Module de formation "Préparation à l'ISO/TS 16949" (support)\nObjectif du module : Préparation à la mise en oeuvre et à la certification d'un système de management de la qualité dans l'industrie automobile (ISO/TS 16 949) pour pouvoir :\n- augmenter la satisfaction des clients et autres parties intéressées\n- accroître les résultats économiques et financiers\n- démontrer la conformité aux exigences automobile client, légales et réglementaires (...)\n2. Principes et étapes\n3.3. Cartographie des processus\n3.4. Approche processus\n4. Exigences du SMQ\n4.1. Exigences générales\n5.2. Revue de direction\n[...] L'implication de la direction à son plus haut niveau est réellement indispensable. Les conseils d'un consultant sont souvent sollicités. Une condition obligatoire est la certification ISO 9001. Un organisme externe de certification est choisi (il peut être différent de celui pour l'ISO 9001). Une des questions clés qui vient très vite (étape est la nécessité de cette décision. Si cela n'est vraiment pas nécessaire ou si l'estimation des coûts de la démarche de certification dépasse les ressources disponibles, on fera mieux d'abandonner tout de suite. [...]\n[...] Un système d'optimisation des stocks et de gestion dans le temps du type FIFO (de l'anglais Fist In First Out - premier entré premier sorti) est utilisé. Les produits et composants obsolètes (périmés) sont identifiés comme non conformes Surveillance et mesure (exigences 303 à 333) La conformité du produit aux exigences applicables est assurée avec des processus d'utilisation d'équipements de surveillance et de mesure appropriés et en état de validité. Tout instrument de mesure est identifié et vérifié. Les conditions d'utilisation, de manutention et de stockage des instruments sont établies et adéquates. [...]\n[...] Un processus peut être très complexe (lancement d'une fusée) et relativement simple (auditer une procédure documentée). Un processus répond à trois caractéristiques. Il est : répétable prévisible définissable Un processus est défini entre autres par : son intitulé et son type sa finalité (pourquoi son bénéficiaire (pour qui son domaine et activités ses documents et enregistrements ses éléments d'entrée ses éléments de sortie (intentionnels et non intentionnels) ses contraintes ses ressources ses objectifs et indicateurs son responsable (pilote) et ses acteurs (intervenants) ses moyens d'inspection (surveillance, mesure) sa cartographie son interaction avec les autres processus ses écarts potentiels ses opportunités d'amélioration continue Les 3 types de processus et quelques exemples sont montrés dans la figure 5. [...]\n[...] Un plan de surveillance (cf. ISO/TS annexe figure 26 et Annexe 09) comprend les éléments suivants : informations générales o désignation de l'organisme o type (prototype, présérie ou production) o numéro unique o dates de création et de révision o informations client o référence du produit (processus) o indice de modification technique o numéros d'opérations o description de l'opération maîtrise du produit o méthodes de surveillance des caractéristiques spéciales o autres caractéristiques o spécification (tolérance) maîtrise du processus o paramètres du processus o méthodes de surveillance des caractéristiques spéciales o machines, outils et outillages o types d'inspections o outils statistiques méthodes o techniques de mesurage o dispositifs antierreurs o fréquence de prélèvement o critères d'acceptation o méthode de maîtrise actions correctives o plan d'actions o actions correctives et leur suivi Figure 26. [...]\n[...] Les enregistrements des résultats d'étalonnage et de vérification sont conservés. Quand un équipement n'est plus conforme des actions appropriées sont prises autant sur l'équipement que sur le produit affecté. Une analyse (étude statistique) des dispersions de résultats de chaque système de mesure et d'essais mentionnés dans les plans de surveillance est entreprise. Les critères d'acceptation sont conformes aux exigences des manuels de référence ou ils sont approuvés par le client. Le descriptif d'activité des prestations d'inspection, d'essais et d'étalonnage d'un laboratoire interne est défini dans la documentation du SMQ. [...]\nAutres docs sur : Module de formation "Préparation à l'ISO/TS 16949" (support)\nModèle de manuel qualité ISO/TS 16949\nPréparation à l'ISO/TS 16949 (ensemble de documents)\nModèle générique de manuel qualité\nLes normes pour les produits\nTI Automotive : présentation de l'entreprise et de son département de management environnemental


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Un voyage le long du Nil - Strauss-Seeber-C\nUn voyage le long du Nil\nLe grand Nil a façonné la vie, la pensée et les coutumes des populations d'Égypte pendant des millénaires et a joué un rôle majeur dans l'émergence de la civilisation égyptienne, il y a 5000 ans. Dans l'Égypte antique, la crue, et la décrue qui s'en suit dans un spectacle naturel impressionnant, a conduit à la croyance que le monde lui-même était né de l'émergence d'une colline des eaux primordiales du dieu Noun. La fertilité des sols était, en outre, associée au mythe du dieu Osiris, qui régna aux temps préhistoriques ... Lire la suite du résumé\n63 € Acheter\nSur la route des taureaux\nLa statuaire non-colon\nLarem, Alain ; Tocon, Antonio\nLe scalp et le calumet ; imaginer et représenter l'Indien en Occident du\nFrom China to Taiwan ; les pionniers de l'abstraction ; pioneers of abstraction\nChine, art en mouvement ; 11 carnets de la création ; coffret\nDissertation sur une stèle pharaonique\nSchwaller De Lubicz, Rene Adolphe ; Varille, Alexandre ; Schwaller De Lubicz, Isha\nToute la cité de Beaume ; l'histoire, l'architecture, les chefs-doeuvre\nLe conflit israélo-palestinien ; 20 questions pour vous faire votre opinion\nTauromachie ; de l'arène à la toile\nNikles, E ; Perregaux, C\nBulguksa et Seokguram ; trésors de Corée\nLa planète a la croisée des chemins\nEstampes du Viêt nam\nL'art préhistorique ; la beauté et le mystère d'oeuvres multimillénaires\nLe futur anterieur ; l'art moderne face à l'art des cavernes\nLe banquet ; de Marseille à Rome\nL'art rupestre d'Afrique ; actualité de la recherche ; actes du colloque international (Paris, 15-16-17 janvier 2014)\nHonore, Emmanuelle ; Gutierrez, Manuel\nLes chats, de l'Egypte au Moyen âge\nImages rupestres du Maroc ; étude thématique\nFiche détaillée de "Un voyage le long du Nil"\nAuteur : Strauss-Seeber-C\nDate de parution : 03/10/2007\nEAN13 : 9782850882418\nCatégorie : Art & Civilisation\nPoids : 1786g\nNombre de page(s) : 199\nLe grand Nil a façonné la vie, la pensée et les coutumes des populations d'Égypte pendant des millénaires et a joué un rôle majeur dans l'émergence de la civilisation égyptienne, il y a 5000 ans. Dans l'Égypte antique, la crue, et la décrue qui s'en suit dans un spectacle naturel impressionnant, a conduit à la croyance que le monde lui-même était né de l'émergence d'une colline des eaux primordiales du dieu Noun. La fertilité des sols était, en outre, associée au mythe du dieu Osiris, qui régna aux temps préhistoriques jusqu'à ce que son frère Seth, avide de pouvoir, ne le tue et jette son corps dans le Nil. L'eau charria son corps à travers tout le pays, et fit éclore une vie nouvelle. Cette évocation récurrente du pouvoir de la nature a ancré dans la foi égyptienne la croyance en la nature cyclique de toute chose et nourrit une riche conception de l'au-delà. Dans tous les domaines de l'art, de l'architecture et de la littérature, le fleuve est un thème dominant. Les superbes reliefs et\n... Lire la suite peintures retrouvés dans les tombes et les temples montrent le fleuve comme l'artère vitale, utilisée pour le transport des vivres, des objets quotidiens mais aussi des sarcophages ou des pierres destinées aux constructions monumentales. D'Abou Simbel à Gizeh, en passant par les plus hauts lieux du patrimoine égyptien, comme Louxor et Karnak, ce voyage au fil du fleuve illustre remarquablement les différentes facettes de la vie et de la culture de la vallée du Nil.


Ça vient !… ;-) | Le blog des citoyens d'Ille-et-Vilaine\nÇa vient !… ;-)\nJ’avais indiqué par courriel à tous ceux et à toutes celles qui ont laissé leur adresse en répondant au sondage qui reste en cours, que j’avais pour objectif de produire avant la fin de la semaine les résultats de l’exploitation des 1.000 premières réponses.\nJ’ai vraiment beaucoup avancé, mais pour de pures questions de mise en forme, je peine à respecter cet objectif.\nJ’ai pourtant vraiment hâte de pouvoir le faire.\nEn attendant, je tiens à vous rassurer sur ma mobilisation.\nJe vous informe donc qu’à sa demande j’ai rencontré lundi dernier le Président du Conseil général, Jean-Louis Tourenne, et que – parmi d’autres choses que je me permettrai d’évoquer ici dans le courant de la semaine prochaine – nous avons parlé « transparence ».\nLe Président m’a indiqué que – de manière à pouvoir disposer de tous les points de vue – il allait s’informer auprès de ses services des raisons pour lesquelles il m’était actuellement opposé le « secret des affaires » lorsque je demande la communication des « livrables » du marché de « création et lancement d’un gentilé pour l’Ille-et-Vilaine » qui a été passé avec la SARL unipersonnelle GFT dirigée par Jacques Delanoë.\nJ’ai laissé passer une semaine, qui me paraissait un délai raisonnable pour ne pas alimenter trop facilement une polémique sur ce sujet.\nS’il n’y a pas d’évolution, je pense reprendre le taureau par les cornes sans tarder.\nNous sommes d’ailleurs convenus avec Jean-Louis Tourenne que la CADA – comme les tribunaux administratifs, a t’il ajouté – n’étaient là que pour arbitrer des différences d’interprétation et qu’il n’y avait strictement rien d’anormal à les saisir quand il y en a.\nComme quoi, ce n’est quand même pas très difficile de s’entendre !… 😉\n← En force et puis en douce\nUne question de transparence →\nUne Réponse to “Ça vient !… ;-)”\nkarlynfox 21 octobre 2013 à 8 h 44 min #\n« Comme quoi, ce n’est quand même pas très difficile de s’entendre !… »\noui normalement entre personne censées !!\nJe pense qu’aux vues des différents problèmes que rencontre la Bretagne en ce moment, ils vont laisser cette « petite » revendication sous la pile ! e, espérant qu’on lâche l’affaire.


Page(s) : 1 ... 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 ... 442\nPage(s) : 1 ... 155 156 157 ... 442\n249630 vues - 6617 réponses - 9 j'aime - 35 abonnés\nPosté le 26/03/2019 à 12h52\nJe t'avoue qu'au premier contact quand elle a répondu à mon mail, je me suis dit "mouais, bizarre, et un peu trop sec à mon goût". Mais bon, j'ai essayé de passer outre, après tout, il y a des gens qui ne sont pas hyper à l'aise à l'écrit ... Au final, si j'avais écouté mon instinct, j'aurais moins perdu de temps.\nAu moins, j'avais pas encore annulé ma demande auprès de Claire !\nÉdité par gebouye le 26-03-2019 à 12h52\nj'ai regarder la video montée y'a vraiment de bonnes choses, notamment ton travail au galop, j'aime beaucoup, il est tonique, belle amplitude et plutot equilibré. (meme si j'ai l'impression qu'il te vole certaines transitions au trot ).\nLes extensions sont tops egalement, le travail de deux pistes de mieux en mieux.\nle seul bemol pour moi c'est sur les 3 premieres minutes de video il avance pas , surtout au trot. on va dire que c'etait le temps de prechauffe musculaire\nPosté le 26/03/2019 à 13h47\nLe galop ça n'a plus rien à voir, de mémoire il ne m'avait pas volé de transitions mais peut être que sur la vidéo c'est trompeur. Les extensions, il a vachement bien compris et en demande tout le temps, faut que je me méfie car il lui arrive de tirer un coup sec pour récupérer les rênes du coup\nOui, j'ai tendance à nous laisser vivre un poil trop pendant la détente. Après, avec A. on le fait travailler sur des allures lentes car sa défense c'est la fuite en avant. Du coup, il n'est pas toujours facile de trouver le juste milieu touts seuls encore.\nÉdité par gebouye le 26-03-2019 à 13h48\nEffectivement tu as tout à fait bien fait de dire next à cette fille!\nDéjà rien que les changements de tarifs à la tête du client c'est pas pro!\nAh mais il les fait les déplacements latéraux!!\nMais oui autant il a une belle energie au galop, qu'au trot, on aimerait le voir un peu plus tonique.\nEt plus rond dans l'ensemble mais tu y vient! les progrès sont vraiment là depuis la mise en place de tes cours\nPosté le 27/03/2019 à 14h53\nmaroche ouiiiiii il fait les déplacements latéraux. On voit bien qu'il faignante un peu sur le croisement de postérieurs parfois mais globalement, il s'applique et c'est plus fluide (sans qu'il soit complètement à la retourne).\nOui, a terme faudra l'avoir plus rond, mais bon on ne peut pas gagner sur tous les tableaux d'un coup. Déjà il s'étend, et se muscle ...\nEt il commence même à croiser quand il broute, pour passer d'une touffe d'herbe à l'autre !! Lui qui a toujours fait au plus basique, il commence à utiliser ce qu'on fait en dress pour son confort de tous les jours. Ça m'a tellement marqué que j'ai pris une photo pour envoyer à ma prof !\nBref, on se fout de sa gueule le pauvre\nSinon autre question con de la semaine. On va être dans la période où je fais habituellement venir le dentiste (avril-mai). Ayant normalement rdv avec la BF début mai, est ce qu'il vaut mieux que je fasse venir le dentiste maintenant quitte à anticiper un peu pour pouvoir caler un rdv osteo dans la foulée, ou est ce qu'il vaut mieux que je ne précipite pas et que je lui foute la paix avant la BF ?\nIl n'a jamais eu bcp de boulot niveau dentiste, un peu de surdents à râper mais ça reste toujours soft. Mais je me dis que ça sera sans doute plus confortable pour lui d'avoir la bouche toute propre. Surtout si on doit lui faire essayer la bride pour la première fois ...\nÉdité par gebouye le 27-03-2019 à 14h55\nPosté le 27/03/2019 à 14h56\ngebouye Dentiste avant BF\nPosté le 27/03/2019 à 15h03\ngebouye ah oui dentiste, ostéo et tout soin que tu juges nécessaires avant le BF\nPosté le 27/03/2019 à 15h09\nC'est ce qu'il me semblait aussi, mais j'avais peur d'être encore trop en mode maman poule\n(Du coup, message envoyé pour la dentiste, je calerais l'ostéo dès que ce sera bon)\nÉdité par gebouye le 27-03-2019 à 15h10\nPosté le 28/03/2019 à 07h53\nBon rdv dentiste le 4 avril ^^ J'ai envoyé un message à l'ostéo. Bonhomme sera tout propre pour la séance de BF !\nSinon pas vu petit père depuis lundi Mon mari a eu le temps de passer le voir en coup de vent mardi. Vivement que mars se termine, j'en ai marre de mon planning à la con ! (quoique ma première semaine d'avril semble dans la même veine ).\nle planning soin se goupille bien !\npas cool pour le taf en revanche, m'enfin courage on arrive bientot dans la période des ponts et des WE a rallonge .\nd'ailleurs question con: tu continue a lui donner son cmv ? il faut imperativement le donner quotidiennement ou on peut faire differemment ? (cf j'ai contacté une nutri pour martingale et son passage au pré, et du coup je m'interroge, vu que la t'y va pas tout les jours)\nPosté le 28/03/2019 à 09h27\nDans l'idéal le CMV c'est tous les jours. Quand j'avais fait mon dossier pour la nutri, j'avais précisé qu'il était au pré, sans ration et que je pouvais y aller 6 jours maximum par semaine (ce qui était vrai vu le temps que je mettais pour aller à son ancienne écurie).\nDu coup, elle m'avait conseillé un CMV (Reverdy Oligovit) qui pouvait se prendre sans ration et que je lui donnais donc comme ça avec un peu de carottes. Si le besoin se faisait sentir, je pouvais complémenter avec un peu d'orge pour pas qu'il perde de poids. Il a commencé son CMV seul en novembre 2017.\nIl a ensuite passé fin décembre 2017 à mi-avril 2018 avec CMV + 1/2l d'orge 6 soirs sur 7. J'ai introduit l'orge petit à petit et je l'ai retiré petit à petit (genre pendant 1 semaine il a eu 1/4l quoi).\nIl n'a pas eu de CMV tout mai l'année dernière vu qu'on était en vacances et à notre retour il l'a boudé. Je lui ai proposé de temps en temps mais tant qu'il n'en a plus voulu j'ai pas insisté. Il a commencé à le reprendre franchement vers fin août 2018.\nEn // la podo m'a parlé d'un autre CMV sans céréales et mélasse (à base d'algue et plantes séchées), mais en poudre donc à prendre avec une ration. Comme on le changeait de pension et que je pouvais maintenant y aller tous les jours, c'était pas dérangeant. D'autant plus que dans la nouvelle pension, il aura 2 rations par jour donc l'estomac serait réhabitué à manger des rations.\nUne fois la boite d'Oligovit terminée (j'en ai passé 3 moyennes boîtes dans l'hiver), je me suis tâtée (vu le prix de l'Alghom au kg !) et j'ai tenté quand même. J'ai fait une transition avec le fond de Reverdy, et un peu de poudre. Frits a tout pris sans se poser de question. Quand il n'y a eu que la poudre, il a un peu buggué et hésité mais franchement il a pas été difficile.\nDu coup, depuis octobre 2018, il est à l'alghom. Depuis fin décembre 2018, il a de nouveau 1/2l d'orge avec pour passer l'hiver. Vu qu'on ne peut pas conserver l'orge trop longtemps, et pour éviter de gâcher, il va en avoir jusqu'à la fin du pot (sans doute fin avril), mais on passera sans doute à 1/4l vers la fin.\nEt tant qu'il voudra de son CMV avec, on lui mettra. Pour l'instant je n'ai toujours pas fini ma petite boite ! Il m'en reste encore facile pour jusqu'à mai. Ce qui fait qu'au final, j'en ai pour moins cher (malgré le prix de la petite boite) d'Alghom que de Reverdy sur un hiver.\nIl en a à chaque fois qu'on passe, quand on est parti 1 semaine en janvier, les autres proprios ont pris le relais au pied levé pour la semaine. Après s'il manque 1 jour ou 2 c'est pas la mort. Ils ont une pierre à sel dans le pré donc il peut compensé s'il en sent le besoin.\nÉdité par gebouye le 28-03-2019 à 09h29\nouai parce que clairement tout les jours ca va pas le faire. enfin je veux pas me rajouter une contrainte quoi.\nenfin bref je verrai bien selon ce qu'elle me dira !\nPosté le 29/03/2019 à 08h25\nOui faut que ça reste gérable, C'est pour ça que j'avais donné les conditions à la nutri.\nPassée voir Frits hier Il m'avait manqué. Il était en train de manger donc je lui ai foutu la paix. De toute façon vu les 10 derniers jours qu'il a passé, ça change pas grand chose !\nJe me suis occupée de remplir les baignoires et lui filer son CMV. Je l'ai grattouillé de partout et J'ai tenté quelques photos vu le beau soleil et ciel bleu qu'on avait hier ...\nIl était pas très coopératif ^^ Ou plutôt, il en avait rien à carrer. Je vous laisse juger !\nPosté le 29/03/2019 à 08h57\nAh ah ah trop sympa la tête de "mais laisse moi bouffer"!!\nAu top pour la gestion du planning pré BF\nJ'ai pas mal de trucs à dire, mais j'ai la grosse flemme d'écrire\nVendredi : cours avec A.\nPas mal mais moins bien que les derniers. On sentait que ça faisait 10 jours qu'on avait pas bossé. Bonhomme moins dans la souplesse, un peu dans le retour de la résistance.\nComme j'avais le dos et le bassin en vrac, on a fait gaffe et je pense que ça n'a pas du aider non plus niveau décontraction. D'autant plus que ma prof m'a fait remettre les étriers en position normal et qu'elle me les a réglé méga longs. Position que je tiens, étonnamment mes jambes se sont vraiment bien verticalisées et pas trop mal stabilisées, mais je crois que j'avais jamais chaussé aussi long sur cette selle !\nBref, on a repris tranquillement. Toujours détente sur des cercles / voltes avec incurvation / contre-incurvations. On a fini par ajouter un peu de difficulté quand même : en incurvation on lui demande de sortir les hanches du cercle, en contre-incurvation on lui demande de les rentrer sur le cercle.\nPas terrible, j'ai galéré mais on a fini par avoir quelques foulées dans chacune des configurations aux 2 mains.\nOn a bossé le galop. Là dessus, 0 problème ! Donc pareil, on a ajouté un peu de difficulté. 1 foulée sur 2, je devais lui rendre les rênes pour qu'il apprenne doucement à être 100% autonome sur sa gestion de l'équilibre. Bonhomme a hyper bien géré, et moi pas trop mal car j'ai réussi à bien reprendre le contact à chaque fois pour ne pas lui mettre de taquet dans la bouche. Au final, j'ai juste manqué d'endurance ^^\nOn a fini sur des cessions à la jambe. Doublé dans la longueur, cession jusqu'à la piste, volte avec départ au trot. Ça commence à venir, les cessions étaient étonnement plus belles sur son coté le plus difficile habituellement. Du coup, on a encore augmenté la difficulté. Doublé -> cession -> arrivé sur la piste, volte avec départ au galop -> retour sur la piste, transition au trot -> passage du coin, transition au pas\nEt bien, mise à part un départ un peu fort car j'ai planté un éperon en me crispant, le reste était franchement pas mal.\nStats Equisense :\n1h19 de séance\n11 min d'arrêt\n49 min de pas\n17 min de trot\n2 min de galop\nSymétrie du trot : 6,9/10 Pas terrible, mais pas catastrophique. On n'a pas fait bcp de lignes droites au trot donc pas sure que ce soit hyper fiable non plus comme stat pour le coup.\nRégularité des allures et cadence : identiques et stables sur les 3 allures par rapport aux autres séances.\nRebond : stable au pas et au galop, bonne augmentation au trot.\nPetite aparté mais qui a son importance ... samedi matin, on a fait notre première vraie grosse sortie vtt depuis 2 ans avec mon mari. 3h30 de balade sportive car le groupe avait un bon rythme.\nBref, je voulais donc faire une balade avec Frits mais avec la sortie du matin, je me suis tâtée longtemps. Pas sûre de pouvoir assumer . Au final, j'ai quand même été sortir Frits du pré et je l'ai préparé. Merci le beau temps de la semaine qui fait que je n'avais pas un sanglier à décrotter, ça aurait enterré ma motivation.\nNous voilà donc parti pour la forêt, objectif : encore et toujours trouver un passage pour accéder à l'étang entre chez Rinkui et chez moi !\nUne fois sous les arbres, je demande le trot ... et là ça bugue. J'arrive pas à suivre, je me sens secouée dans tous les sens, bref la cata. Je demande l'arrêt et je raccourcie mes étriers de 4 trous. Je repars et re-arrêt, c'est trop court donc je rallonge de 2. Me voilà un peu plus à l'aise pour de la balade.\nJe reprends la cordelette et on retente le trot, c'est mieux mais toujours pas la panacée. Je m'accroche donc à la crinière et/ou au pommeau de la selle pour me caler ... Et dès que je suis stable, Frits part en extension d'encolure ^^\nAu final, je vais vite lâcher la cordelette et je vais passer toute la balade avec les rênes, je me sentais vraiment pas. Malgré tout, dans une belle ligne droite, et après un bon trot histoire d'être sûre qu'il est assez détendu, je lui demande un départ au galop. Il part tout en douceur comme pendant les cours. Je m'attendais à un truc guilleret mais pas du tout. Il m'a vraiment impressionné, j'ai même pu refaire l'exercice de la veille en lui rendant les rênes 1 foulée sur 2 sans qu'il change sa cadence d'un iota.\nDu coup, rassurée par mon équilibre, je lui en redemande un quelques minutes plus tard sur un chemin en terre ... et pareil, départ tout doux pendant 5 foulées puis v'là t'y pas que ce trou du cul m'embarque. Je patiente 3-4 foulées voir s'il se calme (chose qu'il fait 90% du temps) mais non, il continue à prendre de la vitesse. Donc je plie avant qu'il fige l'encolure. D'abord à gauche mais vu qu'il y a un vieux grillage rouillé avec du barbelé, j'ai un peur qu'il ne l'ai pas vu et s'il fini par tourner on est mal, donc changement de plan et je plie à droite.\nLe changement de pli le surprend et il repasse au trot, puis au pas, puis s'arrête ... et tente de brouter ! WTF ?? Tu te fous de ma gueule petit con ?\nBref, je le remets au pas et on continue. A un moment donné, je vois 3 mini troncs par terre, je le mets donc au trot pour les passer. Comme je le sens accélérer, je remonte vite sur mes rênes pour parer à toute éventualité.\nA l'aide du GPS, je trouve un autre chemin qui s'approche de l'étang, je vois la belle étendue bleue qui perce à travers les arbres. Je me vois déjà faire une pause au bord de l'eau pendant que Frits broute tout ce qu'il peut ... et comme la dernière fois : muret + grillage au bout du chemin !!! Je suis dégoutée ! A croire que tout l'étang est clôturé\nDemi-tour et retour maison. Pareil, sur le retour, un beau chemin en terre, je lui demande de se mettre au petit trot tranquillou car je sais qu'après on a presque 4 km de chemin en cailloux et qu'il va moins kiffer. Sauf que oui mais non, il prend le galop et tente à nouveau d'embarquer. L'ayant senti tout de suite, je l'ai arrêté direct et je lui ai imposé le trot. Il avait la gueule en l'air en mode petit con, j'ai gardé les mains aussi hautes que possible pour pas lui exploser les barres non plus mais bon, c'était pas la balade agréable que j'aurais souhaité.\nIl a fini par se poser cm par cm, et j'ai pu baisser mes mains, on a du contourner des arbres donc on est repassé au pas mais ça lui a bien plu, il adore faire du tout terrain. Puis, j'ai pas retenté le diable, on a fait les 6 derniers km au pas. Il avait un très bon rythme par contre.\nSur la dernière ligne droite qui ramène à l'écurie, j'ai abandonné et je suis descendue. J'ai donc fait les derniers 2,5km à pied à coté de lui pour me dérouiller. Il a été sage comme tout.\nArrivés, je l'ai désappé et je lui ai douché les jambes + poitrail + passage de sangle. Direction la carrière pour qu'il se roule et retour au pré.\n2h14 de balade\n1h48 de pas\nmoins d'1min de galop\nSymétrie : 7,4/10\nRégularité et cadence stables. Légère baisse au galop mais vraiment pas grand chose\nRebond en augmentation au trot et au galop.\nMalgré tout, ça nous a permis de franchir la barre de nos 100 premiers km de balade en 2019 ^^\nSamedi soir, masterclass via webcam avec Marie Madec. C'était plus une présentation powerpoint de quelques bases de son approche des chevaux mais il y avait quand même quelques points intéressants. Par contre, ça me confirme que les cours à distance, ça sera jamais pour moi !\nJe décroche tellement vite niveau concentration ... Bref, quelques pistes pour travailler le calme que j'ai envie d'essayer. Ça sera toujours utile et même dans son quotidien, bien gérer ses émotions ça aide ^^\nDimanche : cours de TAP avec un nouveau prof.\nDéjà bon point pour lui, il est arrivé avec 15 min d'avance ! Ça nous change\nContact agréable, on commence par se présenter mutuellement et présenter Frits ... qui broute en liberté dans la carrière ! Chose qu'il va faire sur la moitié du cours ! Pas stressé pour 1 sou par le nouveau venu.\nIl a été adorable et patient tout du long. Il a fait des câlins à tout le monde et nous laissait même lui prendre la tête dans nos bras pour les câlins, chose qu'il ne fait pas souvent. Dès qu'on faisait une pause, il se mettait à dormir à coté de nous, il a baillé plusieurs fois à s’en décrocher la mâchoire ... Bref, vraiment en confiance avec ce Mr.\nDébuts un peu hésitants, le cours est un peu parti dans tous les sens mais bon, difficile de savoir ce qu'on sait réellement faire, ce que sait faire Frits ... si on débutait ça aurait été plus simple je pense. Là, on a essayé de faire le tour en 2h donc c'était un peu décousu.\nGlobalement, les codes ne sont pas les mêmes. Au final, c'est surtout lui qui l'a manipulé, pour voir les réactions de Frits et nous montrer sa méthode, mettre un visuel sur ses explications. Bonhomme attentif, respectueux et qui a tout capté très vite. Il a d'ailleurs fait la remarque assez souvent ! Je crois qu'il était surpris par Frits ^^ C'était assez drôle.\nCe qu'on a bossé : déplacer les épaules et les hanches, le travail en longe au pas et au trot, les aspirations (Frits a fait ses premières aspirations d'épaule en 2 sec, et sans le vouloir mon mari lui a fait faire son premier déplacement latéral ... je suis trop jalouse !!!!), et un peu de franchissement avec passage d'un petit obstacle au pas et au trot.\nDonc au final, ce qui nous a plu :\n- Il est à l'écoute. Il nous a donné pleins de conseils, de petits exercices à faire de notre coté.\n- Il nous a donné quelques clés pour la liberté et la monte en licol. Comment mettre en place dès maintenant des codes qui nous serviront plus tard.\n- Et surtout, chose qui a bcp plus à mon mari, des objectifs. Des vrais ! Pas un truc du genre "on passera bientôt au travail du galop", "vous êtes pas loin du travail monté" ... toutes ces phrases qu'on entend depuis 3 ans 1/2 et auxquelles on ne croit plus ! Là, il nous a dit clairement que si on bossait régulièrement avec lui (genre 1 fois par mois) et de notre coté, dans 1 an on pourrait être "autonome" dans le travail en liberté. Faire quelques trucs sympas et commencer à être à l'aise.\n- Très gentil, pédagogue. Il est très curieux, il lit bcp les articles dans les revues spécialisées, il cherche en permanence à s'adapter, à apprendre. Il se déplace ou reçoit chez lui d'autres pro pour des stages, des formations ... Il est plutôt ouvert et humble. Il le dit lui même qu'il a eu des difficultés avec ses chevaux, que ça lui a demandé bcp de travail, de remise en questions ... qu'au final, rien n'est facile.\n- A la fin du cours, il nous a demandé notre ressenti, ce qui nous a plu et moins plu, ce qu'il pourrait améliorer pour les prochaines fois, etc\n- Il n'est pas affolé pour 2 sous par tous les objectifs que j'ai en tête, que ce soit la monte en licol, en cordelette, le travail en liberté ... Le seul truc dont je n'ai pas encore parlé ce sont les exercices " de cirque", pas eu le temps de le placer entre lui et mon mari qui sont des moulins à paroles\n- Il est doux. Il a vraiment été tranquille avec Frits, a demander gentiment mais fermement. Après à voir comment il gérera si un jour Frits nous dit non sur un truc mais il ne semble pas adepte du rapport de force ou quoi que ce soit de ce style.\n- Cours un peu décousu, il l'a lui même admis, beaucoup de sujets abordés donc dur de tout se rappeler. Mais si on choisi de l'avoir régulièrement, il nous a assuré que ce serait cohérent et structuré.\n- Il a beaucoup manipulé Frits. Au final, c'est lui qui l'a fait le plus bossé. Nous qui avons l'habitude que notre prof ne touche jamais à Frits, ça nous change un peu. A voir si ça va être le cas à chaque fois ou pas.\nMon mari est plutôt emballé, et j'avoue que je suis partante pour un autre cours avec lui. Je dois le rappeler cette semaine pour qu'on se cale un autre cours sur avril du coup.\nÉdité par gebouye le 01-04-2019 à 11h28


Husqvarna 7393033087555-Machine a coudre et a broder designer topaz Broderie unite de 25\nAvis Husqvarna 7393033087555-Machine a coudre et a broder designer topaz Broderie unite de 25\nAcheter Husqvarna 7393033087555-Machine a coudre et a broder designer topaz Broderie unite de 25\nVous désirez acheter : Husqvarna 7393033087555-Machine a coudre et a broder designer topaz Broderie unite de 25 ou vraiment avoir un avis avant d'acheter cet appareil, vous vous trouvez à la bonne place.\nLa plupart des utilisateurs qui ont un avis concernant Husqvarna 7393033087555-Machine a coudre et a broder designer topaz Broderie unite de 25 l'ont manipulé pendant plusieurs jours et sont à même de attribuer un témoignage impartial sur son emploi.\nAujourd'hui pour avoir une appréciation et choisir d'obtenir ou pas cette machine, voilà divers avis et tests, rassemblant les points forts ainsi que les points faibles, pour vous aider dans l'achat :\nDénomination précise de cet article : Husqvarna 7393033087555-Machine a coudre et a broder designer topaz Broderie unite de 25\nProfondeur : 233x900x556 mm\nFonctions annexes : 33\nC'est la plus importante des notes dans sa catégorie. Cette arrivée dans notre classement ne manquera pas de vous intéresser par sa prise main.\nDifférentes fonctions, simplicité d'utilisation, beaucoup de caractéristiques pour cet article très intéressant.\nRemise de 60% afin d'acheter Husqvarna 7393033087555-Machine a coudre et a broder designer topaz Broderie unite de 25 à prix discount :\nVoir votre ristourne sur cet équipement


Dossier Lit En Mousse Avec Coussin Confort\nL'ensemble est composé d'un bloc relève buste et d'un coussin 40 x 60 cm. L'enveloppe est en coton avec une housse zippée pour pouvoir le laver. Caractéristiques techniques du dossier lit en mousse avec coussin confort.\n50 x 45 x 30 cm. La taie est en 100% jacquard polyester - mousse polyéther 25kg/m3. On peut laver l'oreiller à part à 60°C et en attendant poser un oreiller classique dessus.\nL'item "Dossier lit en mousse avec coussin confort" est en vente depuis le lundi 30 mars 2020. Il est dans la catégorie "Beauté, bien-être, parfums\_Matériel paramédical\_Mobilité\_Autres". Le vendeur est "tousergofr" et est localisé à/en fr.


Les vésicules synaptiques dans les terminaisons nerveuses fonctionnelles subissent l'exocytose et l'endocytose. Ce recyclage des vésicules synaptiques peut être efficacement analysé en utilisant des colorants styryle FM, qui révèlent le chiffre d'affaires de la membrane. Des protocoles classiques pour l'utilisation de colorants FM ont été conçus pour l'analyse suivante neurones stimulée (évoqué) l'activité synaptique. Récemment, les protocoles sont devenues disponibles pour l'analyse des signaux FM qui accompagnent les activités synaptiques plus faibles, tels que les événements spontanés ou décoratifs synaptiques. L'analyse de ces petits changements dans les signaux FM nécessite que le système d'imagerie est suffisamment sensible pour détecter de petites variations de l'intensité, pour l'instant que les changements d'artefact de grande amplitude sont supprimées. Nous décrivons ici un protocole qui peut être appliquée à évoqué, spontanée, et les activités synaptiques miniatures, et en utilisant des neurones hippocampiques en culture, par exemple. Ce protocole comporte également un moyen d'évaluer le taux de photoblanchiment des colorants FM, comme il s'agit d'une importantesource d'artefacts lors de l'imagerie de petits changements dans l'intensité.\nLa fonctionnalité des vésicules synaptiques est un déterminant important de la transmission synaptique. Ces vésicules libèrent des neurotransmetteurs quand ils fusionnent avec la membrane plasmique présynaptique (exocytose), et ils seront prêts pour un autre cycle de libération après avoir été régénéré à partir de la membrane plasmique (endocytose) et rechargé avec neurotransmetteur. La recherche sur la dynamique des mécanismes sous-jacents et le recyclage des vésicules synaptiques a été fortement accélérée par l'introduction de colorants styryles FM 1. Ces molécules bipolaires, qui ont chargés positivement groupes de tête hydrophiles et queues hydrophobes (plusieurs colorants dans la figure 1A, stereoview de FM1-43 dans la figure 1B), peuvent réversible entrer et sortir de membranes lipidiques sans les imprégner. Groupes de colorants FM partagent des caractéristiques similaires qui influent sur la plage de la lumière qu'ils émettent. Par exemple, FM2-10, FM1-43, et FM1-84 ont une double liaison entre les deux composés cycliques et shoémission verte w. La différence entre eux est la longueur de la queue hydrophobe, qui détermine son hydrophobie et donc la vitesse de sortie de la membrane (décloisonnement). Dans les cas de FM5 et FM4-95-64, trois doubles liaisons relient les composés cycliques, et ils montrent émission dans le rouge. Ces colorants diffèrent en ce qui concerne leurs parties hydrophiles. Dans tous les colorants FM, l'intensité de fluorescence augmente quand ils sont insérés dans les membranes biologiques, en raison d'une augmentation du rendement quantique dans l'environnement hydrophobe par rapport à l'environnement hydrophile. Ainsi, les variations de l'intensité FM représentent les variations de la valeur de la membrane. Les différentes couleurs (spectres d'émission) et hydrophobicités font la FM teint un outil de recherche polyvalent dans le recyclage des vésicules synaptiques.\nSur la base de ces caractéristiques, les colorants FM sont principalement utilisés selon le schéma suivant dans l'analyse de recyclage des vésicules synaptiques (figure 2). Neurons sont baignées dans une solution extracellulaire contenant le colorant FM, ce qui lui permet d'être pris dans des vésicules synaptiques (SVS) car ils forment par endocytose (coloration). Le colorant est ensuite lavé par application d'une solution de colorant extracellulaire libre, ce qui révèle les terminaisons nerveuses fonctionnelles, c'est à dire que ceux subissant une endocytose activement contiendra un groupe de vésicules synaptiques qui sont chargés avec le colorant (figure 2 du bas). Exocytose ultérieur conduit à la perte du colorant FM à l'espace extracellulaire et une perte concomitante de la fluorescence (de décoloration; due à la fois à la décloisonnement à un environnement hydrophile et diffusion en dehors du site de l'exocytose). Par conséquent, les changements dans FM intensité de fluorescence sont des indicateurs de la vésicule synaptique exo-et endocytose.\nColorants FM ont été utilisés pour colorer et décolorer les vésicules synaptiques dans divers organismes et préparations 2,3. Les exemples incluent neur mammifèrescultures onal 4-9, des tranches de cerveau de mammifères 10,11, 12,13 jonctions neuromusculaires, les neurones bipolaires de la rétine 14,15 et cellules ciliées de la cochlée 16.\nEn général, dans ces expériences, les colorations et décoloration sont déclenchées par la stimulation largement les neurones (activité évoquée). Récemment, cependant, de la vésicule synaptique recyclage en réponse à la stimulation faible a également été analysée, de même que le recyclage en l'absence d'un stimulus externe (de l'activité synaptique spontanée et miniature) 9,17-19. Activités synaptiques spontanés et miniatures sont définis comme ceux qui se produisent en l'absence de stimuli externes, avec l'ancien impliquant la décharge spontanée de potentiels d'action (figure 3). Ces activités synaptiques faibles sont associés à de faibles changements de signaux FM que celles déclenchées par une vaste stimulation. La mesure exige que les changements dans Déess FMintensité rence reflètent fidèlement l'exocytose des vésicules synaptiques ou endocytose mais les changements ne artéfactuelles en intensité. L'une des causes de l'artefact est la présence d'une coloration non spécifique de la membrane de plasma par des colorants FM. Lavage progressif de cette composante va conduire à un changement progressif dans l'intensité de fluorescence mesurée, qui sera attribué à tort à des activités synaptiques. Ce facteur peut être réduite par des méthodes appropriées (voir Protocole). La cause la plus notable de l'artefact est le photoblanchiment de colorant FM retenu dans les vésicules synaptiques. Les changements liés à l'intensité photoblanchiment-FM doivent être petites par rapport aux biologiques (synaptiques) les changements qui sont évalués. Le développement récent des appareils sensibles, par exemple la caméra dispositif à couplage de charge d'électrons multipliant (EMCCD), permet de réduire photoblanchiment en raccourcissant la durée d'exposition et l'affaiblissement de l'intensité de la lumière utilisée pour exciter le fluorophore. Une autre cause de l'artefact est une dérive in le niveau de focalisation du microscope optique. La dérive de mise au point au cours d'une session de formation d'image peut être causée par des effets mécaniques ou thermiques, et à tort entraîner un changement dans l'intensité de fluorescence mesurée.\nNous décrivons ici des protocoles et des équipements qui font qu'il est possible d'utiliser des colorants FM pour analyser recyclage des vésicules synaptiques, même dans le contexte de faible ou pas de stimulation, en particulier, l'activité synaptique miniature. Nous montrons des exemples de la coloration et décoloration de vésicules synaptiques lors d'événements évoqué et spontanées, en utilisant les neurones de rongeurs hippocampe en culture, et l'imagerie de la phase de décoloration. Nous démontrons également comment évaluer le degré de photoblanchiment FM colorant, en l'absence de toute perte de colorant FM en raison des activités synaptiques.\nUne. Culture primaire de neurones du cerveau des mammifères\nToutes les procédures animales réalisées dans cette étude sont approuvées par le Comité institutionnel de protection et d'utilisation des animaux de l'Université de l'Iowa.\nPréparer la culture de la cellule dissociée des régions CA3 de l'hippocampe-CA1 de souris ou des rats aux jours postnataux 0-1 19,20. Plaquer les cellules de l'hippocampe sur des lamelles de 12 mm d'épaisseur (numéro 0) préconfigurées avec la couche nourricière de cellules gliales de rat, dans des boîtes de 24 puits, et à une densité de 12 000 cellules / puits.\nCulture des neurones de l'hippocampe pendant au moins 8 jours pour les terminaisons nerveuses fonctionnelles à développer 21. Nous utilisons les neurones sur 11-14 jours in vitro lorsque les terminaisons nerveuses individuelles sont relativement isolés, sans trop de clustering. Les neurones peuvent être utilisés pour des expériences allant jusqu'à environ 21 à 28 jours in vitro, par exemple Willig et al. Nosyreva 22 et 23 et Kavalali.\nPourétudes fonctionnelles, évaluer lamelles (avant coloration) pour les indicateurs de neurones sains en utilisant la microscopie lumière transmise (par exemple contraste optique de phase à un grossissement de 10-20x). Les indicateurs de bonne santé: une couche uniforme gliale de cellule, une marge cellulaire clair autour des neurones, les dendrites étendues sans structures de perles, un manque de soma en cluster, et un manque de neurites groupés.\n2. Chargement du vésicules synaptiques avec le colorant FM (coloration)\nLa coloration due à l'activité synaptique évoquée par une stimulation de champ électrique (concerne les potentiels d'action)\nPréparez coloration solution 1 en ajoutant le colorant FM pour une solution sans colorant à base d'HEPES, la solution de Tyrode par exemple (voir SOLUTIONS pour plus de détails). La concentration de colorant FM est de 10 uM FM1-43 et 2,5 uM FM4-64. Gammes de concentration typiques sont: 2-15 uM FM1-43, ou 2,5-20 uM FM4-64 3,6. Pour les expériences nécessitant la suppression de récidivel'activité synaptique glutamatergique et l'induction de la plasticité synaptique, ajoutent en outre des antagonistes des récepteurs ionotropiques du glutamate: les récepteurs AMPA (par exemple, 10 uM CNQX) et des récepteurs de NMDA (par exemple, 50 pM AP5).\nTransférer une lamelle couvre-objet avec des cellules à partir du milieu de culture à la chambre d'imagerie pré-rempli avec la solution de Tyrode brut. Nous utilisons une chambre d'imagerie avec les électrodes de stimulation attachés aux parois latérales (fils de platine séparées par 6,3 mm, RC-21BRFS). Cette chambre est conçue comme une chambre d'imagerie fermée, mais on l'utilise en tant que chambre ouverte (c'est à dire sans lamelle couvre-objet en haut), avec un volume de bain de ~ 200 ul. Pendant le transfert, ne pas exposer les cellules cultivées à l'air, et ne pas pincer les cellules cultivées avec la pince à épiler (choisir la lamelle en place du périmètre plutôt que près du centre).\nPerfuser la chambre de formation d'image avec une solution de Tyrode brut à la température ambiante (23-25 ° C).\nAppliquer coloration solution 1 par coperfusion Instant.\nÉvoquer l'activité synaptique par l'application d'impulsions électriques. Pour la coloration maximale du pool total de recyclage des vésicules synaptiques dans les neurones de l'hippocampe, stimuler les cultures à 10 Hz pour 60-120 sec 24. Lorsque vous essayez d'atteindre une efficacité maximale de stimulation de champ, garder quelques éléments à l'esprit. 1) La hauteur de la solution du bain doit être aussi faible que possible, tout en conservant les neurones et les électrodes de stimulation entièrement immergés dans une couche mince de la solution de Tyrode (de façon à conserver les neurones vivants et pour obtenir un champ électrique homogène). 2) L'intensité du courant et la durée doivent être optimisés en utilisant un indicateur de l'excitabilité neuronale, par exemple fluorescent Ca 2 + imagerie; dans notre cas, un courant constant de 30 mA l'intensité et 1 msec donne des résultats fiables. 3) La solution du bain doit être appliqué à un débit constant au cours de la stimulation, la stimulation électrique conduit à l'électrolyse, ce qui provoque des protons (H Hanks, par exemple avec du rouge de phénol).\nLaissez les neurones dans une solution de coloration 1 pour un montant supplémentaire de 60 secondes après la stimulation de champ est terminée, de sorte que post-stimulus endocytose sera achevée 25.\nLaver la solution de coloration de la chambre d'imagerie par perfusion avec une solution de rinçage 1, la solution de un Tyrode sans colorant-plus des antagonistes des récepteurs AMPA et les récepteurs NMDA (voir section 2.1.1), et un bloqueur de tension dépendant de canaux Na + ( par exemple de 0,5 à 1 uM de tétrodotoxine, TTX). La combinaison d'inhibiteurs supprime la perte de colorant FM par l'activité synaptique spontanée. Afin de maximiser l'efficacité du lavage, augmenter le débit de perfusion (<em> par exemple, jusqu'à 6.5 ml / min) pendant 1 à 2 min, et ajouter un bolus (par exemple 1 ml) de solution de rinçage 1 directement à la chambre d'imagerie ouvert manuellement, à l'aide d'une pipette. Contrôler la force et la direction de la perfusion manuelle, afin de ne pas perturber les neurones en culture.\nLa coloration due à l'activité synaptique évoquée par solution haut de K + (ne concerne pas les potentiels d'action).\nPréparer coloration solution 2 en ajoutant le colorant FM à la solution de haute K + Tyrode. Plus précisément, préparer une solution de Tyrode modifiée avec 45 mM de KCl, par substitution équimolaire de KCl pour NaCl. Si nécessaire, ajouter des antagonistes de l'AMPA et NMDA. Cette solution haute-K + se dépolariser les neurones en permanence, permettre influx de Ca2 + dans les terminaisons nerveuses, et de lancer l'exocytose des vésicules synaptiques dans la mesure maximale 26. Des concentrations plus élevées (70-90 mm) ont également été utilisés dans d'autres rapports, par exemple Klingauf et al. 27 und Richards et al. 28\nTransférer une lamelle couvre-objet avec des neurones en culture à partir du milieu de culture à la chambre d'imagerie pré-rempli avec la solution de Tyrode brut.\nColorer les neurones à la température ambiante pendant 1 à 2 min par application d'une solution de coloration à deux perfusion constante ou à l'aide d'une pipette de 26,28. Dans ce dernier cas, la concentration finale de colorant doit être contrôlée par addition d'un volume connu de solution de coloration à deux à un volume connu de solution sans colorant.\nLaver la solution de coloration de la chambre d'imagerie, comme décrit dans la section 2.1.7.\nLa coloration due à l'activité synaptique spontanée et miniature.\nPréchauffer la solution à base de bicarbonate (par exemple, le Milieu Essentiel Minimum, MEM) à 37 ° C en plaçant dans l'incubateur de culture pendant plus de 60 min.\nPour la coloration en fonction de l'activité synaptique spontanée, préparer la solution de coloration 3 en ajoutant le colorant FM pour MEM. Pour la coloration sur la base de miniature activité synaptique, préparer la solution de coloration en ajoutant 4 TTX à la solution de coloration 3.\nneurones les taches en transférant une lamelle couvre-objet avec des neurones en culture à partir du milieu de culture pour la coloration solution 3 ou 4, et de les laisser dans la même solution de coloration à 37 ° C pendant 10 min.\nRincer la lamelle brièvement dans la solution 1 rinçage.\nTransférer la lamelle couvre-objet pour une solution de rinçage dans une chambre d'imagerie. Gardez à l'esprit ce qui suit. 1) Les cellules ne doivent pas être exposées à l'air, si nécessaire, transférer la lamelle couvre-objet directement à la chambre de formation d'image sans rinçage. 2) Les neurones peuvent être colorés à la température ambiante en remplaçant la solution de coloration 3 ou 4 avec une solution à base d'HEPES. 3) Les neurones peuvent être colorées pour l'activité synaptique évoquée dans le cadre de la solution de haut-K + à l'aide de cette méthode, en remplaçant la solution de coloration 3 ou 4 avec une solution de coloration à deux et en réalisant les étapes suivantes à la température ambiante.\nLaver la solution de coloration sur la formation d'imagechambre comme décrit dans la section 2.1.7.\n3. Lavage du colorant FM\nAprès coloration neuronale et lavage initial par l'une des méthodes décrites ci-dessus (section 2.1.7), continuer à perfuser la chambre de formation d'image avec une solution de rinçage pendant 5-10 min à température ambiante. Cela permettra d'éliminer le colorant FM à partir de la membrane plasmique et la solution extracellulaire. Dans le cas de notre chambre d'imagerie, le taux de perfusion bain est 600-1.200 ul / min. Le lavage peut également être réalisée en l'absence de Ca 2 + extracellulaire FM pour supprimer la perte de colorant en raison des activités synaptiques 17. Les lavages peuvent être améliorées par une brève application de Advasep-7, une cyclodextrine modifiée qui sert de fixateur de colorants FM à partir de la membrane de plasma de 29 à 31. Il est essentiel de garder tout Advasep-7 l'exposition de courte durée (par exemple 5 secondes dans le cas de la culture monocouche) pour éviter à la fois la réduction de l'intensité des points lacrymaux FM 31 et compromettre la HEAlth des cellules. La fluorescence de FM1-43 dans la membrane de plasma peut également être supprimée par une application d'un agent d'extinction de la sulforhodamine 101 (50 à 100 pM), qui ne pénètre pas dans les vésicules synaptiques 32.\n4. Recherche d'un terrain d'image optimale lors du lavage\nVérifiez que les cellules dans le champ à de représentation sont en bonne santé, en utilisant la microscopie de lumière transmise avec un objectif à fort grossissement et haute ouverture numérique (par exemple 40X). Dans cette section, nous continuons à utiliser un microscope inversé (Eclipse Ti, Nikon) équipé de contraste de phase ou d'interférence différentiel contraste optique. Ce microscope est également équipé avec Perfect Focus System (PFS) qui permet, correction de mise au point continue en temps réel, qui surmonte l'accent dérive du microscope. Cette fonction est essentielle pour l'imagerie time-lapse pendant décoloration avec le même plan de focalisation.\nVérifiez que la coloration a été efficace, en utilisant l'optique de fluorescence. Avagrégats oid de puncta FM moins qu'ils ne soient la cible de la recherche, car boutons individuels seront difficiles à discerner. Faites attention à la forme des points lacrymaux FM: si la plupart des boutons colorés apparaissent comme des colliers de perles circulaires, ils pourraient représenter les terminaisons nerveuses malsaines. Réduire l'exposition des neurones à forte excitation de fluorescence afin d'éviter photoblanchiment.\n5. Déchargement FM colorant du Synaptic vésicules (de décoloration)\nDécoloration due à l'activité synaptique évoquée par une stimulation de champ électrique.\nLaver TTX en perfusant les neurones abondamment avec une solution de rinçage 2 (identique à une solution de rinçage, mais sans TTX). Confirmer l'efficacité de TTX lavage dans des expériences séparées, en utilisant les mêmes paramètres de lavage (taux de perfusion et durée), par exemple par fluorescence Ca 2 + imagerie de cytoplasmiques Ca 2 + transitoires induits par la stimulation de champ, ou par l'enregistrement de patch-clamp de voltscourants Na + dépendant de l'âge.\nLancer l'imagerie des colorants FM. Pour imager FM1-43 ou FM4-64, utiliser 520 nm ou 650 filtres longue passe d'émission nm, respectivement, et un filtre d'excitation de 490 nm. Acquérir les images chaque 1-2 sec, en utilisant un court temps d'exposition (par exemple 10-20 ms), faible intensité d'excitation (par exemple 5-10% de la puissance LED), et une sensibilité élevée (par exemple, avec un gain de EM). Réduire photoblanchiment des colorants FM en réduisant le temps d'exposition et l'intensité de l'excitation de fluorescence. Réduire l'accent dérive du microscope en tournant sur le système mise au point parfaite.\nStimuler les neurones dans une solution de rinçage 2, en utilisant le terrain stimulation (par exemple à 10 Hz pendant 120 secondes) 20.\nAppliquer plusieurs cycles de stimulation, avec intermédiaires des périodes de 1-2 min de repos, d'épuiser toutes les vésicules synaptiques recyclage de colorant FM. Ceci est important lors de l'évaluation de la taille du pool total de recyclage des vésicules synaptiques qui ont été colorées avec des colorants FM en ee état antérieur 20,33.\nDécoloration due aux activités synaptiques évoqués en l'absence de potentiels d'action.\nLancer l'imagerie du colorant FM.\nAppliquer les réactifs de stimulation dissous dans une solution de rinçage 1 ou 2. De tels réactifs comprennent: KCl (solution à haute K +, par exemple 45 mM) 26, ionomycine (un ionophore Ca 2 + qui augmente la concentration en Ca2 + intracellulaire en permettant influx de Ca2 + dans la cellule à partir de la solution extracellulaire, par exemple, utilisé à 5 M) 20,34, et le saccharose (une solution hypertonique qui stimule la libération des vésicules synaptiques de la piscine facilement détachable, par exemple, utilisé à 500 mM) 35,36. Utiliser un système de perfusion rapide, local pour un contrôle temporel fiable dans l'application des réactifs, par exemple le système SF-77B de la Warner Instruments 37, ou système Lyre 38-40.\nDécoloration due à spontanée et miniature activité synaptique.\nPour la décoloration due à l'activité synaptique spontanée, laver TTX comme ci-dessus (section 5.1.1), en utilisant une solution de rinçage 2. Lancer l'imagerie des colorants FM en perfusion neurones avec une solution de rinçage 2. Pour la décoloration due aux activités synaptiques miniatures, commencer l'imagerie des colorants FM, tout en continuant à perfuser les neurones avec une solution (avec TTX) de rinçage.\nAprès décoloration basée sur l'activité spontanée ou miniature, identifier les terminaisons nerveuses fonctionnelles par décoloration par l'activité synaptique évoquée. L'activité peut être provoquée par l'une des procédures décrites ci-dessus. Ce processus d'identification est nécessaire parce que les structures colorées peuvent être des personnes autres que les terminaisons nerveuses fonctionnelles (par exemple le recyclage lentement endosomes ou des vésicules astrocytes) et une grande quantité de décoloration par les aides d'activité évoqués dans ce processus.\n6. L'évaluation du taux de photoblanchiment Colorants FM\nColorer les terminaisons nerveuses avec FM colorant aldéhyde-fixable (par exemple FM1-43FX, FM4-64FX). Ceci peut faire en utilisant la méthode de coloration spontanée ou évoquée miniature décrit ci-dessus, et en remplaçant le colorant FM FM avec un colorant pouvant être fixé.\nLaver le colorant FM fixable comme décrit dans la section 2.1.7.\nFixer chimiquement des neurones par le transfert de la lamelle de la solution de fixation: 4% de paraformaldéhyde et de 4% de saccharose dans la solution de Tyrode à 30 min à 4 ° C. L'intensité de fluorescence du colorant FM fixable sera conservée après la fixation chimique.\nLaver le fixatif pendant 10 min dans une solution de Tyrode, par le transfert de la lamelle de la solution de Tyrode fraîche deux fois.\nTransférer la lamelle couvre-objet dans la solution de Tyrode fraîche dans la chambre d'imagerie.\nLancer l'imagerie du colorant FM peut être fixée à l'aide du même ensemble de paramètres d'imagerie comme pour les neurones vivants. Il est important de rincer la chambre d'imagerie très bien après l'utilisation de tout spécimen fixes chimiquement, cartout en restant fixateur peut affecter ultérieures des expériences d'imagerie en temps réel des cellules réalisées dans la même chambre. Alternativement à l'imagerie cellulaire fixe, les cellules vivantes colorées peuvent être visualisés pour évaluer le taux de photoblanchiment. Toutefois, il convient de garder à l'esprit qu'il est difficile de bloquer l'activité synaptique miniature aiguë, par exemple, la fréquence de l'activité miniature peut être réduite à environ 50% en enlevant le Ca2 + extracellulaire 23, mais ce n'est pas une complète blocus.\nA la fin de chaque session d'imagerie, l'acquisition d'une image de fond pour l'évaluation de la valeur absolue de l'intensité de fluorescence FM. L'intensité des points lacrymaux FM représente non seulement le signal vrai à partir des colorants FM dans les terminaisons nerveuses, mais également le bruit de fond à partir de 1) les cellules gliales qui sous-tendent la culture monocouche neuronal, 2) la lamelle couvre-objet et les composants optiques (lentilles, par exemple l'objectif, des filtres et un miroir), et 3) le détecteur (caméra EMCCD). Le bruit de fond est assessed dans les régions nonstained du champ imagé. Lorsque ces régions sont limitées dans l'espace ou hétérogène dans l'intensité, la remplacer par une image avec l'obturateur de l'appareil fermé et acquérir le bruit du détecteur, même si ce n'est pas une méthode idéale. Acquérir environ 10 images en utilisant les mêmes paramètres d'imagerie.\n7. Analyse de l'image\nImporter les données acquises dans le logiciel d'analyse d'image comme une pile d'images de séries chronologiques. Nous utilisons ImageJ (WS Rasband, NIH), et les plug-ins associés, par exemple, stabilisateur d'image plug-in (Kang Li) pour corriger un petit degré de mouvement entre les points lacrymaux FM, et Time Series Analyzer V2.0 (Balaji Jayaprakash) pour analyser la série temporelle.\nCalculer les variations de l'intensité de la FM, au début et à la fin de la série (AFm). A cet effet, la moyenne des images avant le début de décoloration et après la fin de la décoloration (par exemple, 5 chacun) trames d'image, et générer une image de différence par subtracting eux.\nIdentifier les terminaisons nerveuses fonctionnels potentiellement en appliquant un seuil d'intensité de l'image de différence, et détecter des pixels dont les intensités sont supérieures au seuil. Un procédé de réglage du seuil est de choisir l'écart-type de l'intensité d'arrière-plan obtenues à partir de la zone de lamelle nu.\nIdentifier les isolés, les terminaisons nerveuses fonctionnelles que les pixels contigus qui ont été détectés et qui répondent à un critère de taille (nombre minimal et maximal de pixels de contiguïté). Ce processus élimine les bruits de fond et les terminaisons nerveuses agrégés de l'analyse.\nAttribuer régions d'intérêts (ROI) sur les groupes de pixels détectés (avec des clusters individuels correspondant à des terminaisons nerveuses individuelles). La variation totale de l'intensité au cours de décoloration (AFm) est un paramètre caractéristique de l'analyse. Cela représente le montant cumulé de l'activité synaptique évoquée, spontanée ou miniature. Exclure ROI si elles présentent une des caractéristiques suivantesvariations de l'intensité en fonction des fins d'expériences: une augmentation pendant l'enregistrement, une baisse soudaine avant la stimulation, ou une longue période de latence après stimulation.\nÉvaluer le taux de photoblanchiment par l'importation des données de séries chronologiques acquis dans le logiciel d'analyse d'image. La moyenne des images de fond (par exemple avec un volet fermé), et la soustraire de chaque image. Attribuer ROI à puncta FM qui correspondent putative de terminaisons nerveuses, et de mesurer les changements dans l'intensité du retour sur investissement dans le temps.\nLa solution de Tyrode\nComposition (en mM): 125 NaCl, 2 de KCl, CaCl 2 2, MgCl 2 2, 30 glucose, 25 HEPES, 310 mOsm, pH 7,4.\nSolution de coloration 1\nTyrode solution plus le colorant FM.\nCette solution est utilisée pour la coloration, sur la base de l'activité synaptique évoquée par une stimulation électrique.\nAjouter les antagonistes des récepteurs AMPA et NMDA receptors si nécessaire.\nSolution de coloration 2\nLa solution de High-K + Tyrode plus le colorant FM.\nCette solution de Tyrode modifiée est préparée en augmentant la concentration de KCl à 45 mM, par substitution équimolaire de KCl de NaCl.\nCette solution est utilisée pour la coloration, sur la base de l'activité synaptique évoquée par dépolarisation continue.\nAjouter les antagonistes des récepteurs AMPA et NMDA récepteurs si nécessaire.\nSolution de coloration 3\nSolution MEM plus le colorant FM.\nCette solution est utilisée pour la coloration, sur la base de l'activité synaptique spontanée.\nSolution de coloration 4\nSolution MEM plus le colorant FM et TTX.\nCette solution est utilisée pour la coloration, sur la base de l'activité synaptique miniature.\nSolution de rinçage 1\nTyrode solution ainsi que les antagonistes des récepteurs AMPA et les récepteurs NMDA, et TTX.\nSolution de rinçage 2\nTyrode solution ainsi que les antagonistes des récepteurs AMPA et les récepteurs NMDA, mais sans TTX.\nA titre d'exemple, nous montrons des résultats représentatifs pour le cours du temps de décoloration des vésicules synaptiques (figure 4). Neurones hippocampiques en culture ont été colorées avec FM4-64, en utilisant l'activité synaptique spontanée (étape 2.3) et lavées avec une solution sans colorant (solution de rinçage 2). L'imagerie montre le cours initial de temps de décoloration utilisant activité spontanée (étape 5.3) (partie initiale de la ligne continue, la figure 4A). Ceci est suivi par l'évolution dans le temps de décoloration en utilisant trois séries d'activité évoquée à une stimulation de champ 10 Hz pendant 120 secondes chacun (étape 5.1). Une façon de mesurer la quantité de décoloration provoquée est illustrée avec une double flèche (AFm évoqués) qui correspond à la taille du pool total de recyclage des vésicules.\nAvant la première impulsion a été donnée, il y avait une diminution progressive de l'intensité de la FM (agrandi sur la figure 4B). Cette diminution a été composé de décolorationen raison de l'activité synaptique spontanée (AFm Spont) et photoblanchiment (AFm PB). Lorsque la contribution de photoblanchiment est faible, la variation de la ligne de base preimaging (AFm Spont + PB AFm) peut être utilisée comme une approximation de la quantité de décoloration de l'activité spontanée.\nFigure 1. Structures de colorants FM. A. FM teintures part certaines caractéristiques structurelles communes. Les groupes hydrophiles restent en solution aqueuse et les queues hydrophobes permettent les colorants FM à partitionner en membrane. FM2-10, FM1-43 et FM1-84 montrent émission verte, tandis que FM5-95 et FM4-64 montrent émission décalée vers le rouge. B. Stereoview de FM1-43, colorant la FM la plus couramment utilisée. Groupe hydrophile est orientée vers le haut et queues hydrophobes sont orientés vers le bas. Nitratomes Ogen sont de couleur bleue. Pour une autre vue de FM1-43, voir Schote et Seelig 63.\nFigure 2. Schéma de principe de l'utilisation d'un colorant FM. Après application sur les neurones, le colorant FM insérée dans la membrane plasmique devient fluorescent (vert), alors que, dans la solution aqueuse est beaucoup moins fluorescent (gris). Une vésicule synaptique (SV) est chargé (souillé) par le colorant FM, lorsqu'il subit une endocytose, l'exocytose typiquement suivante. Lavage du colorant FM en solution extracellulaire permet que les vésicules colorées pour être fluorescent. Par la suite, une vésicule synaptique est déchargé (décolorés) quand il subit l'exocytose et libère le colorant FM donc. Une image ci-dessous illustre une coloration exemplaire des neurones d'hippocampe en culture avec FM1-43 (une superposition de fluorescence et de phase des images à contraste). Il est à noter que, dans le protocole décrit dans le présent document, les points lacrymaux fluorescentes représentent des terminaisons présynaptiques nerveuses (diamètre ~ 1 um dans les neurones centraux typiques) avec des grappes de vésicules synaptiques colorées, pas les vésicules synaptiques individuels (diamètre ~ 40 nm). Par souci de simplicité, ce système représente une idée générale de l'exo-endocytose des vésicules synaptiques. Il peut inclure plusieurs formes de exo-endocytose, telles que la fusion complète effondrement suivie par la clathrine endocytose, le kiss-and-run exo-endocytose transitoire, et l'endocytose en vrac 64. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 3. Trois types d'activités synaptiques étudiés par imagerie FM. L'activité synaptique évoquée nécessite généralement, des stimuli électriques externes. L'activité synaptique spontanée se produit en l'absence de stimuli électriques. L'activité synaptique miniature se produit spontanément sans stimuli électriques et sans potentiels d'action: le plus souvent l'action génération de potentiel est supprimée par un bloqueur de canal Na +, tétrodotoxine dépendant de la tension. D'autres activités incluent l'activité évoquée lorsque l'exocytose est stimulée par une solution high-K + (dépolarisation continue), ionomycine (augmentation continue de la concentration de Ca2 + cytoplasmique), et une solution hypertonique contenant du saccharose (susciter l'exocytose de vésicules dans la piscine facilement détachable), tous ce qui ne nécessitera pas de potentiel d'action tir de vésicules synaptiques à subir l'exocytose. Notez que, dans certaines études, l'activité spontanée est généralement défini pour englober l'activité miniature ainsi.\nigure 4 "fo: contenu width =" 5 po "src =" / files/ftp_upload/50557/50557fig4highres.jpg "width =" 500 "/>\nFigure 4. Résultat représentatif de décoloration. A. neurones de l'hippocampe en culture ont été colorées par l'activité spontanée avec 2,5 uM FM4-64 pendant 10 min à 37 ° C (étape 2.3), et lavées (protocole n ° 3). Les neurones ont été imagées pendant décoloration à l'activité spontanée (étape 5.3), et trois cycles d'activités évoqués (étape 5.1) (courbe continue, moyenne de n = 25 terminaisons nerveuses). Les barres verticales représentent SEM. L'axe des Y représente l'intensité absolue de FM et "0" représente l'intensité quand un obturateur de l'appareil est fermé. Le montant total de décoloration provoquée est indiqué (AFm évoqués). B. Une vue élargie de la phase initiale de décoloration dans la partie A (courbe continue, barres SEM omis pour plus de clarté). Lors d'une observation de 60 secondes, la détentrice est principalement due à acte spontanéivité (AFm Spont) mais est en partie due au photoblanchiment (AFm PB). L'évolution dans le temps de photoblanchiment de FM4-64 (courbe en pointillés d'épaisseur) a été déterminée dans une expérience séparée par imagerie fixable FM4-64 (protocole n ° 6). Le taux était de 2-3% au cours de 2 min (une seule fonction exponentielle avec une constante de temps de 5,736 sec, déterminé par emboîtement au-dessus de la courbe 9 min) 19. La courbe de photoblanchiment a été établi comme une fonction exponentielle avec une valeur initiale équivalente à celle de l'intensité mesurée de FM4-64. Voir Figure complémentaire S5 dans Kakazu et al. 19 pour le photoblanchiment sur la période plus longue (9 min), et avec la variable intensité d'excitation et le temps d'exposition. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nNous avons décrit les protocoles de coloration et de décoloration des vésicules synaptiques en réponse à évoqué, l'activité synaptique spontanée et miniature, et pour l'imagerie au cours de la phase de décoloration. En plus des protocoles existants, nous avons inclus un nouveau protocole d'observer la décoloration FM sur la base de l'activité synaptique miniature. L'utilisation de ces protocoles, nous l'avons déjà identifié des anomalies dans les neurones en culture à partir d'un modèle de souris de la dystonie de troubles du mouvement. En comparaison à leurs homologues chez les souris de type sauvage, ces neurones ont subi une accélération synaptique exocytose des vésicules dans un 2 temps + dépendante Ca lorsqu'il est stimulé par une forte activité 20. Ces neurones ont également montré l'activité synaptique miniature plus fréquents, comme l'a confirmé par des enregistrements électrophysiologiques de patch-clamp de la libération de neurotransmetteurs 19.\nL'aspect critique du protocole pour l'utilisation de colorants FM dans de telles analyses est à Asseart et de minimiser photoblanchiment. Des changements subtils dans l'intensité de fluorescence FM peuvent être évalués de façon fiable si les changements causés par photoblanchiment sont petites par rapport à celles provoquées par l'activité synaptique. Photoblanchiment réduite a aussi le potentiel pour supprimer ou éliminer cytotoxicité. Photoblanchiment peut être réduite en minimisant l'exposition des fluorophores à une excitation lumineuse, et il ya au moins deux composants de matériel pour ce faire des expériences en direct d'imagerie. Un élément important est un détecteur sensible de photons, par exemple, une caméra EMCCD. Ceci permet de minimiser la durée et l'intensité de l'exposition, sans affecter négativement la détection d'une émission de fluorescence. Un composant associé est le système de source de lumière qui limite l'exposition de l'échantillon à la lumière d'excitation que lorsque le détecteur acquiert des images. Ceci est facilement réalisé par une lumière 41 LED qui permet un contrôle efficace du moment de l'exposition de lumière (ON / OFF tComprennent beaucoup moins de 1 ms). L'exposition peut être déclenchée que pendant la capture d'image, par la sortie numérique de l'appareil photo (par exemple terminal "Fire" à huis clos Andor). D'autres avantages de l'utilisation de la LED comprennent: la capacité de contrôler l'intensité de la lumière sans l'aide de filtres neutres de densité, stabilité à long terme de l'intensité lumineuse, et l'absence de vibrations mécaniques qui pourraient interférer avec une manipulation de précision de pipettes en verre comme dans l'enregistrement patch-clamp .\nEn général, les colorants structuralement différents de photoblanchiment à des vitesses différentes dans les mêmes conditions de formation d'image. Ainsi, il serait idéal pour évaluer l'ampleur de photoblanchiment du fluorophore utilisé dans une expérience particulière. Pour les colorants FM dans les terminaisons nerveuses vivantes, il est techniquement difficile d'évaluer le taux de photoblanchiment indépendante de l'activité synaptique, en raison de l'activité synaptique spontanée ou miniature. Une diminution de l'intensité de la fluorescence au cours de cette activity pourrait être dû à la perte biologique des colorants (FM), d'exocytose photoblanchiment des colorants FM, ou les deux. Heureusement, les structures des colorants pouvant être fixés FM sont conçus pour être pratiquement identiques à celles des colorants FM nonfixable. Dans le protocole décrit ici, les colorants pouvant être fixés FM ont été chargés dans les vésicules synaptiques par les mêmes procédés que les colorants FM nonfixable, alors que l'activité synaptique a été bloqué ensuite par la fixation chimique de l'échantillon. En particulier, le taux de photoblanchiment mesuré en utilisant ce système était aussi bas que 3.2% de plus de 2 min, lorsque les conditions de formation d'image sont les mêmes que ceux pour l'imagerie des cellules vivantes 19.\nColorants FM peuvent être utilisés avec des protocoles différents pour explorer divers aspects du recyclage des vésicules synaptiques. Activités synaptiques différents au cours de la coloration et décoloration peuvent être combinés de différentes manières, selon les objectifs et les fonctionnalités expérimentales spécifiques de recyclage des vésicules synaptiques à évaluer. La sélection de antagonists dépend aussi de l'objectif de l'expérience. En outre, l'imagerie FM peut être réalisée pendant la phase de coloration, ainsi que pendant la phase de décoloration 9,18,42. Il convient également de garder à l'esprit, cependant, que les colorants FM peuvent avoir des effets inattendus, tels que le blocage des récepteurs muscariniques de l'acétylcholine 43, et imprégnant les canaux de mechanotransducer 44, magasin fonctionnant canaux Ca 2 + 45, et de l'ATP récepteurs 46. De fortes concentrations de colorants FM peuvent potentiellement modifier l'efficacité de l'exocytose des vésicules synaptiques se 47. Ainsi, nous recommandons la prudence dans la conception des expériences et l'interprétation des résultats concernant le recyclage des vésicules synaptiques. Méthodes complémentaires à prendre en compte comprennent l'absorption dans des vésicules synaptiques des anticorps dont les épitopes sont des domaines intra-luminales de protéines vésiculaires 22,48. Ils comprennent également exprimant la GFP sensible au pH des variants ciblés de lumière de la vésicule 49 à 51, et l'absorptiondes conjugués d'anticorps sensibles au pH de 52 à 54 fois de ce qui détectent les variations du pH intra-vésiculaires accompagnant exo-endocytose.\nUne fois que ces effets indésirables sont exclus, colorants FM ont de larges applications. Par exemple, ils peuvent être utilisés pour examiner si les mêmes piscines des vésicules synaptiques sont partagés pour spontanée et évoquée vésicules rejets 17,55, dans quelle mesure l'efficacité du recyclage des vésicules synaptiques peuvent être réglementés 56,57, et quels sont les effets fait un état antérieur (repos ou stimulé) exercent sur l'état plus tard de recyclage des vésicules sur la base, par exemple, spontanée et l'activité synaptique miniature. FM colorants peuvent également être utilisés pour évaluer recyclage des vésicules synaptiques au niveau ultrastructural, en mettant en corrélation les observations de la lumière et microscopie électronique par le procédé de photoconversion FM 30,58-62. Colorant FM peut être utilisé pour surveiller simultanément les fonctions synaptiques et intracellulaire de Ca 2 + concentration 5. En plus de l'étiquetage des vésicules synaptiques, les colorants FM et d'autres marqueurs fluorescents en phase liquide tels que le dextran fluorescent 7 peut être utilisé pour surveiller le nombre d'endocytose qui est déclenchée par une activité neuronale intense. En conclusion, les applications de colorants FM constituent une source inestimable d'informations sur le recyclage des vésicules synaptiques et les fonctions synaptiques supplémentaires.\nLes auteurs remercient les membres du laboratoire Harata pour des discussions utiles tout au long de l'exécution de ce travail. Ce travail a été financé par des subventions de l'American Heart Association, la Dystonia Medical Research Foundation, Edward Mallinckrodt, Jr. Foundation, la National Science Foundation et la Fondation Whitehall à NCH


2012-09-02 Andrianjaka, fondateur de la ville des mille - Agir avec Madagascar\nLes sillons du passé : Andrianjaka, fondateur de la ville des mille\nAndriamanelo à Alasora, Ralambo à Ambohitrabiby, et Andrianjaka à Analamanga… il faut remonter jusqu’à ce fils cadet de Ralambo pour retrouver la paternité d’Antananarivo ! Primitivement occupée par les Vazimbas jusqu’aux alentours de 1610 quand Andrianjaka décida de conquérir cette colline sacrée pour y installer sa capitale, Analamanga était une belle crête forestière qui donnait à la future Antananarivo une opulente crinière d’émeraude. Andrianjaka fit la conquête d’Analamanga sans coup férir. Les Vazimbas voyant la puissance de feu dont disposait l’armée royale, ont choisi de se soumettre pour ne pas verser inutilement du sang et subir de lourdes pertes.\n« Que l’on soit mille en cette ville ! »… On prête à Andrianjaka ces paroles quand il arriva au sommet d’Analamanga, formulant des vœux, mais aussi dispensant grâces et bénédictions. Ainsi est née Antananarivo, « la ville des mille » qui devait par la suite faire d’un proverbe célèbre sa devise : « Ny arivolahy tsy maty indray andro » (Milles guerriers ne meurent pas en un jour).\nAndrianjaka venait ainsi d’entamer la construction de la plus grande cité de l’Imerina, plus tard de Madagascar.


Code promo et reductions Sports & Loisirs\nMis à jour le 06-04-2020\nListe des marchands proposant des réductions ou des codes promos Sports & Loisirs.\nCodes promos Les Prot�ines - Apr�s plus de trois ann�es d�existence, LesProteines.com est devenu le leader de la Distribution Directe de compl�ments alimentaires pour le sport et la sant� sur le march� fran�ais.\n5% de r�duction sur tout le site ...\n10� de remise sur le pack Perte de Graisse acc�l�r ...\n10% sur tous les produits de la marque US Met-Rx, ...\n10% sur le leader des compl�ments alimentaires fit ...\n15� de r�duction sur le pack force et croissance m ...\n5% de r�duction sur la marque Leader en Angleterre ...\nCodes promos Fitness boutique - Boutique sp�cialis�e dans l��quipement et le mat�riel de fitness et de musculation sur le net. D�couvrez tous les produits cardio training, di�t�tique et Home Fitness du marche : tapis de course, rameurs, steppers, �lectrostimulation, v�los d'appartement.\n-7% de remise suppl�mentaire sur toute la marque K ...\nExclusif 15% de remise suppl�mentaire sur toute la ...\nCodes promos 1monde2sport - Sport de combat, arts martiaux, mat�riel de boxe, protection et accessoires de sport.\nB�n�ficiez d'un remise de 5% sur l'ensemble des ar ...\nB�n�ficiez d'une remise de 8 % sur l'ensemble des ...\nCodes promos ActuFitness - Tapis de course, rameurs, v�lo d'appartement, stepper.\nMusculation : banc, presse, systeme de musculation, electrostimulation et dietetique au meilleur rapport qualit�/prix\n7% de remise sur tout le site Actufitness hors art ...\nCodes promos Diet boutique - Decouvrez plus de 300 references produits pour la nutrition sportive et la dietetique grand public (vitamines, complements alimentaires, proteines, acides amines...), ainsi que des dossiers et des conseils de specialistes.\nCodes promos Bien Etre Avenue - "Boutique et conseiller en bien-�tre, beaut�, forme, confort, minceur.\n5% de remise sur tout le site Bien-etre-avenue hor ...


La BP 16 (base bibliographique des éditions parisiennes du 16ème siecle) est en ligne – BiblioMab : le monde autour des livres anciens et des bibliothèques\nExit la publication imprimée des manuscrits de Philippe Renouard sur les éditions parisiennes du 16e siècle. La BP 16 (base bibliographique des éditions parisiennes du 16ème siecle) est maintenant accessible en ligne. Pour l’instant « ce site contient les 10 000 notices des cinq volumes de l’Inventaire chronologique des éditions parisiennes du 16e siècle, imprimés entre 1972 et 2004 et couvrant les années 1501 à 1540, rédigés pour les quatre premiers par Brigitte Moreau (1930-1994). Les notices des éditions publiées de 1541 à 1550 feront l’objet d’un prochain chargement. »\nUtilisant le web sémantique, les notices permettent de regrouper de nombreuses informations ensemble : auteurs, lien vers Gallica, localisation… La recherche se fait par édition (avec filtre par date, imprimeur-libraire, auteur…), par index ou directement en recherche globale. Un « work in progess » à saluer qui vient s’ajouter à la base Reliures numérisées de la Bnf dont j’avais déjà parlé.\nfévrier 24, 2014 février 27, 2014 bibliomabressources16e siècle, édition, bibliographies, imprimerie, livres, Paris, Renaissance\n2 réflexions au sujet de « La BP 16 (base bibliographique des éditions parisiennes du 16ème siecle) est en ligne »\nLa BP 16 (base bibliographique des édit...\n[…] Exit la publication imprimée des manuscrits de Philippe Renouard sur les éditions parisiennes du 16e siècle. La BP 16 (base bibliographique des éditions parisiennes du 16ème siecle) est maintenant accessible en ligne. […]\n[…] tous ceux qui s’intéressent aux livres anciens et vous pourrez le compléter avec Bibliomab et Cornucopia […]\nArticle précédent Gustave Doré : l’imaginaire au pouvoir au Musée d’Orsay et en ligne\nArticle suivant Bretania, le portail des cultures de Bretagne


[SE-UNSA 76] Référentiel de compétences professionnelles : pourquoi il faut revoir la copie\nLe vendredi 31 mai 2013\nRéférentiel de compétences professionnelles : pourquoi il faut revoir la copie\nLe référentiel de compétences professionnelles des professeurs et conseillers d’éducation a été soumis à l’avis du Conseil Supérieur de l’Education du 16 mai. Ce référentiel doit servir de cadre aux maquettes de masters des métiers de l’éducation qui seront mis en place dans les futurs ESPE à la rentrée.\nEn fait, les universités se sont appuyées sur une première version finalisée dans l’urgence début février après plusieurs séances de travail avec les représentants des organisations syndicales. Cette première version, encore très imparfaite, marquait des améliorations importantes par rapport au projet initial que le ministère avait élaboré en décembre. L’argument de l’urgence ne tenant plus, le SE-Unsa, appuyé par le Sgen-CFDT, a exprimé son souhait en CSE d’améliorer le projet et a obtenu le retrait du projet de texte qui sera présenté à nouveau en juin, car des garanties pour les personnels sont nécessaires.\nUn syndicalisme exigeant, responsable, qui agit\nEn syndicalistes exigeants et responsables, nous nous sommes battus pour que ce référentiel soit d’abord lisible et utilisable, en obtenant notamment l’explicitation de la notion de compétence et la réduction significative des compétences, qui sont passées de plus de cent à une vingtaine actuellement. Avant que ce référentiel ne soit présenté de nouveau pour vote au CSE, nous proposons deux modifications que nous jugeons fondamentales, et qui placées dans la partie introductive, éclaircissent l’usage et la portée du texte :\nLa première indique clairement que l’ensemble de ces compétences ne sauraient être exigibles des jeunes enseignants et que l’institution porte une responsabilité importante dans leur acquisition et leur approfondissement par la formation continue.\nla seconde indique que les items ne sont pas des prescriptions qui s’ajoutent les unes aux autres mais de simples exemples de mise en œuvre possible des compétences.\nPour le SE-Unsa, ces modifications sont des garanties pour qu’au final ce référentiel serve bien à construire positivement et progressivement les compétences professionnelles de nos futurs collègues, qui ne peuvent acquérir toutes ces compétences en formation initiale.\nUne cohérence indispensable\nNous soutenons l’idée d’un référentiel de compétences professionnelles qui guide la formation initiale en établissant l’assiette la plus large possible de compétences communes à tous les métiers du professorat et de l’éducation. Mais nous aurions souhaité une approche plus didactisée et plus qualitative des compétences, qui énoncent, plutôt que des items déclinables à souhait, des niveaux d’exigence en fin de formation initiale et les situations professionnelles dans lesquelles elles s’exercent. Nous regrettons par ailleurs que les compétences professionnelles nouvellement évaluées aux concours de recrutement soient déconnectées de ce référentiel. Ce travail important réalisé autour du référentiel de compétences professionnelles doit être une base pour repenser de manière plus globale la formation initiale et continue des personnels, ainsi que leur évaluation. Mais nous n’accepterons pas que ce référentiel « ambitieux » et trop exhaustif dans la déclinaison des items puisse être utilisé en l’état pour l’évaluation des enseignants et CPE en exercice. Le SE-Unsa sera vigilant sur l’usage qui sera fait de ce référentiel et sur la mise en cohérence qu’il implique pour tous les volets de la professionnalisation nécessaire de nos métiers.\nLoin du syndicalisme de posture, le SE-Unsa pratique le syndicalisme utile, exigeant à la fois pour la réussite des élèves et pour la défense des personnels.


Blog de pitchou0311 - mon ptit blog - Skyrock.com\nVous trouverez ici tt ce qui me passe par la tete !!! Mes délires, mes messages etc...\nCréation : 13/07/2004 à 02:58\nMise à jour : 07/02/2006 à 14:58\nBienvenue à toi Anaelle\nVoila, la petite dernière de la famille Simonnet viens de pointer le bout nez....\nC'est la fille de Claire et Mathieu (mon cousin !!!!)\nElle s'apelle Anaelle....\nDerniere année avec les avantages -25 ans !!!!\nEn milieu de semaine, j'ai eu la joie de passé un ptit cap !!!! Et oui maintenant il me reste plus qu'une année a profité des avantage de - 25 ans !!!!!\n# Posté le samedi 05 novembre 2005 05:20\nUne petite dédicasse\nJuste une petite dédicasse a la Frip en Amérique !!!!!\nDepuis fin Aout Vio est partie aux USA !!!! Elle nous manque pas mal, mais bon a trop de chance qu'elle tienne a jour son blog pour prendre des news !!!!!\nVio je pense bien a toi !!! Profite bien de cette année, et rdv a noel qd tu repassera sur le sol francais !!!!\n# Posté le mercredi 05 octobre 2005 16:04\nRECHERCHE IMPORTANTE ET URGENTE\nLe Groupe Scout Marin de St Léon, Paris XVeme (Scout de France) recrute:\n- Tu aimes la voile, tu veux vivre une super expérience de Scoutisme chez les scouts de france, Tu as entre de 14-17 ans, alors viens nous rejoindre chez les Marins de St Léon dans le 15°. Nous recherchons des Marins et des Marines car le groupe est coéduqué !!!! (super ambiance déjà parmi les 17 marins présents :) )\nSi ca t'interesse alors n'hésite pas a mailé Bao au : leeloo2910@hotmail.com\n- Tu as ton BAFA ou une partie, et tu aimes la voile, tu veux t'engager dans une association pour donner de ton temps et partager de super expériences. Viens rejoindre le groupe de St Léon !!!! Nous sommes a la recherche d'une cheftaine pour les Mousses (filles + garcons) de 11-13 ans !!!!! (n'hésite pas a me contacté en laissant un commentaire !!!!)\nCette année je reprend !!!!\nJe viens de trouver un groupe de scout marin qui a besoin de chef !!!! Cette année je reprend donc les scouts !!!! en plus c'est des marins !!! que demander de plus !!!!\nen tt cas ca va être super !!!!


Comment mettre en place un compost ? - Astuces Vertes\nLes personnes qui n’ont pas de compost chez eux, c’est soit parce qu’ils ne sont pas renseignés sur le sujet, soit qu’ils n’en n’ont pas l’envie, ou qu’ils n’ont apparemment pas le temps ou l’argent. Alors sache qu’avoir un compost chez soit ce n’est pas très compliqué, à moindre coût si tu lis mes conseils qui vont suivre, très rapide à mettre en place, en extérieur au fond du jardin, en appartement sans jardin ni balcon rien n'est impossible !\nSache que le compostage permet de réduire 30 à 40 % des déchets en cuisine soit un ⅓ de la poubelle d’un foyer, ou bien encore une centaine de kilogrammes de déchets recyclables par habitant, par an. Et là tu te dis oui mais j’en fais quoi de mon compost si je n’ai ni plantes ni fleurs ? Tu vas déjà jeter un coup d’œil sur mes articles potager d’intérieur et d’extérieur qui te donnera peut être envie de t’y mettre et sinon tu peux toujours faire du troc avec tes proches qui pourraient en avoir besoin. Tu remarqueras que j’ai toujours le dernier mot et solution à tous tes problèmes ! Donc pas d’excuse à présent tu peux avoir ton propre compost.\nC’est recycler les déchets verts du jardin et les déchets principalement de la cuisine. Il permet la transformation des déchets en terreau très riche, les déchets se décomposent grâce aux bactéries, micro-organismes, et macro-organismes (les vers par exemple). Cela te permet de réduire tes déchets et donc de tendre vers le zéro déchet, de ne plus avoir à acheter d’engrais en jardinerie ou grande surface et donc d’utiliser un fertilisant 100% naturel. Le compost nourrit les plantes, les rends plus saines et plus résistantes aux maladies.\nTon compost doit absolument être à l’ombre sinon il va très vite sécher et tu n’auras pas facilement du terreau voir pas du tout car il doit toujours rester humide. Mais il doit également avoir un peu de soleil au cours de la journée. Si il a trop d’ombre il sera trop humide et finira par pourrir si il a trop de soleil il va dessécher beaucoup trop vite et ce n'est pas trop le but ! Il faut également qu’il soit en contact direct avec le sol qui est une source directe de micro-organisme et favorise alors le développement du compost.\nLes différentes méthodes de compostages\n1) Le compostage en tas\nBon comme son nom l’indique c’est créer son compost sur un peu de terre labourée au fond du jardin. Je te la conseille pas trop parce que ça demande beaucoup de travail notamment pour les mauvaises odeurs, les mouches etc. Donc voilà je t’informe juste qu’il y a cette méthode mais en vrai je ne t’en parlerais pas plus que ça parce que j’aime pas trop son principe !\n2) Le compostage de surface\nTout comme le compostage en tas son objectif majeur est d’entretenir, d’améliorer la qualité du sol par les déchets organiques. Il n’a pas vraiment le même processus qu'un compost on parle plus de paillis. C’est à dire que les déchets sont étalés à même le sol.\nCette méthode demande moins de travail car il n’y pas besoin de remuer le compost. J’aime beaucoup celle ci car elle permet également de maîtriser les mauvaises herbes.\nOn utilise notamment des feuilles mortes, de la pelouse tondue, des choses fanées de ton potager.\nIci on compost directement dans un contenant (le silo) très souvent commercialisé en plastique mais je te conseille de privilégier le bois, tu peux également le faire toi même apparemment c’est pas très compliqué. Au niveau des avantages, c’est clairement un gain de place, ça accélère le processus de compostage et c’est quand même plus esthétique.\nPour le fonctionnement ça marche comme le lombricomposteur. Il doit être placé mi-ombre mi-soleil.\nComposter en intérieur : c’est possible !\nIl existe un système de compost d’intérieur qui s’appelle le lombricompostage. C’est un sorte de mini poubelle où tu vas pouvoir mettre tous tes déchets recyclables. Cette méthode permet d’avoir 45 kg de compost par an. Tu te dis surement “Ah non pas de compost à l’intérieur c’est dégoûtant bonjour les mauvaises odeurs !” Figure toi que le lombricomposteur ne dégage aucune mauvaise odeur sauf si tu mets quelques déchets qui en dégage une trop forte pour être arrêter par le lombricomposteur.\nDonc ne met surtout pas d’épluchures d'échalotes, d’ail, d’oignons et aucuns restes d’origines animales c’est le seul inconvénient que j’ai trouvé concernant le fait de composter à l’intérieur, parce que sinon son côté facile d’utilisation, peu encombrant qui te permet de moins jeter de déchets à la poubelle je trouve ça quand même pas mal !\nPour l’utilisation suit bien ce qui est écrit sur ton lombricomposteur, ça n’est pas très compliqué tu as juste recouvrir de terre tes déchets ou d’un carton non humide afin de conserver le plus possible l’humidité\nAttention à bien le surveiller, tu peux mettre un peu d’eau si tu vois que c’est sec. Il faut le remuer 1 fois par semaine aussi pour favoriser son développement et voir comment cela évolue. Tu obtiendras du compost en quelques mois, mais tu peux accélérer la décomposition des déchets en ajoutant des vers de terreau que tu trouves en jardinerie, ou une poignée d’ortie qui sont deux supers activateurs de compost.\nCe que tu peux mettre et ne pas mettre dans ton compost\nJ’en parlais un peu plus tôt, évite les produits d’origine animales, épluchures d’ails, oignons, échalotes qui dégagent des odeurs fortes lors de leur décomposition.\nCertaines choses ne se décomposent pas comme les noyaux d’avocats, les épineux comme les rosiers quoique broyés tu peux les mettre dedans mais non broyés c’est pas la peine !\nTu bannis le pain rassi qui attire les rongeurs, et évite les fruits à coque très long à la décomposition.\nAlors ne t’inquiète pas tu peux mettre tout le reste comme des épluchures de légumes, de fruits (sauf les agrumes qui sont trop acides pour le compost) du carton humide, papier absorbant usagé, coquilles d’œufs écrasées les pour que ça se décompose plus facilement, filtres à café, marc de café, sachet de thé, restes de pâtes, de riz.\nJ’ai fait le tour de ce que je trouve le plus important pour réaliser son compost maintenant à toi de jouer le jeu !\nOne comment on “Comment mettre en place un compost ?”\nLes produits d'entretiens zéro déchet - France Presse dit :\n02/06/2020 à 9:02\n[…] pour frotter les joints de tes carreaux sur le sol par exemple. Ces derniers peuvent être compostés à la fin de leur vie, c’est l’idéal pour ta démarche zéro […]