GEN Plaza Biyoteknoloji Merkezi / Forum / Multiplex PCR nedir?
Anasayfa › Forumlar › PCR › Multipleks PCR › Multiplex PCR nedir?
Etiket: biyoloji, covid19 pcr, deney, gen, genetik, multiplex, multiplex pcr, multiplex pcr kiti, pcr
Bu konu 0 yanıt ve 1 izleyen içeriyor ve en son biyolog@genplaza.com tarafından 1 ay 2 hafta önce tarihinde güncellendi.
15 Nisan 2020: 15:03 #2937
Multiplex PCR, tek bir PCR deneyinde çoklu hedeflerin amplifikasyonu için kullanılan bir yöntemdir. Bir multipleks çalışmada, PCR karışımında birden çok primer çifti kullanılarak birden fazla hedef bölge çoğaltılır (sanki bir reaksiyonda hep birlikte birçok PCR reaksiyonu gerçekleştiriyormuş gibi). Multipleks çalışmalar laboratuvarda zaman ve çabadan önemli ölçüde tasarruf sağlar.
Multiplex PCR uygulama alanları: Patojen Tanımlaması, Yüksek Verimli SNP Genotipleme, Mutasyon Analizi, Gen Silme Analizi, Şablon Ölçümü, Bağlantı Analizi, RNA Tespiti, Adli Çalışmalar
Multipleks PCR Çeşitleri
Multipleks reaksiyonlar iki şekilde ayrılabilir:
1. Tek Şablon PCR Reaksiyonu
Tek bir şablon içindeki belirli bölgeleri çoğaltmak için birden fazla ileri(forward) ve geri(reverse) primer çiftleri bulunur ve birden fazla DNA bölgesi çoğaltır.
2. Çoklu Şablon PCR Reaksiyonu
Birden çok şablon içindeki belirli bölgeleri çoğaltmak için birden fazla ileri(forward) ve geri(reverse) primer çiftleri bulunur ve birden fazla DNA bölgesi çoğaltır. Birden fazla primerler bulunması birbirlerine ve diğer şablonlar ile yanlış bağlanma ile çapraz melezleşmeye yol açabilir.
Multiplex PCR Avantajları
Basit bir PCR’daki olası problemler arasında reaksiyon hatalarından kaynaklanan yanlış negatifler veya kontaminasyon nedeniyle yanlış pozitifler bulunabilir. Her bir bağlanma diğer bağlanmalar için bir iç kontrol sağlar bu nedenle yanlış negatifler multipleks analizlerde ortaya çıkar kendi içinde kontrol sağlanmış olur.
Reaktiflerin kullanım oranı ve hazırlama süresinin maliyeti, multipleks PCR’de, birkaç ayrı PCR tüpünün kullanıldığı sistemlere göre daha azdır. Multiplex bir çalışma, kısıtlı zamanlarda ve düşük maliyetlerde polimeraz ve şablonların kullanım miktarı için idealdir.
3. Şablon Kalite Göstergesi
Şablonun kalitesi, multipleks olarak basit bir PCR reaksiyonundan daha etkili bir şekilde belirlenebilir.
4. Şablon Miktarı Göstergesi
Multiplex PCR’nin üstel amplifikasyonu ve dahili standartları, bir örnekteki belirli bir şablonun miktarını değerlendirmek için kullanılabilir. Şablonları multipleks PCR ile doğru bir şekilde hesaplamak için referans şablon miktarı, reaksiyon döngüleri sayısı ve her döngü için şablonun iki katına çıkarılmasının minimum bağlanma hesaba katılmalıdır.