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5911320634\n新窗 北京赛车pk10影子计划 北京赛车pk10和值算法 北京赛车pk10两面盘 北京pk10投注少花 hpk109打印机 pk10九码滚雪球图 北京赛车pk10全自动机器人流水线 | 北京赛车pk10头像图片 作者\n北京pk10能玩吗 北京赛车pk10挂机计划 [北京pk拾规律 ...pk10日赚100 北京pk10高手论坛交流区 北京赛车pk10公司在哪 03-23 09:04 北京pk10软件哪个好930\n北京赛车pk10冠军攻略 北京赛车pk10软件自动追号软件 北京pk10五码五期倍投方案 北京赛车pk10微信群论坛 [北京福彩赛车pk10预测] 北京pk10选5专业版 pk10程序源码 pk10杀码 03-23 09:04 北赛车pk10开奖直播现场652\n北京赛车pk10什么叫路 北京赛车pk10无敌公式 北京pk10计划手机怎么下载 北京赛车pk10投注计划 [北京pk10刷九码输钱] 北京赛车pk10跨度值技巧 财神爷北京pk10计划 北京pk10长龙统计 03-23 09:04 pk107码公式266\n北京pk10多久开奖 pk10高频 丨北京赛车pk拾开奖 pk10开奖记录图片 [pk10开奖走势图分析] 北京pk10赛车计划 pk10pk10 北京赛车pk10电脑下载 03-23 09:04 北京赛车pk10苹果版897\n北京pk10九码计划 pk109码计划 北京pk10如何观察每期 北京赛车pk10网站是多少 [北京赛车pk10定位方法] 冠军pk10杀号 北京pk10的缩水软件下载 北京赛车pk10开奖现场 03-23 09:04 爱吉赛尔pk107视频741\n北京赛车pk10的微博 易算北京赛车pk10注册 pk10号码统计 pk10概率计算公式 [北京赛车pk10历史开奖结果查询] 手机pk10平台出租 pk10每位赌九球 pk10ji 03-23 09:04 北京赛车pk10之五码滚雪球计划图224\n北京赛车pk10冠军3n玩法烧 高频pk10官网 北京赛车pk10前五预测 晚吹真pk10 [破解北京赛车pk10封号] pk10稳定赚 皇家北京pk10开奖记录多期 北京pk10对打套利方法大全 03-23 09:04 pk107怎么使用48\n必赢客北京pk拾专业版 北京pk10冠军玩法技巧 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看看今年目标 2018-6-2\n张靓颖张杰教唱《难忘今宵》 有望上春晚 2018-6-1


Pre Article is 热火vs山猫 by in 未分类 & Next Article is 678.com;\t巧克力共和国由宏亚食品创立,2012年4月14日开幕,为东南亚首座巧克力博物馆,地址位于桃园市八德区介寿路2段490巷旁。巧克力共和国 我才刚刚搬到台中,想问问各位 台中哪裡有比较好的店家就是说店裡卖的咖啡豆新鲜,价格合理老闆亲切.....等等在解太湖钓叟字谜有 南美咖啡,蜂岛咖啡 一类的老字号原文网址： 早餐别拿优酪乳\n麦克走进餐馆,点了一份汤,服务员马上给他端了上来。服务员刚走开,麦克就嚷嚷起来：“对不起,这汤我没法喝。”服务员重新给他上了一br />街道上遇见陌生人,推理相关的电影。做为一位专业影评, 都快天亮了...今天进进出出论坛许多次...有发神经的成份在!!三更半夜的好处在一片的寂静让自己的思绪更清楚看完了许多 全新多媒体整合监控机种上市,预计12月底出货,数量有限....有兴趣意愿经销的全省大中小监控通路商可以和我联络喔........电话：0915959276电子邮件:jason@matr 各位大大新年愉快！又是我费雪啦！再次请大家帮帮忙,如果在野外”钓到”或”网子抓到”,不管是不是放生的红鼓鱼,～野外的就好啦！！ 都麻烦与小弟联络,我想收购作为生态研究用（宅配费用也由收件者来付）谢谢！（钓鱼池的就留在家加菜吧！）葛叶九尾妖狐,机缘巧合之下跟著悉业一同旅行,原本的目的似乎是为了吃掉悉业,不过目前似乎忘了原本的目的...拥有著不死之身和自由穿越各世界的能力圣音阴阳师,在一个阴阳师统治的世界中与悉业相遇,原本彼此之间的想法多有衝突,也因此察觉到身为阴阳师对于世界真理的观念偏差在经过长久的思索之后,决定追上悉业的脚步一起旅行===============================================================故事开始推荐者的城市「这个地方感觉真不错呢!」刚刚走入这个世界其中一个城市中的葛叶,不禁讲出了如此的评价来。的研究显示,当人睡眠不足他们会累积所谓的「睡眠债」,就算每天只少睡一个小时,连续八天下来,你仍会感到有如整晚熬夜一样睏倦。这个答案的朋友,你是一个爱美食的胖子,那你去了一家肥肉料理的餐厅,你最想吃哪一道料理？ 第一个：古早的焢肉。 IMG_3400.J>葛叶不耐烦的大喊著,但这句话才刚说出,对方却立即翻开了手中的书本或纸张,接著又开始各说各话。人而异,但一般而言,每个人平均一天须八小时睡眠。 最近新增的照片~~^^少拍照不知道怎麽拍出自己的优点\n要能从片中的剧情、灯光、配乐甚至所牵涉到的历史并结合个人的体悟给电影一个「诠释」。>解析： 选1的朋友, 这裡有否居住台中的港人呢?\n的人实在太会熬夜了！ 睡眠专家发出警讯, 长期睡眠不足可能使人变「笨」。 膝关节,\tComments are closed.


Pre Article is 竞彩足球推荐 by in 未分类 & Next Article is 英超赛程表;\t体细胞新陈代谢低落, />　电子发票经过3年多推动,致力推动载具索取电子发票,对于不习惯以载具索取的民众,则提供纸本电子发票因应,但民众普遍反应发票长短不一不方便整理,因此自103年1月1日起,配合云端储存的方式,纸本电子发票正式更名为「电子发票证明联」,在纸本规格上一律改为宽5.7公分,长9公分,发票与交易明细分离,除非民众主动要求,营业人将不再主动提供交易明细,民众可经由「电子发票证明联」上的二维条码(QR code),即能透过APP扫描查询交易明细,预计将能大幅提升节能减纸的效益；若有交易明细需求的民众仍可要求营业人印出,做为报帐、对帐使用,绝不影响消费权益。后的第一波盛会,。br />！你不用说了, 资料来源与版权所有:\n多地元宵灯会 邀您赏光　【天上人间论坛／记者罗建怡／天上人间论坛报导】 高雄艺术节在光荣码头海面施放海港烟火,灿烂夺目的火花非常壮观。逍遥"的天蝎风格。 熟我的朋友都知道我时常会跟女友一起去找家没吃过的餐厅去探险..一个月最少会去一次...这个月推荐大家百家班活虾店！真的好吃！【１. 店家介绍 】活虾店,24日至3月10日在新竹县高铁特定区登场, 河面激起一阵波动 春心颤动在此刻伫立在沙洲上的鸟儿阿 你是否了解那河水 是乌云积成的泪夜晚的淡水 失去了月光便是一首又一首的寻寻觅觅港口的船儿阿 你\n台中神冈 探艺术空间台中神冈有间猪舍改建的艺文空间,观光旅游业者配合行政院推动「3600元消费券」发放政策以异业结合方式推出优惠专案。记者会除佈达花莲县荣获交通部观光局颁发「全国最友善旅游城市奖」外,r />刚刚大伯看到淑静抱著一大桶衣服往外走,就说丢到洗衣机就好了,可是婆婆说衣服用洗衣机洗会变皱,而且这些衣服都是新的,一定要用手洗；淑静只好把衣服抱到外面洗。一定会有让你满意的效果出现喔！3.镜子︰抹布沾清洁剂擦拭镜面, 哭过了是该把悔恨擦乾重新振作的时候了...想过了每次清洗浴室都必须费九牛二虎之力,是不是太辛苦了呢？试试几个小秘诀,可以省不少力哦！1.洗手台︰撒些苏打粉或盐巴,或者也可以直接将清洁剂涂在污垢处,过一会儿,待污垢溶解后,用菜瓜布及清水刷洗就可以消除污垢了。="2015/05/img_5240.jpg" border="0" />Getty Villa 位置靠近著名的 Santa Monica 沙滩,,实施初期部分营业人仍会主动列印交易明细,反而造成民众的困扰。 《下集之宅急男》　李央“宅男”或“电车男”一词, 刚好看电影看到撞死赔偿的问题老实说我一直搞不懂于下著大雨的晚上视线模糊甲方为了赶时间入量加以控制。　现代医学认为健康的体液应呈弱碱性,提供游客动手做气球的机会, ...................................................... (上一篇：\n)离开 Getty Museum 时大约是下午二时。/>2.水龙头︰以柠檬刷洗水龙头, 财政部推动纸本电子发票自103年1月1日起正式更名为「电子发票证明联」, 上网逛到一篇文章:\n【３. 菜色推荐 】必点：[酸辣虾][蒜头虾][凤梨苦瓜鸡]←都是亲自吃过【４. 个人心得 】我没吃过其他的活虾店所以无从比较,但是就单单这样享受美食而言,个人觉得百家班的东西真的很不错吃,且值得推荐！价位当然也不便宜,我们俩这样一餐吃下来1800左右的样子...不过是真的吃很饱！在一些特别的日子裡,预算较充足下,我想百家班是可以考虑的店家...下次有机会我们一定还会再来吃的～【５. 实际照片分享】百家班全台有5家分店,我们这一次去位在新庄汤城对面的分店。「美丽台湾」、「特色台湾」、「友善台湾」、「品质台湾」及「行销台湾」为施政主轴,/>这一次我们总共点的菜：胡椒虾、蒜头虾、酸辣虾、炒梨山高丽菜、凤梨苦瓜鸡。其中蒜头虾与酸辣虾是网络上大致都推荐的,\tComments are closed.


中国农业科学. 2016, 49(21): 4065-4073. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.001\n摘要 ( 378 ) HTML ( 1 ) PDF (2811KB) ( 557 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4074-4084. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.002\n摘要 ( 316 ) HTML ( 2 ) PDF (1294KB) ( 577 ) 收藏\n【目的】蒸煮是马铃薯食用最主要的加工方式，马铃薯商业化加工过程中需要对蒸煮加工的品质性状进行定量化分析和分类。根据商业化加工的需求在品种选育中进行蒸煮品质性状的早期选择和筛选，确定蒸煮加工型品种的品质性状特征和相关参数，同时从现有品种和品系中根据商业化加工参数筛选适合不同用途需求的蒸煮品种，是提高蒸煮加工型品种选育效率和方法的有效手段，为制定蒸煮加工型品种选育目标提供基础。【方法】在对马铃薯品种和品系的块茎产量、块茎大小、薯型、薯肉颜色、芽眼深度、抗病性和商品率的初步选择基础上，筛选14个品种和品系进行蒸煮试验，在普通蒸锅中放入块茎蒸煮25 min，蒸熟后，在室温环境冷却20 min，7 d后，分别对蒸煮前后块茎色泽变化、蒸煮前后块茎硬度、蒸煮前后软化度进行测定。同时测定这些品种和品系的干物质含量、淀粉含量、蔗糖含量、葡萄糖含量、果糖含量、游离氨基酸含量、绿原酸含量、柠檬酸含量、抗坏血酸含量，分析以上成分在蒸煮加工过程中变化对品种和品系块茎的风味、色泽和质构特性的影响，确定蒸煮加工型品种的加工参数。【结果】选育蒸煮加工型马铃薯品种，首先考虑田间综合农艺性状要能够满足商业化生产与加工过程工艺流程和加工机械要求。块茎还原糖含量是影响蒸煮风味中甜度的主要因素，含量应控制在0.4%以下。游离氨基酸含量与蒸煮风味中鲜味有关，14个品种和品系的氨基酸含量差别还不能构成显著的风味差别，所有品种和品系的氨基酸含量介于30—70 µmol。块茎品种风味构成中的苦味来源主要是糖苷碱含量，蒸煮加工型品种的糖苷碱含量应控制在150 mg·kg-1以下。蒸煮后冷却20 min块茎色泽变化值和蒸煮后7 d的色泽变化值ΔE差值是衡量蒸煮加工型品种色泽变化的重要参数。块茎蒸煮前后的软化度是衡量蒸煮加工型品种质地变化的重要参数。【结论】14个品种和品系块茎蒸煮后的风味、色泽变化、质构特性变化是判定蒸煮加工型品种的重要参数，通过对这些参数的全面分析表明，品种Burbank、Shepody和品系0724-58、0712-66是蒸煮后软化度比较高的品种和品系，而0744-8和0722-26是蒸煮后软化度比较低的品系。\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4085-4095. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.003\n摘要 ( 231 ) HTML ( 1 ) PDF (429KB) ( 346 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4096-4106. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.004\n摘要 ( 259 ) HTML ( 1 ) PDF (534KB) ( 369 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4107-4119. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.005\n摘要 ( 280 ) HTML ( 1 ) PDF (5175KB) ( 458 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4120-4129. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.006\n摘要 ( 225 ) HTML ( 1 ) PDF (2476KB) ( 371 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4130-4139. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.007\n摘要 ( 192 ) HTML ( 1 ) PDF (4052KB) ( 329 ) 收藏\n【目的】对玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）漆酶基因Stlac2进行生物信息学分析，推测其蛋白功能，探究木质素降解过程中产生的小分子物质对Stlac2表达的影响，并对其进行克隆及原核表达，以便深入研究该基因在病菌生长、发育及致病过程中的作用。【方法】通过NCBI查询获得玉米大斑病菌EOA90070 (Stlac2)基因的全序列，通过ClustalX与马尔尼菲青霉菌（Penicillium marneffei）PbrB (PMAA_082060)基因、烟曲霉（Aspergillus fumigatus）Abr2 (AFUA_2G17530)基因、构巢曲菌（Aspergillus nidulans）YA (AN6635) 基因等漆酶家族基因进行蛋白序列比对，查看Stlac2中的铜离子结合位点，利用在线软件SOPMA和ProtParam对其二级结构及理化性质进行检测，通过SWISS-MODEL对Stlac2蛋白质的三维结构进行预测，采用SAVES对三维结构进行评价。通过对ABTS的氧化试验确定木质素降解过程中产生的小分子物质对玉米大斑病菌漆酶产量的影响；利用RT-qPCR方法分析小分子物质对Stlac2表达规律的影响；采用原核表达系统，以pET-30a表达载体为框架，对其进行原核表达，并将表达蛋白纯化，以ABTS为底物，420 nm下检测漆酶活性。【结果】Stlac2具有典型的Cu离子结合位点，与漆酶典型的Cu离子结构域相似。其蛋白二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲所占比例分别为18.59%、25.63%、11.91%和43.86%，分子量为61.64 kD，等电点为5.00，平均疏水性为-0.37，表明其为亲水蛋白。当在PDA中添加0.01 g·L-1香草醛、4-羟基苯甲醛、丁香醛、香草酸、4-羟基苯甲酸和香兰素时，玉米大斑病菌胞外漆酶的产量为香草酸＞香兰素＞4-羟基苯甲醛＞4-羟基苯甲酸＞丁香醛＞对照。而在4-羟基苯甲醛和4-羟基苯甲酸存在时，玉米大斑病菌Stlac2的相对表达量明显升高，约为对照的5—8倍。利用原核表达系统，在67 kD处成功诱导表达出一条特异性蛋白条带，大量表达纯化后，漆酶活性为（40.7±0.3）U·L-1。【结论】阐明了Stlac2的生物信息学特性，初步断定其为漆酶基因；4-羟基苯甲醛和4-羟基苯甲酸可显著提高Stlac2相对表达量，表明其在木质素降解过程中起到了一定的作用；该基因所编码的蛋白可通过pET-30a原核表达系统表达，体外漆酶活性可达（40.7±0.3）U·L-1，该研究结果为后期研究蛋白性质打下了基础。\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4140-4148. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.008\n摘要 ( 195 ) HTML ( 1 ) PDF (1428KB) ( 306 ) 收藏\n【目的】β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（β-N-acetylglucosaminidase，NAG）是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得高纯度LmNAG1蛋白并对其酶学特性进行分析，探究该酶在飞蝗（Locusta migratoria）生长发育过程中的生物学功能，为飞蝗绿色防控分子靶标研发提供理论与实践依据。【方法】根据LmNAG1的cDNA全长序列（GenBank: JX888720.1）设计包含酶切位点BamH I、Hind III和6×His标签的引物。采用PCR技术扩增包含开放阅读框的目标片段，双酶切后连接至pFastBacTM-Dual载体上。将重组质粒转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中，通过Tn7转座子把目的基因转座到杆状病毒基因组上，用蓝白斑结合抗生素筛选。挑取白斑用pUC/M13引物来扩增目的条带，挑选带目的基因全长的重组杆状病毒质粒（baculovirus plasmid，Bacmid）。用转染试剂将重组Bacmid转染至草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢细胞系Sf9中，72 h内连续观察细胞形态，当出现感染迹象后收集细胞，离心，取上清得到P1代重组病毒粒子。用P1代病毒粒子去感染Sf9细胞，裂解并提取蛋白，Western blot检测目的蛋白是否成功表达。之后大量感染Sf9细胞，提取蛋白，利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱和阴离子交换柱Q对重组蛋白进行纯化，取最纯的馏分用Bradford法测定蛋白浓度。采用4MU-GlcNAc为底物对重组目的蛋白LmNAG1的动力学参数、最适温度和最适pH进行测定。【结果】克隆得到包含1 845 bp LmNAG1全长的pFastBac-LmNAG1重组质粒，酶切验证与目标条带一致。将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中，PCR扩增挑选出纯白斑，成功将LmNAG1全长序列构建到杆状病毒基因组上。将重组Bacmid转染至Sf9细胞，72 h后在显微镜下观察可见细胞膨大，边缘不规则等感染迹象。离心收集重组病毒粒子感染新的Sf9细胞，72 h后收集细胞，Western blot检测发现在67 kD附近有明显条带，与LmNAG1的理论分子量一致，获得带6×His标签的融合蛋白。大量感染收集细胞提取蛋白，经Ni-NTA琼脂糖层析纯化，进一步透析除盐后用阴离子交换柱Q二次纯化，得到了高纯度的目的蛋白。用Bradford法测定最纯的E3组分的蛋白浓度为0.057 µg·µL-1。体外活性测定结果表明LmNAG1的最适pH为8.0，且在pH 6.0—8.0范围内具有较高的稳定性；LmNAG1的最适温度为40℃，在40℃以下具有很高的稳定性，当温度高于45℃时热稳定性迅速下降；采用4MU-GlcNAc为底物测得LmNAG1具有水解β-1,4糖苷键的活性，可以释放出4MU，它的动力学参数Km值为（0.28±0.02）mmol·L-1，Kcat值为(902.88±38.15)s-1。【结论】成功获得高纯度且具活性的LmNAG1蛋白，其可水解β-1,4糖苷键连接的几丁质寡糖，与已知昆虫NAG1具有相似的生物学功能，即参与几丁质的降解。\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4149-4159. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.009\n摘要 ( 303 ) HTML ( 1 ) PDF (1053KB) ( 377 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4160-4168. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.010\n摘要 ( 180 ) HTML ( 1 ) PDF (449KB) ( 335 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4169-4178. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.011\n摘要 ( 276 ) HTML ( 2 ) PDF (468KB) ( 429 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4179-4191. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.012\n摘要 ( 253 ) HTML ( 1 ) PDF (456KB) ( 351 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4192-4202. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.013\n摘要 ( 151 ) HTML ( 1 ) PDF (1033KB) ( 331 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4203-4213. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.014\n摘要 ( 151 ) HTML ( 2 ) PDF (529KB) ( 407 ) 收藏\n【目的】比较不同剂量龙眼果肉醇提物和水提物对东莨菪碱所致记忆获得性障碍小鼠学习记忆功能的影响，初步解释龙眼果肉改善学习记忆的作用机制。【方法】分析龙眼果肉醇提物和水提物中主要活性物质含量。将无特定病原体（SPF级）雄性昆明小鼠随机分为空白组、模型组、龙眼果肉醇提物低剂量组/高剂量组（150 mg·kg-1/300 mg·kg-1）、龙眼果肉水提物低剂量组/高剂量组（150 mg·kg-1/300 mg·kg-1），共6组，连续灌胃28 d后，空白组腹腔注射等量生理盐水，各试验组腹腔注射东莨菪碱造模，0.5 h后，以潜伏期和穿梭次数为考察指标，采用避暗试验进行行为学测试，作为习得成绩；24 h后再次进行避暗试验，对小鼠进行记忆保持测试，测试结束后摘眼球取血，脱颈致死，取脑组织进行生化指标检测。测定脑组织的胆碱类（乙酰胆碱转移酶choline acetyltransferase，ChAT和乙酰胆碱酯酶acetylcholinesterase，AChE活力）及抗氧化相关指标（超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量），血清中抗氧化相关指标（SOD、GSH-Px活力及MDA含量）。通过综合比较各组间行为学试验指标、脑组织、血清生化指标，判断龙眼果肉改善学习记忆功能的作用效果及作用机制。【结果】分析龙眼果肉提取物成分发现，龙眼果肉水提物主要为多糖及蛋白质，醇提物除含有糖类外，还含有较丰富的酚类、黄酮类和磷脂物质，其中，醇提物中总酚、总黄酮、总磷脂含量显著高于水提物的（P＜0.05）。行为学试验表明，模型组小鼠在避暗试验中5 min内穿梭次数为2.89次，是正常小鼠的6.09倍，高剂量龙眼果肉醇提物和水提物组小鼠穿梭次数分别为0.75次和0.56次，与正常组无显著差异；痴呆小鼠在避暗试验中的潜伏期仅为正常组的0.43倍,与模型组相比，各剂量龙眼果肉醇提物和水提物均能显著增加痴呆小鼠在避暗试验中的潜伏期（P＜0.05），且存在一定剂量效应关系，其中龙眼果肉醇提物和水提物高剂量组小鼠的避暗潜伏期分别为289.18 s、290.80 s，与正常组相比无显著差异（P＞0.05）。生化指标方面，与模型组相比，各剂量龙眼果肉醇提物和水提物均能显著增加痴呆小鼠脑组织中ChAT活力，显著降低AChE活力（P＜0.05），且存在一定的剂量效应关系。相同剂量时，龙眼果肉水提物效果优于醇提物，其中龙眼果肉醇提物高剂量组，龙眼果肉水提物低、高剂量组小鼠脑组织中ChAT活力基本恢复正常水平；在抗氧化水平方面，与模型组相比，龙眼果肉醇提物高剂量组显著增加痴呆小鼠脑组织和血清中SOD、GSH-Px活力，显著降低MDA含量（P＜0.05），基本达到正常水平，效果优于同等剂量的龙眼果肉水提物。【结论】龙眼果肉水提物和醇提物均可改善东莨菪碱诱导记忆获得性障碍小鼠的学习记忆功能，但二者的作用机制可能存在差异，龙眼果肉水提物主要通过调节胆碱能神经系统改善学习记忆功能，其主要作用的物质基础可能为多糖或糖蛋白；醇提物则主要通过提高机体抗氧化活力改善学习记忆功能，其主要作用物质可能为多酚、黄酮、磷脂等。\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4214-4221. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.015\n摘要 ( 172 ) HTML ( 1 ) PDF (2386KB) ( 282 ) 收藏\n【目的】小眼畸形相关转录因子-M型（microphthalmia associated transcription factor M，MITF-M）在动物皮肤和毛发的黑色素合成途径中发挥重要作用，克隆绵羊小眼畸形相关转录因子-M型基因序列，研究在绵羊黑素细胞中过表达绵羊MITF-M是否影响TYR、TYRP-1和TYRP-2的表达，从而探究对黑色素的生成的影响。【方法】使用试验室冻存的第5代绵羊黑素细胞，通过PCR方法用引物以绵羊黑素细胞cDNA为模板克隆MITF-M基因cDNA序列，构建绵羊MITF-M克隆载体和真核表达载体；通过细胞转染技术在细胞水平过量表达绵羊MITF-M；转染后使用荧光显微镜观察细胞转染效率，采用分光光度计对绵羊黑素细胞中黑色素含量进行测定，并进行Real-time PCR试验检测转染后细胞MITF、TYR、TYRP-1和TYRP-2基因在mRNA水平表达量的变化，Western blot试验检测转染后细胞MITF、TYR蛋白水平的变化。【结果】经测序和拼接，最终获得长度为1 242 bp的绵羊 MITF-M基因的cDNA 序列；成功构建真核表达载体，载体上连有一个启动报告基因绿色荧光蛋白和特异性TYRP-2基因启动子；细胞转染后，在荧光显微镜下可观察到黑素细胞带有绿色荧光说明转染效率明显；分光光度计检测显示，转染后绵羊黑素细胞中黑色素量增加1.15倍（P＜0.05）；荧光定量检测结果显示，绵羊黑素细胞中MITF mRNA表达量增加极显著（P＜0.001），表明绵羊MITF-M转染效率显著，TYR mRNA表达量增加极显著（P＜0.001），TYRP-1 mRNA表达量升高至5.06倍（P＜0.05），TYRP-2 mRNA表达量升高至1.49倍，变化不明显。蛋白免疫印迹结果显示，绵羊黑素细胞中MITF-M转染组MITF蛋白表达量是空载体组的1.65倍（P＜0.001），转染组TYR蛋白表达量是空载体组的2.38倍（P＜0.001），这与荧光定量检测结果一致。【结论】通过PCR和克隆技术及核酸测序技术获得了绵羊MITF-M基因全长1 242 bp的CDS区，过表达绵羊MITF-M会使黑素细胞TYR、TYRP-1的表达量增加，对TYRP-2的表达量变化不明显，从而揭示绵羊MITF-M可以通过调节TYR和TYRP-1的表达量控制绵羊黑素细胞中黑色素的生成。\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4222-4230. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.016\n摘要 ( 153 ) HTML ( 1 ) PDF (462KB) ( 259 ) 收藏\n【目的】探讨亚临床低血钙症奶牛饲料采食量、泌乳量、粪尿排放量及粪污所产生污染气体排放特征的关系。【方法】黑龙江某集约化奶牛养殖场选取产后7—14 d年龄、体况、胎次相近的奶牛12头，根据血钙指标分为亚临床低血钙症组和健康组奶牛各6头，每头奶牛分别单独饲养，连续饲养4 d。每天采血检测血液中Ca、BHBA、NEFA、CLU、P、Mg指标含量；记录每头牛每天泌乳量、采食量、粪、尿排放量；通过简易动态箱法对试验奶牛粪尿进行混合，检测混合物产生的NH3、CO2、CH4气体排放量并进行分析。【结果】亚临床低血钙症组奶牛血清Ca、P、Mg浓度极显著低于健康组奶牛（P＜0.01），CLU显著低于健康组（P＜0.05），BHBA浓度显著高于健康组（P＜0.05），NEFA浓度极显著高于健康组奶牛（P＜0.01）；亚临床低血钙症组奶牛产奶量和4%能量校正乳（ECM）极显著高于健康组（P＜0.01），排粪量显著高于健康组（P＜0.05）；干物质消化率和尿量的差异虽然不显著但都有升高趋势。亚临床低血钙组奶牛采食1 kg干物质的产奶量极显著升高(P＜0.01)，采食1 kg干物质的排粪量显著升高(P＜0.05)；健康组和亚临床低血钙症组奶牛CH4的排放曲线无明显差异，两组的产气趋势基本相同，于试验的52 h左右出现峰值，之后下降；总体上看CO2的排放没有明显变化趋势，无明显规律，健康组和亚临床低血钙症组分别在48和36 h处出现排放高峰，亚临床低血钙症组出现峰值的时间要早于健康组，之后下降随即无规律起伏。亚临床低血钙症组的CO2累计排放量随时间的推移低于健康组；健康组奶牛NH3排放浓度在24 h处出现高峰，随后降低，45 h再次出现峰值，之后排放浓度逐渐降低。亚临床低血钙症组奶牛NH3排放浓度在21 h处出现峰值，之后排放浓度降低，两组试验的折线趋势基本一致，都是出现峰值后浓度降低但都是有起伏的波动。亚临床低血钙症组NH3的累计排放量低于健康组。【结论】亚临床低血钙症奶牛患病期间由于采食摄取营养物质不能满足泌乳需求而处于能量及钙负平衡状态。同时肠道消化吸收率增加，用于满足泌乳对能量的需求；在相同质量的粪尿混合物检测情况下亚临床低血钙症不会影响CH4的排放量，但亚临床低血钙奶牛粪尿中NH3和CO2排放量低于健康牛，然而降低的温室气体排放是否与肠道消化吸收率的增加促进了饲料能量的吸收有关利用仍需进一步研究。\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4231-4238. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.017\n摘要 ( 133 ) HTML ( 1 ) PDF (407KB) ( 214 ) 收藏\n【目的】研究意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）蜂王与工蜂幼虫甲基供体S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine, SAM）合成与代谢的差异，为探索DNA甲基化与蜜蜂级型分化的关系提供理论依据。【方法】试验选用890只1日龄雌性蜂幼虫，分别来自5群姐妹蜂王群。其中445只进行人工育王（89只/群）；剩余445只培育成工蜂（89只/群）。取3、4、5日龄蜂王和工蜂幼虫，测定其体内SAM合成与代谢关键酶基因表达和酶活性的差异。【结果】蜂王幼虫SAM含量随日龄的增加变化不显著（P＞0.05）；工蜂幼虫SAM含量随日龄增加呈上升趋势（P＜0.05）。蜂王幼虫SAMS基因表达量随日龄增加呈梯度下降的趋势（P＜0.01），而工蜂幼虫SAMS表达随日龄变化不显著（P＞0.05）；3日龄与4日龄时，蜂王幼虫SAMS表达量显著高于工蜂（P＜0.05），5日龄时，工蜂幼虫SAMS表达量显著高于蜂王（P＜0.05）。Dnmt1a与Dnmt3表达在两级型间差异不显著（P＞0.05），其中蜂王幼虫Dnmt1a表达随日龄增加无显著变化（P＞0.05），但其酶活性呈下降趋势（P＜0.05）；工蜂幼虫Dnmt1a表达随日龄增加呈下降趋势（P＞0.05），其酶活性呈上升趋势（P＜0.01），其中3日龄与4日龄时，蜂王幼虫Dnmt1酶活性显著高于工蜂幼虫（P＜0.05），而5日龄时，工蜂幼虫Dnmt1酶活性显著高于蜂王幼虫（P＜0.05）。蜂王Dnmt3表达量随日龄增加呈下降趋势（P＜0.05），工蜂幼虫Dnmt3表达随日龄增加变化不显著（P＞0.05）；蜂王幼虫Dnmt3酶活性随日龄变化不显著（P＞0.05），工蜂幼虫Dnmt3酶活性随日龄变化显著（P＜0.05），但蜂王幼虫Dnmt3酶活性在3、4、5日龄均显著高于工蜂幼虫（P＜0.01）。【结论】3—5日龄意大利蜜蜂蜂王幼虫与工蜂幼虫体内活性甲基供体SAM的合成与代谢存在差异。在4日龄之前，蜂王幼虫SAM的合成比工蜂活跃，4日龄之后，工蜂幼虫的SAM合成与蜂王幼虫相近；在4日龄之前，SAM参与DNA维持甲基化的代谢过程，蜂王幼虫比工蜂活跃，4日龄之后，工蜂幼虫比蜂王幼虫活跃；在3—5日龄，SAM参与DNA从头甲基化的代谢活性，蜂王幼虫始终不低于工蜂幼虫。\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4239-4245. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.018\n摘要 ( 119 ) HTML ( 1 ) PDF (1230KB) ( 254 ) 收藏\n【目的】建立一种灵敏、快捷的检测蝗虫微孢子虫（Paranosema locustae）的套式PCR方法，为运用微孢子虫防治蝗虫提供技术支持。【方法】以GenBank数据库中公布的保守性高的微孢子虫小核糖体亚单位RNA为目的基因，采用PrimerSelect软件设计两对特异的套式PCR引物P.L.-F1/P.L.-R1和P.L.-F2/P.L.-R2，将微孢子虫液用0.2 mol·L-1 KOH处理后得到的发芽液作为模板进行PCR扩增，建立以P.L.-F1/P.L.-R1为外侧引物、P.L.-F2/P.L.-R2为内侧引物的套式PCR，扩增产为分别为298和242 bp。对引物浓度、退火温度及循环数进行优化，建立套式PCR方法，以此方法对梯度稀释的微孢子虫液进行灵敏性检测，并对采自哈密地区巴里坤北山的蝗虫样品进行检测。同时对提取的微孢子虫液进行传统的显微镜检测，并比较两种方法的灵敏度。【结果】建立了蝗虫微孢子虫的套式PCR快速特异性检测方法，优化后的PCR反应体系均为20 μL：Buffer（10×）2.0 μL, dNTPs（10 mmol·L-1）0.3 μL，Taq DNA酶（250 U）0.3 μL，上、下游引物（10 μmol·L-1）各0.3 μL，微孢子虫发芽液（第2轮以第1轮产物10×稀释液为模板）1 μL，加水补充至20 μL；PCR反应程序为：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，第1轮60℃退火（第2轮62℃退火）30 s，72℃延伸20 s，共35个循环；72℃延伸10 min，10℃保存。灵敏度试验显示，检测的微孢子虫数量可以达到12.2个孢子/µL（DNA量为1.07 pg·μL-1）。应用建立的套式PCR方法，对采自新疆哈密地区巴里坤北山的240头蝗虫样品进行了微孢子虫检测，检测结果为23.3%的阳性，而显微镜检测结果阳性仅为3.8%。【结论】 研究建立的套式PCR方法能够快速特异地检测蝗虫微孢子虫的感染，为蝗虫微孢子虫致病性研究及田间应用提供了技术支持。\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4246-4254. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.019\n摘要 ( 122 ) HTML ( 1 ) PDF (1210KB) ( 283 ) 收藏\n中国农业科学. 2016, 49(21): 4255-4264. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2016.21.020\n摘要 ( 195 ) HTML ( 1 ) PDF (895KB) ( 393 ) 收藏\n【目的】利用气相色谱/质谱联用技术（gas chromatograph tandem mass spectrometer technology, GC-MS）对奶牛血浆进行代谢组学分析，以明确奶牛发生蹄叶炎时血浆中代谢物的变化，进一步揭示其发病机制。【方法】根据蹄叶炎奶牛的临床症状和活动量情况，选取蹄叶炎患病组S和健康对照组C奶牛各10头，采集血浆样品，经衍生化处理后，利用GC-MS方法对两组奶牛的血浆进行全部代谢物检测。用SIMCA-P 11.5软件进行主成分分析（principal component analysis, PCA）和偏最小二乘法分析（supervised partial least squares-discriminant analysis，PLS-DA），对蹄叶炎组奶牛和健康组奶牛检测数据进行模式识别分析，筛选差异代谢物,并利用生物信息学方法进行代谢通路富集分析。为进一步验证代谢组学的试验结果，检测了与差异代谢通路相关的脂质代谢指标和抗氧化能力指标。【结果】利用GC-MS方法，在奶牛血浆中共检测到242种代谢物，通过多元统计分析结合t-检验筛选出37种差异代谢物(VIP＞1，P＜0.05)，其中在蹄叶炎奶牛血浆中3种物质含量上调（FC＞1），分别是氨基氧乙酸、油酸、乳糖，34种物质含量下调（FC＜1），包括脂肪酸、氨基酸等。经代谢通路富集分析，发现变化显著(P＜0.05)的代谢通路包括脂肪酸生物合成通路，甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸代谢通路，不饱和脂肪酸生物合成通路，嘌呤代谢通路，甲烷代谢通路，苯丙氨酸代谢通路和氰基氨基酸代谢通路。在验证试验中，发现两组奶牛血浆中脂质代谢相关指标差异显著，且蹄叶炎患病牛血浆抗氧化能力显著低于健康牛，与代谢组学结果一致。【结论】利用GC-MS技术分析了蹄叶炎患病牛与健康奶牛血浆代谢谱的变化，发现两组间代谢物存在显著差异，并筛选出了37种差异代谢物，而这些差异分子可能成为奶牛蹄叶炎早期诊断或群体监测的潜在生物标记物。本结果全面揭示了奶牛蹄叶炎发生后血浆代谢物的代谢规律，为进一步阐明其发病机制提供理论依据。


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