RAPORTTI. Tarja Pitkänen Seija Kalso Asko Vepsäläinen Jarkko Rapala Seppo I. Niemelä - PDF\nRAPORTTI. Tarja Pitkänen Seija Kalso Asko Vepsäläinen Jarkko Rapala Seppo I. Niemelä\nDownload "RAPORTTI. Tarja Pitkänen Seija Kalso Asko Vepsäläinen Jarkko Rapala Seppo I. Niemelä"\n1 Tarja Pitkänen Seija Kalso Asko Vepsäläinen Jarkko Rapala Seppo I. Niemelä Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön asetuksen 461/2000 mukaisiin koliformisten bakteerien ja Escherichia coli -bakteerin tutkimuksiin Suomessa RAPORTTI\n2 Tarja Pitkänen, Seija Kalso, Asko Vepsäläinen, Jarkko Rapala, Seppo I. Niemelä Colilert-menetelmän verifointi sosiaali- ja terveysministeriön asetuksen 461/2000 mukaisiin koliformisten bakteerien ja Escherichia coli -bakteerin tutkimuksiin Suomessa RAPORTTI 17/2009\n3 Tarja Pitkänen 1,*, Seija Kalso 2, Asko Vepsäläinen 1, Jarkko Rapala 3 ja Seppo I. Niemelä 1 Terveyden ja hyvinvoinnin laitos (), Vesi ja terveys -yksikkö, Kuopio 2 MetropoliLab, Helsinki 3 Sosiaali- ja terveysalan lupa- ja valvontavirasto (Valvira), Helsinki * Vertailukokeen koordinaattori. Puhelin , Kirjoittajat ja Terveyden ja hyvinvoinnin laitos Taitto: Christine Strid ISBN (PDF) ISSN (PDF) Gummerus Kirjapaino Oy Jyväskylä 2009\n4 Tiivistelmä Tarja Pitkänen, Seija Kalso, Asko Vepsäläinen, Jarkko Rapala, Seppo I. Niemelä. Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön asetuksen 461/2000 mukaisiin koliformisten bakteerien ja. Terveyden ja hyvinvoinnin laitos (),. 35 sivua. Helsinki Koliformisten bakteerien ja Escherichia coli -bakteerin (E. coli) määritykset ovat yleisin toimenpide Suomessa jaettavan talousveden mikrobiologisen laadun viranomaisvalvonnassa ja vesilaitosten suorittamassa käyttötarkkailussa. E. coli -bakteerin esiintyminen talousvedessä kertoo veden saastumisesta ja välittömästä terveysriskistä. Suomen viranomaisvalvonnassa on aiemmin hyväksytty standardimenetelmät SFS-EN ISO ja SFS Tässä hankkeessa testattiin Colilert - 18 Quanti-Tray -menetelmän (IDEXX Laboratories) luotettavuutta ja soveltuvuutta Escherichia coli -bakteerin ja koliformisten bakteerien tutkimiseen talousveden laadun viranomaisvalvonnassa Suomessa. Hankkeessa analysoitiin syksyllä 2008 yhteensä 94 koliformisia bakteereita sisältävää näytettä, joista yhteensä 65 näytteessä havaittiin myös E. coli -bakteeria. Colilert-menetelmän kaikki alustavat koliformiset bakteerit varmistuivat koliformisiksi bakteereiksi ja kaikki alustavat E. coli -havainnot varmistuivat E. coli -bakteereiksi. Refererenssimenetelmässä SFS-EN ISO alustavista pesäkkeistä varmistui koliformisiksi bakteereiksi noin 78 % ja E. coli -bakteereiksi 28 %. Tämän hankkeen verifiointiaineiston perusteella Colilert-menetelmä antoi noin 57 % suurempia koliformisten bakteerien tuloksia kuin referenssimenetelmä. E. coli -tulosten osalta Colilert-menetelmän saanto suhteessa referenssimenetelmään oli riippuvainen vertailussa käytetyistä näytetyypeistä: jätevedellä siirrostettuja näytteitä käytettäessä Colilert-menetelmä osoittautui paremmaksi kuin ISO menetelmä, kun taas pinta- ja kaivovesillä siirrostettuja näytteitä tutkittaessa tulos oli päinvastainen. Colilert-menetelmä antoi tässä verifioinnissa keskimäärin 28 % suurempia E. coli -tuloksia kuin referenssimenetelmä SFS-EN ISO , kun varmistuskriteerinä pidettiin indoli- ja β-glukuronidaasipositiivisuutta. Koska Colilertmenetelmä antaa keskimäärin suurempia tuloksia kuin referenssimenetelmä sekä koliformisten bakteerien että E. coli -bakteerin testauksessa, Colilert-menetelmää voidaan pitää vähintään yhtä luotettavana menetelmänä kuin referenssimenetelmä. Työryhmä suosittaa täten Colilert-menetelmää vaihtoehtoiseksi menetelmäksi standardimenetelmien SFS-EN ISO ja SFS 3016 rinnalle talousveden viranomaisvalvontaan Suomessa. Colilert-menetelmän käyttö, olipa kysymys sitten veden laadun viranomaisvalvonnasta tai käyttötarkkailusta, tuo merkittävää ajan säästöä niissä tilanteissa, joissa on aihetta epäillä veden mikrobiologista saastumista. Colilert-menetelmää käytettäessä sekä koliformisten bakteerien että E. coli -bakteerin tulokset valmis- Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 3\n5 tuvat 18 tunnin kuluttua analyysin aloittamisesta. Voimakkaan ulostesaastumisen yhteydessä alustavat viitteet näistä mikrobeista voidaan saada tällä menetelmällä jo muutamien tuntien kuluttua analyysin aloittamisesta. Nopeuden tärkeys korostuu niissä tilanteissa, kun tehdään päätöksiä vedenkäytön rajoituksista ja veden puhtauden varmistavista toimenpiteistä. Colilert-menetelmää käytettäessä on otettava huomioon, että tässä verifioinnissa todettu vastaavuus pätee nimenomaan Colilert -18 -reagenssia käytettäessä inkubointiolosuhteiden ollessa (36 ± 2) ºC, tuntia. Virhenegatiivisten E. coli -tulosten välttämiseksi fluoresenssireaktion lukeminen on suoritettava erityisessä lukukammiossa tai pimiössä ja vähäinenkin fluoresenssi on tulkittava positiiviseksi reaktioksi. Colilert-menetelmää käytettäessä on myös huomioitava, että se antaa standardimenetelmiä SFS-EN ISO ja SFS 3016 useammin koliformisten bakteerien osalta positiivisia tuloksia. Avainsanat: Colilert, Escherichia coli, koliforminen bakteeri, talousvesi 4 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n6 Sisällys Tiivistelmä 1 TAUSTAA TYÖN TOTEUTUS Työryhmä Näytteiden hankinta ja siirrostukset Verrattavat menetelmät Tarvikkeet Suoritus Varmistustestit Laadunvarmistus Tulosten käsittely Tulosten laskenta Tilastollinen käsittely TULOKSET Aineisto Menetelmien herkkyys Colilert-18 ISO vertailu Koliformiset bakteerit Escherichia coli Suomen verifiointitulokset suhteessa Espanjan ja Ison-Britannian aiempiin tuloksiin TULOSTEN TARKASTELU JOHTOPÄÄTÖKSET Kirjallisuus Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 5\n8 1 Taustaa Euroopan unionin neuvoston direktiivi 98/83/EY ihmisten käyttöön tarkoitetun veden laadusta tuli voimaan Suomessa direktiivi on saatettu voimaan sosiaali- ja terveysministeriön asetuksella 461/2000. Asetuksen mukaisesti koliformisten bakteerien ja Escherichia coli -bakteerin määritykset ovat yleisin toimenpide Suomessa jaettavan talousveden mikrobiologisen laadun viranomaisvalvonnassa. Esimerkiksi vuonna 2006 Suomessa mitattiin näitä molempia muuttujia noin talousvesinäytteestä (Laboratorioselvitys, 2008). Koliformisten bakteerien ja E. coli -bakteerin määritysmenetelmäksi viranomaisvalvonnassa on direktiivin mukaisesti säädetty standardin SFS-EN ISO mukainen kalvosuodatusmenetelmä, jossa viljelyalustana käytetään LTTC-Tergitol -agaria. Menetelmän käytössä on havaittu kuitenkin ongelmia, koska etenkin desinfioimattomilla vesillä taustakasvu häiritsee merkittävästi maljojen luettavuutta. Direktiivin mukaan vaihtoehtoisia määritysmenetelmiä voidaan käyttää sillä edellytyksellä, että saadut tulokset ovat vähintään yhtä luotettavia kuin käytettäviksi määritellyillä menetelmillä saadut tulokset. Vaihtoehtoisten menetelmien käytön mahdollistamiseksi Suomessa lähdettiin mukaan Ruotsin Elintarvikeviraston vetämään vaihtoehtoisten menetelmien vertailututkimukseen vuonna Tutkimuksen seurauksena STTV antoi ohjeen, jonka mukaan säädetyn menetelmän lisäksi voidaan käyttää Les Endo -alustan käyttöön pohjautuvaa menetelmää SFS 3016 (Ohje Dnro 240/72/04, ). Jo tuolloin haluttiin hyväksyä myös Colilert -18 Quanti-Tray -menetelmä (IDEXX Laboratories) yhdeksi vaihtoehdoista, koska sen tiedettiin olevan huomattavasti edellä mainittuja standardimenetelmiä nopeampi menetelmä. Nopeuden merkitys korostuu niissä tilanteissa, jolloin vedestä todetaan alustavasti koliformisia bakteereita tai E. coli -bakteeria. Standardimenetelmillä tulos ja siten E. coli -bakteerin löydös varmistuvat vasta useiden päivien kuluttua, kun taas Colilert-menetelmällä varmistettu tulos saadaan samassa yhteydessä kuin alustava tulos em. menetelmillä. Vuoden 2003 vertailututkimuksen tulosten, Suomen aiemmin EY:n komissiolta saaman kielteisen päätöksen ja silloisten menetelmällisten tietojen valossa Colilertmenetelmän hyväksyntää vaihtoehtoiseksi menetelmäksi viranomaisvalvontaan ei kuitenkaan voitu tehdä, vaan päätettiin jäädä odottamaan eräiden muiden EU:n jäsenmaiden, kuten Saksan päätösten käsittelyä EY:n komissiossa. Vaikka viranomaishyväksyntää ei voitu tehdä, epidemioiden ja vesiongelmien selvityksissä on kuitenkin Suomessakin suositeltu käytettäväksi uusintanäytteen tutkimiseen hyväksyttyjen menetelmien rinnalla nopeampia menetelmiä, kuten Colilert-menetelmää. Vuoden 2003 jälkeen on saatu uutta tietoa muissa Euroopan maissa tehtyjen vertailututkimusten perusteella. On mm. havaittu, että vuoden 2003 tutkimuksen varmistustestit väärien positiivisten rajaamiseksi olivat puutteelliset ja lisäksi Es- Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 7\n9 panjassa ja Isossa-Britanniassa on tehty ja kattavasti raportoitu tutkimuksia, joiden loppupäätelmänä Colilert-menetelmä on voitu hyväksyä noissa maissa käytettäväksi. Näiden uusien tietojen innoittamana tässä tutkimuksessa haluttiin verifioida Colilertmenetelmä talousveden viranomaisvalvontaan hyväksyttäväksi vaihtoehtoiseksi menetelmäksi Suomessa. Työn tarkoituksena oli tehdä yhden laboratorion verifiointi Colilert-menetelmän soveltuvuudesta käytettäväksi Suomen talousvesien viranomaisvalvonnassa koliformisten bakteerien ja E. coli -bakteerin analytiikassa vaihtoehtoisena menetelmänä. Tässä raportissa esitetyn aineiston perusteella voidaan antaa kansalliset ohjeet vaihtoehtoisesta menetelmästä ja laatia talousvesidirektiivin vaatimusten täyttämiseksi komissiolle toimitettava raportti. Raportin on sisällettävä kaikki asiaankuuluvat tiedot Suomessa käytetyistä menetelmistä ja niiden vastaavuudesta. 8 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n10 2 Työn toteutus Hankkeessa testattiin Colilert-menetelmää koliformisten bakteerien ja E. coli -bakteerin määrittämiseksi talousvedestä. Työ suoritettiin menetelmien vastaavuuden testaamiseksi standardissa SFS-EN ISO annettujen kriteereiden mukaisesti. Referenssimenetelmänä, johon vaihtoehtoista menetelmää verrattiin, käytettiin kalvosuodatusmenetelmää SFS-EN ISO perustuen LTTC Tergitol -alustan käyttöön (LTTC). Työssä hyödynnettiin aikaisemmin eri Euroopan maissa tehtyjä vertailututkimuksia, joiden tuloksien yhtäpitävyyttä Suomen vesillä verifioitiin tässä tutkimuksessa yhden laboratorion tuottaman aineiston avulla. Tällainen menettelytapa on todettu mahdolliseksi eurooppalaisessa vesimikrobiologian asiantuntijaryhmässä (EMAG/EGM Guidance Note, 2005) vastaavuusstandardin SFS-EN ISO kohdan mukaisesti. Verifiointiin tarvittava näytemäärä laskettiin aikaisempien vertailujen suhteellisten erotusten keskiarvosta ja keskihajonnasta standardin antamalla kaavalla. Pohja-aineistona tässä hankkeessa käytettiin Espanjan vuonna 2007 raportoimaa vertailututkimusta, joka suoritettiin 256 näytteellä ja jonka tuloksena todettiin Colilert-menetelmän antavan koliformisten bakteerien osalta 66 % korkeampia tuloksia kuin referenssimenetelmä LTTC. E. coli -bakteerin osalta espanjalaisessa tutkimuksessa saatiin kahdenlaisia tuloksia riippuen siitä, mitä varmistustestikriteeriä käytettiin. Jos kriteerinä pidettiin indolipositiivisuutta, Colilert antoi 24 % alhaisempia tuloksia kuin LTTC. Sen sijaan, jos kriteerinä pidettiin β-glukuronidaasipositiivisuutta (MUG+), Colilert antoi 22 % korkeampia tuloksia kuin LTTC. Suomen aineistoa verrattiin myös Ison-Britannian vertailututkimuksen tuloksiin, joiden mukaan Colilert antoi 79 % korkeampia koliformisten bakteerien pitoisuuksia kuin LTTC. E. coli -bakteerin osalta Ison-Britannian aineistolla Colilert antoi 23 % korkeampia tuloksia kuin LTTC. Tutkimuksessa tutkittiin noin 450 näytettä, joista suuri osa oli jokivesiä. Taulukossa 1 on esitetty tarvittavat näytemäärät Espanjan ja/tai Ison-Britannian tulosten verifioimiseksi. Koska Colilert-menetelmällä todetaan merkittävästi enemmän koliformisia bakteereita kuin LTTC-menetelmällä, tämän tuloksen verifioimiseksi olisi laskennallisesti riittänyt alle 10 kpl näytteitä. Sen sijaan E. coli -bakteerin osalta verifiointi on hankalampi, koska erot ovat pienemmät ja varmistustesteistä riippuen tulos voi olla erilainen. Osittainen varmistus lisäksi kasvattaa aineiston hajontaa. Täten E. coli -bakteerin osalta verifiointiin tarvitaan noin 90 kpl näytteitä. Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 9\n11 Taulukko 1. Verifiointiin tarvittavat näytemäärät, kun epävarmuuden suurin hyväksytty poikkeama nollasta (D) on 10 % ja laskennassa huomioidaan varmistetut tulokset. Koliformiset bakteerit E. coli Vertailun tulos: suhteellisten erotusten keskiarvo (s) Verifiointiin tarvittava näytemäärä (kpl) Vertailun tulos: suhteellisten erotusten keskiarvo (s) Verifiointiin tarvittava näytemäärä (kpl) Espanjan aineisto 66.1 (71.8) 5 IND+: (103.2) MUG+: 20.7 (101.8) Ison- Britannian aineisto 79.1 (106.2) (106.2) 82 s = suhteellisen erotuksen keskihajonta. Työ toteutettiin yhteistyössä suomalaisten vesimikrobiologian alan toimijoiden kesken. Työn suunnittelusta, koordinoinnista, aineiston käsittelystä ja raportoinnista vastasi Terveyden ja hyvinvoinnin laitos (entinen Kansanterveyslaitos), joka on Colilert-menetelmän osalta jo aikaisemmin koordinoinut Suomessa vuonna 2003 yhdessä ruotsalaisten tahojen kanssa toteutetun talousvesien menetelmävertailun ja vuonna 2006 toteutetun suomalaisten uimavesien E. coli -menetelmävertailun. Näytemateriaalin hankinnasta ja analysoinnista vastasi MetropoliLab (ent. Helsingin kaupungin ympäristökeskuksen laboratorio), jolla on työhön vaadittava akkreditointi ko. menetelmille ja joka Colilert-menetelmän osalta osallistui jo 1990-luvun lopulla eurooppalaiseen menetelmävertailututkimukseen ja lisäksi vuoden 2006 uimavesivertailuun. Muut työryhmän jäsenet ja yhteistyötahot tukivat ja ohjasivat hankkeen toteutusta. Aineiston tilastollista käsittelyä ohjasi emeritus Seppo I. Niemelä, joka on viime vuosina vastannut menetelmävertailuaineistojen käsittelystä Euroopassa ja joka on valmistellut menetelmien vastaavuusstandardin SFS-EN ISO Valvira (entinen STTV) osallistui työn suunnitteluun ja raportointiin vastaten myös vaihtoehtoisten menetelmien kansallisesta hyväksymisestä ja tuloksista tiedottamisesta yhdessä sosiaali- ja terveysministeriön kanssa. Tavoitteena oli tuottaa noin 90 vertailukelpoista näytettä sisältäen kloorattuja ja klooraamattomia talousvesiä, luontaisesti kontaminoituneita raakavesiä ja pintavedellä sekä jätevedellä ympättyjä talousvesiä. Näytteet tutkittiin rinnakkain Colilert-menetelmällä ja LTTC-alustalla. Alustavia löydöksiä (koliformiset bakteerit ja E. coli) pyrittiin varmistamaan resurssien sallimissa rajoissa mahdollisimman paljon molemmilla menetelmillä. Varmistuksissa keskityttiin E. coli -bakteeriin, koska jo ennen hankkeen aloittamista on selvää, että Colilert-menetelmällä todetaan enemmän koliformisia bakteereita kuin LTTC-alustalla. Varmistukset suoritettiin 10 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n12 viljelemällä ensin puhdasviljelmä Chromocult Coliform Agarille ja/tai tryptonisoija-agarille, jonka jälkeen tehtiin varmistustesteinä oksidaasitesti ja Fluorocult LSB-liemitesti. Lisäksi osalle kannoista tehtiin gramvärjäys. Varmistustesteissä epäselviä reaktioita antaneet kannat jatkotyypitettiin Uid-Lac PCR-menetelmällä (Bej et al., 1991). Aineiston hankinta ja analysointi sekä muut käytännön laboratoriotyöt tehtiin loka-marraskuussa Aineiston tilastollinen käsittely aloitettiin tämän jälkeen joulukuussa Tämän raportin perusteella voidaan tehdä kansalliset päätökset menetelmän hyväksymisestä. Laboratoriotöihin liittyvät jatkoselvitykset ja Euroopan komissiolle toimitettava raportti viimeistellään vuoden 2009 loppuun mennessä. 2.1 Työryhmä Tämän menetelmien vertailututkimuksen suunnittelusta, toteutuksesta ja raportoinnista vastasi työryhmä, joka koostui osallistuvan laboratorion ja kansallisten viranomaistahojen edustajista. Työryhmään kuului myös tilastollinen asiantuntija. Työryhmä Tutkija Tarja Pitkänen,, Toimitusjohtaja, mikrobiologi Seija Kalso, MetropoliLab, Emeritus Seppo Niemelä, Helsingin yliopisto, Tutkija Asko Vepsäläinen,, Ylitarkastaja Jarkko Rapala, Valvira, Muut yhteistyötahot Sosiaali- ja terveysministeriö (yhteyshenkilö neuvotteleva virkamies Jari Keinänen) Vesihuoltolaitosten kehittämisrahasto (yhteyshenkilö vesihuoltoinsinööri Riina Liikanen) Helsingin Vesi (yhteyshenkilö mikrobiologi Tuula Laakso) Berner Oy, Terveys ja Tutkimus (yhteyshenkilö avainasiakaspäällikkö Aimo Savolainen) 2.2 Näytteiden hankinta ja siirrostukset Tavoitteena oli tutkia niin monta näytettä, että raportointikelpoisia näytteitä kertyy koliformisten bakteerien osalta vähintään 30 kappaletta (laskennallista määrää 10 kpl pidettiin liian vähäisenä). E. coli -bakteerin osalta pyrittiin noin 90 näytteen tutkimiseen. Verrattavat analyysit tehtiin aina samasta näytepullosta. Tutkittavana tilavuutena käytettiin 100 ml näytevettä molemmilla menetelmillä. Tavoitepitoisuutena oli noin 5 20 positiivista kuoppaa (Colilert) ja pesäkettä (LTTC) tutkitus- Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 11\n13 sa tilavuudessa. Koska tällaisia pitoisuuksia ei luontaisesti ole vesilaitosvesissä, sopivaan positiivisten määrään tähdättiin siirrostusten avulla. Näytteinä käytettiin MetropoliLabiin saapuneita ja kerättyjä kloorattuja ja klooraamattomia talousvesiä, joita terästettiin jätevesillä ja pintavesillä. Tutkimuksessa käytettiin myös luontaisesti kontaminoituneita pintavesiä. Liian paljon bakteereita sisältäneet näyte-erät hylättiin liian suuren työtaakan vuoksi. Myös sellaiset näytteet, joissa molemmat testattavista menetelmistä eivät antaneet yhtään positiivista kuoppaa/pesäkettä, hylättiin. Tuntemattomia näytteitä tutkittaessa meneteltiin siten, että siirrostetusta näytteestä tehtiin ensin analyysi vain Colilert-menetelmällä. Seuraavana päivänä saadut alkutestaustulokset kirjattiin ja niiden perusteella päätettiin, onko näyte kelvollinen vertailuun sellaisenaan. Mikäli näyte oli kelvollinen (ts. tulos noin 5 20 MPN/ 100 ml E. coli-bakteeria), analysoitiin näyte uudelleen käyttäen vertailussa mukana olevia menetelmiä. Vertailuun kelvollinen Colilert -analyysi tehtiin uudestaan aloittamalla se samanaikaisesti referenssimenetelmän (ISO ) kanssa; hylätäänkö näyte. Koliformisten bakteerien osalta oli hankalaa saada sellaisia edustavia näytteitä, joissa olisi myös E. coli-bakteeria. Tämän vuoksi analysoitiin edellä kuvattujen 5 20 MPN/100 ml E. colia sisältävien näytteiden lisäksi vain koliformisia bakteereita 5 20 MPN/100 ml sisältäviä näytteitä. 2.3 Verrattavat menetelmät Tässä tutkimuksessa referenssimenetelmän SFS-EN ISO (LTTC) tuottamia koliformisten ja E. coli bakteerien tuloksia verrattiin mahdollisen vaihtoehtoisen menetelmän Colilert Quantitray antamiin koliformisten ja E. coli bakteerien tuloksiin. SFS-EN ISO menetelmässä koliformisten bakteerien havaitseminen perustuu laktoosipositiivisuuteen (värimuutos elatusaineessa) ja oksidaasinegatiivisuuteen. E. coli -bakteerin havaitseminen ko. elatusaineella perustuu lisäksi bakteerin kykyyn tuottaa tryptofaanista indolia C:ssa. Vaihtoehtoisessa Colilertmenetelmässä koliformisten bakteerien havaitseminen perustuu kromogeeniseen reaktioon. E. coli -bakteerin havaitseminen perustuu fluorogeeniseen reaktioon siten, että positiivinen E. coli -tulos Colilert-menetelmällä vaatii sekä kromogeenisen (koliformi) että fluorogeenisen reaktion tapahtuneeksi ja havaituksi samassa kaivossa. 12 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n14 Tarvikkeet IDEXX Colilert-18 reagenssi IDEXX Quanti-tray liuskat IDEXX Antifoam IDEXX 100 ml:n pullot Merck Lauryl Sulfate Fluorocult Merck Coliform Agar Chromocult Oxoid CM0793 Tergitol-7 agar Oxoid SR0148A, TTC 0,125 % Supplement Merck Tryptic Soy agar Kovac sin reagenssi, ProLab Oksidaasireagenssi, BD Oxidase Reagent Droppers, suodatinpaperi Gramvärjäysliuokset, BD Gram Stainig Kit BD BBL Gram Slide Valomikroskooppi Steriilejä pipetinkärkiä Automaattipipetit UV-lukukammio (vaihtoehtoisesti pimiö, tehokas UV-lamppu ja suojalasit) Colilert sulkijalaite Tyhjiä petrimaljoja (halkaisija 60 mm ja 90 mm) 0,45 µm kalvosuodattimia (EZ-Pak, Millipore EZHAWG474) Koeputkia korkkeineen Durham putkia Koeputkitelineitä Steriloituja Eppendorf tai vastaavia putkia (esim. á 0,5 ml tilavuudeltaan) Steriilejä neuloja ja ruiskuja (esim. 1 ml:n insuliiniruisku) Kertakäyttöisiä viljelysauvoja ja -silmukoita Inkubaattorit 36 ± 2 ºC ja 44 ± 0,5 o C Vesihaude 45 ± 1 o C Suoritus Työssä kiinnitettiin huomiota työjärjestykseen. Joka toisella näytteellä ensin suoritettiin referenssimenetelmä (9308-1) ja joka toisella näytteellä ensin tehtäväksi tuli vaihtoehtomenetelmä (Colilert). Analyysit suoritettiin laboratoriossa verrattavilla menetelmillä kustakin tutkittavasta näytteestä välittömästi peräkkäin, ilman minkäänlaisia taukoja. Inkuboinnit aloitettiin yhtä aikaa, välittömästi suodatuksen (9308-1) ja liuskan (Colilert) sulkemisen jälkeen. Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 13\n15 ISO : 100 ml näytettä (samasta pullosta kuin Colilertiä varten; siirrostettu) suodatettiin kalvolle (0,45 µm) ja kalvo asetettiin LTTC-maljalle (47 mm). Inkubointi (36 ± 2) ºC:ssa (21 ± 3) tuntia. Colilert: 100 ml näytettä (samasta pullosta kuin referenssimenetelmää varten; siirrostettu) lisättiin Colilert-reagenssi, antifoam-tipat ja sekoitettiin. Quantitray täytettiin, suljettiin ja inkuboitiin (36 ± 2) ºC:ssa tuntia. Huom. Vertailussa käytettiin ainoastaan 51-kaivoisia liuskoja. Inkuboinnin jälkeen laskentatulokset kirjattiin laskentalomakkeeseen. Varmistustestit Aluksi sekä Colilert-liuskoilta että LTTC-alustoilta varmistettiin kaikki alustavat kuopat/pesäkkeet (sekä koliformi että E. coli), kunnes varmistuksia oli kertynyt arviolta noin 1000 kannasta. Tämän jälkeen aloitettiin osittainen varmistus, jossa sekä Colilert-liuskoilta että LTTC-alustoilta kaikki tai vähintään 10 kpl alustavia kuoppia/pesäkkeitä otettiin jatkoihin. Tämän jälkeen työtä vielä jatkettiin siten, että osittainen varmistus tehtiin ainoastaan LTTC-alustoilta (raportoitiin vain alustavat Colilert tulokset). Osittaista varmistusta käytettäessä pesäkkeiden ottaminen jatkoon satunnaistettiin. Colilertilta satunnaistaminen toteutettiin siten, että aloitettiin keltaisten ja keltaisten + fluoresoivien kaivojen poimiminen liuskan vasemmasta alakulmasta ja otettiin sieltä lukien järjestyksessä vähintään 10 kpl jatkoihin. LTTC alustalla satunnaistaminen toteutettiin siten, että kalvon laidasta, ensimmäisestä kokonaisesta ruudusta alkaen, maljan pohjaan piirrettiin viiva, josta alkaen kaikki tyypilliset (keltaiset) pesäkkeet kerättiin järjestyksessä jatkoihin, kunnes vähintään 10 kpl oli poimittu. Varmistukset koostuivat seuraavista vaiheista: Puhdasviljelmä Chromocult-alustalle (vain Colilert) Puhdasviljelmä TSA-alustalle Oksidaasitesti Fluorocult-testi + 44 ºC (kasvu, indoli, fluoresenssi ja kaasu) Mahdollinen kantojen talteenotto ja edelleen lähetys Lisäksi yhdeksästä TSA:lle LTTC-maljalta ensimmäiseksi poimitusta kannasta testattiin Gramreaktio, mikäli kanta oli oksidaasinegatiivinen. Testauksia suoritettiin viljelmistä siihen saakka, kunnes niitä oli kertynyt 261 kpl (kattaa testinumerot 1 30). Tiedot varmistustesteihin otettavista pesäkkeistä ja varmistustestitulokset kirjattiin varmistustestilomakkeeseen. Testattavien kantojen puhtauteen kiinnitettiin huomiota ja pyrittiin tekemään jatkoviljelmät erillispesäkkeestä. Mikäli oli aihetta 14 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n16 epäillä sekakasvua tai alustalta ei ollut mahdollista saada erillispesäkkeitä jatkoon, kannat viljeltiin puhtaaksi uudelle alustalle. Koliformiseksi bakteeriksi tulkittiin varmistustestissä oksidaasinegatiivinen kanta, joka alun perin oli Colilert-liuskalla keltainen tai keltainen+fluoresoiva ja LTTC-alustalla keltainen. E. coli -bakteereiksi tulkittiin koliformiset bakteerit, jotka olivat indolipositiivisia (IND+). Vaihtoehtoisena varmistuskriteerinä käytettiin positiivista fluoresenssireaktiota Fluorocult-putkessa (MUG+) ja kaasun tuottoa. Taulukossa 2 on esitetty mahdolliset varmistustestien tulosyhdistelmät (1 8). Taulukko 2. Mahdolliset varmistustestien tulosyhdistelmät 1 Oks-, IND44+, MUG44+ ja GAS44+ 5 Oks-, IND44-, MUG44+ ja GAS44+ 2 Oks-, IND44+, MUG44+ ja GAS44-6 Oks-, IND44-, MUG44+ ja GAS44-3 Oks-, IND44+, MUG44- ja GAS44+ 7 Oks-, IND44-, MUG44- ja GAS44+ 4 Oks-, IND44+, MUG44- ja GAS44-8 Oks-, IND44-, MUG44- ja GAS44- Varmistetuiksi E. coli -bakteereiksi tulkittiin automaattisesti ne kannat, jotka olivat olleet oksidaasinegatiivisia, indolipositiivisia ja fluoresoineet Fluorocult-putkissa, eli vaihtoehdot 1 ja 2. Kaasunmuodostus + 44 ºC:ssa ja sinivioletti väri Chromocult-alustalla tukivat tätä tulkintaa, mutta eivät olleet edellytyksenä E. coli -bakteeriksi tulkitsemiselle. Vaihtoehtojen 3 7 mukaiset kannat lähetettiin MetropoliLabista jatkotutkimuksiin Terveyden ja hyvinvoinnin laitokseen (ent. Kansanterveyslaitos). Laadunvarmistus MetropoliLabissa on akkreditoituna vertailussa käytetyt menetelmät ja varmistusmenettelyt ovat olleet aiemmin käytössä uimavesiä koskeneessa vertailussa kesällä Vertailussa käytettävät Colilert- ja LTTC-reagenssierät testattiin ennen työn aloittamista tunnetulla näytteellä. Vertailussa käytetyn Colilert-reagenssierän toimivuus varmistettiin tunnetun pitoisuuden omaavalla näytteellä ennen työn aloittamista. Näytteessä oli positiivisena testiorganismina Escherichia coli ATCC ja negatiivisena testiorganismina Pseudomonas aeruginosa ATCC Jokainen LTTC-elatusaineen laboratorion valmistuserä varmistettiin kvantitatiivisesti positiivisena testikantana Escherichia coli ATCC ja negatiivisena Staphylococcus aureus ATCC Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 15\n17 Varmistustesteissä käytettyjen elatusalustojen (Chromocult, Fluorocult) jokainen valmistuserä testattiin ennen käyttöä tunnetulla koliformisella bakteerikannalla Enterobacter cloacae ATCC ja Escherichia coli ATCC kannalla sekä 36 että 44 ºC:ssa. Yleiselatusaineen (TSA) kasvatuskyky testattiin Escherichia coli ATCC ja Staphylococcus aureus ATCC testikannoilla. Gramvärjäyksessä jokaisessa objektilasissa oli yhdeksän kantaa ja yksi kaupallinen kontrolli (E. coli ATCC ja S. aureus ATCC 25923). 2.4 Tulosten käsittely MetropoliLab tallensi tuottamansa raportointikelpoiset tulokset tulostiedostoon ja lähetti nämä tiedostot sekä kopiot laboratoriossa täytetyistä laskenta- ja varmistustestilomakkeista hankkeen koordinaattorille. Tulosten laskenta Menetelmien vertailussa tarvittavien testimuuttujien laskemiseksi havainnoista laskettiin jokaisessa näytteessä erikseen varmistetut tulokset kaavalla (1) P pos K = F N P pos = alustavasti positiivisten varmistettu määrä F = alustavasti positiivisten lukumäärä K = varmistuneiden lukumäärä N = onnistuneesti varmistukseen eristettyjen lukumäärä Nämä laskut tehtiin erikseen Colilert- ja LTTC-menetelmille sekä koliformisille bakteereille että E. coli -bakteerille. Colilert-menetelmällä keltaisista+fluoresoivista ja vain keltaisista saadut tulokset laskettiin erikseen ennen yhdistämistä lopulliseen tulokseen. Colilert-menetelmässä, joka on MPN-menetelmä, positiivisten lukumäärät muunnettiin mikrobipitoisuudeksi kaavalla (2) A = 51 x ln [ 51 / (51 P)] A= Colilert-tulos 100 ml kohti (kokonaisen tarkkuudella) P= positiivisten kasvukennojen (F tai P pos ) lukumäärä Menetelmien ISO standardin mukaista vertailua varten muodostettiin testisuure: suhteellinen erotus (x), tavoitteesta riippuen joko alustavista tai varmistetuis- 16 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n18 ta Colilert-tuloksista (A). ISO referenssimenetelmässä käytettiin vain varmistettuja tuloksia (R). (3) x i = 100 [ln(a i ) ln(r i )], Jos toinen menetelmistä antoi tulokseksi nollan, suhteellinen erotus laskettiin kaavalla. (4) x i = 100 [ln(a i +1) ln(b i +1)] Jos molemmat menetelmistä antoivat tulokseksi nollan, kyseinen näyte hylättiin. Tilastollinen käsittely Suhteellisten erotusten jatkokäsittelyssä oli kolme päävaihetta: aineiston normaalisuuden tutkiminen, näytematriisien välisten erojen tutkiminen ja menetelmien välisten erojen tutkiminen. Suhteellisten erotusten normaalisuuden tutkimisessa käytettiin graafisista menetelmistä histogrammia ja siihen liitettyä normaalikäyrää sekä normaalijakauman kvantiilikuviota. Normaalisuus testattiin Shapiro-Wilk-testillä. Näytematriisien suhteellisten erotusten keskiarvojen eroja tutkittiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä, kun ryhmiä oli enemmän kuin kaksi. Niissä tapauksissa, joissa osa-aineiston variansseja ei voitu pitää yhtä suurina, käytettiin ei-parametrista Kruskal-Wallisin testiä. Kaksiluokkaisissa ryhmittelyissä keskiarvojen eroja testattiin t-testillä. Menetelmien vastaavuusvertailu perustui standardin ISO 17994:2004 -ohjeeseen. Niissä osa-aineistoissa, joissa aineiston normaalisuus ei ollut hyväksyttävä, suhteellisen erotuksen poikkeaminen nollasta varmistettiin ei-parametrisella Wilcoxonin Signed Rank -testillä. Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 17\n19 3 Tulokset 3.1 Aineisto Testattujen näytteiden kokonaismäärä oli 94 kappaletta. Menetelmien tekojärjestys vaihteli toivotulla tavalla: 44 kertaa ISO tehtiin ensin ja 50 kertaa Colilert tehtiin ensimmäisenä. Nämä kaikki näytteet sisältyivät koliformisten bakteerien osalta tähän verifiointiin. 23 näyteistä olivat sellaisia, joissa kummallakaan menetelmällä ei todettu E. coli -bakteeria. Täten E. coli -bakteerin osalta verifiointiin käytettävissä oleva näytemäärä oli 71 kappaletta. Näistä näytteistä kuusi kappaletta oli sellaisia, joissa vain toinen menetelmistä antoi nollasta poikkeavan tuloksen. Tulosten käsittelyn alkuvaiheessa nämäkin näytteet pidettiin mukana aineistossa (muunnettuina kaavan 4 mukaisesti). Aineistoja ryhmiteltäessä kuitenkin todettiin, että nämä muunnetut näytteet heikentävät aineiston normaalisuutta ja ne päätettiin poistaa tarkastelusta. Täten jäljempänä E. coli -bakteerin osalta aineistosta on poistettu ne näytteet, joista kummallakaan tai toisella menetelmällä ei todettu E. coli -bakteeria ja E. coli -aineiston näytteiden lukumäärä on 65 kpl. Näytematriisina tässä verifioinnissa oli kloorattuja verkostovesinäytteitä (38,3 %) ja muita verkostovesinäytteitä (61,7 %). Varsinaisten kloorikäsittelyä siirrostuksien jälkeen kohdemikrobien stressaamiseksi ei tässä verifioinnissa tehty. Näytteet olivat peräisin 18 eri vesilaitokselta tai vedenottamolta, noin 16 paikkakunnalta Etelä- ja Keski-Suomesta. Koska verkostovedet Suomessa eivät normaalitilanteissa sisällä koliformisia bakteereita tai E. coli -bakteeria, vesiin siirrostettiin näitä bakteereita sisältäneitä vesimatriiseja. Siirrosteina käytettiin jätevettä (47,9 % näytteistä), pintavettä (31,9 % näytteistä) ja pintavedellä saastunutta kaivovettä (20,2 % näytteistä). Jätevesinäytteet olivat peräisin neljältä eri puhdistamolta pääkaupunkiseudulta ja Itä-Suomesta. Pintavedet olivat Helsingin alueen joki- ja purovesiä. Näytematriisin siirrosteiden mukainen jaottelu on esitetty taulukoissa 3 ja 4. ISO standardin periaatteet edellyttävät viljelymenetelmien vertailun perustuvan varmistettuihin lukumääriin. Kaikki alustavat positiiviset varmistettiin 72 näytteestä ja osittaista varmistusta käytettiin vain kuudelle näytteelle. Näytteistä 16 oli sellaisia, joista vain ISO tulokset varmistettiin. Koliformisten bakteerien ja E. coli -bakteerin osalta varmistettujen näytteiden lukumäärät on esitetty erikseen taulukoissa 3 ja 4, koska kaikissa tutkituista näytteistä ei alustavasti esiintynyt E. coli -bakteeria. 18 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n20 Taulukko 3. Koliformiset bakteerit Aineiston jaottelu näytematriisin, siirrosteiden ja varmistustestityyppien mukaan Näytetyyppi Kaikki varmistettiin Osittainen varmistus Osittainen varmistus (vain ISO ) Yhteensä Yhteensä % Kloorattu verkostovesi, jätevedellä ympätty Kloorattu verkostovesi, pinta- tai kaivovedellä ympätty Muu verkostovesi, jätevedellä ympätty Muu verkostovesi, pinta- tai kaivovedellä ympätty , , , ,9 Yhteensä ,0 Taulukko 4. Escherichia coli Aineiston jaottelu näytematriisin, siirrosteiden ja varmistustestityyppien mukaan Näytetyyppi Kaikki varmistettiin Osittainen varmistus Osittainen varmistus (vain ISO ) Yhteensä Yhteensä % Kloorattu verkostovesi, jätevedellä ympätty Kloorattu verkostovesi, pinta- tai kaivovedellä ympätty Muu verkostovesi, jätevedellä ympätty Muu verkostovesi, pinta- tai kaivovedellä ympätty , , , ,5 Yhteensä ,0 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 19\n21 3.2 Menetelmien herkkyys ISO menetelmän perushavainto koliformisten bakteerien ja Escherichia coli -bakteerin havaitsemiseksi oli keltaisten pesäkkeiden lukumäärä. Colilert-menetelmän perushavainto koliformisten bakteerien havaitsemiseksi oli vain keltaisten (ONPG-positiivisten) kaivojen lukumäärä ja Escherichia coli -bakteerin havaitsemiseksi keltaisten, fluoresoivien (ONPG- ja MUG-positiivisten) kaivojen lukumäärä. ISO menetelmän ongelmana on huono selektiivisyys ja sitä seuraava runsas taustakasvu, minkä vuoksi taustakasvun määrä LTTC-alustoilla kirjattiin ylös myös tässä verifioinnissa. Kaikissa siirrostetuissa näytteistä oli taustakasvua, joko yksittäisinä pesäkkeinä (68,1 % näytteistä) tai häiritsevän runsaasti (31,9 % näytteistä). Colilert-menetelmässä eristettiin viljelmät alustavien E. coli -positiivisten (MUG+, keltaiset, fluoresoivat) kaivojen lisäksi myös alustavista E. coli -negatiivisista (MUG-ONPG+, vain keltaiset) kaivoista varmistettavaksi E. coli -bakteerin varalta. Alustavan oletuksen mukaan nämä vain keltaiset kaivot sisältävät muita koliformisia bakteereita kuin E. coli -bakteeria. Varmistuksilla selvitettiin mahdollista virhenegatiivisten esiintymistä Colilert-menetelmässä. ISO-menetelmässä virhenegatiivisien etsintä ei ollut relevanttia, koska menetelmässä ei alustavasti erotella muita koliformisia bakteereita E. coli -bakteereista. Kolmen ryhmittelytestin (IND, MUG, GAS) perusteella viljelmät jaettiin kahdeksaan (2 3 ) biotyyppiin (taulukko 2). Kaikki oksidaasinegatiiviset viljelmät (biotyypit 1 8) katsottiin koliformisiksi bakteereiksi. Testinumeron 29 näytteen kantojen gramvärjäystä varten tehty objektilasi rikkoutui käsittelyssä. Tehtyjen gramtestien perusteella (n = 261) kaikki LTTC-alustalla kasvaneet tyypilliset pesäkkeet olivat tässä aineistossa asianmukaisesti gram-negatiivisia. Täten gram-tuloksia ei huomioitu biotyyppien jaottelussa. Oksidaasinegatiivisista viljelmistä (IND+MUG+)-tyypit (biotyypit 1 ja 2) kaasun muodostuksesta riippumatta katsottiin E. coli -bakteereiksi. Lisäksi menetelmien vastaavuutta tutkittiin käyttäen E. coli -bakteerin aikaisemman määritelmän mukaisia vain indolitestiin (IND+) perustavia varmistustestituloksia (biotyypit 1, 2, 3 ja 4). Alustavasti positiivisten viljelmien tulokset on esitetty yksityiskohtaisesti taulukossa 5. Varmistettujen havaintojen määrä on pienempi kuin alustavien havaintojen määrä, koska luvuissa on mukana osittain varmistettuja näytteitä 6 kpl ja 16 kpl sellaisia näytteitä, joissa vain ISO menetelmä varmistettiin. Osittain varmistetuissa näytteissä ei todettu E. coli -bakteeria. Tulosten varmistuvuutta eli menetelmän herkkyyttä mitataan varmistuneiden osuudella testatuista alustavasti positiivisista viljelmistä. Colilert -menetelmällä sekä koliformisten bakteerien että E. coli -bakteerin varmistuvuus (herkkyys) oli niin korkea (100%), että sen mukaan päivittäisessä rutiinityöskentelyssä Colilert- 20 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n22 Taulukko 5. Alustavien havaintojen lukumäärät, varmistuksiin otettujen lukumäärät, varmistuneiden frekvenssit eri biotyypeissä (taulukko 2) ja ISO- ja Colilert-menetelmien herkkyys näytteiden lukumäärän ollessa N = 94 ja E. coli -bakteerin varmistustestikriteerin ollessa IND+MUG+ (suluissa IND+). Varmistuneet/ Biotyyppi Herkkyys (%) Alustava havainto Alustavat Varmistetut Yht. E. coli Koliformit Colilert, keltaiset fluoresoivat Colilert, vain keltaiset ,0 100, ,8* 100,0 Colilert, yhteensä ISO , keltaiset ,8 (32,9) ,7 (28,7) 100,0 77,8 * Ns. virhenegatiivisten osuus. menetelmällä ei tarvita varmistuksia vastaavissa näytetyypeissä. Tässä aineistossa virhenegatiivisia löydöksiä saatiin seitsemästä jätevedellä ympätystä näytteestä, joista yhteensä kahdeksan keltaista kaivoa, jotka eivät fluoresoineet, sisälsivät varmistuksen perusteella E. coli -bakteeria. Tästä virhenegatiivisten osuudeksi saadulla alle 1 % osuudella (E. coli -bakteerin esiintyminen vain keltaisissa kaivoissa) ei voida sanoa olevan käytännön merkitystä. ISO menetelmän herkkyys oli koliformisille bakteereille keskimäärin noin 78 % ja E. coli -bakteerille noin 28 %, ja ISO-menetelmään kuuluu päivittäisessä rutiinityöskentelyssä varmistustestien käyttö. Herkkyydet vaihtelivat eri näytetyyppeissä koliformisten bakteerien osalta välillä 65,2 93,6 % ja E. coli -bakteerin osalta välillä 24,9 30,0 %. Kun Colilert-menetelmään kuuluvaa erottelua koliformisten bakteerien E. coli -bakteerin välillä (vain keltaiset kaivot vs. keltaiset fluoresoivat) ei otettu huomioon varmistustestituloksia tulkittaessa, saatiin E. coli -bakteerin varmistuvuus lähemmäs menetelmällä ISO saatua herkkyystasoa (Colilert yhteensä, herkkyys noin 33 %). Valtaosa E. coli -havainnoista oli tyypillisiä fluoresoivia ja indolipositiivisia, kaasua laktoosista tuottavia bakteereita (biotyyppi 1), eikä varmistustestikriteerillä (IND+MUG+ tai pelkkä IND+) ollut sanottavaa merkitystä testattujen menetelmien herkkyyteen. Biotyyppien 3 7 mukaisia kantoja kertyi yhteensä 92 kpl, joista suurin osa oli kaasua tuottavia, mutta indoli- ja MUG-negatiivisia oksidaasinegatiivisia bakteereita. Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 21\n23 3.3 Colilert ISO vertailu ISO standardin mukainen suhteellinen erotus laskettiin alustavista ja varmistetuista Colilert-tuloksista verraten niitä varmistettuihin ISO tuloksiin. Koska Colilertin varmistuvuus (herkkyys) oli 100 % ja virhenegatiivisten osuus jäi mitättömän pieneksi, seuraavassa on esitetty näytetyypeittäin ryhmitellyt tulokset ainoastaan Colilertin alustavien tuloksien mukaan. Menetelmien vastaavuutta arvioitaessa tässä vertailussa käytettiin sallitun poikkeaman arvoa D = 10 % ja menetelmiä arvioitiin 1-suuntaisesti. 1-suuntaisessa tarkastelussa vertailtava menetelmä voidaan hyväksyä, kun se antaa vastaavia tai suurempia tuloksia kuin referenssimenetelmä (ISO 17994). Koliformiset bakteerit Testimuuttujan normaalisuus oli hyvä koko aineiston tasolla ja hyväksyttävissä yhtä poikkeusta lukuun ottamatta myös kaikissa tutkituissa ryhmissä. Poikkeuksena oli näytetyyppi, jossa klooraamatonta talousvettä oli siirrostettu pintavedellä (Shapiro-Wilk p = , kun N = 16). Kyseisistä näytteistä ei kuitenkaan pystytty havaitsemaan mitään erityistä syytä, miksi ne olisi poistettava aineistosta. Varmuuden vuoksi suhteellisen erotuksen arvoja näistä näytteistä testattiin normaalisuuden oletukseen perustuvan standardin ISO mukaisen menettelyn lisäksi ei-parametrisella Wilcoxonin Signed Rank testillä. Kuvioissa 1 ja 2 on esitetty koko koliformisten bakteerien aineisto, johon standardin ISO 17994:2004 mukainen standardianalyysi perustui. Suhteellisten erotusten keskiarvot ja hajonnat eri näytetyyppien mukaisesti jaoteltuna on esitetty taulukossa P e r c e n t suhterokolifal Kuvio 1. Koliformiset bakteerit Histogrammi suhteellisen erotuksen (Colilert vs. ISO ) arvojen jakaumasta verrattuna normaalijakaumaan (normaalikäyrä) 22 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n24 s u h t e r o k 100 o l i f a l Normal Quantiles Kuvio 2. Koliformiset bakteerit Suhteellisen erotuksen (Colilert vs. ISO ) arvojen jakauman normaalisuus normaalijakauman kvantiilikuvion perusteella Taulukko 6. Näytetyypin, siirrostematriisin ja vesimatriisin vaikutus Colilert ja ISO menetelmien koliformisten bakteerien tulosten suhteellisten erotusten kvantitatiivinen vertailu näytetyypeittäin ISO 17994:n mukaan N KA SD Näytetyyppi Kloorattu verkostovesi, jätevedellä ympätty Kloorattu verkostovesi, pinta- tai kaivovedellä ympätty Muu verkostovesi, jätevedellä ympätty Muu verkostovesi, pinta- tai kaivovedellä ympätty Varianssianalyysin F-arvo: 1.36; p = 0.261, Kruskal Wallis p = Siirrostematriisi Jätevedellä ympätyt Pinta- tai kaivovedellä ympätyt T-testin t-arvo 1.50; p = 0.138, Wilcoxon p = Vesimatriisi Kloorattu verkostovesi Muu verkostovesi T-testin t-arvo -0.33; p = 0.746, Wilcoxon p = Varmistustestit Kaikki varmistettiin Osittainen varmistus T-testin t-arvo -0.69; p = 0.492, Wilcoxon p = N = näytteiden lukumäärä, KA = keskiarvo, SD = keskihajonta. Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 23\n25 Näytetyyppien, siirrostematriisien, vesimatriisien ja varmistustestityyppien keskiarvojen väliset erot sisäiseen vaihteluun verrattuna eivät olleet merkitseviä ja menetelmien yleistä vastaavuutta arvioitiin seuraavaksi näytetyyppien yhteisten tulosten perusteella. Taulukossa 7 esitetään koko aineiston suhteellisten erotusten keskiarvot hajontalukuineen sekä arvio menetelmien vastaavuudesta koliformisten bakteerien analytiikassa talousvedestä. Taulukko 7. Colilert- ja ISO menetelmien koliformisten bakteerien tulosten kvantitatiivinen vertailu standardin ISO 17994:2004 mukaan N KA SD SE U LO HI Vastaavuus Vaihtoehtoinen menetelmä antaa suuremmat tulokset kuin referenssimenetelmä N = näytemäärä, KA = keskiarvo (painottamaton), SD = keskihajonta, SE = keskiarvon keskivirhe, U = laajennettu mittausepävarmuus, LO = alempi n. 95% luottamusraja, HI = ylempi n. 95% luottamusraja. Tämän verifioinnin lopputuloksena ISO analyysin mukaan Colilert-menetelmän koliformisten bakteerien saanto oli kaikkien näytetyyppien yhteisissä tuloksissa keskimäärin noin 57 % korkeampi kuin referenssimenetelmän. Escherichia coli ISO menetelmän mukaan havaituille E. coli -bakteereille käytettiin nykyisen määritelmän mukaisten IND+ ja MUG+ varmistustestitulosten antaneiden havaintojen lisäksi E. coli -bakteerin vanhaa määritelmää (vain IND+). Testimuuttujan normaalisuus oli hyvä koko aineiston tasolla ja hyväksyttävissä myös kaikissa osa-aineistoissa. Kuvioissa 3 ja 4 on esitetty tulokset, joihin standardin ISO 17994:2004 mukainen standardianalyysi perustui. Standardin ISO 17994:2004 mukaiset suhteellisen erotuksen keskiarvot ja hajonnat eri näytetyyppien ja ISO tuloksien varmistustyyppien mukaisesti jaoteltuna on esitetty taulukossa Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n26 P e r c 15 e n t suhteroecolial Kuvio 3. Escherichia coli (IND+MUG+) Histogrammi suhteellisen erotuksen (Colilert vs. ISO ) arvojen jakaumasta verrattuna normaalijakaumaan (normaalikäyrä) s u h t e r o e c o l i a l Normal Quantiles Kuvio 4. Escherichia coli (IND+MUG+) Suhteellisen erotuksen (Colilert vs. ISO ) arvojen jakauman normaalisuus normaalijakauman kvantiilikuvion perusteella Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 25\n27 Taulukko 8. Näytetyypin, siirrostematriisin ja vesimatriisin vaikutus Colilert ja ISO menetelmien E. coli (IND+MUG+) tulosten suhteellisten erotusten kvantitatiivinen vertailu näytetyypeittäin ISO 17994:n mukaan. Näytetyyppi Kaikki varmistettiin Osittainen varmistus Yhteensä N KA SD N KA SD N KA SD Kloorattu verkostovesi, jätevedellä ympätty Kloorattu verkostovesi, pinta- tai kaivovedellä ympätty Muu verkostovesi, jätevedellä ympätty Muu verkostovesi, pintatai kaivovedellä ympätty Kruskal-Wallis p = Siirrosteen tyyppi Jätevedellä ympätyt Pinta- tai kaivovedellä ympätyt T-testin t-arvo 4.14; p < Vesimatriisi Kloorattu verkostovesi Muu verkostovesi T-testin t-arvo -0.78; p = N = näytteiden lukumäärä, KA = keskiarvo, SD = keskihajonta Pinta- ja kaivovedellä siirrostetut näytteet olivat jätevesillä ympättyjä näytteitä useammin vain osittain varmistettuja (41/49 kaikki varmistettiin -ryhmästä ovat jätevedellä ympättyjä ja 13/16 osittainen varmistus -ryhmästä ovat pinta- tai kaivovedellä ympättyjä). Tässä E. coli -aineistossa osittainen varmistus itse asiassa tarkoitti sitä, että Colilert-tuloksia ei varmistettu lainkaan ja ISO tulokset varmistettiin osittain. Siirrosteen tyyppi (jätevesi vs. pinta- tai kaivovesi) vaikutti merkitsevästi menetelmien välisen suhteellisen erotuksen keskiarvoon. Klooratun ja muun verkostoveden välillä suhteellisen erotuksen keskiarvo ei poikennut merkitsevästi. 26 Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\n28 ISO analyysin mukaan Colilert menetelmän E. coli-saanto oli kaikkien näytetyyppien yhteisissä tuloksissa keskimäärin 28 % ja 26 % korkeampi kuin referenssimenetelmän, kun varmistustestikriteerinä oli IND+MUG+ ja pelkkä IND+ (taulukko 9). Koko aineistoa ei kuitenkaan voitu täysin varauksetta yhdistää, sillä sekä varmistustestityypin (kaikki varmistettiin vs. osittainen varmistus) että siirrostematriisin (jätevesi vs. pinta- tai kaivovesi) mukaisesti ryhmiteltynä suhteellisen erotuksen keskiarvot poikkesivat tilastollisesti merkitsevästi toisistaan. Taulukko 9. Colilert- ja ISO menetelmien E. coli -tulosten kvantitatiivinen vertailu standardin ISO 17994:2004 mukaan. Kuuden näytetyypin yhteinen tulos Varm. kriteeri Aineiston ryhmittely N KA SD SE U LO HI Vastaavuus* IND+ MUG+ Kaikki varmistettiin Osittainen varmistus Tulos epävarma T-testin t-arvo 3.34; p = Jätevedellä ympätyt Pinta- tai kaivovedellä ympätyt Tulos epävarma Yhteensä T-testin t-arvo 4.14; p < vain IND+ Kaikki varmistettiin Osittainen varmistus Tulos epävarma T-testin t-arvo 3.70; p = Jätevedellä ympätyt Pinta- tai kaivovedellä ympätyt Tulos epävarma Yhteensä T-testin t-arvo 4.34; p < * +; vaihtoehtoinen menetelmä antaa suuremmat tulokset kuin referenssimenetelmä. N = näytemäärä, KA = keskiarvo (painottamaton), SD = keskihajonta, SE = keskiarvon keskivirhe, U = laajennettu mittausepävarmuus, LO = alempi n. 95% luottamusraja, HI = ylempi n. 95% luottamusraja. Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön 27\n29 Tässä verifioinnissa arvioitiin myös ISO menetelmässä esiintyvän taustakasvun määrää ja häiritsevyyttä. E. coli -aineiston näytteistä 40 kpl (61,5 %) olivat sellaisia, että ISO menetelmässä todettiin ainoastaan yksittäisiä taustapesäkkeitä ja 25 kpl (38,5 %) sellaisia, joissa todettiin runsas häiritsevä tausta. Pintatai kaivovedellä ympätyissä näytteiden taustakasvuna todettiin pääasiassa vain yksittäisiä pesäkkeitä (90,5 %) ja osittaiset varmistukset tehtiin pääasiassa sellaisilta maljoilta, joilla oli taustakasvua vain yksittäisiä pesäkkeitä (87,5 %). Jätevesillä siirrostetut näytteet ja näytteet, joissa kaikki varmistettiin, jakautuivat tasaisesti molempiin luokkiin ISO menetelmän taustakasvun suhteen. Taulukossa 10 on esitetty menetelmien välinen suhteellinen erotus luokiteltuna LTTC-taustakasvun mukaan. Colilert-menetelmä antoi keskimäärin suurempia tuloksia suhteessa referenssimenetelmään niillä näytteillä, joissa todettiin runsas ja häiritsevä tausta. Taulukko 10. Taustakasvun vaikutus LTTC-alustalla Colilert ja ISO menetelmien E. coli (IND+MUG+) -tulosten suhteellisten erotusten kvantitatiivinen vertailu siirroste- ja varmistustyyppien mukaisesti jaoteltuna Yksittäisiä pesäkkeitä Runsas ja häiritsevä tausta N KA SD N KA SD Jätevedellä siirrostetut näytteet Pinta- ja kaivovedellä siirrostetut näytteet Kaikki varmistetaan Osittainen varmistus Koska osittainen varmistus näytti vaikuttavan menetelmien väliseen eroon E. coli -tuloksissa, seuraavassa on esitetty aineisto myös niiltä osin, joissa sekä Colilertmenetelmässä että ISO menetelmässä kaikki alustavat havainnot on varmistettu (taulukko 11). Tämän osa-aineiston perusteella Colilert-menetelmä antaa 43,5 % suurempia tuloksia verrattuna referenssimenetelmään ISO Colilert-menetelmän verifiointi sosiaali- ja terveysministeriön\nCOLILERT -MENETELMÄN VALIDOINTI TALOUSVESIEN KOLIFORMEILLE JA E. COLILLE\nCOLILERT -MENETELMÄN VALIDOINTI TALOUSVESIEN KOLIFORMEILLE JA E. COLILLE Jenni Hänninen Opinnäytetyö Joulukuu 2010 Laboratorioala Tekniikan ja liikenteen ala OPINNÄYTETYÖN KUVAILULEHTI Tekijä(t) HÄNNINEN,


mikä on syvä laskimotukos? – Pancho\nmikä on syvä laskimotukos?\nSyvä laskimotukos (aivo–BO-sis), tai syvä laskimotukos on verihyytymän, joka muodostaa laskimoon syvällä kehossa. Veritulppa ilmetä veri paksunee ja möhkäleitä yhdessä.\nUseimmat syvän laskimon veritulppa esiintyä säären tai reiden. Ne voivat myös esiintyä muissa kehon osissa.\nVeritulppa syvä laskimotukos voi katkaista ja kulkea verenkiertoon. Löysä hyytymä kutsutaan embolus (EM-bo-lus). Se voi matkustaa valtimo keuhkoihin ja estää veren virtausta. Tätä tilaa kutsutaan keuhkoveritulppa (PULL-Mun-ary EM-bo-lizm), tai PE.\nPE on erittäin vakava. Se voi vahingoittaa keuhkoja ja muut elimissä ja kuolemat.\nVeritulppa reidet ovat todennäköisemmin katkaista ja aiheuttaa PE kuin veritulppa sääret tai muualla kehossa. Veritulppa voi myös muodostua suonet lähemmäksi ihon pintaa. Nämä hyytymiä ei katkaista ja aiheuttaa PE.\nAlla oleva animaatio näyttää syvän laskimon veritulppa. Napsauta “Käynnistä” -painiketta pelata animaation. Kirjallinen ja suullinen ohjeissa kuhunkin kehykseen. Käytä painikkeita oikeassa alakulmassa keskeyttää, käynnistää uudelleen tai toistaa animaation, tai käytä vierityspalkkia alla painikkeet liikkua kehyksiä.\nAsenna se.; Animaatio näyttää, miten verihyytymä syvässä laskimoon jalan voi katkaista, matkustaa keuhkoihin, ja estää veren virtausta.\nAnimaatio näyttää kuinka verihyytymä syvässä laskimoon jalan voi katkaista, matkustaa keuhkoihin, ja estää veren virtausta.\nPrevious Previous post: Hyvin vähäkalorinen ruokavaliot\nNext Next post: mikä aiheuttaa särkynyt sydän oireyhtymä?


He päättävät Suomen EU-kannan – suuren valiokunnan valta on euromaissa harvinaisuus - Politiikka - Helsingin Sanomat\nEva Biaudét (vas.) ja suuren valiokunnan puheenjohtaja Anne-Mari Virolainen jutustelivat hetki ennen kokouksen alkua sunnuntaina. Oikealla kokoukseen valmistautui valiokunnan sihteeri Anna Sorto. (KUVA: PETRI KROOK)\nJulkaistu: 16.7.2015 20:14\nEduskunta on istuntotauolla, mutta yksi koneiston osa ei lomaile. Eduskunnan suuressa valiokunnassa istuvat kansanedustajat ovat joutuneet kesätauonkin aikana töihin, sillä he ovat onnekseen tai epäonnekseen päässeet valiokuntaan, joka määrittelee Suomessa kansanedustuslaitoksen kannan EU-asioihin.\nHallitusvastuusta vapautunut Varoufakis haukkuu Kreikka-sopimuksen maanrakoon rivi riviltä – HS julkaisee avautumisen\nSdp:n johto hyökkää hallituksen kimppuun ja syyttää Soinia takinkäännöstä


Palvelut - 181082-2019 - TED Tenders Electronic Daily\nPalvelut - 181082-2019\n17/04/2019 S76 - - Palvelut - hankintailmoitus - Avoin menettely\nYhteyshenkilö: Jouni Virtanen\nPuhelin: +358 505766084\nPääasiallinen osoite: http://bc.fi\nHankinta-asiakirjat ovat suoraan saatavilla täydellisinä, rajoituksetta ja maksutta osoitteesta: https://tarjouspalvelu.fi/hkibcoy\nTarjoukset tai osallistumishakemukset on tehtävä/jätettävä sähköisesti osoitteessa: https://tarjouspalvelu.fi/hkibcoy?id=233651&tpk=59da96af-f023-455c-9674-169d06ab8a5a\nMuu tyyppi: oppilaitos\nICT-hankintojen rahoituksen puitesopimus\nPyydämme tarjousta Helsinki Business College Oy:n ylläpitämän oppilaitoksen Business College Helsinki ja yhtiön tytäryhtiön, käyttöön tulevan ICT-materiaalin hankintojen rahoituksen puitesopimuksesta. Helsinki Business College Oy haluaa edistää hankintojen taloudellisuutta, kustannustehokkuutta, elinkaaren hallintaa ja talouden ennustettavuutta. Hankinnan kohteena ovat ICT-laitteiden leasingrahoitus ja niiden elinkaarihallintapalveluiden toimittaminen puitesopimuksessa määritellyillä ehdoilla kolmen (3) + yhden (1) (optio) vuoden ajalle.\nSopimuksen kohteena ovat seuraavat toiminnot tai palvelut:\nVuokralaiterekisteri- ja raportointipalvelu\nPoistuvien laitteiden pakkaus, turvallinen tyhjennys sekä kierrätyspalvelut sekä niihin liittyvät lisäpalvelut. Puitesopimus käsittää kannettavien tietokoneiden rahoituksen, vuokralaiterekisterin ja raportointipalvelun sekä poistuvien laitteiden pakkauksen, turvallisen tyhjennyksen sekä kierrätyspalvelut.\nArvo ilman alv:tä: 2 000 000.00 EUR\nSopimuksen kohteenna ovat seuraavat toiminnot tai palvelut:\nPoistuvien laitteiden pakkaus, turvallinen tyhjennys sekä kierrätyspalvelut sekä niihin liittyvät lisäpalvelut. Puitesopimus käsittää kannettavien tietokoneiden rahoituksen, vuokralaiterekisterin ja raportointipalvelun, sekä poistuvien laitteiden pakkauksen, turvallisen tyhjennyksen sekä kierrätyspalvelut ja niihin liittyvät lisäpalvelut.\nVuonna 2019 rahoitettavien kannettavien tietokoneiden lukumäärä on 1 200 kappaletta. Vuonna 2020 rahoitettavien kannettavien tietokoneiden lukumäärä on 1 600 kappaletta. Vuonna 2021 rahoitettavien kannettavien tietokoneiden lukumäärä on 2 400 kappaletta. Vuonna 2022 rahoitettavien kannettavien tietokoneiden lukumäärä on 2 400 kappaletta.\nKannettavista tietokoneista solmitaan 18 kuukauden, 24 kuukauden tai 36 kuukauden rahoituspalvelut. Helsinki Business College Oy ei vastaa rahoitettavien koneiden lukumäärästä, vaan lukumäärät ovat suuntaa antavia ja voivat toiminnan muuttumisen vuoksi poiketa annetuista luvuista.\nLaatuperuste - Nimi: Tekniset ja toiminnalliset vaatimukset / Painotus: 30\nHinta - Painotus: 70\nKesto (kuukausina): 72\nOptio sopimuksen jatkamiseksi kolmen (3) vuoden jälkeen yhdeksi (1) vuodeksi. Optio vuoden käyttöönotosta sovitaan erikseen vähintään kuusi (6) kuukautta ennen puitesopimuksen loppumista.\nToimittajaksi soveltuvan yrityksen talouden tulee olla kunnossa ja toiminnalla tulee olla jatkuvuutta. Yrityksen ja sen omistajien menneisyydessä ei saa olla seikkoja, jotka vaarantavat luottamuksen jatkuvuuteen.\nResurssien ja luotettavuuden arviointia varten tarjoajan tulee Helsinki Business College Oy:n pyytäessä toimittaa seuraavat asiakirjat:\n- Toimivaltaisen viranomaisen todistus lakisääteisten sosiaaliturvamaksujen ja verojen maksamisesta - Yrityksen tilinpäätöstiedot.\nAsiakirjat eivät saa olla yli kolmea (3) kuukautta vanhempia.\nTarjouksen on oltava voimassa seuraavaan päivämäärään saakka: 31/07/2019\nHelsinki Business College Oy Tietohallinto\nTarjousten käsittelyssä edetään siten, että ensimmäisessä vaiheessa todetaan tarjoajien kelpoisuus. Toisessa vaiheessa tarkastetaan tarjousten kelpoisuus. Kelpoisuusehdot täyttäviä tarjouksia vertaillaan tarjouspyynnössä ilmoitetuin kriteerein.


Kaviobändi: heinäkuuta 2016\nPalapeli on löytänyt uuden muotonsa\nMennään jo heinäkuuta, en voi uskoa. Aika on nyt alkukesästä mennyt siivillä ja olenkin myös tietoisesti viettänyt hiljaiseloa täällä blogissa. Olo on ollut tyhjä, mutta nyt alkaa löytyä niitä uusia juttuja mistä kirjoittaa. En voi luvata että kaikki tulevat jutut olisivat Akusta, mutta hevosista kuitenkin.\nMitä sitten olen puuhaillut nyt toukokuun jälkeen? Alkuun oikeasti en yhtään mitään. Töistä päästyäni ihmettelin ja pyörin kotona tyhjänpanttina. Sen jälkeen pari viikkoa meni elokuvissa juostessa ja yksi lomaviikkokin pääasiassa sohvalla maaten. Okei, käytiin sentään Tukholmassa silloin.\nNyt alkavat palaset kuitenkin loksahtelemaan arjessa paikoilleen. Olen löytänyt uudelleen lenkkeilyn harrastuksekseni ja olenkin käyttänyt nyt edelliset kolme viikkoa etsiessäni sopivan mittaisia reittejä lähimaastosta. Olen varmasti herättänyt hilpeyttä vastaantulijoissa, kun tuijotan karttaa kännykästäni mennessäni.\nSunnuntai-aamu klo 06:30. Hiljaista on lenkkipolulla.\nAkun kanssa olen myös ennättänyt puuhastelemaan paremmin. Tällä hetkellä kävelyille lähdetään aina suitset päässä (ilman sen suurempia seremonioita niiden päähän laittamisessa), ihan vain sen vuoksi, että kaveri oppii niiden kanssa olemaan. Olenkin käynyt sen kanssa nyt kävelemässä peltojen laitaa, pihateitä ja laitumen vieriä ajankuluksi. Pääsääntöisesti Akun arkeen kuuluu kuitenkin laidunnus.\nOlen Akun kanssa sinällään oudossa tilanteessa, että sille kaikki asiat ovat pääsääntöisesti ok. Jos jokin asia on sen mielestä outo, tehdään se kerran ja sen jälkeen ei taas ole mitään ongelmaa. Joudun siis vähän toppuuttelemaan itseäni, etten tekisi vielä sen kanssa liikaa, onhan se vasta 2-vuotias ja kasvanut hurjasti viimeisten kolmen kuukauden aikana. Syksylle toki on suunnitelmia, mutta sinnekin on vielä se pari kuukautta aikaa ja joudun hillitsemään itseäni, etten aloittaisi jo nyt. Laidun kun on kuitenkin se paras paikka varsalle.\nMy boys <3 kuvan copyright: Michaela Meller\nJotten kärsisi liikaa vieroitusoireista kisoihin ja ratsastamiseen liittyen, olen lyöttäytynyt kaverini kisareissuille mukaan groomiksi. Sanoinkin, että käytän tätä tekosyynä myös siihen, että pääsen tsekkaamaan etukäteen sellaiset kisapaikat, missä en ole itse aikaisemmin käynyt. Näin ajattelin välttyä nuoren hevosen kanssa hudeilta kisapaikkojen suhteen.\nNäillä eväillä mennään kesä loppuun ja nautitaan keleistä. Syksyllä puhaltavat sitten uudet tuulet niin Akulla kuin minullakin. Niistä sitten lisää aikanaan.\nLaitan ehkä myöhemmin näkyville lisää Martin ja Akun yhteiskuvia. Niistä suuri kiitos kuuluu Millalle, joka pyynnöstäni jaksoi niitä kuvata ollessani Martin kanssa koulurataharjoituksissa. Kuvien osalta minulla on ongelma, sillä en osaa päättää mitkä niistä teettäisin tauluksi.\nLähettänyt SiskoS klo 1.05 Ei kommentteja:\nTunnisteet: arki, aurinko, hiljaiselo, kuolaimet


Leppä 200 tie- ja lumikoneet - Nettikone\nNyt kun kevät koittaa ja mökkitiet pitää saada auki niin tässäpä olisi sopiva pikkulinko siihen tarkoitukseen, leveyttähän tällä on vain pari metriä mutta vetolaitteeksi käy silloin pienempikin traktori. Linko on ikäisekseen hyväkuntoinen kuten kuvista näkyy. Yhteydenotot vain puhelimitse 0453188251.\nKatso myytävänä olevat Leppä 200 vaihtokoneet »\nNettikone ID 1705459


Viesti Kirjoittaja Suvituulia » 15 Touko 2020, 23:04\nVaikka nää onkin kauheeta luettavaa, on "kiva" huomata etten ole ainoa joka näitä lauseita on joutunut kuulemaan. Joudun edelleen vakuuttelemaan itselleni etten minä ole se hullu.\n-sä oot ihan hullu\n-nyt sä puhut ihan sekavia\n-sun lapset ja äitis varsinkin on ihan hulluja (ja kaikki muutkin jotka asettui mun "puolelle")\n-suljen sun liittymän, jos et vastaa viesteihi/puheluihin. (silloin kun liittymä oli vielä hänen hallussa)\n-otan sun puhelimen töihin, ettet istu vaan sohvalla sen kans (silloinen puh oli hänen ostama, ja tietänee varsin hyvin etten paljoo 4 lapsen kanssa istu päiviä sohvalla..)\n-otan peliohjaimet ja kaukosäätimet töihin, kun et sä kuitenkaan osaa rajottaa lasten ruutu aikaa. (itsellään oli peliongelma)\n-joutaisit sinäkin käymään joskus jossain (että pääsisi leveilemään sillä että on ainakin kerran hoitanut lapsia ja jälkeenpäin voi sitten piikitellä minun seikkailuista) Kävin kerran 3 v aikana. Hän ei käynyt ikinä missään, paitsi töissä\n-älä huuda (jos nostan vähänkin ääntä) hän saa kyllä huutaa..\n-aina sun pitää vetää noi lapset joka asiaan (tottakai ne liittyy elämään, hän ei vaan voinut sietää sitä että lapset menivät hänen edelleen)\n-voit olla aivan varma siitä että..\n-anna olla viimeinen kerta..


Jädelmä | Tuuvanhovin\nvirallisesti Jädelmä, kutsutaan Jädelmä\nsäkäkorkeus 154cm, väriltään vaaleanrautias\nsyntynyt 21.04.2008, iältään 9-vuotias\nkasvattajana Jenni & Julia Santanen evm\npainoittunut koulu- ja kenttäratsastukseen\nEtsinnöissä oli uusi kenttäpainoitteinen suomenhevonen, sepä oli oikeastaan ainoa asia, josta mainitsin tuttavalleni Tuikkeen kanssa radan alussa seisoskellessani. Mies mutristeli hetken suutaan, kunnes ilme kirkastui. Tommi pyysikin minua tulemaan illasta oluelle, ja hieman kummissani suostuin. Hotellin ravintolassa tutustuinkin sitten identtisiin kaksosiin, Jenniin ja Juliaan Pohjois-Karjalasta, jotka kasvattivat pienoisesti suomenhevosia sekä shetlanninponeja. Heille oli syntynyt vain muutamaa viikkoa aiemmin pieni suloinen suomentamma kenttävanhemmista, ja sovin uteliaana, mutta varautuneena tapaamisen varsaa katsomaan sen ollessa lähempänä luovutusikää. Ja Pohjois-Karjalassa kuukausia myöhemmin minua odottikin upea vaaleanrautias hellänkipeä Jädelmä!\nJädelmä on herttaisuuden ja suloisuuden määritelmä yhdessä paketissa; superkiltti ja rapsutuksia rakastava tamma kun on kerta kaikkiaan juuri niin ihastuttava! Jädelmä on myös erittäin hyvän työmoraalin omaava sekä reipas hevonen, enkä suorastaan enempää voi suomenhevosesta toivoa.\nHoidettaessa vaaleanrautias tamma on juurikin niin helppo tapaus kuin jo olettaa voi. Jädelmä ei pane pahakseen mitään, niin kauan kun huomiota sekä hellänä pitoa riittää. Puoleksi unessa nuokkuva suomenhevonen vain huokailee syvään kuin paikoilleen naulattuna. Varustaminenkin on yhtä helppoa, suitset saa päähän kuolaimia tarjoamalla ja satulankin selkään yhdellä yrityksellä. Jädelmä on myös helposti haettavissa tarhasta, vihellyksellä tai kutsulla rautiaan saa iloisena löntystämään luokse ja mukaansa. Narussa tamma kulkee myös mallikkaasti, eli mitään ylimääräisiä temppuiluja ei talutuksessa tarvitse varoa. Ainoa asia, josta voi hernettä nokkaansa vetää, mutta ei kannata, on hevosen loppasuu, joka hamuaa voikukkia tienvarsilta!\nRatsailla Jädelmä tuntuu alussa ehkä aavistuksen jäykältä sekä hitaasti lämpiävältä, ja se vaatiikin hyvät verryttelyt heti alkuunsa. Tamma on kuitenkin erittäin mukava ratsastettava sen hakiessa kontaktia, työskennellessä ratsastajansa mieliksi ja päästessään vauhtiin. Vaaleanrautias on vielä kaiken kukkuraksi todella anteeksiantavainen nuorempien ja aloittelevien ratsastajien käsissä. Kouluratsuna suloinen Jädelmä on tasapainoinen, herkkä apuihin ja kärsivällinen hevonen, jolta löytyy kuitenkin potkua sekä askelmittaa. Esteilläkin reipas, kuuliainen sekä varmajalkainen tamma hyppää esteen kuin esteen, vaikka ratsastaja ei niin varma hypystä olisikaan. Maastossa Jädelmä viihtyy myös, sen verran suomalaisuutta siinä on, ja vaikka kenttäpainoittunut rautias onkin, myös leppoisat käyntimaastot maistuvat Jädelmälle!\nii. Rupelli x ie. Tuulitulen Kukkanen\niii. Rupatti x iie. Annelin Synnit x iei. Tuskatuli x iee. Kukkamaria\nei. Henkijärven Hurmio x ee. Eskon Unelma\neii. Henkijärven Hubertus x eie. Henkijärven Korento x eei. Arvon Esko x eee. Tidilma\nt. Tuuvanhovin Hedelmä :: i. Hermoriihi :: 12.06.2018 :: VRL-14618\no. Tuuvanhovin Hurmossa :: i. Hurmosveikko :: 30.07.2018 :: VRL-14618\nIsä Ruskava oli 158cm korkuinen tummanrautias suomenhevonen, joka kisasi menestyksellä kenttäratsastuksen että esteratsastuksen parissa. Varmajalkaisena sekä mieleltäänkin rauhallisena tunnettu hevonen niitti useita arvokisavoittojakin. Ruskaksi kutsuttu ori tuli ns. mitättömästä, vähemmän tunnetusta suvusta mukaanlukematta isänisää Rupattia ja emänisää Tuskatulta. Ruskava jätti kisaradat taakseen loukkaantumisen jälkeen, ja ehti siittää kaksi tammavarsaa. Ruska lopetettiin 15-vuotiaana loukkaantumisesta seuranneen jalkavamman vuoksi.\nKRJ - 06 sijoitusta, joista 02 voittoja, vain sijoitukset merkitty\n04.06.2018 kutsu - Helppo A - 01/30\n04.06.2018 kutsu - Helppo A - 01/40\n06.06.2018 kutsu - Helppo A - 06/40\n09.06.2018 kutsu - Helppo A - 05/30\n10.06.2018 kutsu - Helppo A - 03/30\n00.00.0000 kutsu - Helppo A - 00/00\nKERJ - 26 sijoitusta, joista 04 voittoja, vain sijoitukset merkitty\n02.06.2018 kutsu - helppo - 04/40\n02.06.2018 kutsu - helppo - 03/30\n03.06.2018 kutsu - helppo - 05/30\n04.06.2018 kutsu - helppo - 04/30\n04.06.2018 kutsu - helppo - 00/00\n05.06.2018 kutsu - helppo - 04/30\n05.06.2018 kutsu - helppo - 03/30\n05.06.2018 kutsu - helppo - 06/40\n06.06.2018 kutsu - helppo - 04/30\n07.06.2018 kutsu - helppo - 03/30\n07.06.2018 kutsu - helppo - 05/30\n07.06.2018 kutsu - helppo - 02/30\n08.06.2018 kutsu - helppo - 01/30\n08.06.2018 kutsu - helppo - 02/30\n09.06.2018 kutsu - helppo - 01/30\n09.06.2018 kutsu - helppo - 06/40\n10.06.2018 kutsu - helppo - 03/30\n11.06.2018 kutsu - helppo - 01/40\n15.06.2018 kutsu - helppo - 02/40\n15.06.2018 kutsu - helppo - 05/30\n18.06.2018 kutsu - helppo - 04/40\n19.06.2018 kutsu - helppo - 05/40\n20.06.2018 kutsu - helppo - 05/30\n22.06.2018 kutsu - helppo - 04/30\n25.06.2018 kutsu - helppo - 05/30\n25.06.2018 kutsu - helppo - 01/30\n00.00.2018, merkintä, kirjoittanut kirjoittaja


Solutum Oy - Valakia Interactive\nKumppanisi menestysstrategian toteuttamisessa\nSolutum Oy on ammattimaisesti toimiva liiketoiminnan kehittäjä, joka on kumppanisi menestysstrategian rakentamisessa ja toteuttamisessa. Yrityksen työkaluja liiketoiminnan kehittämisessä ovat strategian kirkastaminen, hallitustyön aktivointi ja liiketoiminnan uudistaminen yrityskaupoilla.\nSolutumin sivustolle haluttiin uutta ilmettä, joka välittää kuvan luotettavasta ja ammattimaisesta toiminnasta. Myös uusi julkaisujärjestelmä ja nimenomaan WordPress oli asiakkaalle tärkeä osa sivuston uudistuksessa.\nAsiakas Solutum Oy\nToteutettu Helmikuu 2017\nCopyright © 2015–2020 Valakia Interactive Oy


Sijaiseläinlääkäreistä huutava pula - Kotimaa - Uutiset - MTV.fi\nSijaiseläinlääkäreistä huutava pula\nJulkaistu 09.03.2008 12:59\nKunnaneläinlääkäreiden sijaisuuksiin ei tahdo löytyä hakijoita. Ongelma on vaikein Itä- ja Pohjois-Suomessa. Pula sijaisista vaikeuttaa monin eri tavoin eläinlääkäreiden työskentelyä ja lomia ei pysty pitämään silloin kuin haluaisi. - Se ahdistaa minua, kun ei pääse lomalle. Nyt kun lapsilla on hiihtolomia, olisin halunnut mielellään olla lomalla, mutta pystyin pitämään vain yhden lomapäivän, harmittelee Eija Lappalainen. Hän huolehtii yksin eläinlääkärin vastaanotosta Pieksämäellä.Savonlinnassa sijaispulaa lähdettiin korjaamaan perustamalla kuntayhtymään peräti sijaiseläinlääkärin virka.Virka oli perustettu auttamaan vakituisia eläinlääkäreitä, jotta he pystyisivät pitämään päivystysvapaitaan. Mainos (uutinen jatkuu alla)\nTerveysvalvonnan johtaja Marja Heinola Itä-Savon sairaanhoitopiirin kuntayhtymästa kertoo, että virkaa haki vain yksi eläinlääkäri, mutta paikka jäi täyttämättä. Asia tyssäsi hakijan palkkatoivomukseen, joka ylitti niin paljon vakituisten eläinlääkäreiden palkat ja talousarviossa palkkaan varatun rahan, että virkaa ei pystytty täyttämään.Sijaispulan siivittämänä myös eläinlääkäripuolelle onkin syntynyt keikkafirmoja, jotka myyvät kunnille eläinlääkäreiden palveluja sanelemaansa hintaan. Palkkavaatimukset ovat nousseet tuntuvasti. - Jos suinkin pärjätään ilman niin ollaan ilman, koska se on niin kallista verrattuna normaaliin virkaeläinlääkäriin. Kahdessa viikonlopussa menee noin kuukauden palkka, terveysvalvonnan johtaja Marja Heinola sanoo.\nVuokrafirman kautta töihin tulevan ei tarvitse tyytyä eläinlääkärin lähtöpalkkaan, joka on 1600 euroa kuukaudessa. Sijaispulaa ohjailee enimmäkseen raha, sillä Suomessa valmistuu kuitenkin vuosittain enemmän eläinlääkäreitä, kuin jää eläkkeelle. Luetuimmat: Uutiset\nRäsänen vastustaa kiintiövapaita Poliisi kiitti sammuneen kaverinsa pelastanutta poikaa Uusimmat uutisvideot


Kirjoittanut Malagutisti » 22.1.2020 12:33\nJos siinä jarrussa on ihan selkeästi painetta niin jollain ilveellä sieltä on mäntä jumittunut jarrusatulaan. En tosin käsitä että miten se olisi yhtäkkiä jumiutunut.\nJos se ei liiku enää polkimellakaan niin voi olla todella lujassa.\nTuskinpa letkukaan voi noin tukossa olla.\nKirjoittanut Justliekki » 23.1.2020 23:47\nPitänee tarkistaa jarru männät, ja koittaa jotenkin saada ne jumista.\nKirjoittanut Justliekki » 25.1.2020 18:30\nElikkäs avasin nyt sen jarru satulan kokonaan, palat oli ihan decent kunnossa mut sit ne männät oli niin syvällä kun vaan pysty olemaan ja näytti olevan aika tiukasti siellä kun ei liikkuunut vasarallakaan, niin oliskos kellään vinkkiä miten sen männän sais sieltä pohjalta poies, ja ilmeisesti ne jarrupalat ei siks ota siihen levyyn kun se mäntä ei tuu sieltä ylös paloja vasten.\nKirjoittanut RiejunCDI » 1.3.2020 16:03\nTietääkö kukaan Miksi, Riejun jarrukahva on mennyt kovaksi talvisäilön aikana?\nKirjoittanut Arska1337 » 12.3.2020 9:23\nvoisko joku laittaa kuvaa tai kertoa että miten takajarrun palautusjousi pitäisi laittaa takaisin?\nKirjoittanut Malagutisti » 13.3.2020 10:20\nMistä vehkeestä kysymys\nKirjoittanut Arska1337 » 13.3.2020 10:26\nMalagutisti kirjoitti: Mikä?\nKirjoittanut Malagutisti » 13.3.2020 10:38\nSiinä ei kyllä tuollaista komponenttia ole.\nKirjoittanut Arska1337 » 13.3.2020 15:32\nMalagutisti kirjoitti: Siinä ei kyllä tuollaista komponenttia ole.\nhttps://www.enduro24.fi/Rieju-MRT-jarru ... autusjousi\nKirjoittanut yamppaha » 26.5.2020 18:49\nVoiko jarrujen laahaaminen johtua siitä että jarrut pitäis ilmata?\nKirjoittanut Malagutisti » 27.5.2020 0:40\nKirjoittanut Riejumiess » 16.6.2020 2:50\nMikä vosi olla vikana kun asensin uudet jarrupalat riejuun (Rieju mrx 07) eka oli aikamoista ongelmaa saada ees kasaan tai jarruun tehoa. Noh kokeilin lähtee ajaa jarrut toimi jotenkin paisti laahaa todella paljon kulkee max 25 normaalisti 65 ja jarrukevy todella kuuma ja vuoti satulasta nestettä ulos. Kun saavuin pihaan takarengas meni lukkoon en pysty enään työntämään eteen päin mutta taakse kyllä. Mikä voisi olla vika\nKirjoittanut eetus11 » 16.6.2020 13:39\nMikä onku mäntä menee jumii. 1-2kk Sitten viimeks jouduin purkamaa ton takajarrun ja ottaa männän pois jumista ja nyt taas mäntä jumissa\nKirjoittanut am666 » 10.7.2020 4:09\nMikähä o ku riejun etujarru tekee sillei et ku jarrua painaa hetken aikaa nii kahva menee hetken päästä ihan pohjaan ja jarru ei pidä, muuten jarru kyllä toimii ja jarruttaa yllättävän hyvin mutta pitkään jarrua painaessa kahva menee pohjaan ja on koitettu ilmata mut ei auttanu.\nKirjoittanut Malagutisti » 13.7.2020 7:34\nPääsylinterin tiivisteet rikki.\nTänään on 25.11.2020 11:52


Pilapuhelut aiheuttaneet hämmennystä ja huolta – jätä vastaamatta tähän numeroon – Päivän Lehti\nPilapuhelut aiheuttaneet hämmennystä ja huolta – jätä vastaamatta tähän numeroon\nUutiset\t22.7.2017 12:00 Päivän Lehti\nSuomalaisille tulleiden puhelujen sisältönä on ollut muun muassa perintäpuhelu maksamattomista sähkölaskuista ja valitussoitto häiritsevästä elämästä kerrostalossa. (Kuva Fotolia)\nPoliisin tiedossa ei ole, että puheluja olisi hyödynnetty rikollisessa toiminnassa.\nPILAPUHELUT Keskusrikospoliisi on tiedottanut julkisuudessa uutisoidusta ja hämmennystä aiheuttaneesta pilapuhelusovelluksesta. Suomalaisille tulleiden puhelujen sisältönä on ollut muun muassa perintäpuhelu maksamattomista sähkölaskuista, valitussoitto häiritsevästä elämästä kerrostalossa, tilaus, jota ei ole todellisuudessa tehty tai väitös, että henkilö käyttää luvattomasti toisen nettiyhteyttä.\nKaikki puhelut ovat tulleet samasta +358521425364-numerosta. Kyseessä olevan JokesPhone-sovelluksen kautta voi valita valmiiksi nauhoitetun puhelun, joka soitetaan henkilön valitsemaan numeroon. Joidenkin valittavissa olevien puheluiden luonne on sellainen, että vastaanottaja voi säikähtää, ja jotkin puheluista ovat aiheuttaneet vastaanottajalle ahdistusta tai pelkoa.\nPuhelut ovat suomenkielisiä ja aidon oloisia, mutta nauhoitteita joita ei voi itse muokata. Applikaatio nauhoittaa käydyn keskustelun ja lähettää sen pilapuhelun tilanneelle henkilölle.\nLue seuraavaksi Uusi Audi A8 on täynnä tekniikkaa – auto skannaa jopa tienpinnan epätasaisuudet etukäteen


Mitä tehdä jos ruokaan hurahtaa liikaa suolaa? - Asiantuntija vinkkaa\nMitä tehdä jos ruokaan hurahtaa liikaa suolaa? – Asiantuntija vinkkaa\nEllu 15.11.2021 2:19 pm\nKeittoon tai kastikkeeseen hurahtaa helposti liikaa suolaa, mutta mitä voi tehdä tällaisessa tilanteessa? Moni tietää vinkin jossa ruokaan laitetaan raaka peruna, jonka pitäisi imeä ruuasta pois ylimääräinen suola.\nMarttaliiton mukaan perunakikka ei välttämättä yksin pelasta ruokaa, vaan varmin tapa päästä eroon liiallisesta suolaisuudesta on jatkaa kastiketta tai keittoa. Siihen voi käyttää samoja aineksia kun muutoinkin, mutta tekee vaan reilumman määrän ruokaa.\nMyös esimerkiksi sitruunan, limen tai valkoviinietikan lisääminen ruokaan saattaa tasapainottaa liiallista suolaisuutta. Kannattaa myös muistaa, ettei suolaa kannata ikinä mitata ruokaan keitoksen päällä jolloin vahinkoja voi sattua helposti.\nAiheet Artikkeli Ilmiöt Inspiraatio Keittiössä perunakikka Ruokailu suola\nTätä kakkua sanotaan ”taikakaramelliksi” – resepti vastaa herkuttelijoiden rukouksiin\nVaivaako korvasärky Ongelma ratkeaa sukan ja yhden raaka-aineen avulla


2000-01-02 00:00 == 2021-09-27 18:32\nValoilmiö levässä - 23.6.2020 at 12.00 - 23.6.2020 at 18.00 Raisio Observation number 91349\nAfter all, such a thing was finally found, probably based on the info photos to be from Nautococcus. I tried to apply for the same puddles last year, but I guess I was always there at the wrong time.\nFirst, with a break for half a day, the check-in and from there really bounced the proper perimeter on the screen (Figure 1.). With the handset there, the situation recovers and then after work a new company.\nWithin a day the wind had risen considerably and the algae on the surface of the puddles had drifted into thick porridge in several, so that the perimeter was not noticeable. However, a few pools were in some kind of shadow from the worst wind, and then there was still something to describe. The circumference differed very variably depending on the strength of the algal layer on the surface. At its best, the ring was still pretty in the afternoon.\nI raped the pictures earnestly first with a telecom and then with a swipe. Due to memory card failures, some TV screens and all widescreen images were not transferred to the machine after the card was corrupted during the transfer. So here, in addition to the handset sample, only the telescope views of the different compositions.\nWould you be able to try again with an extension on tomorrow. There was, so to speak, the gnawing of the loss of snapshots and a couple of videos ...\nLöytyi tällainenkin sentään vihdoin, taitaa infokuvien perusteella olla Nautococcusta. Samaisilta lätäköiltä koitin jo viime vuonna hakea, mutta taisin olla aina väärään aikaan paikalla.\nEnsin tauon myötä puolen päivän aikaan tsekkaus ja sieltähän pomppasi oikein kunnon kehää näytille (kuva 1.). Luurilla tuossa kohtaa tilanne talteen ja sitten töiden jälkeen uutta yritystä.\nPäivän kuluessa tuuli oli noussut huomattavasti ja levät lätäköiden pinnalla olivat useammissa ajautuneet paksuksi puuroksi, joten kehää ei ollut havaittavissa. Muutama allas oli kuitenkin jonkinlaisessa katveessa pahimmalta tuulelta ja noista sitten löytyikin vielä kuvattavaa. Kehä erottui erittäin vaihtelevasti riippuen leväkerroksen vahvuudesta pinnalla. Parhaimmillaan kehä oli vielä iltapäivälläkin oikein nätti.\nRäpsin kuvia hartaasti ensin telellä ja sitten laajiksella. Muistikorttimurheiden myötä osa teleruuduista ja kaikki laajiskuvat jäivät siirtymättä koneelle kortin korruptoiduttua kesken siirron. Tässä siis luuriotoksen lisäksi vain telenäkymiä erilaisista koostumuksista.\nJosko huomenna jaksaisi yrittää vielä uudelleen laajiksella. Jäi niin sanotusti nakertamaan laajiskuvien ja parin videon menetys...\nTimo Alanko - 23.6.2020 at 23.56 Report this\nTaas lisää syitä kameran raahaamiseen näin kesällä!\nMarko Myllyniemi - 24.6.2020 at 00.17 Report this\nJo on värikästä meininkiä! Täytyy pitää levät mielessä, jos liikkuu vesistöjen lähistöllä.\nPaljon kuvaavan on muuten hyvä vaihtaa kerran vuodessa muistikortit uusiin, säästyy monelta harmilta (nimimerkillä vastaavassa tilanteessa ollut).\nLasse Nurminen - 24.6.2020 at 07.26 Report this\nOli kyllä itsellekin yllätys tuo värien loisto parhaimmissa hetkissä.\nKiitos Marko muistikorttivinkistä täytyy pitää mielessä. Sinänsä mielenkiintoista, että korteissahan on melko pitkiäkin takuuaikoja... Näin jälkiviisaana ehkä jotain oiretta oli jo ilmassa. Kuvia kamerassa selatessa saattoi selaus jumiutua jonkin kuvan kohdalle reilummaksikin aikaa. Samoin zoomattua kuvaa tarkastellessa neliohjaimella ei päässytkään enää liikkumaan kuva-alalla. Pitää seurata miltä näyttää toisen kortin kanssa.\nTero Sipinen - 24.6.2020 at 10.04 Report this\nOnnittelut aluevaltauksesta! Hienoa että sattui vielä noin tymäkät tapaukset ensibongaukseksi!\nMarko Riikonen - 24.6.2020 at 10.32 Report this\nHuh, kirkkaasti parhaat Nautococcus-kehät mitä on koskaan kuvattu. Onko jokainen kehä eri lätäköstä? Millainen paikka tämä oli?\nLasse Nurminen - 24.6.2020 at 20.07 Report this\nKiitoksia Tero :) Mukava kun sai taas yhden lisäruksin havaittuihin ilmiöihin.\nTaisin osua aika optimaaliseen paikkaan tämän osalta. Laittelen Marko tältä päivältä vielä oman havainnon, jossa selviää paremmin tuo ympäristö. Tai siis laitan, mikäli kuvien siirrot tänään onnistuvat eilistä paremmin...


Marjo Puro – Tampereen Vihuri ry\nHome » Articles posted by Marjo Puro\nAuthor Archives: Marjo Puro\nTurvamelojaksi Virrat-Tampere -uintiin\nTaTU Tampre juhlii 100 -vuotista taivaltaan upealla viestiuinnilla Virroilta Tampereelle.\nVihurille on tarjottu mahdollisuutta osallistua tapahtumaan turvamelojina.\nUinti lähtee Virroilta 26.7. klo 2:30 ja saapuu Tampereelle 27.7. klo 12:00.\nMelojan tehtävä on varmistaa uimarin turvallisuus melomalla hänen vierellä.\nLepovuorossa olevat melojat matkustavat mukavan Intti -laivan kyydissä syöden ja lepäillen.\nTämä julkaisu erääntyy 30.07.2019 20:55


Kuunsäde 2, Espoo | Nord LKV\nKuunsäde 2, Espoo\nklo 18:15 - 18:45\nUpea asunto, huippu paikalla, hyvin hoidetussa yhtiössä. Suuret remontit kuten putket ja julkisivu tehty! Asunto rajoittuu metsään ja sijaitsee kalliolla muita rakennuksia korkeammalla 6. kerroksessa.\nAsunto on valoisa ja avara, kaksi makuuhuonetta, olohuone ja keittiö, tilava kylpyhuone ja vaatehuone. Valoisalla lasitetulla parvekkeella on mukavasti tilaa ja näkymät puiden yli ja illan hämärtyessä voit nähdä meren kimaltavan kaukaisuudessa.\nAsunnon sisäilme on moderni ja tyylikäs, pohjaratkaisu on tehokas ja käytännöllinen. Lisäksi tämän asunnon parhaita puolia on näkymät molemmista makuuhuoneesta ja olohuoneesta puiden yli metsään. Ikkunat on kuin vuodenaikojen mukaan vaihtuvat maisemataulut.\nIhanat puitteet ulkoilulle. Laajat Espoon palvelut kuten Iso Omena noin 3 km päässä. Useita päiväkoteja sekä kouluja lähellä.\n195 588,97 €\n52 411,03 €\nAsunto Oy Lealax\nIsännöitsijätoimisto Isännöitsijätoimisto Hanninen Oy Puolikuu 3 F 02210 Espoo Isännöitsijä Tero Hanninen +358988740411\nSuoritetut korjaukset: Lämmönvaihtimen saneeraus 1991. Patteriverkoston saneeraus ja vesilinjaventtiilien uusiminen 1995. Kattojen saneeraus, Julkisivujen ja parvekkeiden kuntotutkimus suoritettu 1997. LV-putkitutkimus suoritettu 2000-2001. Parvekkeiden betoniosien maalauskorjaukset, Parvekeovien ja kaikkien ikkunoiden uusiminen, Saunaosaston saneeraus 2001. Ilmastointihormien nuohous ja säätö, poistoilmakoneen uusiminen, Parvekkeiden lasitus 2002. Piha-alueen saneeraus ja julkisivujen saumakorjauksia 2003. Kylpyhuoneiden kuntokartoitus 2005. Antennisisäverkon kuntotutkimus, Kylpyhuoneiden kuntokartoitus 2006. LW putkistojen kuntotutkimus, julkisivujen ja parvekkeiden tutkimus 2006. Antennisisäverkon kunnostus, Kuntoarvio 2007. Viemärilinjojen kuntoselvitys 2010. Julkisivusaneeraus 2011. Linjasaneeraus 2015-2016. Kiinteistön lukkosaneeraus 2015. Laajakaista 2017. Huippuimurin uusiminen A-B-talo 2017. 1 kpl työhuoneen käyttötarkoitus muutettu päiväkodiksi 2019.\nYhtiön tiedossa ei ole muutostöitä 1.7.2010 jälkeen.\nLähikauppa, ulkoilumahdollisuudet, Iso Omena 3 km päässä.\nBussi, metrolla Matinkylään\nYlä ja ala-asteet


hierontaa naisille most erotic striptease striptease and sex klitoris lävistys Porno Suomi Ilmainen Ilmaisetporno Videot Suomi Aikuisviihde Sortavalan Huorat päiväkahviseuraa seuranhakuilmoitukset kiimaista pillua\nHyvinkää Seksi Porvoo Seksi Deitti alaston suomi bezplatnoe porno Eroottisia Filmejä Seksi Ilmaiset Videot\nmassage anal sihteeriopisto oppilaat.. Pietarin huorat seksitreffit kokemuksia Naitu Vittu Seksiseuraa Tampere suomi pornokuvat hot blonde pussy Pillua Helsingissä Fuck Ass Fuck vanhan naisen pimppi amsterdam huorat\nSexwork girls fin call girls finland... Mällit Pilluun Ilmaiset Porno Sivut\nilmastapornoa suomen web kamerat thai hieronta malminkartano treffit iskuri erotiikkakauppa oulu porno filmiä Kielletty Saattaja Nauhat Kiusaa Sisään Ikaalinen Spermainen vittu finnish legs and feet\nHot Girl Porn Ahvenanmaa Pelikauppa Bordelli suomen suurimmat tissit Erotic Massage Tallinn Seinäjoki Seksi. Erotic massage tartu thai hieronta loviisa\nSuomi Treffi Suomen Pornotähdet rentouttava vittu kaveri eturauhan hieronta lähellä espoo suomalaisia seksikohtauksia paljonko huora maksaa flortende dating sites järvenpää Czech girls escort seksi alasti\nOnko prostituutio laillista suomessa paljas pillu Suomalaista seksiseuraa sex in helsinki\nlähistöllä lailliset bordellit tirkistelijä sisään tampere lingam hieronta sanovat että mulla on iso kyrpä Free Suomiporno Halpaa Puhelinseksiä Prague escort reviews chat naiset thai girl massage fuck grand fuck auto tietokonehuolto kouvola pillua tallinnasta. Escort berlin happy hour mobiili seksi hyvä hierontaa suihin sisään hyvinkää.. latex domina eroottisia fantasioita\nIlmaista Lesbo Seksiä Pillun Huulet,\nsuper hot girls pop pankki lahti.\nPillun hierominen punapää porno Seksitreffit Nainen Etsii Miestä Ruskea Vuoto Raskauden Aikana hvorfor menn onsker uformelle relasjoner lovisa Erootinen Hieronta Koti Seksiä Ilmaista Pillua Ilmaisia Pornokuvia orgasmi naisella itsetyydytys tapoja www sexwork net saint petersburg russia escorts Hanna partanen tissit eroottiset tarina Vuokraovi porvoo escort amsterdam\nJapanilainen seksi ihanaa seksiä Tinder Valkoinen Iso Rinta Sisään Imatra Frenulumin repeämä helsinki thai massage\nseksi chat ilmainen tantrahieronta...\nIlmaisia seksi videoita moscow escorts suomi24 posti fi free sex vids\nPimpin nuoleminen thai massage parlor video. Www Nuru Massage Com Www Pornokarhu Com Sinkkubileet helsinki ilmaisia eroottisia elokuvia\nilmaiset suomi porno videot pikku pillu Czech pornstar escort porno ja omakuva. Nainen etsii miestä turku kuinka nuolla pillua Yle Puhe Netissä Seksi Ei Kiinnosta Seuralainen Fi Hyvä Porno Sivu Suomalaiset pornotähdet anime porn movies\nParas porno elokuva deittiseuraa ilmaiseksi Sexwork Finland Kyrpää Vittuun Hentai Porn Movies Sexwork Girls Nussinta Videot Seksiä Ruotsinlaivalla Lingam Massage Helsinki Alastosuomi Suomi kajaani suomi prostituutio Rakel Liekki Panokoulu Thai Hieronta Lammi Online chat prostituutio hinnat posliini vai karvat pillun nuolemista, Seksiseuraa miehille nainen panee miestä Liukas vittu thai hieronta salo Naisia tallinnasta anaali raiskaus\nSarita Savikko Porno Video Sex Shop Suomi Pietarin huorat male escort finland Suomalainen Seksi Massage Sax Video\nbrazilian shemale tiukka pillu ilmainen teiniporno suomi porno suvi Erotiikka Kuvat Nana Striptease privatsex vaimo haluaa vierasta.. Gratis kanadiske dating sites heinola, Oulu Thai Hieronta Vähäpukeisia Naisia Seksi Palvelut Treffit Joensuu Sex novellit ilmainen porno elokuva Kuinka Saada Pillua Seksiseuraa Rovaniemi pillun hierominen seksitreffit nainen Ryhmäseksi videot escort service moscow\nThai Hieronta Turku Seksi Pori Massage Sex Vedio Porno Xhamster\nNuolla pillua eroottiset tarinat... peniksen hieronta essi striptease...\nSex Flash Games Ilmaista Pillua Video Budapest Bordelli Chat Cam Porno Naisen Klitoris Eroottiset Vaatteet\nkorkeatasoisia saattajat sukupuoli sisään vantaa Kotiporno Videot Erotiikkaliike Helsinki Seksiseuraa kuopio video naisen orgasmista\nOmat Alaston Kuvat Orgasmi Naisella. vıdeo escort girls in st petersburg Eroottinen hieronta helsinki sihteeriopiston naiset ... Sensual massage milf seksi testi\nintiimihierontaa sex in helsinki karvaiset naiset escort girls in helsinki, naked massage videos gay asian massage sex\nSpl keski suomi prostituutio helsinki Hot fucking pics pillu kuumana Sexshop Helsinki Sunny Beach Escort Vaimo antoi pillua kotimainen porno Sinkkuja netissä sihteeriopisto escort seksiseuraa joensuu ravintola kantis oulu\nTantra Sex Massage Video Ilmainen Treffisivusto. massage sex movie free vanhaa naista Full Porn Movies Thai Hieronta Tikkurila escort arlanda kotimainen aikuisviihde Treffit tampereella freehd porn vitun ählämit seksiseuraa miehelle Ilmaiset porno naisen tyydytys.. Mansen Sex Shop Omia Seksikuvia...\nSuomalaiset Seksisivut Sex Workers Finland maajussi porno sihteeriopisto escorts.. hvordan komme ut av en tilfeldig forhold pohjois karjala\nnainen sängyssä seksuaalinen halukkuus Amatööri porno kuvat varattujen deitti\n.. amatööri seksi kuinka saada nainen ejakuloimaan Thai hieronta turku nuru massage site vaimolle vierasta luvalla live sex web cam Thai hieronta pori shemale date.\nKivesten Kidutus Sirkantähti Levi Esiintyjät ilmainen puhelinseksi amatööri pano seksitreffit mikkeli pillu kosteana.. Satu lappi nykyään kultarannikko bulgaria\nFree Adult Dating Site Uk Nivala Mainoksia yksityiset saattajat kasvot istuu Online Tilfeldig Sex Kankaanpaa blowjob cumshot ilmaisia suomalaisia pornoelokuvia\nerotiikka tube sihteeriopisto sex work Amateur bondage hieronta orgasmi ratkaisukeskeinen psykoterapia kokemuksia rovaniemi Quntele Chat Aleksis Kiven Katu Prostituutio Pussy Licking Seksitreffit Vantaa Ryhmäseksi videot tosimies aikuisviihde Seksikäs blondi seuraa helsingistä riga escort girls seksiseuraa parille tinder yksityiset saattajat kovaa seksiä\nAmatööri Pano Suomi Seksi Chat.. Seksi tampere klitoriksen stimulointi mitä nainen haluaa sängyssä kalle seksilehti\nNaisen klitoris seksi jyväskylä,\nKielletty saattaja nauhat kiusaa sisään ikaalinen brazilian shemale ilmaiset sex Wilma Pohjoiskarjala Erootisia Tarinoita suomi seksiseuraa sex porno chat eroottise tarinat amatööri pornokuvat Kiimainen yksityiset saattajat isot tissit sisään vantaa\nmassage sex video hd ilmaisia seksisivuja... Hämmästyttävä hieronta dildo sisään orimattila tänä yönä parinvaihto puku sisään kokkola,\nfinnish legs and feet pimppi videot Ilmaisia porno elokuvia hairy pussy ass Seksiasentoja kuvina seksiseuraa iisalmi Se on suihinotto baltic escort, Xxx Cams Meriton Grand Conference Spa Hotel Kokemuksia ilmainen porno chat eläinseksiä Gratis online dating sider lieksa\nSuomi prostituutio huora joensuu Insesti tarinat eroottinen hieronta espoo gratis online casual dating nastola escort prague nainen sormettaa Tanssikurssit kuopio poppers vaikutus\nYoutube Videot Rohkeat Party Porn escort girl moscow hot striptease videos\ntallinn estonia escorts sex massage milf Seksiseuraa jkl seksiväline kaupat... Kotimaista seksiä jyväskylä escort.\nreddit neitsyt suihin lähellä naantali.. Numerot Viroksi Search Hairy Pussy Outcall Sensual Massage Webcam Porno Online Naiset etsivät miehiä free suomi porn\nIlmaista suomiseksiä big cock com aikuisten ilmainen seksi tapanilan auto kuopio\nPorno Taustakuvat Porno Wikibedia... Thai Hieronta Rovaniemi Ebony Sex\nNuolin äitini Pillua Seksitreffit Shemale Real Tantra Massage Video Art Porno\nlähistöllä saattajat luiseva sisään helsinki ilmainen porno sivu naiset paljaana Hakemisto mistressmistress koiran tyyliin pieru fetissi suomalaista aikuisviihdettä myyntipäällikkö avoimet työpaikat raahe .\nx hamster pissa ja kakkaleikit Fingerpori Selitys Seksi Vilmit.\ndating for seniors over 70 kangasala,\nTrans Treffit Eroottinen Hieronta Espoo,\nitsetyydytys keinoja thai hieronta mikkeli thai hieronta malmi katsastuskonttori joensuu seksiseuraa netistä maksulliset seuralaiset Eroottiset tarinat flexaa länsi turunmaa\nbedrocan hinta suomessa caligula brothel berlin monster cocks posliini vai karvat\nmtv gay chat eniro henkilöhaku kirjaudu Trivago mainos nainen thailand cheap escort. Lingam massage helsinki ruotsi porno Viserrys Tanssijoita Sukupuoli Lähellä Ylöjärvi. Pornoon Seksivideot Eroottinen Hieronta Mari perankoski rinnat porno pelit.\nVerkossa englanti sukupuoli lähellä pudasjärvi Thai hieronta jyväskylä kiimaiset naiset, Hierontaa Naisille Ilmaista Suomalaista Seksiä ... halvat lentokenttähotellit vantaa oulu sexwork korkeatasoisia saattaja sukupuoli sisään hanko\nHienotunteinen Eroottinen Kirjallisuus Fantasia , Elokuvat Porno Nainen Etsii Miestä Pk\nseksifantasia tarinat ilmaista puhelinseksiä Eläinporno Videot Naisen Ejakulaatio Miten. big shemale liian nopea laukeaminen, Seksikkäät kotirouvat seksi vantaa. Hotgirls helsinki naisten ejakulaatio ilmaiset treffisivut pillua naidaan seksi naisen kanssa seksijuttuja\nLäpitunkeva saattaja iso perse Seksi Pano Big Cock Transexual...\nyöaikaan treffisivusto emätin sisään tampere... paksua kullia lintukirppu ihottuma Hierontakoulu Turku Mällit Sisään Suomi Porno Escort Hämeenlinna Hämmästyttävä yksityiset saattajat alaston lähellä lahti\nKatsastusasema Iisalmi Caroline Hieronta escort saint petersburg russia hentai girl gangbang thai massage in helsinki seksiä turussa Www tantra massage sex tarinat, Seksitreffit lappeenranta liukas pimppi... Bdsm seksi seksi video ilmainen\nSexsi Fi Tallinn Estonia Escorts Alastonsuomi com hieronta vantaa tikkurila Suomiseksiä video huora oulusta Seksifilmit Ilmaiset Suomi Porno Sivut\nParas Thai Hieronta Helsinki Alastonsuomi Videot Porno kategoriat escort fuck video\nNuru Massage Helsinki Sihteeriopiston Tontti Seuraa Kuopiosta Helsinki Prostitutes Alaston suomi thai hieronta helsinki keskusta\nOld Pussy Movies Ilmaiset Erotiikkaelokuvat asian massage videos kyrvän nuppi escort seinäjoki vuokraovi rovaniemi hikinen vittu on saatanan kuuma seksi alasti bb inka porno monster cock videos Henkka kuopio hierontahuone mari Ilmaisia Seksisivuja Erotiikka Dvd musta nainen unessa lappeenranta video nuru massage asian massage sex miten saada isompi muna kotimaiset porno videot\nSexy thai massage parhaat pornotähdet Sihteeriopisto oulu suomi treffi\nseksiä suomessa latvia viinakauppa... St petersburg escorts pornofilmit seksitreffit etsi livekamera porno..\nSalaista Seksiseuraa Mature Lingerie Thai hieronta varkaus seksinovellit suomi24 porno russia ilmaiset aikuisviihde videot Prostitution In Finland Hor Sex Com Escort service helsinki sex webcam 18v synttärilahja suuseksiä miehelle . Suomalainen kirjakauppa opiskelija alennus xbox 360 costo\nylin ukrainalainen sukupuoli lähellä tampere Seuranhaku sivut finnish mature fuck.. Tytön pillu nude massage video erotic massage paris ilmaisia pillunkuvia seksi rovaniemi eturauhanen hieronta\nSuomalaista amatööri pornoa deitti viro\nNainen haluaa seksiä bambi ink porn Ton Porno Du Jour Ilmainen Sex Venner med fordeler status etelä karjala Penis painot imatran valtionhotelli kummitus\nmaksullinen seuralainen amatööri porno suomi ilmaisia pillunkuvia prostitute fuck teen lesbo sex ilotalo tallinna\nhieroja lauttasaari shemale on shemale Yöaikaan yksityiset saattajat pyöreä tanssi\nFree hd porn site nainen seksi, matsui mikroaaltouuni cuckold forum Ilmaset porno videot dildo perseeseen\nSalaisuus hotelli escort ratsastaa sisään pieksämäki Vitun nuolenta escort kristianstad Paksu pillu eturauhasen lypsäminen Hieronta Ei Seksiä Porn Actress Escort mobiili porno escort palvelu turku\nKissan Sukukypsyys Seksi Siskon Kanssa Keltainen ruusu cruising cams xxx Suomalaiset Julkkikset Alasti Transu Kuvia\nEscort Service Tallinn Sukupuolitautitestit Helsinki Myyn pikkuhousuja eturauhanen hieronta Free porn suomi erotic body massage video\nseksikuvat ilmaiset thai hieronta kokkola Seksiasut Netistä Thai Hieronta Mikkeli,\nPaksua Kullia Sex Massage Turkey... Sex in turku ilmaiset eroottiset filmit porn hd radio rock eroottiset tarinat De Beste Sex Omradern Kymenlaakso..\nSuomen Pornotähdet Escort Gdansk, Nainen etsii miestä oulu skirt striptease\nAsennot Kuvina Prostituutio Suomessa Laki adult sex videos eroottinen hieronta oulu\nEtsin kavereita swinger bileet Orgasmi Naisella Thai Hieronta Mikkeli Intimmassage Ilmaista Netti Pornoa\nSeksilelut netistä pikkarit myy Helsinki seksi nuru massage net\nTytön Itsetyydytys Kallion Huorat Valehtelisin jos väittäisin chords helsinki escort\nsuomi24 treffit mobiili ruskea valkovuoto thai hieronta salo seuralaispalvelu miehille\nPrague Privat Escort Porno Haku seksiseuraa kouvola bondage girls seksitreffit turku pillu wikipedia Sex shop salo riga sex massage , Brunette fuck gif www suomi porno com Pizzataxi Korso Ultimate Viinikaappi alastonsuomi tunnukset hattara escort.\nporno hental suomi ilmainen porno suomi24 seksiseuraa seksiseuraa hämeenlinna Seksi Ilmoituksia Ilmainen Seksi Video,\nnai mua hieronta malminkartano...\nRaskaus kuumat aallot oulainen Neiti porno suomi24 deittipalvelu Bulgaria Huorat Grand Fuck Auto Without Registration, Tantra Massage Free Video Porn Rakel Liekki Hieronta Tallinnassa Czech Escort\nDonna heart porn massage happy end, livekamera i want a fuck buddy.. S treffit g pisteen stimulointi Nettisivu Saattaja Isot Tissit Lähellä Tampere real escort finland porno suomalainen\nYle Puhe Netissä Sihteeriopisto Pori, Seksitreffit haku ayia napa hintataso Ilmainen eroottinen video teen sex hd alastom suomi paras peppu naiset, suomitytöt alasti salaista seksi seuraa\nTilfeldige datoer svindeln ylivieska...\nnuoren naisen pillu porno xhamster Sex With Girls Aikuisviihde Elokuvat Vaasa thai hieronta hot anime porn Seksitreffit Fi Ilmaisia Seksi Videoita. Käteinen raha mistressmistress sukupuoli sisään maarianhamina escort in oulu private erotic massage...\nSex shop suomi hairy pussy fuck Escort Kajaani Swinger Massage tallinna väkiluku seuraa lahdesta\nPorno Com Filippiinit Prostituutio, hämmästyttävä yksityiset saattajat sukupuoli pissa sex anaaliseksi kokemuksia Oulu sex olen toinen nainen keskustelu Rajua Panoa Suomalaisia Kotivideoita, rakastelua kuvina yli polven saappaat..\n1 Kuala lumpur escort uhkea nainen\tSeuraa netistä ilmaiseksi escort girl moscow\nNettitreffit suomi seksitreffit kokemuksia\nSuomi kouvola ilmainen treffipalsta © Sarita savikko porno video hairy pussy images 2020 Thai hieronta pori shemale date All rights reserved.