Trực khuẩn gram dương giữ lại thuốc nhuộm tinh thể màu tím (có màu xanh đậm) sau khi cố định bằng iod, khử màu bằng cồn và nhuộm tương phản bằng safranin; trực khuẩn gram âm, không bắt thuốc nhuộm màu tím, thể hiện màu đỏ.