b"\n_START_ARTICLE_\nMolekularna biologija\n_START_SECTION_\nDoziranje in lo\xc4\x8devanje DNA in RNA\n_START_PARAGRAPH_\nPosebnost nukleinskih kislin je, da je maksimalna absorbcija pri 260\xc2\xa0nm (hkrati pa je absorbcija sorazmerna s koli\xc4\x8dino nukleinskih kislin). Pri absorbciji uporabljamo enote 1DO._NEWLINE_1 DO: za 40 \xce\xbcg/L RNA_NEWLINE__NEWLINE_1 DO: za 25 \xce\xbcg/L DNA (enojna vija\xc4\x8dnica)_NEWLINE__NEWLINE_1 DO: za 50 \xce\xbcg/L DNA (dvojna vija\xc4\x8dnica)_NEWLINE_Proteini imajo maksimalno absorbcijo pri 280\xc2\xa0nm, fenol pa pri 270\xc2\xa0nm. \xc4\x8ce i\xc5\xa1\xc4\x8demo prisotne proteine, ki so vezani na DNA, moramo narediti dve meritvi; eno pri 280 in drugo pri 260\xc2\xa0nm._NEWLINE_\xc4\x8ce obstaja \xc4\x8dista DNA potem je absorpcija med_NEWLINE__NEWLINE_(Za fenol je potrebno narediti posebno meritev, saj absorbira pri 270\xc2\xa0nm)_NEWLINE_1,8 < (DO 260/ DO 280) < 2\n_START_SECTION_\nZa lo\xc4\x8devanje uporabimo elektroforezo\n_START_PARAGRAPH_\n\xe2\x80\x93 NA GELU Hitrost je odvisna od \xc5\xa1tevila baz na DNA (to pomeni, da je odvisna od PM, ter od koncentracije, ali z drugimi besedami: dalj\xc5\xa1a je veriga manj\xc5\xa1a je hitrost premikanja molekul po gelu)_NEWLINE_Poznamo razli\xc4\x8dne gele:_NEWLINE__NEWLINE_a) poliakrilamid: \xc4\x8de \xc5\xbeelimo lo\xc4\x8diti delce DNA < od 1000pb_NEWLINE__NEWLINE_b) gel AGAROZE: za dalj\xc5\xa1e delce (koncentracija gela je med 0,5 \xe2\x80\x93 1,5\xc2\xa0%) za dele z 0,5 \xe2\x80\x93 20 kpb_NEWLINE_\xe2\x80\x93 ELEKTRI\xc4\x8cNO POLJE Uporabimo gel agaroze 1\xc2\xa0%, za lo\xc4\x8devanje delcev nad 50kbp (Faza elektri\xc4\x8dnega polja se spreminja v \xc4\x8dasu, kar omogo\xc4\x8da lo\xc4\x8devanje velikih delcev)_NEWLINE_Omenjeni tehniki sta zelo dobri za dolo\xc4\x8danje dol\xc5\xbeine verige, predvsem pa zelo natan\xc4\x8dni. Dol\xc5\xbeino verige lahko dolo\xc4\x8dimo tako, da poleg neznanega vzorca dodamo nukleinsko kislino znane dol\xc5\xbeine, nato s pomo\xc4\x8djo primerjave (grafa) od\xc4\x8ditamo dol\xc5\xbeino.\n_START_SECTION_\nGraf elektroforeze\n_START_PARAGRAPH_\ndovoli lo\xc4\x8devanje dol\xc5\xbeine DNA, ki je zelo natan\xc4\x8dna in najbolj uporabljena v Evropi. (dol\xc5\xbeina potovanja je obratno sorazmerna z log \xc5\xa1tevila baz)\n_START_SECTION_\nOzna\xc4\x8devanje in odkrivanje nukleinskih kislin\n_START_PARAGRAPH_\nUporablja se etidijev bromid. Ta dovoli obarvanje nukleinskih kislin, ki so bile lo\xc4\x8dene z elektroforezo. Etidijev bromid je spojina, ki se vriva med baze nukleinske kisline, in jih s tem obarva. Spojina je kancerogena. \xc4\x8ce nato uporabimo svetlobo UV pri 300\xc2\xa0nm, ta spojina povzro\xc4\x8da flouroscenco in seva oran\xc5\xbeno barvo.\n_START_SECTION_\nCentrifugacija\n_START_PARAGRAPH_\nUporabimo CeCl\xe2\x82\x82, ki ima enako gostoto kot nukleinske kisline! Ta raztopina se razporedi glede na gostoto, ko dodamo nukleinske kisline \xe2\x80\x93se postavijo na isto mesto!_NEWLINE_Ko enkrat preverimo gostoto DNA, \xc4\x8de je \xc4\x8dista je med 1,4 in 1,5. Dodamo spojini, ki vsebujeta to gostoto, \xc4\x8de je DNA vmes, pomeni, da je \xc4\x8dista.\n_START_SECTION_\nSinteza oligonukleotidov z uporabo avtomata\n_START_PARAGRAPH_\nOligonukleotidi so zelo kratki del\xc4\x8dki z nekaj nukleotidov. Nukleotidi so tako dodani v aparat v obliki \xce\xb2-cianoetilfosforamid. Prvi nukleotidi se ve\xc5\xbeejo na 3' mesto. Za vezavo drugega nukleotida je potrebno dodajati nukleotide, pri tem pa prvega aktivirati in hkrati za\xc5\xa1\xc4\x8dititi drugi konec, za tretjega pa moramo ponovno aktivirati zavarovani del drugega nukleotida,...."