Evaluation of Red Cell Membrane Cytoskeletal Disorders Using a Flow Cytometric Method in South Iran [Turk J Hematol]
Turk J Hematol. 2014; 31(1): 25-31 | DOI: 10.4274/Tjh.2012.0146
Evaluation of Red Cell Membrane Cytoskeletal Disorders Using a Flow Cytometric Method in South Iran
Habib Alah Golafshan1, Reza Ranjbaran1, Tahereh Kalantari1, Leili Moezzi1, Mehran Karimi2, Abbas Behzad- Behbahani1, Farzaneh Aboualizadeh1, Sedigheh Sharifzadeh1
1Diagnostic Laboratory, Sciences And Research Technology Center, Shiraz University Of Medical Sciences, Shiraz, Iran / School Of Para Medical Sciences, Shiraz University Of Medical Sciences, Shiraz, Iran
2Hematology Research Center, Shiraz University Of Medical Sciences, Shiraz, Iran
OBJECTIVE: The diagnosis of hereditary red blood cell (RBC) membrane disorders, and in particular hereditary spherocytosis (HS) and Southeast Asian ovalocytosis (SAO), is based on clinical history, RBC morphology, and other conventional tests such as osmotic fragility. However, there are some milder cases of these disorders that are difficult to diagnose. The application of eosin-5’-maleimide (EMA) was evaluated for screening of RBC membrane defects along with some other anemias. We used EMA dye, which binds mostly to band 3 protein and to a lesser extent some other membrane proteins, for screening of some membrane defects such as HS.
METHODS: Fresh RBCs from hematologically normal controls and patients with HS, SAO, hereditary elliptocytosis, hereditary spherocytosis with pincered cells, severe iron deficiency, thalassemia minor, and autoimmune hemolytic anemia were stained with EMA dye and analyzed for mean fluorescent intensity (MFI) using a flow cytometer.
RESULTS: RBCs from patients with HS and iron deficiency showed a significant reduction in MFI compared to those from normal controls (p<0.0001 and p<0.001, respectively), while macrocytic RBCs showed a significant increase in MFI (p<0.01). A significant correlation was shown between mean corpuscular volume and MFI, with the exceptions of HS and thalassemia minor.
CONCLUSION: Our results showed that the flow cytometric method could be a reliable diagnostic method for screening and confirmation, with higher sensitivity and specificity (95% and 93%, respectively) than conventional routine tests for HS patients prior to further specific membrane protein molecular tests.
Keywords: RBC, Membrane disorders, Band 3, Flow cytometry
Güney İran’da Eritrosit Zarı Hücre İskelet Bozukluklarının Akım Sitometri ile Değerlendirilmesi
AMAÇ: Kalıtsal eritrosit zarı bozukluklarının ve özellikle kalıtsal sferositoz ve Güneydoğu Asya ovalositozunun tanısı klinik öykü, eritrosit morfolojisi ve ozmotik frajilite gibi konvansiyonel testlere dayanmaktadır. Ancak bu hastalıkların tanı koymada zorlanılan daha hafif formları bulunmaktadır. Eozin-5-malemid’in (EMA) kullanımı diğer anemiler yanında eritrosit zarı bozukluklarının taramasında değerlendirilmiştir. Biz HS gibi bazı zar bozukluklarının değerlendirilmesinde, öncelikle band 3 proteinini ve daha az oranda diğer zar proteinlerini bağlayan, EMA boyasını kullandık.
YÖNTEMLER: Hematolojik açıdan normal kontrollerin ve HS, SAO, kalıtsal eliptositoz, kıskaç hücreli kalıtsal sferositoz, ağır demir eksikliği anemisi, talasemi minor ve otoimmun hemolitik anemi hastalarının taze eritrositleri EMA ile boyandı ve akım sitometri kullanılarak ortalama floresan yoğunluğu (MFI) değerlendirildi.
BULGULAR: HS ve demir eksikliği olan hastaların eritrositleri normal kontrollere kıyasla MFI açısından anlamlı düşüklük gösterirken (sırasıyla p<0,0001 and p<0,001), makrositik eritrositlerde MFI anlamlı olarak yüksekti (p<0,01). HS ve talasemi minor haricinde ortalama eritrosit hacmi ile MFI’nin anlamlı düzeyde ilişkili olduğu gösterildi.
SONUÇ: Sonuçlarımız HS hastalarının taraması ve doğrulaması için, konvansiyonel rutin testlerden daha yüksek duyarlık (%95) ve özgünlüğe (%93) sahip olan akım sitometrinin zar proteinlerine yönelik ek, özgün moleküler testler öncesinde güvenilir bir tanısal yöntem olabileceğini göstermektedir.
Anahtar Kelimeler: Eritrosit, zar bozuklukları, band 3, akım sitometri
Habib Alah Golafshan, Reza Ranjbaran, Tahereh Kalantari, Leili Moezzi, Mehran Karimi, Abbas Behzad- Behbahani, Farzaneh Aboualizadeh, Sedigheh Sharifzadeh. Evaluation of Red Cell Membrane Cytoskeletal Disorders Using a Flow Cytometric Method in South Iran. Turk J Hematol. 2014; 31(1): 25-31
Corresponding Author: Sedigheh Sharifzadeh, Iran