Voges-Proskauer Test Vakfı, Hazırlanması ve Kullanımı / biyoloji | Thpanorama - Bugün kendini daha iyi yap!
Voges-Proskauer Test Vakfı, Hazırlanması ve Kullanımı
Voges-Proskauer testi Enterobacteriaceae familyasına ait bakterileri tanımlamaya yardımcı olmak için kullanılan bir biyokimyasal testtir. Özellikle suşları ayırt etmek yararlıdır Escherichia coli arasında Klebsiella ve Enterobacter, diğerleri arasında.
Test, RM / VP kısaltması tarafından daha iyi bilinen metil kırmızı-Voges Proskauer adlı sıvı kültür ortamında gerçekleştirilir. Bu ortam tamponlu polipepton, glukoz, dipotasyum fosfat ve damıtılmış sudan oluşur.
Mevcut RM / VP ortamı, başlangıçta daha düşük konsantrasyonda pepton ve glikoz içeren Clark ve Lubs ortamının bir modifikasyonudur. Bu nedenle, pozitif Voges-Proskauer reaksiyonu için gerekli olan daha az hidrojen iyonu üretildi.
Test, mikroorganizmanın butilen glikol yoluyla glikoz kullanma yeteneğine ve oksijen ve bir alkalin pH varlığında asetoin adı verilen nötr bir son ürün oluşturma kabiliyetine dayanmaktadır..
RM / VP ortamında, Voges-Proskauer testini açığa çıkarmanın yanı sıra, metil kırmızısı testi de açığa çıkarılabilir..
1.1 Voges-Proskauer testinin temeli
1.2 Test geliştirme ve yorumlamanın temeli
2.1 Orta RM / VP
2.2 Bir Reaktif Seçer
2.3 Voges B Reaktifi
Voges-Proskauer testinin 3 prosedürü
3.1 Testin geliştirilmesi
5 kalite kontrol
Voges-Proskauer testinin temeli
Ortamda bulunan pluripeptonlar, bakteri üremesi için gerekli olan besin gereksinimlerini sağlar. Bir kısmı için, glikoz ana bileşiktir. Birçok bakteri glukozu metabolize etme ve piruvik asit oluşturma yeteneğine sahiptir.
Piruvik asit, glukoz metabolizmasında bir orta noktadır ve oradan her bir mikroorganizma farklı yollar alabilir. Bazıları laktik asit, asetik asit, formik asit ve süksinik asit gibi karışık asitler oluşturacak ve diğerleri 2,3-bütandiol gibi nötr ürünler oluşturacaktır..
Voges-Proskauer testi, mikroorganizmanın aerobik koşullar altında 2,3-bütandiolün bir ara ürünü olan asetil metil karbinol (asetoin) oluşturma kabiliyetini ortaya koymaktadır.
Asetoin indirgenir ve 2,3-bütandiol oluşturur, ancak bu reaksiyon tersine çevrilebilir, böylece 2,3-bütandiol oksitlenirse, asetoin oluşur. Bu nedenle, oksijen esastır.
Dipotasyum fosfat, karışımı 6.9 ± 0.2 pH'da nemlendiren tampondur..
Test geliştirme ve yorumlamanın temeli
Reaksiyonu göstermek için, Voges A ve Voges B olarak bilinen iki reaktif (Barrit reaktifi) kullanılarak bir geliştirme yapılmalıdır..
Voges A,% 5'lik bir a-naftol çözeltisidir ve Voges B,% 40'lık bir potasyum hidroksit preparatıdır. Potasyum hidroksit mevcut değilse,% 40 sodyum hidroksit ile değiştirilebilir.
Α-naftol, reaksiyonun renginin yoğunluğunu artıracak ve testi daha hassas hale getiren bir katalizördür. Her zaman önce a-naftol eklenmeli, böylece ortam karıştırılarak ortamın oksijenle temas etmesi sağlanır. Bu şekilde, mevcut asetoin, diasetil'e oksitlenir ve 2,3-bütandiol, diasetil'e geçirerek asetoin oluşturmak üzere oksitlenir..
Bu, α-nafolün, sırasıyla pluripeptonlardan gelen amino asit arginininde bulunan guanidin çekirdeğine bağlı olan diasetil'e nasıl bağlanacağıdır..
Parçası olarak, potasyum veya sodyum hidroksit CO'nun emilmesinden sorumludur.2 ve peptonlarla reaksiyona girer. Bu reaksiyon, tüp çok iyi çalkalandıktan sonra net bir şekilde görülebilen pembe-somon renginin oluşumuna neden olur..
Renklendirmenin anında gerçekleşmesi için doğru miktarda diasetil, pepton ve a-naftol karıştırılmalıdır. Bu olmazsa, çevirmeden önce tüpü 15 dakika dinlendirin.
Genellikle, zayıf pembe renk görülebildiğinde, test 2 ila 5 dakika sonra pozitiftir. 30 dakika ila 1 saat boyunca dinlenmeye bırakılırsa, rengin yoğunluğu maksimum olacaktır (koyu kırmızı).
Et suyu sarı olduğunda negatif bir test ortaya çıkacaktır. 1 saat sonra, eğer test negatif ise, potasyum hidroksitin a-naftol üzerindeki reaksiyonu sonucunda bakır rengi oluşabilir..
Orta RM / VP
Susuz kültür besiyerinden 17 g tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. 5 dakika bekletin. Tamamen çözünene kadar kaynamaya kadar ısıtın. Tüplerde 3 ila 4 ml servis yapın ve 121 ° C'de 15 dakika otoklavda sterilize edin.
Susuzlaştırılmış kültür besiyeri bej ve hazırlanan besiyeri açık sarı renktedir..
Ortamın son pH değeri 6.9 ± 0.2'dir..
Bir Reaktif Seçti
5 g a-naftol tartılır ve 50 ml etil alkol (mutlak) içinde çözülür. Daha sonra 100 ml yapmak için etil alkol eklemeye devam edin.
Reaktif Voges B
40 g potasyum hidroksit tartın ve bir beherde 50 ml damıtılmış suda çözün. Cam, sıcaklığı kontrol etmek için soğuk bir su banyosuna yerleştirilmelidir, çünkü hazırlığı çözme sırasında keskin bir şekilde yükselir.
Çözelti soğuduktan sonra, dereceli bir balona aktarılır ve damıtılmış su ile 100 mL'ye getirilir.
Voges-Proskauer test prosedürü
Voges-Proskauer testini gerçekleştirmek için, RM / VP et suyu, incelenen mikroorganizma ile 18 ila 24 saatlik saf bir kültürden aşılanır..
Aşı çok yoğun olmamalıdır. Bazen inkübasyon birkaç gün boyunca gerekli olmasına rağmen, 35-37 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edilir. Cowan ve Steel, Enterobacteriaceae familyasının tüm pozitif Voges-Proskauer (VP) türlerini tespit etmek için gerekli olan minimum inkübasyon süresi olduğuna inanmaktadır..
1 mL'lik bir alikotu bir tüp içinde ayırın ve aşağıdaki gibi gelişmeyi gerçekleştirin: 12 damla (0.6 mL) Voges A reaktifi ve 4 damla (0.2 mL) Voges B yerleştirin. gerçekleştirmeden önce 5-10 dakika. Bununla birlikte, eğer test hala negatifse, 30 dakikadan 1 saate kadar tüpü durdurarak gözlemleyin..
Pembe-kırmızı bir rengin ortaya çıkması, Voges-Proskauer reaksiyonunun pozitif olduğunu gösterir. Ortam sarı renkte kalırsa, reaksiyon negatiftir.
Hatalı negatifleri önlemek için geliştiricilerin belirtilen sırada ve miktarlarda eklenmesi esastır.
Voges-Proskauer testi, türlerini ayırt etmek için kullanışlıdır. E. coli Klebsiella, Enterobacter, Serratia cinsinden VP negatif olan, VP pozitif olan diğerleri.
Hazırlanan ortamın kalitesini test etmek için kontrol suşları kullanılabilir. Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium ve Enterobacter cloacae ATCC 13047.
Beklenen sonuçlar sadece Voges-Proskauer reaksiyonları içindir K. pneumoniae ve E. cloacae. Gerisi olumsuz tepkiler verir.
Laboratuvarlar Britania. MR-VP Orta. 2015. Erişim: www.britanialab.com
Microkit Laboratuvarları M-Ident Voges Proskauer. 2014. Mevcut: http://www.medioscultivo.com
Mac Faddin J. (2003). Klinik öneme sahip bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editörden Panamericana. Buenos Aires Arjantin.
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
« Rorschach testi İnsanlar hakkında ne diyor? Torus Testis Besin İçeriği ve Tarifler »