Identification of a Murine Erythroblast Subpopulation Enriched in Enucleating Events by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry | Protocol (Translated to Spanish)\nEl presente protocolo describe un nuevo método de identificación de una población de enucleación eritroblastos ortocromáticas por el flujo de imágenes multiespectrales citometría, proporcionando una visualización del proceso de enucleación eritroblastos.\nLa eritropoyesis en los mamíferos concluye con el dramático proceso de enucleación que resulta en la formación de reticulocitos. El mecanismo de la enucleación aún no ha sido aclarada completamente. Un problema común encontrado al estudiar la localización de las proteínas y estructuras clave dentro de eritroblastos enucleación por microscopía es la dificultad de observar un número suficiente de células sometidas a enucleación. Hemos desarrollado un protocolo de análisis novela utilizando imágenes de multiparamétrico de alta velocidad en la célula de flujo (multi-espectral de imágenes Citometría de Flujo), un método que combina la microscopía de inmunofluorescencia con citometría de flujo, con el fin de identificar de manera eficiente un número significativo de eventos enucleación, que permite obtener mediciones y realizar el análisis estadístico.\nEn primer lugar, describimos aquí dos métodos de cultivo in vitro en la eritropoyesis utilizados con el fin de sincronizar los eritroblastos murinos y aumentar la probabilidad de capturar la enucleación en el thtiempo e de evaluación. A continuación, se describe en detalle la tinción de eritroblastos después de la fijación y permeabilización con el fin de estudiar la localización de las proteínas intracelulares o balsas de lípidos durante la enucleación por citometría de flujo de imágenes multiespectrales. Junto con el tamaño y la tinción DNA/Ter119 que se utilizan para identificar los eritroblastos ortocromáticas, utilizamos los parámetros "relación de aspecto" de una célula en el canal de campo brillante que ayuda en el reconocimiento de las células alargadas y "centroide Delta XY Ter119/Draq5 "que permite la identificación de los procesos celulares en los que el centro de la tinción Ter119 (reticulocitos naciente) está lejos del centro de la tinción DRAQ5 (núcleo de someterse a extrusión), lo que indica una celda sobre enuclear. El subconjunto de la población de eritroblastos ortocromática con alta centroide delta y baja relación de aspecto es altamente enriquecido en células enucleación.\nLa diferenciación terminal dentro del linaje eritroide en mamíferos concluye con el dramático proceso de enucleación, a través del cual el eritroblasto ortocromática expulsa su núcleo membrana revestida (pyrenocyte) 1, lo que genera un reticulocitos 2. El mecanismo exacto de este proceso, que es también la etapa limitante de la velocidad de éxito, a gran escala, la producción de células rojas de la sangre in vitro, aún no se ha aclarado completamente. La localización de las proteínas y estructuras clave dentro de eritroblastos enucleación se basa en el uso de microscopía de fluorescencia y electrónica de 3-5. Este proceso tedioso típicamente resulta en la identificación de un número limitado de eventos enucleación y no siempre permite un análisis estadístico significativo. Ampliando un método de identificación eritroblasto descrito previamente por McGrath et al. 6, hemos desarrollado un nuevo método de identificación y estudio de eventos enucleación Multi-espectral Imaging Citometría de Flujo (multiparamétrico de imágenes de células de alta velocidad en el flujo, un método que combina la microscopía fluorescente con citometría de flujo) 7, que puede proporcionar un número suficiente de observaciones para obtener mediciones y realizar análisis estadísticos.\nAquí, se describe primero dos métodos de cultivo in vitro en la eritropoyesis utilizados con el fin de sincronizar los eritroblastos y aumentar la probabilidad de capturar la enucleación en el momento de la evaluación. A continuación se describe en detalle la tinción de eritroblastos después de la fijación y permeabilización con el fin de estudiar la localización de las proteínas intracelulares o balsas de lípidos durante la enucleación por citometría de flujo de imágenes multiespectrales.\nLas muestras se ejecutan en un flujo de imágenes citómetro y las células recogidas se gated apropiada para identificar eritroblastos ortocromáticas 6. Eritroblastos ortocromáticas Después se analizan en función de su relación de aspecto, según se mide en campo claro imaging, frente a su valor para el centroide parámetro Delta XY Ter119-ADN, que se define como la distancia entre los centros de las zonas manchadas de Ter119 y ADN, respectivamente. La población de células con una relación de aspecto de baja y alta centroide delta XY Ter119/DNA es altamente enriquecido en enucleación células. El uso de tipo salvaje (WT) eritroblastos frente eritroblastos con Mx-Cre mediada eliminación condicional de Rac1 en Rac2 - / - o combinado Rac2 - / -; Rac3 - / - de fondo genético y de este protocolo de análisis de la novela de flujo de imágenes multiespectrales citometría, hemos demostrado que la enucleación se asemeja a la citocinesis asimétrica y que la formación de un anillo de actomiosina regulada en parte por Rac GTPasas es importante para la progresión de la enucleación 7.\n1. A largo plazo in vitro eritropoyesis Cultura (Ex vivo Eritroides Protocolo Cultura Diferenciación Giarratana et al. 8, Modificado y Adaptado por células de ratón)\nSe trata de un largo plazo de 3 pasos en el protocolo de la eritropoyesis vitro. En el primer paso (días 0-4) 2 x 10 5 células / ml se colocan en medio de crecimiento suplementado con eritroblastos de factor de células madre (SCF), interleuquina-3 (IL-3), y la eritropoyetina (EPO). En el segundo paso (días 5-6), las células se resuspendieron a 2 x 10 5 células / ml y se co-cultivaron en células de estroma adherentes (MS5) en medio de crecimiento eritroblastos fresco suplementado sólo con EPO. En la tercera etapa (días 7-9), las células se cultivan en una capa de MS-5 células en medio de crecimiento fresco eritroblastos sin citoquinas hasta la enucleación (Figura 1A).\nTodos los animales protocolos fueron aprobados por el Cuidado de Animales y el empleo Comisión Institucional (IACUC) deCentro Médico del Hospital Infantil de Cincinnati.\nCosecha de huesos y aislamiento de células de médula ósea de baja densidad\nAñadir 2 ml de IMDM estéril que contiene suero bovino fetal al 2% (FBS) en un tubo cónico de 15 ml y mantener en hielo.\nLa eutanasia a un 2-6 meses de edad de tipo salvaje del ratón C57/BL6 (junto con o sin ratón genéticamente orientada de interés) siguiendo el protocolo institución aprobada (por ejemplo, inhalación de CO2, seguido por dislocación cervical).\nAislar los huesos de la pelvis, fémures y tibias de ambas piernas con unas pinzas y bisturí, añadirlos al tubo que contenía IMDM 2% de SFB y mantener en hielo.\nAñadir 1 ml de IMDM 2% de FBS en un tubo de citometría de flujo estéril y los huesos ras utilizando fórceps y una jeringa de tuberculina con una 25-G x 5/8 "de la aguja. IMDM al ras 2% de FBS a través de los huesos de un par de veces suavemente ( mediante la aspiración de ~ 500 l de la suspensión celular y el lavado de nuevo a través del hueso), y recoger las células de médula ósea en el flujo-cytometrtubo en Y. Flushing es completa cuando los huesos aparecen blancos.\nFiltrar suspensión de células a través de un 40-m conjunto de filtro de células en la parte superior de un tubo cónico de 50 ml. Lavar filtro de células con IMDM 2% de FBS y utilizando el mismo medio Ajustar el volumen final de la suspensión celular a 5 ml.\nPreparar las células de médula ósea de baja densidad (LDBM) por centrifugación en gradiente de densidad: la capa cuidadosamente los 5 ml de suspensión de células en 5 ml de separación de células en gradiente de densidad medio de 1.083 g / ml en un tubo de 15 ml y centrifugar a 750 xg durante 25 min a temperatura ambiente (TA) sin freno / aceleración baja.\nTransferir el sobrenadante (todo en manos de la marca de 2 ml del tubo de 15 ml con el fin de adquirir la capa leucocitaria) a un nuevo tubo de 15 ml y llevar a cabo un lavado más con IMDM 2% FBS a 525 xg durante 5 minutos a RT.\nAspirar el sobrenadante y lisar las células rojas de la sangre (RBC) restantes suspendiendo el sedimento en 3 ml de tampón de lisis de glóbulos rojos durante 5 min a TA. Si una mayor pureza de eritroblastos esrequerido en el paso final (por ejemplo, para estudios bioquímicos), purificar células LDBM más a fondo en este paso para neg células Lin por separación magnética.\nEx vivo eritroide protocolo de cultivo de diferenciación a partir de LDBM o neg células Lin (Figura 1A)\nAñadir 7 ml de IMDM 2% de FBS, centrifugado a 525 xg durante 5 min a TA y resuspender las células sedimentadas en 2 ml de medio de crecimiento eritroblastos (EGM), que consiste en:\nuna. Medio StemPro-34, que contiene\nb. 2,6% StemPro-34 suplemento medio,\nd. Sulfato ferroso 900 ng / ml,\ne. 90 nitrato férrico ng / ml,\ng. 10 -6 M hidrocortisona\nh. y citoquinas recién añadido:\ni) 100 ng / ml de SCF,\nii) 5 ng / ml de IL-3, y\nContar las células utilizando un contador de células automatizado o manual en el microscopio utilizando un dobladilloocytometer.\nPlaca en una placa de cultivo celular de 6 pocillos a una concentración de 5 x 10 5 células / pocillo a un volumen final de 2,5 ml en EGM (2 x 10 5 LDBM células / ml) y se incuba a 37 ° C (esto se considera como el día # 0 de la cultura).\nCambio de medio por aspiración de 1,5 ml del sobrenadante, que gira a 525 xg durante 5 min a TA, la resuspensión en 1,5 ml de medio fresco que contiene todas las 3 citoquinas y la adición de nuevo a los pocillos cada día en día # 2, 3, 4, para optimizar fase proliferativa. El día 3, eliminar todas las células, contar y dividir en un número apropiado de pozos a fin de mantener las concentraciones de células y de ~ 2 x 10 5 células / ml. Mantener cultivo a 37 ° C / 5% de CO 2.\nEl día 4, las células de la placa MS5 (línea celular estromal murina) en los pocillos de una celda de cultivo en placa de 6 pocillos nueva. El medio de cultivo celular MS5 se α-MEM que contiene 20% de FBS, 100 unidades / ml de penicilina / estreptomicina, y 2 mM de L-glutamina.\nEl día 5, contar el número decélulas (ahora enriquecido significativamente en eritroblastos) en cada pocillo de la placa de cultivo original utilizando un contador de células automatizado o manualmente en un microscopio utilizando un hemocitómetro.\nLevantar todas las células de cada pocillo y transferir a tubos cónicos de 15 ml, centrifugar a 525 xg durante 5 min a TA, se aspira el sobrenadante y disolver gránulos con EGM fresco que contiene sólo la Epo (3 UI / ml) a una concentración de 2 x 10 5 células / ml.\nAspirar el sobrenadante de los pocillos en los que MS-5 células se sembraron el día anterior (orientada al 70-80% de confluencia en el momento de co-cultivo) y se añaden a las células eritroides en estos pozos en EGM contiene sólo Epo (aunque no es su medio de elección, MS-5 células sobreviven bien en EGM durante varios días).\nCambie medio adición fresca EPO en el día # 6.\nCambie medio en el día n º 7, usando EGM sin citoquinas añadidas. En los días 7 al 9 de muestras para descartar la enucleación con citometría de flujo después de la tinción con anti-Ter119 y Syto-16 todos los días y proceed de la tinción de muestras para múltiples imágenes espectrales Citometría de Flujo (como se detalla en la sección 3).\nNota:. Antes de chapado y en el día 2, 4, 6, y 7 de cultivo, las células cultivadas para controlar el enriquecimiento de los eritroblastos y la diferenciación con citometría de flujo mediante la evaluación de los marcadores de superficie CD44 y Ter119 vs tamaño (FSC) 9 Alternativamente CD71, Ter119, y FSC también se puede utilizar 10, 11.\n2. Ensayo Enucleación rápida, De acuerdo con el protocolo descrito por Yoshida et al. 12 con modificaciones (Figura 1B)\nEl estrés de la inducción de la eritropoyesis y estroma preparación de células para el cultivo in vitro de la eritropoyesis\nAnestesiar a un 2-6 meses de edad de tipo salvaje C57/BL6 ratón por directrices IACUC (por ejemplo, con una solución de isoflurano). Asegúrese de que el ratón ha sido anestesiado adecuadamente mediante la comprobación de la ausencia de respuestas reflejas a un suave pellizco pata trasera y pararespiración regular durante el procedimiento. Utilice veterinario pomada oftálmica en los ojos para evitar la sequedad, mientras que bajo anestesia.\nInducir la eritropoyesis estrés a través de la cola sangrado hasta un volumen final de 500 l. Usando una jeringa de insulina, inyecte un volumen igual de solución salina normal por vía intraperitoneal para asegurar la reposición de líquidos del animal (mantenga animales en posición de Trendelenburg antes de inyectar e inyectar en la parte inferior del abdomen, para no dañar los órganos internos).\nNo deje el ratón sin atención hasta que se haya recuperado el control del motor, como se indica por el animal comienza a moverse alrededor de la jaula y ser capaz de ponerse de pie y caminar sin caerse. El ratón Phlebotomized se coloca en una jaula sin otros ratones.\nDespués de 2 días, placa MS-5 células en pocillos de una placa de cultivo celular de 24 pocillos. Incubar MS-5 células a 37 ° C / 5% de CO2 en medio celular MS5 (a-MEM que contiene 20% de SFB, 100 unidades / ml de penicilina / estreptomicina y 2 mM L-glutamina) con el objetivo de ser 70-80 % confluentes ipozos n de la placa después de 48 hr.\nCosecha del bazo y el procesamiento de los esplenocitos\nCuatro días (96 horas) después de la inducción de la eritropoyesis estrés, practicar la eutanasia previamente purgado del ratón a través del protocolo aprobado por el IACUC (por ejemplo, inhalación de CO 2 seguido por dislocación cervical).\nBazo Harvest y lo puso en un tubo cónico de 15 ml que contenía IMDM FBS al 2% y mantener en hielo.\nDe vuelta en el laboratorio, en la campana de cultivo de tejidos en condiciones estériles, invierta el tubo que contiene el bazo-en un filtro de células de 40 m situada en la parte superior de un tubo de 50 ml. Crush bazo utilizando el émbolo de una jeringa de plástico de 5 ml.\nLavar filtro de células con IMDM 2% de FBS y utilizando el mismo medio, ajustar el volumen final de la suspensión celular a 5 ml.\nCapa cuidadosamente la suspensión de esplenocitos 5 ml en 5 ml de densidad de separación celular gradiente medio de 1.083 g / ml en un tubo de 15 ml y centrifugar a 750 xg durante 25 min a temperatura ambiente sin freno / bajo aceleración.\nTransferenciasobrenadante (solución hasta aproximadamente la marca de 2 ml del tubo de 15 ml con el fin de adquirir la capa leucocitaria) a un nuevo tubo de 15 ml y llevar a cabo un lavado más con IMDM 2% de SFB a 525 xg durante 5 min a TA .\nAspirar el sobrenadante y lisar las células rojas de la sangre mediante la suspensión el sedimento en 3 ml de tampón de lisis de glóbulos rojos durante 5 min a TA.\nAñadir 7 ml de IMDM 2% de FBS para lavar las células y para diluir y neutralizar el tampón de lisis de RBC y centrifugado a 525 xg durante 5 min a 4 ° C.\nAspirar el sobrenadante y suspender las células peletizadas en 2 ml de medio de crecimiento eritroblastos (EGM).\nCultura de los esplenocitos aislados de baja densidad, enriquecidas en eritroblastos, en plástico (primera etapa de la cultura de la eritropoyesis rápido in vitro)\nContar las células en un contador de células automatizado o manualmente por un hemocitómetro. Número habitual de células aisladas por el bazo en esta etapa es de ~ 15 x 10 6.\nSuspender las células más en EGM contienen las citocinas (a fconcentraciones de nal): SCF 50 ng / ml, IL-3 5 ng / ml, y la OEP 2 U / ml.\nPlate 1-5 x 10 6 células en un volumen final de 1 ml / pocillo (mismo número de células por pozo, dependiendo del número total de células) de una placa de cultivo celular de 24 pocillos y se incuban O / N a 37 ° C / 5% de CO 2.\nCultura de eritroblastos en las células MS5 (segunda etapa de la cultura de la eritropoyesis rápido in vitro\nAspirar el sobrenadante de la plástico bien y levantar las células (altamente enriquecidas en eritroblastos) mediante la adición de 2 ml de frío de EDTA 10 mM en PBS durante 5 min, en hielo a cada pocillo.\nPoner las células en tubos frescos, lavar una vez en EGM (sin citoquinas) y volver a suspender en el mismo.\nPlate 5 x 10 5 -1 x 10 6 células en un volumen de 1-2 ml a cada MS5 celular recubierto pocillo de una placa de 24 pocillos. Si inhibidores farmacológicos están siendo utilizados en el experimento, añadirlos a concentraciones apropiadas ahora.\nIncubar durante 6 a 8 horas (tiempo guiado porobservación microscópica de aproximadamente 30% -40% enucleación en el peso de la muestra no tratada). La unión de los eritroblastos de MS-5 células acelera su enucleación.\nLevante las células de cada pocillo mediante la adición de 2 ml de EDTA frío PBS + 10 mM, durante 5 minutos, en hielo. Junto con los eritroblastos, también se recogerán MS-5 células, pero estos más tarde se pueden excluir fácilmente durante el análisis de citometría de flujo como FSC hi Ter119 - células.\nEn esta etapa, las células se pueden fijaron y se tiñeron para el análisis en un Multi-espectral de imágenes citometría de flujo.\n3. La tinción de Eritroblastos para la localización intracelular de proteínas o lípidos balsas Durante enucleación por multiespectral de imágenes de Citometría de Flujo\nLavar las células en PBS, girar 525 xg durante 5 min a TA y se aspira el sobrenadante.\nFijar las células resuspendiendo los sedimentos celulares en 500 l de 3,7% de formaldehído en PBS durante 15 min (tiempo de fijación puede variar dependiendo de la lucha contrase sondeó generación) y pipeteando con suavidad.\nTransferencia a tubos de centrífuga de plástico de 1,5 ml y se incuba durante 15 min a TA.\nCentrifugado en un banco de microcentrífuga 2000 xg durante 20 seg, se aspira el sobrenadante y llevar a cabo un lavado mediante la adición de 500 l de PBS a cada tubo y pipeteado suavemente.\nHaga girar en un banco de microcentrífuga 2000 xg durante 20 segundos, se aspira el sobrenadante y mantener los tubos en hielo durante al menos 15 min. Permeabilización los pasos 3.6 a 3.9 se debe hacer de manera rápida y eficiente, y siguiendo spinning / aspiración a temperatura ambiente, los sedimentos celulares inmediatamente debe ser puesto de nuevo en hielo, para que las células conserven mejor su integridad.\nTomar soluciones de acetona a partir de -20 ° C congelador y poner en hielo. Permeabilizar las células mediante resuspensión sedimentos celulares por primera vez en 500 l helado 50% de acetona (1:1 con dH 2 O) y pipeta suavemente.\nGiro en el banco de microcentrífuga 2000 xg durante 20 seg, el sobrenadante aspirado y teléfonos resuspender pellets en 500 l60; helado acetona al 100% con la pipeta suavemente.\nGiro en el banco de microcentrífuga 2000 xg durante 20 seg, el sobrenadante aspirado y teléfonos resuspender gránulos una vez más en 500 l helado acetona al 50% con la pipeta suavemente.\nGiro en el banco de microcentrífuga 2000 xg durante 20 segundos, se aspira el sobrenadante y lavar las células una vez en tampón FACS frío (PBS + BSA al 0,5%) con la pipeta suavemente.\nPreparar cóctel de marcaje con anticuerpos o marcadores para las moléculas de interés: 0,1 U/100 l AF488-faloidina para la tinción de actina F y 1 μl/100 l Ter119-PECy7 para la tinción de células eritroides. Tinción alternativa o adicional también se puede hacer uso de AF-488-anti-β-tubulina de anticuerpos (1:50), AF-594-conjugado toxina del cólera subunidad B para etiquetar las balsas de lípidos (1:200), anti-pMRLC (Ser19) anticuerpo primario durante la miosina fosforilada cadena ligera reguladora (01:50), seguido de conejo anti-AF-488-conjugado secundaria de anticuerpos (1:400) y anti-γ-tubulin anticuerpo primario de conejo (1:100) seguido por anti-conejo anticuerpo secundario AF-555-conjugado (1:300).\nDespués de la aspiración sobrenadante, resuspender los sedimentos celulares en 100 l de cóctel de marcador, pipeta suavemente y se incuba durante 30 min a TA.\nPreparar tampón FACS que contiene 2,5 M de DRAQ5 la tinción nuclear.\nLavar las células en tampón FACS, girar hacia abajo en el banco de microcentrífuga 2000 xg durante 20 segundos, se aspira el sobrenadante y resuspender en 60 l de tampón FACS que contiene DRAQ5.\nCorra las muestras en el citómetro de flujo de imágenes para recoger al menos 10.000 eventos por cada experimento, compensar a los archivos de datos brutos según lo publicado previamente 13, y analizar los resultados, como se muestra en la figura 2, utilizando el software de análisis específico de la proyección de imagen citómetro de flujo.\nEn primer lugar, las células se analizaron sobre la base de su relación de aspecto de campo claro (la relación de la longitud de su menor en comparación con su eje mayor) y su área de campo claro (indicativo de su tamaño). Los eventos con un valor de campo claro de la zona inferior a 20 y superior a 200 son en su mayoría de los desechos celulares y agregados, respectivamente, y se excluyeron del análisis (Figura 2A). Las células individuales (gate "R1") son luego analizadas en función de su valor para el parámetro Gradient RMS, lo que indica la nitidez de la imagen. Gate "R2" se crea con las células que contienen el valor RMS de degradado más de los 50 º percentil en el fin de seleccionar las imágenes tomadas con mucha atención (Figura 2B). Después las células se gated sobre la base de su tamaño, medido por su área de campo claro, y su positividad para el Ter119 marcador de eritroide como se mide por el parámetro mancha-Media de pixel Ter119 fluorescente (puerta "Ter119 positivo", Figura 2C). Las células muy bajas o muy altas para Ter119, son o no eritroides o agregados de células que quedan, respectivamente, y se excluyeron del análisis. En el siguiente paso, se seleccionan las células en base a su DRAQ5 Relación de Aspecto Intensidad (la relación del menor frente a la intensidad eje mayor de su núcleo) y la intensidad de DRAQ5 (Figura 2D). DRAQ5 células negativas (células mayoría enucleados, como reticulocitos y glóbulos rojos) y células con una baja relación de aspecto DRAQ5 (en su mayoría dobletes) están excluidos del análisis. DRAQ5 células positivas (puerta "de ADN positivo", la mayoría de los eritroblastos en este punto) se analizan a continuación en base a su Zona Ter119, que indica el tamaño de la célula, y su Ter119 Media de pixel / área (densidad de expresión Ter119), que indica la brillo de tinción Ter119. Eritroblastos ortocromáticas (gate "OrthoE") son reconocidos como células pequeñas, Ter119 hi (Figura 2E). Por último, una subpoblación de la orthochroMatic eritroblastos altamente enriquecido en enucleación células se caracteriza por una baja relación de aspecto de campo claro, que es una medida de la elongación celular, calculada por la relación de eje / eje mayor de menor importancia de la imagen de la célula en el canal de campo claro M01, y por la alta Delta centroide XY Ter119 / DRAQ5, que se define por la distancia entre el centro de la incipiente Ter119 +-reticulocitos y el centro de la DRAQ5 +-núcleo (GATE "células enucleación" en la Figura 2F).\nJunto con anticuerpo contra Ter119 y la DRAQ5 ADN-tinción, las células también se han teñido para la actina filamentosa (F-actina) con faloidina fluorescente para evaluar la localización de F-actina durante la enucleación eritroblastos 7. Es de destacar que una progresión de la enucleación puede ser visualizado en las células fijas, como las células con una relación de aspecto decreciente (es decir, cada vez más alargada) y se observó el aumento de centroide delta XY Ter119/Draq5 (Fig.Ure 3). Se observa la F-actina para concentrarse en el surco de segmentación durante la enucleación y luego disipar una vez que se extruye el núcleo. Por otra parte, la co-localización de la actina y la miosina en el surco de segmentación entre reticulocitos incipiente y el núcleo se puede demostrar por el flujo de imágenes multiespectrales citometría después de la co-tinción de eritroblastos WT para pMRLC (miosina fosforilada de la cadena ligera reguladora) y F-actina 7.\nOtras proteínas y estructuras de interés también pueden ser teñidas con anticuerpos apropiados o marcadores fluorescentes para permitir los estudios de imagen de su papel durante la enucleación. La formación de microtúbulos polarizada es visible en eritroblastos ortocromáticas WT antes de la enucleación, pero no en los eritroblastos tratados con colchicina (Figura 4). La inhibición de la polimerización de tubulina por colchicina disminuye la polarización celular, como se demuestra mediante la medición de la centroide parámetro Delta XY BF/Draq5 entre el CENter del cuerpo celular visto en el canal claro y el centro de la tinción nuclear alcanzado con DRAQ5 (Figura 4B).\nUtilizando WT o Rac-deficiente (después de la manipulación genética o farmacológica) eritroblastos en el flujo de imágenes multiespectrales citometría de estudios de imagen permitieron que demuestran el papel de Rac GTPasas en la enucleación. Rac GTPasas regulan al menos en parte la formación de un anillo de actomiosina, así como la confluencia de las balsas lipídicas en el surco entre reticulocitos incipiente y pyrenocyte 7.\nFigura 1. Demostración esquemática de los protocolos de la eritropoyesis in vitro utilizados para producir eritroblastos enucleación para los estudios. A. a largo plazo en la cultura de la eritropoyesis vitro iniciated de LDBM o Lin -.. células B. ensayo enucleación Fast iniciado por esplenocitos altamente enriquecidas en eritroblastos después de la inducción de la eritropoyesis estrés in vivo mediante flebotomía Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 2. Análisis de los datos utilizando el software de análisis específica para el flujo de imágenes citómetro. Gating sucesiva de las poblaciones de interés se muestra en los paneles de AF. El número entre paréntesis indica el porcentaje aproximado de la población de padres correspondiente, en este experimento. A. compuerta inicial de la población R1 elimina los agregados de célulasy restos celulares. B. Puerta de R2 desde R1 incluye las células que han sido fotografiados claramente, con exclusión de células de enfoque. células Ter119-positivos C. (de R2) se seleccionan, con exclusión de células que son ya sea negativo para Ter119 o están demasiado intensamente manchada debido a su presencia en los agregados. se seleccionan las células de ADN positivas D. (fuera de las células Ter119-positivos), después de trazar para Intensidad Relación de aspecto frente a la intensidad de la tinción nuclear (aquí DRAQ5 leído en el canal 5). E. células con el ADN y Ter119-positivas tienen puertas en basófilos, policromatófilo y eritroblastos ortocromáticas función de su ubicación en el Ter119 Mean pixel frente Ter119 Área (aquí leen en el canal 3), como se muestra anteriormente por McGrath et al 5. F. Las células enucleación son aquellas células de los eritroblastos ortocromáticas, que tienen relación de aspecto baja (una medida de la célula alargadaiones en campo claro (BF) de canal) y de alta Delta Centroid XY Ter119/Draq5 (distancia entre el centro de formación de Ter119 +-reticulocitos y el centro del núcleo). Esta investigación fue publicada originalmente en la sangre: Konstantinidis DG, Pushkaran S, et al Señalización y requisitos del citoesqueleto en la enucleación eritroblasto Sangre... 2012,. 119 (25) :6118-6127 por la Sociedad Americana de Hematología Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 3. Imágenes representativas de enucleación eritroblastos con aumento progresivo Delta Centroid XY Ter119/Draq5. WT ratón eritroblastos ortocromáticas, manchados con Ter119-PECy7, phalloidin-AF488, y Draq5, están cerrada por su relación de aspecto y delta centroide XY Ter119/Draq5. Las células se muestran fijo en diferentes etapas sucesivas, de la enucleación, con una progresión que corresponde a la disminución de la relación de aspecto y el aumento de centroide Delta XY Ter119/Draq5 (verde-cruz dentro de la puerta amarilla muestra la posición de la celda reflejado a la derecha). En las imágenes de celda de arriba a abajo, F-actina se puede observar durante la enucleación de concentrarse en el surco de segmentación y luego disiparse una vez que se extruye el núcleo (como se muestra en la celda # 4782 en la imagen inferior). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta cifra.\nFigura 4. Formación de un ensamblaje de los microtúbulos unipolar y la polarización de orthochromaeritroblastos tic precede a la enucleación. A. Polarized la formación de microtúbulos es visible en eritroblastos de control WT (teñidas con anti-b-tubulina-AlexaFluor-488 y la DRAQ5 tinción nuclear), mientras que b-tubulina se tiñe difusamente en los eritroblastos incubadas con colchicina (5 M) durante 6 horas en el ensayo in vitro de la enucleación rápido en. B. multi-espectral citometría de flujo de imágenes puede ofrecer una evaluación cuantitativa de la polarización celular mediante el análisis de la distribución del parámetro de Delta centroide XY BF/Draq5, que mide la distancia entre el centro del cuerpo de la célula como se ve en campo brillante y el centro de la tinción nuclear alcanzado con DRAQ5 (representación esquemática en el recuadro). Los valores delta centroide BF/Draq5 de eritroblastos ortocromáticas WT tratados con colchicina son estadísticamente significativamente diferente que el control de los valores de Delta centroide BF/Draq5 (p <0,001). Esta investigación fue publicada originalmente en Blood:.. Konstantinidis DG, Pushkaran S, et al Señalización y requisitos del citoesqueleto en la enucleación eritroblasto Sangre. 2012,. 119 (25) :6118-6127 por la Sociedad Americana de Hematología Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nEn los últimos años el estudio de la enucleación eritroblastos ha adquirido cada vez mayor impulso, ya que es el paso en cultivos in vitro de la eritropoyesis en que es más difícil de reproducir de manera eficiente con el fin de lograr éxito, la producción a gran escala de células rojas de la sangre ex vivo. Hasta hace poco, el estudio de la enucleación eritroblasto utilizó la microscopía de fluorescencia, principalmente y citometría de flujo métodos. Métodos de microscopía de fluorescencia, aunque útil en la identificación de moléculas que participan, requieren días de observación microscópica para identificar un pequeño número de eritroblastos ortocromáticas sometidos a enucleación dentro de cientos de células fijadas en un punto particular en el tiempo. Citometría de métodos de flujo, por otro lado, son muy útiles en la evaluación de la tasa de enucleación en una cultura, así como los efectos de la manipulación farmacológica o genética de moléculas particulares en este proceso, pero no proporcionan ningún dato sobre la intracellulAR localización de estas moléculas.\nFlujo de imágenes multiespectrales combina citometría de los beneficios de la citometría de flujo y microscopía de inmunofluorescencia, ya que permite la adquisición rápida de ambos de citometría de flujo y los datos morfológicos en varios miles de células. Esta es una ventaja significativa frente de flujo clásico de citometría en los estudios de la eritropoyesis, ya que las diferentes etapas de la diferenciación de eritroblastos (proeritroblastos, basófilo, policromatófilo, y ortocromática) han sido definidos utilizando criterios morfológicos 6. Sin embargo, multiespectral citometría de flujo de formación de imágenes es óptima para la visualización de las estructuras celulares en lugar de comparaciones cuantificación relativa en las cifras de población. Para tales comparaciones, rutina de citometría de flujo que no requiere el paso necesario para la permeabilización de inmunofluorescencia de las estructuras intracelulares se comporta mejor. Por ejemplo el porcentaje relativo de BasoE: PolyE: OrthoE en la Figura 2E\nLos datos de imágenes pueden ser procesados en asociación con la citometría de flujo de datos utilizando el software de análisis específica para el flujo de imágenes citómetro, permitiendo la recogida de células con ciertas características morfológicas dentro de puertas. Aproximadamente un centenar de células enucleación pueden ser identificados dentro de una población de 10.000 eritroblastos con el método de análisis descrito anteriormente de una manera rápida y eficiente 7, lo que permite observaciones más significativos y la evaluación estadística.\nPor otra parte, el procesamiento de imágenes se facilita con el software de análisis específica para el flujo de imágenes citómetro de permitir el análisis cuantitativo de características tales como el delta del centroide XY para estudiar por ejemplo, la posición relativa del núcleo ael citoplasma que se puede utilizar como una medida de la polarización.\nLos pasos críticos en el protocolo y la resolución de problemas\nEs bien conocido que incluso pipeteo suave puede resultar en la separación de reticulocitos y pyrenocyte 12. Esto tiene el potencial de limitar severamente el número de eventos enucleación de imágenes. Como resultado, se debe tener cuidado, especialmente al levantar eritroblastos unidos a células MS5 en la cultura.\nLa fijación con solución de formaldehído puede causar alteraciones a las regiones extracelulares de los marcadores de superficie resultantes en anticuerpo específico disminución de la unión y / o aumento de la unión de anticuerpo no específica. Una ventaja de la formación de imágenes citómetro de flujo es que tinción de la superficie se visualiza y su calidad por lo tanto se puede evaluar. Punteada, en lugar de uniforme, la tinción de los marcadores de superficie abundantes como Ter119 indica overfixation y debe abordarse a través de una mezcla de formaldehído menorconcentración hyde y una menor duración de la fijación.\nDespués de la fijación, manteniendo las células en hielo durante al menos 15 min es de vital importancia con el fin de prevenir el exceso de la rotura de células durante el proceso de permeabilización debido a las diferencias de temperatura. Aunque la permeabilización acetona mantiene los eritroides finales de los frágiles mejor que la permeabilización mediada por detergente, el paso donde se requiere 100% de acetona dará lugar a una notable, pero no perjudicial, pérdida de células. Al final, después de un lavado con tampón FACS frío, las células se les permite a temperatura ambiente durante los pasos de incubación de anticuerpos.\nEl flujo de imágenes tiene citómetro de una tasa fija de flujo (células / seg) dependiendo del objetivo utilizado (tasa disminuye a medida que aumenta la magnificación). Tras el lavado final antes de la medición, se recomienda que los sedimentos celulares se resuspendieron en un volumen pequeño (50-60 l), con el fin de acelerar el procesamiento de la muestra. Para un gran número de muestras que reQuire larga duración de la ejecución (durante 30 min), las muestras se deben mantener en hielo.\nEl ensayo de la enucleación largo plazo ofrece el beneficio de una producción de células eritroides ampliado con el fin de producir suficientes células que se pueden recoger en la etapa de la enucleación para evaluación bioquímica como inmunotransferencia y desplegables. El ensayo de la enucleación rápido da el beneficio de tiempo que requiere sólo 2 días para llevar a cabo, aunque un ratón necesita ser Phlebotomized 4 días antes del experimento. No hemos observado una diferencia significativa en la eficiencia de la enucleación entre los dos métodos. De nota, citometría de flujo de evaluación, que no requiere la etapa de permeabilización necesario para inmunofluorescencia de las estructuras intracelulares, tal como se describe antes de 7, es más apropiado para la evaluación cuantitativa de la eficiencia de la enucleación.\nEl método descrito aquí utilizes inducidos eritropoyesis estrés in vivo y la cultura en un medio que contiene hidrocortisona in vitro con el fin de amplificar las poblaciones eritroides y sincronizarlos en la etapa de la enucleación. Ambas condiciones probablemente imitan eritroblasto-enucleación bajo estrés. Además, hidrocortisona aumenta significativamente el rendimiento de eritroide y la supervivencia. Para obtener un rendimiento similar de eventos enucleación de células de médula ósea procedentes de ratones de tipo salvaje con la eritropoyesis en estado estacionario y se cultivan sin hidrocortisona (sincronización evitando así), tendríamos que cultivar células de varios ratones y correr y procesar mucha más eventos a través de múltiples -espectral Imaging Citometría de Flujo. Aunque el flujo de imágenes multiespectrales acelera citometría de colección de datos morfológicos enormemente en comparación con la microscopía de inmunofluorescencia utilizando la lente de aumento de hasta 60x, la comparación de las observaciones obtenidas por imágenes de citómetro de flujo con el clásico, Z-stack,y las imágenes de microscopía confocal es valiosa para obtener un mejor detalle, puesto que la lente objetivo en un microscopio puede proporcionar magnificación hasta 100 veces y las imágenes Z-pila dan una impresión 3-dimensional de las estructuras, que no es alcanzable por el flujo de formación de imágenes en el mismo citómetro célula. El alto número relativo de células similares recogidos en un flujo de imágenes multiespectrales citometría de experimento, en una orientación aleatoria, compensa parcialmente esta limitación permitiendo observaciones de un diferente punto de vista.\nLos autores agradecen al flujo Citometría de Investigación de la Fundación de Niños de Cincinnati Research Hospital y Richard Demarco, Sherree amigo, y Scott Mordecai desde el Amnis Corporation (parte de EMD Milllipore) para el apoyo técnico de expertos. Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud subvenciones K08HL088126 y R01HL116352 (TAK) y DK090971 P30 (YZ).


Holasabe q me pica muchos la pierna cuando llego de mi\nHolasabe q me pica muchos la pierna cuando llego de mi trabajo. Y me rasco y me lastimo .me queda marcado como manchas negra .que puede cer .\nAsistente del experto: ¿Cuánto hace que notas las manchas?Cliente: Y desde q me empiso a rascar .tengo la piel muy cecible\nAsistente del experto: ¿Las manchas han cambiado de tamaño con el tiempo?Cliente: Y si por q me brotó y me rasco\nCliente: Eso es pero más me rasco más alergia me das y me lastimo\nExperto: Dr. Ferrer escribió hace 25 días.\nA eso se le denomina alergia colinergica un tipo de alergia que ocurre por la exposición al sudor al calor al roce de la ropa sobre todo si uno se ve sometido a cambios de temperatura esto se puede agravar cuando se utilizan algunos productos de higiene personal que son muy antisépticos qué son muy irritantes.\nLo ideal es tomar tratamiento apropiado tomé nota por favor.\nCetirizina una tableta de 10 mg una vez al día por 10 días.\nAplicar crema andantol en crema dérmica mañana tarde y noche por 10 días consecutivos en la zona afectada.\nEl lavado diario con jabón suave tipo Dove en barra.\nAplicar después del baño, crema Nivea corporal.\nEspero haber podido ayudarle en su problema de salud, desde la plataforma lamentándolo mucho no podemos enviar recetas médicas, por favor antes de desconectarse tenga la bondad y gentileza de ofrecerme la colaboración de calificación positiva dando clic a las 4 con cinco estrellitas de la barra superior al chat. Es necesario para registrar esta consulta. De lo contrario el sistema me deja negatividad automática. Le envío un fuerte saludo y bendiciones\nAgradezco por favor valore con las estrellitas mi atención de acorde a su criterio, atención y servicio prestado. Saludos y bendiciones por casa.


El triunfo de la voluntad - Mar Gruesa\nPero hay dos tipos de hambre. Una es un hambre autoimpuesta y bajo la cual subyace la certeza de tener comida en la nevera. La segunda, es un hambre que se padece por falta total de alimento y se somete a un agente externo: la carencia. Por tanto, ésta resulta ser un hambre preocupante, desquiciante… Que incluso puede desembocar en la locura o la muerte, mientras que la primera puede llegar a ser gratificante dado que supone el triunfo de la voluntad –y la salud- ante la ansiedad o la glotonería.\nCuando alguien te dice ‘qué más te da que no te dejen surfear esta semana. Va a estar pequeño y tal vez no irías de todos modos’, está pasando por alto la diferencia abismal que existe entre no coger olas por decisión propia o no hacerlo por imposición. Esa diferencia abismal se llama voluntad. Y la voluntad es la única cosa capaz de desestabilizar –o derrumbar- el espíritu de una persona.\nEso se debe a que la voluntad siempre doblega al cuerpo mientras que el cuerpo jamás triunfa sobre la voluntad. De ahí que, si lo decides, madrugues pese a tener sueño, padezcas sufrimientos que conducen la mejora de tu pasión o incluso puedas atentar explícitamente contra tu propio físico. Aunque a priori esto pueda parecer un disparate, recordad aquel montañero que se cortó la mano (atrapada bajo una roca) para sobrevivir o imaginad quien accede a amputarse un miembro gangrenado o por el cual circula el veneno de una serpiente.\nY por eso, en última instancia, es más fácil acallar el dolor físico que el moral y tú puedas dormir cuando te duele una rodilla (antinflamatorio y pista) pero te cueste conciliar el sueño si no tienes la conciencia limpia.\nY es que la voluntad, el espíritu, la conciencia o el alma, llamadlo como queráis, no son amigos ni de celdas ni de engaños.\nDando por hecho que esta es una cuestión más-que-egoísta ya que tenemos cama, wifi, agua corriente y comida en la nevera, pero volviendo al ejemplo de no surfear, en un caso por no querer y en otro por no poder, ambos desembocan en una misma situación física (no coger olas) pero nacen dos causas diametralmente opuestas (no me da la gana – no me dejan pese a tener ganas). Por eso, sólo una persona con la voluntad doblegada ante una causa ajena a sí misma puede empatizar con la verdadera naturaleza de ambos padecimientos, mientras que otra cuyo espíritu no haya sido limitado y sólo tenga falta de ganas o dolor físico, por ejemplo, es capaz de comprender solamente uno.\nEl hecho de cobrar la misma apariencia final -ante los ojos- pese a obedecer a un principio espiritual contrario tiene tantos símiles en la naturaleza que, yéndonos al más radical de todos, viene a ser lo mismo que morir deseando la muerte o morir pese añorar la llegada de un nuevo día.


Ecuador impulsa acciones para reducir los efectos de la contaminación asociada a compuestos químicos | El PNUD en Ecuador\nMás de 150 representantes de organizaciones públicas y privadas, participaron en talleres y encuentros cuyo objetivo es capacitar para combatir un tipo de contaminación altamente nociva y casi invisible, asociada a compuestos químicos presentes en productos de uso cotidiano, desde aparatos electrónicos, textiles o pinturas hasta alimentos.\nEl Ministerio del Ambiente del Ecuador (MAE) con la asistencia técnica del Programa de las Naciones Unidas para el Desarrollo (PNUD) y el financiamiento de Fondo para el Medio Ambiente Mundial (GEF por sus siglas en inglés), a través del ‘Programa Nacional para la Gestión Ambientalmente Adecuada de Sustancias Químicas en su Ciclo de Vida’, promovieron esta formación en Quito, Guayaquil y Cuenca. Esta capacitación ha permitido cumplir dos objetivos clave de esta iniciativa gubernamental: identificar las necesidades de los diferentes sectores en relación a la reducción y eliminación de sustancias nocivas como contaminantes orgánicos persistentes (llamadas en el ámbito técnico-científico COP) y mercurio; y generar herramientas que mejoren la gestión de componentes químicos a través de guías, mecanismos e incentivos que promuevan mejores prácticas por parte de los diferentes actores involucrados a lo largo del proceso.\nEntre los principales resultados y hallazgos de estos talleres se destaca que, instituciones como el Ministerio de Salud Pública, Gobiernos Autónomos Descentralizados (GAD), el Programa Nacional para la Gestión Integral de Desechos Sólidos (PNGIDS), e industrias azucareras, cementeras, siderúrgicas e incineradoras, entre otras, cuentan con información indispensable para prevenir emisiones de contaminantes orgánicos persistentes no intencionales, producto de accidentes como incendios forestales, quema de basura, incineraciones y procesos químicos industriales. Asimismo, se aportó en la construcción de mecanismos de coordinación interinstitucional y sus grupos de trabajo para una gestión racional de químicos basada en un enfoque de ciclo de vida, lo que permitirá articular acciones de manera eficiente en un futuro cercano.\nPor otro lado, en relación con la minería artesanal se identificó la posibilidad de diseñar un producto crediticio de la banca pública, que acorde a las dinámicas del sector, ayude a eliminar brechas de género entre hombres y mujeres e impulse producción limpia de oro a pequeña escala.\nMario Rodas, coordinador del Programa Nacional para la ‘Gestión Ambientalmente Adecuada de Sustancias Químicas en su Ciclo de Vida’ resaltó la urgencia que tiene Ecuador para promover mejores prácticas y tecnologías que reemplacen a los contaminantes orgánicos persistentes y el mercurio, y prevengan el desarrollo de nuevas sustancias tóxicas para la salud. Además, Rodas, afirmó que es importante la participación de todos los sectores involucrados y su compromiso para lograr el objetivo del proyecto.\nUno de los principales retos asumidos es garantizar modalidades de consumo y producción sostenibles que aporten al desarrollo del país, concluyó.


Se lanzó la preventa del Range Rover Velar – Parlamentario\nlunes 08 marzo 2021 | 2:49 pm\nSe lanzó la preventa del Range Rover Velar\nDitecar, importador de las marcas Jaguar, Volvo y Land Rover lanzó la preventa de Range Rover Velar.\nComentarios desactivados en Se lanzó la preventa del Range Rover Velar\nEl Range Rover Velar es un SUV de lujo, con moderna tecnología y diseño innovador, que comprende la nueva identidad visual de la línea Range Rover. Su atractivo diseño, presenta proporciones perfectamente optimizadas y una silueta deslumbrante.\nSegún la marca, el nombre Velar proviene de la denominación que la marca dio a los modelos de preproducción del Range Rover de primera generación; fue utilizado en referencia al térmico latín “velare”, que significa “velar” o “cubrir”.\nCon respecto a las motorizaciones, se ofrecerá 3 propulsores nafteros y uno diesel. Los primeros son dos de 2.0 litros de 250 CV y 300 CV y uno V6 de 3.0 litros y 380 CV. El diesel es un 2.0 litros de 240 CV.\nLos asientos delanteros tienen ajustes eléctricos y pueden llevar funciones de calefacción, ventilación y masaje. Los asientos de la fila posterior pueden tener regulación en inclinación del respaldo y calefacción. El volumen del maletero es 632 litros.\nEn la consola central hay dos pantallas táctiles de 10 pulgadas cada una. Con ellas se maneja el sistema multimedia y otras funciones como el climatizador y el Terrain Response 2. A este sistema de doble pantalla Land Rover le da el nombre de Touch Pro Duo y dice que gracias a él se despeja la consola de botones y se gana espacio para guardar objetos. Utiliza un procesador Intel Quad Core, cuenta con un disco duro sólido (SSD) de 60 GB y tiene capacidad para conectarse a redes 4G.\nLa pantalla superior está pensada para controlar el navegador, el sistema de audio y el teléfono móvil que se haya conectado mediante Bluetooth. Su uso, dice Land Rover, es igual de sencillo e intuitivo que en un smartphone. El conductor puede inclinar esta pantalla para dejarla en la posición que más le guste (tiene una libertad de movimiento de 30º). Cuando se apaga el motor retorna a su posición original, y vuelve a donde estaba la última vez cuando se enciende el motor.\nLa pantalla inferior está pensada para controlar el climatizador, el sistema Terrain Response y otras funciones como la conexión y desconexión de la calefacción de los asientos. En esta pantalla hay dos mandos giratorios, cuya función es ajustable. Por ejemplo, pueden servir para variar la temperatura del climatizador o cambiar entre diferentes tipos de masaje para el asiento.\nLos instrumentos puede tener indicadores analógicos con una pantalla central de 5,0 pulgadas, o bien, puede ser una pantalla de 12,3 pulgadas en la que se muestra toda la información y que puede ser configurada a gusto del conductor en algunos parámetros. Para reducir las posibilidades de distracción, hay disponible un sistema de proyección de información en el parabrisas. Los botones que hay en el volante son sensibles al tacto, es decir, no son los tradicionales botones que hay que presionar.\nEl Velar se puede pedir con un paquete estético llamado R-Dynamic, que da un aspecto más “deportivo” gracias a unos parachoques con un diseño diferente y unas entradas de aire más grandes. Hay cuatro tipos de faros, todos ellos de led´s. Los más avanzados son los que Land Rover llama Matrix-Laser LED. Son unos faros matriciales —es decir, los led´s se encienden y se apagan individualmente para reducir el deslumbramiento a otros vehículos a la vez que se da la máxima iluminación posible— con un sistema de proyección de luz láser cuyo alcance es de 550 metros.


Oracle Anuncia Oracle PartnerNetwork Exchange @ OpenWorld - estamos en línea\n10/09/2013 Alberto Marín Morán\tOracle\nVenezuela. – 10 de septiembre de 2013. La comunidad Oracle PartnerNetwork (OPN) es una parte integral del éxito de Oracle. Hoy la compañía anuncia el segundo Oracle PartnerNetwork Exchange anual para ofrecer a los más de 25,000 miembros de OPN las estrategias y la información que necesitan para crecer y ser rentables con Oracle.\n◦ Cloud Solution Pavillion: incluye a asociados de Oracle que ofrecen soluciones y servicios superiores. Los socios podrán lanzar y hacer demostraciones de sus productos, promover sus servicios y conectarse con clientes y prospectos.\n◦ JD Edwards Pavillion: con sesiones de JD Edwards, este pabellón alberga a los socios de Oracle que ofrecen las mejores soluciones y servicios de su clase, permitiéndoles consolidar su posición entre los asistentes a Oracle OpenWorld como jugadores importantes en el área de JD Edwards.\n◦ Mobile Enterprise Solution Pavillion: aquí los socios pueden mostrar sus soluciones móviles más recientes, las cuales permitirán que los clientes aprovechen sus inversiones móviles para ampliar las oportunidades de negocio y la eficiencia.\n◦ Oracle Hyperion Pavillion: con sesiones de Oracle Hyperion, este pabellón ofrece una oportunidad para que los socios muestren sus soluciones y servicios a una audiencia dirigida y enfocada en conocer las mejores soluciones para la gestión del desempeño empresarial.\n◦ Oracle Linux & Virtualization Pavillion: este pabellón le permitirá a los socios destacar sus soluciones ante una audiencia dirigida e interesada en las soluciones de infraestructura de escala empresarial.\nOracle PartnerNetwork (OPN) Specialized es la versión más reciente del programa de socios de Oracle que les ofrece las herramientas para desarrollar, vender e implementar mejor las soluciones de Oracle. OPN Specialized ofrece los recursos para capacitar y apoyar el conocimiento especializado de los productos y soluciones de Oracle; y ha evolucionado para reconocer el creciente portafolio de productos de Orale, la base de socios y la oportunidad de negocio. La capacidad de los socios de diferenciarse a través de las Specializations es clave para las recientes mejoras de OPN. Las Specializations se logran a través del desarrollo de competencias, los resultados del negocio, la experiencia y el éxito probado. Para consultar más información, visite: http://www.oracle.com/partners.


Sobre esta pieza,mil aclaraciones. - Audi 80 / 90 / 100 / A6 C4 / 200 / Cabrio / Coupé - Audisport Iberica\nSobre esta pieza,mil aclaraciones.\nMarch 11, 2006 in Audi 80 / 90 / 100 / A6 C4 / 200 / Cabrio / Coupé\nComo veis es donde va "enchufado" el cable del acelerador....\nEsta es la famosa "mariposa"?\nSe puede desmontar y limpiar?\nSi está sucio..cuales son los simtomas?\nNo sé si sabreis,(supongo que si),que al pisar el acelerador esta pieza se mueve hacia la derecha,y a medio tramo "arrastra" a otra que se situa justo debajo,justo en ese momento el coche me da muchos tirones...puede ser que los de por estar sucias las partes internas que no se ven en la foto?\nIgualmente tironea mucho al ir en marcha y soltar el acelerador,esta pieza es la causante?\nSi yo desmontara ese "bloque" por los tornillos (solo se ve uno en la foto) que lo sujetan al bloque donde pone audi.... empezaria a salir gasolina?demasiado "escandaloso"?\nComo ya he dicho,el coche da muchos tirones y estoy con que es culpa de esa pieza puesto que todo lo demas,filtros bomba de gasolina,inyectores y demas esta todo revisado...y ya no sé de donde tirar.\n2mil gracias compis¡¡¡\nSuelta la abrazadera del tubo de goma moviendo el tubo y veras las dos mariposas podras limpiarlas con algun trapito que no suelte hilos. Si quieres hacerlo mas "Profesional " suelta el cable del acelerador ,los cuatro tornillos Allen y un par de enchufes que son el del contartor del ralenti y el de plena carga si mal no recuerdo.\nYo probaria la primera opcion menos lio y veras si las mariposas estan en realidad sucias\nY Si miras esto...\nLo digo porque me parece más un fallo eléctrico que mecánico¿?\nHay algo más pero es regulación del ralentí y pruebas con el VAS 5051...\nVeo que ahi ya tienes algo de info. Te pongo una foto del interior de las mariposas xa que te orientes x si aun no las has desmontado.\nCuando notas que el edal tiene un tacto mas duro es que la primera y menor mariposa ya va abierta a tope y es entonces cuando arrastra y comienza a abrir la grande para dar mas entrada de aire.\nProbablemente el fallo no sea de ahi sino más bien electrico como te dicen, cables de bujias etc etc...\nDe todas formas nunca viene mal limpiarlo y dejar un ralenti más estable y un caudal de aire optimo.\n2mil gracias a todos,haber si doy con el fallo de una miserable vez¡¡\nEsque la casualidad es que al notar que el pedal se pone duro(justo para abrir la otra mariposa)da tirones,al igual que al llevarlo con el pedal a fondo,los cables de las bujias son nuevos,y me he fijado que hay una especie de bobina "contra la pared" que tambien parece nueva...y esque ya no sé que mas mirarle para quitar esos tirones,tambien es un suplicio y despacio,es como ir en un caballo dandome patadas,como si le llegara la gasolina a borbotones..si os surge alguna idea os lo agradeceria mil.\nAL MIO LE PASA LO MISMO PERO ES CUANDO VAS CON EL COCHE UN RATEJO EN MARCHA Y LE CUESTA BASTANTE SUBIR DE RPM CREO QUE EL CAUSANTE PUEDE SER EL FILTRO DE LA GASOLINA QUE NO SE LO CAMBIO DESDE HACE 25000 KM Y APURO MUCHO LOS DEPOSITOS O IGUAL LA BOMBA DE LA GASOLINA YA QUE HAY VECES QUE ME SUENA.\nEl filtro se lo he puesto nuevo hace 3 semanas,tendrá ahora 500 km,de eso no es,y una cosa...como sabes que te "suena" la bomba de la gasolina?


Dani Alves, con la sartén por el mango en el Barça\nPublicación:1/01/2015 - 13:53h\nLa ratificación de la sanción de la FIFA al Barça provoca que Alves se haya convertido, a sus 31 años, en un jugador más que necesario de cara a la próxima temporada teniendo en cuenta que, si se marcha, Luis Enrique tendrá sólo a Montoya y Douglas como laterales diestros\nSi Dani Alves estuvo a punto de abandonar este pasado verano el FC Barcelona y se había tomado esta temporada como su última en el club azulgrana al finalizar contrato en junio de 2015, todo hace pensar que a partir de este mismo martes desde la entidad culé impulsarán la renovación inminente del brasileño por una campaña más con el objetivo de tener cubierta la posición de lateral derecho, dado que si se marcha Alves el Barça se quedará únicamente con Martín Montoya y Douglas Pereira.\nEl hecho de que Martín Montoya quisiera marcharse también durante el actual mercado de invierno, además, pone la situación de dicha posición en estado de alarma. El Barça no permitirá que el de Viladecans se vaya y podría intentar que el brasileño se quede, aunque sabe que si decide abandonar el equipo pretendientes no le van a faltar y tampoco grandes posibilidades de alcanzar un suculento contrato con algún "grande" de Europa.\nA partir de este próximo 1 de enero, Alves ya podrá empezar a negociar con cualquier club que esté interesado. Se desconoce, sin embargo, si estaría dispuesto a cumplir una última temporada en un Barça en la cuerda floja, sin ningún otro jugador de gran nivel en dicha posición para ser titular indiscutible. A pesar de sus 31 años, Alves sigue siendo uno de los mejores laterales derechos.


RATIFICADA SANCIÓN DISCIPLINARIA AL CONTRALOR DE ANTIOQUIA\nEl procurador General de la Nación, Fernando Carrillo, reveló ayer en Medellín que la Procuraduría ratificó la sanción de 10 meses de suspensión en el cargo al contralor departamental de Antioquia, Sergio Zuluaga Peña. Para acceder a este cargo, el todavía contralor dijo tener un doctorado de una universidad española, circunstancia para ese momento falsa. El mismo procurador Carrillo manifestó ayer el bochorno que significa que el jefe de un ente de control incurra en falsedades para acceder a un cargo donde le tocará velar por la transparencia pública y la honradez.\nAdicionalmente, Zuluaga Peña fue llamado a juicio penal por el asunto de las cirugías plásticas en un hospital público. Desde hace rato, un mínimo sentido de la decencia pública y la dignidad personal habrían obligado al funcionario a retirarse del cargo. Pero sigue aferrado a él.\nLa saturación y el desafío con las ofertas de mototaxismo\nLA DETENCIÓN ARBITRARIA DE ROBERTO MARRERO EN CARACAS\njuez obliga al gobernador a atender los parques educativos


Sergio Pérez: "Decepcionado por no haber podido correr hoy" -- F1 -- Autobild.es\nSergio Pérez: "Decepcionado por no haber podido correr hoy"\n30/03/2014 - 17:46\nEl mexicano Sergio Pérez (Force India) manifestó que está "decepcionado por no haber podido correr hoy" en el Gran Premio de Malasia, la segunda prueba del Mundial de Fórmula Uno, que se disputó en el circuito de Sepang, en las afueras de Kuala Lumpur.\nSergio Pérez no pudo tomar la salida en la carrera al bloquearse el cambio cuando se dirigía a la parrilla. "Estoy decepcionado por no haber tenido la oportunidad de correr hoy. Aún estamos investigando la causa del problema, pero el coche se quedaba continuamente en punto muerte al bajar de marchas cuando me dirigía a la parrilla de salida", indicó 'Checo' Pérez, nacido hace 24 años en Guadalajara.\n"Pude llegar al garaje, pero no encontramos la solución. Tengo que centrarme en los aspectos positivos, porque aprendimos mucho del fin de semana, así que espero que podamos regresar con más fuerza en Baréin", manifestó el piloto tapatío, con miras al próximo Gran Premio, que se disputará el próximo fin de semana en el circuito de Sakhir. "Ha sido un fin de semana desesperante para nosotros, pero, al menos, correremos de nuevo en siete días y espero que se me pase pronto este disgusto", manifestó 'Checo' Pérez hoy, domingo, en Sepang. EFE


wZD, un servidor de almacenamiento de archivos compacto | Desde Linux\nwZD, un servidor de almacenamiento de archivos compacto\nwZD es un potente servidor de almacenamiento eficientemente, diseñado para sistemas de almacenamiento de datos grandes con archivos pequeños y grandes para uso mixto y reduce drásticamente una gran cantidad de archivos en una forma compacta que se parece a un servidor WebDAV normal desde el exterior.\nEl servidor está escrito en lenguaje Go que utiliza una versión modificada de la base de datos BoltDB como back-end para guardar y distribuir cualquier cantidad de archivos pequeños y grandes, claves/valores NoSQL, en una forma compacta dentro de bases de datos micro Bolt (archivos), con distribución de archivos y valores en bases de datos BoltDB dependiendo del número de directorios o subdirectorios y la estructura general de los directorios.\nEl servidor puede reducir significativamente la cantidad de archivos pequeños en sistemas de archivos regulares o agrupados con soporte de bloqueo total. Con el respaldo de los desarrolladores de wZD, el clúster almacena alrededor de 250 millones de archivos pequeños distribuidos en 15 millones de directorios en el clúster MooseFS FS.\nwZD hace posible mover (archivar) el contenido de directorios a archivos en formato BoltDB y luego distribuir estos archivos desde estos archivos (o poner archivos en archivos usando el método PUT), reduciendo significativamente el número de archivos en el sistema de archivos y reduciendo la sobrecarga de almacenamiento de metadatos.\nPara aumentar la eficiencia del procesamiento de archivos grandes, dichos archivos se pueden almacenar por separado de los archivos de Bolt.\nTal enfoque le permite organizar el almacenamiento de una gran cantidad de archivos pequeños, sin descansar en el límite de la cantidad de inodos en el sistema de archivos.\nEl servidor también se puede utilizar como una base de datos NoSQL para datos en el formato clave/valor (con particiones basadas en la estructura del directorio) o para distribuir documentos html o json generados previamente desde la base de datos.\nEn términos de rendimiento, cargar y escribir datos usando archivos Bolt conduce a un aumento en la latencia de aproximadamente 20-25% al leer y de 40 a 50% al escribir. Cuanto más pequeño sea el tamaño del archivo, menor será la diferencia en la latencia.\nDe las características clave, se destacan las siguientes:\nServidores múltiples para tolerancia a fallas y equilibrio de carga\nMáxima transparencia para el usuario o desarrollador\nMétodos HTTP admitidos: GET, HEAD, PUT y DELETE\nAdministra el comportamiento de lectura y escritura a través de encabezados de clientes\nSoporte para hosts virtuales personalizables.\nEscalado lineal de lectura y escritura utilizando sistemas de archivos agrupados\nMétodos efectivos de lectura y escritura de datos.\nAdmite integridad de datos CRC al escribir o leer\nCompatibilidad con encabezados Range y Accept-Ranges, If-None-Match y If-Modifed-Since\nAlmacene y comparta 10.000 veces más archivos que inodos en cualquier sistema de archivos compatible con Posix, dependiendo de la estructura del directorio\nSoporte para agregar, actualizar, eliminar archivos y valores, y compactación retrasada de archivos Bolt\nPermite que el servidor se use como una base de datos NoSQL, con un fragmentación fácil basado en la estructura del directorio\nSoporte de archivos Bolt para lectura selectiva de un cierto número de bytes de un valor\nFragmentación fácil de datos en miles o millones de archivos Bolt basados en la estructura de directorios\nSoporte de modo mixto, con capacidad para guardar archivos grandes por separado de los archivos Bolt\nSoporte para obtener una lista o número de claves en un directorio, incluidas las no únicas\nIncluye un archivador wZA multiproceso para migrar archivos sin detener el servicio\nEn cuanto a las limitaciones de la versión actual: no hay soporte para Multipart, el método POST, el protocolo HTTPS, carpetas para lenguajes de programación, eliminación recursiva de directorios, no hay soporte para montar la estructura en el sistema de archivos a través de WebDAV o FUSE, los archivos se almacenan bajo un usuario del sistema.\nFinalmente si estás interesado en conocer más al respecto sobre wZD así como las instrucciones y requisitos para su instalación puedes consultar los detalles en el siguiente enlace.\nRuta completa hacia el artículo: Desde Linux » Noticias » wZD, un servidor de almacenamiento de archivos compacto


'Westworld' pierde audiencia en EE UU durante su segunda temporada | Cinemanía\n‘Westworld’ pierde audiencia en EE UU durante su segunda temporada\nEl culebrón robótico ha perdido un 16% de espectadores en TV (y algo menos en vídeo bajo demanda) respecto de su primera temporada. ¿Un aviso para HBO?\n“Liosa”, “incomprensible”, “tramposa” o “pesada” son algunos de los adjetivos que se han vertido hacia la segunda temporada de Westworld. El show de Jonathan Nolan y Lisa Joy (y J. J. Abrams, que siempre se nos olvida) para HBO siempre ha lucido con orgullo su condición de trabajo ‘adulto’ y no apto para todo tipo de públicos, pero esta actitud podría salirle muy cara. Según cifras de la auditora Nielsen (citadas por Vulture) la audiencia de la serie en EE UU ha caído severamente durante su segunda temporada.\nLa audiencia de la segunda etapa de Westworld habría rondado los 2,5 millones de espectadores durante la primavera. Lo cual representa una caída del 16 por ciento respecto a las cifras de la primera temporada en otoño de 2016. Esta caída, señala Vulture, se repite en las cifras de vídeo bajo demanda: 10 millones de espectadores, frente a los 12 millones de la temporada anterior. Cifras que, en el contexto de una serie más barata, no serían demasiado alarmantes. Pero que importan mucho tratándose de un serial que cuesta alrededor de 100 millones de dólares por temporada.\nYa cuando Westworld encaraba su larguísima preproducción, J. J. Abrams advirtió que la serie de los androides cowboys no sería el relevo de otra serie con dragones: “Juego de tronos es un fenómeno que no puede repetirse”, advirtió. Asimismo, ni las cifras ni las previsiones de marketing deben de ser tan malas cuando HBO ha encargado una tercera temporada. Pero está claro que este show no va a ser el blockbuster que el canal necesita para mantener las espectaculares cifras del culebrón medieval-fantástico. Y que su futura trayectoria puede ser un aviso en esta época de superseries con presupuestos millonarios.


Lubricante Contacto Natural Shunga Toko\nLubricante Contacto Natural Shunga Toko 125 ml\nEs un lubricante especialmente formulado para reproducir la lubricación natural y para facilitar la penetración. Este lubricante ultra-suave hace perfecta las sensaciones experimentadas por los cuerpos en el movimiento sexual. A base de agua y sin aceites minerales, este lubricante se puede utilizar con juguetes sexuales de látex y es soluble en agua. Compatible con preservativos.\nBase agua, envase de 125 ml\nAconsejado para pieles sensible\nPuede usarse en sexo vaginal y anal


09/09/2014 - actualizado el 20/11/201815 min\nHace unos días hablamos sobre los mejores teclados para Android, pero si lo que tienes es un iPhone y tienes dificultades para manejar el teclado o no te convence a la hora de escribir, debes saber que también existen algunas apps que lo mejoran, haciéndolo más cómodo y práctico para ti. ¿Quieres saber cuáles son los mejores teclados para iPhone? Sigue leyendo, ¡lo descubrirás enseguida!\nLos mejores teclados para iPhone: ¿con cuál te quedas?\nOtras apps de teclado para iPhone\nSmart Keyboard es un teclado con una distribución muy similar al iPhone original, con la ventaja de que a la hora de escribir algo, aparece una caja encima del teclado con diferentes palabras y, entre ellas, probablemente, la que vas a utilizar. Además, cuanto más lo uses, más inteligente será, ya que se acostumbrará a tu estilo de escritura, anticipándose a la palabra que vas a poner. ¡Con esta app serás más rápido al escribir! Smart Keyboard se puede utilizar en SMS, Facebook, Twitter y correos electrónicos.\nFast Keyboard es un teclado bastante rápido y de fácil uso gracias a una serie herramientas que aparecen en el lateral. Estas aceleran el proceso de escritura al incluir botones como deshacer/rehacer y teclas para mover el cursor.\nEasy Typing posee una peculiaridad diferente a los otros teclados, y es que es capaz de decidir el tamaño que deben tener algunas teclas, según el uso que las demos. Por ejemplo, si normalmente utilizamos las teclas “a”, “x” y “s”; estas adquirirán un tamaño mayor que las demás. De esta manera, la velocidad de escritura será mayor, al verlas en un simple golpe de vista.\nY si quieres personalizar el estilo del teclado, te recomendamos Fleksy, uno de los teclados más rápidos del mundo. ¡Podrás escribir sin mirar! Con él podrás insertar un espacio con solo desplazarte hacia la derecha o borrar una palabra desplazándolo hacia la izquierda. ¡Así de rápido! Sin necesidad de pulsar una tecla.\nOtro de los teclados que podrás instalar dentro de poco en tu iPhone es Quickboard. El nuevo teclado virtual para iOS 8, que aún no se ha lanzado al mercado. La apuesta de este teclado es la capacidad de guardar fragmentos de texto que utilicemos y acceder a ellos para escribir más rápido.\n¿Con cuál de estos teclados te quedarías! ¡Descárgatelos, pruébalos y cuéntanos qué tal!\nPersonaliza tu teléfono con los mejores teclados para iPhone was last modified: noviembre 20th, 2018 by Mister Comparador\nLas mejores apps para seguir la Liga de fútbol: ¡oé, oé, oé, oé...!\nGuifi.net, una forma de estar conectado al mundo\nYo me quedo con el que viene de fabrica, que esta muy bien hecho. Estoy deseando que salga a la venta el Iphone 6. Pero no se cual comprarme. Si el 6 normal o el Plus


Volkswagen revela sus citas del Driving Experience y hay eventos más...\nVolkswagen revela sus citas del Driving Experience y hay eventos más que apetecibles\nEscrito el 14 de febrero de 2022\nEn 2003 este proyecto echo a andar y ha sido todo un éxito. Más de 26.000 conductores se han formado en este plan de la firma alemana. Con el objetivo principal de enseñar a todo amante de los coches las nuevas tecnologías que Volkswagen desarrolla y para evitar posibles riesgos al volante el Driving Experience sigue siendo más que una buena opción. El equipo de instrucción cuenta con pilotos profesionales de primer nivel. La escuela tiene unas citas marcadas en el calendario en las cuáles el embajador de la marca, Luis Moya, estará presente.\nEl viaje internacional de Volkswagen\nComo plato fuerte que se incorpora al calendario, Volkswagen promete una cita en Suecia, exactamente en Laponia. Los clientes españoles que se animen podrán disfrutar de la conducción con un Golf R en la localidad de Arvidsjaur, situada a 100 kilómetros del círculo polar ártico. Del 25 al 28 de febrero esta fechado este evento. Los alumnos tendrán la aventura de realizar el curso y conducir sobre un lago helado y se promete enseñar a realizar ‘drifting’.\nDe vuelta los eventos en España\nNavarra será el primero de los tres trazados que se realizarán en España. El circuito de los Arcos acogerá a la escuela R del 15 al 17 de febrero. El 3 y 4 de mayo los cursos de los alemanes se trasladan al circuito de Montmeló con el Race Tour y el Race Tour Fast Track. Por último, el circuito Madrid Jarama- RACE renombrado hace unas semanas será el que cierre esta temporada de cursos.\nEn estos eventos se puede disfrutar de la gama de vehículos eléctricos. El alumno aprenderá tanto a sacar lo máximo del vehículo como todo lo que necesiten saber sobre la carga de este tipo de coches.\nEn los cursos de motores de combustión desde Volkswagen aseguran que estos van dirigidos a los que quieran mejorar su técnica de conducción. En esta categoría de motores, habrá dos niveles. El Nivel R está enfocado en conductores más experimentados que quieran tener un desafío. El segundo nivel, denominado GTI va para los conductores con dos años de carnet o menos.\nEl plan de Volkswagen Driving Experience incorpora por segundo año a la escuela OneToOne, con la posibilidad de acceder a una clase privada con un piloto profesional.\nLos cursos que ofrece OneToOne están disponibles todos los sábados en Madrid y Barcelona.\nEscrito el 01 de julio de 2022\nCamino a la sucesión, comparativa entre M4 VS i4\nParece que el futuro M4, que llegará al final de la década, será eléctrico. Y antes de eso, sobre 2025, la división M lanzará su primer deportivo 100% eléctrico. Mientras tanto, ¿hasta qué...\nNissan acelera en la Fórmula E\nLa marca japonesa ha adquirido la escudería e.dams de la competición de monoplazas eléctricos, consolidando así su compromiso con el medio ambiente. Vivimos junto a ellos el Mónaco E-prix.\nEscrito el 30 de junio de 2022\n¡Bienvenido! Polestar llega a España\nPolestar pasa a ser una marca independiente dentro de Volvo, bajo el paraguas del gigante chino Geely. Algo así como DS para Citroën o Abarth para Fiat. Eso sí, todos sus modelos serán cien por...\nAcudimos a la presentación del BMW M4 CSL en el concurso de Elegancia Villa d’Este (IT)\nBMW Group patrocina el Concurso de Elegancia de Villa d’Este, y siempre aprovecha la ocasión para presentar alguna novedad apasionante. Además acuden allí los primeros espadas de la marca, a los...


Carrera sanitaria en Neuquén: ¿de qué se trata este debate? | Ricardo Corradi Diez\nCarrera sanitaria en Neuquén: ¿de qué se trata este debate?\nRicardo Corradi Diez. Ministro de Salud\nSe ha planteado una discusión con respecto a lo que había y lo que hay. Yo me pregunto, si lo que hay incluye a lo que había y lo mejora en cada punto y además se introduce una carrera sanitaria para cada uno de los actores del sistema de salud, entendiendo que es para el gobierno de la provincia prioritario poder seguir creciendo en el mejor sistema de salud del país, ¿de qué se trata este debate?\nSi partimos de esta base, vemos que todas las apreciaciones que se han hecho son sólo interpretaciones personales basadas en conceptos individuales y malintencionados o mal informados, intentando solamente crear confusión con datos erróneos.\nTenemos el fuerte compromiso de dar solución y respuesta a los diferentes problemas que se nos iban presentando. Tuvimos que dar grandes charlas y debates con todos los actores del sistema de salud en cada uno de los momentos por los que atravesamos y es allí donde fuimos viendo la necesidad de mejorar el sistema y dar respuesta a los puntos que más anhelaban los trabajadores de salud, como mejorar los salarios, contemplar las guardias, reconocer el esfuerzo y cuidar a quienes entregan y entregaron su vida día a día a este sistema.\nEl eje fundamental de la planificación del sistema de salud está basado en la figura del full time, lo cual se mantiene. Pero es importante entender que en el siglo que vivimos, en las exigencias de las nuevas generaciones y en la diversificación de las especialidades, necesitábamos contar con una figura igual o más exigente que el full time y que nos permitiera tener la posibilidad de captar profesionales de diferentes sectores para que presten servicios en los hospitales, manteniendo la posibilidad de conservar su título.\nEs por eso que, producto de muchas entrevistas y charlas con diferentes especialistas, se entendió que en la figura del rendimiento óptimo, la cual no retiene el título del profesional, pero es igual o más exigente que el full time ya que mes a mes debe ganarse esta remuneración cumpliendo con el presentismo, la cantidad y calidad de prestaciones basadas en la especialidad, podía existir esta posibilidad que, sumada a las herramientas que hoy tenemos y que se mantienen, favoreciera la incorporación de profesionales.\nEntendemos que existen diversas opiniones y diversos puntos de vista, y es por eso que hemos conformado una sociedad democrática donde las expresiones siempre deben ser tomadas para el enriquecimiento de los objetivos comunes. Pero es importante darnos el tiempo para que estas herramientas puedan ser evaluadas como lo fueron en su oportunidad cada una de las modificaciones que se introdujeron para fortalecer. El tiempo dirá si la búsqueda de las mejores condiciones laborales para los diferentes agentes del sistema, manteniendo la escala salarial, reconociendo la diversidad de cada uno de los actores, manteniendo los agrupamientos, introduciendo mejores condiciones laborales y salariales, tuvo el resultado esperado.\nComo lo he manifestado en otra oportunidad, es nuestro compromiso reconocer y cuidar a los actuales representantes y trabajadores del sistema de salud.\nCon respecto al sistema de guardias en la dispersión provincial que tenemos de hospitales, las realidades son muy diferentes. La cantidad de guardias para los profesionales del sistema de salud está distribuida en forma proporcional y bajo las mismas oportunidades. Pero por diferentes motivos (certificados médicos, licencias, etc.), algunos profesionales se ven en el compromiso y obligación de hacer mayor cantidad de guardias para cubrir ese déficit. En el convenio colectivo se contempla esta situación y se reconoce el esfuerzo del profesional que se recarga.\nYo me pregunto: ¿la calidad del sistema de salud neuquino se puede reducir solamente a las condiciones de contratación? ¿No es faltar el respeto a cientos de trabajadores que durante años de dedicación, compromiso y entrega han hecho grande este sistema?\nEl gobierno de la provincia de Neuquén es el más interesado en conservar, mantener y mejorar lo que juntos hemos construido por más de cincuenta años. El orgullo que sentimos cuando hablamos de nuestro sistema de salud es fruto de la formación, la entrega y la dedicación de miles de mujeres y hombres que optaron por la vocación de servir a los demás.


que le regalo a mi novio que es papa una sobrina es el mejor regalo que te puede dar una hermana regalo de cumpleaños para mi novio cristiano regalo ipad por domiciliar nomina 2015 tarjetas de regalo ropa\nSale solo 5€ con 5 días de Servicio de suporte y asesoramiento y te dan las dos verciones, para PS 1.6 y PS 1.7, Funciona perfectamente, mejor que muchos otros modulo de pago simileras que ya probé y sobre todos es MIT License y una vez descargado puedes utilizarlo infinitas veces para todas tu tiendas prestashop.\nTarjeta Regalo para Prestashop - YouTube\nModulo: las tarjetas de regalo - venden códigos de descuento - posted in Modulos y temas gratuitos + pagos para Prestashop: Las tarjetas de regalo - venden códigos de descuento. Con este gran addon usted puede fácilmente aumentar las ventas en su tienda. este plugin prestashop le permite vender los certificados de tarjetas de regalo en su\nModulo Tarjeta Regalo para Prestashop versión 1.4 y 1.5\nModule De Tarjeta regalo Prestashop by Knowband by\nTarjetas regalo. Esta táctica es un éxito asegurado, ya que el año pasado en la época navideña, dos de cada tres consumidores, adquirieron tarjetas regalo para regalárselas a sus familiares. Este modulo de Prestashop es muy bueno, y lo que más me gusta es:\nLa extensión de tarjeta de regalo de PrestaShop crea una pestaña a parte con el nombre de "Mis tarjetas de regalos", la cual está disponible en la sección de cuentas de clientes. Pueden ver y administrar las tarjetas de regalo cuando ingresen a sus cuentas. Haga clic en el DEMO para conocer más acerca de esta extensión de tarjeta de regalo de PrestaShop. Ver más. Funcionalidades\nMódulo de la semana para Prestashop, tarjetas regalo\nLos módulos de tarjetas regalo para Prestashop permitem crear tarjetas de distintas cantidades, establecer la caducidad de las mismas y determinar si el código puede usarse para varias compras para compras parciales. Esto las convierte en un gran aliado para aumentar las ventas. 5. Ofertas o descuentos temporales\nSaber el iva de cada producto si se usa una tarjeta regalo\nEl módulo es certificado de regalo - tarjetas de regalo - venta códigos de descuento v3.2.3 - por MyPresta.eu Supongo que te refieres a este modulo -> Prestashop Gift Cards - sell voucher codes. La ultima versión del modulo es la 3.3.2, prueba actualizarlo y revisa si con eso se soluciona.\nun regalo bonito para tu mejor amiga\npistas regalo viaje\nlazos regalo verde


Parlamento Infantil permite formar ciudadanía en niñas y niños tlaxcaltecas: ITE - Expediente Político.Mx\nHome Democracia Principal Parlamento Infantil permite formar ciudadanía en niñas y niños tlaxcaltecas: ITE\nParlamento Infantil permite formar ciudadanía en niñas y niños tlaxcaltecas: ITE\nZurya Escamilla Díaz (Tlaxcala, 22 de abril de 2022) El proceso para integrar el Parlamento Infantil es una oportunidad para la formación ciudadana de las niñas y niños de Tlaxcala, indicó Elizabeth Piedras Martínez, presidenta del Instituto Tlaxcalteca de Elecciones (ITE), durante la celebración de la convención estatal para integrar a la decimo tercera legislatura infantil.\nEn su mensaje, la consejera presidenta destacó que el ITE, además de organizar elecciones, tiene otras funciones encaminadas como preparar elecciones escolares y sumar a este tipo de ejercicios que permiten a las infancias acercarse a un proceso democrático a través de la disertación, la escucha, y el ejercicio libre y secreto del voto.\nDe igual forma, comentó que en una democracia es importante que todas las personas hablen, escuchen y sean tolerantes con las opiniones de los demás, aún cuando haya desacuerdo; por lo que este tipo de experiencias contribuye a la formación de la ciudadanía.\nEn su intervención la diputada Laura Alejandra Ramírez Ortiz, presidente de la Comisión educación, cultura, ciencia y tecnología en el Congreso; destacó el trabajo que realiza el Instituto para organización transparente de los proceso electorales, apegado a las reglas de la democracia; lo que es muestra de su compromiso.\nDestacó que el Parlamento Infantil que se desarrollará el próximo 30 de abril será un espacio para que las niñas y niños tlaxcaltecas alcen la voz, reflexionen y analicen temas como la discriminación, la tolerancia, el respeto y otros más que son importantes tocar para tratar de mejorar la calidad de vida de la población. Por ello, aseguró que todas las opiniones vertidas en este ejercicio se traducirán a políticas públicas.\n"Los queremos escuchar fuertes, los queremos escuchar claros, los queremos escuchar con esa bondad y nobleza de corazón que sabemos que ustedes tienen", manifestó y recordó que la democracia no solo se construye con los procesos electorales, sino que es una labor diaria de opinar y participar.\nEn su intervención, el consejero electoral Hermenegildo Neria Carreño, explicó que en esta convención se eligieron a 15 legisladores infantiles, uno por cada distrito de mayoría relativa; quienes previamente participaron en una mesa de trabajo\nDe esta manera, Melisa Carrera Sánchez representará al distrito 01; Citlali Solís Pastén al 02; Dulce Olivia Quintero Hernández, al 03; David del Razo Pozos al 04; María Fernanda García Velasco al 05; Angy Michel Sánchez Pérez al 06; Mya Bonilla Cortés, 07; Mario Ángel Reyes Barrera, 08; Grecia Rugerio Sánchez, 09; Juan Eduardo Portillo Sosa, 10; Martha García Encarnación, 11; Ian Gael Velázquez Berruecos, 12; Blanca Merari García Munive, 13; Daniela Morales, 14; y María Belén García Pérez, 15.


"Prepárate porque te van a deportar" – Contagio Radio\n«Prepárate porque te van a deportar»\nnoviembre 17, 2016 at 2:37 pm\nFoto: Unimedios Agencia de Noticias\nLuego de las elecciones llevadas a cabo el pasado 8 de Noviembre en Estados Unidos, las voces de protesta en este país no se han detenido. Cientos de movilizaciones y actos simbólicos han hecho que el mundo, conozca el descontento de un amplio número de personas que no votaron por el actual presidente electo, Donald Trump.\nFrancisco Herrera, líder comunitario en San Francisco en Estados Unidos manifestó que las señales de protesta continúan en todas las escuelas para “repudiar” las elecciones, y precisó que es necesario recordar “que ni siquiera voto la mitad de la gente y eso es un mensaje de que la gente ya no está creyendo en el proceso electoral”.\nCerca de 30 ciudades en todo Estados Unidos, han continuado con las marchas y las diversas expresiones de repudio al presidente electo que ha amenazado con expulsar a millones de latinoamericanos, ha dicho que creará muros para no permitir la entrada de latinos y musulmanes y perseguirá a familias por su orientación sexual.\nPor su parte, luego de pasados 9 días de las presidenciales en USA, el candidato electo Donald Trump ha empezado a dar a conocer algunos nombres que podrían acompañarle en su mandato, para el cual se posesiona en enero de 2017.\nStephen Bannon ha sido una de esas personas que Trump ha designado para que trabaje con él, más exactamente como consejero presidencial en todo las labores que vaya a realizar el presidente electo. Diversos grupos de organizaciones civiles ya han mostrado su rechazo a la designación de Bannon pues lo acusan de ser un extremista.\nPara Francisco, tras todos los anuncios hechos por Donald Trump la población se encuentra como en una “resaca, porque mucha gente que votó en contra de Hilary Clinton por cuestión de aborto, porque la gente se sintió traicionada por las políticas elitistas (…) hubo mucha confusión y ahora que se están viendo ataques raciales y el peligro de deportar gente, muchas iglesias, pastores evangélicos, se han dado cuenta que su propia membresía está en peligro y se arrepienten de su voto”. Le puede interesar: Donald Trump no es nuestro presidente: latinos en usa\n“Prepárate por que te van a deportar”\nAsí lo aseveró Herrera, quien contó para Contagio Radio que en las escuelas los niños latinos están siendo víctimas de continuos ataques y violencias “(…) a una niña de 9 años le dijeron en la escuela: ¿eres latina? Pues prepárate porque te van a deportar”.\nSegún cifras otorgadas por Herrera, solo en los últimos 8 días, más de 300 casos de ataques de violación a los derechos humanos, de violencia contra personas latinas “incluso se está viendo la violencia entre los mismos latinos que tienen papeles o que llevan mucho tiempo aquí – en Estados Unidos – contra personas que acaban de llegar” agregó Francisco.\nEn la actualidad organizaciones sociales y líderes, están realizando diversas actividades encaminadas a que la movilización social se convierta en acciones que redunden en la protección de latinos, comunidad LGBTI e ilegales que están en Estados Unidos.\nSe pretende que a mediano plazo pueda lograrse la legalización de cientos de latinos e intentar frenar acciones que puedan perjudicar a la sociedad que habita en USA “nos estamos preparando para protegernos, también estamos haciendo que la gente empiece a legalizarse y por último hacerse ciudadanos para poder participar” concluyo Francisco Herrera. Le puede interesar: “Xenofobia no debe tener un lugar en la política estadounidense”: WOLA\nTags Deportados Donald Trump Estados Unidos Hilary Clinton Latinos en Norte America Latinos en USA Votaciones\nPrevious articleEn España el 48.9% de las horas extra laborales no están siendo remuneradas\nNext articleIntereses económicos quieren frenar el Derecho al agua


Comienzan en Caracas los debates previos a la reunión de Ministros de Interior y Seguridad del Mercosur - NODAL\nComienzan en Caracas los debates previos a la reunión de Ministros de Interior y Seguridad del Mercosur\nLas naciones que conforman el Mercado Comun del Sur (Mercosur) y estados asociados inician hoy en esta capital un encuentro de expertos, con vistas a preparar la cita de ministros del Interior y Justicia.\nSegún el ministerio de Relaciones Interiores, Justicia y Paz, el titular de esa cartera, Miguel Rodríguez, presidirá la instalación de la Primera Ronda de Encuentros Técnicos Preparatorios de la 34 Reunión de Ministros de Interior y Seguridad (RMI) y 40 Reunión de Ministros de Justicia (RMJ) del Mercosur y Estados Asociados.\nPor Venezuela asistirán al foro la presidenta del Tribunal Supremo de Justicia, Gladys Gutiérrez y los titulares de Relaciones Exteriores, Elías Jaua, y del Servicio Penitenciario, Iris Valera,\nLa cita tiene como propósito definir la agenda que se debatirá en los mencionados encuentros de alto nivel, a celebrarse en la Isla de Margarita el 8 de Noviembre de este mismo año.\nPara este primer encuentro se espera que asistan las delegaciones de Argentina, Brasil, Bolivia, Chile, Colombia, Ecuador, Uruguay, Paraguay y Perú.\nLa apertura de la programación prevé la presentación de una conferencia sobre el delito de Trata de Personas y el Seminario Internacional de Modelos y Regulación sobre Uso de la Fuerza en la Acción Policial.\nLas reuniones preparatorias estarán distribuidas en 12 grupos de trabajos y cada uno de ellos responde a una agenda tentativa.\nEntre los temas que serán discutidos figuran Acuerdo Migratorio del Mercosur, Trata de Personas, Seguridad en Eventos de Fútbol, Seguimiento y Difusión del Sistema de Intercambio de Información de Seguridad en Mercosur, Delitos Cibernéticos, entre otros.


Menor producción de acero bruto en 33 meses preocupa al mercado latinoamericano | Alacero\nTecnologías al servicio del Medio Ambiente y la Seguridad\nLa industria latinoamericana enfrenta el reto del bajo consumo, pero hay signos...\nMenor producción de acero bruto en 33 meses preocupa al mercado latinoamericano\nPresiones internas afectan el rendimiento, a pesar de la estabilidad del consumo\nAlacero - Sao Paulo, Brasil, 04 de noviembre de 2019. El crecimiento de la capacidad mundial se intensificó, haciendo el panorama más desafiador para la industria del acero. Ulf Zumkley, presidente del Comité del Acero de la OCDE, expresó recientemente serias preocupaciones sobre el crecimiento inesperado de las capacidades de producción de acero en 2019, lo que viene empeorando el exceso de capacidad y ha contribuido al aumento de las tensiones comerciales.\nAnte este problema, Alacero se ha unido a otras 15 asociaciones de la industria en América del Norte y del Sur, Europa, África y Asia para demandar a los gobiernos de los países productores de acero a fortalecer los esfuerzos para eliminar la sobrecapacidad persistente en la producción, incluyendo foros de negociación como el "Foro Global de Sobrecapacidad del Acero (GFSEC)", del G20, para buscar la implementación inmediata de reglas y soluciones efectivas que reduzcan la sobrecapacidad, su impacto y sus causas.\nEn medio de las crisis políticas y económicas que impactan negativamente los mercados internos y la competitividad externa, el déficit comercial regional se amplió en septiembre. La producción de acero bruto llegó a 4.692 millones de toneladas (Mt), el peor indicador en 33 meses desde diciembre de 2016, cuando el resultado alcanzó 4.651 Mt. La cifra fluctuó a la baja, quedándose un 5% por debajo de los 4.922 Mt observados en agosto. Además, se ha desacelerado: cayó un 16% en comparación con septiembre de 2018, un 7% en el acumulado del año hasta septiembre y estuvo un 9% por debajo del promedio durante los primeros 8 meses. La caída del 5% en el saldo regional negativo fue impulsada por Brasil (48%), México (24%) y Argentina (12%).\nUno de los factores de la baja producción fue el aumento de los costos del mineral de hierro, que afectó los márgenes de las empresas. Dado el bajo precio del acero y el salto en el costo de las materias primas, algunos productores han optimizado su producción. Otro factor fue el cierre de tres importantes altos hornos en Brasil, el mayor productor de acero de la región. Las perspectivas de baja para los tres mayores productores regionales, por lo tanto, no favorecen una recuperación regional para el año.\nPor otro lado, el consumo de productos laminados alcanzó 5.615 Mt en agosto, un aumento del 2% en comparación con julio, y el mejor indicador en 5 meses. Sin embargo, el resultado fue un 6% menor que en agosto de 2018, cuando se registraron 5.977 Mt. Aunque fue un 4% superior al promedio de los primeros 7 meses del año, el total acumulado hasta agosto cayó un 5% en relación al año anterior. El saldo regional fue positivo con 135 mil toneladas, un aumento del 2% en comparación con julio. El aumento fue impulsado por Argentina (40%), Brasil (36%), Chile (36%) y México (20%). Por otro lado, Costa Rica vio caer su demanda un 50% de julio a agosto, acompañando a otros países que también registraron una caída, como Colombia y Ecuador (-9 mil t).\nLa producción de acero laminado sufrió también una caída, y terminó septiembre con 4,177 Mt, un 8% menos que en septiembre de 2018, alcanzando el nivel más bajo en 7 meses. El resultado fue un 2% inferior al promedio de los primeros 8 meses y retrocedió un 7% en lo que va del año con relación a 2018, aunque disminuyó un 0,9% en comparación con agosto. La caída de 0.9% en el saldo regional negativo de 39 mil toneladas fue liderada por México y Argentina, que, además de aumentar negativamente el déficit, tuvieron saldos individuales negativos mayores que los regionales. Brasil se recuperó con la mejor producción desde mayo, con 1,932 Mt. El resultado brasileño alcanzó el 82% del impacto de Argentina y México. Así mismo, el déficit restante, aunque mínimo, apunta a un estancamiento económico que muestra fragilidad en el cuarto trimestre.\n“Los factores externos que afectaron los números del mercado del acero latinoamericano a principios de año están dando paso a presiones internas. Como parte del estancamiento económico ante las guerras comerciales y los conflictos internos, el aumento del consumo –resultado de una producción estancada, la caída de las exportaciones y el aumento de las importaciones– apunta a un mercado interno que carece de infraestructura y competitividad. En este contexto, el aumento del déficit comercial regional indica que América Latina se está convirtiendo en un importante consumidor para los mercados extranjeros que aprovechan esta fragilidad”, dice Francisco Leal, Director General de Alacero.\nAdemás de la desaceleración mundial, agravada por las crisis en Alemania, Italia y Reino Unido con el Brexit, y en consecuencia en China, hay también presiones externas que llegan a América Latina con las guerras comerciales entre Estados Unidos y China y entre Estados Unidos y la Unión Europea (UE). Los factores internos, por otro lado, están afectando con tipos de cambio, la inflación, el desempleo y otros desafíos sociales, con temas políticos en Argentina, Uruguay, Bolivia y Colombia, así como reformas en proceso en la mismo Colombia, Brasil, Chile y Ecuador; y temas económico-sociales con las crisis en Argentina y Venezuela, y las normas impuestas por el FMI, que han generado una serie de problemas también. Otros factores internos incluyen los bloques comerciales entre Argentina y Paraguay, Argentina y Brasil, y entre México, Estados Unidos y Canadá (T-MEC).\nLa participación de las importaciones en el consumo se mantiene relativamente estable, representando el 36% del consumo acumulado hasta agosto de 2019, por tercer mes consecutivo. En los primeros 8 meses de 2018 representaron el 35%. En agosto, las importaciones totalizaron 1.987 Mt, 1% más que en julio y el mejor indicador en 3 meses, quedándose 3% por encima del promedio de los primeros 7 meses del año. Por otro lado, el resultado mostró una disminución del 7% en comparación con el mismo mes de 2018, además de una baja del 3% en el acumulado en comparación con el año pasado.\nLos mayores descensos fueron en Costa Rica (-40 mil t), Brasil (-15 mil t) y El Salvador (-14 mil t). Las altas principales en las importaciones se observaron en México (48 mil t), Chile (26 mil t), Panamá (25 mil t) y Argentina (11 mil t). México y Argentina apuntan a un reemplazo de la producción por importaciones para satisfacer la demanda interna, lo que debilita sus exportaciones.\nExportaciones pierden el ritmo\nEn agosto, las exportaciones totalizaron 615 mil t, disminuyendo 10% con relación a julio y un 29% en respecto al mismo mes del año pasado – el peor indicador en 11 meses. Además de estar un 21% por debajo del promedio de los primeros 7 meses, el resultado de las exportaciones en el acumulado hasta agosto mostró que hubo una disminución del 9% en comparación con el mismo período de 2018. Las mayores caídas ocurrieron en Brasil (-25 mil t), Chile (-24 mil t) y Argentina (-17 mil t), mientras que los mayores incrementos se registraron en Guatemala (4 mil t) y Perú (3 mil t).\nIncluso con la disminución de las importaciones en Brasil, la caída de las exportaciones – que bajaron un 7% interanual en comparación con 2018 – acompañada de un aumento en la producción y el consumo, aunque breves, indica un estancamiento del mercado interno.\nAumento del déficit en la balanza comercial\nEn agosto, el saldo de la balanza comercial fue negativo, totalizando -1.370 Mt, el peor indicador en 5 meses. El déficit fue un 7% más alto que en julio y un 8% más alto que en el mismo mes de 2018, con un aumento acumulado del 0,6% en comparación con el año pasado. Brasil y Argentina se destacaron por sus saldos positivos de enero a agosto, que crecieron 1,399 Mt y 163 Mt toneladas, respectivamente.\nLos mayores saldos negativos en el mismo acumulado fueron vistos por México, Chile, Perú y Ecuador, que representaron el 50%, 16%, 13%, 11% y 7% del déficit, en ese orden. A pesar de las políticas de apertura comercial, las crisis políticas en Colombia, Chile, Perú y Ecuador fueron factores agravantes en este escenario, mientras que México continúa sufriendo la desaceleración económica. ••\nAlacero – Asociación Latinoamericana del Acero – es la entidad civil sin fines de lucro que reúne a la cadena de valor del acero de América Latina para fomentar los valores de integración regional, innovación tecnológica, excelencia en recursos humanos, seguridad en el trabajo, responsabilidad empresarial y sustentabilidad socio-ambiental. Fundada en 1959, está integrada por 40 empresas de 12 países de América Latina, cuya producción es cercana a las 70 millones de toneladas anuales.


Pasaportes y visados en Reino Unido\nLos ciudadanos de la Unión Europea pueden entrar en Reino Unido con su documento nacional de identidad (DNI) o pasaporte en regla.\nLa situación para los ciudadanos no comunitarios varía en función del país de origen y de la duración de los estudios. Para cursos inferiores a seis meses hay que pedir una visa de estudiante visitante (short term study visa). Para obtenerla debes demostrar:\nHaber sido aceptado en un curso reconocido por el gobierno\nTener suficiente dinero para mantenerte por ti mismo durante el tiempo de la estancia\nTener dinero para pagar tu vuelo de salida del país\nAquellos estudiantes que vayan a realizar un curso de más de seis meses deberán solicitar una visa de estudiante general, llamada Tier 4 (General) student visa. Puedes aplicar para este tipo de visa si:\nHas sido aceptado en un curso reconocido por el gobierno\nDemuestras tener suficiente dinero para mantenerte por ti mismo durante el tiempo de la estancia y pagar el curso\nPuedes comunicarte inglés\nEn ambos casos, debes solicitar la visa antes de tres meses del inicio del curso. La solicitud se inicia online pero deberás acudir a una oficina diplomática del Reino Unido en tu país para completarla. La espera media para obtener respuesta es de tres semanas.\nPara conocer las circunstancias que se aplican en cada situación particular el gobierno británico ha creado un rápido y claro formulario.