b'\n_START_ARTICLE_\nTransfekcija\n_START_PARAGRAPH_\nTransfekcija je proces vstavljanja nukleinskih kislin v celice s pomo\xc4\x8djo brezvirusnih metod. Pojem\xc2\xa0\xc2\xbbtransformacija\xc2\xab\xc2\xa0se uporablja za opis brezvirusnega DNK prenosa v bakterijo in v ne\xc5\xbeivalske evkariontske celice;\xc2\xa0\xc2\xbbtransdukcija\xc2\xab\xc2\xa0pa se pogosto uporablja za opis prenosa DNK s pomo\xc4\x8djo virusov. _NEWLINE_Pri transfekciji \xc5\xbeivalskih celic se v celi\xc4\x8dni membrani odprejo pore za transport, preko katerih celica sprejme material. S pomo\xc4\x8djo transfekcije se lahko prenese genetski material (npr. dodatno zvita plazmidna DNK ali siRNK) ali celo proteini, kot so protitelesa. Transfekcija se lahko izvede z uporabo kalcijevega fosfata, elektroporacije in liposomov, ki nastanejo z me\xc5\xa1anjem kationskihlipidov z genetskim materialom ali proteini. Ta se potem zlije s celi\xc4\x8dno membrano in odlo\xc5\xbei material v notranjost celice. Transfekcija lahko vodi do nepri\xc4\x8dakovanih morfologij in nepravilnosti v tar\xc4\x8dni celici.\n_START_SECTION_\nTerminologija\n_START_PARAGRAPH_\nPomen pojma se je razvijal in dopolnjeval skozi \xc4\x8das.  Prvoten pomen transfekcije je bil \xc2\xbbinfekcija s pomo\xc4\x8djo transformacije\xc2\xab, tj. vnos DNK (ali RNK) z bakterijskimi virusi ali bakteriofagi v celice, kar povzro\xc4\x8di infekcijo. Ker ima pojem transformacija druga\xc4\x8den pomen v \xc5\xbeivalski celi\xc4\x8dni biologiji (genetska sprememba, ki omogo\xc4\x8da dolgoro\xc4\x8dno propagacijo celi\xc4\x8dne kulture ali pridobitev lastnosti rakavih celic), se za \xc5\xbeivalske celice uporablja pojem transfekcija, ki predstavlja spremembo celi\xc4\x8dnega materiala z vnosom DNK.\n_START_SECTION_\nMetode\n_START_PARAGRAPH_\nObstajajo razli\xc4\x8dne metode za vnos tuje DNK v evkariontske celice. Za nosilce pri transfekciji se uporabljajo razli\xc4\x8dn materiali, ki jih lahko razdelimo v tri vrste: (kationski) polimeri, liposomi in nanodelci. _NEWLINE_Ena izmed najcenej\xc5\xa1ih metod transfekcije je transfekcija s kalcijevim fosfatom, ki sta jo odkrila F. L. Graham in A. J. van der Eb leta 1973 (glej tudi ). HEPES-puferna solna raztopina (HeBS), ki vsebuje fosfatne ione, je zme\xc5\xa1ana z raztopino kalcijevega klorida, v kateri se nahaja DNK za transfekcijo. Z zdru\xc5\xbeitvijo pozitivno nabitih kalcijevih in negativno nabitih fosfatnih ionov se tvori precipitat, na povr\xc5\xa1ino katerega se ve\xc5\xbee DNK za transfekcijo. Suspenzija precipitata se potem doda celicam, ki so po navadi vzgojene v enosloju v celi\xc4\x8dni kulturi. Skozi proces, ki \xc5\xa1e ni \xc4\x8disto razjasnjen, nato te celice sprejmejo nekaj tega precipitata in s tem tudi nekaj DNK.  _NEWLINE_Ostale metode za vezavo DNK in vnos v celico uporabljajo mo\xc4\x8dno razvejane organske komponente t. i. dendrimere. Zelo u\xc4\x8dinkovita metoda je vklju\xc4\x8ditev DNK za transfekcijo v liposome, ki so majhna telesa omejena z membrano. Podobna so strukturi celice in se zato lahko zlijejo s celi\xc4\x8dno membrano in tako prenesejo DNK v celico. Ker so evkariontske celice bolj ob\xc4\x8dutljive, se za njih po navadi uporablja lipidno-kationska transfekcija. _NEWLINE_\xc5\xa0e ena metoda uporablja kationske polimere, kot sta DEAE-dekstran in polietilenimin. Negativno nabita DNK se ve\xc5\xbee na polikation in kompleks se prenese v celico preko endocitoze. _NEWLINE_Direkten pristop k transfekciji je uporaba genske pi\xc5\xa1tole, kjer se DNK ve\xc5\xbee na nanodelce trdnega nerektivnega telesa (navadno zlato), ki se nato izstreli direktno v jedro tar\xc4\x8dne celice. DNK lahko pride v celico preko virusov. Tak\xc5\xa1na tehnika se imenuje virusna transdukcija, za celice pa re\xc4\x8demo, da so bile transducirane. _NEWLINE_Transfekcija z magnetom je transfekcijska metoda, ki izkori\xc5\xa1\xc4\x8da magnetno silo za dostavo DNK v tar\xc4\x8dne celice. Nukleinske kisline se najprej pove\xc5\xbeejo z magnetnimi nanodelci. Nato magnetna sila po\xc5\xbeene komplekse nukleinskih kislin in magnetnih nanodelcev v tar\xc4\x8dno celico, kjer se DNK sprosti._NEWLINE_Opti\xc4\x8dna transfekcija je metoda, kjer se v celi\xc4\x8dno membrano z natan\xc4\x8dnim laserjem naredi za\xc4\x8dasna luknjica (~1\xc2\xa0\xc2\xb5m premer). To tehniko so prvi\xc4\x8d opisali Tsukakoshi in sod. leta 1984. Za stabilno transfekcijo normalnih podganjih ledvi\xc4\x8dnih celic je uporabil potrojeno frekvenco Nd:YAG laserja. Pri tej tehniki se naenkrat transficira le ena celica, kar je zelo uporabno za analize posameznih celic. _NEWLINE_Ostale metode transfekcije vklju\xc4\x8dujejo nukleofekcijo, elektroporacijo, sonoporacijo, toplotni \xc5\xa1ok in magnetofekcijo. Uporabljajo pa se tudi transfekcijski reagenti, kot so Lipofectamine, PromoFectin, Dojindo, GenePORTER, Hilymax, Fugene, jetPEI, Effectene ali DreamFect.\n_START_SECTION_\nStabilna in prehodna transfekcija\n_START_PARAGRAPH_\nZa ve\xc4\x8dino aplikacij transfekcije je dovolj, \xc4\x8de se transficiran genetski material le za\xc4\x8dasno izrazi. Ker DNK, ki se vgradi v celico skozi proces transfekcije, po navadi ni integrirana v jedrni genom se bo oslabila skozi mitozo ali pa bo uni\xc4\x8dena._NEWLINE_\xc4\x8ce ho\xc4\x8demo, da transficiran gen ostane v genomu celice in njenih h\xc4\x8derinskih celicah, mora priti do stabilne transfekcije. Da to dose\xc5\xbeemo, kotransficiramo markerski gen, ki da celici selekcijske prednosti, kot je npr. odpornost na nekatere toksine. Nekatere (zelo malo) transficirane celice bodo po naklju\xc4\x8dju integrirale tuj genetski material v svoj genom. \xc4\x8ce se potem v celi\xc4\x8dno kulturo doda toksin, bodo proliferacije zmo\xc5\xbene le tiste celice, ki bodo imele v svoj genom vgrajen markerski gen. Ostale celice ne bodo pre\xc5\xbeivele. Po dodatku tega selekcijskega pritiska, po dolo\xc4\x8denem \xc4\x8dasu pre\xc5\xbeivijo samo tiste celice s stabilno transfekcijo. Te potem lahko gojimo naprej. _NEWLINE_Medij za detekcijo stabilne transfekcije je geneticin (poznan tudi kot G418), ki je toksin in ga lahko nevtraliziramo s produktom gena z rezistenco na neomicin.'