背景与目的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）基因突变是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）最常见的驱动基因突变。为延长患者生存时间，NSCLC EGFR酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors, TKIs）耐药是目前急需解决的重大难题。本研究主要探究烟草烟雾（cigarette smoke, CS）诱导NSCLC发生吉非替尼耐药的机制。方法体外培养PC-9、A549细胞，分别经1 µmol/L吉非替尼处理4 h、10%CS萃取物（CS extract, CSE）处理48 h。Western blot检测沉默蛋白3（Sirtuin 3, Sirt3）、超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase 2, SOD2）蛋白表达，使用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平，CCK-8试剂盒检测细胞活性，EdU检测细胞增殖能力。Sirt3过表达质粒（OV-Sirt3）转染于PC-9和A549细胞中、N-乙酰半胱氨酸乙酯（N-acetylcysteine, NAC）作用于细胞后分别经1 µmol/L吉非替尼处理4 h和10%CSE处理48 h。Western blot检测Sirt3、SOD2蛋白表达，DCFH-DA探针检测细胞中的ROS水平，CCK-8检测细胞活性。结果CSE均可促使PC-9、A549细胞对吉非替尼的半数抑制浓度（50% inhibitory concentration, IC50）提高（P<0.01），并且增强PC-9和A549细胞的增殖能力，提示CS可诱导NSCLC吉非替尼耐药；ROS参与CSE诱导的吉非替尼耐药（P<0.05）；CSE诱导Sirt3、SOD2低表达（P<0.01），且Sirt3/SOD2与肺癌患者不良预后有关（P<0.05）；OV-Sirt3的PC-9、A549细胞可逆转CSE诱导的吉非替尼耐药（P<0.05）且显著降低ROS生成；NAC可逆转CSE诱导的PC-9、A549细胞吉非替尼耐药（P<0.05）。结论ROS/Sirt3/SOD2通路参与了CS诱导的NSCLC吉非替尼耐药。