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柱色谱法
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柱色谱法（英语：Column chromatography，又称为柱层析，俗称过柱子）是一种制备性色谱（Preparative chromatography），在化学中是最为常用的从混合物中分离纯净物的分离方法。不同蛋白质具不同大小、电荷、附着力，这些差异可以帮助分离从毫克到公斤级别的产物。柱色谱的主要优点是相对的低成本和可处理的固定相，选用的固定相可以避免重复利用的交叉污染和固定相的分解。
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固定相
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固定相通常为吸附性的粉末状固体。最常用的固定相是硅胶，其次是氧化铝。过去也有使用纤维素的。除此之外，离子交换色谱法、反相色谱法、亲和色谱法、扩张床吸附也可用于柱色谱。固定相与待分离物质干重之比是一个评估固定相效率的重要参数，对于硅胶，这一比值在20:1到100:1之间，取决于待分离物保留因子的接近程度。
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流动相
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流动相或称洗脱剂，可以是单组份的纯溶剂，但更多情况下选用一定比例的混合溶剂。流动相的选择对柱色谱分离至关重要。溶剂配比或根据文献，自己尝试时则需综合考虑产物和溶剂极性等因素。极性产物能被极性溶剂洗脱，而非极性产物能被非极性溶剂洗脱。常使用薄层色谱法（TLC）测试各组分的保留因子，以确定固定相溶剂种类和配比。通常，保留因子在0.2至0.3之间较为合适，平衡了分离效率和溶剂消耗量。_NEWLINE_流动相的流出速率影响分离的效果。较快的速率能缩短实验时间，并且减少扩散，因而使得分离效果更好。然而流速也不是越快越好，因为固定相和流动相之间平衡需要时间。范第姆特方程对影响分离效果几种主要因素进行了总结，根据此方程，流速当有一最优值。简单的柱色谱利用重力驱动洗脱，调节旋钮减慢流速，或者在柱顶加上溶剂球增加压力加快流速。需要更快的流速时，可使柱顶与泵或压缩气体（例如空气、氮、氩）相通，在液面以上加压，这种方法称为快速柱色谱（flash column chromatography）。_NEWLINE_快速柱层析中的固定相粒径较 平时做管柱层析时所使用的颗粒 小。前者最常用的粒径为230 – 400目 (40 – 63 µm)，而后者通常为70 – 230目(63 – 200 µm)。
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自动化系统
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柱色谱是化学实验室中极为耗时的步骤，以至于成为实验室工作的效率瓶颈。基于此现状，很多实验室仪器制造商，包括Biotage、Buchi、Interchim和Teledyne Isco等公司已经开发了自动化的快速柱色谱系统，称为LPLC（low pressure liquid chromatography，低压液相色谱仪，工作压力350～525 kPa或50.8～76.1 psi），以期人力投入的最小化。LPLC通常含有更昂贵的高效液相色谱（HPLC）的组件，包括梯度泵，样品注入端口，UV检测器和馏分收集器。LPLC可分离毫克至千克级的产物，对于原本需要HPLC多次进样的情况提供更廉价的解决方案。