélelektroforézis ( SDS-PAGE ) során a mintafelvivő pufferben redukálószerként . Ugyanakkor nem használható izoelektromos fókuszáláshoz , mivel vizes közegben töltéssel rendelkezik . A DTT-vel , DTE-vel és a β-merkapto-etanollal ellentétben használható fém affinitás kromatográfiában . Források Angol Wikipédia Német Wikipédia Foszforvegyületek