Jes Holtsø spillede med i langt de fleste af filmene med Olsen-banden, hvor han i rollen som Børge var en vigtig figur medvirkende til mange af bandens kup. Endvidere medvirkede han op gennem 1970'erne i serien Huset på Christianshavn samt i filmen Ballade på Christianshavn fra 1971 som flyttemand Olsens søn William. Herudover har han også haft en enkelt rolle i filmen Stine og drengene fra 1969. Udover at være skuespiller var han også rekvisitør i Olsen-banden ser rødt. I 2009 deltog han som sanger i tv-programmet Talent 2009 akkompagneret af Morten Wittrock og Ray Weaver, hvor han fremførte sangene "She Is My Shelter", "What's This Road" og "Strong", og han ytrede i den forbindelse ønske om at få lov at synge noget mere og igen at blive brugt som skuespiller. Han kom videre til finalen og blev placeret som nummer fem. Talentkonkurrencen formåede at sætte så meget fokus på Jes Holtsø, at han i foråret 2010 udkom med sit første selvbetitlede album, produceret af Morten Wittrock. Albummet fik 5 stjerner i BT og Berlingske Tidende samt 4 stjerner i Politiken og Ekstrabladet. i 2012 udkom albummet Big Easy med tekst og musik af Morten Wittrock og Ray Weaver, produceret af Morten Wittrock. Albummet modtog 5 stjerner i Berlingske, og Jes Holtsø fik prisen "Årets Danske Blues navn" 2012 og nominering til Danish Music Awards Folk 2012. Holtsø og Wittrock blev i 2013 nomineret til en Danish Music Awards for Årets Danske Bluesudgivelse.