Michel Delpech – Bénabar, Laurent Voulzy, Marc Lavoine reviennent sur sa carrière | Non Stop People\nMichel Delpech – Bénabar, Laurent Voulzy, Marc Lavoine reviennent sur sa carrière\nMercredi 15 Juin - 20:00\nMichel Delpech a succombé à un cancer de la langue et de la gorge au début de l'année. Avec 50 ans de carrière, le chanteur est considéré comme une référence dans le monde de la musique française. De nombreux artistes lui rendent hommage dans un documentaire spécial sur TMC, Non Stop People vous en dit plus.\nLe chanteur est décédé d'un cancer le 2 janvier 2016, laissant des millions de fans derrière lui. Michel Delpech a entamé sa carrière à tout juste 19 ans, avec la désormais célèbre ''Chez Laurette'' qui a fait danser plusieurs générations dans les bals populaires. 14 albums et un immense succès plus tard, Michel Delpech était considéré par les Français et par nombre de musiciens comme une référence et un mentor. Une carrière impressionnante que TMC a choisi de faire revivre dans un documentaire retraçant le parcours du chanteur à travers le témoignage de plusieurs musiciens français.\n''Il a traversé le temps avec son talent''\nMichel Delpech est ''quelqu'un qui a été porté par un succès inouï et qui ne s'est pas arrêté pendant quinze ans, voir plus'', confie Bénabar, qui avait poussé un violent coup de gueule après la mort du chanteur, dans des propos repris par TVMag. Pour Laurent Voulzy, le chanteur était quelqu'un de ''toujours anxieux de ce qui allait suivre''. C'est l'image qui reste de Michel Delpech dans l'esprit de beaucoup de Français, celle d'un chanteur de talent réservé et discret. ''Le mot idole me gêne, cela ne me convient pas du tout'', avouait-il lors d'une émission télé. Son succès causera également sa perte : entre divorce et dépression, Michel Delpech sombre peu à peu avant de retrouver l'amour et la joie de vivre grâce à une nouvelle rencontre. ''Il a traversé le temps, avec son inquiétude et son talent'', résume Marc Lavoine. Le documentaire est à suivre dès 20h55 sur TMC.\nMichel DelpechTMCQuand j'étais chanteurhommagecarrière


Yik Yak est-il sûr ? Nous avons testé leur relance et leurs nouveaux garde-corpsYik Yak\n18 août 2021, 23h38 updated 19 août 2021, 9h48\nYik Yak est de retour. Le forum en ligne anonyme – un mélange entre Twitter et Reddit – fait son retour 4 ans après sa fermeture.\nL’application révolutionnaire a été lancée en 2013 et a été un succès instantané, mais le modèle commercial n’a pas été conçu pour durer et la base d’utilisateurs a diminué quelques années après sa conception en raison de problèmes de cyberintimidation.\nMaintenant que c’est de retour, avec des « garde-fous » censés interdire l’intimidation, le harcèlement et la diffusion d’informations personnelles.\nNous avons donc décidé de prendre le train en marche et de vérifier les nouveautés de l’application, l’efficacité de ces garde-corps et si l’application est toujours aussi amusante qu’elle l’était – avant la cyberintimidation.\nYik Yak est-il sûr ?\nVoici les 15 publications les plus drôles de Yik Yak depuis leur relance.\n1. Affichage S–t de haut niveau\n2. Applebees est une belle date\n3. Au moins Drake ne sort pas avec nos mères\n4. La génération Z ne peut pas danser ici\n5. Laissez la cyberintimidation commencer (comme une blague)\n6. La génération Z est-elle facile ?\n8. En parlant de collégiens\n9. Mises à jour de la ligne de barre\n10. Les milléniaux sont coincés dans le passé\n11. À quoi ressemble une brique dans une sécheuse ?\n12. Ceci est une lettre personnelle à Kanye West\n13. Yik Yak est idéal pour les conseils de cuisine\n14. C’est ce qu’ils entendent par thérapie en ligne, n’est-ce pas ?\n15. L’enfant d’amour de Twitter et Reddit\nLa sécurité semble être au cœur de la relance de Yik Yak. Yik Yak n’autorise pas les utilisateurs à publier se livrer à tout type d’intimidation, de harcèlement, de fanatisme ou de menaces, publier renseignements personnels ou promouvoir la violence.\nLeur site Web propose désormais des ressources en santé mentale et des lignes directrices pour rester en sécurité.\nMais nous ne pouvons pas simplement croire Yik Yak sur parole, alors j’ai demandé à un de mes amis de m’aider et de tester les «garde-corps» pour voir à quel point ils fonctionnent bien.\nJ’ai utilisé le prénom le plus populaire auquel je pouvais penser et le nom d’une rue de ma ville et je me suis moqué de la personne fictive – John Grove.\nMon ami a voté contre et signalé ce Yak, et en moins d’une heure, le message a été supprimé par l’application.\nIls s’appuient sur deux systèmes : les utilisateurs peuvent voter contre les publications suffisamment de fois pour les faire supprimer, et le système de rapport.\nLes modérateurs de Yik Yak surveillent les rapports pour voir si quelqu’un a enfreint leurs « garde-corps », mais la communauté peut également rendre la communauté plus sûre ensemble, de la même manière que reddit.\nIl semble que cette fois-ci, ils prennent les choses beaucoup plus au sérieux.\nC’est un message que j’ai vu avant de faire mon test et qui a également été supprimé dans l’heure où je l’ai vu.\nJe ne sais pas à qui c’était le numéro de téléphone, et je n’ai pas essayé de l’appeler, mais l’action rapide de Yik Yak pour supprimer ce type de contenu est rassurante.\nDonc, étant donné que Yik Yak semble passer le test de sécurité jusqu’à présent, nous pouvons recommencer à profiter de contenu amusant!\nPréparez-vous, pour un « s–tposting » de haut niveau. Maintenant que Yik Yak est officiellement de retour, les gens sont prêts à publier les (meilleurs) pires mèmes et blagues de la planète.\nYik Yak était vraiment un creuset de certains des pires contenus, et il ne fait aucun doute qu’il retrouvera bientôt sa tristement célèbre gloire d’antan.\nPrenez votre costume et votre cravate et préparez-vous à frapper les Applebees les plus proches.\nJe veux dire, cette personne a raison. Ces hors-d’œuvre à moitié prix ne sont pas des blagues. Applebees a une grande collection d’applications et leur menu de boissons est assez diversifié – 7 € Mana Margaritas n’importe qui?\nAvec tout ce qui se passe dans le monde et toutes les choses stressantes que vous entendez dans les nouvelles, cette personne veut jeter un œil au bon côté des choses – Drake ne sort avec aucune de nos mères.\nEh bien, pas toutes nos mamans. Amari Bailey ne peut pas en dire autant de sa mère Johanna Leia, que Drake a emmenée avec un rendez-vous au Dodgers Stadium – comme tout.\nMais au moins, il est sûr de dire que Drake sait comment impressionner les dames.\nEn l’absence de Yik Yak, le leader des médias sociaux de la génération Z est apparu – et c’est Tik Tok.\nCe Yik Yaker a fait un drôle de petit bonhomme allumette montrant quelqu’un frappant le « woah » et se moquant des enfants de la génération Z qui font des danses sur la plate-forme de Tik Tok.\nEn fait, il y a beaucoup de gens qui se moquent de la génération Z lors de la grande réouverture de l’ancienne plate-forme.\nL’intimidation était une préoccupation majeure pour les utilisateurs et les investisseurs de Yik Yak lors de la première sortie de la plate-forme. À l’époque, il n’y avait pas grand-chose à faire pour l’application pour protéger les enfants ou toute personne dont on se moquait.\nMais le retour de ce nouveau Yik Yak a beaucoup de «garde-corps» améliorés pour prévenir la cyberintimidation et aider à créer une plate-forme sûre et amusante.\nC’est pourquoi cette personne pense que la génération Z a le visage facile et renfrogné. Ceci, et probablement pour d’autres raisons.\nLes Millennials – ces personnes désormais âgées qui ont peuplé l’application à son apogée – reviennent sur la plate-forme et voient comment les choses ont changé.\nNon seulement cela, mais ils sont également au sommet de leur âge adulte et doivent apprendre les voies du monde des adultes dans un état mondial stressant et instable.\nIls ont de la chance de ne pas avoir à se soucier de beaucoup de choses, mais je ne dirais pas qu’ils ont la tâche facile non plus, et cela a manifestement suscité beaucoup de débats, donc il y a d’autres personnes qui pourraient être d’accord.\nEncore plus heureusement pour eux, l’application revient à une heure de grande écoute. L’université recommence bientôt et beaucoup de la génération Z sont encore à l’école.\nLa congrégation de tous ces enfants dans un petit rayon (5 miles) fournira certainement à l’application beaucoup de contenu de qualité.\nDes étudiants fauchés se réjouissent de la célébration d’un collègue qui sort de la crise – mettre enfin la main sur un cadre de lit.\nCe n’est qu’un des nombreux Yaks qui ont fait leur entrée sur la scène universitaire jusqu’à présent.\nCet étudiant a eu une idée brillante que j’aurais aimé avoir à l’université.\nLes mises à jour de la ligne en direct au bar auraient permis d’économiser de nombreuses tournées de bars qui sont mortes à cause de bars trop emballés ou d’une attente trop longue.\nCette personne est l’une des rares Millenials de retour sur la plateforme et qui sait, j’ai peut-être connu cette personne au lycée.\nYik Yak était extrêmement populaire dans ma ville quand j’étais au lycée, et ma ville était très bonne pour en faire un endroit sain, en faisant des compliments à des gens qu’ils ne connaissaient pas très bien et en faisant juste des blagues sur l’école.\nAjouter un peu de saveur avec le modèle de mème ‘POV’ montre à quel point l’humour a vraiment évolué au fil des ans.\nCe qui m’amène à ce Yak (c’est comme ça qu’ils l’appellent) à propos d’une rappeuse nommée Coi Leray.\nC’est le deuxième que je vois à propos de cette personne, alors peut-être que je suis trop vieux pour savoir qui c’est, mais il semble que les garde-fous contre l’intimidation ne protègent pas les célébrités ou les personnalités publiques.\nCependant, je dirai que jeter une brique dans une sécheuse ne peut pas produire un son agréable.\nEn parlant de rappeurs, où diable est DONDA, Kanye ?\nMême Yik Yak est sorti avant votre album. L’application qui mourait depuis 2015, est décédée en 2017, et est finalement revenue après 4 ans de silence.\nApparemment, la date de sortie a encore été repoussée et devrait maintenant sortir le 20 août. Ou fin août. Ou la fin du Q3. Ou la fin de l’année.\nQui sait vraiment plus ?\nLes gens viennent à Yik Yak à la recherche de conseils de leurs pairs. Certaines de ces personnes veulent des conseils relationnels, peut-être des conseils financiers et où elles devraient investir leur argent, ou même ce qu’elles devraient porter lors de leur premier rendez-vous.\nCette personne veut savoir si elle doit ou non laver ses oignons. Comment ils sont restés aussi longtemps sans savoir comment faire cuire des oignons est un mystère, mais les réponses sont encore meilleures.\n« Avec de l’eau et du savon. »\nJe garderai cela à l’esprit la prochaine fois que je cuisinerai.\nCette personne a peut-être raison. Yik Yak est gratuit et la thérapie ne l’est pas.\nAlors que la dernière personne voulait des conseils de cuisine, cette personne veut juste que quelqu’un l’écoute. Eh bien, ils ont de la chance car à moins que leur Yik Yak n’obtienne 5 votes négatifs ou n’intimide quelqu’un, il ne sera pas supprimé et les gens devront écouter.\nC’est essentiellement à cela que servent les médias sociaux, n’est-ce pas ?\nComme je l’ai dit précédemment, Yik Yak est vraiment comme Twitter avec la fonctionnalité Reddit. Vous publiez du contenu de type tweet, avec l’anonymat et un système de karma comme Reddit.\nC’est l’enfant parfait de l’amour des médias sociaux sans tous les adolescents dansants et les théories du complot – je te regarde Tik Tok.\nPrevious article Bruno Mars retarde la sortie de son album avec Silk Sonic\nNext article Anthony Mackie signe un accord pour jouer dans Captain America 4


Pochet, R. (1979). Contribution à l'étude de l'interaction hormone récepteur (Unpublished doctoral dissertation). Université libre de Bruxelles, Faculté des sciences, Bruxelles.\nDisponible à / Available at permalink : https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/214121/3/e83c1458-8659-45a9-9c2f-98c1c0aa66ed.txt\nUNIVERSITE LIBRE DE BRUXELLES C(\nInstitut de Recherches Interdisciplinaires en Biologie Humaine et Nucléaire Dir. Prof. J. E. Dumont\nL’INTERACTION HORMONE RECEPTEUR\nMémoire présenté en vue de l’obtention du grade légal de Docteur en Sciences\nL'HYBRIDATION IN SITU DU cDN/ju^joE PROLACTINE SUR DES COUPES DE CERVEAU DEVRAIT PERMETTRE DE DETERMINER SI CERTAINS NEURONES DE\nL'HYPOTHALAMUS EXPRIMENT LE GENE DE LA PROLACTINE\nL'HYBRIDATION IN SITU DU cDN/(lîl DE PROLACTINE SUR DES COUPES DE CERVEAU DEVRAIT PERMETTRE DE DETERMINER SI CERTAINS NEURONES DE\nL'HYPOTHALAMUS EXPRIMENT LE RENE DE LA PROLACTINE\nSI 8 U 0 THÉQUE DE CHIMIE\nMémoire présenté en vue de l'obtention du grade légal de Docteur en Sciences\nc'est avec beaucoup de plaisir et de reconnaissance que j'exprime ici ma gratitude au Professeur J.E. DUMONT qui m'a permis d'entreprendre et de réaliser ce travail dans les meilleures conditions.\nSes qualités humaines et scientifiques hors du commun, son enthousiasme et son énergie à entreprendre ont été extrêmement profitables à ma for\nmation et m'ont toujours stimulé et guidé dans mes recherches.\nJe suis reconnaissant au Professeur J.L. PASTEELS de m'avoir permis d'achever ce travail dans d'excellentes conditions alors que j'étais assistant dans son service.\nJe suis reconnaissant au Professeur R. KRAM qui m'a permis de collaborer avec son équipe.\nIl m'est également particuliérement agréable de remercier le Docteur G. DELESPESSE avec qui j'ai entrepris une fructueuse colla\nboration et qui n'a négligé aucun effort pour m'initier à l'immunologie et grâce à qui j'ai pu bénéficier pendant plus d'un an d'une aide techni\nque. Sa disponibilité et sa rigueur scientifique m'ont été très pré\nJe tiens à exprimer ma gratitude à ceux qui ont participé activement à la réalisation de mon travail.\n- A Jacqueline VAN SANDE avec qui a été réalisée la partie qui traite de l'effet de l'iodure sur l'adénylate cyclase ainsi que l'effet de la choiera toxine.\n- A Jean Marie BOEYNAEMS avec qui a été réalisée la partie théorique de l'activation de la cyclase thyroïdienne et qui a manifesté un intérêt soutenu tout au long du travail.\n- A Henri SCHMITT qui a été beaucoup plus qu'un collaborateur et qui a réalisé toutes les cultures de cellules et avec lequel j'ai effec\ntué les premières caractérisations sur cellules intactes.\n- A David MARTINS, responsable de la salle des Comptages de l'Institut, qui a témoigné de beaucoup de patience à notre égard.\n- A Stéphane SWILLENS qui a effectué le programme à la Wang 2000 permettant d'automatiser le calcul des résultats de la cyclase.\n- A Francis CANTRAINE qui a effectué les programmeide calcul par itérations successives permettant la détermination du nombre de Hill.\n- A Christine DECOSTER et Gilbert VASSART qui m'ont aidé à couper au microtome de nombreuses tranches de thyroïde.\n- A Szabo LAZLO et Jeanine VANDENBROEK qui ont participé à des nom\n- A Henri COLLET qui a préparé des milliards de lymphocytes d'amyg\nMa gratitude va également à Monsieur J.P. RIETHUIZEN de la firme Upjohn qui m'a fait bénéficier d'une recherche bibliographique ainsi que d'un crédit pour photocopies.\nEt je réserverai une attention toute particulière à Mesdames LEEMANS et VERBIST qui ont réalisé avec beaucoup de patience et de gentillesse la partie dactylographique de ce travail.\nUne grande partie de cette étude a été réalisée alors que nous bénéficiions d'une bourse de l'Institut pour l'Encouragement de la Recherche Scientifique dans l'Industrie et l'Agriculture (I.R.S.I.A.).\nadénylate cyclase en système\nACELLULAIRE ...■■... 30\naractérisation pharmacologique de l\nCYCLASE THYROÏDIENNE ACTIVABLE PAR LA THYRO-\nTROPINE ... S5\nRÉCEPTEURS 1^-ADRÉNERGIQUES. CARACTÉRI\nétude de laliaison\nRESUME ... m\ncAMP Adenosine 3':5' monophosphate ATP Adenosine 5'; triphosphate GTP Guanosine 5triphosphate\nITP Inosine 5triphosphate\nGppNHp Guanosine -imido^ triphosphate PGEj Prostaglandine Ej\nGMl Galactosyl-N-acetylgalactosami nyl-(sialyl)-galactosyl ceramide\nMMI Methimazole (l-methylimidazol-2-thiol)\nHYP Hydroxybenzylpindolol ((+)-3-indoloxy-l-(2-p-hydroxy- benzylpropyl-2-amino)isopropyl alcool\nImODUCTION GENERALE ... ...\n1. LES RECEPTEURS ET LEUR FONCTION ...\n2. DEFINITION DU RECEPTEUR ...\n3. LE MODELE DU MECANISME D'ACTION HORMONALE PROPOSE PAR SUTHERLAND ...\n4. LA GLANDE THYROÏDE : UN MODELE POUR L'ETUDE DU META\nBOLISME DES NUCLEOTIDES CYCLIQUES ...\n5. LES RECEPTEURS ^-ADRENERGIQUES ...\nA. Généralités ...\nB. Notation stéréochimique ...\nC. Classification des récepteurs adrénergiques ...\nD. Relation entre les récepteurs adrénergiques et\nla formation de cAMP ...\n6. LES RECEPTEURS ET LA REPONSE IMMUNITAIRE...\nB. Bases cellulaires de la réponse immunitaire ...\nC. Différenciation des lymphocytes T ...\nD. Modifications adrénergiques de la fonction des\nlymphocytes T immunocompétents...\nE. Modulation adrénergique de la réponse humorale ...\nF. Modulation adrénergique de la réaction allergique immédiate ...\n7. L'ADENYLATE CYCLASE ...\nB. Dimension moléculaire et caractéristique thermodyna\nmique de la réaction...\nC. Effets du Fluorure ...\n8. BUT et STRATEGIE ...\n8 9 9 1 1 13 14 15 15 15 19 22 24 25 26 26 26 27 28\n1. LES RECEPTEURS ET LEUR FONCTION\nLa faculté que possède un grand nombre de cellules à répondre de manière très sélective à des signaux chimiques présents à l'état de trace est une donnée initiale de base de l'étude de la pharmaco\nL'hypothèse de l'existence au niveau de la cellule de récep\nteurs spécifiques à ces signaux a été émise à partir de l'observation de trois caractéristiques : la première est la sensibilité élevée de la cellule à ces signaux. Des effets produits à des concentrations de 10 M en signaux sont courants et des concentrations aussi faibles -9 que 10 ^ sont dans certains cas suffisantes pour induire une réponse.\nLa deuxième caractéristique est la spécificité chimique dont l'exemple le plus frappant est la stéréospécificité. Ainsi la sensibilité à 1'isoprotérénol de la cellule de muscle est différente de deux ordres de grandeur selon l'isomère optique utilisé. La troisième est la spécificité cellulaire. L'adrénaline, par exemple, a un effet très marqué sur le muscle cardiaque tandis qu'au niveau du muscle strié squelettique l'effet est beaucoup plus faible.\nC'est la contraction des muscles volontaires provoquée par l'addition de nicotine en des endroits précis du muscle et l'antago\nnisme de cet effet par le curare observés par Langley dès 1905 qui conduisit celui-ci à suggérer l'existence de récepteurs spécifiques à la nicotine sur le muscle volontaire. Le concept de récepteur\ndésignait originellement le composant cellulaire impliqué dans l'action initiale d'une drogue. Un récepteur est donc doué de deux propriétés fondamentales : 1. reconnaître et se lier spécifiquement à une drogue;\n2. transmettre un signal qui est le point de la réponse cellulaire à la drogue.\nDonc diverses macromolécules qui sont capables de lier spécifiquement une drogue mais qui ne produisent aucun effet, comme les protéines transporteuses du plasma, ne peuvent être considérées comme des récep\nteurs, et seront plutôt appelées accepteurs.\nLes drogues ne sont pas les seules substances à exercer leurs effets par l'intermédiaire d'une interaction avec des récepteurs spé\ncifiques ; il en va de même pour tous les messagers et cofacteurs, intra- et extra- cellulaires, qui contrôlent l'activité des cellules : hormones^neurOtransmetteurs, nucléotides cycliques,etc... Donc, le concept de récepteur qui, historiquement, est d'origine pharmacolo\ngique, s'est étendu à la physiologie et en particulier à l'endocri\nnologie et à la neurochimie.\nLes études pharmacologiques classiques définissaient les récep\nteurs de manière indirecte à partir d'une action terminale de la drogue en reproduisant cette action par des agonistes ou en l'inhi\nbant par des antagonistes. Ce type d'étude permit de différencier les récepteurs nicotinique et muscarinique de l'acétylcholine et les récepteurs oL et jj) des catécholamines (Ahlquist, 1948). Ces der\nnières années, l'étude des récepteurs a progressé grâce au développe\nment de méthodes radioisotopiques permettant la mesure directe de la liaison d'une drogue, hormone ou neurotransmetteur, à ses récepteurs et à la possibilité de détecter des effets primaires, c'est-à-dire l'effet le plus proche de l'interaction avec le récepteur et dont découlent tous les autres. L'activation de l'adénylate cyclase par plusieurs hormones constitue jusqu'à ce jour et dans de nombreux tissus la première réponse biologique mesurable.\nDès l'introduction du concept de récepteur, il a été tenté de définir les lois mathématiques qui régissent d'un point de vue quantitatif l'action des drogues. Ces lois, dérivées de la loi d'action des masses et de la thermodynamique classique, ont été progressivement compliquées de manière à rendre compte des données\nexpérimentales. L'interaction d'une drogue avec son récepteur «\nn'est pas différente en termes mathématiques de l'équilibre acide- base ou de la catalyse enzymatique.\n2. DEFINITION DU RECEPTEUR\nLa définition du récepteur s'applique à une molécule (ou com\nplexe moléculaire) qui est capable de reconnaître et d'interagir sélectivement avec une hormone ou un neurotransmetteur et qui suite à cette interaction cause un signal responsable de l'initiation d'une chaine de réaction aboutissant à la réponse biologique.\n3. LE MODELE DU MECANISME D'ACTION HORMONALE PROPOSE PAR SUTHERLAND.\nC'est dans les années 50 que Sutherland, étudiant sur le foie l'effet byperglycémique des catécholamines, a découvert et identifié un facteur résistant à la chaleur et responsable de l'acti\nvation des phosphorylases dans l'homogénat d'hépatocytes : le cyclique AMP.\nCette découverte est le fruit d'une recherche où la question essentielle a été de savoir comment agit une hormone. Cette contri\nbution majeure à la compréhension du mécanisme d'action des hormones a permis à Sutherland de proposer un modèle général du mode d'action hormonal schématisé dans la fig. 1.\nFig. 1. Modèle de Sutherland\nCe modèle postule que l'hormone interagit avec un récepteur spécifique situé sur la surface externe de la membrane. Cette interaction confère au récepteur une structure lui permettant d'activer l'adénylate cyclase situé sur la surface interne de la membrane plasmique et d'augnj&iiterr amsi la concentration intracellu\nlaire de cAMP. Le cAMP active différentes enzymes et permet ainsi d'exprimer plus ou moins directement l'effet hormonal.\nPour qu'un tel modèle rende compte du mode d'action d'une hormone quatre critères doivent être satisfaits.\n1. L'hormone doit augmenter le niveau de cAMP dans la cellule cible.\n2. L'hormone doit activer l'adénylate cyclase en système acellulaire (homogénat ou fraction particulaire).\n3. Les agents qui augmentent le taux de cAMP intracellulaire doivent reproduire l'effet de l'hormone.\n4. Les agents qui diminuent le taux de cAMP des cellules doivent inhiber l'effet de l'hormone.\n4. LA GLANDE THYROÏDE : UN MODELE POUR L'ETUDE DU METABOLISME DES NUCLEOTIDES CYCLIQUES.\nLa thyroïde est une glande endocrine structurée en follicule.\nS'a fonction principale est de synthétiser les hormones thyroïdiennes, la thyroxine et la triiodothyronine. L'iodure est le substrat indis\npensable à cette synthèse. L'ion est capté par un mécanisme actif localisé à la membrane basale des cellules folliculaires et est trans\nporté à travers le cytoplasme. Au voisinage de la membrane cellu\nlaire apicale, là où se localisent les peroxydases, l'iodure est oxydé et fixé sur des résidus tyrosines d'une glycoprotéine spécifique : la thyroglobuline. Cette protéine est accumulée dans un compartiment extracellulaire clos représenté par la lumière des follicules thyroï\ndiens. La thyroglobuline exerce au moins deux fonctions : c'est une forme de réserve de l'iode ainsi que le substrat nécessaire à la bio\nsynthèse des hormones thyroïdiennes. Deux iodotyrosines d'une même\nmolécule de thyroglobuline sont susceptibles de se coupler par un mécanisme oxydatif nécessitant une peroxydase. Les tri et tetra- iodothyronines ainsi formées restent partie intégrante de la thyro\nglobuline, En fonction des besoins de l'organisme, la thyroglobuline est phagocytée par la cellule thyroïdienne qui l'hydrolyse complè\ntement grâce à ses lysosomes ce qui permet la libération des hor\nmones thyroïdiennes. L'ensemble de ces mécanismes qui conduisent à la synthèse de thyroxine et de triiodothyronine est soumis au contrôle hypophysaire par l'intermédiaire de la thyrotropine (TSH).\nCette hormone contrôle l'activité thyroïdienne en modulant le taux intracellulaire du cAMP. Il est aujourd'hui accepté que la plupart des effets rapides de la TSH sur la thyroïde soient médiés par le cAMP (Dumont, 1971; Field, 1971). Les critères classiques proposés par Sutherland qui valident son hypothèse sont aujourd'hui satis\n1) La TSH active l'adénylate cyclase en système acellulaire;\n2) La TSH module le taux de cAMP dans les cellules intactes;\n3) Les effets de la TSH sur la thyroïde tels, que la sécrétion et i' iodation de la thyroglobuline peuvent être reproduits par le cAMP exogène et son analogue le Bt^-cAMP. De même les effets de la TSH peuvent être reproduits par des agents qui augmentent le taux de cAMP dans la thyroïde tels que la PGEj et la choléra-\n4) Les effets de faibles concentrations en TSH sont potentiés par les méthylxanthines qui inhibent les phosphodiestérases cAMP dépendantes.\nles terminaisons nerveuses du système nerveux central et périphé\nrique. La sécrétion de norépinéphrine des nerfs adrénergiques provoque la modification d'une variété de processus cellulaires.\nLes modifications postsynaptiques résultant de la sécrétion de la toxine.\n5. LES RECEPTEURS -ADRENERGIQUES\nLa norépinéphrine est synthétisée et stockée dans\nnorépinéphrine sont le résultat de l'interaction entre l'hormone et ses récepteurs spécifiques. L'interaction de la norépinéphrine avec ses récepteurs spécifiques est la première étape d'une série compliquée et incomplètement comprise de réactions. La configuration moléculaire des récepteurs adrénergiques détermine la spécificité structurelle et l'activité des Unités et des antagonistes. Cette activité n'est pas seulement structurellement spécifique, elle est de plus stéréosélective.\nCette propriété a été mise à profit dans de nombreux cas tant en phar\nmacologie qu'en enzymologie et de nombreuses informations quant à la géométrie du site de liaison des macromolécules réceptrices (par exemple une enzyme) ont été obtenues par l'utilisation des isomères optiques et des analogues. Cette approche indirecte est la seule possible tant que la structure tridimensionnelle d'un récepteur n'a pu être élucidée.\nIl y a de nombreuses analogies entre l'interaction d'une hormone avec ses récepteurs et d'une enzyme ayec son substrat. Il n'est donc pas étonnant que l'utilisation de stéréoisomères de différents substrats de 1'o(-chymotrypsine a permis de définir le site actif de l'enzyme\nLa propriété de stéréospécificité a été mise en évidence dès la découverte de la présence de 1'épinéphrine dans la médullaire surré\nnalienne. Cushny (1908) testa l'effet sur la tension sanguine de la (-) épinéphrine naturelle et du mélange racémique (^) de 1 ' épinéphrine sur des chiens anesthésiés. La (^) épinéphrine était deux fois moins active que la (-) épinéphrine. PLus tard Cushny (1926) compara l'effet sur la pression sanguine des deux stéréoisomères de 1 ' épinéphrine et trouva une activité 12 fois supérieure pour l'isomère (-) comparée à l'isomère (+). En 1948, Euler montra que le neurotransmetteur prin\ncipal du système nerveux orthosympathique était la (-) norépinéphrine.\nC'est vers les années 1955 que la majorité des catécholamines et autres amines non phénoliques ont été découvertes ainsi que leur configuration et leurs effets pharmacologiques (Pratesi, 1963) et depuis les cinq dernières années, l'utilisation des stéréoisomères et des analogues a regagné un grand intérêt comme outil dans l'étude du mécanisme adré-\nadrénergique et de son récepteur et permet de vérifier lors de l'étude de la liaison d'une drogue adrénergique un des critères les plus impor\ntants, celui de la stéréospécificité. Nous reviendrons plus en détail sur ce point lors de l'étude des critères d'identification des récep\nteurs fb (cf chap. V).\nB. Notation stéréochimique\nUne molécule chirale est une molécule qui est constituée d'énantiomères. La terminologie (+) et (-) où d et\nI pour chacun des énantiomères a été utilisée pour spécifier le sens de la rotation de la lumière polarisée traversant une cellule optique contenant un des énantiomères. Ainsi une molécule faisant tourner le plan de polarisation vers la droite est dite d ( dextrorotatoire) et une molécule faisant tourner le plan de rotation vers la gauche est dite 1 (levorotatoire). La configuration absolue est définie selon l'arrangement relatif dans l'espace d'un atome ou groupe d'atomes par rapport à un carbone asymétrique ou une partie rigide de la molécule.\nLa configuration absolue d'antipodes optiques peut être représentée par la méthode de Fischer-Rosanoff (Alworth, 1972) ou D et L.\nCe système utilise comme référence arbitraire la glycéraldéhyde dextro\nrotatoire qui est désignée par D pour définir sa configuration absolue.\nII n'y a pas de relation simple entre le signe de rotation et la dési\ngnation de la configuration. La nomenclature de Fischer-Rosanoff est encore utilisée couramment pour les acides aminés et les sucres. Mais cette méthode faisant appel à une référence arbitraire a été peu à peu abandonnée pour les autres classes de molécules et c'est l'utilisation de la règle des séquences de Cahn-Ingold-Prelog, plus rationnelle qui est de plus en plus utilisée (Cahn, 1964; Cahn, Ingold, Prelog, 1956).\nLes groupes fonctionnels (a,b,c,d) sont affectés d'une priorité et le groupement qui a la priorité la plus basse (d) est orienté loin de l'observateur (cf fig. 2). Ensuite le sens de la rotation est défini par le sens de l'ordre décroissant des priorités.\nSi ce mouvement génère une rotation dans le sens des aiguilles d'une montre, alors la configuration est définie par la lettre R ou au contraire lorsque le sens de la rotation est opposé à celui des aiguilles d'une montre la configuration est définie par la lettre S.\nLa priorité la plus élevée est donnée au groupement fonctionnel qui a le nombre atomique le plus élevé. La fig. 3 illustre les deux énantiomères de la norépinéphrine.\n(R)-(-)-Norépinéphrine (S)-(+)-Norépinéphrine Fig. 3\nC. Classification des récepteurs adrénergiques.\nL'existence de plusieurs types de récepteurs adrénergiques a été suggérée pour la première fois par les résultats de Dale (1906).\nIl démontra que certains des effets de 1'épinéphrine et de la stimu\nlation du nerf sympathique étaient bloqués par les alcaloïdes d'ergot alors que d'autres réponses n'étaient pas affectées. En 1948, Ahlquist divisa les réponses adrénergiques en deux classes basées sur les répon\nses à une série de catécholamines. La première classe de récepteurs dénommée alpha (oC ) interagit avec les agonistes suivants :\népinéphrine norépinéphrine alpha-méthyl-norépinéphrine\n> alpha-méthyl-épinéphrine isoprotérénol selon une potentialité décroissante. La stimulation de ces récepteurs provoque la contraction de la membrane nictitante, la vasoconstriction et la contraction du muscle lisse de l'utérus et de l'urètre. Le second type de récepteurs\nadrénergiques appelé beta ( y?) ), répondent aux agonistes avec la spé\ncificité décroissante suivante : isoprotérénol 2!^ épinéphrine alpha- méthyl-épinéphrine alpha-méthyl-norépinéphrine norépinéphrine.\nL'interaction avec ces récepteurs conduit à une chronotropie et une inotropie cardiaque positive à la vasodilatation et à la relaxation du muscle utérin. L'utilisation de techniques pharmacologiques classiques\na étendu cette classification à d'autres effets médiés par les catécho\nlamines. Les réponses caractéristiques faisant intervenir les récep\nteurs IX et^ont été définies de manière plus détaillée grâce à l'uti\nlisation d'antagonistes spécifiques (Furchgott, 1967). Lands et coll.\n(1967) montrèrent que le groupe des récepteurs /b devait être divisé en deux sous classes ^ j et Ainsi les muscles cardiaques possé\nderaient des récepteurs j et les muscles lisses bronchiques des récepteurs ^2' niveau des récepteurs 1 'épinéphrine et la norépinéphrine sont équipotentes et l'effet des agonistes est bloqué préférentiellement par le practolol (Dunlop et Shanks, 1968). Au ni\nveau des récepteurs ^2 1'épinéphrine a une potentialité supérieure à la norépinéphrine pour stimuler un effet qui peut être inhibé spéci\nfiquement par la butoxamine (Levy, 1966). D'autres antagonistes et\nnotamment le propranolol, l'alprénolol et le pindolol ont la même affi\nnité pour les récepteurs j et jb^ (Moore et O'Donnell, 1970).\nIl semble que l'interconversion entre ^ j et 2 soit possible, un cas dans la littérature le mentionne (Lacombe et coll., 1976).\nD. Relation entre les récepteurs adrénergiques et la formation de cAMP.\nSutherland (1965) fut le premier à montrer que le cAMP pour\nrait servir de second messager aux catécholamines et que l'interaction entre les agonistes et les récepteurs Jt) activait l'adénylate cyclase.\nSauf dans le système nerveux central, la stimulation des récepteurs 0(\nn'augmente pas le taux intracellulaire de cAMP (Daly, 1975).\nLES RECEPTEURS ET LA REPONSE IMMUNITAIRE\nIl est actuellement bien établi que les systèmes nerveux et endocrinien peuvent moduler la réponse immunitaire .\nDes études récentes ont démontré que les hormones et les neurotrans\nmetteurs influencent l'activité des cellules immunocompétentes par l'intermédiaire de récepteurs spécifiques situés sur celles-ci (revue cf Hadden et coll., 197 7).\nC'est ainsi que l'on a décrit au niveau de la membrane cytoplasmique des lymphocytes l'existence de récepteurs pour des hormones poly\npeptidiques (insuline, hormone de croissance, calcitonine) des neuro\ntransmetteurs (acétylcholine, catécholamine) et pour l'histamine.\nSuite à l'interaction du récepteur membranaire et de son ligand, deux types de signaux peuvent être transmis au l3nnphocyte : un signal activateur dont le messager est le cGMP et un signal inhi\nbiteur ayant le cAMP pour messager. Toute modification du rapport entre le contenu lymphocytaire de ces deux nucléotides cycliques résultera en une modification parallèle de l'activité de la cellule soit dans le sens d'une inhibition\ncGMP) ou d'une facilitation\nB. Bases cellulaires de la réponse immunitaire.\nLa réponse immunitaire est le résultat d'interactions cellulaire multiples, positives et négatives entre différentes sous populations de lymphocytes et entre les lymphocytes et les macrophages (figure 4).\nLa réponse immunitaire se présente classiquement sous un double aspect humorale (fabrication d'anticorps) et cellulaire (immunité cellulaire).\nFigure 4. Schéma de la réponse immune.\nLes anticorps sont secrétés par les plasmatocytes provenant de la différenciation des lymphocytes B précurseurs. Ceux-ci expriment à leur surface des immunoglobulines (Ig) qui constituent les récepteurs à l'antigêne et qui sont identiques aux Ig secrété® par les plasmato\ncytes. Cinq classes d'Ig sont actuellement reconnues chez les mammi\nfères et chez l'homme en particulier : les Ig G, A, M, D et E. Elles diffèrent entre elles par leurs propriétés biologiques et physico\nL'immunité cellulaire est due à l'intervention de lymphocytes T, déri\nvés du thymus et distincts des précédents. On distingue deux types de réactions cellulaires médiées par des sous-populations distinctes de Ijnnphocytes T effecteurs (fig. 5).\na) la réaction cytotoxique par laquelle le lymphocyte T cytotoxique détruit une cellule cible exprimant à sa surface un antigène auquel la cellule T est spécifiquement immunisée. Ce mécanisme intervient dans la desctruction de cellules infectées par des\nyirus > de cellules cancérigènes ou de cellules étrangères (greffes) .\nb) la réaction d'hypersensibilité retardée due à la libération par des lymphocytes T (distincts des précédents) de médiateurs chimiques suite au contact avec l'antigène auquel ces cellules sont spécifi\nquement sensibilisées. Ces médiateurs sont appelés lymphokines et agissent essentiellement en stimulant les différentes fonctions des macrophages dont ils facilitent le recrutement local. La réaction cutanée à la tuberculine constitue un exemple classique de cette réaction, qui intervient dans la protection de l'organisme contre des agents infectieux ayant une phase intracellulaire facultative ou obligatoire de leur cycle (virus, mycobactéries ...).\nSCHEMA DE L ' IMMUNITE CELLULAIRE\nInhibiteurs cytotoxiques (prolifé ration. suppression).\nActivateurs (mitoses des lympho. DES macrophages. CSF. etc)\nInflammatoires (ag. chemotactiques DES macrophages. DES NEUTROPHILES. DES ÉOSI\nNOPHILES. HIF. etc)\nCes deux types de lymphocytes T sont appelés effecteurs car ils constituent les facteurs directs de l'immunité cellulaire. En\nplus des lymphocytes T effecteurs, on reconnaît l'existence des cellules T régulatrices constituées en fait de populations distinctes de lympho\ncytes suppresseurs (TS) et facilitants ou helper (TF). Ces cellules régulatrices conditionnent l'activation des T effecteurs à partir de leurs précurseurs inactifs et la transformation des B en plasmatocytes.\nLe contrôle de la sécrétion d'anticorps par ces lymphocytes T régulateurs est non seulement quantitatif mais aussi qualitatif; les lymphocytes T contrôlent donc non seulement la quantité d'anticorps produits mais aussi leur qualité (affinité, type d'Ig). Les macrophages jouent un rôle essentiel dans l'induction et l'expression (stade effecteur)\nde la réponse immunitaire. Ils induisent les lymphocytes T facilitants e leur présentant l'antigène de manière adéquate; en l'absence de macro\nphages, il est impossible d'induire in vitro une réponse cellulaire ou hormonale de bonne qualité. Bien que non immunologiquement spéci\nfique (absence de récepteurs à l'antigène) le macrophage est le prin\ncipal effecteur de l'immunité. En effet , aussi bien les anticorps que les lymphocytes T ont pour fonction de faciliter, d'amplifier et de focaliser l'action des macrophages sur un antigène donné. Les différentes sous-populations lymphocytaires sont morphologiquement identiques. Il est cependant possible de les identifier et même de les isoler. Elles ont en effet des marqueurs membranaires qui leur sont spécifiques. Les lymphocytes T et B ont une origine\ncommune, située au niveau de la moelle osseuse sous la forme d'une cellule lymphoïde primitive. Celle-ci se différencie in situ en\ncellules pré-B et pré-T. Les premières vont continuer leur maturation au niveau de la moelle osseuse alors que les secondes vont migrer vers le thymus où elles vont acquérir les marqueurs et les propriétés fonctionnelles des lymphocytes T. La maturation intrathymique est un processus complexe résultant à la fois du contact des lymphocytes précurseurs avec l'épithélium thymique et de l'action d'hormones thy\nmiques sécrétées par celui-ci. Il en résulte la formation et la\nlibération vers les tissus lymphoïdes périphériques de plusieurs lignées de lymphocytes T différenciés.\nEn plus des lymphocytes et des macrophages, la réponse immunitaire fait intervenir les polynucléaires, les mastocytes et\nles plaquettes. Les mastocytes et les polynucléaires basophiles sont le cellules effectrices de la réaction allergique de type réaginique\nou anaphylactique (figure 6). En effet ces cellules fixent à leur surface,par l'intermédiaire de récepteurs spécifiques,les réagines (IgE). Au contact de l'antigène liant deux molécules voisines d'Ige, la cellule est activée et libère les médiateurs chimiques de la réaction allergique (histamine, bradykinine, fac\nteur chémotactique pour les éosinophiles etc...).\nLe système neuro-endocrinien est susceptible de contrôler non seulement la fonction des lymphocytes T et B immunocompétents mais encore d'interférer avec leur maturation et leur différen\nciation au départ des éléments précurseurs.\nG. Différenciation des lymphocytes T\nL'incubation in vitro de cellules immatures, isolées de la moelle osseuse > dépourvues de marqueurs T ou B et fonctionnellement\nincompétentes, en présence d'hormone thymique induit la différen\nciation des cellules pré-T. Suite à cette incubation, on voit\napparaître des cellules présentant des marqueurs membranaires propres aux lymphocytes T.Le processus implique la synthèse de mRNA mais ne nécessite pas de réplication du DNA. Scheid et coll. (1973) ont démontré que cette maturation était accompagnée d'une\nMASTOCYTE ou BASOPHILE\nGranules contenant les médiateurs\nSécrétion des médiateurs\nS-RSA (slow reacting substance of anaphylaxis )\nFigure 6. Schéma de la réaction allergique.\naugmentation de cAMP intracellulaire; de plus, tout agent pharma\ncologique capable d'augmenter ce taux de cAMP se comportait comme l'hormone thymique. C'est le cas du dibutyryl cAMP, de l'isoproté- rénol, de la théophylline et des PGE. Des concentrations faibles d'isoprotérénol (10 ^M, 10 ^M) sont suffisantes pour induire ce processus qui de plus est spécifiquement bloqué par l'alprénolol*- Ceci suggère la présence de récepteurs adrénergiques à la surface des cellules pré-T et rend plausible la notion d'un contrôle adré\nnergique in vivo de la maturation des lymphocytes T. Il est de plus important de noter que certains facteurs thymiques, capables d'in\nduire la différenciation des lymphocytes T sont antagonisés par le propranolol (Goldstein, G. et coll., 1976) ce qui suggère que les récepteurs adrénergiques sont proches ou identiques axix récep\nteurs de certains polypeptides thymiques biologiquement actifs.\nIl est probable mais non démontré qu'un contrôle adrénergique puisse également intervenir au niveau de la maturation des lymphocytes B à partir de leurs précurseurs médullaires.\nAu cours de leur différenciation intrathymique, les lympho\ncytes ont une réponse progressivement décroissante aux agents béta agonistes alors que leur réponse à l'histamine augmente (Bach, 1975;\nRoszkowski et coll., 1977). C'est ainsi que les thymocytes corticaux, détruits par la cortisone et immunologiquement peu compétents sont plus sensibles à 1'isoprotérénol que les thymocytes médullaires, cortico-résistants et immunologiquement compétents. De plus, les Ijnnphocytes T périphériques sont dans l'ensemble moins bon répondeurs aux stimuli adrénergiques que les thymocytes. Notons que dans toutes ces expériences la sensibilité lymphocytaire à l'isoprotérénol a été mesurée en déterminant les modifications intracellulaires du taux de cAMP induites par cet agoniste, utilisé à de faibles concentrations\n(10 10 ^M). De plus, les auteurs ont démontré la stéréospécificité de la réaction et sa réversibilité en présence d'antagonistes spéci\nfiques tels que le propranolol. Si l'on admet que la sensibilité du\nlymphocyte à 1'isoprotérénol est conditionnée uniquement par le nombre de récepteurs adrénergiques, les données rapportées ci-dessus suggèrent une réduction progressive du nombre de ces récepteurs au cours de\nla matura,tion des lymphocytes T.\nD. Modifications adrénergiques de la fonction des lymphocytes T immunocompétents.\nLa prolifération des lymphocytes T est un phénomène constant et indispensable, aussi bien in vitro qu'in vivo, pour l'induction d'une réponse primaire ou secondaire. Il est bien établi que cette réponse proliférative est induite par un signal délivré au niveau de la membrane lymphocytaire. Des données récentes indiquent que les nucléotides cycliques, cAMP et cGMP sont étroitement associés à ce\nsignal mitogénique. Peu de temps après l'interaction du stimulus lympho\ncytaire (antigène ou mitogène) avec son récepteur membranaire on observe une élévation de la synthèse de ces deux nucléotides. L'élévation du taux de cAMP est cependant de brève durée et est suivie d'une réduction progressive jusqu'à des valeurs inférieures à celles de départ.\nA l'inverse, les taux de cGMP restent élevés durant la phase prolifé- rative. Toute augmentation du rapport cÂMP s'accompagne d'une diminu\ntion de la prolifération lymphocytaire. Les beta agonistes, le PGE, la choiera toxine, l'histamine ont ainsi un effet généralement inhibi\nteur sur la prolifération lymphocytaire induite in vitro par des mito\ngènes ou des antigènes et in vivo par des antigènes. Il faut cependant noter que prolifération lymphocytaire induite in vitro et in vivo est un phénomène complexe résultant de l'interaction de plusieurs lignées distinctes de lymphocytes et de macrophages. De plus, il a été établi que les différentes populations de lymphocytes T périphériques sont différemment sensibles à l'action de 1'isoprotérénol ou de l'histamine.\nc'est ainsi que chez l'homme les l5nnphocytes T isolés du sang sont plus sensibles que ceux provenant des amygdales ou des végétations adénoïdes (Niaudet et coll., 1976). De même chez la souris, les lymphocytes T spléniques diffèrent de leurs homologues isolés des ganglions lymphatiques (Bach, 1975). Il faut ajouter également que la sensibilité d'un lymphocyte aux stimuli adrénergiques est proba\nblement fonction de son état d'activation. Ce concept a été clairement établi en ce qui concerne la sensibilité des lymphocytes T cytotoxiques à l'histamine. Plaut et coll. (1975) ont en effet démontré que l'inhi\nbition de l'activité cytotoxique des l3miphocytes T au cours de l'in\nduction d'une réponse allergique atteignait un maximum de 50 % 16 jours après l'injection de l'antigène tandis qu'au lOème jour l'inhi\nbition n'était que de 10 Z. Ces observations sont à rapprocher de travaux récents indiquant que les récepteurs à l'insuline ne sont\nprésents que sur les lymphocytes T et B activés par un antigène ou un mitogène, alors qu'ils sont absents des cellules non activement engagées dans une réponse immunitaire (Schwartz et coll., 1975;\nHelderman et Strom, 1978). L'ensemble des données de la littérature indique que les agonistes beta adrénergiques ont un effet inhibiteur sur l'induction l'expression des deux types de réactions d'immunité cellulaire. Il a été démontré in vivo et in vitro que l'isoproté- rénol inhibait non seulement l'induction de cellules T cytotoxiques\n(à partir de leurs précurseurs) mais encore l'activité de ces cellules T cytotoxiques (Strom et coll., 1973). Il en est probablement de même en ce qui concerne la sécrétion de l3nnphokines par les lymphocytes T responsables des réactions d'hypersensibilité retardée (Pick, 1977).\nLes beta stimulants sont de plus capables d'inhiber l'activation des macrophages par les l3miphokines (Pick, 1977). Les polynucléaires neutrophiles considérés comme cellules accessoires de l'immunité sont également soumis au contrôle béta adrénergique. Celui-ci inhibe la sécrétion d'enzymes lysosomiaux (par ex. la glucoronidase), la phagocytose, la mobilité et la cytotoxicité de ces cellules vis-à- vis d'une cellule cible recouverte d'anticorps.\nEn conclusion de cette revue de la littérature, il est permis de dire que les p> stimulants inhibent les différents types de cellules effectrices de l'immunité cellulaire.\nE, Modulation adrénergique de la réponse humorale.\nDes expériences réalisées in vitro et in vivo indiquent que -3 certains agonistes utilisés à des concentrations très élevées (10 ,\n10 ^M) ont un effet inhibiteur sur la sécrétion d'anticorps tandis qu'à faibles doses ils ont un effet facilitant. Rappelons que la sécré\ntion d'anticorps au départ des lymphocytes B est contrôlée par les lymphocytes T régulateurs et les macrophages. Le contrôle adrénergique pourrait donc s'effectuer préférentiellement au niveau de l'une ou l'autre des sous-populations lymphocytaires concernées, La présence de récepteurs p) adrénergiques au niveau du lymphocyte ^ a été établi récemment par Roszkowski et coll, (1977) qui ont mis en évidence un\naccroissement de la concentration cellulaire en cAMP induit par l'isopro- térénol et non par l'histamine. La prolifération et la différenciation des lymphocytes B (isolés de la rate de souris) induites par l'endotoxine de bactéries gram négatif (LPS) est inhibée par les béta agonistes.\nNotons que le LPS induit la synthèse de cGMP au niveau du lymphocyte B et que le cŒP ajouté seul aux cultures de lymphocytes B purifiés est capable de les stimuler. L'effet facilitant des beta stimulants sur la sécrétion d'anticorps peut néanmoins s'observer dans certains conditions expérimentales in vivo et in vitro. Ces expériences indiquent en effet que les beta agonistes peuvent inactiver les cellules suppressives qui inhibent la synthèse d'anticorps (Teh et Paetkau, 1976).\nEn réstimé, les données actuelles de la littérature indiquent que les lymphocytes B sont sensibles à l'action inhibitrice des ^ago\nnistes mais que dans certaines conditions expérimentales les ago\nnistes facilitent la sécrétion d'anticorps en inhibant l'action des lymphocytes T suppresseurs.\nF. Modulation adrénergique de la réaction allergique immédiate.\nCette réaction résulte de la libération de médiateurs chimiques par le mastocyte tissulaire ou le basophile circulant. Elle est due à la présence d'anticorps IgE fixés à la surface de ces cellules et sera déclenchée lorsque l'antigène aura lié deux molécules voisines d'IgE. Dès 1968, Lichtenstein et Margolis ont démontré que l'épi- néphrine et la théophylline inhibaient la dégranulation des basophiles et la sécrétion d'histamine et d'autres médiateurs. Il a été démontré ultérieurement que cette inhibition était due à un accroissement de la concentration intracellulaire en cAMP et que des substances telles la PGEj, la choiera toxine, l'histamine, le dibutyryl-cAMP avaient les\nmêmes propriétés. D'autres expériences ont de plus établi que les agents favorisant un accroissement du taux de cGMP intracellulaire favorisaient le processus de dégranulation. Le concept actuel, dans ce domaine, est que la réactivité de ces cellules (quantité de médiateurs libérés pour un stimulus donné) est conditionné par le rapport cAMP.\nIn vivo au niveau de l'arbre respiratoire, les médiateurs libérés par le mastocyte provoquent une réaction inflammatoire locale, une con\ntraction des muscles lisses bronchiques et une stimulation des cellules glandulaires de la muqueuse. Les effets périphériques résultant de l'ac\ntion de ces médiateurs sont eux aussi inhibés par les sympathicomimétiques.\nCet effet inhibiteur est très important au niveau des muscles lisses bronchiques à tel point que les^ ^ stimulants constituent un des trai\ntements de base de l'asthme allergique. Un effet inhibiteur analogue a été rapporté au niveau de la peau et les stimulants ont été utilisés avec succès dans le traitement de certaines formes dallergies .\nLe système béta adrénergique est donc susceptible de moduler non seulement la libération des médiateurs de la réaction allergique mais en outre d'in\nhiber la réponse des organes cibles à ces médiateurs.\n7. L’ADENYLATE CYCLASE\nLa conversion enzymatique de l'adénosine triphosphate (ATP) en adénosine 3',5'-monophosphate (cAMP) (fig. 1) a été décrite pour la première fois en détail par Sutherland et Rail et leurs colla\nborateurs dans une série d'articles en 1962 (Revue cf. Perkins 1973).\nIl a été montré que l'enzyme, qu'ils ont appelée adenyl cyclase exigeait de l'ATP et du Mg^"*^, qu'elle était particulaire et existait\ndans les tissus d'au moins quatre phyla. Dans tous les cas testés, l'activité enzymatique était stimulée par le NaF et selon une spé\ncificité tissulaire par différentes hormones. Leur hypothèse (Sutherland and Rail, 1960; Rail and Sutherland, 1961; Sutherland, Oye and Butcher, 1965) selon laquelle l'action des hormones pouvait être médiée par le cAMP«résultat de l'activation de 1'adenyl cyclase, a été largement confirmée et développée par des milliers de travaux.\nNotre but ne sera pas de faire ici une revue exhaustive de la litté\nrature mais de nous limiter à quelques généralités afin de permettre une meilleure compréhension d'une enzyme qui est à ce jour loin d'avoir livré ses secrets.\nB. Dimension moléculaire et caractéristique thermodynamique de la réaction.\nL'adénylate cyclase non stimulable par des hormones c'est-à- dire l'unité catalytique du complexe récepteur enzyme semble être une molécule asymétrique. Neer (1974) qui solubilisa l'adénylate cyclase\nde rein de chien par le triton-XlOO ou le lubrol-PX trouva deux formes de l'enzyme avec comme poids moléculaire respectif 158.000 et 38000 daltons. Une adénylate cyclase naturellement soluble, insensible aux hormones, celle de Brevibacterium liquefaciens a été crystallisée (Takai et coll., 1974). L'enzyme diffère de celle des mammifères par le fait qu'elle n'est pas stimulable par le NaF mais est stimulable par le pyruvate. Cette enzyme peut être séparée par\nle sodium dodecyl sulphate en deux sous unités de 46.000 daltons.\nA partir des déterminations des enthalpies de formation de 5'AMP à partir de cAMP et de 5*AMP à partir d'ATP (Kurashina et coll., 1974; Greengard et coll., 1971; Hayaishi et coll., 1971) il a été établi que l'hydrolyse du lien phospho ester est associé à une variation d'énergie libre d'approximativement 12 kcal/mol. Donc le cAMP pourrait éventuellement servir de donneur énergétique, comme l'ATP.\nC. Effets du Fluorure.\nPresque tous les systèmes adénylate cyclase de cellules eukaryotes décrits jusqu'à aujourd'hui sont stimulables par le NaF.\nL'anion aurait un effet direct sur l'enzyme et n'agit pas par son effet inhibiteur des ATPases. Son mode d'action est mal connu. Ses effets décrits pour la première fois par Rail et Sutherland (1962) exigent du Mg^'*' (ou du Mn^"*^) et sont faiblement réversibles (Schramm and Naim, 1970). L'activation par le NaF est beaucoup moins dépen\ndante de l'environnement lipidique de la cyclase que celle induite par hormones. Ainsi toutes les adénylates cyclases à l'exception de\ncelle du cerveau (Johnson and Sutherland, 1973) sont encore stimu\nlables par le fluorure après solubilisation par des détergents (Levey, 1970; Neer, 1974).\nLe mécanisme d'action de la stimulation hormonale et du NaF ont des propriétés très différentes (Birnbaumer et al., 1969, 1971;\nManganiello et Vaughan, 1976).\nL'hypothèse selon laquelle le fluorure activait de manière maximale 1'adénylate cyclase a été adoptée pendant de nombreuses\nannées. Cependant en améliorant les milieux d'incubation utilisés pour mesurer la réponse hormonale, en particulier par l'addition de de certains nucléotides, il a été possible d'obtenir des activité supérieures à celles obtenues en présence de fluorure (Birnbaumer et coll., 1971). De plus, Rodbell et coll. (Rodbell et coll, 1974;\nRodbel 1975) ainsi que d'autres laboratoires (Spiegel et Aurbach, 1974; Lefkowitz, 1975) ont montré que la guanosine 5'-/^ , -imido -triphosphate (GMP-P(NH)P) l'analogue imidodiphosphate du GTP est capa\nble dans certaines conditions d'augmenter l'activité cyclasique à un niveau loin au-dessus de celui obtenu par le fluorure. Ceci suggère que l'activité de fluorure ne doit pas être considérée comme repré\nsentant l'activation maximale de l'unité catalytique comme précé\ndemment suggéré. En outre des travaxix récents (Sahyoun et coll., 1977) ont montré qu'il était possible de solubiliser un ou plusieurs composants responsables de la régulation par le fluorure et que ces entités moléculaires étaient physiquement distinctes de l'enzyme elle-même.\n8. BUT et STRATEGIE\nLe but général de notre travail a été d'étudier dans une perspective physiologique l'interaction d'un signal hormonal et de son tissu cible.\nNous avons d'abord choisi comme objet d'étude l'adénylate cyclase thyroïdienne. En effet, J_°) l'activation de l'adénylate cyclase par un signal extracellulaire est l'un des principaux mécanismes bio\nchimiques de modulation cellulaire, ce qui conférait à notre sujet un caractère très général.\n^°) la thyroïde est relativement homogène ce qui permettait d'espérer des résultats clairement interprétables.\n^“) des travaux antérieurs du laboratoire avaient montré que la plupart des effets de la TSH sur la thyroïde sont causés par le cAMP.\n^°) les travaux poursuivis par d'autres au laboratoire permettaient d'espérer que l'on pourrait mettre en relation les données obtenues en système acellulaire et les données obtenues sur cellules intactes.\nLes travaux menés sur l'adénylate cyclase thyroïdienne sont complémentaires à l'étude des récepteurs hormonaux eux-même.\nPour des raisons diverses (complexité de la TSH, manque d'analogues, ignorance de la structure, etc..) les résultats obtenus sur les récepteurs de la TSH risquaient d'être ambigus.\nLa nécessité méthodologique de posséder un ligand de choix (qui n'existe pas encore pour les récepteurs à la TSH) nous a poussé à choisir un modèle expérimental plus simple pour cette partie du travail : le récepteur adrénergique. L'état des connaissances de la pharmacologie des récepteurs ^adrénergiques et plus particu\nlièrement l'existence d'agonistes, d'isomères optiques et d'anta\ngonistes à haute affinité pouvant être radiomarqués ont orienté\nnotre choix vers ce système pour la caractérisation d'un récepteur par l'étude de la liaison de ligands. Notre but a été de mettre au point ue\nméthodologie permettant de caractériser et de quantifier les récep\nteurs Jh adrénergiques sur cellules intactes. L'étude sur cellules intactes a l'avantage d'être physiologique et offre un outil de qua\nlité qui devrait permettre de compléter et d'étendre l'étude des récepteurs faite essentiellement sur des préparations membranaires.\nNous avons abordé cette étude sur des cellules C 6 de gliome de rat en culture. Cette lignée est aisée à obtenir, à cultiver et\nà manipuler. De plus des études pharmacologiques avaient montré la présence sur ces cellules de récepteurs /^-adrénergiques (Gilman et Nirenberg, 1971) présentant la propriété très générale de désensibi\nlisation ou réfràctorité (de Vellis et Brooker, 1974). C'est sur cette lignée cellulaire que nous avons mis au point la méthodologie de la mesu\nre de la liaison de ligands et la caractérisation des récepteurs padréner giques sur cellules intactes. Nous avons ensuite applique cette\nméthodologie aux cellules de muscle squelettique en culture. Un tra\nvail récent (Atlas, Hanski et Levitzki, 1977) suggérait que ces cel\nlules auraient une densité extrêmement élevée de récepteurs ^ et pour\nraient être un système de choix pour aborder la purification et l'iso-\nlement du récepteur. Notre étude a infirmé cette hypothèse\n(cf chapitre V). Le succès de la méthodologie utilisée a suscité des collaborations avec d'autres groupes de recherche de notre Université (R. Kram, département de Biologie Moléculaire et G.\nDelespesse, département d'immunologie. Hôpital St Pierre).\nNous avons pu, en collaboration avec le premier groupe, carac\ntériser les récepteurs ^ des cellules érythroleucémiques de Friend.\nCette étude ne sera pas développée dans le présent travail.\nL'intérêt d'une extension en immunologie de nos travaux nous a conduit à étudier les récepteurs /4 sur les lymphocytes amygda- liens humains et sur leurs, sous populations cellulaires.\nDes études biochimiques et pharmacologiques ont démontré (cf Intro\nduction) l'existence de récepteurs yS adrénergiques sur les lympho\ncytes ainsi que le rôle que ceux-ci jouent dans la modulation de la réponse immune •\nLe système des leucocytes constitue , spécialement chez l'humain, un modèle facilement manipulable pour l'étude d'une pathologie\n(l'asthme) dans laquelle serait impliquée une altération au niveau des récepteursy^ adrénergiques (Szentivanyi, 1968). En effet, chez l'homme le lymphocyte et le parench3nne pulmonaire possèdent\nle même type 2^ récepteuradrénergique (Conolly et\nGreenacre, 1977). De plus la réponse physiologique et pharmacologique des muscles lisses bronchiques aux catécholamines joue un rôle clé dans l'asthme (Conolly et Greenacre, 1976). Il était donc raison\nnable de considérer le lymphocyte humain comme un bon modèle pour étudier une éventuelle altération chez les asthmatiques de leurs récepteurs adrénergiques.\n3i 1. PRELEVEMENT DES GLANDES ... 31 2. HOMOGENEISATION ... 31 3. INCUBATION DES TRANCHES ... 32 4. PREPARATIONS MEMBRANAIRES A PARTIR DES HOMOGENATS\nDE thyroïde ... 32 5. MESURE DE L'ACTIVITE DE L'ADENYLATE CYCLASE ... 33 6. SYNTHESE DE L'^^^I lODOHYDROXYBENZYLPINDOLOL, ^^^I-\n(+^)-HYP ... 33 7. MESURES DE LA LIAISON DE ^^^I-HYP SUR CELLULES\nINTACTES ... 34 8. DOSAGE DES ACTIVITES ENZYMATIQUES CHOISIES COMME\nMARQUEURS ... 38 9. DOSAGE DES PROTEINES ... 38 10. MILIEUX ... 38bis\n1. PRELEVEMENT DES GLANDES\nLes glandes thyroïdes ont été prélevées sur l'animal (généralement le cheval) dans les cinq minutes qui suivent l'abattage et transportées au laboratoire, à 0°C, dans du NaCl 9 %o. Les glandes ont été disséquées avec soin des parathyroïdes éventuelles, de leur capsule et des tissus conjonctif et adipeux avoisinants.\nDeux techniques ont été employées selon qu'il s'agissait de tranches de tissu après incubation ou de tissu frais utilisé à des fins préparatives. Dans le premier cas, les tranches de thyroïde étaient finement hachées au moyen d'un hachoir automatique (Mc Ilwain- Tissue Chopper). Dans le second, les glandes sont d'abord émincées au moyen de ciseaux avant d'être hachées manuellement au moyen d'un\nhachoir ménager multilame ("hache-vite"). Dans les deux cas, la bouillie tissulaire obtenue est homogénéisée dans un homogéneisateur teflon-\nverre dont le piston est animé d'un mouvement rotatif. De 5 à 10 passes sont habituellement réalisées. Cette méthode d'homogénéisation particulièrement peu agressive est la seule qui nous ait donné de bons résultats. Toutes ces opérations se déroulèrent toujours entre 0 et 4°C.\nLe milieu d'homogénéisation est constitué par 0.25M sucrose, 25 mM Tris-\n3. INCUBATION DES TRANCHES\nLes glandes nettoyées ont été coupées en tranches d'environ 0,5 mm d'épaisseur au moyen du microtome de Stadie-Riggs. Les tran\nches ont été incubées à 37°C sous carbogène (95 % O2, 5 % CO2) dans du tampon Krebs Ringer bicarbonate enrichi avec 8 mM glucose et 0,5 g/L d'albumine bovine sérique. La proportion entre le poids humide des tranches et le milieu d'incubation a été de 100 mg par 40 ml de milieu.\n4. PREPARATIONS MEMBRANAIRES A PARTIR DES HOMOGENATS DE THYROÏDE\nUn milieu aqueux à deux phases a été préparé préalablement de la manière suivante : à 190 ml de Dextran T 500 (22 % w/v) sont mélangés 100 ml de polyéthylène glycol 6000 (30 % w/v), 200 ml Tris- HCl 0.2 M pH 7.4 et 100 ml d'eau bidistillée. Le mélange est intime\nment mélangé, décanté dans une ampoule pendant 48 heures et les 2 phases séparées. La phase supérieure est enrichie en polyéthylène glycol\nalors que la phase inférieure l'est en dextran.\nL'homogénat de thyroïde filtré sur deux couches de gaze est centrifugé à 800 g pendant 5 minutes (Sorvall rotor HB4, 2200 rpm) Le culot est lavé deux fois avec le milieu d'homogénéisation et resus\npendu dans la phase supérieure du milieu à deux phases. Un volume égal (^ 15 ml) de la phase inférieure est ajouté et le tout intimement mélang Le mélange est centrifugé pendant 15 minutes à 12.000g\n(Sorvall rotor HB4,860Grpm)et la fraction enrichie en membranes plasma\ntiques est recueillie à l'interphase, resuspendue dans le milieu d'homo\ngénéisation et centrifugée à 10.000 g pendant 10 min. L'ensemble des opérations a été réalisé à 4°C. Cette préparation a pu être stockée pendant 15 jours dans l'azote liquide sans modification sensible de l'activité adénylate cyclase.\n5. MESURE DE L'ACTIVITE ADENYLATE CYCLASE.\nL'activité enzymatique est mesurée par la conversion de ATP-0(-P32 en cAMP^^. Le milieu réactionnel (200 ul)tamponné à pH 7.4 contient de\nl'ATP 3 mM, du MgCl2 5 mM, du cAMP 2 mM, du Tris-HCl 50 mM, de l'ATP-ov-P 2^Ci, 0.1 % albumine bovine sérique,de la créatine phosphate lOmM et 60 de créatine kinase de muscle de lapin.Les membranes 200^g de protéines)ou l'homogénat (+^ 1 mg protéines) sont incubés dans le milieu réactionnel pendant 20 min. à 30°C. Lorsque la mesure de l'activité enzymatique a été effectuée sur de l'homogénat de l'IBMX 1 mM a été ajouté au milieu réactionnel pour inhiber l'activité phosphodiestérase. A la fin de la réaction 100 ^1 d'une solution contenant de l'ATP 50 mM, du cAMP 20 mM et du cAMP H 20.000cpm sont ajoutés au milieu réactionnel qui est cen\ntrifugé à 5.000rpm pendant 15 minutes et le surnageant est ensuite passé sur colonne d'oxyde d'aluminium neutre. L'oxyde d'aluminium neutre (+^ 2 g) a été préalablement activé à 100°C pendant 3 heures et conditionné à sec dans des colonnes de verre. Le surnageant (+^ 300 ^1)\ndéposé au sommet de la colonne estélué par 6 ml de tampon tris HCl 50 mM pH 7.4. Les 3 premiers ml de l'éluat sont écartés et les 3 suivants collectés dans des fioles à scintillation auquel 15 ml de\n. . ^ 3 liquide de Bray sont ajoutés avant comptage de la radioactivité ( H et 32P) dans un compteur à scintillation liquide Packard.\n6. SYNTHESE DE L'’^^IODOHYDROXYBENZYLPINDOLOL, ^^^I-(+)-HYP\nL'iodure est oxydé par la Chloramine T et peut sous cette forme attaquer le noyau phénol du groupement hydroxybenzyl de la molécule de HYP. La réaction est arrêtée grâce à un réducteur^ le métabisulfite.\nLa réaction est effectuée dans un volume final de 45 ul pendant 3 min et à 21°C de la manière suivante . 5 ^1 de HYP (5.10 gf (10 mM)—9 dissout dans l'acétate d'éthyle sont déposés et évaporés sous azote dans le tube réactionnel en polypropylëne (Falcon). On y ajoute 30 ul\nde tampon phosphate pH 7.4 et 10 ul d' I (1 mCI) (Amersham 1850 Ci/mmole)\n—9 — ^\n(0,3 10 grd'I ). La réaction est initiée par l'ajoute de 5 pi de Chlo\nramine T 0,75 mM (3,8 10 gr). Apres 3 min. 500 jil de métabisulfite .-9 de soditim (1 mg/ml dans l'acide acétique 1 M) sont ajoutés. Les pro\nduits hydrophobes à savoir le HYP en excès, les HYP mono et diiodés sont ensuite extraits 4 fois par 500 ;ul d'acétate d'Ethyle contenant 10 M de phénol fraîchement distillé. Le volume d'extraction est réduit 10 à 20 fois par évaporation sous azote et ensuite déposé sur papier Whatmann 3 MM et soumis à une chromatographie dépendante .\npendant 12 heures, par du formiate d'ammonium O.IM pH 8.5 et du-phénol O.lmM.\nOvv . C\n1 O C , V 125\nL' ^I-HYP monoiodé (Rf = 0.07 >est ainsi séparé de l'iodure I (Rf=l' du HYP (Rf=0.6) et du HYP diiodé (5% de la radioactivité totale) (Rf=0).\nL'“■ I-HYP monoiodé est élué du chromatogramme par le mélange acé\ntate d'éthyle, diethylamine (98/2) et stocké à - 80°C en présence de 0.1 mM phénol à une concentration de lOO.OOOcpm par yl. Le rendement de la réaction est d'environ 30 %. L'ensemble des opérations est ef- fectué à l'abri de la lumière. L'activité spécifique de 1' I-HYP est125 celle de l'iode 125 utilisé (+ 2000 cpm/10 mole).-15\n7. MESURES DE LA LIAISON DE '^^I-HYP SUR CELLULES INTACTES.\na. Sur cellules en_culture adhérentes aux boites de Pétri.\nLes souches utilisées ont été les cellules C6 de gliome de rat et les cellules L8 de myoblaste de rat. Ces cellules ont été cultivées par H. Schmitt (actuellement Département de Biologie Molé\nculaire, U.L.B.) et fournies par D. Yaffe et l'Institut Weizmann (Israël).\nLes C6 sont cultivées sur des boites Falcon dans du milieu DMEM (Gibco) additionné de sérum de veau foetal ( Gibco) sous une atmos\nphère contenant 95 % d'air et 5 % CO^. Les cellules en phase expo\nnentielle de croissance sont détachées par trypsinisation et distri\nbuées en boite de Pétri de 3.5 cm de diamètre. La mesure de la liai\nson est effectuée 48h au moins après cette sous culture.\nChaque boite contenant environ 2.10 cëllules est lavée avec 5 ml de PBS (Phosphate Buffered Saline) et incubée 30 min. à 37°C avec 0.8 ml de\nPBS contenant différentes concentrations de I-HYP et 5.10 M de phentolamine. Après incubation le milieu est aspiré et les boites\nlavées 5 fois avec 2 ml de PBS à température ambiante, suivie par 6 lavages de 10 minutes chacun. Les cellules sont ensuite détachées des boites par 1 ml de trypsine 0,1 % dans un milieu isotonique D-1 et comptées au compteur gamma. La culture et la mesure de la liaison des cellules L8 de muscle sont identiques à celles des C6.\n^• Sur lymphocytes amygdaliens humains.\n1. Préparation des lymphocytes amygdaliens.\nCes préparations ont été effectuées par H. Collet ( dépar\ntement d’immunologie de l'Hôpital St Pierre).\n1.1. Lymphocytes totaux\nLes amygdales palatines de. patients généralement jeunes (8 à 16 ans) ont été prélevées stérilement et transportées dans du milieu RPMI 1640 à 0°C (Flow Laboratories, Rockville, Md) contenant de la pénicilline 1000 Unités/ml, de la strçtomycine 500 yug/ml,de l'amphoté- ricine B 1 ;ug/ml (Grand Island Biological Co., Grand Island, N.Y.) et\n1 pg/ml de gentamycine. Le tissu a été coupé et pressé pour en extraire le "jus" lymphocytaire. Les fragments de tissu et de cellules sont\nalors éliminés et la siispension de cellules est lavée 3 fois avec du Hank' (milieu isotonique et tamponé HBSS) sans calcium et magnésium\n(Grand Island Biologicals) puis resuspendues à la densité désirée (^ 50 10^ cellules/ml) dans du Hank's contenant du Mg"*^^ 10 mM et du tris HCl pH 7.4 50 mM. Les lymphocytes totaux amygdaliens sont constitués dans ces conditions de préparation par environ 42 % de lymphocytes T, 43 % de lymphocytes B et 15 % de cellules non identifiées (Delespesse et coll., 1976).\n1.2. Préparation des rosettes (E-RFC) de_globules rouges de^mou|gng 1SRBCi.\n0.2 ml de SRBC 2 % dans du HESS ont été mélangés à 0.2 ml de lymphocytes amygdaliens (4.10 cellules/ml et incubés à 37°C pen\ndant 15 min. (méthode de Jondal et coll., 1972). Le mélange a ensuite été centrifugé à 100 g pendant 3 min. à température ambiante et incubé à 0°C pendant 16 heures. Le culot est ensuite resuspendu délicatement par agitation mécanique et le pourcentage de lymphocytes ayant liés plus de trois érythrocytes est alors déterminé.\n1.3. Purification des lymphocytes T et B.\n1.3.1. Par la technique des rosettes : 1°) Lymphocytes B\nLes lymphocytes B sont obtenus en séparant les cellules ayant formé des rosettes des autres lymphocytes. Le culot de lymphocytes préparé en 1.2 est délicatement resuspendu et centri\nfugé (30 min., 450 g à 20°C) sur un coussin de Ficoll-Hypaque (d=l,077) . Les cellules à l'interphase (enrichies en B) sont récupérées et lavées deux fois dans du milieu Hank's. Le culot est conservé pour préparer les lymphocytes T. Dans ces conditions sur 100 cellules de l'interphase moins de 5 sont des lymphocytes T et environ 30 sont des cellules non identifiées, c'est-à-dire n'ayant ni IgG ni IgM ni IgA détectable sur leur surface et 60 % ont des Ig détectables.\n2°) Lymphocytes T -o-o-o-o-o-o-\nLes rosettes (lymphocytes + globules rouges) sépa\nrées par centrifugation sur Ficoll sont lavées 2 fois dans du HESS.\nLes globules rouges de mouton sont lysés en incubant les rosettes dans du NH^Cl (0,83 % pH 7.3) 5 min à 37°C et les lymphocytes sont récupérés par centrifugation (300 g 5 min). Dans ces conditions, la préparation contient en moyenne 81 % de lymphocytes T, moins de 5 % de cellules B et 1,6 % de monocytes (Pochet et coll., 1979).\nDownload (PDF - 174 Page - 12.98MB)\nOutline : LES RECEPTEURS ^-ADRENERGIQUES BUT et STRATEGIE


livres sur l impact de l extraction du charbon au nigeria\nLe charbon de bois et ses vertus insoupçonnées pour …\n2021-2-2 · Impact environnemental de l''extraction de gaz naturel. Le gaz est un des combustibles fossiles les moins polluants. Dans l''idéal, c''est à dire si sa combustion est parfaite, il n''émet que de l''eau et du dioxyde de carbone.\nLa voie de la reprise en Afrique subsaharienne ...\n2021-5-27 · Entre 2006 et 2010, les projets liés à l''extraction minière, au pétrole et à la transformation du charbon absorbaient plus de la moitié des 236 milliards de dollars d''annonces d''investissements dans de nouveaux projets en Afrique (figure 4.1).\n30 L''extraction du lignite a commencé en 1955 avec l''ouverture de trois carrières dans le bassin de Rovinari, au bord de la rivière Jiu, là où les couches de charbon étaient situées près de la surface. Les années qui suivent, les excavations commencent à grignoter l''espace collinaire situé à l''ouest du …\n2020-12-7 · La complexité de leur extraction, le coût de leur traitement et l''impact sur l''environnement limiteront la contribution de ces pétroles à l''approvisionnement du globe en liquides. ... trentaine d''années de production et laissent entrevoir la fin de l''exploitation du pétrole au . Jean-Pierre Favennec – L''avenir du …\nComment la Russie assoit sa puissance sur les gazoducs\n2019-12-23 · Entre la fin de 2019 et mi-2020, l''entrée en fonction de trois nouveaux grands gazoducs vers l''étranger doit renforcer la position dominante de la Russie sur le marché mondial du gaz. 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Le Guardian révèle aujourd''hui – 9 octobre 2019 – les 20 firmes de combustibles fossiles dont l''exploitation implacable des réserves mondiales de pétrole, de gaz et de charbon peut être directement liée à plus d''un tiers de toutes les émissions de gaz à effet de serre à l''ère moderne.. De nouvelles données provenant de chercheurs de ...\nMaroc: Extraction clandestine du charbon, abandon …\npre：bergetar layar peralatan untuk concasseur agregatnext：produit le moins cher concasseur à mâchoires de charbon concasseur à mâchoires de roche\nbibliographie sur les méthodes d extraction souterraine du charbon


International > États-Unis > Décès de Philip Roth, l’un des plus grands écrivains de l’Amérique contemporaine\nPar Brigitte DUSSEAU, Catherine TRIOMPHE, publié le 23 mai 2018 à 6h50, modifié le 23 mai 2018 à 12h43.\nSelon une amie de l’écrivain, Judith Thurman, citée par le New York Times, le décès serait dû à une défaillance cardiaque.\nSa plume exigeante et sa lucidité implacable sur la société américaine ont fait de lui une figure majeure de la littérature d’après-guerre. C’est le seul écrivain vivant dont l’oeuvre a été éditée par la Library of America. En France, il a commencé d’être édité dans la prestigieuse collection La Pléiade.\n– Frustration d’écrire


Accueil » Sénégal - Actualités » Marseille : Bamba Dieng poussé vers la sortie ?\nPublié le 11/05/2022 à 11:40 - Mis à jour le 11/05/2022 à 11:43\nAlors que Pablo Longoria a fait du recrutement de Mohamed Ali Cho l’une de ses priorités à l’OM, un départ de Bamba Dieng lors du prochain mercato estival n’est pas à exclure, selon Nicolas Filhol, journaliste pour Football Club de Marseille.\nEt pourtant l’attaquant Sénégalais avait affirmé clairement que rester dans le club phocéen est la meilleure option pour lui. Ce, malgré les rumeurs concernant un éventuel départ de Bamba Dieng en Premier League.\nSélectionné pour vous : Transfert – Marseille : Du nouveau dans le dossier Bamba Dieng\n« Cho a un profil intéressant. C’est cher mais dans le football moderne, si tu veux faire des plus-values, il faut tenter. Il a un profil où tu peux imaginer que s’il progresse, ça peut devenir intéressant, à son jeune âge, j’ai vu un match en début de saison où il a bougé des défenseurs de 30 ans, il courrait dans tous les sens, techniquement c’était ultra propre. Après tu as Bamba Dieng… ça veut dire que tu vas le vendre, c’est le même genre de profil », Nicolas Filhol pour qui un départ de Bamba Dieng ne serait pas surprenant.\nCe contenu a été publié dans Sénégal - Actualités, FootBall, SeneNews Sport, avec comme mot(s)-clé(s) Bamba Dieng, om. Vous pouvez le mettre en favoris avec ce permalien.


Voir les contributions - Midona-Hylia\nProfil de Midona-Hylia »\nMessages - Midona-Hylia\n« le: lundi 13 juillet 2015, 02:32:28 »\nZelda / [Théorie] La Mort de Link (.RIP.) dans Majora's Mask ???\n« le: mercredi 01 juillet 2015, 12:53:40 »\nEt puis, Nintendo a affirmé que Termina est juste un monde parallèle, Link n'est pas mort! Dès que je retrouve le lien, je vous mets la preuve.\n« le: vendredi 27 février 2015, 22:32:38 »\nJoyeux anniversaire Nile!\n« le: mercredi 25 février 2015, 17:25:47 »\nLittérature, Fictions / Fic de Xanto01\n« le: vendredi 20 février 2015, 18:38:00 »\nÇa c'est de la fic comme je les aimes! Ça commence par de l'action! J'ai hâte de lire la suite!\nCoin Artistique / les p'tits dessins de Gaellink\n« le: jeudi 19 février 2015, 17:37:02 »\nTiens, y a du40 dans ta BD! Sans lire qui c'était dans la BD, j'ai crue que c'était Link ! Sinon, tout est génial, comme d'habitude.\n« le: mardi 17 février 2015, 18:27:59 »\nBienvenue Leviarthrite! Passe de bons moments ici !\nZelda / Aide jeux Zelda\n« le: lundi 09 février 2015, 16:52:57 »\nIl faut que tu retapes le cristal rose qui t'a permis de faire monter le niveau de l'eau, si je me souviens bien. Comme ça, tu pourras aller l'activer. Sinon, tu pourras plonger mais bien plus tard dans le jeu.\nDiscussions Générales / Partagez vos rêves!\n« le: samedi 07 février 2015, 13:16:25 »\nJ'ai fait un rêve trop bizarre dans la nuit d'hier à aujourd'hui:\nJ'ai rêvée que j'étais avec ma meilleure amie dans la rue, en train de parler. Tranquille, quoi. Puis là, on voit notre prof de maths et notre prof de physique qui s'insultent et qui commencent à se battre avec des VRAIES épées. Puis là, ma pote disparait comme ça. Je me retourne et là je la vois revenir vers moi en brandissant fièrement une bouteille de picole.\nNon mais franchement... Qu'est ce que ma mère me donne à manger pour que je fasse des rêves pareil?!\n« le: vendredi 30 janvier 2015, 16:43:19 »\nMême sans les dlc il est possible de monter rapidement de niveau. Rien qu'en faisant la première carte aventure et en finissant le mode légende, mes persos en sont déjà au lvl 80. Pour réussir à les faire monter à ce niveau là, j'ai juste tuer tout les ennemis de la map. Essaye de faire ça, c'est peut-être long mais c'est efficace .\n« le: mardi 27 janvier 2015, 12:49:19 »\nBienvenue Taku! Passe de bons moments sur PZ !\n« le: mardi 20 janvier 2015, 18:22:07 »\nBienveue Okepi et illiane!\n« le: vendredi 16 janvier 2015, 21:09:14 »\nTu peux compter sur moi pour participer! J'ai hâte de savoir ce qu'on va faire dans cette suite!\n« le: vendredi 16 janvier 2015, 19:45:38 »\nGénial! Dis-moi si je me trompe mais, il y aurait une suite à ce que je vois. En tout cas, c'est ce que laisse penser les dernières phrases.\nActualité et News sur Zelda / HW - Le DLC MM le 29 janvier\n« le: vendredi 16 janvier 2015, 17:54:49 »\nNon mais franchement, ils font quoi à Nintendo? C'est évident que la plupart des joueurs voulaient Skull Kid, et voilà que c'est Tingle qui débarque comme une fleur! Non mais je vous jure ... Heureusement que Link Enfant rattrape le coup!\nEdit: Wow! J'adore Lana en Skull Kid! Elle est génial!


Le lycée Lucie Aubrac de Courbevoie accueille ses 1500 élèves dans des locaux flambant neufs réalisés par Eiffage Construction\nLe lycée Lucie Aubrac de Courbevoie accueille ses ...\nAttendu depuis de longues années, le second lycée général de Courbevoie, réalisé par Eiffage Construction, a été inauguré le 3 septembre dernier en présence de Valérie Pécresse, présidente de la région Ile-de-France, Patrick Devedjian, président du département des Hauts-de-Seine, Jacques Kossowski, maire de Courbevoie et Daniel Filâtre, recteur de l’académie de Versailles.\nCe lycée, aux dimensions hors normes, totalisera plus de 13.000 m² de surface de plancher et aura une capacité d’accueil de 1 500 élèves. Il sera doté d'un CDI, d'une salle polyvalente de 200 places, d'un gymnase, d'un amphithéâtre et de logements de fonction. Le restaurant scolaire, d'une capacité d'accueil de 470 places, fonctionnera avec deux selfs et deux files d'attente distinctes. Les locaux s’organisent de part et d’autre d’une grande allée centrale couverte d’une verrière photovoltaïque.\nLes équipes d’Eiffage Construction ont livré cet établissement en 18 mois au lieu des 24 habituellement prévus pour un bâtiment de cette envergure.\nLe cabinet d’architecture Epicuria a conçu un bâtiment en longueur sur quatre étages, avec une véritable rue intérieure, recouverte d’une verrière photovoltaïque. Elle sera utilisée entre les cours comme espace récréatif en plus d’une petite cour de récréation arborée d’environ 350 m².


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