3、实验室事故案例
生物性安全事故
【案例1】传染性疾病　2010年12月19号的一次实验，改变了东北农业大学28名师生的人生轨迹。这是一次羊活体动物实验，先解剖，再肢解，最后观察羊内脏。整堂解剖课从上午一直持续到下午，它的结果却是：28人感染严重布鲁氏杆菌传染病。
实验设备安全事故
【案例1】厌氧培养箱　2009年10月25日，北京理工大学实验室发生爆炸：北京理工大学5号教学楼9层实验室发生爆炸，5人受伤。爆炸的厌氧培养箱为新购进的设备，调试中可能因压力不稳引发事故。
【案例2】储气钢瓶　2015年4月5日，中国矿业大学南湖校区化工学院实验室发生储气钢瓶爆燃事故，5人受伤，其中1人抢救无效死亡，1人重伤截肢；
【案例3】加热设备2010年6月21日，宁波大学重点实验室——应用海洋生物技术教育部重点实验室-种质资源保护与良种选育实验室发生大火，原因是两个粗心的学生正在该实验室做实验：用电磁炉熔化石蜡。后来暂时离开了一会，没想到就发生了火灾。
【案例4】高压反应2011年12月7日上午11点左右，南开大学一名女生在做化学实验时发生了意外，手部严重受伤。实验台上一片狼藉，阳台地上散落着被爆炸震碎的玻璃。受伤女生是南开大学化学学院无机专业的一名博士生，从爆炸的程度来看，初步推断当时可能正在做高压化学实验。这名女生被送往了武警医院，医生透露，除了面部和颈部有大面积擦伤外，这名女生手部严重受伤。
【案例5】气体泄漏2012年2月15日，南京大学实验室发生甲醛泄漏，事故中不少学生喉咙痛、流眼泪，感觉不适。实验室飘出白色气体，捂鼻、眯眼、一路小跑，师生紧急疏散。原因是老师做实验时违规离开。
易燃易爆试剂
【案例1】丁基锂自燃　2008年12月，加州大学洛杉矶分校（ucla）一名23岁研究助理sheharbano sangji在实验室取用丁基锂的过程中，因注射器活塞滑脱，导致药品暴露在空气中发生自燃，她的衣服着火。尽管实验室中有紧急淋浴装置，但sangji却没有去使用它灭火，她尖叫着在实验室中来回奔跑。由于当时她没有穿实验工作服，因此造成了三度烧伤;18天后，她在医院离世。
2011年，她的导师patrick harran教授也成为美国首个因实验室事故而面临违反健康安全标准等3项罪状刑事指控的有机化学家。他需要向sangji接受治疗的烧伤病房支付1万美元，并在5年的时间内履行以下条款才可能避免牢狱之灾：设置实验室安全培训课程作为其所教授的有机化学课的一部分；告知即将入学的ucla新生实验室安全的重要性；在医院进行800个小时的与教学无关的社区服务。
马萨诸塞州纳蒂克实验室安全研究所所长jim kaufman说，这场法律诉讼是“规则改变者”，这将显著影响人们思考自身责任的方式，以及释放一个很清楚的信号：有坐牢的可能性。 ucla校长gene block说：“这场事故是一次悲剧，但不是一次犯罪。”
【案例2】氢气瓶泄漏　2015年12月18日上午，清华大学化学系何添楼一实验室发生火灾事故，一名博士后不幸遇难。当天所进行的实验是催化加氢实验，实验所用氢气瓶意外爆炸、起火。
【案例3】实验物料爆炸　2011年4月14日，四川大学江安校区第一实验楼b座103化工学院一实验室三名学生在做常压流化床包衣实验过程中，实验物料意外发生爆炸，3名学生受伤。
【案例4】双氧水爆炸　2010年6月9日，由于做实验时发生差错，中国科学院大连化学物理研究所一实验室发生爆炸，部分居民家玻璃被震碎，所幸没有造成人员伤亡。爆炸化学物品为双氧水。
【案例5】乙醚引燃　2005年 8月8号,首都师范大学化学系在实验楼二层的一个实验室在做实验时不慎引燃乙醚发生火灾,造成两人被烧伤。
放射性物质
【案例1】废弃物 某高校进行实验室搬迁，雇了一些民工来负责搬运清理，其中有位民工发现某仓库中有十几只篮球般大小的铅罐，觉得好玩，就打开了一只，看看只有几颗小金属粒就准备重新盖好，这时正好有知情的老师过来，告诉他这是放射性物质专门储藏罐，并告之这位民工他已受到了辐射，需马上送医院检查。所幸的是该放射性物质的强度一般，而且接触时间短，送医院及时，这位民工住院半个月，身体就慢慢恢复了健康。【分析与教训】该实验室的管理虽已采取了一定的措施，但仍不规范，台账不是很清楚，搬运时又没有专门人员负责，这是管理上的问题。而从民工的角度来说，缺乏基础知识，好奇心强，盲目操作，终于造成伤害。因此，对于放射性物质的采购、保管、使用和废弃都必须严格按照规定执行，杜绝随意、不负责任的行为，保障人身安全。
信息安全
【案例1】数据资料《每日新报》2004年9月17日报道，2004年7月初，洛斯阿拉莫斯国家实验室一个管区内的研究人员发现两张存有重要数据的光盘失踪，负责管理该实验室的加利福尼亚大学宣布，暂停这个实验室的一切具有保密性质的研究工作，全面查找丢失的绝密资料。有4名雇员因涉嫌泄密被开除，1名被要求辞职，7人被降职、减薪或被要求写检查。【分析与教训】洛斯阿拉莫斯国家实验室是全球第一颗原子弹的诞生地，信息安全受到了最严格的控制。但是，实验室一直受到设备失窃和管理不善的困扰，信息安全事故时有发生，比如，当年5月，报告有机密文件丢失了，后来说是销毁了；6月，一个敏感区域的钥匙丢失了一整天。可见，实验室信息安全绝非小事。
其它
【案例1】火灾　2010年5月15日，巴西最大生物研究所――布坦坦研究所发生火灾，许多珍藏了近百年的动物标本被毁。存放众多蛇类、蝙蝠和蝎子等标本的大楼灾情严重，许多存放了近百年的标本毁于一旦。不过好在抢救及时，所有用作研究的活体生物被安然转移到安全地带。布坦坦研究所当天发表公报称，当地政府已经获悉灾情，并承诺将拨款重建。布坦坦研究所创立于1901年，位于巴西最大城市圣保罗西郊，是巴西乃至南美洲地区最大的生物研究所，其研制的疫苗广泛应用于巴西医药领域。
核酸电泳实验
琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化dna片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的dna片段。此外，还可以从电泳后的凝胶中回收特定的dna条带，用于以后的克隆操作。
实验原理：当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶eb染色，在紫外光下至少可以检出1-10ng的dna条带，从而可以确定dna片段在凝胶中的位置。
通常采用水平装置在强度和方向恒定的电场下进行琼脂糖电泳。dna电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于dna分子的大小。琼脂糖凝胶分离dna片度大小范围较广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的dna片段。
一般情况下，分离小于0.5kb的dna片段所需胶浓度是1.2-1.5%，分离大于10kb的dna分子所需胶浓度为0.3-0.7%，dna片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
一、设备
水平式电泳装置，电泳仪，台式高速离心机， 恒温水浴锅， 微量移液枪， 微波炉或电炉，紫外透射仪，照相支架， 照相机及其附件。
二、试剂
1、5×tbe电泳缓冲液。
2、6×电泳载样缓冲液。
3、溴化乙锭(eb)溶液母液:将eb配制成10mg/ml，用铝箔或黑纸包裹容器，储于室温即可。
三、琼脂糖凝胶的制备
1、取5×tbe缓冲液20ml加水至200ml，配制成0.5×tbe稀释缓冲液，待用。
2、胶液的制备：称取0.4g琼脂糖，置于200ml锥形瓶中，加入50ml 0.5×tbe稀释缓冲液，放入微波炉里(或电炉上)加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8％琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。
3、灌胶：
（1）将有机托盘放入制胶模具上，插上样品梳子，注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm左右的间隙。
（2）向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(eb)溶液使其终浓度为0.5μg/ml(也可不把eb加入凝胶中，而是电泳后再用0.5μg/ml的eb溶液浸泡染色)。
（3）将琼脂糖小心地倒入胶槽内，使胶液形成均匀的胶层。倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀，速度也不可太快，否则容易出现气泡。
（4）待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶，然后向槽内加入0.5×tbe稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。因边缘效应样品槽附近会有一些隆起，阻碍缓冲液进入样品槽中，所以要注意保证样品槽中应注满缓冲液。
4、加样：取10μl酶解液与2μl 6×载样液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中。若dna含量偏低，则可依上述比例增加上样量，但总体积不可超过样品槽容量。每加完一个样品要更换tip头，以防止互相污染，注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。
5、电泳：加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在60-80v，电流在40ma以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时，停止电泳。
6、染色：未加eb的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml的eb溶液中，室温下染色20-25分钟。
7、观察和拍照：
在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有eb的电泳胶板。dna存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。
sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)
实验原理：
sds-page是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。  
sds是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。sds蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。
试剂和器材：
试剂：
1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/l的tris-hcl(ph6.8)，5ml 50%甘油，2ml 10%的sds，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。
2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。
3. ph8.9分离胶缓冲液： tris 36.3g ，加1mol/l hcl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调ph8.9，定容至100ml，4℃保存。
4. ph6.7浓缩胶缓冲液：tris 5.98g ，加1mol/l hcl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调ph6.7，定容至100ml，4℃保存。
5. temed（四乙基乙二胺）原液
6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）
7. ph8.3 tris-甘氨酸电极缓冲液：称取tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调ph8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，临用前稀释10倍。
8. 考马斯亮蓝g250染色液：称100mg考马斯亮蓝g250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。
实验操作
（一）样品制备
将蛋白质样品与5x样品缓冲液（20ul＋5ul）在一个eppendorf管中混合。放入100℃加热 5－10min，取上清点样。
（二）分离胶及浓缩胶的制备
1 将玻璃板、样品梳、spacer用洗涤剂洗净，用ddh2o 冲洗数次，再用乙醇擦拭，晾干；
2 将两块洗净的玻璃板之间加入spacer，按照bio-rad mini Ⅱ/Ⅲ说明书提示装好玻璃板；
3 按如下体积配制10％分离胶8.0 ml，混匀；
ddh2o　3.0 ml  
1.0 mol/ltris-hcl ph=8.8　2.1 ml  
30% acr-bis　2.8 ml  
10% sds　80 ul  
10%ap　56 ul  
temed 　6 u
4 向玻璃板间灌制分离胶，立即覆一层重蒸水，大约20 min后胶即可聚合；
5 按如下体积配制6％浓缩胶3.0 ml，混匀；ddh2o 1.0 mol/ltris-hclph=6.8 30% acr-bis
2.0 ml 400 ul 600 ul  
10% sds 10% ap temed  
36ul 24ul 4ul
6 将上层重蒸水倾去，滤纸吸干，灌制浓缩胶，插入样品梳；
7 装好电泳系统，加入电极缓冲液，上样20 μl;
8 稳压200v，溴酚蓝刚跑出分离胶时，停止电泳，约需45 min～1hr.
9 卸下胶板，剥离胶放入染色液中，室温染色1～2 hr；加入脱色液，置于80 rpm脱色摇床上，每20 min更换一次脱色液（10 ml 冰乙酸；45 ml乙醇；45 ml蒸馏水）至完全脱净。