Xác định hàm lượng prolin trong mật ong theo Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 như thế nào?
Tôi có một thắc mắc: Theo quy định thì việc xác định hàm lượng prolin trong mật ong theo Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 như thế nào?
Mong được giải đáp thắc mắc!
<subquestion>Xác định hàm lượng prolin trong mật ong theo Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 như thế nào?</subquestion>
Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 về mật ong - xác định hàm lượng prolin được ban hành năm 2018
Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 này quy định phương pháp xác định hàm lượng prolin trong mật ong.
Lưu ý: Hàm lượng prolin là chỉ số chất lượng của mật ong và chỉ ra sự giả mạo khi hàm lượng giảm xuống dưới một giá trị xác định.
Nguyên tắc xác định hàm lượng prolin như sau: Prolin và ninhydrin tạo thành một phức màu. Sau khi thêm 2-propanol đo độ hấp thụ tại bước sóng cực đại của dung dịch mẫu thử và dung dịch chuẩn. Hàm lượng prolin được xác định theo tỷ lệ.

Xác định hàm lượng prolin trong mật ong theo Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018? (Hình từ Internet)
<subquestion>Thuốc thử và dụng cụ thiết bị để xác định hàm lượng prolin trong mật ong quy định như thế nào?</subquestion>
Theo Mục 4 và Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 quy định về thuốc thử và dụng cụ thiết bị để xác định hàm lượng prolin trong mật ong như sau:
[1] Thuốc thử
Chỉ sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích và nước cất hoặc nước có chất lượng tương đương, trừ khi có quy định khác.
- Axit formic (HCOOH), độ tinh khiết từ 98 % đến 100 %.
- Dung dịch ninhydrin, 3 % (thể tích)
Hoà tan 3,0 g ninhydrin trong 100 ml etylen glycol monometyl ete không chứa peroxit.
- Dung dịch chuẩn prolin
+ Dung dịch chuẩn gốc prolin trong nước, 40 mg/50 ml
Pha loãng 40 mg prolin trong 50 ml nước.
+ Dung dịch chuẩn làm việc, 0,8 mg/25 ml
Pha loãng 1 ml dung dịch gốc (4.3.1) bằng nước đến 25 ml. Chuẩn bị dung dịch mới trong ngày làm việc.
- 2-propanol, 50 % trong nước.
[2] Thiết bị, dụng cụ
Sử dụng các thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường và cụ thể như sau:
- Máy đo quang phổ, có thể đo được bước sóng từ 500 nm đến 520 nm.
- Cuvet, chiều dài đường quang 1 cm.
- Ống phản ứng, có nắp đậy hoặc bằng nắp văn bằng borosilicat, thể tích danh định 20 ml.
- Bình định mức, thể tích danh định 100 ml.
- Nồi cách thủy, có thể điều chỉnh đến nhiệt độ đun sôi.
- Cốc có mỏ.
- Pipet.
- Cân phân tích, có thể cân chính xác đến 0,001 g
- Sàng, cỡ lỗ 0,5 mm.
- Tủ sấy, có thể duy trì nhiệt độ ở 40 °C.
<subquestion>Cách tiến hành xác định hàm lượng prolin trong mật ong thực hiện như thế nào?</subquestion>
Theo Mục 7 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 quy định về cách tiến hành xác định hàm lượng prolin như sau:
[1] Chuẩn bị mẫu thử
- Mật ong lỏng hoặc mật ong kết tinh không chứa chất ngoại lai
Đồng hóa mẫu phòng thí nghiệm bằng cách khuấy kỹ (ít nhất 3 phút). Tiến hành cẩn thận để hạn chế tối đa không khí bị khuấy lẫn vào mẫu. Nếu mẫu mật ong kết tinh thành một khối cứng và chắc, có thể làm mềm trước bằng cách làm nóng trong tủ sấy hoặc nồi cách thủy ở nhiệt độ không quá 40 °C.
- Mật ong lỏng hoặc mật ong kết tinh chứa chất ngoại lai
Loại bỏ các chất thô, sau đó khuấy mật ong ở nhiệt độ phòng và lọc qua sàng cỡ lỗ 0,5 mm. Nhẹ nhàng ép mật ong đã kết tinh bằng thìa qua sàng.
- Mật ong sáp (nguyên tổ)
Tháo sáp ong, ép qua sàng cỡ lỗ 0,5 mm (không cần đun nóng) để tách mật ong ra khỏi sáp.
[2] Chuẩn bị dung dịch mẫu thử
Cân khoảng 5 g mật ong đã chuẩn bị, chính xác đến 0,001 g, hòa tan vào 50 ml nước trong cốc có mỏ, chuyển định lượng vào bình định mức 100 ml. Pha loãng bằng nước đến vạch và lắc đều.
[3] Phép xác định
Dùng pipet lấy chính xác 0,5 ml dung dịch mẫu thử cho vào ống phản ứng thứ nhất, 0,5 ml nước (mẫu thử trắng) vào ống phản ứng thứ hai và 0,5 ml dung dịch chuẩn prolin vào ống phản ứng thứ ba.
Thêm 1 ml axit formic và 1 ml dung dịch ninhydrin vào mỗi ống. Đậy ống cẩn thận và lắc mạnh trong 15 min. Đặt trong nồi cách thủy đun sôi trong thời gian 15 min, nhúng các ống ngập trong dung dịch. Chuyển sang nồi cách thủy để ở 70 °C trong 10 min.
Thêm 5 ml dung dịch 2-propanol trong nước vào mỗi ống và đậy nắp ngay. Lấy ra khỏi nồi cách thủy 70 °C, để nguội và xác định độ hấp thụ trong khoảng 45 min đo ở bước sóng cực đại 510 nm, sử dụng cuvet 1 cm.
Cần chú ý hệ số hấp thụ quang không ổn định, do đó mỗi một lần đo cần thực hiện lặp lại 3 lần để xác định giá trị trung bình.

TCVN 12400:2018 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12400:2018 TCVN 12400:2018