b'\n_START_ARTICLE_\nSequenciamento\n_START_PARAGRAPH_\nEm biologia molecular, sequenciamento  ou sequencia\xc3\xa7\xc3\xa3o  \xc3\xa9 o nome dado ao processo de determina\xc3\xa7\xc3\xa3o da ordem sequencial das partes constituintes de um biopol\xc3\xadmero n\xc3\xa3o ramificado, isto \xc3\xa9, a ordem de nucleot\xc3\xaddeos de uma mol\xc3\xa9cula de DNA ou RNA, ou de amino\xc3\xa1cidos de uma prote\xc3\xadna. O sequenciamento resulta numa representa\xc3\xa7\xc3\xa3o linear simb\xc3\xb3lica conhecida como sequ\xc3\xaancia, a qual sucintamente resume a estrutura da mol\xc3\xa9cula sequenciada.\n_START_SECTION_\nSequenciamento de DNA\n_START_PARAGRAPH_\nSequenciamento de DNA \xc3\xa9 o processo de determina\xc3\xa7\xc3\xa3o da ordem dos nucleot\xc3\xaddeos de um dado fragmento de DNA. At\xc3\xa9 o momento, a maioria dos sequenciamentos de DNA foram feitas usando o m\xc3\xa9todo de terminadores de cadeia (m\xc3\xa9todo de Sanger) desenvolvido por Frederick Sanger. Esta t\xc3\xa9cnica tem como princ\xc3\xadpio a termina\xc3\xa7\xc3\xa3o sequ\xc3\xaancia-espec\xc3\xadfica da rea\xc3\xa7\xc3\xa3o de s\xc3\xadntese de DNA utilizando nucleot\xc3\xaddeos modificados, an\xc3\xa1logos aos dNTPs normais. Por\xc3\xa9m, novas tecnologias de sequenciamento, como o pirosequenciamento, est\xc3\xa3o ganhando for\xc3\xa7a. Entre as principais vantagens desta nova tecnologia est\xc3\xa3o a rapidez e o custo reduzido do processo._NEWLINE_A sequ\xc3\xaancia dos \xc3\xa1cidos nucleicos codifica as informa\xc3\xa7\xc3\xb5es necess\xc3\xa1rias \xc3\xa0 sobreviv\xc3\xaancia e \xc3\xa0 reprodu\xc3\xa7\xc3\xa3o dos seres vivos. A determina\xc3\xa7\xc3\xa3o destas sequ\xc3\xaancias \xc3\xa9 \xc3\xbatil \xc3\xa0 pesquisa b\xc3\xa1sica, para compreender como funciona a vida, assim como oferece solu\xc3\xa7\xc3\xb5es em \xc3\xa2mbito aplicado. Em fun\xc3\xa7\xc3\xa3o do papel chave do DNA para os seres vivos, o conhecimento sobre a sequ\xc3\xaancia de DNA pode ser \xc3\xbatil em praticamente qualquer \xc3\xa1rea da pesquisa em biologia. Por exemplo, na medicina ela pode ser \xc3\xbatil para identificar, diagnosticar e potencialmente desenvolver tratamentos para doen\xc3\xa7as gen\xc3\xa9ticas. Em pesquisas envolvendo pat\xc3\xb3genos, o sequenciamento pode levar a tratamentos para doen\xc3\xa7as contagiosas. De maneira similar, a biotecnologia pode utilizar as facilidades do sequenciamento para desenvolver produtos e servi\xc3\xa7os.\n_START_SECTION_\nSequenciamento pelo m\xc3\xa9todo de Sanger\n_START_PARAGRAPH_\nO sequenciamento pelo m\xc3\xa9todo de terminadores de cadeia (m\xc3\xa9todo de Sanger) envolve a s\xc3\xadntese de DNA a partir de primers, pequenos moldes de DNA (oligonucleot\xc3\xaddeos) complementares a uma regi\xc3\xa3o espec\xc3\xadfica de DNA. A partir desta regi\xc3\xa3o, uma nova fita de DNA \xc3\xa9 produzida, pela a\xc3\xa7\xc3\xa3o de uma enzima capaz de replicar DNA: a DNA polimerase. Na rea\xc3\xa7\xc3\xa3o, juntamente com os primers e a enzima, s\xc3\xa3o adicionados os 4 deoxinucleot\xc3\xaddeos (dNTPs de A, T, C e G); e uma pequena concentra\xc3\xa7\xc3\xa3o de nucleot\xc3\xaddeos terminadores (mais comumente um dideoxinucleot\xc3\xaddeo: ddNTP de A, T, C e G). A incorpora\xc3\xa7\xc3\xa3o limitada dos terminadores na cadeia crescente de DNA, pela DNA polimerase, interrompe a extens\xc3\xa3o da fita no ponto de inser\xc3\xa7\xc3\xa3o do nucleot\xc3\xaddeo terminador espec\xc3\xadfico, o qual foi utilizado na rea\xc3\xa7\xc3\xa3o. S\xc3\xa3o procedidas rea\xc3\xa7\xc3\xb5es envolvendo os 4 ddNTPs separadamente, de modo a gerar fragmentos terminados nos 4 ddNTPs existentes. Isto produz fragmentos truncados da sequ\xc3\xaancia completa de interesse. Os fragmentos obtidos, possuindo diferentes tamanhos, s\xc3\xa3o separados por peso molecular em processos de eletroforese em gel de agarose (ver imagem ao lado), ou mais comumente atrav\xc3\xa9s de capilares preenchidos por um pol\xc3\xadmero viscoso, no qual os fragmentos correm, ordenadamente, dos mais leves aos mais pesados._NEWLINE_Os primers que participam de cada uma das rea\xc3\xa7\xc3\xb5es, envolvendo separadamente cada um dos terminadores, podem possuir marcadores que os identificam, por\xc3\xa9m, em alternativa a marca\xc3\xa7\xc3\xa3o dos primers, os terminadores podem ser marcados. A vantagem desta estrat\xc3\xa9gia reside na possibilidade de se fazer o sequenciamento completo em apenas uma rea\xc3\xa7\xc3\xa3o, ou seja, sem a necessidade de proceder uma rea\xc3\xa7\xc3\xa3o espec\xc3\xadfica com cada um dos ddNTPs isoladamente. Cada um dos quatro ddNTPs s\xc3\xa3o marcados com um fluorocromo diferente, o qual emite fluoresc\xc3\xaancia a um determinado comprimento de onda. A marca\xc3\xa7\xc3\xa3o dos ddNTPs ao inv\xc3\xa9s dos primers resulta em um m\xc3\xa9todo mais r\xc3\xa1pido e f\xc3\xa1cil.\n_START_SECTION_\nPirosequenciamento\n_START_PARAGRAPH_\nPirosequenciamento \xc3\xa9 uma t\xc3\xa9cnica de sequenciamento desenvolvida por P\xc3\xa5l Nyhren e Mostafa Ronaghi. Esta t\xc3\xa9cnica tem como princ\xc3\xadpio a detec\xc3\xa7\xc3\xa3o do pirofosfato liberado durante a incorpora\xc3\xa7\xc3\xa3o do nucleot\xc3\xaddeo, ao inv\xc3\xa9s da termina\xc3\xa7\xc3\xa3o da cadeia de DNA com ddNTPs. De maneira geral, no pirosequenciamento, fitas simples de DNA s\xc3\xa3o aneladas a beads (gr\xc3\xa2nulos) e amplificados via EmPCR (emulsion-based PCR). Estas mol\xc3\xa9culas de DNA associadas a beads s\xc3\xa3o ent\xc3\xa3o colocadas em placas, localizadas pr\xc3\xb3ximas a uma fibra \xc3\xb3tica, juntamente com enzimas que produzem luz na presen\xc3\xa7a de ATP. Quando nucleot\xc3\xaddeos (dNTPs) s\xc3\xa3o adicionados \xc3\xa0 rea\xc3\xa7\xc3\xa3o, luzes passam a ser emitidas a medida que estes s\xc3\xa3o incorporados sequencialmente a cadeia crescente de DNA. Os diferentes sinais luminosos s\xc3\xa3o registrados por um detector de f\xc3\xb3tons do aparelho. As \xc3\xbaltimas plataformas de sequenciamento desenvolvidas s\xc3\xa3o capazes de sequenciar, aproximadamente, 25 x 10\xe2\x81\xb6 bases em 4,5 horas, por meio de uma \xc3\xbanica plataforma de sequenciamento.\n_START_SECTION_\nSequenciamento de RNA\n_START_PARAGRAPH_\nMol\xc3\xa9culas de RNA s\xc3\xa3o menos est\xc3\xa1veis nas c\xc3\xa9lulas, e tamb\xc3\xa9m mais propensas a degrada\xc3\xa7\xc3\xa3o por nucleases em procedimentos experimentais. Como o mRNA \xc3\xa9 gerado por transcri\xc3\xa7\xc3\xa3o a partir do DNA, a informa\xc3\xa7\xc3\xa3o gen\xc3\xa9tica que estes carregam est\xc3\xa1 presente no DNA celular. Por\xc3\xa9m, muitas vezes, a sequ\xc3\xaancia de RNA \xc3\xa9 requerida, principalmente nos casos de mRNAs eucari\xc3\xb3ticos, os quais n\xc3\xa3o necessariamente correspondem a sequ\xc3\xaancia exata da fita molde de DNA, uma vez que os \xc3\xadntrons s\xc3\xa3o removidos durante o processamento do mRNA. Para sequenciar RNA, \xc3\xa9 usual se proceder uma transcri\xc3\xa7\xc3\xa3o reversa a partir da sequ\xc3\xaancia contida na fita simples de RNA, gerando uma c\xc3\xb3pia de cDNA por meio de RT-PCR, a qual poder\xc3\xa1 ser sequenciada como descrito acima.\n_START_SECTION_\nSequenciamento de prote\xc3\xadnas\n_START_PARAGRAPH_\nEntre os m\xc3\xa9todos utilizados para os sequenciamento de prote\xc3\xadnas, est\xc3\xa3o: Degrada\xc3\xa7\xc3\xa3o de Edman; Peptide mass fingerprint (PMF); e Espectrometria de massa.'