Gonadotropine CONCEPT PAPER SIE - PDF\nDownload "Gonadotropine CONCEPT PAPER SIE"\n1 Mod. 357/02 Template - AIFA CONCEPT PAPER Rev.0 Data: Gonadotropine CONCEPT PAPER SIE DATA giorno/mese/anno AIFA CONCEPT PAPER TITOLO: < > 1. INTRODUZIONE La sterilità di coppia viene definita come l incapacità a concepire figli dopo un anno di rapporti sessuali regolari senza adozione di misure contraccettive; essa viene distinta in primaria, quando la coppia non è mai riuscita a concepire, o secondaria se consegue a un precedente successo. La percentuale di coppie coinvolte in questo problema varia dall 8% al 20%. Complessivamente la stima di prevalenza internazionale è pari al 9%, con un 3,5-16,7% nelle Nazioni sviluppate e al 6,9%-9,3% nelle Nazioni in via di sviluppo. Va considerato che la probabilità di un concepimento si aggira sul 20-25% per ogni ciclo e sul 60% nei primi 6 mesi per arrivare all 84% nel primo anno e al 92% nel secondo. Circa una coppia su 10 si rivolge al medico a causa di problemi di infertilità. Le cause della infertilità possono essere ricondotte a fattori maschili, come alterazioni quantitative e qualitative dei parametri seminali, a fattori femminili, come disturbi ovulatori, patologie ovariche, difetti tubarici e cervicali, e a fattori riferiti a entrambi i membri della coppia. Circa il 5-15% dei casi di sterilità rimane di origine sconosciuta. In particolare, i dati del registro italiano sulla Procreazione Medicalmente Assistita (PMA) indicano che l infertilità è dovuta a cause femminili nel 35,5% dei casi (disordini ovulatori, endometriosi, malformazioni degli organi sessuali); maschili nel 35,4%; di coppia nel 15%; a cause idiopatiche nel 13,2% dei casi, altro 1%.\n2 L approccio farmacologico all infertilità di coppia dipende, ovviamente, dal fattore etiologico e si avvale di varie molecole. Uno dei capisaldi della terapia sia nell uomo che nella donna è rappresentato dall impiego delle gonadotropine umane FSH ed LH da sole o in combinazione. 2. LE GONADOTROPINE Le gonadotropine sono una famiglia di ormoni di origine ipofisaria che esercitano un effetto stimolante sulle gonadi maschili e femminili e includono l ormone follicolo-stimolante (FSH), l ormone luteinizzante (LH) e la gonadotropina corionica (HCG). Le gonadotropine utilizzate a scopo farmacologico si possono ottenere per estrazione da urina umana o mediante tecnologia del DNA ricombinante. Le estrattive provengono da urine di donne in menopausa e contengono una percentuale variabile di FSH, LH e HCG, purificate sino ad ottenere un prodotto ad attività FSH e LH pari a 75 UI. L attività LH è principalmente legata alla componente HCG. La gonadotropina a sola attività FSH, viene ottenuta rimuovendo la componente LH mediante anticorpi policlonali. L ulteriore purificazione può portare a preparazioni di FSH altamente purificate (FSH-HP UI; LH <0,1 UI e proteine urinarie varie <5%), a volume contenuto, adatte alla somministrazione sottocutanea. Le preparazioni a base di HCG, standardizzate a o UI, vengono invece prodotte per estrazione dall urina di donne in gravidanza. La tecnologia del DNA ricombinante ha permesso di ottenere preparazioni ad elevata purezza delle singole gonadotropine il cui contenuto può essere quindi espresso in termini di massa e non solo di unità biologica (FSH: 75 UI di FSH corrispondono a 5,5 mcg; UI di HCG corrispondono a 250 mcg). La varietà dei prodotti a nostra disposizione consente di effettuare protocolli di trattamento altamente personalizzati. Di recente è stata messa a punto una nuova forma di FSH ricombinante, corifollitropina alfa, che presenta una lunga durata di azione e richiede quindi una sola somministrazione invece delle somministrazioni giornaliere degli altri tipi di FSH. FSH (somministrazione giornaliera a dosaggi variabili): è utilizzato per la induzione della crescita follicolare, che viene monitorata per via ecografia e con il dosaggio dell estradiolo. La durata della stimolazione è variabile da caso a caso e si conclude quando il follicolo/follicoli selezionato/selezionati raggiunge/raggiungono dimensioni adeguate. In caso di carenza di LH (ipogonadismo ipogonadotropo), oltre a FSH, viene somministrata una gonadotropina ad attività LH (75 UI). Corifollitropina alfa: rappresenta una nuova forma di FSH ricombinante a lunga emivita, che consente una somministrazione unica, per sette giorni, il 1 giorno di stimolazione (100 o 150 mcg), seguita da somministrazioni giornaliere di altre preparazioni FSH ricombinante a partire dall 8 giorno in caso di ulteriore stimolazione. Durante la stimolazione, entrambi i protocolli di trattamento prevedono la somministrazione dell antagonista dell ormone rilasciante le gonadotropine (GnRH) al fine di prevenire i picchi prematuri di LH. Raggiunta la maturazione dei follicoli, viene somministrata un iniezione unica dell ormone HCG (dose unica da o UI) per indurre la maturazione degli ovociti. I dati sull impiego della coriofollitropina alfa in associazione a un GnRH-agonista sono limitati. I risultati di un piccolo studio clinico non controllato suggeriscono una risposta ovarica maggiore rispetto all associazione con un GnRH-antagonista. Pertanto, l uso della coriofollitropina alfa non è raccomandato in associazione a un GnRH agonista.\n3 3. SCHEMA DI TRATTAMENO DELL INDUZIONE DELL OVULAZIONE NEI TRATTAMENTI DI PROCREAZIONE MEDICALMENTE ASSISTITA (PMA) DI SECONDO LIVELLO Il primo passaggio è rappresentato dall induzione di una condizione di ipogonadismo ipogonadotropo al fine di impedire l interferenza delle gonadotropine ipofisarie sulla stimolazione ovarica. Tale condizione si ottiene o con gli analoghi o con gli antagonisti del GnRh (vedi il paragrafo dedicato) che sono in grado di rendere la risposta ovarica direttamente proporzionale alla quantità di gonadotropine utilizzate, impedire picchi endogeni di LH, permettere di ottenere un numero elevato di ovociti, incrementare la percentuale di gravidanza. Per quanto riguarda gli analoghi esistono vari tipi di protocolli, i principali possono essere così schematizzati: PROTOCOLLI LUNGHI: unica somministrazione il 21 giorno del ciclo mestruale PROTOCOLLI BREVI o flare-up: la somministrazione inizia contemporaneamente a quella di gonadotropine e dura sino al giorno dell HCG PROTOCOLLI ULTRA-BREVI: prevedono la somministrazione dell analogo negli ultimi tre giorni della fase follicolare precoce. Per quanto riguarda gli antagonisti del GnRH, il protocollo di utilizzo prevede la somministrazione delle gonadotropine dai primi giorni del ciclo con aggiunta dell antagonista nella fase finale della stimolazione per 2-3 giorni gli antagonisti del GnRH, quando i follicoli sono quasi maturi, per evitare il picco spontaneo dell'lh. Le gonadotropine vengono impiegate secondo due tipi di modalità: Protocollo step-up : prevede l uso di dosi fisse o in incremento di FSH ( UI ogni 2-3 giorni), partendo da una dose iniziale di 225 UI per i primi 5-6 gg di stimolazione; Protocollo step down : prevede una iniziale dose alta di FSH ( UI/die per 3-4 gg) che viene gradualmente ridotta in base alla risposta individuale. In entrambi i casi, 36 ore prima del prelievo ovocitario con follicoli del diametro >= 16 mm e valore dell estradiolo adeguato al numero dei follicoli, vengono somministrate (5.000/ UI) di HCG. La corifollitropina alfa viene impiegata in somministrazione unica (100 o 150 mcg), per sette giorni, a partire dal 1 giorno di stimolazione, seguita da somministrazioni giornaliere di altre preparazioni di FSH ricombinante a partire dall 8 giorno in caso di ulteriore stimolazione. Durante la stimolazione, viene impiegato sempre l antagonista del GnRh per prevenire i picchi prematuri di LH. Nella Tabella 1 vengono riassunte le gonadotropine attualmente in commercio in Italia. La rimborsabilità da parte del SSN è regolata dalla Nota AIFA 74, previo piano terapeutico di strutture specialistiche, ed è limitata al trattamento: 1) dell infertilità femminile in donne di età non superiore ai 45 anni e con valori di FSH, al 3 giorno del ciclo, non superiori a 30 mui/ml; 2) dell infertilità maschile in uomini con ipogonadismo-ipogonadotropo con livelli di gonadotropine bassi o normali e comunque con FSH non superiore a 8 mui/ml. Come abbiamo detto esistono in commercio gonadotropine ricombinanti ed estrattive. Di seguito vengono analizzati gli studi di comparazione dei due tipi di prodotti in termini di efficacia e sicurezza.\n4 Attività Indicazioni Principio attivo FSH LH Associazione FSH+LH HCG Stimolazione farmacologica della crescita follicolare per l induzione dell ovulazione Trattamento dell ipogonadismo ipogonadotropo nell uomo Stimolazione farmacologica della crescita follicolare in associazione ad una preparazione FSH, in caso di carenza di FSH Stimolazione farmacologica della crescita follicolare in donne con carenza di LH (ipogonadismo ipogonadotropo) Trattamento dell ipogonadismo nell uomo (solo Menogon ) Stimolazione del rilascio dell ovulo dal follicolo giunto a maturazione dopo terapia con FSH Infertilità nell uomo Alterazione dello sviluppo degli organi sessuali nel bambino (solo Gonasi HP ) Ricombinante: Follitropina alfa Follitropina beta Corifollitropina alfa CLASSE A, NOTA 74, PT/PTH Umana: Urofollitropina CLASSE A, NOTA 74, PT/PTH Ricombinante: Lutropina alfa CLASSE A, NOTA 74, PT/PTH Ricombinante: Follitropina alfa + Lutropina alfa CLASSE A, NOTA 74, PT/PTH Umana: Menotropina CLASSE A, NOTA 74, PT/PTH Ricombinante: Coriogonadotropina alfa CLASSE A, NOTA 74, PT/PTH Umana: Gonadotropina Corionica CLASSE A Tab.1 Gonadotropine attualmente in commercio in Italia 4. DONNA La perdita progressiva del potenziale di fertilità nelle donne, con il passare degli anni è dovuta principalmente al declino quantitativo e qualitativo dei follicoli ovarici e quindi degli ovociti, processo che si accentua durante la quarta decade di vita. Effettivamente, nelle donne dai 30 ai 40 anni, è già perso il 75% della loro riserva follicolare. Questo problema assume un importanza fondamentale nel trattamento della sterilità di coppia in quanto l invecchiamento ovarico è il singolo fattore più importante nel determinare l efficacia dei trattamenti. La qualità ovocitaria è molto età-dipendente mentre la quantità ovocitaria è influenzata da fattori genetico-familiari, pregressi interventi chirurgici, endometriosi, chemioterapie e radioterapie. E pertanto necessario,\n5 prima di impostare un protocollo terapeutico, stabilire i criteri di una accurata valutazione della riserva ovarica. I markers ad oggi più impiegati prevedono la valutazione dei valori dell FSH il 2 /3 giorno del ciclo, dell inibina B, la conta ecografica dei follicoli antrali (AFC) e, più di recente, del dosaggio sierico dell ormone antimulleriano (AMH), prodotto dalle cellule della granulosa dei follicoli preantrali e dei piccoli follicoli antrali che ha il compito di regolare la crescita follicolare e di inibire il reclutamento e la crescita dei follicoli non dominanti. La stimolazione ovarica con gonadotropine per l induzione dello sviluppo di follicoli multipli rappresenta una tappa fondamentale nei cicli di fecondazione assistita, permettendo un miglioramento significativo dei risultati clinici. Il protocollo di stimolazione ideale dovrebbe avere un basso tasso di abbandono, ridurre i costi dei farmaci, ridurre al minimo i rischi e gli effetti collaterali e comportare un limitato monitoraggio endocrino ed ecografico al fine di minimizzare il disagio per la paziente. Purtroppo un protocollo che preveda tutte queste caratteristiche non è stato ancora messo a punto anche se, in questi ultimi anni, si sono fatti grandi passi avanti, specie sulla sicurezza di questi farmaci in seguito alla sempre maggiore individualizzazione del protocollo di stimolazione in base all età, alla riserva ovarica e ad eventuali stimolazioni precedenti. Tutto questo presuppone, da parte del medico che effettua la stimolazione, una approfondita valutazione della funzionalità ovarica. Un problema chiave nella gestione dei cicli di stimolazione è la dose ottimale di FSH da impiegare nelle singole pazienti per ottimizzare i risultati minimizzando i rischi. La personalizzazione del protocollo di stimolazione si dovrebbe basare sulla predizione della risposta ovarica di ogni singola paziente. Non è più accettabile la prescrizione di una terapia standard in quanto potrebbe ridurre notevolmente il recupero di un numero appropriato di ovociti. La molecola principale che viene impiegata per la stimolazione della crescita follicolare è l FSH sotto forma di somministrazione giornaliera a dosaggi variabili, a seconda della risposta, che variano da UI, fino ad un max di 450 UI/die. Durante la stimolazione, la risposta ovarica viene costantemente monitorata per via ecografica e mediante il dosaggio dell E2 (17-beta estradiolo). Il ciclo di stimolazione si conclude quando il follicolo selezionato raggiunge la dimensione pre-ovulatoria (circa 18 mm) ed è pertanto pronto al rilascio dell ovocita. In caso di deficienza di LH, oltre a FSH, viene somministrata una gonadotropina ad attività LH (75 UI). La durata della stimolazione con i diversi preparati FSH in commercio può variare da 7 a 28 giorni. Qualunque sia la dose adottata, solitamente, la fase di stimolazione viene considerata conclusa se al controllo ecografico si evidenziano almeno 2-3 follicoli antrali delle dimensioni di mm di diametro medio ed una concentrazione ematica di estradiolo di pg/ml per follicolo di diametro medio >14 mm. Al fine di personalizzare la terapia e ridurre i rischi per la paziente, i più recenti algoritmi prevedono aggiustamenti posologici di 12,5 UI. Le formulazioni di hufsh (human FSH) non consentono tale aggiustamento. In un contesto di studio clinico randomizzato questo non rappresenta un problema in quanto vengono, in genere, confrontati dosaggi standard (150, 225, ecc.) delle due molecole, rappresenta invece un problema nella pratica clinica quotidiana quando bisogna adattare il protocollo di stimolazione alle singole esigenze della singola paziente. 5. ANALOGHI ED ANTAGONISTI DEL GnRH Gli analoghi del GnRH (GnRH-a) Sono una categoria di molecole di origine sintetica in cui sono stati sostituiti vari aminoacidi presenti nella struttura iniziale del GnRH. La maggior parte dei GnRH-a contiene una o due\n6 sostituzioni nella catena peptidica, dove un residuo D-aminoacidico idrofobico sostituisce la glicina in posizione 6 ed un N-etilamide sostituisce la glicinamide in posizione 10. La somministrazione cronica dei GnRH-a determina una sequenza di eventi a livello delle cellule gonadotrope della adenoipofisi: a. una fase di rilascio massivo di gonadotropine, la cui durata è di 1-2 settimane (effetto flare ) b. una successiva fase di inibizione della sintesi e del rilascio di gonadotropine determinata dalla desensibilizzazione dei recettori specifici cellule gonadotrope ipofisarie. La fase di desensibilizzazione si prolunga alcuni giorni oltre la sospensione della somministrazione del GnRH-a. Le diverse vie di somministrazione dei GnRH-a possono influenzare il loro assorbimento ed il grado di soppressione. Con la somministrazione per via nasale si ottiene un assorbimento inferiore al 3% e, solitamente, l intervallo tra le somministrazioni non dovrebbe essere superiore alle otto ore. La via sottocutanea consente un buon assorbimento del farmaco e, a seconda della molecola impiegata, la frequenza della somministrazione è di ore. Le formulazioni a rilascio lento (depot) possono essere somministrate per via intramuscolare o sottocutanea e consentono un assorbimento continuo per almeno quattro settimane. Gli antagonisti del GnRH (GnRH-anta) I GnRH-anta sono peptidi sintetici sintetizzati contemporaneamente ai GnRH-a. Tuttavia, le molecole di prima generazione si rivelarono inutilizzabili farmacologicamente per via degli effetti collaterali sistemici e locali indotti. La sostituzione degli aminoacidi in posizione 1,3,6,8 e 10 ha consentito la sintesi di GnRH-anta di ultima generazione caratterizzati da elevata potenza inibitoria della sintesi-rilascio di gonadotropine, di maggiore durata d azione ed assenza di effetti sistemici e locali rispetto alle molecole sintetizzate in precedenza. A differenza degli GnRH-a, tutti i GnRHanta si legano competitivamente al recettore per il GnRH nativo, non ne determinano desensibilizzazione ed inducono una immediata soppressione del rilascio delle gonadotropine. 6. PROTOCOLLI DI INDUZIONE DELLA CRESCITA FOLLICOLARE (ICFM) PER FECONDAZIONE IN VITRO (FIV) E FECONDAZIONE INTRACITOPLASMATICA (ICSI) Impiego concomitante o sequenziale di GnRH-a e gonadotropine Per la ICFM sono state proposte svariate modalità di combinazione dei GnRH-a con la gonadotropina FSH associata o meno alla gonadotropina LH (Figura 2). I protocolli proposti si possono raggruppare in due differenti strategie di intervento sulla follicologenesi indotta: a. protocolli lunghi b. protocolli corti Nei primi, la ICFM mediante gonadotropine inizia dopo avere ottenuto la desensibilizzazione ipofisaria. La somministrazione del GnRH-a può iniziare in fase luteale media-tardiva o follicolare precoce e può essere interrotta, a seconda della riposta ovarica, nello stesso giorno in cui si somministra la prima o l ultima dose di gonadotropine. Nei protocolli corti la somministrazione del GnRH-a e delle gonadotropine è concomitante fin dall inizio della ICFM e la somministrazione del GnRH-a può essere interrotta in vari momenti della ICFM. I protocolli corti vengono anche detti protocolli flare poiché sfruttano la massiva liberazione delle gonadotropine endogene indotta dal GnRH-a. In presenza di una riserva ovarica follicolare adeguata, il dosaggio iniziale delle gonadotropine è di UI al dì per 4-5 giorni, a partire dal 2-3 giorno dopo l inizio del flusso mestruale. Dopo il primo controllo di monitoraggio ormonale ed ecografico, tutti i protocolli prevedono la possibilità\n7 di incrementare o ridurre il dosaggio delle gonadotropine in relazione all entità della risposta ovarica. L impiego dei GnRH-a rende indispensabile la supplementazione della fase luteale (abitualmente mediante progesterone), che dovrebbe essere iniziata il giorno dell aspirazione follicolare. Quale protocollo usare? In generale, la scelta dovrebbe essere condizionata dalla evidenza, se esiste, che una strategia farmacologica sia risultata, per qualche aspetto, migliore rispetto ad un altra. Sebbene talvolta i singoli studi comparativi possano apparire contraddittori nelle loro conclusioni, un analisi dei dati aggregati ha dimostrato che: a. I protocolli che prevedono l impiego dei GnRH-a sono associati ad un incremento dei tassi di gravidanza, se confrontati con protocolli di ICFM senza GnRH-a; b. I protocolli lunghi, in generale, consentono di ottenere migliori risultati, in termini di tasso di gravidanza evolutiva, rispetto ai protocolli corti, anche se questi ultimi consentono di ottenere una ICFM più breve ed un riduzione della dose totale di gonadotropine utilizzata. Comunque, il vantaggio, in termini di efficacia, nell impiego dei protocolli lunghi è tale da determinare una rapporto costo/efficacia sempre vantaggioso. Quale gonadotropina usare (rfsh verso hufsh)? FSH ricombinante (rfsh) vs gonadotropine umane (hu o h) con PMA In una review di Trew et al. (2010) sono stati messi a confronto i risultati ottenuti con rfsh o hmg- HP in cicli di fecondazione in vitro. Gli autori concludono che l impiego di rfsh consente di ottenere un maggior numero di ovociti maturi impiegando un numero di UI inferiori rispetto a hmg-hp. Non si è riscontrata una differenza significativa sulle percentuali di gravidanza mentre si è avuta una maggiore incidenza di sindrome da iperstimolazione con rfsh. In uno studio su cicli di PMA Sunkara et al. (2011) hanno dimostrato che, in tutte le fasce di età, vi è una correlazione tra il numero di ovociti recuperati ed il tasso di nascita nei cicli a fresco, il tasso aumenta in maniera costante con l aumento del numero degli ovociti recuperati sino a 15 ovociti, si stabilizza tra i 15 ed i 20 e diminuisce decisamente oltre i 20 ovociti. Nella metanalisi di van Wely et al. (2011), è stata confrontata l efficacia nella stimolazione follicolare multipla in donne sottoposte a fecondazione in vitro mediante FIVET o ICSI, della follitropina ricombinante (rfsh) con quella della menotropina (hmg e hmg-hp ad alta purezza) o urofollitropina (FSH e FSH-HP ad alta purezza). Sono stati inseriti 42 studi randomizzati e controllati, per un totale di coppie di pazienti e di cicli di trattamento. L età delle donne incluse nell analisi era compresa tra 18 e 45 anni. I due tipi di trattamento non hanno mostrato differenza significativa in termini di percentuale di nati vivi o gravidanze in corso (23,6% per rfsh vs 24,5% per gonadotropine umane, OR 0,97; IC 95% 0,87-1,08). Non è stata fatta alcuna analisi sulla durata del trattamento. Tuttavia, prendendo in considerazione i risultati dei singoli studi, la durata della terapia è stata significativamente minore con rfsh in 5 studi e con gonadotropine umane in 4, mentre in tutti gli altri lavori la durata delle due terapie è risultata equivalente. Complessivamente la durata media dei cicli di stimolazione nei diversi studi era compresa tra 6,2 e 14,7 giorni con rfsh e tra 6,0 e 14,5 giorni con FSH estrattivo. Peraltro un limite di questa metanalisi è che non prende in considerazione le dosi di gonadotropine impiegate. HCG ricombinante (rhcg) o LH ricombinante (rlh) vs HCG umana (hhcg) in PMA\n8 Nella metanalisi di Youssef et al. (2011) è stata confrontata l efficacia nell induzione della maturazione finale dell ovocita in donne sottoposte a FIVET o ICSI, di HCG ricombinante (rhcg) vs HCG urinaria (uhcg) e di LH ricombinante (rlh) ad alte dosi vs uhcg. Tali autori hanno incluso 14 Randomized Clinical Trial (RCT), per un totale di donne di età compresa tra anni, con ciclo mestruale regolare di giorni, livelli di FSH <12 UI/L al 3 giorno del ciclo, senza precedente sindrome da iperstimolazione ovarica (OHSS). L analisi dell endpoint primario, gravidanze in corso o nati vivi per coppia, ha evidenziato che non esiste una differenza significativa di efficacia né per rhcg vs uhcg in 6 studi per coppie (35,4 % vs 40,0%, OR 1,04; IC 95% 0,79-1,37), né per rlh vs uhcg in 2 studi per 280 coppie (18,8% con rhcg vs 19,9% con uhcg, OR 0,94; IC 95% 0,50-1,76). Il numero delle sole gravidanze in corso per coppia è stato significativamente maggiore con l utilizzo di rhcg rispetto a uhcg (36,4% vs 31,2%, OR 1,28; IC 95% 1,00-1,65) in 8 studi per coppie, ma non con rlh vs uhcg, in 2 studi per 280 coppie partecipanti (25,0% vs 26,5%, OR 0,93; IC 95% 0,53-1,63). Nella metanalisi di Gerli et al. (2013) è stata confrontata l efficacia clinica in cicli FIVET ed ICSI di una preparazione di FSH altamente purificato (Fostimon ) vs rfsh (Gonal-F ) Non ci sono state differenze tra l HP-FSH e il rfsh in termini di percentuale di nati vivi (OR 0,85, 95% CI 0,68-1,07), numero di ovociti recuperati, numero di ovociti maturi e giorni di stimolazione. La supplementazione con attività LH Sebbene vari studi pubblicati in passato sostengano che una supplementazione con attività LH (LH urinario o ricombinante o HCG) non sia di alcun vantaggio nel corso della ICFM mediante FSH, se non uno svantaggio in assenza di desensibilizzazione ipofisaria, recenti dati sostengono che una forma di attività LH rappresenti un vantaggio nella resa dei protocolli di ICFM per PMA. In un recente studio prospettico randomizzato controllato sono state confrontate le gonadotropine umane menopausali (hmg) ed il rfsh per quanto riguarda i successi clinici e l insorgenza di una sindrome da iperstimolazione ovarica (OHSS) in pazienti con sindrome dell ovaio policistico (PCOS) sottoposte a FIVET (Figen Turkcapar et al., 2013). Lo studio includeva 80 donne con PCOS. Di queste 38 sono state trattate con hmg e 42 with r-fsh dopo protocollo lungo con analogo del GnRH. Gli obiettivi dello studio erano le caratteristiche del ciclo, la percentuale di gravidanza, la necessità di effettuare il coasting e la percentuale di OHSS. Nel gruppo hmg è stato osservato un picco di estradiolo significativamente minore (p=0.02), meno follicoli di diametro intermedio (p=0.001), un più basso numero di ovociti recuperati (p=0.002) e di ovociti in metafase II (MII) (p=0.003). Peraltro gli autori non riportano differenze statisticamente significative tra i gruppi nel numero di ovociti fecondati, percentuale di fecondazione, numero di embrioni di alto grado e numero di embrioni trasferiti. Inoltre non si è riscontrata una differenza nella percentuale di gravidanze tra i due gruppi. L OHSS si è verificata nell 11.9% delle pazienti trattate con rfsh, mentre non vi sono stati casi di OHSS nel gruppo hmg. Infine, la necessità di effettuare il coasting è stata minore nel gruppo hmg (19.2% vs. 48.9%, p=0.013). In tale ottica una recente metanalisi (Lehert et al., 2014) dimostra che in caso di aggiunta di rhlh a rfsh vi è un aumento relativo nella percentuale di gravidanze del 9% nella popolazione generale e del 30% nelle poor responders. Impiego concomitante di GnRH-anta e gonadotropine L introduzione dei GnRH-anta tra gli strumenti farmacologici della ICFM è relativamente recente. Come detto in precedenza, i GnRH-anta inducono un blocco immediato della increzione delle gonadotropine ipofisarie per inibizione competitiva del recettore specifico. La possibilità di evitare la fase di rilascio acuto di grandi quantità di gonadotropine associata alla somministrazione dei\n9 GnRH-a, è stato considerato un vantaggio teorico dell impiego dei GnRH-anta nei protocolli di ICFM, soprattutto per ciò che concerne il consumo di gonadotropine e la durata del trattamento farmacologico. La maggior parte degli studi pubblicati fa riferimento a due protocolli: a. Il protocollo a dose singola di GnRH-anta; b. Il protocollo a dose multipla di GnRH-anta. Il protocollo a dose singola prevede la somministrazione di 3 mg di GnRH-anta in fase follicolare tardiva (giorno 7-8). L effetto inibitorio di questo dosaggio si mantiene per almeno 4 giorni. Il protocollo a dose multipla prevede l impiego della dose minima efficace giornaliera (0,25 mg) a partire dalla fase follicolare media (5 giorno del ciclo od alla presenza di un follicolo di 14 mm di diametro) e fino al giorno di iniezione di HCG. Gli studi che hanno messo a confronto i protocolli lunghi GnRH-a/Gonadotropine ed i protocolli GnRH-anta hanno evidenziato una minore incidenza di sindrome da iperstimolazione ovarica, un minore consumo di gonadotropine (come atteso), ma una lieve riduzione dei tassi di gravidanza. L introduzione dei GnRH-anta ha indotto a rivedere la potenzialità di impiego di vecchi protocolli, considerati di buona efficacia anche se superati dall impiego dei GnRH-a per via dell elevata incidenza di picchi prematuri di LH. Così, è stato recentemente proposto l impiego di stimolazioni cosiddette soft che prevedono l impiego di basse dosi di gonadotropine. Un ridotto numero di ovociti con notevole riduzione delle dosi di gonadotropine è l obiettivo di questi protocolli. Inoltre, una stimolazione gonadotropa di supporto della maturazione follicolare finale e GnRH-anta può essere utilizzato nello sfruttamento dei cicli spontanei. Risposte inadeguate alla ICFM Una risposta alla ICFM è da considerare adeguata se è capace di consentire un recupero ovocitario di almeno 6-10 cellule uovo potenzialmente fecondabili. Questo numero di cellule uovo consente solitamente di ottenere un numero di embrioni adeguato per un singolo transfer e, probabilmente, di un ulteriore transfer con embrioni scongelati. In queste condizioni, la fase di ICFM rappresenta un elemento di prognosi favorevole. Le ICFM con risposte inadeguate sono quelle associate ad un recupero ovocitario in difetto ( poor responder ) o in eccesso ( high responder ). Queste deviazioni da una condizione definibile arbitrariamente di adeguatezza, inducono problemi di natura diversa: per le poor responder il problema è quello della associata riduzione della probabilità di concepimento, mentre per le high responder il problema è quello del rischio di indurre la sindrome da iperstimolazione ovarica (SIO). ICFM nelle poor responder Se appare ormai chiaro che una risposta povera alla ICFM si associa ad una prognosi riproduttiva ridotta, non sono ancora uniformi i criteri adottati per la definizione della condizione clinica. In generale, una risposta inadeguata è associata ad una età riproduttiva avanzata e, comunque, ad una cosiddetta riserva ovarica ridotta. Ovvero, ad una riduzione critica della coorte di follicoli che esprimono sensibilità alla supplementazione di gonadotropine esogene. Questo fenomeno è fisiologico in età riproduttiva avanzata. Quando si manifesta prematuramente esso si associa ad un esaurimento precoce del patrimonio follicolare. La prevalenza di tale fenomeno varia pertanto a seconda dell età della donna, più bassa tra le donne con età < 34 anni raggiunge il 50% nelle donne in una fascia di età >43 anni. Una risposta povera alla ICFM può essere preventivamente attesa se si valutano alcuni parametri capaci di stimare la riserva ovarica. Tra quelli descritti, la combinazione del dosaggio di FSH ed estradiolo in fase follicolare precoce (giorno 2-4 ), con la valutazione ecografica del numero dei follicoli antrali in fase follicolare precoce-media e dell ormone antimulleriano (AMH), oltre ad una precedente risposta poor ( 3 ovociti con un protocollo di\n10 stimolazione convenzionale) è una semplice strategia di indagine predittiva. Esiste una correlazione tra AMH e numero di follicoli antrali rilevati all indagine ecografica basale e numero di ovociti aspirati. Per quanto riguarda i possibili protocolli di ICFM, il grande numero di strategie proposte spiega la difficoltà a rendere reversibile la condizione di poor responder. In linea di massima viene considerata come poor responder una donna che dopo una adeguata stimolazione follicolare produce un numero di follicoli inferiore a 4 e presenta un picco di estradiolo (E2) inferiore a 500pg/ml. In generale, è richiesto un incremento della dose giornaliera di gonadotropine fino a UI di FSH. In queste condizioni, è opportuno astenersi dalla somministrazione di GnRH-a in formulazione depot e sospendere la somministrazione del GnRH-a giornaliero nel giorno di inizio della somministrazione delle gonadotropine (protocollo sequenziale). L impiego dei protocolli corti è stato proposto per la ICFM delle poor responder con risultati deludenti. Alcuni autori propongono l uso sequenziale di un contraccettivo, delle gonadotropine esogene ad alto dosaggio e di un GnRH-anta. Il razionale di questo approccio è quello di inibire la dismissione gonadotropa con l estroprogestinico (evitando l effetto inibitorio del GnRH-a diretto sull ovaio), bloccando una non temporizzata selezione follicolare, indotta dalle elevate concentrazioni di FSH endogeno presenti in condizione di inadeguatezza del patrimonio follicolare. L impiego dei GnRH-anta nella fase finale della ICFM protegge dal possibile picco prematuro di LH. ICFM nelle high responder Le pazienti a rischio di risposta esplosiva alla ICFM sono, abitualmente, soggetti giovani, con basso BMI e con aspetto ecografico delle ovaie di franca PCO o di ovaio multifollicolare. Tutti i protocolli fino ad ora descritti possono essere impiegati con successo se si presta attenzione alla riduzione del dosaggio giornaliero iniziale delle gonadotropine e alla adeguata riduzione del dosaggio stesso a selezione follicolare iniziata (protocolli step-down ). La personalizzazione delle dosi e dei tempi di somministrazione delle gonadotropine può richiedere più tentativi, ma un adeguato counseling ed una corretta interpretazione della dinamica della follicologenesi indotta, rappresentano la chiave per il successo della ICFM in questi soggetti. La metanalisi di Bayram et al. (2001) ha confrontato efficacia e sicurezza di rfsh vs hufsh in donne con sindrome dell ovaio policistico e infertilità resistente al clomifene. Scopo della terapia era l induzione dell ovulazione finalizzata al concepimento, senza PMA. Sono stati inclusi 4 RCT per un totale di 544 donne trattate. I due trattamenti non hanno mostrato differenze significative di incidenza di ovulazione, endpoint primario valutato in 2 studi (71,4% per rfsh vs 70,3% per FSH OR 1,19; IC 95% 0,78-1,80) né di frequenza di gravidanze per paziente (3 studi N=445: 37,2% vs 40,2%, OR 0,95; IC 95% 0,64-1,41). In uno dei 4 studi inclusi nella metanalisi, la durata media della stimolazione è stata di 16 giorni per le donne trattate con rfsh vs 16,3 giorni per quelle trattate con FSH umano. Al fine di rendere quanto più possibile personalizzata la dose di gonadotropine da utilizzare sono stati proposti dei nomogrammi per il calcolo della dose di gonadotropine da impiegare che si basano sui classici parametri di riserva ovarica: età della donna, livelli sierici di FSH al 3 giorno e AFC o AMH. Questi due ultimi marcatori vengono impiegati indistintamente in quanto considerati intercambiabili. Grazie a questo modello è stata predetta una dose giornaliera < 225 UI di gonadotropine nel 50,2% delle pazienti con età 35 aa e del 18,1% in pazienti con età > 35 anni. (La Marca et al. 2014) ICFM per i cicli di inseminazione intrauterina (IUI) Esistono sufficienti evidenze per affermare che la condizione di sterilità coniugale da causa sconosciuta o da fattore maschile lieve, può essere vantaggiosamente trattata mediante la\n11 combinazione della IUI ed una moderata ICFM. Quindi, l obiettivo principale della ICFM nel trattamento della difficoltà riproduttiva mediante IUI è l induzione della maturazione di non più di 2-4 follicoli preovulatori. Anche se, al fine di raggiungere l obiettivo, è teoricamente possibile aggiustare il dosaggio delle gonadotropine in tutti i protocolli fin qui descritti, in generale non sembra essere utile l impiego dei protocolli che prevedano l uso dei GnRH-a o GnRH-anta. I dati aggregati di differenti studi clinici randomizzati suggeriscono che l impiego delle sole gonadotropine è da preferire all impiego combinato con il citrato di clomifene ed al citrato di clomifene da solo. Qualunque sia il protocollo adottato, solitamente, la fase della ICFM viene considerata conclusa se al controllo ecografico si evidenziano almeno 2-3 follicoli antrali delle dimensioni di mm di diametro medio ed una concentrazione ematica di estradiolo di pg/ml per follicolo di diametro medio >14 mm. Il numero di giorni di impiego di gonadotropine esogene utili a raggiungere questo grado di risposta è di 9-13 giorni con i protocolli lunghi. Con l uso dei protocolli corti il numero di giorni è inferiore. L induzione della ripresa della attività meiotica della cellula uovo avviene mediante la somministrazione di UI di gonadotropina corionica umana. I protocolli che non prevedono l impiego dei GnRH-a consentono l utilizzazione degli stessi GnRH-a per l induzione della ripresa della attività meiotica della cellula uovo attraverso la dismissione massiva di LH ipofisario. Questa strategia è stata impiegata nella prevenzione della SIO in pazienti a rischio. La gonadotropina rlh ha mostrato efficacia nella induzione della ripresa della attività meiotica della cellula uovo al dosaggio in bolo di UI circa. La più recente metanalisi su tale argomento è quella di Matorras del 2011 in cui sono state analizzate le percentuali di gravidanza (PR) dopo IUI. Gli autori hanno identificato sei studi randomizzati (713 donne, 1581 cicli). In tre di questi studi sono state impiegate le stesse dosi di FSH ricombinante (rfsh) e di FSH altamente purificato(hp-fsh) ( equal dose group) mentre negli altri tre il rapporto fra la dose di HP-FSH: rfsh era di 1,5. La metanalisi globale non ha mostrato differenze di PR. La PR per ciclo è risultata simile tra il gruppo con rapporto 1,5 (14.51% vs %; rischio relativo [RR], 0.970; 95% intervallo di confidenza [CI], ). Una differenza statisticamente significativa in favore del rfsh si è avuta nell equal dose group (16.36% vs %; RR, 1.394; 95% CI, ) e nei dati della PR per singola paziente (41.44% vs %; RR, 1.273; 95% CI, ). La PR riferita al primo ciclo di trattamento ha mostrato risultati simili anche se la differenza non è risultata statisticamente significativa (RR, 1.434; 95% CI, ). Da questa metanalisi si ricava che la PR per ciclo era maggiore impiegando il rfsh alla stessa dose dell HP-FSH, mentre era simile quando la dose del rfsh era inferiore del 50%. 7. ASPETTI RELATIVI ALLA SICUREZZA DELLE GONADOTROPINE DI ORIGINE ESTRATTIVA NEI CONFRONTI DI QUELLE OTTENUTE CON DNA RICOMBINANTE Fonte dell FSH Escludendo l origine pituitaria, la materia prima di FSH per uso farmaceutico può essere ottenuta dall estrazione dalle urine menopausali umane o attraverso la tecnologia del DNA ricombinante dalle culture cellulari ovariche di mammiferi (es. chinese hamster ovary- CHO). Provenendo dalla fonte menopausale, l FSH di derivazione umana è per definizione ricco di isoforme di FSH iperglicosilate e acide. L FSH ricombinante (rfsh) viene prodotto dalle cellule CHO che posseggono un pool di enzimi che differiscono da quelli di tipo umano in termini di efficienza nella capacità di glicosilazione\n12 proteica; pertanto rfsh presenta un più basso grado di ramificazioni oligosaccaridiche oltre che un più basso contenuto di acido sialico. La iperglicosilazione e le isoforme molto acide (pl<3) sono presenti in bassa concentrazione. Metodi di purificazione delle gonadotropine Le gonadotropine vengono purificate a partire dalle urine donate da donne in menopausa. Le donne in menopausa vengono reclutate come donatrici da un apposito team di medici. Il loro stato di salute ed una serie di possibili condizioni patologiche vengono controllati in base ad un algoritmo normativo ben codificato. Le urine vengono prima sottoposte a un trattamento a ph 11, durante il quale molte delle molecole contaminanti precipitano. Il ph elevato rende inattivi i virus potenzialmente presenti. Il surnatante viene recuperato e ultra-filtrato per concentrare la soluzione ed eliminare le molecole urinarie più piccole. Una frazione di FSH viene fatta precipitare selettivamente in etanolo, il che consente altresì di separare ulteriormente eventuali virus. Nell ultima fase, il precipitato ottenuto viene essiccato dopo un trattamento con acetone ed etere etilico. L estratto grezzo risultante, contenente un mix poco purificato di FSH e LH (hmg), viene reso nuovamente solubile in una soluzione di etanolo/acetato di ammonio, che viene quindi inglobata in una matrice solida. Applicando un gradiente di concentrazione di etanolo, si estraggono per eluizione due frazioni distinte, contenenti rispettivamente FSH o LH/hCG, che vengono raccolte in due pool diversi. In seguito, le due frazioni vengono sottoposte parallelamente allo stesso processo al termine del quale si ottengono due prodotti finiti, da un lato FSH altamente purificato e dall altro LH altamente purificato. L LH altamente purificato sarà usato, in combinazione con dosi opportune di FSH e hcg, per la formulazione di un farmaco hmg altamente purificato. Le fasi finali di purificazione prevedono una serie di cromatografie a scambio ionico e di affinità che consentono di ottenere un FSH altamente purificato come prodotto finito. La prima (DEAEsefarosio) è una cromatografia a scambio ionico e serve per la rimozione iniziale della gran parte dei contaminanti urinari. Il materiale risultante viene ulteriormente purificato con una cromatografia di affinità che utilizza la resina blu-sefarosio e che è la vera responsabile dell elevato livello di purificazione del processo. I rimanenti LH/hCG, ancora presenti a bassa concentrazione a questo stadio, vengono infine rimossi mediante una cromatografia di affinità basata su anticorpi policlonali anti-hcg di coniglio. Alla fine del processo si ottiene un FSH altamente purificato che viene quindi formulato e prodotto come farmaco. Metodi di produzione dell FSH ricombinante Nell ultimo decennio la tecnologia del DNA ricombinante ha consentito la produzione su scala industriale di gonadotropine, senza dovere ricorrere alla raccolta di urina umana. Il concetto base di tale tecnologia risiede nel fatto che la struttura della molecola di DNA è identica in tutti gli esseri viventi, a prescindere dalla complessità dell organismo; stessa cosa si può dire del codice genetico incluso nella doppia elica, responsabile della sintesi cellulare delle proteine. Il DNA ricombinante è costituito da frammenti molecolari di DNA ricavati da diverse specie di un organismo, oppure prelevati da diverse fonti e ricombinati. Pertanto, la tecnologia del DNA ricombinante prevede la selezione di una porzione del codice genetico di un animale o di una pianta per la sintesi di una proteina desiderata (ad esempio, FSH o insulina) e la ricombinazione nel\n13 materiale genetico di un microrganismo (es. un batterio). Le proteine ricombinanti così prodotte sono copie identiche della sostanza prodotta dall organismo di partenza. Schematicamente, la tecnologia del DNA prevede l identificazione e l isolamento del gene che codifica per l FSH; l inserimento del gene in un frammento che veicola il DNA (cosiddetto vettore); l inserimento del vettore + il gene in un altro organismo ed, infine, la clonazione dell organismo per ottenere una quantità sufficiente di cellule per la produzione su scala industriale della proteina desiderata. La cellula che viene impiegata per la produzione dell FSH ricombinante deriva dall ovaio di criceto cinese (Chinese Hamster Ovary - CHO). 8. UOMO Mentre vi sono numerosi studi di confronto tra rfsh e FSH estrattivo nell induzione dell ovulazione, i dati sulla spermatogenesi sono più scarsi, anche se non sembrano esserci differenze significative nell uso dell uno o dell altra forma. Le caratteristiche farmacocinetiche del rfsh, che descrivono alcune modalità di comportamento del farmaco una volta iniettato nell'organismo, sono molto simili a quelle delle preparazioni estrattive urinarie. L uso delle gonadotropine (GT) ha un fondamento razionale nella terapia sostitutiva dell ipogonadismo ipogonadotropo, dove il deficit di GT è il responsabile dell assenza di spermatogenesi e la somministrazione di preparati ad azione LH e FSH-simile avvia la maturazione tubulare e porta alla comparsa di spermatozoi nell eiaculato (Matsumoto, 1984). I risultati ottenuti nell ipogonadismo ipogonadotropo hanno giustificato l estensione dell uso delle gonadotropine alla stimolazione della spermatogenesi in soggetti con alterazioni del liquido seminale e normali livelli di gonadotropine. Sia l HMG da sola che in associazione con l HCG è stata largamente utilizzata anche se l efficacia del trattamento non è mai stata testata in maniera appropriata. I primi risultati positivi nell impiego delle GT si riferiscono a studi aperti, non controllati che hanno dimostrato notevoli miglioramenti della qualità nemaspermica; questa serie di studi ha indotto altri autori a mettere a punto ulteriori studi non controllati che hanno ingenerato l opinione comune che l impiego delle GT fosse la terapia più efficace in caso di alterazione dei parametri seminali. Peraltro, nel 1987 uno studio clinico controllato con placebo, in doppio cieco dimostrava che non vi era alcun miglioramento dei parametri seminali nei pazienti trattati con HMG rispetto ai pazienti trattati con placebo, concludendo che non vi era efficacia della terapia con GT rispetto alla normale fluttuazione dei parametri seminali che possono essere osservati nel tempo (Knuth et al., 1987). Negli anni successivi la progressiva comparsa di preparazioni di FSH sempre più purificate, sino alle attuali formulazioni ottenute con tecnologia ricombinante, hanno portato vari autori all impiego del solo FSH sia come opzione terapeutica nel miglioramento della fertilità naturale sia come terapia di preparazione alle tecniche di PMA. L FSH urinario altamente purificato (FSH-HP) è stato utilizzato nel trattamento dell infertilità maschile idiopatica in numerosi studi non controllati, che riportavano miglioramenti della capacità fecondante degli spermatozoi utilizzati in cicli di PMA, nel gruppo dei soggetti trattati con FSH. Questi effetti sono stati messi in relazione con un miglioramento della morfologia nemaspermica valutata con la microscopia elettronica a trasmissione, nonostante non si osservassero variazioni significative nei parametri seminali classici (Bartoov et al., 1994; Ben Rafael et al., 2000). Anche in questo caso gli effetti degli studi non controllati non sono stati confermati da studi effettuati con gruppi di controllo (Matorras et al., 1997; Foresta et al., 1998). Peraltro, altri lavori controllati con impiego di FSH urinario pre-icsi (Ashkenazy et al., 1999) hanno dimostrato differenze statisticamente significative nella percentuale di gravidanze, pur non avendosi miglioramenti significativi dei classici parametri nemaspermici. In uno studio randomizzato a singolo cieco Baccetti et al. (1997) hanno trattato per 12 settimane 66 pazienti con una dose giornaliera di 150 UI di FSH-HP sottocute. Come gruppo di controllo sono\n14 stati impiegati 15 soggetti trattati con placebo. I pazienti sono stati sottoposti prima e dopo terapia all analisi degli spermatozoi mediante microscopia elettronica. Nel gruppo sottoposto a terapia si è dimostrato un aumento statisticamente significativo di nuclei nemaspermici con cromatina compatta ed una diminuzione altrettanto significativa (valore iniziale 33,5%, dopo terapia 18,05%) dei nuclei con cromatina marginalizzata, tipico segno di apoptosi. Nel complesso questi studi non offrono sufficienti ed inequivocabili evidenze di un miglioramento significativo della percentuale di fecondazione e di gravidanze e dei parametri nemaspermici convenzionali nei pazienti trattati con differenti formulazioni di FSH. La metanalisi Cochrane di Attia et al. (2006) conclude che This review did not find enough studies to draw strong conclusions about the use of gonadotrophins for the treatment of idiopathic male infertility. However, analysis of the results of the four included studies showed a significant increase in the pregnancy rates, during and within three months, after gonadotrophin treatment of men with idiopathic subfertility. Le differenze che emergono da questi studi possono, in parte, essere giustificate da vari fattori come i criteri adottati nella selezione dei pazienti, l interpretazione dei parametri seminali, la posologia del trattamento e la sua durata. In effetti, il criterio più utilizzato nella selezione dei pazienti da trattare con FSH è rappresentato solitamente dalla normalità del livello basale di gonadotropine sieriche, mentre l efficacia del trattamento è valutata esclusivamente sulla base della concentrazione nemaspermica oppure della percentuale di gravidanze. Per questa ragione sono stati eseguiti anche altri studi che hanno preso in considerazione, come fattori predittivi dell efficacia del trattamento con FSH, parametri come la citologia testicolare e la concentrazione plasmatica di inibina B. In uno studio Foresta et al. (1998) hanno trattato 60 pazienti oligozoospermici, con normali concentrazioni di FSH sierico (<7 UI/l), usando FSH estrattivo alla dose di 75 UI a giorni alterni per 3 mesi. La funzione tubulare di questi pazienti è stata studiata tramite citoaspirato testicolare bilaterale, prima e dopo terapia. In base alla risposta al trattamento è stato possibile identificare due sottogruppi di pazienti. I non-responders che presentavano, al citoaspirato pre-terapia, un quadro di ipospermatogenesi associata a difetti della maturazione spermatidica e i responders che presentavano un quadro di ipospermatogenesi con normali processi maturativi. L esame citologico effettuato dopo il trattamento con FSH mostrava un aumento del numero di spermatogoni, spermatociti e spermatidi in tutti i pazienti. Nonostante ciò, solo nel gruppo dei responders veniva osservata l attivazione del processo della spermiogenesi, con conseguente aumento sia del numero di spermatozoi intratesticolari che della concentrazione nemaspermica nel liquido seminale. I risultati di questo studio indicano che, in pazienti affetti da oligozoospermia idiopatica con gonadotropine sieriche nella norma, la terapia con FSH è in grado di stimolare la funzione tubulare. Tale dato si conferma solo nel caso in cui l oligozoospermia sia dovuta ad ipospermatogenesi senza arresto maturativo. Un altro parametro preso in considerazione come fattore predittivo del successo della terapia con FSH, è stato il livello di inibina B. Foresta et al. (2000) hanno studiato 135 pazienti oligozoospermici prendendo in considerazione esame del liquido seminale, FSH, inibina B e citoaspirato testicolare. I pazienti sono stati suddivisi in tre gruppi sulla base delle concentrazioni plasmatiche di FSH ed inibina B: gruppo A con normali concentrazioni di entrambi gli ormoni; gruppo B con FSH elevato e normale inibina B; gruppo C con FSH elevato e bassi livelli di inibina B. Di questi pazienti, 78 sono stati trattati con 75 UI di FSH estrattivo a giorni alterni per 3 mesi e 57 con 75 UI di FSH/die sempre per lo stesso periodo. Alla fine del trattamento solo i pazienti appartenenti al gruppo A senza alterazioni maturative della spermatogenesi hanno mostrato un incremento significativo della concentrazione di spermatozoi eiaculati. In questi pazienti, non è stata evidenziata nessuna differenza, in termini di concentrazione nemaspermica, tra i due schemi terapeutici usati. Nei restanti pazienti del gruppo A (quelli con ipospermatogenesi associata ad alterazioni maturative) ed in tutti i pazienti del gruppo B e C, non è stato registrato nessun\n15 incremento significativo della conta nemaspermica. Questi dati confermano ulteriormente che i pazienti che rispondono alla terapia con FSH, sono quelli caratterizzati da oligozoospermia con livelli di FSH normali e senza alterazioni della maturazione nemaspermica. Inoltre, veniva sottolineato che gli elevati livelli basali di FSH, indipendentemente dalla concentrazione di inibina B, erano un fattore predittivo negativo per l efficacia del trattamento. Nel mese di agosto 2013 è stata pubblicata l ultima Cochrane sull impiego delle gonadotropine nell infertilità idiopatica (Attia AM, Abou-Setta AM, Al-Inany HG. Gonadotrophins for idiopathic male factor subfertility. Cochrane Database Syst Rev Aug 23;issue 8) con lo scopo di determinare l effetto della somministrazione sistemica dell FSH, nell uomo, sulla percentuale di gravidanze e di nascite vitali. Gli autori hanno analizzato la percentuale di gravidanze spontanee nel corso dei tre mesi successivi al completamento della terapia con gonadotropine. Dall analisi dei risultati risulta una differenza statisticamente significativa nella percentuale globale di gravidanze per coppia a favore del gruppo in trattamento con gonadotropine (Peto OR 4.94, 95% CI 2.13 to 11.44) con un 16% di gravidanze (20/201) nel gruppo trattato rispetto al 7% (3/211) nel gruppo di controllo (Figura 1). L analisi di un sottogruppo che comprendeva partners femminili normali ( no female factor ) ha mostrato un risultato significativamente favorevole al gruppo trattato con FSH (Peto OR 5, 95% CI 1.88 to 13.34) con una percentuale di gravidanze dell 11.3% (15/133) nel gruppo con gonadotropine rispetto all 1.5% (2/131) nel gruppo di controllo (Figura 2).\n16 La conclusione della Cochrane è in definitiva favorevole all impiego delle gonadotropine anche se riconosce che il numero di studi e partecipanti è insufficiente per trarre conclusioni finali. E necessario un grosso studio multicentrico con un adeguato potere statistico. 9. LE GONADOTROPINE DISPONIBILI: focus sulla sicurezza La terapia gonadotropinica, basata su farmaci a base di ormoni ipofisari, è utilizzata efficacemente in uomini e donne per il trattamento del deficit gonadotropinico a varia eziologia, utilizzando regimi basati su derivati urinari o su ricombinanti. La prima generazione di gonadotropine prodotta è stata la menotropina (hmg) i cui prodotti in commercio sono Meropur e Menogon, in cui il contenuto di ormone follicolostimolante è pari a quello di ormone luteinizzante. Nel tempo sono state progressivamente introdotte gonadotropine sempre più purificate del contenuto di LH: le più recenti sono rappresentate dall FSH umano urinario altamente purificato (FSH-HP), come Fostimon, dall FSH ricombinante (rfsh), come Gonal F e Puregon e dalla corifollitropina, come Elonva. Le indicazioni dei prodotti di derivazione umana, così come di quelli ricombinanti, sono simili: nella donna possono essere utilizzati in caso di anovulazione (incluso donne con sindrome dell ovaio policistico) o di iperstimolazione controllata delle ovaie in donne sottoposte a tecniche di riproduzione assistita; nell uomo comprendono unicamente l induzione della spermatogenesi in pazienti affetti da ipogonadismo ipogonadotropo. La posologia varia a seconda del farmaco e della condizione clinica della paziente: per ottimizzarne l efficacia e la sicurezza, le rfsh devono comunque essere somministrate a un dosaggio totale più basso e per un periodo di trattamento più breve rispetto a quello generalmente impiegato per l FSH urinario. Riguardo all efficacia e alla sicurezza, per gli outcome principali non sono emerse differenze statisticamente significative tra le gonadotropine di origine estrattiva e quelle di origine ricombinante. Nel confronto con le forme ricombinanti, gli studi più recenti a cui è possibile far riferimento per gli aspetti relativi alla sicurezza sono le metanalisi di Al Inany e colleghi, van Wely e colleghi e di Matorras e colleghi. In relazione alla sicurezza, non si sono evidenziate differenze significative tra hmg, hufsh HP e rfsh nel tasso di gravidanze multiple, nella frequenza della sindrome da iperstimolazione ovarica (OHSS), nel tasso di interruzione del trattamento né nei tassi di aborto spontaneo.\n17 In merito alla sicurezza, un problema da valutare è quello della possibile trasmissione iatrogena delle malattie prioniche attraverso le iniezioni di ormoni, come le stesse gonadotropine. Dorsselaer et al. in un loro studio laboratoristico del 2011 evidenziano, infatti, come, anche se le donatrici di urina sono donne in menopausa e sottoposte a screening per malattia neurologica, è impossibile escludere, su sola base anamnestica, l incubazione (fino a dieci anni) della malattia di Creutzfeldt- Jakob (vcjd). Essi mostrano che proteine prioniche sono presenti nei preparati derivati da urine umane e ipotizzano che tra esse potrebbero teoricamente essere contenute proteine causa di patologie come la vcjd (da loro comunque non rilevate). Sul rischio potenziale di trasmissione di agenti infettivi con la somministrazione di prodotti ormonali derivanti da urine umane, si era espresso l Istituto Superiore di Sanità nel Era stato suggerito l inserimento di un avvertenza di carattere generale ( non può essere totalmente escluso il rischio di trasmissione di malattie infettive dovuto alla trasmissione di agenti infettivi. Ciò si applica anche ai patogeni di natura finora sconosciuta ) negli stampati dei medicinali derivati da urine umane, in analogia al rischio potenziale riscontrabile con l impiego degli emo- e plasma derivati. In tale contesto la European Society of Human Reproduction and Embryology (ESHRE) e la Canadian Fertility and Andrology Society (CFAS) hanno precisato che le gonadotropine di derivazione urinaria possono contenere proteine prioniche normali ma attualmente sembra non esserci alcuna conseguenza clinica di questa osservazione e che ad oggi non esistono dati a supporto del rischio di trasmissione di malattia da prioni a seguito di iniezioni sottocutanee di gonadotropine. Sebbene infatti i prioni siano potenzialmente trasmissibili attraverso una iniezione intramuscolare, gli attuali preparati iniettabili sono più spesso somministrati per via sottocutanea e quindi privi di rischio potenziale. Alcune delle gonadotropine di origine estrattiva presenti in commercio (FSH-HP) dichiarano di rispettare elevati standard di qualità e sicurezza in quanto sono sottoposte ad un processo di purificazione finale che prevede una serie di fasi tra cui la nanofiltrazione. Tale metodica è riconosciuta essere in grado di eliminare i virus, compresi quelli non capsulati e di più piccole dimensioni e rappresenta, inoltre, un efficace procedura per rimuovere i prioni, come evidenziato nel recente lavoro di Caccia et al. Per quanto riguarda le evidenze pubblicate sulla sicurezza di FSH-HP di origine estrattiva rispetto all hmg, sono rappresentativi i risultati dello studio di Ismail e colleghi in cui, oltre all efficacia, è stata valutata anche la sicurezza di questi trattamenti in donne sottoposte a IVF. Gli outcome considerati sono stati: tasso di abortività, gravidanze multiple e sindrome da iperstimolazione (OHSS). Il tasso di abortività è risultato simile nei due gruppi, analogamente alla OHSS. L incidenza di gravidanze multiple è stata tuttavia significativamente più alta nel gruppo FSH-HP rispetto al gruppo di donne trattate con hmg (32% vs. 10%). Nel confronto con rfsh, gli studi più recenti a cui e possibile far riferimento sono le metanalisi di Al Inany e colleghi, van Wely e colleghi e di Matorras e colleghi. Nello studio di Al-Inany et al. gli outcome di sicurezza considerati sono stati: tasso di gravidanze multiple (MPR), tasso di abortività e OHSS. Come visto per l efficacia, anche per gli outcome di sicurezza non si è giunti alla significatività statistica né per MPR (OR=1,10; IC95%: 0,42-2,89), né per tasso di abortività (OR=1,05; IC95%: 0,65-1,70), né per OHSS (OR=0,24; IC95%: 0,03-2,23). I risultati delle analisi condotte da van Wely et al., analogamente, non hanno evidenziato differenze statisticamente significative nei 16 trials selezionati e in cui sono stati confrontati rfsh e FSH-HP in relazione alla OHSS. Considerando la comparazione tra le rfsh e tutte le gonadotropine urinarie, anche i riscontri per il tasso di gravidanze multiple per donna (OR=0,91; IC95%: 0,76-1,09; I²=0%), per il tasso di gravidanze multiple per gravidanza clinica (OR=0,96; IC95%: 0,78-1,18 I²=20%) e per i tassi di aborto\n18 spontaneo (OR=1,16; IC95%: 0,93-1,44; I²=12%) sono apparsi privi di significatività statistica. Anche il lavoro di Matorras et al. ha mostrato dei tassi di gravidanza multipla simili tra rfsh e FSH-HP. La frequenza della OHSS è stata simile nelle donne trattate con rfsh e FSH-HP. E stato inoltre riportato un tasso di interruzione del trattamento pari a 2,05% (8/389) nel gruppo rfsh e a 2,54% (9/354) nelle donne trattate con FSH-HP. Le differenze mostrate non sono state tuttavia statisticamente significative. Per quanto riguarda, infine, l ipotesi di trasmissione dei prioni, la pratica clinica e le evidenze epidemiologiche, mostrano che a oggi non esistono dati a supporto del rischio di trasmissione di malattia da prioni a seguito di iniezioni sottocutanee di gonadotropine. Peraltro, in caso di somministrazione di gonadotropine di origine umana il paziente deve essere dichiarato permanentemente non idoneo alla donazione di sangue o diemocomponenti, come riportato nel DECRETO 25 gennaio 2001 Caratteristiche e modalita' per la donazione di sangue e di emocomponenti pubblicato in GU n.78 del 3/4/ FARMACOGENOMICA NELL IMPIEGO DELLE GONADOTROPINE NELLA DONNA E NELL UOMO Polimorfismi del recettore dell FSH e delle catene dell FSH I polimorfismi vengono definiti come variazioni nella sequenza del DNA che sono presenti almeno nell 1% della popolazione e danno luogo a enzimi con diversi livelli di attività metabolica o a recettori con diversa affinità per l ormone endogeno o il farmaco, modificando la risposta di un individuo. Le variazioni genetiche riguardano più spesso un singolo nucleotide e sono pertanto definite polimorfismi a singolo nucleotide (SNP) e riguardano tratti monogenici, cioè a polimorfismi di un singolo gene codificante una proteina coinvolta nel metabolismo di un ormone endogeno o di farmaco o nel suo effetto, che sono in grado di causare risposte individuali variabili sia all ormone naturale che ai farmaci. Pertanto, lo studio dei polimorfismi presenti su geni codificanti o su zone di regolazione di recettori ormonali ci permette di identificare una eventuale resistenza o riduzione di riposta sia ad ormoni endogeni che ad ormoni esogeni impiegati in terapia. Come abbiamo visto l'fsh riveste un ruolo fondamentale nella riproduzione umana. Il suo recettore, FSH-R, si trova sulla superficie delle cellule della granulosa nell'ovaio e delle cellule del Sertoli nei testicoli: il legame specifico ormone-recettore induce la maturazione degli ovociti e la spermatogenesi. Negli ultimi anni sono stati identificati due polimorfismi a singolo nucleotide localizzati a livello dell'esone 10 del gene FSH-R che modificano la sensibilità della risposta ovarica, e secondo studi recenti anche della risposta testicolare, ad una stimolazione con l'ormone FSH; in particolare, il polimorfismo Treonina (Thr) 307 Alanina (Ala), determinato da una variazione nucleotidica A G in posizione c.919, che produce una variazione aminoacidica da Thr ad Ala in posizione 307 ed il polimorfismo Asparagina (Asn) 680 Serina (Ser), determinato da una variazione nucleotidica A G in posizione c.2039, che produce una variazione aminoacidica da Asn a Ser in posizione 680. Queste due varianti alleliche, in linkage disequilibrium tra loro, si presentano con frequenza maggiore nelle combinazioni Thr307-Asn680 (TN) e Ala307-Ser680 (AS). La valutazione di tali varianti alleliche viene condotta mediante l'amplificazione tramite PCR, a partire da DNA genomico, dell'esone 10 del gene FSH-R, e successiva analisi mediante sequenziamento diretto. Pertanto l analisi dei polimorfismi del gene FSH-R permette di dosare in maniera individuale l ormone e quindi di aumentare l efficacia e la sicurezza della terapia. I risultati di questa analisi, permettono di personalizzare i protocolli di stimolazione durante una IVF, cercando di evitare fenomeni di iperstimolazione e ci potranno consentire in un futuro molto prossimo di individuare un\n19 sottogruppo di pazienti maschi che avranno maggiori possibilità di rispondere alla terapia con gonadotropine. Nelle donne, recenti studi, hanno dimostrato la presenza di polimorfismi del gene che codifica per il recettore dell FSH capaci di influenzare i livelli circolanti di FSH e la sensibilità del recettore all ormone (Aittomäki et al., 1995; Greb et al., 1995; Behre et al., 2005). Nel maschio il significato di questi polimorfismi è tuttora non chiaro (Simoni et al., 1999; Asatiani K. et al., 2002; Ahda et al., 2005) anche se i primi dati pubblicati sembrano dimostrare che i diversi genotipi del recettore dell FSH non sono in grado di modificare i livelli di FSH in soggetti normali ed infertili e non sembrano essere associati ad azoospermia o oligozoospermia (Pengo et al., 2006). Nonostante la mancanza di correlazione diretta tra polimorfismi del recettore dell FSH e spermatogenesi, una ipotesi interessante sembra essere quella che i polimorfismi di tale recettore possano influenzare la risposta al trattamento con FSH, al pari di quello che è stato osservato, ad oggi, solo nelle donne (Perez Mayorga et al., 2000). Oltre al recettore dell FSH si sta iniziando a valutare anche i polimorfismi del gene FSHB che codifica per la subunità β dell FSH. I sempre più frequenti studi di farmacogenomica ci stanno consentendo di affinare sempre più i criteri da utilizzare per impiegare le gonadotropine nel maschio. Per es., recentemente è stato descritto un polimorfismo a singolo nucleotide (SNP) G/T nel promotore del gene FSHB (rs , -211 bp dal sito di inizio trascrizione dell mrna (Grigorova et al., 2008). Studi funzionali hanno evidenziato che l attività relativa del promotore dell FSH in presenza dell allele T è circa la metà rispetto all allele G (Hoogendoorn et al., 2004). In accordo a tale attività funzionale, Grigorova et al. (2010) hanno dimostrato una significativa associazione tra questo SNP ed i livelli circolanti di FSH nella popolazione generale in Estonia: i soggetti eterozigoti GT e gli omozigoti TT hanno infatti livelli di FSH più bassi rispettivamente del 15,7 e 40%. Gli stessi autori hanno replicato queste evidenze in un gruppo di soggetti infertili, mostrando un arricchimento dell allele T e dei soggetti omozigoti TT tra i soggetti infertili (Grigorova et al., 2010). Di recente, Ferlin et al. (2011) hanno dimostrato che la terapia con rfsh (150 UI a gg alterni per tre mesi) in 67 soggetti divisi in tre gruppi (38 omozigoti GG, 20 eterozigoti GT e 9 omozigoti TT) ha indotto un aumento dei parametri seminali statisticamente significativo nel gruppo degli omozigoti TT rispetto agli altri gruppi. Pertanto questo marker genetico potrebbe rappresentare un valido approccio farmacogenetico per l identificazione di potenziali responders al trattamento con FSH. Tali dati costituiscono un valido motivo per tentare di identificare in modo sempre più preciso il gruppo di pazienti che per il loro assetto genetico e ormonale, sono i candidati ideali alla terapia. In conclusione la letteratura dimostra che la terapia con FSH è correlata con un aumento del volume testicolare ed con una riduzione della frammentazione del DNA spermatico, indicando un effetto positivo sulla spermatogenesi e sulla maturazione spermatica. 11. IMPIEGHI OFF-LABEL DELLE GONADOTROPINE L uso off-label delle gonadotropine riguarda principalmente l impiego della Human-Chorionic Gonadotropin (HCG) come prodotto dimagrante, nella terapia del dolore cronico e per il miglioramento delle prestazioni sportive. Perdita di peso L HCG viene impiegato in un programma dietetico che prevede un introito calorico giornaliero di non più di 500 calorie abbinato ad iniezioni, gocce o compresse giornaliere di HCG. La durata di tale dieta è in genere di 45 giorni. Gli effetti collaterali più importanti nella donna sono l aumento di volume delle mammelle e, più raramente, galattorrea; si possono verificare anche lievi quadri di iperstimolazione ovarica con formazioni di cisti funzionali nonché un lieve aumento dell irsutismo e della caduta dei capelli. Nell uomo si può avere una riduzione della libido, disfunzione erettile,\n20 ginecomastia. A questi effetti collaterali lievi si associano reports di eventi avversi molto gravi come embolia polmonare, depressione, eventi cerebrovascolari, arresto cardiaco e morte improvvisa. Purtroppo, di recente, alcuni organi di stampa e siti internet hanno riportato alla ribalta questo tipo di dieta, anche alla luce del fatto che pare sia stata impiegata da personaggi celebri. Inutile dire che non c è la minima evidenza scientifica che l HCG abbia un ruolo nel dimagrimento e che la perdita di peso derivi da quello che possiamo definire un vero e proprio digiuno controllato: 500 calorie sono assolutamente insufficienti ed anche le diete più drastiche non scendono mai sotto le 1000 calorie. Gli eventuali cali di peso sono da attribuire alla drastica limitazione del numero di calorie assunte e non all HCG. E possibile comperare in internet gocce o capsule omeopatiche a base di HCG! Terapia del dolore cronico L HCG è stata impiegata di recente in alcuni pazienti sulla riduzione a medio e lungo termine del dolore cronico. Gli studi sono iniziati dall osservazione che le pazienti con dolore cronico durante la gravidanza necessitano di dosi minori di oppiacei e che tale affetto è dovuto ai livelli aumentati di HCG in gravidanza. In effetti, in vari studi dopo una singola iniezione di UI di HCG si è riscontrata una riduzione statisticamente significativa della sintomatologia dolorosa. I motivi della funzione analgesica dell HCG sono ad oggi ancora in fase di chiarimento ma si ritiene che possano derivare dalla contemporanea stimolazione del testosterone, progesterone ed estradiolo indotta dall HCG o da un suo presunto ruolo nella neurogenesi e nei processi di riparazione tissutale. Prestazioni sportive L HCG è stato messo al bando dalle federazioni sportive sin dagli anni 80, in seguito all uso illecito che ne facevano i sollevatori di peso ed i ciclisti. Ai giorni nostri tale sostanza viene impiegata e rilevata molto raramente nel mondo dello sport, come si evince da un report del 2007 in cui su campioni di sangue raccolti in tutto il mondo, solo in 15 si sono ritrovate tracce di HCG. Peraltro viene ancora impiegata in maniera massiccia per stimolare il testicolo e tentare di contrastare gli effetti negativi degli steroidi anabolizzanti sulla funzionalità del testicolo. Social Freezing Consiste nel crioconservare gli ovociti di una donna ancora in età fertile per poi poterli riutilizzare in età avanzata per garantirsi un concepimento altrimenti difficile con l invecchiamento. Ovviamente, in analogia con quanto accade per la fecondazione assistita, la paziente deve essere sottoposta ad una stimolazione ormonale con FSH. Tale impiego, ad oggi, va considerato off-label e non può essere richiesta la copertura dal SSN. Bibliografia 1. Ahda Y. Et al. Follicle-stimulating hormone receptor gene haplotype distribution in normozoospermic and azoospermic men. J Androl. 2005;26: Aittomäki K. et al. Mutation in the follicle-stimulating hormone receptor gene causes hereditary hypergonadotropic ovarian failure. Cell. 1995;82: Al-Inany HG, Abou-Setta AM. Are all human-derived follicle-stimulating hormone products the same? A systematic review and metaanalysis using direct and adjusted indirect analyses, to determine whether Fostimon is more efficient than Metrodin-HP( ). Gynecol Endocrinol 2012;28(2): Asatiani K. et al. Distribution and function of FSH receptor genetic variants in normal men. Andrologia. 2002;34: Ashkenazi J. et al. The role of purified follicle stimulating hormone therapy in the male partner before intracytoplasmic sperm injection. Fertil Steril. 1999;72: Baccetti B, Strehler E, Capitani S, Collodel G, De Santo M, Moretti E, Piomboni P, Wiedeman R, Sterzik K. The effect of follicle stimulating hormone therapy on human sperm structure (Notulae seminologicae 11). Hum Reprod Sep;12(9): Bartoov B. et al. Sperm quality of subfertile males before and after treatment with human follicle-stimulating hormone. Fertil Steril. 1994;61:


1 Aprile 2021 - Infopinione\nmercoledì , 28 Luglio 2021 08:40\nHome / 2021 / Aprile / 01\nOspedale di Cetraro, Medicina diventa reparto Covid-19\n1 Aprile 2021\tCETRARO, CORONAVIRUS, IN PRIMO PIANO, INFO Commenti disabilitati su Ospedale di Cetraro, Medicina diventa reparto Covid-19\nDecisione del commissario Asp La Regina. Aumenti attuati e altri da attuare in tutta la provincia. Cennamo chiede garanzie.\nVaccini Calabria, responsabili campagna vaccinale in Commissione anti ‘ndrangheta\n1 Aprile 2021\tCORONAVIRUS, IN PRIMO PIANO, INFO Commenti disabilitati su Vaccini Calabria, responsabili campagna vaccinale in Commissione anti ‘ndrangheta\nChi sono i 68mila della categoria “Altro” che hanno ricevuto le dosi? Il presidente dell’organismo Antonio De Caprio vuole vederci chiaro.\nSan Lucido, ruolo primario dell’ente nell’efficientamento energetico\n1 Aprile 2021\tIN PRIMO PIANO, SAN LUCIDO Commenti disabilitati su San Lucido, ruolo primario dell’ente nell’efficientamento energetico\nIl comune selezionato come partner per un progetto internazionale sulla promozione di politiche energetiche sostenibili.


Né Stato, né mercato. Si chiama Terzo settore ed è quel’insieme di realtà che non esistono per fare profitto e non sono riconducibili alla pubblica amministrazione Sono le associazioni di volontariato, le cooperative sociali, e le società di mutuo soccorso, ma anche le associazioni sportive dilettantistiche, quelle di consumatori e le organizzazioni non governative (Ong). Danno lavoro a circa 800 mila persone in Italia, secondo i dati riportati dal Forum Terzo Settore e relativi al 2016, divise in più di 343 mila realtà. Non solo: all’ultimo censimento del no-profit, crescevano più delle imprese e dei servizi. Dal 1973 godevano di una tassazione agevolata – 12% invece di 24% – che ha permesso loro di fare investimenti come acquistare ambulanze, strumenti per le emergenze e pulmini per disabili.\nIl testo approvato in Senato prevede che l’articolo 6 del decreto presidenziale 601 di 45 anni fa venga cancellato. E che, in sostanza, una associazione che assiste i disabili paghi le stesse tasse di una oreficeria di lusso o una multinazionale, come scrive Gian Antonio Stella su Vita.\nMatteo Salvini ha difeso la misura dicendo che la fine del regime agevolato Ires per gli enti del terzo settore “è stata una scelta”. “Vedremo di aiutare chi effettivamente ha bisogno” ha affermato, sottolineando che nella manovra “ci sono tanti di quegli investimenti per i disabili, per la scuola, per l’università, per la ricerca, che sono assolutamente contento”.\nPer la portavoce del Forum, Claudia Fiaschi. l’emendamento approvato la notte del 23 dicembre è “particolarmente penalizzante, soprattutto in relazione al periodo transitorio in cui si attende la piena entrata in vigore della Riforma del Terzo Settore” e si aggiunge a un’altra preoccupazione: quella per la fatturazione elettronica per i soggetti con proventi superiori a 65 mila euro. L’effetto che si potrebbe generare, avverte, è che “un ente che riceve una sponsorizzazione e che fino ad oggi aveva goduto del regime forfettario, non potrà più ricevere l’importo dell’Iva e sottoporlo al regime fiscale semplificato”. Insomma, un’altra tegola fiscale che associazioni e organizzazioni si aspettavano di dover affrontare non prima della riforma.\nSulla vicenda è intervenuto anche Enrico Mentana che su Open ha lanciato un appello a cancellare subito questa norma perché “tutti sappiamo che attorno a noi c’è una rete del terzo settore che supplisce all’inadeguatezza dello Stato ad aiutare chi ha bisogno: bambini, poveri, anziani, malati, senzatetto, tossicodipendenti”.\nSempre Gian Antonio Stella fa un’altra considerazione, numeri alla mano. “Mediamente”, scrive su Vita “ognuno di quei 5,5 milioni di volontari regala a chi ne ha bisogno almeno tre ore alla settimana (almeno: in realtà sono sempre di più, senza contare le emergenze di un terremoto o un’alluvione) per un totale annuale di 858 milioni di ore di lavoro. A 10 euro l’ora, paga ridicola per tanti impagabili esempi di abnegazione, quel volontariato regala allo Stato oltre otto miliardi e mezzo di euro. Quasi settanta volte di più di quanto andrà a rosicchiare sull’Ires”.\ngoverno conteterzo settorevolontariato


FREE - WEB: Florida: Fbi ammette, fummo avvertiti ma non abbiamo agito\nFlorida: Fbi ammette, fummo avvertiti ma non abbiamo agito\nFlorida: Fbi ammette, fummo avvertiti ma non abbiamo agito.\n'Non seguito il protocollo dopo indicazioni preoccupanti su Nikolas Cruz'\nL'Fbi ammette che il protocollo non è stato seguito nella sua interezza dopo indicazioni ricevute lo scorso 5 gennaio su Nikolas Cruz, l'autore della strage nella scuola di Parkland, in Florida, che sottolineavano comportamenti preoccupanti. Lo sottolinea lo stesso Bureau federale in una nota che comprende un commento del Christopher Wray che esprime rammarico "per l'ulteriore dolore che ciò ha provocato in coloro coinvolti in questa orribile tragedia". La polizia locale era stata chiamata decine di volte tra il 2011 e il 2016 a casa di Cruz, riferisce la Cnn.\nIl governatore della Florida, Rick Scott, ha chiesto le dimissioni del direttore dell'Fbi, Christopher Wray, in seguito all'ammissione del Bureau di non aver agito dopo gli avvertimenti sul conto del killer del liceo di Parkland. L'Fbi ha riconosciuto di non aver fatto nulla quando il 5 gennaio una persona vicina all'autore della strage, Nikolas Cruz,\nla contattò per segnalare comportamenti preoccupanti.\nE' stata colpa dei "demoni". Il 19enne Nikolas Cruz, accusato della strage alla Marjory Stoneman Douglas High School di Parkland, in Florida, secondo Abc News ha detto agli investigatori che sono state voci nella sua testa, descritte come "demoni",\na dargli istruzioni su cosa fare per portare a termine il massacro.\nLa polizia rivede la cronologia della ricostruzione dell'arresto di Nikolas Cruz, l'autore della strage scolastica in Florida, riferendo che e' stato catturato dopo aver lasciato un fast food. Il giovane si e' diretto prima in una catena di piccoli ristoranti economici acquistando una bibita e poi ad un McDonald's. Quindi e' stato avvicinato da un poliziotto e arrestato\n40 minuti dopo essere uscito dal McDonald's.\nLa sparatoria nel liceo della Florida è durata per tre minuti e l'autore e' arrivato a bordo di un taxi Uber. Sono alcune delle circostanze riferite dallo sceriffo locale. Uber ha riferito che sta collaborando con gli investigatori ma non ha risposto alla domande se il tassista aveva notato un comportamento sospetto del passeggero o se stava trasportando un'arma in una grande borsa.\nCruz ha sparato in cinque classi: prima in tre aule del primo piano, tornando poi a sparare in due di queste, quindi in un'altra classe allo stesso piano. Infine è salito al secondo piano e ha sparato ad una persona che si trovava in classe. Lo ha reso noto lo sceriffo della contea locale.\nIn serata la veglia per le vittime alla quale hanno partecipato migliaia di persone.\nLe 17 vittime sono quasi tutti studenti, ma anche una professoressa e uno dei coach della squadra di football della scuola: due eroi morti per aver fatto da scudo in difesa dei ragazzi. Nikolas è stato catturato dopo circa un'ora: si era mescolato agli studenti in fuga e aveva fatto tappa anche in due fast food, l'ultimo dei quali era un McDonald's. Incriminato con 17 capi d'accusa per omicidio premeditato, è già comparso con la divisa arancione dei detenuti davanti alla corte per la condalida dell'arresto (senza cauzione) e ha gia' confessato tutto alla polizia. Rischia la pena di morte.\nEtichette: #Florida, ammette, Fbi, fummo avvertiti, non abbiamo agito


Home Giovanna Delvino\tVentisettesima edizione del Film Festival della Lessinia Giorno per Giorno\nscritto da logtogreen 20 Agosto 2021\nUna delle rassegne cinematografiche più importanti del nostro territorio ha inizio oggi, venerdì 20 Agosto 2021, a pochi minuti da Verona: il Film Festival della Lessinia apre così le porte al pubblico per la sua ventisettesima edizione. I film e i cortometraggi sono incentrati principalmente sulle tematiche ambientali e sul contatto con la natura.\nNoi di Log to Green seguiremo la gli eventi e i lungometraggi per tutta la durata della manifestazione e riporteremo quanto accade giorno per giorno in questo articolo, fino al Log to Green Movie Award, il premio che la nostra testata assegnerà al film più meritevole, che rispetterà maggiormente le tematiche ambientali ed i canoni della sostenibilità.\nSi comincia stasera con la cerimonia di apertura che si terrà all’interno del Teatro Vittoria e in diretta live Facebook sui canali social di Log to Green e del Film Festival della Lessinia. A seguire verrà proiettato il primo film in concorso, Febbraio, di Kamen Kalev,il racconto della vita del pastore bulgaro Peter sul grande schermo in anteprima Italiana esclusiva.\nQuest’anno, oltre alla tradizionale ed evocativa location di Bosco Chiesanuova, c’è un nuovo spazio dedicato alle proiezioni dei film: quello online, consultabile sul sito del Film Festival della Lessinia. Per ricevere informazioni su programmazione, accrediti, abbonamenti e biglietti basta cliccare al sito https://www.mymovies.it/ondemand/ffdl/\nPrima giornata del FfdL\nLa prima giornata si apre con la Cerimonia di Inaugurazione della ventisettesima edizione del Film Festival della Lessinia all’interno del Teatro Vittoria; il Direttore Artistico Alessandro Anderloni è salito sul palco e, come di consueto, ha ringraziato i Partner e gli Amici del Festival per il sostegno di chi c’è sempre stato e ha fatto in modo di rimanere, anche in tempi difficili.\nIn compagnia del sindaco di Bosco Chiesanuova, Claudio Melotti, sono state fatte delle approfondite riflessioni sull’importanza di essere stati sostenuti da chi ha sempre creduto nei valori della rassegna. È stato inoltre ricordato Giancarlo Corradi, presidente del festival per venticinque anni, scomparso l’anno scorso dopo aver sostenuto la manifestazione dalla sua nascita, credendo nell’idea e nei suoi collaboratori dagli esordi fino alla affermata notorietà attuale.\nHa allietato gli animi di tutto il pubblico l’intervento di Roberto Buttura, attuale presidente del festival, che si è palesato sul palco sorridente e positivo, pronto a questa edizione 2021.\nIl Direttore Artistico Alessandro Anderloni ha poi introdotto la proiezione del film “Febbraio” descrivendolo “un film legato ai suoi silenzi”. Il pubblico è rimasto affascinato dalla narrazione di un ciclo di vita che ripercorre la prima giovinezza, la crescita e la vecchiaia del protagonista, raccontando le voci della montagna e quelle della Madre Terra.\nLink della giornata\nIntervista ad Alessandro Anderloni: Scopri i segreti del Festival\nDiretta Inaugurazione: inaugurazioneffdl25\nProfilo Instagram: cliccami e sfogliami\nSeconda giornata del FfdL\nLa prima vera giornata dedicata interamente al festival!\nSi parte, anzi siamo partiti alle ore 9.00 del mattino con l’escursione “Alla scoperta della Silva Frizolana”, il viaggio tra le antiche contrade di Bosco Chiesanuova a cura dell’ Associazione Rotte Locali, accompagnati da Gianmarco Lazzarin.\nIl Teatro Vittoria ospita al mattino il film argentino “La conquista de Las Ruinas” della categoria FFDLgreen, lungometraggio che porta alla riflessione sullo sfruttamento della terra da parte dell’uomo.\nSono poi succedute le proiezioni pomeridiane: “Mia Sconosciuta” di Marco Albino Ferrari, “Le Terre Alte”, di Andrea Zambelli e Andrea Zanoli e “The Postcard” di El Moudir Asmae.\nLa serata si conclude con il concerto gypsy-jazz dei Panic Therapy – Manouche Journey, un viaggio tra le sonorità della tradizione gitana e della Francia degli anni Trenta che arriva ai nostri giorni e conserva sia la personalità delle composizioni originali sia quella delle più note influenze culturali del tempo.\nIntervista ad Eduardo Zanoli: Regista del film “Le terre alte”\nTerza giornata del FfdL\nIl buongiorno si vede dal mattino qui al Film Festival della Lessinia. Ha aperto la giornata la conferenza “Lessinia, Terra di un Festival che parla al mondo” nella Piazza del Festival organizzata dalla Nobile Compagnia della Buona Tavola: una tavola rotonda finalizzata ad analizzare quanto sia stato incrementato lo sviluppo culturale ed economico del territorio col sopraggiungere del Festival. Roberto Buttura, Vito Massalongo, Claudio Melotti e Renato Cremonesi dialogano con il Direttore Artistico Alessandro Anderloni sugli aspetti che negli anni si sono conservati e su quanto siano incredibilmente cambiate alcune dinamiche arrivati alla ventisettesima edizione della rassegna.\nIl “caffè con i registi” è il consueto appuntamento per dialogare con gli autori dei film in programmazione: gli ospiti di oggi hanno parlato della loro esperienza e dei loro lavori; in particolare Andrea Zanoli, presente al caffè, ha parlato della reazione del pubblico al suo film e ha rilasciato un’intervista speciale a noi di Log to Green per confrontarsi sugli argomenti inerenti all’ambiente e al rapporto con la natura. Il Teatro Vittoria ha proiettato al mattino i cortometraggi in concorso: “Germogli”, “Il Ragazzo dalla testa grossa, Sciamani e Samurai” e “Per il vostro bene” mentre alle ore 21.00 è la volta di “Haeberli”, “La via del Pastore”, “Cattivo Auspicio”, “Sogni al Campo” e “ Pecore, Lupo e una Tazza di Thè…” . Tutti i lavori raccontano realtà differenti: tra rapporti familiari difficili, adolescenze complicate, l’introspezione di un bambino turbato e il rapporto con la morte di un giovane che si ritrova a dire addio al proprio animale da compagnia. Toccanti, originali e mai banali, i cortometraggi in concorso hanno regalato emozioni con la capacità di sintesi e di immediatezza di un genere sempre fresco e piacevole.\nL’esibizione di “Corde e Ance di Mondrago” ha accompagnato le luci del tramonto in piazza con i brani della tradizione veronese, lasciando i fruitori del festival a bocca aperta, incuriositi e stupiti dal salto nel passato dell’ensemble folk.\nIntervista a Roberto Buttura: Presidente del Film Festival della Lessinia\nIntervista a Liliana Colombo: Icemeltland Park\nDiretta incontro Nobile Compagnia della Buona Tavola: Lessinia, Terra di un Festival che parla al mondo\nQuarta giornata del FfdL\nLa settimana si apre all’insegna del divertimento per i più piccini!\nAl mattino Lucia di Farfilò e Chiaranordlys hanno accompagnato i bambini in una magica avventura, alla scoperta degli alberi presenti nei boschi di Boscochiesanuova, pieni di nuovi doni per i più piccini grazie al passaggio della Luna Piena. Il contatto con il legno, con gli uncinetti e con gli altri strumenti naturali, ha emozionato e divertito i piccoli che hanno poi costruito delle trottole in legno utilizzando un ciondolo e una matita! Un laboratorio stimolante e innovativo che aiuta genitori e figli a tornare indietro nel tempo e a riapprezzare la genuinità dei giochi di una volta.\nAnche i cortometraggi del pomeriggio erano dedicati ai più piccini. La categoria che comprendeva un pubblico dai 3 ai 5 anni ha potuto apprezzare i lavori provenienti da Germania,Russia, Francia, Norvegia e Repubblica Ceca grazie anche al lavoro in sala dei doppiatori che hanno tradotto e interpretato le voci dei personaggi, permettendo a tutti in sala di godersi la visione. Noi di Log To Green li abbiamo intervistati in una diretta speciale, conoscendo meglio loro e la loro passione.\nIl caffè con i registi ha invece ospitato Sylvain Ferrari e Daniel Kemény; i due registi hanno fatto “viaggiare” il pubblico in Portogallo e in Calabria con le loro storie e con le loro interviste. Ha chiuso la serata la proiezione dei due cortometraggi di Takeshi Yashiro e Marianne Chaud, “Gon, the Little Fox” e “L’Aventure”.\nIntervista a Vito Massalongo: Presidente del Curatorium Cimbricum Veronense\nIntervista a Violeta Paus: Siluetas de agua\nQuinta giornata del FfdL\nNatura e magia sono state le protagoniste assolute di una giornata all’insegna di fate e spiriti del bosco! La Cooperativa La Tata ha accompagnato i bambini in una magica avventura: la riscoperta delle energie delle montagne della Lessinia! I piccoli hanno vestito le fate delle montagne con i loro disegni, i ritagli di foglie e le decorazioni che hanno preparato con Silvia e Federica, creando abiti scenografici per la vestizione della tipica Fada, il simbolo del territorio e del Film Festival. L’escursione del mattino ha invece portato grandi e piccini nel selvaggio Vajo dell’Anguilla tra i racconti di Alessandro Tenca e i profumi della natura.\nIl tradizionale appuntamento con il “Caffè coi registi” ha coinvolto in una conversazione stimolante Liliana Colombo, la regista di Icemeltland Park di cui potete trovare l’intervista qui. I cortometraggi dedicati ai bambini della categoria 6+, a cui è stato dedicato l’intero pomeriggio, ha dato la possibilità ai più piccini di votare il loro cortometraggio preferito grazie a dei dischetti raffiguranti delle stelline, necessari per poter assegnare il “premio dei bambini”.\nLe proiezioni serali ci hanno portato sulle Ande argentine, nelle campagne calabresi e tra le attività del Veneto con “Piedra sola” di Alejandro Telemaco Tarraf, “Accamòra” di Emanuela Muzzupappa e “Marana” di Giovanni Benini.\nIntervista a Raquel Castro: SOA\nSesta giornata del FfdL\nLa Lessinia continua ad affascinare tutti i fruitori del festival! Grazie all’iniziativa “Scopriamo il Bosco: Laboratorio Sensoriale nel Bosco” ci siamo immersi nel bosco tra alberi,funghi e muschi, riscoprendo i suoni della natura, i colori e i profumi delle erbe,cantando canzoni coi più piccini. Una iniziativa di “Educare nel Bosco“, la Rete Nazionale di Scuole nel Bosco, da sempre impegnata in attività per i più piccoli.\nAnche questo pomeriggio è stato dedicato ai corti per bambini! Alle 16.00 è il turno della categoria degli ffdl 9+ che hanno votato il loro prodotto audiovisivo preferito.\nAlle 18.00 l’esperimento sonoro compiuto in sala dal film “Soa” di Raquel Castro ha affascinato tutti direttamente dal Portogallo; alle ore 21\n“Fire in the mountains” di Ajitpal Singh, girato in India, ha riempito la sala e emozionato il pubblico che, una volta finita la proiezione, ha potuto apprezzare le musicalità del concerto nella Piazza del Festival di Anna Bassy, cantautrice italo-nigeriano, con la band formata da Pietro Girardi, Andrea Montagner e Pietro Pizzoli.\nIntervista a: Guillermo Quintero, regista e membro della giuria internazionale\nIntervista alla casa di produzione Ezme: Marana\nSettima giornata del FfdL\nUna nuova giornata del Film Festival della Lessinia ha aperto le porte alle attività per adulti e bambini! L’escursione nelle vallate di Cerro Veronese è stata un vero e proprio viaggio nel tempo alla riscoperta del modo in cui l’uomo del Paleolitico viveva la Lessinia; Lorenzo Carra ha guidato i fruitori del festival tra gli affascinanti luoghi abitati dalla preistoria. E per i più piccini invece? Torna l’appuntamento con la lana di pecora Brogna! Grazie a dei piccoli telai a cornice i bambini hanno scoperto che la lana si può lavorare in molti modi, imparando a tessere con Elisabetta Casella Creazioni.\nIl regista Giovanni Benini ha poi condotto il momento speciale del “Caffè con i registi” in compagnia di Raquel Castro, la regista di “Soa”, che abbiamo intervistato per parlare del suo lavoro, classificato nella categoria FFDL Green.\nNel pomeriggio è stato allestito il Piccolo Mercato Contadino a cura del GAS Lessinia con i produttori agricoli coinvolti nella Osteria del Festival. È stato impossibile non apprezzare i prodotti tipici del luogo e non comprarne in grandi quantità!\nNel pomeriggio la proiezione del film “Now” ha lasciato tutti senza parole, poichè gli spettatori hanno assistito al racconto delle manifestazioni e degli scioperi di chi combatte per sensibilizzare i politici e il resto della popolazione sulla preoccupante questione climatica. Dopo i corti “L’anno dei sette inverni” e “Movida”, è stata la volta dell’appuntamento serale con il film “Tra fuoco e acqua” apprezzato da tutto il pubblico.\nUna giornata ricca di appuntamenti e proiezioni si è dunque conclusa qui al Film Festival della Lessinia tra le risate e i commenti dei fruitori della rassegna, tutti radunati nella Piazza del Festival per parlare di film e di green!\nIntervista a: Lionel Roux regista di “Les bergers du futur”\nIntervista a: Leonardo Panizza di Primascesa – la montagna creata dall’uomo\nIntervista alle responsabili dell’osteria del festival: Lucia Gaspari e Barbara Crea\nOttava giornata del FfdL\nLa storia de “La principessa sul pisello” ha aperto una giornata ricca di novità al Film Festival della Lessinia. I bambini sono partiti dalla fiaba e si sono dedicati alla costruzione di corone regali fatte da rametti e colori, creati grazie all’aiuto di Francesca Corso. I racconti magici sono stati i protagonisti anche dei corti del film festival: “Kalsubai“ racconta della dea della montagna di Maharashtra che simboleggia un femminile libero dalla società patriarcale, mentre “Il monte interiore“, “Angh” e “Binh” si concentrano sullo scambio di forze energetiche, tra antichi riti e contatti col soprannaturale. Le anteprime italiane “Terremoto” e “Anima Antica” hanno regalato scenari spettacolari direttamente dall’India e dalla Spagna.\nIl concerto del gruppo “Ménego Maìstro” ha allietato la Piazza del Festival con un repertorio ricco di brani di cantautori italiani. Una giornata all’insegna della magia per la penultima sera della ventisettesima edizione del Film Festival della Lessinia!\nNona giornata del FfdL\nUltima giornata di Festival! Si è conclusa ieri la manifestazione del Film Festival della Lessinia con la cerimonia di premiazione che ha portato sul palco i registi: alcuni si sono commossi,altri hanno sorriso e applaudito i loro colleghi, complimentandosi tra loro.\nTra i tanti riconoscimenti, il “Premio Log to Green movie Award ” è stato vinto da “Primascesa – la montagna creata dall’uomo“. Abbiamo intervistato il regista e ci siamo molto divertiti con lui! Potete inoltre trovare tutti i premiati qui.\nOggi ci saranno tutte le proiezioni dei premiati per tutti quelli che si sono persi i film vincitori o che vogliono rivedere i loro lungometraggi e cortometraggi preferiti!\nAnche quest’anno è stata un’edizione ricca di appuntamenti, eventi e proiezioni. La magia del Festival è da sempre emozionante ed intensa, tanto da portarci ad attendere già il prossimo anno con trepidazione!\nAl prossimo Film Festival della Lessinia da tutto lo staff di Log to Green!\nVentisettesima edizione del Film Festival della Lessinia Giorno per Giorno was last modified: settembre 7th, 2021 by logtogreen