CNFL explora en banca estatal mejores condiciones para su deuda en dólares – La Nación\nCNFL explora en banca estatal mejores condiciones para su deuda en dólares\nAl cierre del 2020, subsidiaria del ICE debía $117,1 millones ligados a planta hídrica Balsa Inferior y el Parque Eólico Valle Central\nagosto 03, 2021 at 10:00 CST\nLa CNFL es una subsidiaria del ICE. Su sede central se ubica sobre la quinta avenida, en San José. FotografÍa: Archivo (Pablo Montiel)\nEn busca de mejores condiciones para gestionar sus deudas, especialmente, las obligaciones en dólares, la Compañía Nacional de Fuerza y Luz (CNFL) asegura que desde 2019 toca las puertas de bancos estatales.\nLa subsidiaria del Instituto Costarricense de Electricidad (ICE) adeudaba al 2020 $117,1 millones (unos ¢72.683 millones), correspondientes a cuatro préstamos con los cuales financió dos obras de generación: la hidroeléctrica Balsa Inferior (Florencia de San Carlos) y el Parque Eólico Valle Central (Santa Ana).\nAmbas instalaciones, confirmó la empresa, representan casi el 100% de su deuda en dólares.\nAparte, debía ¢112.283 millones, como revelan los estados financieros con corte a diciembre del 2020.\nEsas obligaciones en colones incluían otros préstamos, emisiones de bonos, pagos por arrendamientos y dineros adeudados a su casa matriz (el ICE), por inyecciones de capital para ayudarle a reestructurar cuentas.\nSegún Juan Manuel Casasola, director de Administración y Finanzas de la Compañía, desde finales del 2019 trabajan en la renegociación de deudas con diversos bancos.\n“Durante el segundo semestre del año 2020 y primer semestre del año 2021 se avanzaron las negociaciones con el Banco Popular, Banco de Costa Rica (BCR) y Banco Nacional (BN), negociando el refinanciamiento de dichos créditos”, precisó.\nCon el Banco Popular, dijo, se concretó en junio una transacción para pagar obligaciones pendientes al ICE (un convenio de pago y un refinanciamiento para la serie B-1 de bonos) y se cancelaron saldos de créditos con Scotiabank y el Banco Internacional de Costa Rica (Bicsa), todos en dólares. Además, se canceló un crédito de corto plazo con el Popular.\nEntretanto, con el BCR y el BN, la Compañía procura pasar a colones su deuda en dólares y refinanciarla en esa primera moneda.\nDe esa forma, añadió Casasola, pretenden reducir su exposición al riesgo cambiario (subidas del colón frente al dólar) que los obligarían a desembolsar más dinero si dejan en dólares todas sus obligaciones.\n[ ICE intervendrá CNFL para restaurar finanzas de su subsidiaria ]\nSu búsqueda de mejores condiciones coincide con uno de los objetivos de la intervención que alista el ICE en las finanzas y actividades de su subsidiaria.\nLa idea, anunció en junio su casa matriz, consiste en renegociar préstamos y trasladar dólares a colones cuanto sea posible de los créditos.\nEsa “reingeniería financiera” del ICE en su filial llega por pedido directo del presidente de la República, Carlos Alvarado, quien habló en mayo de “malas decisiones” de la CNFL que hoy comprometen la estabilidad financiera del ICE en referencia a proyectos eléctricos “mal planificados y ruinosos”.\nBalsa Inferior pasó de un costo estimado inicial de $75 millones a uno real de $361 millones, mientras que el Parque Eólico, de $21 millones a $54 millones.\nSobre la posibilidad de vender activos (como también lo ha considerado el ICE), Casasola comentó que ellos realizan un estudio financiero y técnico de terrenos que pueden resultar atractivos en el mercado inmobiliario.\n“En este momento no se puede indicar puntualmente cuáles de estos terrenos podrían ser sujetos de venta y que el mercado los adquiera”, indicó.\nSobre una salida de personal de la CNFL en el marco de la intervención del Instituto, el vocero únicamente indicó que hace seis años se tomaron acciones para mejorar la eficiencia de los procesos y la estructura funcional de la empresa.\nHasta ahora, el ICE se ha reservado las acciones específicas que tomará en la CNFL, aunque al anunciar el plan, a finales de junio, adelantó que revisará los contratos de mantenimiento en los activos de la Compañía como parte de su propia valoración técnica de inmuebles no estratégicos.\nLa nueva hoja de ruta de la CNFL aún permanece en revisión final por parte del Consejo Directivo del ICE.


Checklist rápido de Mercado Envíos Full - Centro de vendedores\nAsegúrate que exista la publicación del producto que quieres enviar, ya sea que esté activa o inactiva. Para que podamos hacer el ingreso a la bodega, todos tus productos deben estar ligados a un número de publicación.\n3) Empacar tus productos\n7) Asegurar la llegada en tiempo y forma a la bodega\nDesde el panel te ayudamos a programar y calendarizar tu cita en la bodega de Full. Es muy importante que cumplas con los horarios que elegiste para que el ingreso de tus productos sea lo más rápido posible. No aplica si envias tus productos por correo o paquetería como DHL y FedEx.\nPara un mejor control procura estar al pendiente de tus envíos una vez que están en camino a nuestra bodega. Ante cualquier inconveniente podrás contactar al equipo de atención a cliente con el botón ¿Necesitas ayuda? dentro del panel de Full.\nAhora que ya tienes todo listo, es momento de seguir enviando tus productos a la bodega de Mercado Envíos Full.\nPara optimizar tu gestión y tu operación, te recomendamos descargar e imprimir esta versión simplificada de la lista para que la puedas revisar cada vez que realices un envío a la bodega.\nDescarga checklist en PDF


Una hora de visita real en Liébana | El Diario Montañes\nliebanaUna hora de visita real en Liébana\nUna hora de visita real en Liébana\nDon Juan Carlos y Doña Letizia, durante la inauguración del Centro Botín en junio. / Celedonio Martínez\nFelipe VI y doña Letizia tendrán el tiempo justo para cruzar la Puerta del Perdón de Santo Toribio, ver de cerca el Lignum Crucis y recorrer el monasterio\nD. MARTÍNEZ | P. ÁLVAREZ SANTANDER/POTES. Martes, 18 julio 2017, 18:43\nLos Reyes de España visitarán mañana Cantabria con la intención de apoyar con su presencia la celebración del Año Jubilar Lebaniego. Para ello, Don Felipe y Doña Letizia se acercarán hasta el monasterio de Santo Toribio en un viaje oficial con parada única y que estará cronometrada. Llegarán a las 10.40 horas y, si se cumple el protocolo establecido por la Casa del Rey, a las doce menos veinte de la mañana estarán ya de vuelta. Una hora exacta en la que tendrán el tiempo justo para cruzar la Puerta del Perdón y ver de cerca el Lignum Crucis que se conserva en el interior del templo, el que, según la tradición, es el pedazo más grande de la cruz de Cristo que se conserva en la actualidad.\nLa visita de los monarcas será una réplica de la que estaba planeada para el pasado 23 de junio y que tuvo que suspenderse por la previsión meteorológica adversa. Entonces, la niebla y la lluvia que se esperaban para la jornada en la que también se inauguró el Centro Botín -a este acto sí pudieron asistir sin problemas- hacían poco recomendable volar en helicóptero hasta la comarca lebaniega. El mismo programa, pero con casi un mes de diferencia.\nLa pareja real aterrizará en el helipuerto de Tama (Cillorigo de Liébana) alrededor de las diez y media de la mañana y desde allí se desplazará por carretera hasta el monasterio de Santo Toribio. Los encargados de recibirles serán el presidente de Cantabria, Miguel Ángel Revilla; la presidenta del Parlamento, Dolores Gorostiaga; el delegado del Gobierno en la región, Samuel Ruiz, y el alcalde de Camaleño, Óscar Casares. Está previsto que antes de entrar al templo saluden también al resto de consejeros, a los frailes franciscanos que custodian la reliquia y a los cofrades de la Santísima Cruz.\nAterrizarán en Tama y desde allí se desplazarán por carretera hasta el monasterio\nLa llegada al templo está prevista para las 10.40 horas. A las puertas les esperarán las autoridades\nComo es tradición, pasarán por la Puerta del Perdón, requisito indispensable para todos los peregrinos.\nTendrán la oportunidad de ver de cerca la reliquia, la pieza más grande de la cruz de Cristo que se conserva.\nSe han instalado unos paneles que explican la historia del monasterio y la figura de Beato de Liébana\nLa visita acabará alrededor de las 11.40 horas. Harán el camino contrario hasta el helipuerto de Tama.\nTras atravesar la Puerta del Perdón, entrarán en la sacristía para firmar en el libro de honor del templo y posteriormente verán el Lignum Crucis. De ahí pasarán al claustro, donde recibirán una explicación pormenorizada -desde la Casa del Rey afirman que ya están de sobra familiarizados- de la historia del monasterio y la figura de Beato.\nEl deseo de los vecinos de la comarca, que como explicaba entonces el alcalde de Potes, Javier Ruiz Gómez, quedaron un tanto «desilusionados» cuando conocieron la noticia de la anulación de la visita en junio, era que al aplazar su presencia en Liébana pudieran prolongar al menos durante medio día su estancia en la zona. Entonces, la agenda institucional hacía prácticamente imposible realizar un paseo por el casco viejo de la villa o conocer la exposición del Beato de Liébana en la Torre del Infantado. Ahora, aunque los Reyes de España no tienen más actos públicos programados para ese día, la Casa Real ha preferido no cambiar los planes iniciales.\nDespués de su presencia en la región el pasado mes de junio con motivo de la inauguración del Centro Botín en Santander, la de mañana será la segunda ocasión en que los Reyes visiten de manera conjunta la comunidad autónoma desde su proclamación en junio de 2014. Previamente, habían pisado suelo cántabro en actos oficiales en diversas ocasiones. Para Felipe VI, esta será su decimotercera visita desde que en julio de 1973 acompañara a su padre a Laredo para participar en una regata. La capital ha sido la parada más frecuente en sus viajes.\nTendrán el tiempo justo para pasar por la Puerta del Perdón, contemplar el Lignum Crucis y conocer el monasterio\nEl ahora Rey, cuando todavía era Príncipe de Asturias, asistió al centenario de la fundación de la Caja de Ahorros (1998), inició en la ciudad una visita más amplia por la región en 1999, embarcó en 2001 en el buque escuela 'Juan Sebastián Elcano' y participó en un encuentro científico en La Magdalena en 2004. Fue el mismo año en que contrajo matrimonio con la periodista asturiana. Se casaron en mayo y sólo tres meses después, en agosto, la pareja apareció por sorpresa paseando por San Vicente de la Barquera.\nDesde entonces, sólo han regresado por motivos de agenda, ya sea de forma conjunta -como durante el Encuentro de Telecomunicaciones de la UIMP de 2011- o por separado. Todavía como heredero, Felipe VI asistió en 2007 a una jornada del Instituto de Comercio Exterior en el Palacio de Exposiciones y a la inauguración del curso universitario de 2011 en la Facultad de Derecho. Ya con el peso de la corona sobre sus hombros, el monarca se acercó a la región en septiembre de 2014 con motivo del Mundial de Vela de Santander. Esa misma jornada, mostró sus condolencias a la familia de Emilio Botín en el funeral del banquero cántabro.\nEstudian poner autobuses para subir desde Potes\nPara que los vecinos de Liébana puedan ver de cerca a los monarcas, está previsto –la confirmación llegará hoy– que mañana se habilite una flota de autobuses que haga el recorrido entre Potes y el monasterio de Santo Toribio, el único lugar que pisarán Don Felipe y Doña Letizia si se cumple el programa tal y como está diseñado. La idea es facilitar el acceso a todos aquellos interesados en ver de cerca a los Reyes, ya que durante los momentos previos a su llegada la carretera estará cortada o muy limitada al tráfico, según detalla la Casa del Rey. La intención de las autoridades es que los autocares salgan de la estación de la villa desde las 8.00 hasta las 10.00 horas.\nLetizia Ortiz Rocasolano, Felipe Vi Rey De España, Principe Felipe, Emilio Botín, Miguel Ángel Revilla Roiz, Dolores Gorostiaga, Samuel Ruiz Fuertes, Año Jubilar Lebaniego, Casa Real\nPrimeras imágenes de 'Beato' en libertad\nNacen las 'Liebanucas', el nuevo dulce del Año Jubilar Ultimátum a los dueños de cabras en el Desfiladero


Nos unimos al esfuerzo por sacar nuestro país adelante\nComo equipo nos hemos unido para aportar en esta coyuntura que se presenta en el país y en el mundo debido a la pandemia del COVID-19.\nPor esto, desde el mes de marzo implementamos un esquema de trabajo remoto que nos permite continuar operando y al mismo tiempo disminuir el riesgo de contagio de nuestro equipo, logrando mantener todos los colaboradores en el ejercicio de sus funciones.\nAdemás, decidimos adelantar el lanzamiento de nuestra nueva App de Crédito Digital, siendo una de las primeras Fintech colombianas en implementar un crédito por libranza 100% digital y así llegar cada vez a más regiones del país sin que los clientes deban desplazarse y sin pagar costos adicionales por el uso de esta herramienta.\nEn relación con las opciones de crédito tradicionales, decidimos bajar en un 25% la tasa de interés para todos los clientes que necesiten refinanciar sus créditos debido a la coyuntura económica generada por el impacto del aislamiento preventivo. Sabemos que esta decisión impacta los resultados de nuestra operación, especialmente teniendo en cuenta que somos una empresa joven, pero estamos convencidos de que estos esfuerzos son los que hacen la diferencia en la calidad de vida de los cientos de familias afectadas y esa es nuestra prioridad en este momento.\nDe la misma manera y, honrando la responsabilidad social que nos caracteriza, aportamos mercados a 500 familias que necesitaban apoyo para subsistir en medio de la cuarentena. Dado que nuestra familia ExcelCredit también se ha visto afectada con la situación, promovimos y apoyamos la donación de dinero por parte de nuestros colaboradores a otros miembros del equipo, los cuales recibirán este apoyo económico de forma anónima por parte de sus compañeros de trabajo, reafirmando los lazos que nos unen y que fortalecen nuestra cultura corporativa.\nSabemos que nuestros recursos son limitados, pero también reconocemos que cualquier apoyo suma y no queremos dejar de actuar en medio de una situación sin precedentes que ha afectado nuestros clientes, nuestras familias y nuestros colaboradores. Esperamos que este esfuerzo inspire a muchas más empresas y personas para que, con el aporte de todos, contribuyamos a que nuestro país salga adelante.\nJonathan Mishaan Gerente General ExcelCredit SAS.\nFintech enfocada en brindar préstamos por libranza a pensionados, docentes, empleados públicos y policías. Una de las modalidades de solicitud de crédito, se realiza 100% online a través de nuestra app ExcelCredit Crédito Digital de forma ágil y confiable ¡simplemente chateando!


Cerca del final, los convencionales participantes entonaron El Derecho de Vivir en Paz del cantante Víctor Jara.\nPor Cristián Meza 4 de Agosto, 2021 › 20:37 hrs\nPasadas las 13:00 horas, en los jardines del palacio, miembros del pueblo Diaguita se preparaban para llevar a cabo una Pawa en agradecimiento a la Pachamama. AGENCIA UNO\nBanderas diversas, agrupaciones, representantes indígenas y una ceremonia ancestral marcaron esta jornada en el ex Congreso, cuando se cumple el primer mes de la Convención Constitucional.\nDespués de aproximadamente 10 minutos minutos se pidió un fuerte grito a todos los participantes, antes de partir con la segunda parte, encabezada por la integrante de la Convención Elsa Labraña y la agrupación ecofeminista, donde se pidió a los asistentes tomarse de las manos y moverse, luego se pedía que se soltaran y caminaran libremente, dejando espacios para respirar y meditar.\nCerca del final, los participantes entonaron El Derecho de Vivir en Paz del cantante Víctor Jara que, a juicio de la convencional Giovanna Grandón, conocida como Tía Pikachú, “es el emblema, no solamente de Chile, del mundo entero. Todos necesitamos vivir en paz, en unión”. Asimismo, aseguró que “todos los partidos políticos decían que era necesario esta ceremonia de reflexión”.


Nuevos Riesgos Para El Agua Potable: Microcistina: Mejora de la calidad del agua de consumo por eliminación de toxinas | Citoplasma | Cianobacterias\nNuevos Riesgos Para El Agua Potable: Microcistina: Mejora de la calidad del agua de consumo por eliminación de toxinas\nSalvaSalva microcistina.pdf per dopo\nOr Ganelos Rafael Hernández Barba Celulares 2010\nNUEVOS RIESGOS PARA EL AGUA POTABLE:\nMejora de la calidad del agua de consumo por eliminación de toxinas.\nOX-CTA S.L. Yolanda Vergara Armando Moya\nDpto. Bioquímica y Biología Molecular y Celular Universidad de Zaragoza María Luisa Peleato Sánchez Emma Sevilla Sara López\n1.2. El problema de las algas: Efectos indeseados de las algas y las cianobacterias en aguas dulces\n1.3. La cianotoxina microcistina\n4. EFECTO DE BIOCIDAS SOBRE FITOPLANCTON\n4.2. EFECTO SOBRE ANABAENA PCC 7120\n4.2.1. Características de Anabaena PCC 7120\n4.2.2. Efecto de OX-VIRIN sobre Anabaena PCC 7120\n4.2.3. Efecto de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN sobre Anabaena PCC 7120\n4.2.4. Efecto de OX-AGUA sobre Anabaena PCC 7120\n4.3. EFECTOS DE SOBRE MICROCYSTIS PCC 7005\n4.3.1. Características de Microcystis PCC 7005\n4.3.2. Efecto de OX-VIRIN sobre Microcystis PCC 7005\n4.3.3. Efecto de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN sobre Microcystis PCC\n4.3.4. Efecto de OX-AGUA sobre Microcystis PCC 7005\n4.4. EFECTOS SOBRE CHLORELLA\n4.4.1. Características de Chlorella fusca\n4.4.2. Efecto de OX-VIRIN sobre Chlorella fusca\n4.4.3. Efecto de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN sobre Chlorella Fusca\n4.4.4. Efecto de OX-AGUA sobre Chlorella Fusca\n4.5.1. Efecto de OX-VIRIN sobre Anabaena PCC 7120\n4.5.2. Efecto de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN sobre Microcystis PCC 7005\n4.5.3. Efecto de OX-AGUA sobre Chlorella fusca\n5. EFECTO DE OX-VIRIN SOBRE MICROCISTINA 64\n5.2.1. Efecto de OX-VIRIN sobre albúmina bovina\n5.2.2. Efecto de OX-VIRIN sobre microcistina LR\n5.2.2.1. Determinación de microcistina por HPLC 65\n5.2.2.1.1. Recta de calibrado\n5.2.2.1.2. Efecto de OX-VIRIN sobre microcistina LR tras 1 hora de tratamiento\n5.2.2.1.3. Efecto de OX-VIRIN sobre microcistina LR en 24 horas de tratamiento\n5.2.2.1.4. Efecto de OX-VIRIN sobre microcistina LR en 48 horas de tratamiento\n5.2.2.1.5. Efecto de OX-VIRIN sobre microcistina LR en 72 horas de tratamiento\n5.2.2.2. Determinación de microcistina por espectrometría de masas 68\n5.2.2.3. Determinación de microcistina por ensayo de inhibición de protein-\n5.2.2.3.1. Ensayo de protein-fosfatasa con OX-VIRIN neutralizado\n5.2.2.3.2. Ensayo de inhibición de protein-fosfatasa con microcistina tratada con OX-VIRIN\n5.2.2.3.3. Estudio de la dosis de 3% de OX-VIRIN\n5.2.3. Efecto de OX-VIRIN sobre microcistina de cultivos de cianobacterias\n6. ESTUDIO DE LA EFICACIA FRENTE A MICROCISTINA DE OX-VIRIN POTENCIADO CON DIFERENTES SALES DE HIERRO\n6.1. Estudio de la eficacia de diversas concentraciones de OX-VIRIN con cloruro ferroso\n6.2. Estudio de la eficacia de 1% OX-VIRIN con diversas sales de hierro\n7. REALIZACIÓN DE ENSAYOS DE DESTRUCCIÓN DE MICROCISTINAS UTILIZANDO OX- VIRIN ENRIQUECIDO CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO\n8. ESTUDIO DE LA EFICACIA COMO AGENTE ELIMINADOR DE MICROCISTINAS DE OX- AGUA 2ª GENERACIÓN\n9. ESTUDIO DE LA EFICACIA DE LA RADIACIÓN ULTRAVIOLETA COMO POTENCIADOR DE LA ACCIÓN OXIDANTE DE OX-VIRIN Y OX-AGUA 2ª GENERACIÓN\n9.1. Efecto del peróxido de hidrógeno y radiación ultravioleta sobre ovoalbúmina\n9.1.1. Visualización de las muestras por SDS-PAGE\n9.1.2. Medidas espectrofotométricas de las muestras\n9.2. Efecto de peróxido de hidrógeno y de OX-AGUA 2ª GENERACIÓN potenciados con UV\nsobre ovoalbúmina, Anabaena sp. y Microcystis\n9.2.1. SDS-PAGE de las muestras incubadas bajo luz UV\n9.2.2. Lectura de las placas a 450 nm y 630 nm\n10. ENSAYOS CON SISTEMAS DE ACTIVACIÓN FÍSICOS\npotenciado con ultravioleta y TiO2\n10.1.1. Microcistina LR= 20 ng/ml\n10.1.2. Microcistina LR= 200 ng/ml\n10.1.3. Microcistina LR= 2000 ng/ml\n10.2. Estudio de la eficacia frente a microcistina de OX-VIRIN potenciado con ultravioleta y TiO 2\n10.2.1. Microcistina LR= 20 ng/ml\n10.2.2. Microcistina LR= 200 ng/ml\nGENERACIÓN potenciado con ultravioleta y TiO 2\n10.4. Estudio de la eficacia frente a Microcystis sp. PCC 7806 de OX-VIRIN potenciado con ultravioleta y TiO 2\n1.1. El agua como recurso\nEl siglo XXI es el siglo en el que el mayor problema se centrará en la calidad y la gestión del agua (UNESCO, 2003). La gestión del agua ha evolucionado favorablemente, pero en torno a 6.000 personas, la mayoría niños menores de cinco años, mueren diariamente por enfermedades relacionadas con el agua. El agua es, en este siglo, una preocupación de primera magnitud. En esta introducción se intenta dar una visión global sobre la importancia de los recursos hídricos en el mundo; Se muestra desde su disponibilidad y variación del recurso por regiones hasta la relación con los habitantes o el abastecimiento de la población, pasando por enfermedades y desastres naturales provocados por el agua.\nTodos dependemos del mismo elemento vital: el agua. Su naturaleza es cambiante, pudiendo\nencontrarla en estado líquido, sólido o gaseoso, en la atmósfera, en la superficie de la tierra o en el\nsubsuelo, dando forma a una gran cantidad de ecosistemas\ndiversidad también significa grandes disparidades en riqueza y desarrollo. Según degradamos la calidad del agua y modificamos los ecosistemas naturales de los que dependen muchas culturas, estamos amenazando nuestra propia supervivencia.\nPara los habitantes del planeta, su\nEn el siguiente gráfico se indica la demanda de agua dulce en diferentes regiones del mundo en la situación actual y en dos proyecciones alternativas:\nEn algunas partes del mundo la conexión entre agua, higiene y salud es un hecho indiscutible, pero para la mayoría de la población el acceso a agua limpia y adecuada es una lucha diaria. Uno de los mayores problemas del mundo en el que vivimos es que el 90% de las muertes relacionadas con el agua se deben a la contaminación y no a la escasez. Cada día enfermedades diarreicas causan unas muertes estimadas en más de 5.400 personas, la mayor parte niños menores de cinco años.\nEn la segunda mitad del pasado siglo la demanda de agua potable se ha incrementado enormemente, debido sobre todo al crecimiento de la población, aunque la disponibilidad de ésta es cada vez menor a causa de la contaminación. Todas estas situaciones han provocado el refuerzo de las técnicas de tratamiento del agua, así como la investigación centrada sobre todos los posibles efectos secundarios causados por la desinfección del agua destinada a consumo humano.\nEl agua es un bien común y es un recurso renovable, aunque limitado. Por esta razón, estamos obligados a controlar, además de la disponibilidad, la conservación de los reservorios, controlando la calidad del agua que llega a ellos. En épocas de escasez de agua como la que nos encontramos, hay que rentabilizar los recursos de agua con los que contamos.\nDe entre todos los problemas se considera de trascendental importancia, ya que puede traer implicaciones importantes, el control de la calidad del agua de boca. Los embalses o reservorios de agua con alto contenido en nutrientes, utilizados como suministro de agua para consumo humano o animal, son ambientes de riesgo para que se den factores ambientales propicios para que cianobacterias presenten sus efectos indeseados:\nLas algas producen dos tipos de problemas: proliferaciones indeseadas, con consecuencias de muy diversa índole, obstrucción de conducciones, colapso vital por agotamiento de oxigeno proliferaciones de bacterias que usan como sustrato la biomasa generada… Estos "blooms" o proliferaciones indeseadas son actualmente muy frecuentes debido al creciente enriquecimiento en nutrientes de todos nuestros acuíferos, que se constituyen en un medio de cultivo muy apropiado para organismos de tipo fotoautótrofo, con unos requerimientos nutricionales muy bajos. En el caso de las cianobacterias, algunas de ellas diazotrofas, los mecanismos de supervivencia están especialmente activos, con sistemas de adquisición de hierro (sideróforos) muy eficaces.\nEl segundo problema que puede originar el fitoplancton es la presencia de toxinas. En este caso la producción de toxinas está originada principalmente por cianobacterias. Hay dos tipos de cianotoxinas: neurotoxinas (alcaloides) y hepatotoxinas (péptidos). Las cianotoxinas más frecuentes son las producidas por el género Microcystis, las microcistinas. Los factores ambientales en los que una cianobacteria pasa a expresar toxinas es uno de los aspectos más estudiados por los especialistas, pero dista mucho de estar claro. Parece ser que altas temperaturas, alta luminosidad, poco viento (es decir, aguas tranquilas y no aireadas), además de disponibilidad de nitrógeno y fósforo, podrían ser los factores implicados en que una determinada especie se transforme en tóxica, dando lugar a grandes problemas cuando estas proliferaciones y liberaciones de toxinas se producen en agua para uso urbano o ganadero. Este es un problema creciente en los países del área mediterránea, y en el caso del ganado hay numerosas referencias de muertes por toxicidad procedente de cianobacterias. En el caso de humanos, fue tristemente famoso un caso de fallecimiento de numerosos pacientes sometidos a diálisis en Brasil, y se sospecha que algo parecido ocurrió recientemente en nuestro país. Es de destacar que en nuestro entorno se dio esta situación en La Estanca de Alcañiz (Teruel), que aprovisiona de agua a varios pueblos que tuvieron que buscar fuente alternativa de agua.\n1. Casos atribuidos a cianotoxinas en agua de bebida\n1 Colapso vital por agotamiento de oxígeno: daños al ecosistema por agotamiento del oxígeno disuelto.\n2. Casos atribuidos a cianotoxinas en aguas recreativas\n3. Casos relacionados con otras vías de exposición\nLas cianobacterias producen, en determinadas condiciones, un amplio rango de metabolitos secundarios que tienen carácter tóxico para los organismos eucariotas. Estas toxinas son producidas únicamente por algunos géneros de cianobacterias, entre ellos Microcystis, Anabaena, Planktothrix, Nostoc y otros. Esta capacidad, conservada durante la evolución en algunas cepas, provoca graves problemas sanitarios y medioambientales. Como ya se ha comentado anteriormente, en aguas dulces, la presencia de cianotoxinas se está convirtiendo en un problema acuciante, debido a la imparable eutrofización de los acuíferos.\nLas toxinas producidas son fundamentalmente hepatotóxicas y neurotóxicas, aunque también dan lugar a alteraciones gastrointestinales, reacciones alérgicas o irritación y sintomatología similar a la de la neumonía, aunque el principal riesgo tóxico deriva de su actividad promotora tumoral. Este riesgo se puede producir tras el contacto con la piel durante el baño o tras una exposición prolongada a niveles crónicos y subcrónicos de estas toxinas en el agua de bebida. Los estudios sobre efectos genotóxicos son muy escasos.\nLa necrosis hepática aguda masiva producida por estas toxinas (microcistinas) produce un cuadro hemorrágico y choque hipovulémico que dan lugar a la muerte. La muerte se puede producir en unas pocas horas o días y viene precedida por un cuadro de choque, es decir, coma, temblor muscular, palidez y dificultad de la respiración. Uno de los primeros efectos que se observan en la intoxicación (tras 15-30 min) es una elevación en los niveles séricos de bilirrubina, fosfatasa alcalina, aspartato aminotransferasa, y alanina aminotransferasa.\nLas microcistinas son metabolitos secundarios hepatotóxicos producidos por ciertas cianobacterias. Se han descrito cerca de un centenar de microcistinas, que son péptidos cíclicos en los que intervienen aminoácidos no proteicos y cuya síntesis no se lleva a cabo mediante ribosomas, sino por enzimas denominadas en general péptido sintetasas, que llevan a cabo los enlaces peptídicos, junto con otras enzimas que modifican las cadenas laterales. Es importante destacar que no es necesario que se produzca una gran proliferación de cianobacterias para que la población presente sea tóxica, ya que las cianotoxinas son uno de los venenos más potentes.\nSon fuertes inhibidores de serin-treonin fosfatasas (1 y 2A), que inducen hemorragias hepáticas severas. Recientemente se ha descrito que podrían también afectar a la subunidad ß de la ATP- sintasa. Su presencia en aguas dulces está aumentando considerablemente en toda la zona mediterránea, aunque las microcistinas son muy ubicuas y se reconoce como un problema a escala mundial. Las microcistinas han dado lugar a la muerte de animales salvajes y domésticos y fue identificada como la causa de la muerte de enfermos sometidos a hemodiálisis en Brasil (ver tabla anterior). Su ingesta a dosis subletales ha sido relacionada con cáncer de hígado en humanos.\nLa Organización Mundial de la Salud recomendó hace ya muchos años unos niveles máximos de microcistina en aguas de boca de 1 µg/l, cifra que recoge la legislación española en el Real Decreto 140/2003, aunque la obligatoriedad de determinar microcistina se restringe a aguas emergentes de depuradoras, con sospecha de eutrofización en su origen.\nLas microcistinas están constituidas por aminoácidos proteicos y no proteicos, cuya fórmula es D-Ala- X-Masp-Z-Adda-D-Glu-Mdha, donde X y Z son L-aminoácidos que varían en función en los distintos tipos de microcistinas. Se conocen más de 70 variantes de microcistina diferentes, las más estudiadas son MC-LR, MC-RR, MC-YR, de las cuales la más abundante es la microcistina LR (X=Leu, Z=Arg). Las microcistinas no se excretan al medio o en muy pequeña tasa, y únicamente se liberan tras la muerte de las células que las contienen. Se ha sugerido que podría haber exportación de estos péptidos al medio, pero la doctrina general es que permanecen en el interior celular.\nLa estructura molecular es la siguiente:\nUna vez sintetizadas las microcistinas son muy difíciles de eliminar. Los métodos vigentes están desarrollados fundamentalmente a nivel de laboratorio; Se utiliza floculación o filtración, seguido de cloración. Estos procedimientos tan apenas afectan a las microcistinas, salvo que se utilicen filtros de carbón activo, algo inviable en muchos casos. El cloro debe ser empleado en altas concentraciones, dando lugar a metabolitos residuales organoclorados y mal sabor.\nOtros procedimientos, como utilización de permanganatos, ozono, luz ultravioleta junto con algún agente inmovilizado como TiO 2 , filtros de arcilla y caolinita pueden ser utilizados pero, o bien la tecnología no está desarrollada a nivel comercial, o los productos de degradación hace que sean incompatibles desde el punto de vista sanitario o ambiental. Según bibliografía (Lawton y Robertson, 1999), el uso de H 2 O 2 en aguas en muy limitado y resulta poco efectivo, aunque la presencia de metales como Fe ++ puede, mediante reacciones de Fenton, generar radicales libres muy activos.\nEl objetivo propuesto es obtener metodologías de eliminación de cianotoxinas basados en la utilización de agentes químicos con actividad antimicrobiana y alguicida. El control del fitoplancton productor de toxinas es una medida preventiva que puede evitar la producción de toxinas. En nuestro trabajo proponemos desarrollar metodología, utilizando productos biodegradables y respetuosos con el medio ambiente, para destruir controladamente la presencia de cianobacterias tóxicas en determinados ambientes en que pueden desarrollarse, así como sus cianotoxinas, las microcistinas.\nEste trabajo se va a desarrollar en distintas partes:\nEfecto de OX-VIRIN sobre la cianotoxina microcistina;\nEstudiar la eficacia frente a microcistina de OX-VIRIN potenciado con diferentes sales de hierro en concentraciones catalíticas;\nRealizar ensayos de destrucción de microcistinas utilizando OX-VIRIN enriquecido con peróxido de hidrógeno;\nEstudiar la eficacia como agente eliminador de microcistinas de otros sistemas de desinfección basados en el ácido peracético y el peróxido de hidrógeno, como OX-AGUA 2ª GENERACIÓN;\nEstudiar la eficacia de sistemas físicos, tales como la radiación ultravioleta, como potenciadores de la acción oxidante de OX-VIRIN y OX-AGUA 2ª GENERACIÓN;\nEstudio de la eficacia de sistemas físicos como radiación UV que ofrece sinergia con la acción oxidante de OX-VIRIN y OX-AGUA 2ª GENERACIÓN y TiO 2 .\nPara las partes I y II del proyecto se cultivaron tres tipos diferentes de organismos representativos de fitoplancton; Se escogieron como representantes de tipos estructural y morfológicamente distintos:\n- Anabaena PCC 7120: Procariota, filamentosa representativa de las cianobacterias fijadoras de nitrógeno. Se obtuvo del Instituto Pasteur.\n- Microcystis PCC 7005: Procariota, unicelular y representativa de las cianobacterias potencialmente tóxicas. No fijadora de nitrógeno. Se obtuvo del Instituto Pasteur.\n- Chlorella fusca: Eucariota, se trata de un alga verde unicelular con una pared especialmente dura. Se obtuvo de la colección de cultivos de Gottingen (Alemania).\nSe llevaron a cabo cultivos en placa, para posteriormente establecer cultivos en medio líquido. Se utilizó medio BG11 (Ripka et al., 1979) para las dos cianobacterias, y medio Kessler y Czigan (1970) en el caso de Chlorella fusca.\nPara estudiar el efecto de los productos OX-VIRIN y OX-AGUA 2ª GENERACIÓN se utilizaron cultivos de las cianobacterias Anabaena sp. PCC 7120 y Microcystis sp. PCC 7806 crecidos en medio BG11 (Rippka et al., 1979) con burbujeo de aire estéril. Las cepas de las cianobacterias se obtuvieron del Instituto Pasteur. En la realización de los ensayos se utilizaron cultivos que fueron diluidos en medio BG11 para dejarlos a la concentración de trabajo. La concentración del cultivo se calculó midiendo su absorbancia a 600 nm.\nEfecto de los biocidas sobre los organismos\nPara cada línea de cultivos se llevó a cabo el siguiente protocolo:\nSe prepararon las correspondientes diluciones de los tres biocidas suministrados por la empresa de manera que, después de mezclarlos con 100 ml de cada uno de los cultivos, queden a las siguientes concentraciones:\n- OX-VIRIN: 0,2; 0,5; 1%.\n- OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN: 0,003; 0,015; 0,5%.\n- OX-AGUA: 0,001 y 3%.\nEl experimento se realizó con cultivos que presentaban una absorbancia a 700 nm entre 0,250 y 0,350. Los cultivos tratados (con biocida) y el control (sin biocida) se mantuvieron en condiciones normales de crecimiento tomando alícuotas de 10 ml a diferentes tiempos (5 minutos, 1 hora y 24 horas).\nDespués de incubar 24 horas con el biocida, se toman 10 ml de cada muestra y se resiembran sobre 50 ml de medio fresco. Sobre estos cultivos se midió absorbancia a 3, 6 y 9 días después de la resiembra. De esta forma estudiamos la viabilidad de las células después del tratamiento.\nLas alícuotas tomadas a 5 minutos, 1 hora y 24 horas se sometieron a la determinación de los siguientes parámetros:\nDeterminación de clorofila, determinación de peso húmedo y determinación de proteínas totales.\nllevó a cabo según el método de Mackinney (1941): Se toma 1 ml de la alícuota en un eppendorf,\ncentrifuga 10 minutos a 10.000 rpm, se elimina el sobrenadante y al pellet se le añade 1 ml de\nmetanol. Se agita 30 segundos y se centrifuga 5 minutos a 10.000 rpm. Se toman 600μl y se determina la absorbancia a 665 nm.\nTodo este proceso se realiza en ausencia de luz, puesto que la luz degrada la clorofila. La concentración de clorofila se obtuvo mediante la siguiente ecuación:\nμg clorofila/ml = Abs 665nm x 13,43\nDeterminación de peso húmedo\nSe toma 1 ml en un eppendorf, se centrifuga 15 minutos a 10.000 rpm, se elimina el sobrenadante y,\ntras la eliminación de todos los restos de líquido de las paredes de los tubos, se pesa. Esta operación\nhace por duplicado para hacer media de dos valores. Los valores de peso húmedo expresados en\nresultados para Anabaena PCC7120 y Microcystis PCC 7005 corresponden a 1 ml de cultivo.\nResiembra en medio líquido\ntoman 10 ml de los cultivos tratados (con biocida) y del control (sin biocida) y se añaden sobre 50\nde medio de cultivo fresco. Se mantienen en condiciones normales de cultivo durante 9 días\ntomando alícuotas a 3, 6 y 9 días, a las cuales se les determina la absorbancia a 700nm.\nModificaciones en el protocolo para Chlorella fusca.\nLa dureza de la pared de las células intactas de Clorella fusca hizo necesaria la modificación parcial\ndel protocolo. Se tomaban 800 μl de las células y se sometían a 6 ciclos de 45 segundos de sonicación con descansos de 30 segundos. Con esto y la adición de metanol conseguíamos la rotura\ncogían 250 μl de células rotas y se les añadía 1 ml de metanol. El resto del protocolo es similar al\ndescrito en 2.2.1 para la determinación de clorofila.\nPara la determinación del peso húmedo también llevamos a cabo una variación ya que las células de 1 ml del cultivo no se posaban bien, optamos por obtener el peso húmedo correspondiente a 4 ml. Los valores de peso húmedo expresados en los resultados para Chlorella fusca corresponden por tanto a 4 ml de cultivo.\nLa microcistina LR fue obtenida de Alexis Biochemicals, la protein-fosfatasa 2A (PP2A) de Upsdate\nBiotechnology, y el p-nitrofenilfosfato (p-NPP) de Sigma. OX-VIRIN fue proporcionado por OX-CTA\n(lote de PP2A 26330).\nDosis y tiempos de exposición a OX-VIRIN\nDisoluciones de microcistina LR se sometieron a distintas dosis de OX-VIRIN (típicamente 0,5%, 1%, 3%), durante distintos tiempos de incubación dependiendo del experimento (1 hora, 24 horas, 48 horas, 72 horas). Otras dosis y tiempos fueron utilizados según se indica en los experimentos.\nLa cuantificación de microcistina residual tras el tratamiento se llevó a cabo por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en un equipo de la marca Kontron equipado con un detector espectrofotométrico, siguiendo el procedimiento descrito por Lawton (2001).\nSe utilizó una columna Waters Simmetry 300, de fase reversa C 18 , 5 μm, 4,6 mm x 250 mm. Como solventes se utilizaron: agua milliQ 0,05% ácido trifluoroacético (TFA) (solvente A) y acetonitrilo 0,05% ácido trifluoroacético (TFA) (solvente B). Se llevó a cabo un gradiente lineal de 0-100% de B en 40 minutos y un flujo de 1 ml/min.\nSe detectó la microcistina mediante un detector uv-visible a una longitud de onda de 238 nm, el máximo de absorción de la microcistina LR.\nGeles de poliacrilamida (SDS-PAGE)\nSe utilizaron geles de poliacrilamida SDS-PAGE al 15% para valorar el efecto de OX-VIRIN sobre albúmina bovina (BSA). Se utilizó esta técnica (Laemmli, 1970) también para analizar la degradación de ovoalbúmina producida por OX-VIRIN y OX-AGUA 2ª GENERACIÓN, así como para determinar el efecto producido sobre la proteína total de las cianobacterias.\nEs posible visualizar el extracto crudo de las cianobacterias debido a que la preparación de las muestras conlleva diluirlas en un tampón desnaturalizante y hervirlas a 100º C durante 5 minutos, lo que rompe las membranas celulares. Una vez preparadas las muestras, se cargaron en un gel de poliacrilamida del 17% y tras la electroforesis se visualizaron las bandas de proteínas mediante tinción específica con azul de Coomassie. Se utilizó un patrón de pesos moleculares comercial para poder identificar las proteínas visualizadas.\nCantidades para 1 gel:\nEnsayo de inhibición de protein-fosfatasa 2A\nLa actividad de la protein-fosfatasa (PP2A) se determina midiendo el color asociado con la producción a 37º C de p-nitrofenol a partir de p-nitrofenilfosfato (p-NPP), en un lector de placas microtiter a 405 nm. El p-NPP se disuelve en un tampón que contiene 40 mM Tris-HCl, 34 mM MgCl 2 , 4 mM EDTA y 4 mM de ditiotreitol, pH 8,3. La PP2A se disuelve en el mismo tampón pero suplementado con 0,5\nmg/ml de albúmina bovina. El ensayo se lleva a cabo añadiendo 200 μl de muestra sobre 50 μl de buffer 5X en cada pocillo. Se añade 25 μl de enzima y se incuba 10 minutos a 37º C, entonces se añade 25 μl de sustrato. La producción de color se mide a 405 nm, después de incubar a 37º C durante 1 hora (Bouaicha et. al, 2002). El p-NPP y la enzima se disuelven en un tampón que contiene 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM MgCl 2 y 120 mM EDTA.\nEn las partes del ensayo III-VI se lleva a cabo añadiendo 50 μl de muestra diluida 1/100, 10 u de enzima y 90 μl de sustrato. Es necesario realizar una dilución previa de la muestra debido a que el metanol en el que fue eluída tras los cartuchos C18 interfiere en el ensayo. Esta dilución no se realiza en el caso de muestras con poca concentración de microcistina ya que se evaporó el metanol burbujeando con N 2 y se resuspendieron en un tampón que no interfiere en el ensayo. La producción de color se mide a 405 nm, después de incubar a 37º C durante 1 hora (Bouaicha et al., 2002). La absorbancia a 405 nm se transforma en porcentaje de inhibición de la enzima protein-fosfatasa asignando que no existe inhibición en el control negativo de cada ensayo, donde sólo está presente el sustrato p-nitrofenilfosfato (p-NPP).\nLa concentración típica de microcistina en esta parte del ensayo es de 2 µg/ml, concentración 2.000 veces superior al máximo permitido en aguas de consumo humano según el RD 140/2003. Tras la eliminación del producto oxidante por medio del cartucho C18 queda diluida a la mitad y posteriormente diluida 1/100 antes de la realización del ensayo de la actividad fosfatasa, por lo que la concentración de microcistina final sería de 10 µg/l.\nFigura 1.- Ensayo de la actividad de la protein-fosfatasa en placa microtiter.\nLa lectura de la absorbancia de las muestras a 280 nm se realizó en un espectrofotómetro Uvikon. Se realizó un espectro de 250 nm a 350 nm para observar el pico de la proteína antes de cuantificar la muestra con el valor de absorbancia a 280 nm. Las muestras se diluyeron 1/10 antes de la medida para estar dentro del rango de detección. Las medidas a 450 nm y 630 nm se realizaron en un lector de placas microtiter.\nEl análisis se realizó mediante electrospray (ESI-MS), siendo el volumen de muestra necesario de 50 μl y la concentración de la muestra 1 mM. El instrumento utilizado fue un espectrómetro de masas ZQ. Fue llevado a cabo en el Servicio de Masas de la Universidad de Barcelona.\nCultivos y extracción de microcistina\nSe llevaron a cabo cultivos en placa de Microcystis PCC7806, para posteriormente establecer cultivos en medio líquido. Se utilizó medio BG11 (Ripka et al., 1979) para el cultivo de la cianobacteria. La cepa de Microcystis PCC7806 se obtuvo del Instituto Pasteur. La extracción de microcistina a partir de alícuotas del cultivo se llevó a cabo mediante una doble extracción con metanol 0,1% TFA según el método descrito por Lawton en 2001.\nMedida de estrés oxidativo\nAlícuotas del cultivo de Microcystis PCC7806 se sonicaron, se tomó el sobrenadante y las proteínas\nse precipitaron con acetona. El pellet se trató con cloruro de guanidinio y se le añadió BHT (3,5 di- tert-butyl-4 hidroxi tolueno) como antioxidante. Una vez la muestra preparada se le añade una mezcla\nde agua, ácido sulfúrico,\nespectrofotométricamente a 560nm.\nnaranja de xilenol, sorbitol y Fe 2+ que producirá color que mediremos\nEliminación de OX-VIRIN\n• Neutralización de OX-VIRIN para determinación de microcistina por ensayo de inhibición de protein-fosfatasa\nSe le añade a las muestras que contienen 0,5% y 1% de OX-VIRIN 20 µl de una disolución 0,7 M de NaOH, y a las muestras que contienen 3% de OX-VIRIN 60 µl de una disolución 0,7 M de NaOH. Se incuba 10 minutos y posteriormente se les añade a todas las muestras 3 µl de una disolución de catalasa, y se incuba 1 hora. Transcurrido este tiempo se mide la cantidad de peróxidos con las tiras colorimétricas (MercK) y se observa que en el caso de las dosis de 0,5% y 1% se ha neutralizado todo el peróxido, pero en el caso de la dosis de 3% de OX-VIRIN aun queda peróxido en la muestra.\nSe hicieron numerosos intentos de neutralizar la dosis de 3% de OX-VIRIN con NaOH y catalasa, pero los resultados fueron infructuosos.\n• Neutralización de la dosis de 3% OX-VIRIN para la determinación de microcistina por el ensayo de inhibición de protein-fosfatasa.\nSe procedió a neutralizar el peróxido por medio de dilución. Se prepararon muestras 1.000 veces más concentradas de microcistina y luego se le añadió el OX-VIRIN; Se dejaron incubar el tiempo necesario y posteriormente se procedió a la neutralización diluyendo las muestras 1.000 veces. Después se midió la cantidad de peróxidos con las tiras colorimétricas y aún quedaba algo de peróxido, que se consiguió eliminar añadiendo 3 µl de catalasa.\n• Neutralización de OX-VIRIN para la determinación por espectroscopia de masas\nPuesto que el volumen de muestra en este caso es mucho menor no se consiguió la neutralización. A las muestras que contenían 1% y 3% de OX-VIRIN se les añadieron 2,5 µl de NaOH 0,7 M, se dejó incubar durante 15 minutos y posteriormente se le añadió 3 µl de catalasa y se dejo incubar 1 hora.\n• Eliminación de OX-VIRIN mediante cartuchos C18\nEn los ensayos en los que se utilizó OX-VIRIN en presencia de hierro y de agua oxigenada se procedió a la separación de la microcistina del resto de la muestra mediante unos cartuchos de fase reversa C18 (Waters), para posteriormente poder realizar el ensayo de inhibición de la protein- fosfatasa. El procedimiento seguido fue el siguiente:\n1- Activación del cartucho con 1 ml de metanol 2- Lavado del cartucho con 1 ml de agua destilada 3- Aplicación de 1 ml de muestra que contiene 2 μg/ml de microcistina LR 4- Lavado del cartucho con 3 ml de agua 5- Eluído de la microcistina utilizando 2 ml de metanol\nEn algunos casos en los que, debido a la baja concentración de microcistina utilizada en el ensayo, fuera necesario concentrar la muestra, tras el paso por el cartucho C18 se somete a evaporación del metanol mediante burbujeo de N 2 . El residuo seco obtenido se resuspende en 2 ml de buffer 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM MgCl 2 y 120 mM EDTA.\nEnsayo de la actividad oxidante de OX-VIRIN y OX-AGUA 2ª GENERACIÓN\nEn el estudio de la potencial funcionalidad de OX-VIRIN y OX-AGUA 2ª GENERACIÓN como productos degradantes de proteínas y microorganismos se utilizaron como sustratos de su acción la proteína ovoalbúmina de pollo (SIGMA) y la cianotoxina microcistina LR (Alexis Biochemicals). Como organismos modelo se utilizaron las cianobacterias Anabaena sp. PCC 7120 y Microcystis sp. PCC 7806. En determinados ensayos se estudió el posible efecto potenciador de sales de hierro: cloruro ferroso [Cl 2 Fe], citrato férrico amónico [C 6 H 8 O 7 xFexNH 3 ] y sulfato férrico amónico o sal de Mohr [Fe(NH 4 ) 2 (SO 4 ) 2 ]. Asimismo se utilizó en algunos ensayos peróxido de hidrógeno (H 2 O 2 ) bien para comparar su acción oxidante con la obtenida con OX-VIRIN y OX-AGUA 2ª GENERACIÓN o bien como potenciador de su acción de forma que dichos productos fueron suplementados con peróxido de hidrógeno. En determinados ensayos se estudió el posible efecto potenciador del óxido de titanio (TiO 2 ) (PROBUS).\nSegún las condiciones particulares de cada ensayo, muestras de ovoalbúmina, microcistina LR y cianobacterias, se incubaron con distintas dosis de los productos durante distintos tiempos de incubación a una temperatura de 4º C. En los ensayos en los que se activaba la acción de los productos con radiación ultravioleta, las muestras se incubaron a temperatura ambiente y con agitación suave. Inmediatamente después del periodo de incubación se procedía a parar la reacción eliminando el producto oxidante para posteriormente medir la toxicidad remanente de la muestra mediante el ensayo de inhibición de la protein-fosfatasa, o bien se procedía a preparar las muestras para llevar a cabo una electroforesis desnaturalizante en gel de poliacrilamida para determinar el efecto producido por los productos sobre la proteína total.\nSegún las condiciones particulares de cada ensayo, muestras de microcistina LR o de la cianobacteria Microcystis sp., se incubaron con distintas dosis de los productos durante 2 y 4 horas, a temperatura ambiente y con agitación suave. Inmediatamente después del periodo de incubación se procedía a parar la reacción eliminando el producto oxidante para posteriormente medir la toxicidad remanente de la muestra mediante el ensayo de inhibición de la protein-fosfatasa.\nEl dispositivo de luz ultravioleta consiste en una lámpara de 35 cm de longitud bajo la cual se disponen las muestras a una distancia de 5,5 cm.\nFigura 2.- Sistema emisor de luz ultravioleta\nExtracción de la microcistina\nLa extracción de microcistina a partir de alícuotas de cultivo de Microcystis sp. se realizó siguiendo un protocolo de doble extracción con metanol 0,1% TFA (Lawton & Edwards, 2001). Debido a que el metanol interfiere en el ensayo de la protein-fosfatasa 2A, las muestras fueron diluidas 1/10 antes de la realización del ensayo.\nSe va a estudiar el efecto de diferentes biocidas comercializados por OX-CTA sobre diversos tipos de fitoplancton: procariotas y eucariotas.\nLos organismos fotosintéticos que forman el fitoplancton de aguas dulces tienen dos organizaciones celulares de muy distinta naturaleza, y por lo tanto van a responder de distinta forma a los agentes biocidas. Los procariotas fotosintéticos son o bien bacterias fotosintéticas o bien cianobacterias, mientras que los eucariotas son diversos grupos de algas, tanto macroscópicas como microscópicas, unicelulares o pluricelulares.\nAnabaena PCC 7120 es una cianobacteria procariota, aeróbica, filamentosa y representativa de las cianobacterias fijadoras de nitrógeno.\nEstas cianobacterias tienen la capacidad de desarrollar unas células diferenciadas llamadas heterocistos, cuyo número varía en función de la disponibilidad de los nutrientes nitrogenados en el medio de cultivo.\nLa organización celular de la célula vegetativa corresponde a la de un procariota, ya que carece de orgánulos membranosos subcelulares. El protoplasma está rodeado de una doble capa, homóloga en estructura y composición a las bacterias Gram-; La capa interior es homogénea y la exterior presenta una estructura fina de membrana que contiene proteínas y lipopolisacáridos.\nEn el protoplasma se ha desarrollado un elaborado sistema de membranas fotosintéticas o tilacoides en cuyo interior se encuentran los componentes del aparato fotosintético. Estas células contienen una región nucleoplásmica fibrilo granular, así como una gran diversidad de inclusiones citoplasmáticas características.\nLas regiones que contienen la membrana citoplasmática están en contacto directo con el DNA y los ribosomas.\nLos heterocistos presentan grandes diferencias estructurales y metabólicas con las células vegetativas y es en ellos donde se va a producir la fijación de nitrógeno.\nAbsorbancia inicial del cultivo a 700 nm = 0,294\n- 0,2% OX-VIRIN (M1)\n- 0,5% OX-VIRIN (M2)\n- 1% OX-VIRIN (M3)\nA los 5 minutos de exposición de los cultivos a cantidades crecientes del biocida se observa una disminución de la concentración de clorofila y del peso húmedo. En cuanto al aspecto físico, se aprecia en las muestras tratadas una ligera disminución del color verde.\nPESO HUMEDO T=5MIN\nTranscurrida 1 hora de exposición al biocida se observa una disminución paulatina respecto al control de la concentración de clorofila y del peso húmedo, siendo más acusada dicha disminución en la muestra que contiene la dosis mayor de biocida. Se aprecian más diferencias en el aspecto físico entre la muestra control y las tratadas, adoptando estas últimas un color más blanquecino.\nPESO HUMEDO T=1HORA\nA tiempo de exposición 24 horas la concentración de clorofila se reduce a la mitad en M1, mientras\nque en M2 y M3 se hace cero. El peso húmedo disminuye sensiblemente respecto al control, los valores obtenidos en las muestras tratadas corresponden a restos celulares y no a células viables. El control presentaba color verde, mientras que M1 era amarillo y M2 y M3 eran blancos. Estos datos, junto con los de los recultivos, muestran que las tres dosis de OX-VIRIN aplicadas son letales para Anabaena PCC 7120 tras 24 horas de incubación.\nCLOROFILA T=24 HORAS\nPESO HUMEDO T=24HORAS\nVIABILIDAD DE LAS CÉLULAS TRATADAS:\nSe observa que los cultivos tratados no presentan absorbancia a 700 nm a 3, 6 y 9 días después del\nrecultivo, por lo cual se deduce que los cultivos después de tratarlos con esas dosis de OX-VIRIN son inviables. Y por tanto las dosis de 0,2%; 0,5% y 1% de OX-VIRIN son letales para Anabaena PCC\nAbsorbancia inicial del cultivo a 700 nm = 0,317\n- 0,003% OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN (M1)\n- 0,015% OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN (M2)\n- 0,5% OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN (M3)\nLas muestras tratadas durante 5 minutos con OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN presentan una disminución respecto del control, en cuanto a concentración de clorofila y peso húmedo. El aspecto de los cultivos es similar en las muestras tratadas y en las no tratadas.\nTranscurrida 1 hora se continúa observando la ligera disminución de la concentración de clorofila y peso húmedo en las muestras tratadas. Esta disminución es más acusada en la muestra con mayor dosis de biocida. A medida que aumenta la concentración de biocida se observa una perdida progresiva de color en los cultivos.\nLa clorofila disminuye a la mitad para la dosis de 0,015% y se hace 0 para la dosis de 0,5%. El peso húmedo adquiere valores muy bajos para estas dosis. El control y la muestra M1 presentan color verde, mientras que M2 y M3 presentan color amarillo y blanco respectivamente. Estos datos junto con los del recultivo, nos indican que las dosis de 0,015% y 0,5% van a ser letales, mientras que la dosis de 0,003% afecta al cultivo pero no consigue la inviabilidad del mismo.\nLa muestra M1 presenta absorbancia creciente a 3, 6 y 9 días de recultivo por lo tanto la dosis de 0,003%, no es letal para Anabaena PCC 7120. Sin embargo, vemos que las otras dos muestras tratadas, no presentan absorbancia en los 9 días de recultivo, por lo tanto, serán dosis letales para Anabaena PCC 7120, 0,015% y 0,5% de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN.\nAbsorbancia del cultivo inicial a 700 nm = 0,349\n- 0,001% OX-AGUA (M1)\n- 3% OX-AGUA (M2)\nExisten pocas diferencias entre las muestras tratadas y la no tratada en cuanto a los datos experimentales y en cuanto al aspecto físico.\nTranscurrida 1 hora de exposición se aprecia una disminución de clorofila y peso húmedo de la muestra M2 respecto de las otras dos. Este hecho también era observable en el aspecto físico de los cultivos, ya que el cultivo M3 presentaba un color más claro que los otros cultivos.\nMientras la dosis de 0,001% del biocida no produce apenas cambios en los parámetros experimentales y físicos de la muestra, la dosis de 3% disminuye notablemente la clorofila y peso húmedo de la muestra, así como afecta al aspecto físico de la muestra, ya que pierde todo el color verde.\nVIABILIDAD DE LAS CÉLULAS TRATADAS\nSe observa que el cultivo tratado con la dosis de 0,001% presenta absorbancia creciente a lo largo de los 9 días al igual que el control, por lo tanto esta dosis no es letal para Anabaena PCC 7120. Pero el cultivo tratado con la dosis de 3% no presenta absorbancia a lo largo de los 9 días por lo que podemos afirmar que las células no son viables y que, por tanto, dicha dosis es letal para Anabaena PCC 7120.\nEFECTOS DE SOBRE MICROCYSTIS PCC 7005\nCaracterísticas de Microcystis PCC 7005\nMicrocystis PCC 7005 es una cianobacteria procariota, unicelular y no fijadora de nitrógeno. Es representativa de las cianobacterias potencialmente tóxicas. Frecuentemente se producen crecimientos explosivos o “blooms”, los cuales generan una toxina denominada microcistina, siendo las causas por las que se producen estos “blooms” aún no bien conocidas.\nLa microcistina es un heptapéptido cíclico cuya fórmula es D-Ala-L-X-D-MeAsp-L-Z-Adda-D-Glu-Mdha donde X y Z son aminoácidos variables, en función de los cuales se describen numerosas variantes de microcistina. De todas ellas la más frecuente es la microcistina LR, que posee en las posiciones X y Z leucina y arginina.\nLas microcistinas son potentes inhibidores de protein-fosfatasas, en concreto de la protein-fosfatasa 1 (PP1) y de la protein-fosfatasa 2 (PP2A). Inhibiendo a estas protein-fosfatasas alteran el citoesqueleto de los hepatocitos, produciendo necrosis del tejido hepático.\n4.3.2 Efecto de OX-VIRIN sobre Microcystis PCC 7005\nAbsorbancia inicial del cultivo a 700nm = 0,338.\nT = 5 MINUTOS:\nA los 5 minutos de exposición de los cultivos a dosis crecientes de OX-VIRIN, observamos ya una\nnotable disminución, tanto de clorofila como de peso húmedo, respecto del control. Este hecho se refleja también en el aspecto físico puesto que, transcurrido este tiempo, los cultivos tratados han adoptado ya un color amarillento, frente al color verde del control.\nPESO HÚMEDO T=5MIN\nT = 1 HORA:\nLa disminución de los parámetros experimentales que son clorofila y peso húmedo se agrava aún más transcurrida una hora de incubación con el biocida. El aspecto de M1 y M2 sigue siendo de un color amarillo, mientras que M3 se torna anaranjado.\nPESO HÚMEDO T=1HORA\nT = 24 HORAS:\nA tiempo de exposición 24 horas la concentración de clorofila se hace muy pequeña respecto del\ncontrol, mientras que el peso húmedo también se reduce notablemente haciéndose 0 para la concentración de 1% de OX-VIRIN. Estos datos junto con los de los recultivos muestran que las tres dosis de OX-VIRIN probadas van a ser letales para Microcystis PCC 7005.\nEl color de la muestra M1 es amarillo claro, mientras que M2 y M3 muestran un color blanco.\nPESO HÚMEDO T=24HORAS\nLos recultivos de las células tratadas no muestran absorbancia a 3, 6 y 9 días, en contraposición con el control que alcanza una absorbancia de 1,241. Esto nos indica que los cultivos van a ser inviables y ratifica que las dosis de 0,2%, 0,5% y 1% van a ser letales para Microcystis PCC 7005.\n4.3.3. Efecto de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN sobre Microcystis PCC 7005\nAbsorbancia inicial del cultivo a 700nm = 0,271.\nDespués de este tiempo de exposición al biocida no existe mucha variación entre las muestras tratadas y el control, salvo en la dosis de 0,5% que ya se observa efecto en clorofila y peso húmedo. El aspecto no varía entre C, M1 y M2, pero M3 muestra ya un color amarillento.\nCLOROFILA T =5MIN\nLa concentración de clorofila presenta ya una mayor disminución respecto al control, que se hace más acusada en la dosis mayor de biocida. El peso húmedo presenta una disminución gradual a medida que aumenta la dosis de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN.\nEl control y la muestra de 0,003% presentan color verde, mientras que la muestra de 0,015% y 0,5% presentan color amarillo.\nTranscurridas 24 horas de exposición a OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN la concentración de clorofila disminuye a la mitad para M1y M2, mientras que se hace 0 para M3. El peso húmedo disminuye en buen grado respecto del control.\nM1 y M2 presentan un color amarillo y M3 blanco en contraposición al color verde del control.\nObservamos que para las muestras tratadas no existe absorbancia a 700 nm durante los 9 días de recultivo. Estos datos, junto con los parámetros experimentales a tiempo 24 horas, nos hacen concluir que las dosis 0,003%; 0,015% y 0,5% de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN son letales para Microcystis PCC 7005.\nAbsorbancia inicial del cultivo a 700 nm =0,305.\nNo se observan muchas diferencias entre el control y la muestra que contiene un 0,001% de OX- AGUA, pero sí que se observa efecto en la que contiene 3% de OX-AGUA, donde disminuye ligeramente la concentración de clorofila y el peso húmedo. También existe una disminución del color respecto del control y M1.\nCLOROFILA T= 5MIN\nA tiempo de incubación 1 hora ya se observa también efecto sobre la muestra que contiene 0,001%\nde OX-AGUA. El control y M1 siguen manteniendo el color verde mientras que M2 ya tiene color amarillo.\nTras 24 horas de exposición al biocida las muestras tratadas presentan un nivel muy inferior de clorofila y peso húmedo con respecto al de la muestra de control. Esto se complementa con que ambas muestras tratadas presentan un color amarillo. Estos datos, junto con los del recultivo, indican que las dosis de 0,001% y 3% de OX-AGUA van a ser letales para Microcystis PCC 7005.\nAl realizar el recultivo durante 3,6 y 9 días se aprecia que no hay aumento de absorbancia en las muestras tratadas y que los valores de absorbancia son muy inferiores a los del control. Los valores de absorbancia de M2 son algo elevados debido a que existía turbidez en la muestra pero no existían células viables en la misma. Por lo tanto ambas dosis de OX-AGUA van a ser letales para Microcystis PCC 7005.\n4.4. EFECTOS SOBRE CHLORELLA FUSCA\nChlorella fusca es un alga verde unicelular sin flagelos ni ocelos ni vacuolas contráctiles; Es un alga filamentosa y carece de motilidad. En la naturaleza está ampliamente distribuida tanto en agua dulce como en agua salada, así como en el suelo. Es eucariota y cada célula contiene un único cloroplasto con o sin pirenoide y un único y diminuto núcleo. El protoplasto está rodeado de una pared celular constituida por celulosa con una capa de pectina amorfa externa. Esta cubierta es especialmente dura y por lo tanto la hace muy resistente.\nLa reproducción se efectúa por transformación del contenido de las células en esporas; Cada célula haploide se divide mediante mitosis dos o tres veces para dar lugar a cuatro u ocho células.\nLos rasgos morfológicos parecen insuficientes para diferenciar las distintas especies de Chlorella. Sin embargo, atendiendo a sus características morfológicas, bioquímicas y fisiológicas se pueden clasificar las distintas especies.\nAbsorbancia Inicial del cultivo a 700 nm = 0,306.\nA los 5 minutos se aprecia una ligera disminución del contenido de clorofila respecto del control, y el\npeso húmedo se mantiene más o menos constante. En cuanto al aspecto físico no se observan diferencias a simple vista entre las muestras tratadas y el control.\nTras 1 hora de exposición a OX-VIRIN los cultivos experimentan una notable disminución del contenido en clorofila respecto del control. El peso húmedo también disminuye gradualmente a medida que aumenta la concentración del biocida. El color de los cultivos tratados ya es verde amarillento, frente al color verde del control.\nLa concentración de clorofila adquiere valores muy pequeños en las muestras tratadas y el peso húmedo disminuye de una forma notable frente al control. Estos hechos se reflejan en el aspecto físico de los cultivos, puesto que los cultivos tratados adquieren un color blanco frente al color verde del control. Los parámetros experimentales, aspecto físico y los datos de los recultivos nos hacen concluir que las dosis de 0,2%; 0,5% y 1% de OX-VIRIN son letales transcurridas 24 horas de exposición al biocida, para Chlorella fusca.\nEn el gráfico se observa que durante los 9 días de recultivo de las muestras tratadas no existe aumento de absorbancia, y que el valor de absorbancia obtenida es muy inferior al valor de la muestra no tratada. Los valores de cierta absorbancia que se producen en las muestras tratadas son debidos a que en ellas existe turbidez, debida a los restos celulares. De los datos presentados se deduce que para las dosis probadas los cultivos van a ser inviables.\nAbsorbancia inicial del cultivo a 700 nm = 0,299.\n- 0,003% OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN\n- 0,015% OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN\n- 0,5% OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN\nLa concentración de clorofila se ve disminuida en las muestras expuestas al OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN mientras que el peso húmedo se mantiene más o menos constante. En el aspecto físico no se aprecian apenas diferencias entre la muestra control y las tratadas.\nLas muestras incubadas durante 1 hora con el biocida presentan una disminución de clorofila, fundamentalmente la muestra que contiene 0,5 % de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN. El peso húmedo también disminuye para las dosis de 0,015% y 0,5%. La apariencia de los cultivos es similar a la del control para el caso de M1 y M2, mientras que M3 presenta ya un color verde amarillento.\nEl contenido en clorofila de las muestras M1 y M2 se reduce a la mitad mientras que en M3 se hace prácticamente 0. El peso húmedo es inferior en M2 y M3. Las muestras M1 y M2 mantienen el color verde, sin embargo M3 muestra color blanco amarillento. Estos datos, junto los de los recultivos, nos llevan a concluir que las dosis de 0,003% y 0,15% van a afectar a Chlorella fusca, pero no van a ser letales para ella, siendo la dosis de 0,5% la única dosis letal.\nEn la gráfica se observa que la muestra tratada con 0,003% de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN crece de forma similar al control, por lo tanto no se va a ver afectada la viabilidad de Chlorella fusca por esta dosis de biocida. La muestra tratada con 0,015% de biocida si que va a ver afectada su viabilidad puesto que crece mucho más lento que el control, pero existen células viables en el cultivo que van creciendo a lo largo de los 9 días de recultivo. Por lo tanto la dosis de 0,015% no es letal para Chlorella fusca. Sin embargo la dosis de 0,5% si que es letal para Chorella fusca, porque aunque exista algo de absorbancia esta se mantiene constante y es debida a la turbidez producida por los restos celulares.\n4.4.4. Efecto de OX-AGUA sobre Clorella fusca\nAbsorbancia inicial del cultivo a 700 nm = 0,334\nA los 5 minutos de exposición no se observan grandes diferencias ni en los parámetros experimentales ni en el aspecto físico entre la muestra control y las muestras tratadas. M2 muestra una disminución de la concentración de clorofila y del peso húmedo, que se refleja en un color verde más blanquecino que el control.\nTranscurrida 1 hora de incubación se observan más diferencias entre las muestras tratadas y la de control. En la muestra M1 disminuye muy ligeramente la clorofila y el peso húmedo y en la muestra M2 se agravan las diferencias que existían a tiempo 5 minutos. M1 sigue manteniendo un color verde similar al del control mientras que M2 está ya casi blanco.\nSe observa que la clorofila no ha disminuido para M1, sino que se mantiene respecto al control y, aunque el peso húmedo sí que ha disminuido ligeramente, esta dosis no va a ser letal para Chlorella fusca, como se ratifica en los datos del recultivo. Sin embargo M2 tiene unos valores de clorofila y peso húmedo muy bajos y además presenta un color blanquecino. Estos datos, junto con los datos del recultivo, nos llevan a concluir que la dosis de 3% de OX-AGUA es letal para Chlorella fusca.\nEl gráfico muestra claramente que la dosis de 0,001% no es letal para Chlorella fusca, mientras que la dosis de 3% consigue la inviabilidad total de las células y por tanto es letal para Chlorella fusca.\nSensibilidad de los organismos a los biocidas:\nTodas las dosis probadas de OX-VIRIN, OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN y OX-AGUA son letales para Microcystis PCC 7005. Por lo tanto, este organismo va a ser el más sensible a los productos, de los tres organismos testados.\nTodas las dosis probadas DE OX-VIRIN, OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN y OX-AGUA son letales para Anabaena PCC 7120, salvo la dosis de 0,003% de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN y la dosis de 0,001% de OX-AGUA.\nTodas las dosis probadas de OX-VIRIN, OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN y OX-AGUA son letales para Clorella fusca, salvo la dosis de 0,003% y 0,015% de OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN y la dosis de 0,001% de OX-AGUA. Por lo tanto, este organismo va a ser el más resistente a los productos, de los tres organismos testados.\nEfectividad de los productos:\nOX-VIRIN es el producto más eficaz de los tres, puesto que va a ser letal a las tres dosis probadas para los tres organismos testados.\nOX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN va a ser menos eficaz, puesto que hay una dosis (0,003%) que no es efectiva en Anabaena y dos dosis (0,003% y 0,015%) que no son efectivas en Chlorella.\nOX-AGUA va a ser efectivo frente a los tres organismos testados, salvo la dosis de 0,001%, que no es efectiva ni en Anabaena ni en Chlorella.\nEl aspecto físico de los cultivos de los organismos estudiados va a ser indicativo de la viabilidad de los mismos. El color típico de los tres tipos de organismos estudiados es verde en distintas tonalidades. Cuando los cultivos pierden este color tan característico y adoptan colores amarillentos o blancos es síntoma de que los cultivos están en fase de muerte.\nBasándonos en este hecho hemos incluido fotografías en el informe, con la intención de que visualmente se pudiese observar la eficacia de los productos testados. Se ha elegido un organismo distinto con cada producto, para tener un ejemplo representativo de cada biocida.\nLas fotografías se han tomado a 5 minutos, 1 hora y 24 horas de exposición al biocida.\n- 1% OX-VIRIN (M3).\nEn las fotografías se muestra que a 5 minutos existe ya una pequeña diferencia de color entre las muestras tratadas y la no tratada. Esta diferencia se agrava a 1 hora de exposición. Y tras 24 horas de exposición, las muestras tratadas presentan colores amarillo y blanco, indicativos de la inviabilidad de las mismas. Esto refleja que a 5 minutos y 1 hora los cultivos están afectados, pero es a 24 horas cuando la inviabilidad de los cultivos es total. Las tres dosis probadas son letales para Anabaena\n- Control (C);\n- 0,5% OX-AIRE TORRES DE REFRIGERACIÓN.\nEn las fotografías se observa que a 5 minutos ya existe diferencia de color con el control, sobre todo la muestra con mayor dosis de biocida. A tiempo 1 hora ya se observan más diferencias con respecto\ncontrol. Y a 24 horas los tres cultivos tratados adquieren colores amarillos y blancos indicativos de\ninviabilidad de los mismos. Las tres dosis probadas son letales para Microcystis PCC 7005.\n- 3% OX-AGUA (M2).\nA tiempo 5 minutos y 1 hora se aprecia una ligera disminución del color de la muestra que contiene la\ndosis de 3% de OX-AGUA. Y a 24 horas se observa que ese cultivo ha adquirido un color blanquecino indicativo de la inviabilidad del mismo. Sin embargo vemos como el cultivo que está expuesto a la dosis de 0,001% no varía su color respecto al control, el cultivo es viable. Por lo tanto la dosis de 3% es letal y la dosis de 0,001% no es letal para Chlorella fusca.\nEFECTO DE OX-VIRIN SOBRE MICROCISTINA\nTrabajos previos han demostrado que productos basados en peróxidos pueden destruir de forma muy eficaz células del genero Microcystis. Este método puede resultar una medida preventiva interesante en determinados usos pero, paradójicamente, podría darse el caso de implicar mayor liberación de microcistinas al medio al lisar las células. Los agentes oxidantes utilizados están optimizados para su comercialización de forma que pueden controlar el crecimiento de microorganismos de forma muy eficaz con un mínimo riesgo ecológico.\nEn este trabajo se estudia el efecto de distintas dosis de oxidantes de la gama comercial OX-VIRIN sobre la microcistina LR.\nEfecto de OX-VIRIN sobre albúmina bovina\nSe llevó a cabo una prueba preliminar del efecto oxidante sobre albúmina comercial, un polipéptido de alto peso molecular, con unas 100 veces más aminoácidos que la microcistina. La concentración utilizada fue también extremadamente alta, 2 g/l. Esto pretendía poner de manifiesto la capacidad oxidante del peróxido en una situación extrema.\nUna disolución de 2 mg/ml de albúmina bovina se sometió a distintas dosis de OX-VIRIN durante distintos tiempos. Se probaron tres dosis (0,2%, 0,5% y 1%) a dos tiempos (1 hora y 24 horas).\nLas muestras se cargaron en geles de poliacrilamida SDS-PAGE al 15% para valorar la destrucción de la proteína.\n1- Control (albúmina 2 mg/ml sin OX-VIRIN)\n2- 0,2% OX-VIRIN t = 1 hora\n3- 0,2% OX-VIRIN t = 24 horas\n4- 0,5% OX-VIRIN t = 1 hora\n5- 0,5% OX-VIRIN t = 24 horas\n6- 1% OX-VIRIN t =1 hora\n7- 1% OX-VIRIN t=24 horas\n8- Marcador de pesos moleculares\nSe observa que a cualquier dosis la albúmina se ve afectada, y a la dosis 0,2% la proteína disminuye la banda, tanto a 1 hora como a 24 horas. Utilizando 0,5% y tiempo 24 horas la banda disminuye ostensiblemente. Con dosis de 1% y tiempo 24 horas desaparece la banda por completo. Esto confirma que la albúmina se ve afectada por el OX-VIRIN, siendo necesario un tratamiento de 24 horas y una dosis del 1% para su desaparición. No se observan subproductos de menor peso molecular, aunque esta técnica es inapropiada para detectar péptidos menores de unos 6 kDa.\nLos resultados obtenidos indican que la microcistina, con solo 7 aminoácidos, y a una concentración en medios naturales mucho menores, puede ser susceptible de destrucción utilizando OX-VIRIN.\n5.2.2.1. Determinación de microcistina por HPLC\nDisoluciones de microcistina LR de concentración 1μg/ml (dosis mil veces mayores a la recomendada como máxima por la legislación y que muy raramente se encuentra en medios naturales) se sometieron a distintas dosis de OX-VIRIN (0,5%, 1%, 3%) y a distintos tiempos de incubación (1 hora, 24 horas, 48 horas, 72 horas). Los productos obtenidos se analizaron por HPLC para determinar la cantidad de microcistina remanente tras el tratamiento. El peróxido residual se valoró para todas las dosis y para todos los tiempos mediante las tiras colorimétricas.\nSe prepararon disoluciones de 0,2 μg/ml, 0,4 μg/ml, 0,6 μg/ml, 0,8 μg/ml, 1 μg/ml de microcistina LR y se aplicaron al HPLC para hacer una recta de calibrado, en la cual se relaciona el área del pico del cromatograma con la concentración de microcistina (Fig 1). Con las condiciones descritas, la microcistina pura exhibía un tiempo de retención de 25 minutos. Se llevó a cabo un control con OX- VIRIN para detectar posibles picos debidos a componentes del producto comercial.\nLa columna y el sistema de solventes empleado nos han permitido llegar hasta un límite de detección de 0,1μg/ml.\nRECTA CALIBRADO MICROCISTINA\n2 = 0,9947\nEfecto de OX-VIRIN sobre microcistina LR tras 1 hora de tratamiento\nTras una hora, los resultados obtenidos indican que con ninguna de las tres dosis se había logrado la destrucción total de la microcistina. En el caso del 3%, la más afectada, todavía se observa un 39,05% de la microcistina intacta.\nEfecto de Ox-Virin t=1hora\nEfecto de Ox-Virin t=24 horas\nTras 24 horas, se observa que dosis del 3% han destruido totalmente la microcistina, si bien en el cromatograma se ve la aparición de otros picos que deben de corresponden a moléculas modificadas o fragmentadas de microcistina. En el caso del 1% del peróxido, la destrucción fue del 34,45%\nEfecto de Ox-Virin t=48horas\nTras 48 de tratamiento, tanto las dosis del 1% como del 3% han resultado eficaces, y se había destruido toda la microcistina. Sorprendentemente, una dosis de 0.5%, únicamente la mitad de la de 1%, mantenía la microcistina prácticamente en el nivel del control. Como ocurría en el caso del tratamiento con un 3% durante 24 horas, el cromatograma obtenido mostraba la aparición de otros picos con distinto tiempo de retención, que corresponderían a productos de degradación de la microcistina.\n5.2.2.1.5 Efecto de OX-VIRIN sobre microcistina LR a 72 horas de tratamiento\nEfecto de Ox-Virin t=72horas\nTras 72 horas de tratamiento no se observan cambios en la cinética de degradación de la microcistina, y los valores obtenidos son análogos a los de 48 horas de tratamiento, incluida la dosis menor testada, 0.5%.\nLos cromatogramas de las dosis del 1% y el 3% sí que presentaban cambios y los productos de degradación han seguido oxidándose, dando lugar a nuevos subproductos.\n5.2.2.2 Determinación de microcistina por espectrometría de masas\nSe prepararon cinco muestras para ser enviadas al Servicio de Espectroscopia de Masas de la Universidad de Barcelona. Las muestras fueron las siguientes:\n1. Control: Microcistina LR\n2. Microcistina LR + 1% OX-VIRIN\n3. Microcistina LR + 3% OX-VIRIN\n4. 1% OX-VIRIN\n5. 3% OX-VIRIN\nLa muestra 1 sería el control, es decir, la microcistina sin OX-VIRIN; las muestras 2 y 3 son la microcistina pero con el producto en dos dosis distintas 1% y 3% y neutralizadas con NaOH y catalasa después de 48 horas de incubación con OX-VIRIN, y las muestras 4 y 5 son muestras que contienen exactamente lo mismo que las muestras 2 y 3 pero que no tienen microcistina.\nLos valores marcados en azul corresponden a productos presentes en los blancos (1% OX-VIRIN y 3% OX-VIRIN) y los marcados en rojo corresponden a la microcistina LR.\nControl: Microcistina LR\nMicrocistina LR + 1% OX-VIRIN


Toma de decisiones de marketing - Ensayos - 6775 Palabras\nPágina principal Ensayos Toma de decisiones de...\nToma de decisiones de marketing\nPáginas: 28 (6775 palabras) Publicado: 6 de octubre de 2010\nEl marketing se concentra sobre todo en analizar los gustos de los consumidores, pretende establecer sus necesidades y sus deseos e influir su comportamiento para que deseen adquirir los bienes ya existentes, de forma que se desarrollan distintas técnicas encaminadas a persuadir a los consumidores para que adquieran un determinado producto.\nLa actividad del marketing incluyela planificación, organización, dirección y control de la toma de decisiones sobre las líneas de productos, los precios, la promoción y los servicios postventa.\nEn estas áreas el marketing resulta imprescindible; en otras, como en el desarrollo de las nuevas líneas de productos, desempeña una función de asesoramiento; además, es responsable de la distribución física de los productos.ADMINISTRACION DE LINEAS DE PRODUCTOS Y MARCAS\nUn producto es cualquier cosa que se ofrezca en un mercado para su atención, adquisición, uso o consumo y que pudiera satisfacer una necesidad o deseo. Los productos que se comercializan Incluyen:\nBienes físicos (edificio, vehículo); Servicios (mantenimiento, reparación); Experiencias (asesoria, abogado); Eventos (paquetes de quince años, matrimonios);Personas (Enrique Iglesias); Lugares (villas de descanso); Propiedades (terrenos, casas); Organizaciones (club); Información (bases de datos); Ideas (campañas cívicas).\n*NIVELES DE UN PRODUCTO\nCada nivel añade valor para el cliente y constituye la jerarquía de valor.\n-El nivel elemental es el beneficio básico, es el beneficio o servicio que el cliente adquiere. Ejemplo: un cuarto de hotel.-El mercadólogo convierte este beneficio básico en un producto genérico, en una versión básica del producto, incluye cama, baño, toallas, escritorio, etc.\n-El producto esperado, es el conjunto de atributos y condiciones que los clientes esperan y convienen cuando adquieren el producto, como: buena comida y atención.\n-El producto aumentado, incluye servicios y beneficios adicionales, como:servicio rápido y música acogedora.\n-El producto potencial, abarca los aumentos y transformaciones a futuro, las empresas buscan nuevas formas de satisfacer a los clientes y distinguir la oferta, como: ampliación en el local y reestructuración de los servicios.\n*JERARQUÍA DEL PRODUCTO\nUn sistema de producto es un grupo de artículos diversos pero relacionados que funcionan de forma compatiblecomo: celulares Nokias, handsfree, estuches.\nUna mezcla de productos: es el conjunto de todos los productos y artículos que una empresa ofrece a la venta tenemos: baterías Maxwell, CD Maxwell, cintas de video Maxwell.\n*CLASIFICACIONES DE PRODUCTOS\nSe clasifican en función de durabilidad,tangibilidad y uso\nDurabilidad y tangibilidad se clasifican:\n-Bienes no duraderos: Son productos tangibles que generalmente se consideran de un solo uso, ejemplo: Cerveza, el jabón.\n-Bienes duraderos: Productos tangibles que sobreviven a muchos usos, ejemplo: refrigeradores, ropa, entre otros... requieren ventas y servicios más personales.\n-Servicios: Son productos intangibles inseparables,variables y perecederos, requieren mas control de calidad, credibilidad del proveedor y adaptabilidad, Ejemplo: corte de pelo y reparaciones.\n*CLASIFICACIÓN DE LOS BIENES DE CONSUMO\n-Bienes de conveniencia: Son productos que el cliente compra con frecuencia. Ejemplo: Tabaco, jabones y periódico.\n- Productos de uso común: leche La Campesina, crema Colgate.\n- Bienes de impulso: chicles,chocolates.\n- De emergencia: vendas, medicamentos.\n-Bienes de comparación: Son productos que el cliente compra en base a su idoneidad, calidad, precio y estilo. Ejemplo: muebles, ropa, automóviles usados, electrodomésticos importados...\n- Bienes comparación homogénea: similares en cuanto a calidad pero muy diferentes en precios. Ejemplo: Refrigeradora Samsung con refrigeradora Daewoo....\nRE: Marketing intelligence y toma de decisiones\n...finalidad es llevarnos a un entendimiento de cómo se deben manejar las empresas hoy en día considerando como base fundamental la información. \tLa formalización de datos a través de bases, su mineo para obtener variables técnicas que apoyarán la toma de decisiones en las empresas, la combinación de la inteligencia intuitiva, objetiva y artificial, conlleva a un proceso planificado y adaptado a la realidad de cada una de las instituciones, considerando los...\n...MERCADOTECNIA II CICLO II-2015 EL PAPEL DE LA INVESTIGACIÓN DE MERCADOS EN LA TOMA DE DECISIONES DE MARKETING. El marketing destaca la identificación y satisfacción de las necesidades del cliente. Para determinar esas necesidades y poner en práctica estrategias y programas de marketing que las satisfagan, los gerentes de marketing necesitan información sobre los clientes, los competidores y otras fuerzas...\nMarketing Y Toma De Decisiones\n...UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO FACULTAD DE CIENCIAS ECONÓMICAS COMO TOMAR DECISIONES DE MARKETING. CONOZCA A STEVE GOLDSTEIN Un hombre de decisiones en Levi Strauss & Co. Steve Goldstein está profundamente consciente del poder del marketing. Como vicepresidente de investigación y desarrollo de la marca Levi´s en la compañía Levi Strauss & Co. Desde 1992, él sabe que todos los aspectos del...\nDiscurso academico sobre la pobreza\nSilviano carrillo cardenas


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En el pasado, tenía que contratar a un asesor personal o invertir en ETF sin comisiones para evitar cargos. Cada firma de corretaje cobra tarifas diferentes. 4/13/2017 · Serrano encabezó las mesas de negociación y destacó el compromiso de los concesionarios por prestar un servicio eficiente, de calidad, seguro y económico. En Ciudad de México se cuenta con la tarifa más baja del país de transporte público, tanto concesionado como el operado por el Gobierno de Ciudad de México, destacó. 1/31/2005 · Al igual que las aseguradoras, las compañías de corretaje están pasando por un momento de gran competencia, en donde la pelea se está dando con las tarifas. Según algunos de los empresarios del sector, esto hace que las comisiones que reciben los corredores sean cada vez más pequeñas y eso influye en sus ganancias. Competencia. 10 mejores corredores de opciones binarias 880 Uniéndose a 888, auto binario nadex tácticas binarias abe cofnas, emo binario. 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Comprender dónde cae como comerciante es fundamental para seleccionar un corredor para el día de negociación. Regla del comerciante del día del patrón y requisitos de margen. Ver: Guía de ejecución de pedidos. Dejando a un lado el enrutamiento de pedidos, nuestros otros corredores principales brillan por diferentes motivos. Las tasas de corretaje de comercio en línea +\nPara aquellos que simplemente buscan una forma barata de ejecutar intercambios de opciones, Charles Schwab y eOption hacen el trabajo. Las mejores plataformas de negociación de opciones. Estos corredores ofrecen algunas de las plataformas de negociación más potentes disponibles a un precio razonable.\n- Si usted está buscando un corredor en línea más barato, no busque más - OptionsHouse es nuestra primera opción. 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La tarifa de la Retención del Impuesto de Industria y Comercio sobre los pagos\nEstos corredores ofrecen algunas de las plataformas de negociación más potentes disponibles a un precio razonable. Juzgar la plataforma de negociación de un corredor por la cantidad de características que ofrece es como comprar un automóvil basándose únicamente en lo que lee en el folleto del concesionario. 9/17/2010 · Incluso cuando empezé, que todavía era en pesetas, cobrabamos 500.000 pts mientras ya habia quien cobraba 1 millón y más. eso si, por entonces los pisos valían entre 10 millones y si que se cobraba sobre un 5% pero como dice la noticia, cuanto más caro es el piso, más barata es la comisión o así debería ser, aunque muchos no Cuesta $ 9.95 intercambiar acciones, bonos, fondos de inversión y ETF. Los competidores como TradeKing, OptionsHouse y FirstTrade tienen tarifas más bajas en estos intercambios. Las opciones de compra son baratas, pero puede encontrar opciones más baratas de otras corredoras de opciones, aunque la diferencia es bastante insignificante. Por lo tanto, se sabe que los corredores del Reino Unido, Chipre, Francia, España y otras naciones miembros de la UE atienden a los comerciantes de Alemania sin una licencia BaFin válida. BaFin ha adoptado varios protocolos regulatorios que la convierten en una de las autoridades reguladoras más temidas del mundo. Para probar la facilidad de uso y la flexibilidad, nos registramos para cuentas y simulamos operaciones en todo lo demás. Tres corredores subieron a la cima y cada uno aporta algo único a la mesa. Nuestra elección para el mejor corredor de opciones. TD Ameritrade Tarifas más altas en una plataforma ultra fácil. ¿Busca un contrato de teléfono móvil barato, pero no desea empatar? Entonces las tasas mensuales de venta sin plazo son correctas. ¿Qué proveedor ofrece la Para algunos inversores, el mejor corredor para opciones de negociación es el que tiene las comisiones más baratas. Otros priorizan las herramientas de negociación, el diseño de la plataforma, la investigación, el servicio al cliente o todo lo anterior.\nPor lo tanto, un contrato a plazo es el modo más simple de una transacción derivada. Si el precio de las acciones de Satyam Computers cae en Rs 800, perderá Rs 800. Cada contrato vence el último jueves del mes de vencimiento y, simultáneamente, se introduce un nuevo contrato para la negociación después de la expiración de un contrato. Tarifas competitivas Interacción con una comunidad de comerciantes Recursos educativos para principiantes. Una de las mejores características para negociar Plataforma de negociación superior Amplia personalización disponible. Verá en la tabla anterior que proporcionamos reseñas de los corredores que recomendamos. La Mejor Encuesta de Agentes en Línea 2013 de IBD encontró las cinco plataformas de negociación de opciones que los clientes calificaron como las más altas. Eran OptionsXpress, TD Ameritrade (AMTD), Interactive Brokers, Charles Schwab (SCHW) y TradeStation. - Si usted está buscando un corredor en línea más barato, no busque más - OptionsHouse es nuestra primera opción. Con sus costes de negociación muy bajos y tasas, Al ver el creciente descontento de los comerciantes activos e inactivos igual que estaban cansados de ver los comentarios en línea son abrumadora negativa hacia Questrade. Hay tantos tipos de corredores de bolsa, pero qué corredor le gustaría elegir y sobre qué base lo seleccionará. La siguiente es la información detallada sobre ellos para saber quién es la persona correcta para sus necesidades. El Más Barato De Negociación De Opciones Broker India. Vale la pena verificar esto por adelantado. A través de este plan, los clientes pueden negociar en corretaje 0, en los segmentos de acciones, divisas y materias primas excepto la entrega de acciones, que se cobra en 0,07 y las opciones se cobran en Rs 7 por lote. A diferencia de los corredores que pueden estar al otro lado de su operación, Nadex nunca está del otro lado de su comercio. BMO Harris y Fifth Third. Su pedido se compara con otro comerciante o con un creador de mercado independiente, una institución más grande que acepta proporcionar liquidez.\nCambio de moneda bank of america\nNab tipos de cambio efectivo\nVeces para no operar en forex\nBnb coin a inr\nTipo de cambio banco de canad usd a cad\nPor qué deberías evitar invertir en moneda digital\nMercado bursátil alcista amazon\nSubirá el precio del oro en 2020 india\nPrecio objetivo de las acciones de cld\nPrecio de bitcoin hoy en kenia\nMelhores altcoins 2020\nCui stock después de horas\nCómo pone en el comercio robinhood\nConvertidor de cambio usd\nPrecio del aceite de jaitun 500ml\nPrevisión del precio del combustible para calefacción\nBitcoin cash reino unido\nLista de inversores de ondulación\nRobot de forex ganon\nMmt fotos gratis\nTutorial de comercio de divisas pdf\nCódigo promocional oneup trader


Son seis las modificaciones que el Head Coach Raúl Pérez realizó en la alineación titular. Los Jaguares debutarán como locales ante Chiefs este sábado, a las 18:40 hs. en la cancha de Vélez Sarsfield.\n07- Juan M. Leguizamón.\n09- Martín Landajo\n12- Juan M. Hernández.\n18- Felipe Arregui.


Publicado porvwattb 26 enero, 2016 27 septiembre, 2019 Publicado en Nunca supisteEtiquetas:curioso, sexo\nArrojar pasteles (“Pie throwing”) puede ser una forma divertida de deshonrar a alguien. Se arrojan pasteles en fiestas, en películas y algunas parejas también lo hacen en privado.\nUn sujeto llamado “Pieface Mike” o “PieMan” comenzó su juego con los pasteles a los 8 años. A los 18 le empezó a parecer sexualmente estimulante y ahora le gusta que le arrojen pasteles mientras tiene relaciones sexuales. Autoproclamado “piesexual”, transformó este placer en una performance.\nEl PieMan tiene a un público intrigado por los pasteles. Se acerca a la gente en clubs o eventos e invita a las mujeres a que le tiren pasteles en la cara y luego froten los restos. La mayoría acepta. Mike disfruta de las risas y los comentarios que hacen. Mike ha sido pasteleado pr unas 700 mujeres entre 1990 y 1992 (el link de más arriba es del año cero).\nLos elementos que pueden resultar excitantes respecto de arrojar pasteles a la cara son la anticipación, la vulnerabilidad y la humillación. La pareja que practica el acto lo pasa bien porque los roles son complementarios y tienen la oportunidad de hacer o decir lo que quieran durante ese acto. También es frecuente encontrar videos eróticos “messy” que incluyen a mujeres a las que se les arrojan pasteles…o se los tiran a sí mismas.\n* En los Simpsons hay un PieMan -inventado por Homero-, pero no con los mismos fines.\nEncyclopedia of Unusual Sex Practices, Brenda Love.\nOMGYES, aprende a estimular a una mujer