Koloni PCR nedir? Koloni PCR nasıl yapılır? - Laboratuvar Notları - Biyoloji Günlüğü
Bunun için, hedef genimizi tanıyacak spesifik primerlere ihtiyaç vardır. Pozitif kolonilerden elde edilecek DNA örneği ve bu primerler kullanılarak yapılacak PCR reaksiyonu ile istenilen bant büyüklüğünü veren koloniler bizim istediğimiz DNA parçasını taşıyor demektir.
Test edilecek koloniden öze yardımıyla gözle görünür bir parça alınarak yaklaşık 50ul steril su içinde çözündürülür.
10dk kaynayan su içinde bekletilerek plazmitlerin patlayan hücrelerden çıkması sağlanır.
Kısa bir santrifüjleme ile bakteri kalıntıları çökeltilir.
Üstteki sulu kısımdan 0.5-1ul alınarak PCR reaksiyonu kurulur.
Beklenen bantların oluşup oluşmadığı agaroz jel elektroforezinden sonra belirlenir.