Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA Analysis | Protocol (Translated to Danish)\nFormålet med dette oplæg er at præsentere en trinvis procedure til at indsamle forskellige hvide fedtvæv fra mus, behandle de fedt prøver og udtrække RNA.\nI forhold til andre væv, har hvidt fedtvæv en betydeligt mindre RNA og protein indhold til downstream applikationer såsom real-time PCR og Western Blot, da det for det meste indeholder lipider. RNA isolering fra fedtvæv prøver også udfordrende som ekstra trin er nødvendige for at undgå disse lipider. Vi præsenterer her, en procedure for at indsamle tre anatomisk anderledes hvidt fedtvæv fra mus, til at behandle disse prøver og udføre RNA isolering. Vi yderligere at beskrive syntesen af cDNA og gen expression eksperimenter ved hjælp af real-time PCR. Den hermed beskrevne protokol giver mulighed for reduktion af forurening fra dyrets hår og blod på fedtpuder samt krydskontaminering mellem forskellige fedtpuder under væv samling. Det er også blevet optimeret til at sikre tilstrækkelig kvantitet og kvalitet af RNA ekstraheret. Denne protokol kan i vid udstrækning anvendes til enhver musemodel, hvor fedtvæv prøver er nødvendige for rutinemæssig eksperimenter såsom real-time PCR men er ikke beregnet til isolation fra primære adipocytter cellekultur.\nFedme er en verdensomspændende epidemi, som kan føre til komplikationer såsom type 2-diabetes1. Kost-induceret fede og genetisk modificerede animalske modeller er ofte anvendes til forskning i fedme og dens tilknyttede komplikationer. Traditionelt hvidt fedtvæv er kendt som et opbevaringsrum til overskydende energi og er for det meste består af lipider, mens brunt fedtvæv omdanner energi til varme2,3. Fedtvæv vil er dynamisk og udvide og krympe afhængig af mange faktorer såsom fødeindtagelse og fysisk aktivitet. Derfor, bestem medvirkende faktorer til disse ændringer ved passende fedtvæv indsamling og håndtering er påkrævet4.\nBlandt hvide fedtvæv, er det generelt accepteret, at subkutan og visceralt fedt depoter har forskellige egenskaber såsom anatomiske lokalisering og fungere2,5. Derfor, for at undgå modstridende resultater eller store forskelle i cadmiumkoncentrationerne, opmærksomhed skal træffes for at undgå krydskontaminering mellem disse forskellige fedt depoter når indsamling fedtpuder.\nDesuden er der tre store udfordringer, når isolering af RNA og protein fra mus hvidt fedtvæv. Første er indsamling fedtpuder i overvægtige mus ikke en let opgave, som den grænse, der adskiller forskellige hvide fedt depoter ikke er altid klart, i modsætning til andre organer som nyrer og hjerte6. For det andet på grund af den høje lipid indhold af fedtvæv under RNA eller protein isolation, et lag af lipider flyder ovenpå og forhindrer direkte adgang til prøven. Tredje, i modsætning til brunt fedtvæv eller andre væv, hvidt fedtvæv har betydeligt lavere RNA og protein indhold og det er af største bekymring, når du bruger unge mus, mus fodret med en normal (N) kost og mus, som forventes at have lav fedt masserne (dvs. KO modeller, behandling med lægemidler, motion uddannelse, osv.) 7 , 8.\nDerfor, at vælge den passende metode til at isolere RNA fra fedtvæv er kritisk. Alternative metoder til fenol/chloroform udvinding er kommercielle kits. De er typisk baseret på en indledende phenol ekstraktionstrinet, efterfulgt af RNA oprensning på en kolonne9. Disse kits er typisk dyrere og give prøver af lavere udbytte, mens RNA kvalitet kan være variabel men er mindre tidskrævende. Men en af de største fordele til phenol løsning/chloroform udvinding beskrevet her er muligheden for isolering af RNA, DNA og protein fra en enkelt prøve10. Da mus fedtpuder er som regel små og give lille mængde af RNA og proteiner (især i lean musemodeller), maksimere disse protokoller den data, man kan få ud af et lille udsnit.\nFormålet med dette papir er at beskrive i detaljer en metode til at sikre passende stikprøve samling fra tre mus hvidt fedtvæv depoter samt mængden og kvaliteten af RNA isolering. RNA opnås ved at følge denne protokol kan bruges til at udføre real-time PCR assays. Denne protokol er ikke beregnet til RNA isolering fra kulturperler primære adipocytter.\nPleje af musene brugt i procedurerne, der overholdes standarder for pleje og anvendelse af forsøgsdyr fastsat af den canadiske Rådet for beskyttelse af dyr. Alle procedurer blev godkendt af universitetet Animal Care og brug Udvalget på kammerat Research Center.\n1. obduktion og fedtvæv samling fra mandlige mus\nGøre eksperimentelle grupper efter undersøgelse mål. I denne undersøgelse blev prøverne indsamlet fra to grupper af mandlige mus på en C57Bl/6 baggrund (n = 12-14/gruppe). Sikre, at musene brugt her er 12-15 uger gammel og vedligeholdes på 12-h lys/mørke cyklus med adgang til enten normal (N) eller høj-fedt (HF) kost og vand ad libitum i en periode på 10 uger11.\nAflive en mus ved at placere musen i et lukket kammer, hvor det er udsat for 6% CO2 i løbet af 10 min.\nUdføre hjerte punktering ved langsomt at indsætte en 1 mL sprøjte monteret med en 26G 1/2po nålen lige til venstre for dyrets brystbenet og langsomt trække stempel til at fjerne det meste af dyrets blod. Sørg for, at sprøjten er parallel til dyrets krop. Rotere sprøjten langsomt mens du trækker stemplet, hvis blod ikke kommer ind i sprøjten.\nBemærk: Vellykket hjerte punktering (mellem 0,8 og 1 mL blodvolumen) vil formindske forurening af fedtvæv med blod.\nLægge mus på ryggen og pin hver pote på pad'en ved brug af 22G nåle, som vist i figur 1.\nMed en gaze, gnide huden af mus med alkohol flere gange starter fra halsen hele vejen ned til genitalierne ved at følge en ensrettet bevægelse, da dette sikrer, at håret forbliver flade og reducerer hår kontaminering af fedtvæv prøver uden hårfjerning.\nBruger ren men ikke steril pincet og kirurgisk saks, ophøje den centrale huden i nærheden af kønsorganer og lave en lille 0.3 mm snit.\nIndsætte saks vandret i åbnede hullet og frigøre den abdominale hud fra den abdominale væg.\nBemærk: Dette er gjort af stump dissektion i mellemrummet mellem huden og bugvæggen og ikke skære membraner fundet i dette rum.\nBrug af pincet, ophøje den centrale huden nær den åbnede hul og skære huden den linea alba indtil du er i nærheden af brystkassen (~ 4 cm afhængigt af mus størrelse).\nBemærk: Undgå at skære den mavemuskel, da dette kan udsætte det viscerale fedtvæv til luften og føre til udtørring af de fedtpuder, som kan ændre integriteten af vævet og dens indhold.\nFra midten af brystkassen, skære huden mod højre arm på ~ 2 cm. Fra skære i nærheden af kønsorganer, huden over det højre bagben lemmer på ~ 2 cm.\nStrække et hjørne af den åbnede hud og pin det ned på puden ved hjælp af en 22G nål. Gentag med andet hjørnet.\nBemærk: Fedtvæv udsat på huden er den abdominale spæk (SCF) (fig. 1A).\nIndsamle SCF af stump dissekere og skære det fra huden ved hjælp af kirurgiske saks placeret så fladt som muligt mod huden. Når indsamlet, sætte SCF på forhånd identificerede aluminiumsfolie.\nBemærk: Indsamling eller forurener adipøst væv med hud eller hår vil ændre prøve kvalitet og RNA udbytte på grund af RNases. Hvis er brugt for meget tid, indsamle fedtvæv, kan prøven også tørre som kan også ændre kvaliteten af prøven.\nGentag trin 1,9 til 1.11 på venstre side af dyret. Pool både venstre og højre fedt puder i aluminiumsfolie og fryse prøven i flydende kvælstof.\nFor at få adgang til de viscerale fedtvæv, skære mavemuskel ved hjælp af ren men ikke steril kirurgiske saks og pincet langs den linea alba, på ~ 4 cm, afhængigt af mus størrelse, fra kønsdelene til brystkassen. Derefter foretage et snit i mavemusklerne fra kønsdelene mod bagsiden af musen på ~2.5 cm skal have adgang til siden af den abdominale organer.\nFedt omkring de reproduktive organer er det peri-gonadale fedt (PGF) (figur 1B). Som PGF er knyttet til epididymis, testiklerne og ductus deferens, Fjern forsigtigt den venstre fedt pad fra disse strukturer og sætte på forhånd identificerede aluminiumsfolie. Gentag for højre side. Når begge PGFs er indsamlet, fryse prøven i flydende kvælstof.\nBegyndende med den venstre side, udsætte nyrerne ved at flytte gut fra bughulen til højre side. Fedtvæv omkring nyrerne er den peri-renal fedt (PRF) (figur 1C). PRF omgiver også binyrerne (fig. 1D).\nIsolere og fjerne binyrerne før indsamling PRF. Dette kan være trættende, da de er bare en smule pinker end fedtvæv.\nBemærk: Nyrerne skal ikke fjernes under dette trin, som blod kan forurene fedtvæv og gøre det vanskeligere at identificere binyrerne inden for denne fedt pad.\nIsolere PRF fra tilbage muskulære væg, slutter ved at skære ureter, renal arterie og vene, som adskiller PRF og nyre fra resten af kroppen. Isolere PRF fra nyre ved at skære og fjerne den renale kapsel. PRF forbliver knyttet til kapslen.\nGentag trin 1,15 og 1,17 for højre side. Sætte begge PRF i aluminiumsfolie og fryse prøven i flydende kvælstof.\nGentag proceduren fra trin 1.2 til 1.18 for alle mus der skal indsamles.\nPå dette punkt fortsætte med fedtvæv slibning eller opbevare prøver i et-80 ° C fryser for senere udvinding. Prøver kan opbevares stabilt ved-80 ° C for flere år4.\n2. forberedelse af jorden hvid fedtvæv til RNA isolering\nBemærk: Bære handsker for hvert trin, som huden indeholder RNases, som kan fremme RNA nedbrydning og som sådan ændrer prøve kvalitet og RNA udbytte efter isolation.\nForberede og identificere tre RNase-fri 1,5 mL konisk skruelåg rør pr. mus, én for hver type af hvidt fedtvæv, og placere dem på en rist.\nBemærk: Fede dyr kan kræve ekstra rør, som de har øget fedt masserne. Dette er især sandt for SCF, op til 7 rør til en mus blev opnået.\nRen bænk med 70% ethanol og sætte en ren og ny bænk papir på overfladen.\nFedtvæv er frisk indsamlet fra mus eller gemt på forhånd i en-80 ° C fryser, samle alle prøver i en flydende nitrogen-fyldt beholder indtil begyndelsen af proceduren.\nFryse den mørtel, spatel og pistillen ved at placere dem i flydende nitrogen container. Når den flydende kvælstof stopper '' koge '', kan slibning af fedtvæv startes.\nBemærk: Fra dette trin, mørtel, spatel skal koniske rør og fedtvæv holde kølet under hele processen. Eventuel varme, der vil smelte fedtvæv og gøre det vanskeligere at udtrække RNA. Også, hvis du bruger en keramisk morter og støder, man kan bruge tøris og/eller flydende kvælstof til at holde det koldt.\nPlacere alle RNase-fri 1,5 mL konisk skruelåg rør parat på trin 2.2 på tøris til at køle dem.\nFor at undgå frostbites på hænderne, skal du bruge et par lag af brunt papir til at løfte mørtlen fra den flydende kvælstof og sætte det på en bænk i orden.\nBruge pincet til at indsamle en fedtvæv prøve fra den flydende kvælstof og sætte det i mørtel. Hurtigt unwrap aluminiumsfolie og slip prøven på midten af mørtel.\nBemærk: Hvis eksemplet fedtvæv er for stor, som er tilfældet med overvægtige mus, bryde prøverne i mindre dele i aluminiumsfolie ved hjælp af dine tommelfingre og pulverisere hver del adskilt.\nBruge et par lag af brunt papir til at løfte pistil fra den flydende kvælstof og passe det ind i mørtel. Mens du holder pistil med brun papirer, brug hammer til at ramme toppen af pistil gange. Tryk på pistil ned mod mørtel med roterende bevægelser at male prøven, indtil der opnås et fint pulver.\nBemærk: Dette trin er afgørende for at opnå tilstrækkelig RNA isolering. Faktisk vil tilstedeværelsen af større fragmenter hindre RNA isolering og reducere udbyttet.\nNår et fint pulver, der er opnået, fjerne pistil og afhente spatel fra den flydende kvælstof og bruge den til at overføre prøven til de tilsvarende præ kølet 1,5 mL konisk tube.\nBemærk: Dyppe spatlen tilbage i flydende kvælstof fra tid til anden at forhindre prøven fra smeltende. Også, holde den koniske rør i tøris altid at forhindre prøven fra optøning. En koniske rør fyldt med jorden prøve at omkring 2/3 kapacitet (~ 1 mL) er påkrævet for passende RNA udbytte og mængde.\nNår fyldt til omkring 1 mL, lukke røret og slip det i de andre flydende nitrogen-fyldt beholder.\nBemærk: Overskydende prøver kan sætte i separate pre kølet RNase-fri 1,5 mL koniske rør og gemt i et-80 ° C fryser til senere brug.\nRen mørtel, pistil og spatel med brun papirer at undgå fremførsel til eksemplet næste fedtvæv. Sætte pistil og spatel tilbage til de flydende kvælstof til køling. Selv om den brune papir er ikke RNase-fri, bruger vi en frisk åbnet pakke i brunt papir for hver dag i RNA isolering.\nGentag trin 2.4 til 2.11 med den næste prøve.\nNår alle prøver er behandlet, starte RNA isolering eller opbevare prøver i et-80 ° C fryser til senere brug.\nBemærk: For at forhindre, at rørene brister, fryse en prøve boks ved fuldstændig nedsænkning det i flydende nitrogen beholder. Når cool nok fjerne det overskydende kvælstof fra boks og lad det flyde ovenpå den flydende kvælstof. Sortere prøverne ind i boksen og sætte det i en-80 ° C fryser.\n3. RNA isolering fra jorden fedtvæv\nForsigtighed: Phenol løsning er skadelige for huden. Bære en laboratoriekittel, handsker, sikkerhedsbriller og udføre proceduren under en kemisk hætte. En trin for trin flowchart er vist i figur 2.\nForberede og identificere to sæt af RNase-fri 1,5 mL koniske rør og læg dem i en rack.\nOm fedtvæv var frisk jord eller allerede gemte i et-80 ° C fryser, samle alle prøver i en flydende nitrogen-fyldt beholder indtil begyndelsen af den procedure, der er for det meste udført ved stuetemperatur.\nBruge pincet til at udtage jorden fedtvæv fra den flydende kvælstof og sætte det i en tube rack. Rørene skal indeholde ~ 1 mL pulver, hvilket svarer til omkring 100 mg af væv pulver.\nLangsomt Åbn røret.\nBemærk: Forlader et lukket rør ved stuetemperatur eller åbne den rørets låg for hurtigt kan føre til prøven tab eller skade som pres fra kvælstof tendens til at flygte fra røret.\nTilføje 500 µL af phenol løsning til prøven (1:2 forholdet af phenol løsning: væv pulver).\nLuk låget af rør og vortex ved maksimal hastighed for omkring 5 s. langsomt og åbne omhyggeligt røret for at frigive trykket fra kvælstof (en lyden af luft, der kommer ud af røret kan blive hørt).\nGentag trin 3.5 og 3.6. Den endelige phenol løsning volumen tilsættes prøven er 1 mL.\nGentag trin 3.6 indtil prøven er helt opløst.\nBemærk: Det er vigtigt at frigive alle pres fra røret før du går videre til at forhindre, at røret sprænger.\nLad prøven stå ved stuetemperatur mens gentage trin 3.4 til 3.8 næste prøverne.\nNår alle prøver er behandlet kort vortex ved maksimal hastighed og inkuberes alle prøver 5 min ved stuetemperatur.\nCentrifugeres 10 min. ved 12 000 x g ved 4 ° C. Bringe rør tilbage til stuetemperatur.\nBemærk: Efter centrifugering, 3 faser er til stede som vist i figur 2: fedt (top), RNA (i midten) og pellet (nederst).\nFor hver prøve, skal du overføre så meget RNA (midterste pink lag) som muligt ind i det første sæt af tilsvarende rør med P1000 pipette bruger en filtreret tip. Ændre tips mellem prøver.\nFor at sikre minimal kontaminering af RNA (midterste lag) af lipid (øverste lag), gennembore den øverste fase med spids i nærheden af siden af røret. Dispensere RNA i de nye koniske rør uden at røre siderne af de nye rør til at forhindre overførsel af lipider, der kan være på ydersiden af spidsen.\nTilføje 200 µL af ren chloroform til hver prøve og blandes ved inversion for 15 s. Ruger 10 min ved stuetemperatur.\nCentrifugeres 15 min på 12 000 x g ved 4 ° C og bringe rør tilbage til stuetemperatur.\nBemærk: Efter centrifugering, 3 faser er til stede: RNA (top), interfase, som indeholder DNA (i midten) og rød phenol-chloroform, som indeholder proteiner (nederst).\nFor hver prøve, overføre som meget gennemsigtig RNA-holdige vandfasen (top fase) som muligt til det andet sæt af tilsvarende koniske rør med P1000 pipette ved hjælp af filtreret-tips. Ændre tips mellem hver prøve.\nBemærk: Interphase er skrøbelige og kan forurene den øverste fase, hvis aspiration er gjort alt for hurtigt. Som et alternativ bruge P200 pipette til at reducere chancerne for at forstyrre interfasen.\nTilsæt 500 µL af 100% isopropanol til hver prøve og bland af inversion i 15 sek.\nRuger 10 min ved stuetemperatur\nCentrifugeres 10 min. ved 12 000 x g ved 4 ° C og bringe rør tilbage til stuetemperatur. Kassér isopropanol af invertere hver tube.\nBemærk: En lille hvid RNA pellet kan normalt ses men kan lejlighedsvis ikke.\nDer tilsættes 1 mL af 75% ethanol (fremstillet af 100% ethanol og RNase-fri vand) til hver prøve og kortvarigt vortex hver tube ved maksimal hastighed.\nCentrifugeres 5 min på 7 500 x g ved 4 ° C og bringe rør tilbage til stuetemperatur.\nKassér 75% ethanol af invertere hver tube og let tap mod et brunt papir til at fjerne eventuelle rester.\nBemærk: Hvis det kræves, skal du bruge en filtreret-tip til at fjerne alkohol nær RNA pellet. Ændre spidsen mellem prøver.\nLad låget åbnes og luft tørre RNA pellet for omkring 15-20 min.\nBemærk: RNA pellets kan blive gennemsigtig under dette trin.\nSom RNA oploesning fra pellet størrelse-afhængige, vurdere størrelsen af toerstoffet til at bestemme mængden af RNase-fri vand skal bruges til solubilize af RNA. Skrive ned for lydstyrken (10-25 µL) for hver prøve.\nBemærk: Dette trin er blot kvalitative. Hvis RNA pellet ikke kan ses, tilføje 10 µL af RNA-gratis vand til prøven.\nTilføje 10-25 µL af RNase-fri vand til hver prøve (forudbestemte volumen på trin 3.24).\nInkuber prøve 5 min i en varme blok sat til 60 ° C. Kort vortex rør.\nInkuber prøve for en yderligere 5 min i den samme varme blok ved 60 ° C.\nQuick-spin alle prøver i en mini spin centrifuge og straks lagt på is.\nBestemme RNA koncentration og renhed. Udføre reverse transkription (RT) til at opnå cDNA eller opbevare prøver i et-80 ° C fryser til senere brug.\nBemærk: Undgå flere fryse/tø cykler, da dette forringer RNA prøver.\n4. bestemmelse af fedtvæv RNA koncentration og renhed\nOm fedtvæv RNA prøver var frisk udvundet og solubilized eller allerede gemte i et-80 ° C fryser, samle alle prøver og tillade dem at tø på is indtil starten af proceduren. Dette gøres lige før starten af den næste skridt eller i slutningen af isolation at undgå flere fryse/tø cykler.\nForberede og identificere to sæt af RNase-fri 1,5 mL koniske rør og læg dem i en tube rack.\nNår alle RNA prøver er helt optøet, vortex en prøve for 1 s og sat tilbage på isen.\nFortyndet din RNA 100-fold i 1 x TE løsning i det første sæt af RNase-fri 1,5 mL konisk rør ved hjælp af filtreret RNase-fri tips (sætte 99 µL 1 x TE løsning og 1 µL af RNA til røret).\nGentag for hver prøve.\nBemærk: Mængderne, der kan være forskellige for hver Spektrofotometer afhængigt af kuvette anvendes.\nNår alle prøver er behandlet, fortyndes vortex hver prøven.\nFølg protokol spektrofotometrets at kalibrere instrumentet ved hjælp af en blank (1 x TE) før behandling de fortyndede RNA prøver.\nOverføre de fortyndede RNA prøver til kvarts kuvette og bestemmes koncentrationen af hver prøve på 260 nm.\nBemærk: Hvis spektrofotometrets ikke giver den endelige RNA-koncentration, bruges denne formel til at beregne: RNA (µg/µL) = OD260 x fortyndingsfaktoren x (40 µg RNA/1 000 µL).\nBestemme RNA renheden af hver prøve ved beregning af forholdet OD260/OD280.\nBemærk: Forholdet OD260/OD280 omkring 2.0 er generelt betragtes som ren for RNA12. Det anbefales, at RNA kvalitet er kontrolleret. For at gøre det, sætte 1 µg af RNA på en 1% blegemiddel agarosegel lavet med 1 x TBE buffer (89 mM Tris base, 89 mM borsyre og 2 mM EDTA, pH 8,0) og 1% blege løsning13 (figur 3). RNA af meget god kvalitet viser både 28S og 18S rRNA bands og 28S bandet bør være mere intens end 18S. RNA kvalitet er acceptabel, når begge rRNA bands er synlige på en tilsvarende intensitet. RNA kvalitet bliver mangelfuld øjeblikket 18S band er mere intens end 28S band, og når en smear er synlige, vejledende RNA nedbrydning.\nFor hver prøve, forberede 10 µL af 0,5 µg/µL af RNA fra bestanden i det andet sæt af RNase-fri 1,5 mL konisk rør ved hjælp af RNase-fri vand til at fortynde prøverne efter behov. Disse prøver anvendes til RT for at opnå cDNA.\nNår alle prøver er behandlet, starte RT eller opbevare prøver i et-80 ° C fryser til senere brug.\n5. reverse-transskription (RT)\nOm fedtvæv RNA prøver var frisk fortyndet til 0,5 µg/µL eller allerede gemte i et-80 ° C fryser, samle alle prøver og reagenser og tillade dem at tø på is indtil starten af proceduren.\nSætte PCR rør strip rack på is. Når kold nok forberede og identificere ét sæt af RNase-fri PCR rør strimler og læg dem på en rist. Omfatte en tom.\nForberede reaktion for DNase behandling af RNA: gøre en master mix (for den nødvendige mængde af prøven + 1 prøve) af følgende (mængder for 1 prøve): 1 µL af 10 X reaktion buffer med MgCl2, 0,5 µL af DNase jeg (1 U/µl) og 7,5 µL af RNase-fri vand ved hjælp af filtreret-tips. Give afkald 9 µL i hver tube.\nTilføje 1 µL af 0,5 µg/µL af RNA fra hver prøve til den tilsvarende tube, sætte hætter på hver strimmel og quick-spin alle strimler i en mini spin centrifugeres for at bringe prøven til bunden af røret. Tilføj 1 µL af RNA-gratis vand til blindprøven.\nInkuber alle rør strimler i en termisk cycler eller en opvarmning blok ved 37 ° C i 30 min. sæt rør strimlen tilbage på rack på is.\nTilføje 1 µL af EDTA (50 mM) til hver tube og inkuberes alle rør strimler i en termisk cycler eller en opvarmning blok på 65 ° C i 10 min. sæt rør strimlen tilbage på rack på is.\nGøre en master mix (for det krævede antal prøver plus 1 prøve) af følgende (mængder for 1 prøve): 1 µL af tilfældige hexamers (0,2 µg/µL) og 1 µL af dNTP mix (indeholder hver af de fire deoxynucleotides i en koncentration på 10 mM). Undvære 2 µL af den master mix i hver tube ved hjælp af filtreret-tips. Ændre spidsen mellem prøver.\nInkuber alle rør strimler i en termisk cycler eller en opvarmning blok på 65 ° C i 5 min. sættes tube strimlen tilbage i rack på is.\nGøre en master mix (for det krævede antal prøver plus 1 prøve) af følgende (mængder for 1 prøve): 4 µL af 5 x RT buffer, 1 µL af RNase inhibitor (20 U/µL), 0,25 µL af reverse transkriptase (200 U/µL) og 1,75 µL nukleasen-gratis vand. Dispensere 7 µL i hvert rør ved hjælp af filtreret tips. Ændre spidsen mellem prøver.\nUdføre RT i en termisk cycler ved at indstille følgende program: 10 min. ved 25 ° C, 30 min ved 50 ° C, 5 min ved 85 ° C. Sæt rør strips tilbage på rack på is.\nForberede og identificere ét sæt af RNase-fri PCR rør strips og læg dem på rack.\nFor hver prøve, forberede den ønskede mængde af 1:5 fortyndet cDNA fra bestanden i de nye rør strimler bruger ultrarent vand. 1:5 fortyndet cDNA prøver vil blive brugt til real-time PCR.\nNår alle prøver er behandlet, starte real-time PCR eller opbevare prøver (lager og fortyndede prøver) i en-20 ° C fryser til senere brug.\n6. real-time PCR for genekspression i fedtvæv\nBemærk: Undgå at udsætte den fluorescerende farvestof til lys. Protokollen nedenfor beskriver forstærkningen af reference gen s1614. Primere og PCR betingelser bør være tilpasset gen af interesse.\nOm cDNA prøver var frisk fortyndet til 1:5 eller allerede gemte i en-20 ° C fryser, samle alle prøver og reagenser og tillade dem at tø på is indtil starten af proceduren.\nSætte rack for real-time PCR rør strimler på is. Når kold nok forberede og identificere ét sæt af real-time PCR rør strimler og læg dem på rack. Forberede hver prøve og Tom i to eksemplarer.\nGøre en master mix (for det krævede antal prøver plus 1 prøve) af følgende (mængder for 1 prøve): 1,9 µL ultrarent vand, 5 µL af fluorescerende farvestof (fx SYBR green) og 0,3 µL af en fremadrettet primer og 0,3 µL af den omvendte primer. Dispensere 7,5 µL i hver tube.\nTilføje 2,5 µL af 1:5 fortyndet cDNA fra hver prøve til den tilsvarende tube. Tilføje 2,5 µL ultrarent vand til de tomme felter. Sæt lågene på hver strimmel.\nFølg fabrikantens instruktioner for at konfigurere følgende program på real-time PCR: 10 min. ved 95 ° C og 40 cykler med 15 s ved 50 ° C, 30 s på 60 ° C, 30 s ved 70 ° C. Læg prøven strimler ind i rotoren af real-time PCR maskine og start programmet.\nBemærk: Betingelser, der termisk cycler kan variere afhængigt af den benyttede apparatur og gen af interesse. mRNA udtryk resultaterne præsenteres i fig. 3 viser leptin mRNA forstærkning normaliseret af reference gen S16 mRNA forstærkning14,15.\nEfter proceduren obduktion blev tre hvide fedtvæv indsamlet og vægtet fra de to grupper af mus (N og HF kost-fed mus). Som forventet, havde mus på HF kost øget endelige kropsvægt og vægtøgning i forhold til søskende på N kost (tabel 1). Disse observationer blev ledsaget af mere end en 2-fold stigning i vægten af PGF, PRF og SCF i overvægtige mus i forhold til dem på N kost.\nFør du udfører eksperimenter med den isolerede RNA, blev dets renhed evalueret som beskrevet i trin 4.9. For hver hvidt fedtvæv, RNA isolering af phenol løsning produceret prøver med passende kvalitet som forholdet OD260/OD280 var omkring 2,0, der betragtes som ren for RNA (tabel 2). Real-time PCR data viste, at leptin mRNA udtryk var steget betydeligt i PGF, PRF og SCF af overvægtige mus i forhold til dem på N kost (figur 4A). Forskelle observeret i leptin mRNA udtryk var faktisk ikke på grund af en variation af s16, reference gen bruges til at normalisere resultater, mellem de to grupper af mus Ct værdier var ikke ændres (fig. 4B). Således kan s16 pålideligt bruges som en reference-genet til mRNA udtryk i PGF, PRF og SCF når HF kost er en parameter i en undersøgelse protokol.\nFigur 1 . Anatomiske lokalisering af hvidt fedtvæv i mus. En mandlig mus på N kost er blevet dissekeret for at vise lokalisering af hver fedtvæv depot og binyrerne. SCF (A), PGF (B), PRF (C) og binyrerne (D). PGF, peri-gonadale fedt; PRF, peri-renal fedt; SCF, abdominal spæk. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.\nFigur 2 . RNA isolering protokol flowdiagram ved hjælp af phenol løsning. Skematisk fremstilling af de nødvendige skridt til at isolere RNA fra jordet hvidt fedtvæv. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.\nFigur 3 . RNA kvalitetsvurdering på blegemiddel gel. 1 ug af RNA isoleret fra spæk (SCF) og peri-gonadale fedt (PGF) er adskilt på en 1% agarosegel blegemiddel af elektroforese. 28s og 18s rRNA er visualiseret ved ved UV-gennemlysning. På gel er RNA isoleret fra SCF og PGF af en mus fodret en normal kost. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.\nFigur 4 . Effekten af HF kost om leptin og s16 mRNA ekspression i hvidt fedtvæv. Leptin (A) og s16 (B) mRNA udtryk. Data for leptin er normaliseret til s16 mRNA niveau, mens tallene for s16 vises som Ct værdi og begge præsenteres som gennemsnit ± SE med n = 12-13 pr. gruppe. * p < 0,05 sammenlignet med N kost. Nielsen, normal; HF, høj-fedt; PGF, peri-gonadale fedt; PRF, peri-renal fedt; SCF, abdominal spæk. Dette tal er blevet ændret fra Tan, P. et al, fedme (2014) 22, 2201-2209. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.\nN kost HF kost\nEndelige vægt (g) 37,5 ± 1.3 46,7 ± 1.7*\nVægtøgning (g) 6.6 ± 0,7 16,7 ± 1.0*\nPGF (g) 1.08 ± 0,17 2.19 ± 0.15*\nPRF (g) 0,79 ± 0,15 1,71 ± 0.06*\nSCF (g) 1.62 ± 0,35 3,55 ± 0.20*\nTabel 1. Effekten af HF kost på kroppen og hvidt fedtvæv vægte. Værdier udtrykkes som middel ± SE med n = 14-15 pr. gruppe. * p < 0,05 sammenlignet med N kost. Nielsen, normal; HF, høj-fedt; PGF, peri-gonadale fedt; PRF, peri-renal fedt; SCF, abdominal spæk. Dette tal er blevet ændret fra Tan, P. et al, fedme (2014) 22, 2201-2209.\nPRF 2 2,08\nPRF 3 2,08\nSCF 2 2.02\nTabel 2. RNA renhed efter isolation fra hvidt fedtvæv. n = 3 pr. fedtvæv. PGF, peri-gonadale fedt; PRF, peri-renal fedt; SCF, abdominal spæk.\nFølgende HF-kost fodring, blev overvægtige mus fundet at være steget krop og hvidt fedtvæv vægte sammenlignet med mus fodret en N kost. RNA udvundet ved hjælp af phenol løsning givet prøver med god renhed. Leptin er et adipokine primært fremstillet af fedtvæv og er kendt for at korrelere positivt med fedt masse16. Som forventet, øget leptin mRNA udtryk i overvægtige mus i bankkonsortiet med deres fedtmasse.\nDenne metode har flere kritiske trin. Den store er forurening af et hvidt fedtvæv depot med en anden som det er kendt, at forskellige fedtvæv depoter har forskellige funktioner2,5. Kontaminering kan give misvisende resultater i downstream applikationer. Derudover som fedt tendens til at tørre en gang i kontakt med luft, indsamle hvide fedtvæv i en regelmæssig og ensartet tempo i mellem mus anbefales hvis vægten skal tages. Ellers, den samlede vægt af et fedt pad kan være forkert. For at få RNA af god kvalitet og udbytte, efter den nyligt offentliggjorte MIQE retningslinjer er en konkret aktiv17. Navnlig kan gør meget fine prøve pulver under slibningen hjælpe maksimere udbyttet. Dette maksimerer kontakt mellem væv pulver og phenol løsning under RNA isolering. Sidst men er ikke mindst isolering af RNA-holdige lag under RNA isolering (trin 3.12). Som fedt er mindre tæt end vand, er det placeret oven på fasen af interesse. Minimere fremførsel af fedt er nødvendige for at reducere interferens med downstream applikationer.\nEn begrænsning af denne metode er den færdighed, der kræves for at udføre flere trin i proceduren samt behovet for at arbejde med skadelige reagenser under RNA isolering. Hele processen er desuden arbejdskraftintensive.\nDer er ikke mange alternativer til metoden af fedtvæv samling og prøve behandling før RNA isolering bortset fra små detaljer, som er normalt justeret af hver bruger. I tilfælde af RNA isolering er mange indstillinger tilgængelige som fenol/chloroform udvinding eller RNA isolering kits. Der er fordele og ulemper til hver indstilling, og det er op til brugeren at vælge den bedste metode baseret på downstream applikationer. Fenol/chloroform udvinding er billigere, men kræver brug af skadelige reagenser og er besværlige. RNA isolering kits er generelt dyrere men proceduren er hurtigere og typisk udbytter prøver med god kvalitet og renhed. Det er vigtigt at overveje udbyttet og renheden af RNA, fordi materialet er begrænset i hvidt fedtvæv som hovedsageligt består af fedt. Den største fordel ved at bruge phenol løsning til isolering (fenol/chloroform udvinding) er muligheden for isolering af RNA, DNA og protein fra en enkelt prøve18. Det er tid- og omkostningseffektive som det reducerer antallet af mus, der kræves for at opnå tilstrækkeligt materiale. Som tidligere nævnt, er fedtmasse begrænset i nogle musemodeller. For disse mus anbefales opdele jorden fedtvæv i tre dele separat få RNA, DNA og protein ikke som dette kan føre til utilstrækkelig materiale til downstream applikationer. For at omgå dette problem, er det også muligt at samle lignende fedtvæv depot fra flere mus baseret på brugerdefinerede kriterier, der fører til et øget antal dyr behov.\nDette arbejde blev støttet af Diabetes Canada.


Udkast til kontrakt vedrørende madproduktion og levering heraf i Roskilde. Kontrakt om madproduktion og levering heraf Kontrakten er indgået mellem: - PDF\nDownload "Udkast til kontrakt vedrørende madproduktion og levering heraf i Roskilde. Kontrakt om madproduktion og levering heraf Kontrakten er indgået mellem:"\n1 Social og Sundhed Social- og Sundhedssekretariat Udkast til kontrakt vedrørende madproduktion og levering heraf i Roskilde Kontrakt om madproduktion og levering heraf Kontrakten er indgået mellem: Roskilde Kommune Køgevej Roskilde Kommune Cvr. nr (herefter benævnt kommunen) og XX (herefter benævnt leverandøren) 1. Kontraktens formål Formålet med nærværende kontrakt samt tilhørende bilag er at regulere forholdet mellem kommunen og leverandøren i forbindelse med leverandørens varetagelse af madproduktion og levering heraf. Aftalegrundlaget udgøres af følgende bilag i prioriteret rækkefølge: Nærværende kontrakt dateret den XX. XX 20XX Det samlede udbudsmateriale dateret januar 2010 Spørgsmål og svar dateret i perioden den 16. februar 2010 til og med den 20. februar 2010 i forbindelse med udbudsforretning Leverandørens beskrivelse af at kunne efterkomme kvalitetskrav opsat i udbudsmateriale 2. Kontraktperiode Kontrakten indgås for perioden 1. juni 2010 til og med 31. maj 2012 med en option for kommunen på forlængelse i op til yderligere 2 gange 12 måneder. Kommunen giver senest 3 måneder før kontraktens udløb meddelelse til leverandøren, såfremt kommunen ønsker at gøre brug af optionen. Såfremt optionen ønskes benyttet, vil kontrakten blive forlænget på uændrede vilkår. Såfremt optionen ikke ønskes benyttet, udløber kontrakten automatisk med udgangen af maj måned Ved misligholdelse af kontrakten kan kommunen opsige kontrakten med 30 dages skriftlig varsel, i grovere tilfælde eller gentagelsessituationer med omgående virkning.\n2 Side2/8 3. Kontraktens omfang Kontrakten omfatter produktion af mad til hjemmeboende borgere i distrikt XX og udbringning heraf. 4. Leverandørens forpligtigelser Leverandøren påtager sig at gennemføre de ved ordreafgivelsen anførte leverancer. 5. Kontakt mellem kommunen og leverandøren I forbindelse med kontraktens underskrivelse aftaler kommunen og leverandøren, hvem der er kontaktpersoner under kontrakten, og hvem der varetager den daglige kontakt i relation til kontrakten. Der udarbejdes i forbindelse hermed en telefonliste, hvor der er kontaktinformationer på relevante personer fra Roskilde Kommune og fra leverandøren. 6. Prisregulering Prisregulering kan finde sted én gang årligt med virkning fra 1. januar, første gang den 1. januar Såfremt leverandøren ønsker at benytte muligheden for prisregulering, skal dette varsles kommunen senest den 1. december året før reguleringen træder i kraft. Prisreguleringen kan maksimalt udgøre den procentvise stigning på den kommunale kontoart 4.9 (øvrige tjenesteydelser) som udmeldt af Kommunernes Landsforening året før - normalt i løbet af marts måned. Det kan oplyses, at fremskrivningen fra 2009 til 2010 på denne kontoart udgør 2,8 %. Ingen prisregulering kan iværksættes uden kommunens forudgående skriftlige godkendelse heraf. I modsat fald vil det være at betragte som en væsentlig misligholdelse. Såfremt der vedtages ny lovgivning, herunder omlægning af skatter og afgifter, som påvirker leverandørens produktionsomkostninger, har begge parter ret til en genforhandling af prisstrukturen. En sådan genforhandling skal baseres på detaljeret dokumentation, der godtgør ændringen i produktionsomkostningerne. 7. Afregning For leverancen afregnes bagud den til enhver tid leverede ydelse med de tilbudte enhedspriser jf. leverandørens løbende månedlige opgørelser. 8. Betaling Betalingsbetingelser vil for alle betalinger i forbindelse med denne kontrakt være en måned fra fakturamodtagelse hos Roskilde Kommune. 9. Fakturering Udspecificeret faktura separat for madleverance og for transport / levering fremsendes elektronisk. Af bilag til faktura fremgår navn, adresse samt antal leveringer for hver person. Tilbudsgiveren af mad skal være i besiddelse af edb-udstyr, der kan kommunikere med KMD. Roskilde Kommune er ikke berettiget til helt eller delvis at tilbageholde betaling på grund af modkrav, leverandøren ikke har anerkendt.\n3 Side3/8 Betaling vil først kunne ske efter modtagelse af faktura. Alle fakturaer til kommunen skal gebyrfrit fremsendes elektronisk, jf. LBK nr. 798 af 28. juni 2007 om offentlige betalinger mv. 10. Diverse data og informationer Inden for lovens rammer, har leverandøren brugsret til diverse data og informationer så længe leverandøren udfører opgaver i henhold til kontrakten. Data må alene anvendes i forbindelse med opfyldelse af kontrakten. Alt materiale tilhører kommunen, og skal efter konkret anmodning udleveres til kommunen enten elektronisk eller såfremt dette ikke er muligt i papirform. 11. Målinger og kvalitetssikring Leverandøren forpligter sig til månedligt at udarbejde de i kravspecifikationen opstillede informationer til Roskilde Kommune, jævnfør afsnit om krav til ledelsesinformation for så vidt angår madproduktion og madleverance. Leverandøren er forpligtet til at levere data til brug ved senere udbud af tilsvarende område. Leverandøren er på anfordring fra Roskilde Kommune forpligtiget til at fremsende dokumentation, der vedrører de af lovgivningen udstukne retningslinjer, samt statistikker der i en vis detaljeringsgrad periodevis viser del- og totalleverancer til Roskilde Kommune. Statistik skal fremsendes i elektronisk læsbart format kompatibelt med microsoft excel eller tilsvarende konvertibelt format. Leverandøren skal have et internt kvalitetssikringssystem, som dokumenterer, at ydelserne leveres i overensstemmelse med kontraktgrundlaget. Kommunen kan kræve kvalitetssikringsrapporter fremsendt med 14 dages kalendervarsel. 12. Sikkerhedsstillelse og forsikringer Samtidig med underskrivelse af kontrakt, skal tilbudsgiveren stille en sikkerhed i form af bankgaranti, der udgør 10 % af tilbudssummen beregnet som den samlede anslåede betaling for den tilbudte leverance i 12 måneder. Manglende garantistillelse anses for en væsentlig misligholdelse. Leverandøren er ansvarlig efter dansk rets almindelige erstatningsregler. Leverandøren skal, i hele kontraktperioden, have forsikringsmæssig dækning af sit erhvervsansvar i et af Finanstilsynet anerkendt forsikringsselskab dækkende tingsskade på minimum kr. 2 mio. og dækkende personskade på minimum kr. 5 mio. pr. skadebegivenhed. Leverandørens ansvar er dog ikke begrænset hertil. Leverandøren er forpligtet til i hele kontraktperioden at opretholde denne forsikringsdækning. Kommunen forbeholder sig ret til under kontraktens løbetid at afkræve leverandøren dokumentation herfor. Såfremt leverandøren ikke er registreret i Danmark, skal leverandøren overfor kommunen udstede en garanti for, at leverandøren er omfattet af den forsikringsdækning, som er angivet\n4 Side4/8 ovenfor, og at leverandøren - i fald forsikringen opsiges eller bortfalder - forpligter sig til straks at informere kommunen herom. Senest fem arbejdsdage efter kontraktens indgåelse, skal leverandøren fremsende dokumentation for tegnede forsikringer til kommunen. Manglende forsikringsdækning vil være at betragte som en væsentlig misligholdelse. 13. Love, myndighedskrav m.m. Leverandøren og dennes personale skal overholde de til enhver tid gældende direktiver, love, bekendtgørelser, myndighedskrav, offentlige påbud, regulativer og diverse standarder såvel på aftaletidspunktet som i aftaleperioden. 14. Tavshedspligt og aktindsigt Leverandøren og dennes personale har tavshedspligt med hensyn til oplysninger, som de måtte blive bekendt med i forbindelse med opfyldelse af kontrakten, jf. relevante bestemmelser i hhv. Straffelov, Forvaltningslov og Retssikkerhedslov. Denne tavshedspligt gælder også efter kontraktens udløb. Enhver person, der gennem sin tilknytning til leverandøren er beskæftiget med udførelsen af opgaverne i henhold til kontrakten eller på anden måde får kendskab til fortrolige oplysninger i tilknytning til opgaverne, er undergivet samme tavshedspligt. Leverandøren er forpligtet til at sikre, at leverandørens ansatte og andre personer, som gennem tilknytning til leverandøren får kendskab til oplysninger i tilknytning til kontrakten, kender og overholder de forpligtelser, som følger af tavshedspligten. Tavshedspligten fortsætter efter kontraktens udløb og efter den enkelte medarbejders fratræden af sin stilling hos leverandøren. Kontrakten er fortrolig og må hverken helt eller delvist offentliggøres uden at leverandøren og kommunen har indgået en skriftlig aftale herom. Overtrædelser af disse bestemmelser vil blive betragtet som væsentlig misligholdelse. 15. Overdragelse af rettigheder og fordringer Rettigheder og forpligtigelser efter denne kontrakt med tilhørende bilag, vil hverken helt eller delvist kunne overdrages, sælges eller belånes af leverandøren. Overtrædelse af denne bestemmelse anses som væsentlig misligholdelse. 16. Underleverandører Anvendelse af underleverandører kan kun ske efter skriftlig godkendelse af kommunen. Kommunen kan kræve, at underleverandøren opfylder samme krav som leverandøren. Det er leverandørens ansvar at fremsende relevant dokumentation til kommunen herfor. Såfremt leverandøren anvender underleverandøren til opfyldelse af sine forpligtigelser under kontrakten, garanterer leverandøren for opfyldelsen af kontrakten i samme omfang, som hvis leverandøren selv havde udført opgaven.\n5 Side5/8 Leverandøren hæfter for underleverandørens forhold på samme vis som for egne forhold. 17. Konsortium Såfremt leverandøren er et konsortium, hæfter de i konsortiet deltagende fysiske/juridiske personer ubegrænset, solidarisk og direkte for opfyldelse af kontrakten. 18. Miljø Leverandøren garanterer, at alt hvad der bliver leveret under kontrakten opfylder de til enhver tid gældende miljøregler, -love, -bekendtgørelser, EU-direktiver m.m. På kommunens forlangende skal leverandøren, uden udgifter for kommunen, fremskaffe den dokumentation, som kommunen måtte ønske omkring et produkt, til brug for kommunens miljøvurdering af produktet, jf. i øvrigt kravspecifikationen. Såfremt gældende miljøregler ændres på en måde, der påfører leverandøren en merudgift, kan det aftalte vederlag reguleres. Reguleringen kan kun omfatte dokumenterede merudgifter. Dokumentationen skal vise, hvordan ændringer påvirker leverandørens omkostninger og i hvilket omfang. Dokumentationen er ikke løftet med en henvisning til aftaler indgået af 3. mand, f.eks. aftaler indgået mellem Kommunernes Landsforening og leverandørens brancheorganisation. 19. Personale Leverandøren og dermed underleverandører har underskrevet erklæring om arbejdsforhold, jf. bilag 4. Herudover henvises til krav i udbudsmaterialet for så vidt angår personale og personalets optræden. 20. Socialt ansvar Leverandøren er forpligtet til at sikre overholdelse af grundlæggende rettigheder, herunder må leverandøren ikke forskelsbehandle som følge af køn, race, religion, seksuel orientering, politisk anskuelse, handicap, alder og etnisk tilhørsforhold. Leverandøren skal endvidere bestræbe sig på at deltage i integrationen af udsatte grupper, eksempelvis længerevarende ledige, personer med anden etnisk baggrund end dansk og personer med nedsat arbejdsevne. 21. Misligholdelse Såfremt den ene part misligholder sine forpligtigelser i henhold til kontrakten, er den anden part berettiget til erstatning, for ethvert tab, efter dansk rets almindelige regler og kan kræve forholdsmæssigt afslag, foretage modregning, foretage erstatningskøb, modtage erstatning mv., og det forudsættes, at reglerne herom kan bringes i anvendelse samtidig således, at modregning, erstatning, erstatningskøb, forholdsmæssigt afslag mv. ikke udelukker hinanden. Ved væsentlige misligholdelse er den anden part berettiget til at ophæve kontrakten med øjeblikkelig virkning. Niveauet for misligholdelse er nogle steder reguleret direkte i kontraktgrundlaget. Dette er dog ikke udtømmende.\n6 Side6/8 Forinden misligholdelsesbestemmelserne bringes i anvendelse, har parterne pligt til at søge uoverensstemmelsen løst i mindelighed. Ved væsentlig misligholdelse har den part, der vil påberåbe sig misligholdelsen pligt til, forinden kontrakten ophæves, at fremsende ét skriftligt påkrav til den misligholdende part om at bringe misligholdelsen til ophør med øjeblikkelig virkning, subsidiært inden for en nærmere fastsat frist afhængig af misligholdelsens karakter. Den krænkede part kan stille krav til den måde, hvorpå misligholdelsen skal bringes til ophør, og de skridt der skal tages for at undgå tilsvarende misligholdelser fremover. Såfremt den misligholdende part ikke kan bringe misligholdelsen til ophør indenfor den i påkravet anførte frist, kan den krænkede part ophæve kontrakten uden yderligere varsel. Såfremt den krænkede part ikke anser den misligholdende parts bestræbelser på at afhjælpe den væsentlige misligholdelse for tilstrækkelige, kan den krænkede part ophæve kontrakten uden yderligere varsel. Ved bedømmelsen af om der foreligger en væsentlig misligholdelse, skal der tages hensyn til karakteren af de opgaver, som kontrakten omfatter, misligholdelsens karakter, risikoen for gentagelse efter allerede indtrufne gentagelser, en ophævelses betydning for leverandøren hhv. kommunen, herunder set i lyset af kommunens offentligretlige forpligtelser i tilknytning til de opgaver, som kontrakten omfatter samt til andre relaterede omstændigheder Nedenfor er anført dog ikke udtømmende andre mulige situationer, der er at betragte som væsentlig misligholdelse: Væsentlig tilsidesættelse af hele eller dele af kontrakten eller væsentlige ændringer af opgavens indhold uden forudgående skriftlig aftale med kommunen betragtes som væsentlig misligholdelse af kontrakten. Væsentlig misligholdelse anses altid for at foreligge, når leverandørens udførelse af opgaven i henhold til kontrakten er behæftet med så alvorlige mangler, at kommunen ikke med rimelighed fortsat kan forventes at ville overlade udførelsen af de i kontrakten omfattende opgaver eller dele heraf til leverandøren. Væsentlig misligholdelse anses altid for at foreligge, hvis leverandøren forgæves har forsøgt at korrigere en misligholdelse, eller hvis der i løbet af 14 dage efter kommunens påtale af en mangel eller misligholdelse indtræder en tilsvarende mangel eller misligholdelse. Leverandøren kan ophæve kontrakten, hvis kommunen væsentligt misligholder sin betalingsforpligtelse eller sin forpligtelse til, som kontraktpart at medvirke til, at leverandøren kan udføre de af kontrakten omfattende opgaver korrekt og rettidigt. Leverandøren er dog ikke berettiget til at ophæve kontrakten, såfremt leverandøren på anden måde kan varetage sine interesser i tilstrækkeligt omfang. Væsentlig misligholdelse foreligger, hvis leverandøren ikke aktivt medvirker til en effektiv realisering af de målsætninger og værdigrundlag, som er beskrevet i kontraktgrundlaget, eller hvis leverandøren ikke aktivt medvirker ved procedurer o. lign., som er beskrevet i kontrakten. Dersom leverandøren gentagne gange ikke opfylder sine forpligtigelser i henhold til kontrakten, eksempelvis ved reklamation, forsinkelser, fejlagtige leverancer, vil det anses som væsentlig misligholdelse.\n7 Side7/8 Såfremt leverandøren må indse, at der er risiko for misligholdelse, skal leverandøren omgående give kommunen en skriftlig og begrundet meddelelse herom. I tilfælde af leverandørens misligholdelse kan kommunen stille krav til den måde, hvorpå misligholdelsen skal bringes til ophør, og de skridt der skal tages for at undgå lignende misligholdelse fremover. Ved ophævelse af kontrakten tilbagebetaler leverandøren den betaling, som eventuelt måtte være modtaget for endnu ikke udførte opgaver i henhold til kontrakten. Uanset en ophævelse af kontrakten er leverandøren i en overgangsperiode forpligtet til at varetage opgaverne, som er omfattet af kontrakten, indtil opgaverne med rimeligt varsel kan overdrages til kommunen eller tredjemand. Leverandøren er ved kontraktens ophør, uanset årsagen hertil, forpligtet til aktivt og på absolut bedste vis at medvirke til, at opgaven overgår til tredjemand uden problemer. Vil en part ophæve kontrakten, skal den anden part uden ugrundet ophold have meddelelse efter misligholdelsen er eller burde være opdaget. I modsat fald fortaber parten sin ret til at hæve kontrakten eller til at kræve afhjælpning. Dette gælder dog ikke, hvis den anden part har handlet svigagtigt eller gjort sig skyldig i grove fejl og forsømmelser. Al korrespondance omkring misligholdelse og ophævelse skal foregå skriftligt. 22. Konkurs Går leverandøren konkurs eller indtræder der betalingsvanskeligheder, insolvens, betalingsstandsning eller likvidation, vil dette/disse forhold være at betragte som væsentlig misligholdelse, og de i tilknytning hertil fastsatte vilkår vil kunne bringes i anvendelse i såvel umiddelbar forlængelse af kommunens kendskab herom som senere i forløbet, eksempelvis under en betalingsstandsning eller likvidation. Såfremt boet har ret til at indtræde i kontrakten i medfør af konkurslovens bestemmelser skal boet efter forespørgsel inden 5 arbejdsdage give skriftlig meddelelse herom. 23. Force majeure Force majeure reguleres i overensstemmelse med dansk rets almindelige bestemmelser herom. Særligt gælder, at vejrlig som leverandøren ikke med rimelighed kan forventes at overvinde, anses som force majeure. 24. Tvist Eventuel tvivl om forståelse eller andre tvistigheder i forbindelse med denne aftale afgøres endeligt ved Dansk Voldgifts Institut. 25. Ændring af kontrakt Nærværende kontrakt kan kun ændres ved skriftlig enighed mellem leverandør og kommunen.\n8 Side8/8 26. Underskrift Dato: Dato: Leverandør Roskilde Kommune


Bordeller i århus pigerne fra halmtorvet / Babeindex dk\n17-08-2018 af Danielsen Anita med Kommentarer Slået Fra på Bordeller i århus pigerne fra halmtorvet\nLidt nostalgi, fRA, webmaster Geil Auf Sperma, escort, desire Lidt nostalgi, fRA, webmaster - DET handler faktisk OGSÅ OM EN skolelukning. Ovenstående billede af min barndoms skole - Enghave Plads Skole (oprindelig Istedgade Skole der er over 100 år gammel og hvor jeg har tilbragt 8 år af mit liv er også lukningstruet, den skal sammenlægges - bemærk udtrykket - med Matthæusgade Skole, som jeg). Annonce lys hævede patter Mørke piger. Operationen foregår i fuld\nLidt nostalgi, fRA, webmaster Geil Auf Sperma, escort, desire Lidt nostalgi, fRA, webmaster - DET handler faktisk OGSÅ OM EN skolelukning. Ovenstående billede af min barndoms skole - Enghave Plads Skole (oprindelig Istedgade Skole der er over 100 år gammel og hvor jeg har tilbragt 8 år af mit liv er også lukningstruet, den skal sammenlægges - bemærk udtrykket - med Matthæusgade Skole, som jeg). Annonce lys hævede patter Mørke piger. Operationen foregår i fuld bedøvelse, med 1 døgns indlæggelse og efterfølgende sygemelding i 1-2 uger. Thai Massage, hottest Sex Thai Intim, massage Jyllingevej 173 Kusse Og Pik Arabiske Piger Svebölle Amateur Wife Porn Sex Store Damer Bestil Virtual Sex Porn Sexy Thai massage i Vejle slikke min fisse, Dansk trans For Sex Yderby Hot College Girls Kontaktinformation på Danske Lena Nordjylland Har en dejlig behåret stram mis, der elsker. Aalborg pornofilm at fotografere escort massage kbh vil. Denne e-mailadresse er allerede blevet brugt ved tilmelding til connected_third. Car Porn Par Søger Fyr Over Barrit Online Chat Dansk Odense Thai Massage Fensmark Japanese Sex Tube Sex Annonce Thyborøn Nøgne Dame.\nDer er en hel del magistre, der har en ubændig lyst til at gøre sig gældende og tilsyneladende mangler enhver form for kritik af egne påstande. Bægeret har en let konisk cuppa, kort stilk med nodus og næsten flad, cirkulær form. Et par bygninger andre steder, hvor jeg også har haft min gang er Københavns Byret, Retten på Blegdamsvej, Fogedretten i Hestemøllestræde og dommervagten på Politigården. På grundlag af den store mængde faktiske oplysninger, der er til rådighed, må man komme til den konklusion, at disse års danske udenrigspolitik på intet stadium kan forklares tilfredsstillende ud fra de internationale konjunkturer. Der er noget uendeligt mere hellig og unikt over jødisk liv end over ikke-jødisk liv.' Dette blev sagt af en førende Lubavitch rabbiner ved navn Yithzak Ginsburgh og det kan findes i april 26 1996 nummeret af den populære jødiske publikation Jewish Week. Det kræver ikke en ældstebroder eller pastor, eller en speciel formet døbefond med indviet vand. Det lille palæ stod færdigt i 1702 og kaldtes i folkemunde for 'Gyldenløves lille Palæ'. Jeg spiste og drak øl og snakkede med folk på et berømt Pivnice (ølstue hvor man også kunne få 3 retter mad for ingen penge. Sådan kan et enkelt blik på en bygning på en udflugt med Bevaringsforeningen bringe en masse op af erindringens dyb. Hvis denne jødegud ikke er for alle mennesker på jorden - så kan jeg sagtens undvære ham og vil helst være fri for ham.\nNogle laver det sjove - andre det grove. Jesus og hans disciple forfulgtes af Herodes den Store og hans børn, børnebørn og oldebørn; Paulus nævner dem ikke. 1803-05 ledede Horatio Nelson blokaden af den franske flåde i Toulon;. Muslimer omskæres traditionelt senere. Vi kastede Carduserne fra de forreste Kister i Lasten grænsekiosker padborg ladyboy porno og slukkede Ilden. Det har politiske efterfølgere lagt i ruiner. August 1943 trods løfter om det modsatte ladt i stikken, så tyskerne kunne føre dem til sex-annoncer swinger klub odense Kz-lejre i Tyskland - ved et slumpetræf, fordi tyskerne ikke vidste at Horserødlejren bestod af 2 lejre, lykkedes det en sex heute berlin kliniksex frankfurt del af de internerede at flygte, men 150 havnede. Begge de to Rostopcin-betænkninger, der danner rygraden i en sådan argumentation bærer nemlig vidnesbyrd om, at Rusland havde ambitioner om at blive en sømagt af rang. Du sætter ikke kun dit liv på spil - du mister det. Jeg taler af årelang erfaring som uofficiel turguide i Tjekkiet og netop Prag er jeg specialist. Men hvordan foregår det og hvorfor? Der skete ikke tyskeren Ernst noget - han havde lidt tab, men Schimmelmännerne klarede sig fint igennem det hele. Der var masser af lokaler der blev brugt til selskabslokaler og lejet ud til fester og arrangementer. Bernstorff sig klart, at en fransk troppeopmarch ved Kanalkysten ville være til stor hjælp for Danmark, fordi den ville binde den britiske flåde til de hjemlige farvande. Den har jeg aldrig glemt. Vagtkommandøren står strunk og stiv som med en lineal i ryggen. De er nu sigtet for at have medvirket til bestikkelse. Men mon ikke det er pengene og prestigen der har trukket det læs. Så alle er her. En moske er ikke på nogen måde en kirke. Den var enevældens retsgrundlag. Den danske mark i en bølgen går som åndedræt af en venlig kvinde. Derefter satte han kikkerten til øjet, alt imens han konstaterede: Jeg kan virkelig ikke se det signal! Ingen ville stå på lemmen. De forstår ikke, at vi står over for en tilrettelagt besættelsesplan drevet af brigader, der vil frarøve det sekulære flertal dets åndelige og fysiske hjemsted. Der bare handlede om, at Saulus og Barnabas skulle overbringe nogle penge i forbindelse med en hungersnød. Planerne blev dog ikke til noget, og i stedet udstykkede han ejendommen. Derfor mister han autoritet i forhold til sit embede her til lands.\nNår hegnet er færdigbygget vil 400.000 palæstinenserne blive afskåret fra arbejde, lægehjælp og hospitaler og skoler. Byen er en kurby med radioaktivt vand der smager forskrækkeligt af rust og alskens mærkværdige kemikalier. De er helt vilde med Åbenbaringsbogen og Daniels bog. På det tidspunkt boede Ulrik Frederik Gyldenløve selv i Hamburg, hvor han døde i 1704. Vi bliver svigtet af guiden, så en fra administrationen må lave en improviseret omvisning. Det ligger ude ved Ruzyne lufthavnen cirka 20 kilometer fra Praha centrum. Læreren burde have påvist bjælken i Tjekkernes øje før han omtalte splinten i Nazisternes. Borgerskabets sønner glimrede ved deres fravær, ikke fordi de var mindre villige til at deltage, men fordi man i disse kredse i stedet formerede frivillige korps og borgervæbninger. Adolf er lige kommet ned efter at have talt til en kæmpeskare af nazisympatisører fra et vindue i bygningen til højre i billedet.\nHer tog man mod forventning - befolkningen var jo hedninge - gæstfrit imod ham. Men i så fald kan der kun være tale om en Pyrrhos-sejr, for da det i juli kom til det væbnede sammenstød i Kanalen mellem visiterende orlogsskibe og den danske konvoj-fregat »Freya hvis kaptajn blev dekoreret af kronprinsen for at være så beslutsom, at skyde. Admiralen blev tvunget til at trække sig en måned senere fordi han ikke havde søofficerernes tillid. Det kan man undre sig over, for der er tale om en meget gammel tradition. Det er et skel der sættes. Jessen trak også de to engelske skibe efter sig, men hans lods, gik i panik og han nægtede at sejle inden om Sejerø, så manøvren blev lidt vanskeligt og han måtte udsætte sig. Ønsket om oprettelsen af Det væbnede Neutralitetsforbund, der formelt var et forsvarsforbund, var fuldt foreneligt med bevarelsen af Danmarks neutrale status og sikrede en videreførelse af den udfordrende konvoj politik, der i realiteten var rettet mod England. Udover de økonomiske skadevirkninger ville en besættelse af Hannover skabe politisk splittelse i den engelske regering, fordi den ville bringe Georg III i et alvorligt dilemma.\nBordeller i århus pigerne fra halmtorvet 508\nBordeller i århus pigerne fra halmtorvet 257\nSwingers guide thai massage københavn 972\nÆgte thai massage side 9 massage 585\nThai massage nordjylland sex tilbud Tantra templet københavn eroguide


Vision Solina Fluefiskesæt\nVision Solina sæt 9'6 #7\nSolina komplet sæt, egner sig både til nybegyndere og erfarende fluefiskere. Stangen har en behagelig action, som er let at mestre. Linen er Visions meget populære WF Vibe85, som er af yderst høj kvalitet. Linen er flydende, hvilket gør den egnet til største delen af det danske fiskeri. Sidst men ikke mindst er dette sæt, udstyret med et Vision Kalu hjul. Kalu hjulet er et robust hjul, med en stærk bremse. Hjulet er støbt i aluminium, og har et forsejlet indre, som gør hjulet mere modstandsdygtig over for vand, salt og snavs. Et sæt i høj kvalitet hele vejem igennem, og til en super skarp pris.\nDer medfølger stangrør, med plads til stang og hjul.


Indfri rejselængslen med en safaritur i Sydafrika | ugeavisen.dk\nIndfri rejselængslen med en safaritur i Sydafrika\nRejselængslen har verden over nået nye højder inden for seneste par år, hvorfor flere og flere nu søger at indfri de helt store rejsemål, der har været lagt på hylden i nogen tid. En luksuriøs safaritur i Sydafrika er jeres mulighed for at få spektakulære naturoplevelser uden at gå på kompromis med komfort eller autenticiteten af det sydafrikanske landområde.\nEn luksussafaritur i Sydafrikas berømte National Park\nSydafrikas national parker er landet største stoltheder, og den har nu i over 100 år været udgangspunkt for verdensberømte safariture. Nationalparkerne er kendt for sin enorme variation i parkens dyreliv, en god infrastruktur og komfortable, autentiske overnatningscamps. Parkerne er blevet udvidet af flere omgange, siden den blev fredet i 1926, og den tæller i dag intet mindre end 21.000 kvadratkilometer, hvilket svarer til 2/3 af hele Jylland. Det er derfor en fordel for dig, der ønsker en safaritur i en national park, at alliere dig med et rejsebureau, som kan tilbyde rådgivning og hjælpe dig med at få planlagt turen ned til mindste detalje. Sådan får du mest ud af nationalparken, uanset om du planlægger at blive der et par dage eller en hel uge.\nPlanlæg din rejse efter din ønskede årstid\nKruger National Park er en af de mange parker, som bestemt er værd at opleve alle tider på året, men selv dette sydafrikanske reservat må lægge under for årstidernes skiftende luner. Du gør derfor klogt i – forud for din rejse – at undersøge, hvilken årstid, der bedst passer din rejsestil. Hvis du rejser i vinterperioden (april-august), får du lune, solrige dage uden meget regn, og her vil der værre mindre vand i floderne og færre blade på træerne, der gør det nemt at spotte dyrene. Sommeren er ofte en ideel rejsetid for de fleste, men her må man have øje for, at den sydafrikanske sommer er enormt varm og fugtig. Det er dog også på denne tid, at landskabet står med sin fulde pragt, og samtidigt er det ofte denne tid på året, at de nyfødte unger på tværs af dyrenes kongerige kommer til.\nEn all-inclusive oplevelse Sydafrikas bedste, private vildtreservater\nNår du booker din safaritur gennem et bureau, der specialiserer sig i safarioplevelser, får du muligheden for en all-inclusive oplevelse. All-inclusive betyder her ikke bare, at turen er inklusive mad, drikke og eventuelt transport, men det betyder også, at du kan få lov at bo i private bungalows i en sikret del af parken under hele turen. Hvis du ønsker at opleve området omkring vildtreservatet og parken, kan de også vejlede dig i forbindelse med udflugter til nogle af de skønne, omkringliggende seværdigheder.


12 verdensklasse museer, som du kan "besøge" på internettet - Til en ferie - 2021\nDer er ingen tvivl om, at enhver historisk artefakt eller kunstværk ses bedst ved hånden. Men ikke altid og ikke alle har mulighed for at rejse meget rundt om i verden. Heldigvis har vi i dag, i den moderne digitale tidsalder, mulighed for at besøge en række berømte museer i verden fra komforten i dit eget hjem. Vores anmeldelse indeholder nogle af de museer, der inviterer virtuelle ture.\nMuseet tilbyder gratis online ture.\nLouvre er ikke kun et af verdens største kunstmuseer, det er også en af de mest ikoniske historiske monumenter i Paris. Museet tilbyder gratis online ture, hvor du kan se nogle af de mest berømte og populære udstillinger af Louvre, som egyptiske relikvier.\nDen unikke arkitektur i Guggenheim-bygningen.\nSelvom du bør se selv den unikke arkitektur i Guggenheim-bygningen, som blev tegnet af Frank Lloyd Wright, bør du ikke flyve til New York for at se på nogle af de uvurderlige udstillinger af dette museum. Online kan du se værket af Franz Marc, Piet Mondrian, Picasso og Jeff Koons.\nHer kan du beundre malerierne i Van Gogh og skulpturerne i Angkor.\nGrundlagt i 1937, er National Gallery of Art åben for offentligheden. For dem der ikke kan komme til Washington, tilbyder museet virtuelle ture gennem sine gallerier og udstillinger. For eksempel kan du beundre sådanne mesterværker som Van Gogh malerier og skulpturer fra oldtidens Angkor. "\nTilgængelige udstillinger Tekstiler fra Afrika, Objekter af de romerske byer i Pompeji og Herculaneum.\nSamlingen af British Museum har mere end otte millioner objekter. I dag har det verdensberømte museum fra London introduceret evnen til at se online på nogle af sine udstillinger, for eksempel "Kanga: tekstiler fra Afrika" og "Objekter fra de romerske byer i Pompeji og Herculaneum". I samarbejde med Google Cultural Institute tilbyder British Museum virtuelle ture ved hjælp af Google Street View-teknologien.\nEn online tour er organiseret med 360 graders visning.\nNationalmuseet i Washington, som er et af de mest besøgte museer i verden, giver mulighed for at se på sine smukke skatte gennem en virtuel online tour. Online-guiden byder på seerne i rotunda efterfulgt af en onlineudflugt (med 360 graders udsigt) gennem Hall of Mammals, Insekthalen, Dinosaurs Zoo og Hall of Paleobiology.\nVærker af Van Gogh, Jackson Pollock og Giotto di Bondone.\nMetropolitan er hjemsted for mere end to millioner kunstværker, men det er overhovedet ikke nødvendigt at tage til New York for at beundre dem. Museet har virtuelle ture af nogle af de mest imponerende værker, herunder Van Gogh, Jackson Pollock og Giotto di Bondone. Derudover arbejder Metropolitan også med Google Cultural Institute for at gøre endnu flere værker tilgængelige for visning.\nBeliggende i den catalanske by Figueres, er Dali Museum og Theater helt dedikeret til Salvador Dali kunst. Her kan du finde mange udstillinger og udstillinger forbundet med hver fase af Dali liv og karriere. Kunstneren selv er begravet her. Museet byder på virtuelle ture på nogle af sine udstillinger.\nNASA tilbyder ture af Space Center i Houston.\nNASA tilbyder virtuelle ture i sit rumcenter i Houston. Vejledningen er en animeret robot kaldet "Audima".\n9. Vatikanens museer\nLoftet på det sixtinske kapel, malet af Michelangelo.\nVatikanens museer, der er blevet kureret af paverne i århundreder, har en omfattende samling af kunst og klassisk skulptur. Du kan benytte lejligheden til at se nogle af de mest ikoniske udstillinger på computerens skærm, herunder loftet på det sixtinske kapel malet af Michelangelo.\nUdstilling om kvinders liv i USA under anden verdenskrig.\nLedelsen af National Museum of Women's History i Alexandria, Virginia, hævder, at museet blev grundlagt for at inspirere til at udforske fortiden og forme fremtiden "ved at integrere historien og kulturen i kvinders liv i USA." I den virtuelle tour mode] kan du se udstillinger af museet, der demonstrerer kvinders liv under anden verdenskrig og kampen for kvinders rettigheder gennem amerikansk historie.\n11. Nationalt medlem af USAF\nMuseet byder på ture på sit område.\nNationalmuseet for United States Air Force er placeret på Wright-Patterson Air Base i Dayton, Ohio. Her er en enorm samling af militære våben og fly, herunder præsidentplanerne Franklin Roosevelt, Harry Truman, Dwight Eisenhower, John F. Kennedy og Richard Nixon. Museet tilbyder også gratis virtuelle ture på sit territorium, hvor du kan se nedlukne fly fra Anden Verdenskrig, Vietnamkriget og Koreakrig.\nDet er muligt at se kunstværker i høj opløsning og detaljer.\nFor at hjælpe brugerne med at finde og se vigtige kunstværker online i høj opløsning og detaljer arbejder Google sammen med mere end 60 museer og gallerier fra hele verden, arkiverer og dokumenterer uvurderlige kunstværker, samt leverer virtuelle ture til museer, der bruger Google Street-teknologi. View.\nCopyright 2021 \_ Dine egne hænder - Del dit arbejde! \_ 12 verdensklasse museer, som du kan "besøge" på internettet


Korsør IF2018 fejrer 1 års fødselsdag - VD Online - Forside - Korsør\n9. august 2019 - kl. 15:30\nKorsør IF2018 fejrer 1 års fødselsdag\nFormand for Korsør IF2018, Jeanette Nielsen er glad for den flotte opbakning, der har været til foreningen det første år.\nSend artiklen Korsør IF2018 fejrer 1 års fødselsdag til din ven.\nKorsør: En 1 års fødselsdag skal selvfølgelig fejres. Det mener de i hvert fald i Korsør IF2018. Og ifølge formanden, er der meget at fejre. - Vi har for længst rundet 100 medlemmer, og det er vi meget tilfredse med, udtaler formand Jeannette Nielsen, og fortsætter: - De forskellige målsætninger vi havde sat os omkring medlemmer, hold osv., har vi til fulde nået - og mere til. Korsør IF2018 har fra starten arbejdet på at blive 'hele familiens idrætsforening', med et bredt tilbud til både børn, unge og voksne. Og det synes vi selv begynder at ligne noget. Vi har før sommerferien startet et børnegymnastikhold for de helt små 2-4-årige med stor succes. Vi valgte lørdag formiddag, da nogle familier er udfordret på tiden i hverdagene, og det viste sig at være et rigtig godt valg. Vi starter også et hold for de lidt ældre søskende også - de 5-7- årige, som også bliver lørdag formiddag umiddelbart i forlængelse af det andet hold, fortæller formand Jeannette Nielsen.\nNyt dansehold til de voksne\nDet er ikke kun børnene, der er nye hold til. Et dansehold for de voksne piger omkring 20-40 år er også kommet til. - Vi har fået fat i en forrygende instruktør, Marie Skak, som selv har danset hele sit liv, og også er kendt fra forskellige musicals mm. Hun glæder sig vildt til at komme i gang. Holdet bliver showpræget og skal også til opvisning, Jeannette Nielsen.\nSøger piger og drenge til fodbold\nOgså fodboldafdelingen er inde i en spændende udvikling. De nuværende hold; U16, U19 og senior, alle drenge, kører naturligvis videre. Og med gode resultater fra sidste sæson i rygsækken. Derudover arbejder klubben meget på et tilbud til mindre drenge og piger. Så er man omkring 10-12 år, og kunne tænke sig at spille fodbold, kan man kontakte Korsør IF2018. - Vi gik så småt i gang inden sommerferien med dette, og der var flere friske drenge til træning, men der er stadig plads på banen, siger Jeannette Nielsen.\nFlere nye aktiviteter på vej


Doc Houlind Revival - Tøjhuset - Fredericias Livescene\nDoc Houlind Revival\nHer tænkes bl.a på Kid Ory’s og Louis Armstrongs Bands, hvor der inspireres til mere solistiske præstationer og så især George Lewis orkestre med fantastisk ensemblespil i form af rytmisk tailgate basunspil flettet sammen med klarinetspring fra højde til dybde rundt om melodisk dynamisk trompetspil. Endelig har orkesteret fundet idealformationen til sådant sammenspil.\nI 2004 skiftede Doc Houlind fra trommerne til trompet i forsøget på at skabe et orkester efter ovenstående idealer og trompetinspiration hovedsagelig fra Bunk, Howard og Louis Armstrong, og hvor alle i orkesteret uden undtagelse har samme indstilling og musikalske opfattelse og som kunne skabe New Orleans jazzmusik i unik høj klasse. Dette projekt er lykkedes over alt forventning – klubberne og festivalerne virker begejstrede og orkesteret har musikalsk glød i øjnene.\nBandet har fået ry for at mestre disse kriterier uimodståeligt. Alt dette kunne dog ikke lykkes uden den kompakt swingende rytmegruppe. Rytmegruppen har fået herlig tilgang med miss ”Sweet Purnell”i form af Lis Krøyers nydelige kvindelige skikkelse og nu fra Papa Bue og Sammy Rimington kendte trommeslager DIDIER GEERS (Tidl. Belgien nu Sverige) plus swingende banjo og bas til en rytmegruppe, der sammen giver et herligt swingende up-beat.\nRepertoiret er lige fra ren New Orleans og nyere Armstrong til Papa Bue Hits.


Lagt ud på 25.10.2017 Forfatter tantra københavn jeanette massage i kalundborg\tpå Tantra københavn jeanette massage i kalundborg\ndig løs i kroppen så du kan give slip på tankerne. Gamle udtryk og ordsprog hvidovrevej 233. Husk altid: Jeg svarer aldrig på opkald fra hemmeligt nummet. Jeg mærker ind til dig ved at lægge mine hænder på din krop. Det er en meget speciel erotisk tantra inspireret massage, som jeg selv har. 01:15 Joys Thaimassage kan hjælper dig hvis du har problemer med kroppen, jeg har mere end 10 års erfaring med massage. Jeg tilbyder alt blidt og har cocktails hvor du selv mixer hvad du kan lide. Da der ofte også kan opstå stærke følelsesmæssige reaktioner under og efter massagen, tilbyder jeg altid en afsluttende snak og en opfølgende telefonisk samtale. Som et led i din massage vil jeg tilbyde både at massere din anus, prostata (mand skede, livmoderhals (kvinde) og dit køn, da der også her ofte ligger skjulte spændinger, som kan forhindre din kundalini i at strømme frit. Elsker fræk sex, elsker at sutte din stive pik og få den i min fisse og frække røv, urin til dig og frække klaps i min røv jeg er cm høj. I forløbet vil jeg anvende triggerpunktmassage for at opløse de spændinger jeg møder i dine muskler. Tantramassage 1 time 400. Jeg tilbyder Thai massage, Body to body og meget meget mere. Porno sexaben thai massage sydhavnen, dansk pige kneppet genbrugsplads valby åbningstider. Herefter betaler man, og vi laver fræk telefonsex bagefter.\nMassage, kalundborg: Tantra københavn jeanette massage i kalundborg\ntantra københavn jeanette massage i kalundborg 511\nTantra københavn jeanette massage i kalundborg 100 free to join, 100 free messaging. We do almost tantra københavn jeanette massage i kalundborg all services, OWO superfransk,GFE, Roleplay, Golden shower. By clicking on or navigating the site, you agree to allow us to collect information on and off Facebook through cookies. Denne massage kan varmt anbefales for dem, som ønsker at komme i kontakt med og opløse gamle spændinger/traumaer og dermed kan opleve en intens, smuk og livs(energi)bekræftende massage. Categories, tantra templet valby vekselbureau.\nTantra københavn jeanette massage i kalundborg Hentet Simon Jul klar til karriere med Bonderøven: Man skal fucking ikke nøjes! Jeg forventer at du er nyvasket inden behandlingen. Jeg havde besluttet mig for endnu en selvforkælelse hos Heidi, samtidig tilbød Heidi den eksklusive tantra massage, hvor der var ekstra af det hele, med dufte, smagsoplevelser og rigtig meget fokus på mit velvære. Odense Jeanette Dejlig moden 36 årig pikliderlig kvinde tilbyder massage tlf. Thai massage og thai wellness i hele Danmark Christian Dating For Free (cdff) #1 Christian Singles Annonce oversigt - Escort og Massage Guide Find thai massage i nærheden af dig.\nPrivate massage escort i roskilde 97\nMassage, i: Tantra københavn jeanette massage i kalundborg\nDejlige, glade og charmerende piger giver god service i hyggelige omgivelser. Homo chat uden login pp thaimassage århus. Himmel, så kig her. Dejligt at jeg måtte bruge den på min hjemmeside 3 knus Heidi. 30 I 2013 blev programmet Bonderøven kommer til byen sendt på DR2. Du bliver først masseret bagpå op af benene, ballerne, ryggen, armene, hænder, skulder og nakken og derefter vil jeg bede jeg om at vende dig. Frank Erichsen - Wikipedia, den frie encyklopædi Sexpiger - Massage og Escort Thaimassage eller thai massage er en meget gammel traditionel Thailandsk massageform, som i dag er en af de mest almindelige massageformer, der findes på markedet. Oplys venligst om specielle fysiske/psykiske forhold og/eller indtagelse af medicin som kan have betydning for massagen. Stater og deltag i dag, som du finde der tilbydes for godt fisse massage På andre end det føles Asian Pussy Tantra Massage Nordjylland Krogshede Dvd Gratis Sex Film Dyngby nuru massage københavn Er Sandsynligt.\n0 tanker om “Tantra københavn jeanette massage i kalundborg”\ntantra københavn jeanette massage i kalundborg på Tantra københavn jeanette massage i kalundborg


Hjem / Stuk Rosetter / Arstyl Loftroset CS5\nVarenummer (SKU): JM-470-CS5 Kategori: Stuk Rosetter\nArstyl Loftroset CS5 ligger i toppen af listen med bedst sælgende varer i webshoppen i den eftertragtede varegruppe Stuk Rosetter. Når du bestiller her får du lovpligtige 14 dages returret hvis du skulle fortryde dit køb din vare. Det er efterhånden velkendt at online shoppere køber deres Arstyl Loftroset CS5 fra den meget brugte forhandler DecoFarver.dk, der virkelig har samlet toppen af de mest populære varer. Hos webshoppens store udvalg går mange på jagt efter deres mål, deriblandt også dette produkt. Købes der ind i online webshops er priserne bedre- og det kan lade sig gøre fordi shoppen sparer husleje til en almindelig butik.\nAlle de tilfælde, hvor online webshops frister dig til at købe varer, er betingelserne lidt gunstigere, som ikke nødvendigvis findes i fysiske butikker. Du får med dine varer 14 dages returret. når du har handlet dine varer, der er endda shops, der vælger at give mere som ligger udover de lovpligtige 14 dage. Husk også på, at du online har et kæmpe udvalg, og det at sammenlligne priser bliver en leg, uden af være afhængig af, at det skal være tæt på din bopæl. Det er let i dag at sammenligne priser – du kan gøre det når du har lyst, uden at være afhængig af butikkers åbningstider. Mange har allerede fundet glæde ved at købe online og slippe for, at du ikke kan bære alle din varer på én gang og skal gå flere gange frem og tilbage til bilen. Dine varer bliver sendt direkte hjem til dig, eller du kan bede dem om at sende til dit arbejde i stedet for, og få den løsning, der passer bedst for dig. De tider med at stå i kø er længe forbi – i dag handler vi online og der er ingen kø online – det er bare direkte til betaling, og så er du videre, så er det aldrig mere ubehaget ved at stå alt for tæt i en kø til kassen.


Overgaden Oven Vandet - tagrende - Movellas\nUnder mine fødder dingler verdenen frem og tilbage i et virvar af gadelygter og latter. Det er mørkt, aften. Den slags mørke, der lover mig noget. Mørke, der får undersiderne af mine negle til at ligne hvide halvmåner. Jeg kan mærke, at det samme er sket med mine knoer, der borer sig ind i den øverste af de mange metalstængler af stilladset udenfor din søsters taglejlighed på Christianshavn.\nHeroppe, højt over fødselsdagsfesten som med bedste intentioner var dedikeret til mig, men senere gled ud af mit greb, spiller de din yndlingssang. En spinkel tone i det fjerne. Det lyder halvkvalt.\nJeg svinger det ene ben over tagrenden. Luften er blid mod huden, tagstenene stadig lune. Selvom regnen også her har efterladt sine spor, sætter jeg mig ned og smelter ind i mørket. Lugten af tobak og våde gader sidder stadig i min næse. Din yndlingssang snurrer ud i ingenting.\nUnder sålerne på mine selvlysende gummisko, en fødselsdagsgave fra mor, er taget mørt. Alligevel balancerer jeg mere eller mindre frit rundt på tæerne, helt ude ved kanten til ingenting. Fri er præcis dét, jeg føler mig forpligtet til at være: fri og fregnet og atten år i åben skjorte. Kraven bukker blødt mod min hals.\nFølelsen af at have begået et valg alternativt til alt, hvad jeg ellers står for – fregner og atten år værd af molekyler, atomer, celler – sidder ubekvemt i mit bryst. København er sommersmuk, som hun iklæder sig glade mennesker på husbåde og lyskæder, pletter af vodkatonic. Jeg betragter nogen dingle benene over bølgerne, der tumler rundt i kanalens mørke vand.\nEt vindpust får gadelygterne til at rasle. Lyspletterne danser for mine øjne som en uforståelig morsekode. Stilladset knirker. Jeg bilder mig selv ind, at jeg kan dufte støv og grammofonplader, og pludselig er vi tilbage på køkkengulvet i dine forældres herskabslejlighed, hvor du fortæller mig, at vi måske skulle, "give hinanden plads," og jeg fik kaffen galt i halsen.\nDen var alligevel lunken i første omgang.\n"Dine sko er helt rumskibsagtige," lyder din stemme, den smyger sig gennem vind, zigzagger mellem en lydene fra en tonedøv nabos forsøg på klaverspil. En finger er rettet mod mine tæer. "Meget atypisk dig, men de er fede nok. Ser nye ud."\nOppe blandt stjernehimmel og tagtoppe sætter du dig ned, ubesværet og nonchalant. Du læner ryggen mod en skårsten. Jeg ser dig hive en sammenkrøllet pakke Prince op ad lommen. Tøvende stikker du filteret af den næstsidste cigaret mellem mine fortænder. Dine fingre har været smadrede siden du startede i Mads' band, rigtige basfingre. Hærdede og solbrændte.\n"Hvad fanden er det for en kompliment," siger jeg og fumler efter min lighter. Flammen slikker sig kælende op ad smøgen, bader dit ansigt i guld. Under os fortsætter festen ufortrødent. Jeg smiler lidt, suger hårdt til. Asken gløder mod mine rumskibssko. "Hvad med et tillykke? Et undskyld jeg kneppede Sarah, måske?"\nDu smiler ikke. Jeg tør ikke rykke tættere på, for jeg ved, hvordan du dufter af de citrusbolsjer, jeg ikke kan lide, hvordan du trommer med dine brune basfingre, lader dem danse gennem dit krøllede hår, hvordan du ruller en smøg med en form for præcision, der virker uvant hos én som dig.\n"Jeg var ellers stoppet," fortæller du mig. "Nogle gange, i hvert fald. Det er helt vildt, hvor meget du giver mig lyst til at ryge."\nEn Arctic Monkeys sang gjalder gennem natten. Nogen har pillet ved anlægget. Først, "I Bet You Look Good On The Dancefloor," så, "Piledriver's Waltz," og til sidst, "No. 1 Party Anthem." Arktiske Aber.\nDu fremprovokerer hovedryst efter hovedryst, når du spørger om vi ikke snart skal ses igen, puster på mine fingre, fordi de er kolde. Fortæller, at du ikke var i humør til mere papvin, flere samtaler i vinduet. At det klæder mig at blive tre måneder ældre.\nJeg ønsker, at du vil skubbe mig ned i kanalen, men i stedet ruller hovedet om på min skulder og jeg tænker på, om du en dag vil forstå.\nøl, arcticmonkeys, taglejlighed, kærlighed, københavn, ung


Loretta Lynn | Kjartans musikblog\nKategoriarkiv: Loretta Lynn\n485 – Loretta Lynn – All Time Greatest Hits (2002)\nUdgivet den 23. juli 2012 af Kjartan\nLoretta Lynn er en af de mest roste countrysangerinder nogensinde, og hvis man vil høre hende, skal man nok helst finde sig et opsamlingsalbum. Hendes største hits fra 1964-78 blev i 2002 samlet på All Time Greatest Hits. Nu har jeg jo mine små problemer med countrymusik, så næsten uanset hvor god hun nu engang er, eller hvor stor betydning hun har haft for genren, så har jeg stadig svært ved at værdsætte hende. Så jeg vil starte med at snakke lidt om noget af det, jeg rent faktisk godt kan lide ved albummet: For det første er det, hvis vi kun ser på det som en opsamling, rigtig godt udvalgt. Jeg føler ikke, at nogle af Lynns mest kendte numre mangler, og det er generelt godt sammensat, så selv jeg, der jo ellers har mine problemer med country sagtens kan lytte alle 22 numre igennem. Jeg synes ikke selv, at Lynn varierer meget fra nummer til nummer, men der er sørget godt for, at to numre, der lyder alt for ens, aldrig kommer efter hinanden på All Time Greatest Hits.\nLoretta Lynn er også en ganske god sangskriver. Desværre har hun ikke skrevet så mange af sangene på opsamlingen igen, men når hun gør, mærker man, at hun virkelig har noget at sige. Fist City handler f.eks. om Lynns tidligere mand, der er hende utro og oven i købet mishandler både hende og de andre kvinder, når nu han er i gang. Sangen er udformet som en advarsel, og den blev i sin tid bandlyst fra mange radiostationer, da dens tekst blev ret kontroversiel. Det behøver ikke at blive så slemt igen, før hendes tekst dog bliver interessant, men hendes bedste numre har alle til fælles, at hun selv helt eller delvist har skrevet dem. Selv før jeg vidste dette, syntes jeg at numre som Rated X og Coal Miner’s Daughter føltes mere reelle og nærværende end resten, så når hun er involveret, er det rigtig tydelig. Desværre er der dog kun 5 af dem i alt blandt de 22 numre på pladen. 5 andre numre er duetter med Conway Twitty, og dem har jeg noget sværere ved at holde ud. De er rigtig corny, og selvom begge er karismatiske personligheder, føles deres samspil bare så utrolig falsk og overfladisk.\nDet største problem ved Loretta Lynn er det samme som for de fleste andre countrymusikere, nemlig lyden. Det lyder bare så ensartet, hvis du spørger mig. Jeg har svært ved at huske det meste af musikken, den føles kønsløs, og end ikke på sange med så tunge, hårdtslående tekster som Fist City eller Rated X kan jeg mærke en på nogen måde tilsvarende styrke i melodien. Når Lynn ikke selv har skrevet teksten, kunne man let risikere at teksten blev corny som bare pokker, men det sker heldigvis kun på duetterne. Nogle få af dem har rigtig gode tekster, der sagtens kan måle sig med Lynns, men de fleste er bare lige så lette at glemme som melodierne er. Hvis du er til gammeldags country, så er Loretta Lynn jo en klassisk sangerinde, som du nok bør lytte til, men for mig personligt, gjorde hun ikke meget specielt i løbet af de sangene på All Time Greatest Hits. Albummet indeholder til gengæld meget af det, hun er blevet berømt for – både på godt og ondt – så det er en god introduktion til Lynn, og hvis du ikke kan lide noget på det album, finder du næppe meget interessant i resten af hendes diskografi.\nUdgivet i 2002, Loretta Lynn\t| Tagget Country, Loretta Lynn\t| Skriv et svar


Indtag Østersøkysten på cykel med Scandlines\nIndtag Østersøkysten på cykel\nNogle af Nordtysklands bedste cykelruter gemmer sig i landskabet langs og bag Østersøen. Så sæt cyklerne bag på bilen, og lad så ellers ferien begynde på færgen. Eller lej en komfortabel tysk model - med eller uden batteri - når I er fremme.\nUd over oplevelsen af vind i håret, sand mellem tæerne og sol og salt på huden byder cykelruten gennem Mecklenburg-Vorpommern en lang række attraktioner langs kysten. Så der er nok at opleve, hvad enten I er på den lange tur eller blot tager på en række udflugter fra et fast tilholdssted.\nBesøg øen Usedom, som mod øst er polsk og mod vest er tysk. Her ligger Ahlbeck som juvelen i et trekløver af badebyer, der tilsammen kalder sig Kaiserbäder, fordi det bl.a. var her, de tyske kejsere i 1800- og 1900-tallet tog havbad.\nPå Usedom ligger også Raketstationen Peenemünde, Hitlers raket- og rumfartsforsøgsanlæg, som professor Wernher von Braun stod i spidsen for.\nPå det nordlige og østlige Rügen ligger badebyerne tæt, men også kridtklinterne ved Sassnitz, Kap Arkona og Hitlers planlagte feriecenter ved Prora - der nu er på vej til blive virkelighed i en moderniseret udgave - er værd at gøre holdt ved.\nHansestæderne ligger tæt langs Østersøen, og både de kendte Stralsund, Rostock og Wismar, og de mindre kendte som Greifswald, bundet sammen af fælles kendetegn som f.eks. de store rødstenskirker, store torvepladser og fine købmandshuse med gavlene mod gaden, er alle et besøg værd.\nEn cykel bringer jer langt omkring, uanset om I er til små korte ture fra et fast udgangspunkt eller I vil på en lang cykeltur. Minder som havluft og honningduft fra blomstrende rapsmarker er stensikre, hvis I vælger en tidlig sommercykeltur i baglandet bag Østersøkysten. Og gør I det på den dovne måde, kan I parkere bilen ved udgangspunktet, indtil ferien er slut, og undervejs lade andre flytte bagagen for jer fra hotel til hotel.\nNår I bliver sultne, er der aldrig langt til en hurtig håndmad, f.eks. et Fischbrötchen - en bolle med en sild eller anden fisk imellem - eller et større måltid mad med øl, vand eller vin.\nOplev det tidligere DDR på cykel\nCykelruten Ostseeküstenradweg er i sig selv en rejse gennem ét eneste langstrakt ferieparadis med mulighed for et utal af svinkeærinder ind i baglandet. Svinger I væk fra strandpromenaderne, havner I hurtigt i grønne skove eller blandt vidtstrakte marker. Bliver det for varmt, hopper I bare af cyklen og svaler jer i Østersøens bølger.\nCykelruten går hele vejen fra øen Usedom ved den polske grænse i øst og over mod Flensborg i vest. Alene i Mecklenburg-Vorpommern er strækningen langs Østersøen og rundt langs Rügens kyster på 585 km gennem det tidligere DDR’s mest populære ferieområde.\nLet rejse til Østersøkysten\nI kommer direkte ned til cykelruten langs Østersøkysten med færge og bil via Gedser-Rostock.\nMecklenburger Radtour er den største udbyder af cykel-pakkerejser med bagagetransport, ikke bare langs Østersøkysten, men mange andre steder i Tyskland.\nNordtysklands bedste cykelruter\nLej cykler eller tag din egen med\nCykel tilbage i tiden


Uncategorized - Peters Portal\nSnart er vi ved vendepunktet, kære, og Jorden fortsætter ufortrødent sin rejse, hvorunder den lige så stille vipper til den anden side.\nDen bliver aldrig træt; jeg kan derfor sige: bare det var mig. Med energi til at kredse og dreje og vippe som Jorden, behøvede jeg ingen søvn og ville altid være i gang med et herligt projekt, som i sig selv ville være så energigivende, at jeg slet ikke skulle tænke på, hvordan jeg nu kredser og drejer og vipper.\nHonningen ville smelte mellem mine fingre, men jeg giver den straks tilbage til bierne, som har brug for energien til at kredse og dreje og vippe.\nMen kongen over den sidste is, Snemand, vil ikke forlade sin plads. Han lader sig ikke inspirere af snurrige bevægelser, mærkelige danse og varme hænder. Nej, siger han, jeg bliver stående i selv den koldeste vinterstorm. Og jeg holder lige så længe som Jorden, den krukke, som kredser og drejer og vipper.\nPas godt på dig selv, pige, som engang hældte honning i mit hår. Pas på vinteren og den kolde Snemand, for han vil stoppe dig, når du kredser og drejer og vipper.\nMin kammerat Lars stod helt stille, da han første gang så Sjælebillede ”Ulrich”. Her var et billede af ondskaben selv. Lars betroede mig mange hypoteser om baggrunden for at se så fjendsk ud. Der var ikke grænser for, hvor grov Ulrich kunne være.\nLars har i følgende tekst givet Ulrich stemme:\nHold da kæft! Sikken en idiot!! Stå der og brokke sig over at jeg har travl! Det er sgu for åndssvagt! Men jeg HAR altså travlt. Frede, det pjok, sidder på ”Det Lille Sted” og venter på mig. Vi ska’ ha’ en øl, se champions league og sludre. Og så står den bitch og brokker sig! Jeg sagde sgu da undskyld, da jeg smøg mig ind i køen foran hende. Bitch!\nHun minder om min mor. Hun var fa’me os’ en bitch. Hende ku’ man ikke stole på. Eller jo det ku’ man – hun var sgu altid fuld. Ja eller os’ havde hun abstier. Jeg ved ikke hvad, der var værst. Når hun var fuld og lallede ”Min elskede dreng, mit pus” og straks efter stak mig et par flade for at spørge til aftensmaden, der selvfølgelig ikke var noget af den aften, eller når hun patetisk selvmedlidende rystede over hele kroppen, og ikke kunne noget som helst, før der var skaffet en karton vin.\nJa hun var sgu en bitch. Det var hendes egen skyld. Hun drak sig ihjel.\nÆv – nu er der brok fra kællingen bag mig igen! Det er fa’me heller ikke til at holde ud. Et par flade eller sådan noget er, hvad hun trænger til. Men man er vel et ordentligt menneske!\nUps, nu hyler hun op. Jeg kom vist til at træde et skridt tilbage på hendes ømme tæer. Ømme tæer, ja det får man jo, når man går i for små sko! Det er hun selv ude om.\nEndelig! Der kommer bussen. Det var da os’ på tide. Så gælder det om at komme med! Sikken en masen; men jeg nåede da heldigvis lige at komme med. Nu skal det blive godt med en øl og lidt champions league fodbold sammen med Frede. Han skal nok give i dag. Det plejer han.\nSynd for bitchen, men hun var sgu selv ude om det.\nI 1981 var jeg med maleskolen på weekendtur til Helsingør nordstrand. Vi havde hidtil malet opstillinger og model i atelieret, men nu skulle landskabsmaleriet afprøves. Det var den grundige undervisnings fortsatte præsentation af billedkunstens klassiske discipliner. Stranden var udgangspunkt for vores motivvalg; de fleste så sandet, dernæst vandet, og nogle lod blikket række helt over til Sverige.\nHellere kysten som motiv, tænkte jeg, og logikken bød mig derfor at sidde ude på en høfde. Det var på én gang at gemme sig lidt med sit maleri og samtidig vække opsigt ved netop den placering. Høfden havde som værn mod erosion en både funktionel og symbolsk betydning: beskyttelse, bevarelse, overlevelse. Men dengang faldt det mig ikke ind, at jeg måske greb efter tilsvarende værdier i mit liv ved at sidde 30 m ude i havet.\nMotivvalget tiltalte mig. Her var muligheden for at male kysten på en ny måde. Men maleriet blev amatørens ambitiøse opvisning af et postkortmotiv. Høfdens beskyttende magi var tydeligvis ikke til stede. For meget kitsch og for lidt ånd.\nDet var et billede, som jeg på én gang var glad for og ked af. Glad for at det lykkedes at afslutte et maleri med en improvisatorisk teknik, ked af at det ikke blev et personligt billede. Postkortet tog så at sige over.\nDagen efter stod valget mellem at gentage min placering på høfden eller at finde et andet sted at forfølge ideen om at male kysten.\nHvis jeg igen valgte høfden, ville motivet stort set være det samme. Maleøvelsen ville handle om ændret valg af betydende strukturer i motivet og personliggørelse af malesproget.\nMed en ny placering stod alt åbent bortset fra, at den nævnte opstramning af det først gjorte blev fravalgt. Et andet motiv kunne vælges mere bevidst om hensigten og samtidig kunne en øget opmærksomhed på malesproget gøre sig gældende.\nJeg valgte det sidste, og det blev et lykkeligt valg. Fordi motivet spænder op til både nysgerrighed og let undren. Emotionelt står det stærkere end det første billede. Det passede mere på mig, det blev entydigt mit billede.\nDen ny synsvinkel førte til et maleri med flere gentagelser og flugtlinjer end i første billede. Alligevel opleves en større enkelhed, fordi der er reduceret i billedets virkemidler. På den måde er motivvalget også et fravalg. Og narrativet er markant anderledes. Fra sommerstemning til bølgeskum og truende himmel.\nMen rusk og mørk himmel passede bedre til mit indre rusk, som dagen før ledte til en alliance med høfden. Således kom jeg hjem med nye erkendelser om at se, om at male billeder og om det personliges påvirkning af resultatet på en subtil måde.\nDet har som regel positiv betydning at ændre syn på samme udfordring. I kunsten er det en brugbar måde at nuancere, uddybe og forfine værkets udtryk. Så at sige at komme rundt om kernen. Betydningen er forbundet med ny erkendelse og forståelse. Og det gælder for såvel kunstner som beskuer. På et personligt plan kan det føre til ny selvindsigt og påvirke fremtidige hensigter og beslutninger for én selv og andre.\nVi ser og i bedste fald indser vi. Eksempelvis at et valg altid medfører fravalg.\nDette kunne være opskriften på et godt liv og på skønheden. Ligesom i kunsten. At trække fra er ofte bedre end at lægge til.


Hele Tidens Tegn den 9. maj 2015\nSendt lørdag 9. maj 2015\nDet kan være dyrt at afholde en konfirmation og nemt koste 100.000 kroner. Det kan også gøres billigt med mad fra supermarkedernes containere. Vi ser nærmere på hvad konfirmationen og konfirmationsfesterne er for en størrelse.\nÅrets Viggo 2012:\nPå onsdag den 13. maj er det et år siden at Folketinget anerkendte dansk tegnsprog som et selvstændigt sprog. Dengang var Danske Døves Landsforbund, DDL, tilstede i folketingssalen. Forleden var DDL tilbage på Christiansborg for at uddele ’Årets Viggo’ til et par af de politikere, der har gjort en forskel for dansk tegnsprog det sidste år.\nHvad laver du, mand? Vild med motorcykler:\nI serien Hvad laver du, mand? er Olivia taget til Solrød syd for København, hvor hun møder en gruppe mænd, der er vilde med motorcykler.\nSøndag den 10. maj er det Mors dag”. Det er dagen, hvor mange danskere giver blomster, chokolade eller andre gaver til deres mor. Ligesom Halloween og Valentines Day stammer traditionen fra USA. Kim Moesby har set nærmere på hvorfor og hvordan traditionen "Mors Dag" er blevet til.\nForrige lørdag var der en stor international pokerturnering på Casino Copenhagen. Her havde en stor gruppe pokerspillere lagt ansigterne i de rette folder i jagten på den store gevinst. Førstepræmien var nemlig på lidt over 13.000 kr.\nSpot – stem og bestem:\nDu kan nu få mulighed, for at få indflydelse på, hvad du kan se i Tidens Tegn. Du kan nemlig stemme og være med til at bestemme.\nRikkes Verdenskøkken – Island:\nRikke Hansen elsker mad. Hun har tidligere her i Tidens Tegn lavet sine egne yndlingsretter. Nu har hun kastet sig over andres specialiteter. I Rikkes Verdenskøkken laver hun mad fra forskellige verdenshjørner. Sammen med en gæst smager hun på retten og taler om landets kultur. Denne gang skal det handle om Island.\nMad og drikke Politik


Disse produkter skal du holde øje med på Black Friday - Grib Livet\nForside Guides Disse produkter skal du holde øje med på Black Friday\nNår Black Friday nærmer sig, skal man være forsigtig med alle de ”gode” tilbud. Det er efterhånden blevet åbenlyst at butikkerne bruger nogle metoder til at få os til at købe selvom produktet faktisk ikke er så meget billigere som de plejer. De sætter også prisen op på varen flere måneder før, så det virker som en god pris når weekenden nærmer sig. Her er nogle af de holdbare tilbud du skal holde øje med når Black Friday nærmer sig.\nDenne her er lidt tricky, for selvom butikkerne bruger deres uetiske metoder her, kan der være rigtig mange penge at spare, når man køber elektronik på Black Friday. Det er især fra de store firmaer som phillips, sony og samsung der sænker prisen. Det kan være alt fra soundsbars, fjernsyn og endda telefoner. Måden man kan finde den rigtige værdi af produktet, er at kigge på diverse sider som pricerunner og lignende hvor de sammenligner alle priser på markedet for det produkt.\nDette er også en kategori, hvor der kan være mange penge at spare. Parfume og Make-up er en kæmpe industri danskerne bruger mange penge på hvert på så det er en oplagt mulighed at for butikkerne at få nogle kunder ind. Her ville der typisk være rabat på alle typer og det kan være fra Axe for men til mærker som zarkoperfume, hvor der kan findes rigtig gode priser. Igen er det en god ide at have lidt kendskab til før priserne så du ikke bliver snydt. Her kan det også være en fordel at forberede sig lidt, ved at gå ned og butikkerne og prøv produkterne først, og så være klar til at købe dem online når vanviddet starter.\nHvidevare er også blevet en stor del af Black Friday. De helt store butikker tilbyder mange tilbud på køleskabe, vaskemaskiner og så videre. Her er det vigtigt at sammenligne tilbudende mellem butikker da de ofte har det samme produkter. Så hold godt øje med med de enkelte butikker og så kan du med sikkerhed finde lige den vaskemaskine du ledte efter, til en væsentlige bedre pris end normalt.\nTidligere artikelTip til at indrette boligen\nNæste artikelSvært Ved at Vælge Din Næste Rejse? Så Lad Være!


Hjernevrimmel: Den klammeste gåsehud\nDen klammeste gåsehud\nJeg fik ikke set tv2 dok i torsdags, men havde fået Chris til at optage det til mig. Et program jeg måtte se... aner ikke hvorfor? For at ryste mine indvolde helt omkuld og forarges over at der findes SÅ syge mennesker derude? For at se hvad man skal kigge efter, nu det lader til, at dem der skal passe vores børn engang imellem svigter på det groveste!\nJeg tænker jo lidt, at man da må kunne gennemskue en pædofil? Jeg har altid antennerne ude overfor mine egne børn... Min umiddelbare tanke, hvis de blev gjort ondt er, at jeg vil ty til selvtægt, men når jeg tænker over det, ved jeg ikke hvad det vil gøre for mig og for mit barn? for ikke at tale om de konsekvenser det ville føre med sig. Det vil jo ikke fjerne den smerte det syge menneske har påført mit barn... (men jeg ville vide at den syge stodder ikke bare ville blive isoleret og beskyttet i et eller andet fængsel...hmm). Jeg tror egentlig det er menneskeligt at ens overlevelsesinstinkt vil spille en en pus.\nJeg starter udsendelsen og det løber mig koldt ned af ryggen...alle hårene rejser sig på hele min krop, ja selv de allermindste fimmerhår. Det er som om en film starter inde i mit hovede. Billeder fra 2004, hvor jeg var i øvelsespraktik i en naturbørnehave i Århus. Martin - forbryderen, var min kollega dengang! Jeg fatter det ikke?\nDet er som om jeg lige er kastet 5 år tilbage og prøver at genopfriske det jeg kan huske fra de tre måneder jeg arbejde sammen med ham? Jeg husker ham som lidt sær, men en gave for børnene. Kan huske jeg tit følte mig håbløs ved siden af ham og hans børnetække og jeg kunne på ingen måde nå ham til sokkeholderne i konkurrencen om at være mest populære... Martin hittede! Jeg fik i denne praktik meget ros for mine iagtagelsesevner, men den her havde jeg ikke set komme! Det er uhyggeligt hvordan man kan tage fejl af et andet menneske!\nJeg har netop kigget alle gamle billeder fra denne praktik igennem og hver gang han kom frem på et af dem fik jeg den klammeste gåsehud. Ja hvad kan jeg sige, tingene er mere end hvad øjet umiddelbart ser og det er frygtelig skræmmende!\nIndsendt af Camilla Wedel Sivertsen kl. 13.11