b"\n_START_ARTICLE_\nPoliklonsko protitelo\n_START_SECTION_\nProdukcija\n_START_PARAGRAPH_\nPoliklonska protitelesa so obi\xc4\x8dajno pripravljena z imunizacijo ustreznega sesalca kot so na primer mi\xc5\xa1i, zajci ali koze. Za\xc5\xbeelena je uporaba ve\xc4\x8djih sesalcev, saj lahko iz ene \xc5\xbeivali pridobimo ve\xc4\x8djo koli\xc4\x8dino seruma. Dolo\xc4\x8den antigen, ki je injiciran v \xc5\xbeival, povzro\xc4\x8di, da limfociti B proizvedejo IgG imunoglobuline, specifi\xc4\x8dne za ta antigen. Le-te nato izoliramo iz \xc5\xbeivalskega seruma._NEWLINE_Obstaja ve\xc4\x8d razli\xc4\x8dnih metod za pripravo poliklonskih protitles. Zakonske smernice glede uporabe \xc5\xbeivali in na\xc4\x8dina dela z njimi, ve\xc4\x8dinoma zajemajo eti\xc4\x8dna na\xc4\x8dela humanega ravnanja in primerno uporabo adjuvanta. To vklju\xc4\x8duje izbiro adjuvanta, na\xc4\x8din in lokacijo administracije, koli\xc4\x8dino adjuvantana dolo\xc4\x8denem mestu in \xc5\xa1tevilo mest za injiciranje. Dolo\xc4\x8dena je tudi najve\xc4\x8dja dovoljena koli\xc4\x8dina odvzete krvi ter varnostne zahteve tako za poskusne \xc5\xbeivali kot za osebje._NEWLINE_Primarni cilj priprave protiteles v laboratorijskih \xc5\xbeivalih je dose\xc4\x8di antiserum z visokim titrom in visoko afiniteto za uporabo v eksperimentalnih in diagnosti\xc4\x8dnih testih. Adjuvanti se uporabljajo za izbolj\xc5\xa1anje ali pove\xc4\x8danje imunskega odziva na antigene. Nekateri vsebujejo surfaktante in imunostimulatorne molekule oziroma imajo sami take lastnosti. Ve\xc4\x8dina adjuvantov tudi omogo\xc4\x8da skladi\xc5\xa1\xc4\x8denje antigena na mestu injiciranja, od koder se antigen po\xc4\x8dasi spro\xc5\xa1\xc4\x8da. Adjuvant po navadi uporabimo s topnim proteinskim antigenom, ki je sicer slabo imunogen. Ve\xc4\x8dina kompleksnih proteinskih antigenov spro\xc5\xbei odziv razli\xc4\x8dnih klonov B-celic, medtem ko je odziv na neproteinske antigene \xc5\xa1ibek in ne zagotavlja spomina (10).\n_START_SECTION_\nPriprava antigena\n_START_PARAGRAPH_\nNa kvaliteto in koli\xc4\x8dino proizvedenih protiteles vplivajo velikost, stopnja agregacije in splo\xc5\xa1ne zna\xc4\x8dilnosti proteinskega antigena. Majhni polipeptidi in neproteinski antigeni morajo biti obi\xc4\x8dajno vezani na ve\xc4\x8dje imunogene transportne proteine, ki povi\xc5\xa1ajo imunogenost in nudijo ve\xc4\x8d epitopov celicam T. Ve\xc4\x8dji kot so imunogeni proteini, bolje delujejo, saj obi\xc4\x8dajno tudi v manj\xc5\xa1ih koli\xc4\x8dinah spodbudijo zadovoljiv imunski odziv (10).\n_START_SECTION_\nReaktivnost\n_START_PARAGRAPH_\nZnano je, da protitelesa proti nativnim proteinom bolje reagirajo z nativnimi proteini in protitelesa proti denaturiranim proteinom z denaturiranimi proteini (10).\n_START_SECTION_\nAsepti\xc4\x8dnost\n_START_PARAGRAPH_\nZa pripravo antigenov moramo vedno uporabiti tehnike, ki prepre\xc4\x8dujejo kontaminacijo z mikrobiolo\xc5\xa1kimi organizmi. Ve\xc4\x8dino proteinskih antigenov lahko steriliziramo s filtriranjem (0,22 \xce\xbcm filter) (10).\n_START_SECTION_\nAntiserum\n_START_PARAGRAPH_\nAntiserum je imunski serum, ki vsebuje protitelesa, specifi\xc4\x8dna za posamezen antigen ali antigene.\n_START_SECTION_\nPoliklonski antiserum\n_START_PARAGRAPH_\nPoliklonski antiserum je antiserum, ki vsebuje veliko razli\xc4\x8dnih protiteles proti danemu antigenu. Vsako protitelo je specifi\xc4\x8dno za eno od determinant in ga proizvede en klon limfocitov B.\n_START_SECTION_\nReferen\xc4\x8dni antiserum\n_START_PARAGRAPH_\nReferen\xc4\x8dni antiserum je bil narejen v pi\xc5\xa1\xc4\x8dancih proti 15 podtipom hemaglutinina (HA) gripe z uporabo DNA cepiva, da bi naredili visoko kakovostni poliklonski serum proti proteinu HA brez protiteles proti ostalim virusnim proteinom influence. Dobljeni antiserum so uspe\xc5\xa1no uporabili pri testu inhibicije hemaglutinina, ki je standardna metoda klasifikacije podtipov HA virusa gripe. Specifi\xc4\x8dnost HA antiseruma so pokazali z analiznima metodama prenos Western in imunski odtis. DNA cepivo nudi varnej\xc5\xa1o alternativo za proizvodnjo HA specifi\xc4\x8dnih protiteles, ker je narejeno brez uporabe \xc5\xbeivega virusa.\n_START_SECTION_\nUporaba\n_START_PARAGRAPH_\nVelik del moderne biologije in biokemije je odvisen od razpolo\xc5\xbeljivosti visoko specifi\xc4\x8dnih protiteles za uporabo v zelo raz\xc5\xa1irjenih tehnikah kot so imunohistokemija, ELISA test (encimsko imunski test), imunoprecipitacija in imunski odtis. Tako je proizvodnja velikih koli\xc4\x8din specifi\xc4\x8dnih protiteles, usmerjenih proti dolo\xc4\x8denim proteinom in peptidom, klju\xc4\x8dnega pomena za uspeh tako bazi\xc4\x8dnih kot aplikativnih raziskav. Poleg tega je raz\xc5\xa1irjena uporaba protiteles v proteomiki za dolo\xc4\x8devanje izra\xc5\xbeanja proteinov in njihovih posttranslacijskih modifikacij \xc5\xa1e dodatno zve\xc4\x8dala pomen hitre in enostavne izdelave specifi\xc4\x8dnih protiteles. Poliklonska protitelesa, ki jih pridobimo z imunizacijo \xc5\xbeivali s pre\xc4\x8di\xc5\xa1\xc4\x8denimi proteini in peptidi, so \xc5\xa1e posebej dragocena za uporabo v laboratorijih._NEWLINE_\xc4\x8ceprav je razvoj tehnik za proizvodnjo monoklonskih protiteles temeljito spremenil specifi\xc4\x8dnost, homogenost in koli\xc4\x8dino protiteles, vseeno obstajajo \xc5\xa1tevilni primeri, v katerih so poliklonska protitelesa bolj za\xc5\xbeelena od monoklonskih. Proizvodnja poliklonskega antiseruma vzame manj \xc4\x8dasa in napora kot proizvodnja monoklonskih protiteles, ter zahteva relativno enostavno in dostopno opremo. S to proizvodnjo lahko pripravimo reagente, ki se uporabljajo za imunoprecipitacijo, imunski odtis in ELISA test.\n_START_SECTION_\nPopolni Freundov adjuvant\n_START_PARAGRAPH_\nPopolni Freundov adjuvant (angl. Freund's Complete Adjuvant ali FCA) je emulzija tipa voda v olju, sestavljena iz mineralnega olja, manidnega monooleata (surfaktant) in toplotno obdelane bakterije ali komponente bakterije Mycobacterium tuberculosis. FCA je mo\xc4\x8dan adjuvant, ki spodbudi tako humoralno kot celi\xc4\x8dno imunost. Zaradi njegove toksi\xc4\x8dnosti so njegovo uporabo omejili na laboratorijske \xc5\xbeivali. Do toksi\xc4\x8dnosti pride, ker se mineralna olja ne morejo metabolizirati in ker lahko elementi mikobakterij povzro\xc4\x8dijo hude granulomatozne reakcije. 9\n_START_SECTION_\nNepopolni Freundov adjuvant\n_START_PARAGRAPH_\nNepopolni Freundov adjuvant (angl. Freund's Inomplete Adjuvant ali FIA) je enak kot FCA, le da ne vsebuje mrtvih mikobakterijskih celic oz. celi\xc4\x8dnih komponent. Tako kot FCA vsebuje tudi FIA antigen v vodni fazi emulzije. FIA je manj u\xc4\x8dinkovit za doseganje visokih protiteles in za izbolj\xc5\xa1anje celi\xc4\x8dne imunosti kot FCA. Kljub temu je dokaj u\xc4\x8dinkovit adjuvant in veliko manj toksi\xc4\x8den kot FCA. 9\n_START_SECTION_\nRibi adjuvantni sistem (RAS)\n_START_PARAGRAPH_\nZa razliko od Freundovih adjuvantov so Ribi adjuvanti emulzije olje v vodi, v katerih je antigen porazdeljen v minimalnem volumnu olja. Kapljice olja so emulgirane v slani raztopini, ki vsebuje surfaktant Tween 80. \xc4\x8ceprav so emulzije tipa olje v vodi manj viskozne od emulzij voda v olju in se zato la\xc5\xbeje injicirajo, so brez dodatkov precej \xc5\xa1ibak adjuvant. Zato jim za izbolj\xc5\xa1anje imunogenosti dodajamo imunostimulatorje. RAS je po navadi \xc5\xa1ibkej\xc5\xa1i od FCA, a obenem manj toksi\xc4\x8den in ima zadovoljivo adjuvantno aktivnost za \xc5\xa1tevilne namene. 9\n_START_SECTION_\nTiterMax\n_START_PARAGRAPH_\nV tem adjuvantu se kot imunomodulator uporablja kopolimer CRL - 8941. Ta vrsta kopolimerov spada v posebno skupino surfaktantov. Sestavljeni so iz lineranih skladov ali verig hidrofobnega polioksipropilena (POP) in hidrofilnega polioksietilena (POE) v razli\xc4\x8dnih razmerjih. TiterMax tvori mikroemulzijo tipa voda v olju s CRL - 8941 in skvalenom (olje, ki se lahko metabolizira). CRL \xe2\x80\x93 8941 je oblo\xc5\xbeen s silikatnimi delci, kar dodatno stabilizira emulzijo. Stabilnost je klju\xc4\x8dnega pomena zato, ker so zaradi nje v emulziji lahko dodane \xc5\xa1tevilne vrste antigenov brez uporabe velikih koli\xc4\x8din toksi\xc4\x8dnih emulgatorjev. Adjuvant tako ne vsebuje nobenih sladkorjev, ma\xc5\xa1\xc4\x8dobnih kislin ali drugih snovi biolo\xc5\xa1kega izvora. Ena od osnovnih biolo\xc5\xa1kih aktivnosti adjuvanta je ta, da je kopolimer sposoben skoncentrirati ve\xc4\x8d antigena na svoji povr\xc5\xa1ini, kot bi to dosegli s podobno koncentracijo antigena v raztopini. Poleg tega z uporabo kopolimerov v adjuvantu dose\xc5\xbeemo pove\xc4\x8dano delovanje molekul glavnega histokompatibilnostnega kompleksa (MHC II) na makrofage, kar izbolj\xc5\xa1a predstavljanje antigena T celicam. S TiterMax po navadi dose\xc5\xbeemo enako visoke ali vi\xc5\xa1je titre protiteles kot s FCA pri manj\xc5\xa1i toksi\xc4\x8dnosti. 9"