Techoje\t- A Importância da Gestão de Estoques\tPreencha o campo abaixo para realizar sua busca\nVídeos (0)\tPodcast (0)\tLivros (0)\tArquivos (2)\nÉrica Carvalhais de Azevedo, Graduada em Administração de empresas / Gerente de Compras da Condor Equipamentos Industriais Ltda\nJúlio Cezar de Souza, Graduado em Administração de empresas / Supervisor de Suprimentos da Sotreq S/A\nEx-alunos da pós-graduação em Gestão da Logística do IETEC\nMuitas empresas buscam manter estoques mínimos para tentarem obter vantagem competitiva no mercado. Com os baixos valores agregados aos estoques, elas conseguem ter a oportunidade de investir o capital ao invés de deixá-lo ocioso em forma de estoques. Mas, será que essa é a melhor solução? Outros pontos devem ser analisados, como por exemplo, a variação da demanda. Se a empresa não possui o estoque para atendimento imediato ao seu cliente, ela gera a oportunidade para que o mesmo busque seus concorrentes, correndo riscos de perdê-los. Ou então, se ela não cumpre os prazos, seja por falta de matéria-prima devido à um atraso do fornecedor, a empresa terá sua imagem denegrida junto ao mercado e, para conseguir restabelecê-la acarretará em grandes custos. Daí a necessidade de se estudar uma melhor forma para manter um estoque de segurança.\nEstes dois pontos devem ser ponderados (manter ou não manter estoques). Esse artigo tem como objetivo demonstrar algumas vantagens e custos para manutenção dos estoques, além de descrever brevemente suas funções, tipos e como fazer um planejamento adequado.\nPalavras-Chave: Gestão de estoques, Custos dos Estoques e Classificação ABC\nDefinição e Tipos de Estoques\nPode-se considerar estoque tendo matérias-primas, produtos semi-acabados, componentes para montagem, sobressalentes, produtos acabados, materiais administrativos e suprimentos variados, que podem ser para utilização posterior, permitindo o atendimento regular das necessidades dos usuários para continuidade das atividades da empresa considerando que este estoque foi gerando pela impossibilidade de prever-se a demanda exata, ou então como uma reserva para ser utilizada em tempo oportuno.\nPorém, os estoques representam boa parte dos ativos da empresa, em alguns casos podendo representar aproximadamente 46% dos ativos totais. Então pode-se considerar que “os estoques são recursos ociosos que possuem valor econômico, os quais representam um investimento destinado a incrementar as atividades de produção e servir aos clientes” (VIANA, 2000, p.144). Alguns autores classificam os tipos de estoques conforme quadro abaixo:\nImportância e os Custos de Manutenção dos Estoques\nA maioria das empresas tem como objetivo o atendimento aos seus clientes na hora certa e com a quantidade certa.\nPara obter uma vantagem competitiva duradoura é necessário a rapidez e presteza na distribuição das mercadorias. Nesse sentido, a maioria dos estoques gera algumas vantagens e são importantes para: melhorar o serviço do cliente – dando suporte à área de marketing, que ao criar demanda precisa de material disponível para concretizar vendas; economia de escala – os custos são tipicamente menores quando o produto é fabricado continuamente e em quantidade constantes; proteção de mudanças de preços em tempo de inflação alta – um alto volume de compras minimiza o impacto do aumento de preços pelos fornecedores; proteção contra incertezas na demanda e no tempo de entrega – considera o problema que advém dos sistemas logísticos quando, tanto o comportamento da demanda dos clientes, quanto o tempo de entrega dos fornecedores não são perfeitamente conhecidos, ou seja, para atender os clientes são necessários estoques de segurança e; proteção contra contingências – proteger a empresa contra greves, incêndios, inundações, instabilidade política e outras variáveis exógenas que podem criar problemas. O risco diminuiria com a manutenção de estoques.\nIdeal, seria a inexistência de estoques, a medida que fosse possível atender ao usuário no momento em que ocorressem as demandas. As primeiras causas que exigem estoques permanentes para atendimento imediato do consumo interno e das vendas são as necessidades de continuidade operacional, incerteza da demanda futura ou sua variação ao longo do período de planejamento e, disponibilidade imediata do material nos fornecedores e cumprimento dos prazos de entrega.\nOutras razões para existência dos estoques, segundo Viana (2000), são a impossibilidade de se ter os materiais em mãos, na ocasião em que as demandas ocorrem; o benefício obtido em função das variações dos custos unitários (esta razão torna-se altamente significativa em economias inflacionárias, quando a manutenção de elevados estoques de materiais estratégicos poderá, até determinado limite, beneficiar os detentores), a redução da freqüência dos contatos com o mercado externo, que muitas vezes é prejudicial à atuação formal do órgão comprador e a segurança contra os riscos de produção do mercado fornecedor.\n“O custo de manutenção de estoque é o custo incorrido para manter o estoque disponível”.(BOWERSOX; CLOSS, 2001, p. 232)\nPozo (2002), considera os três custos abaixo como os mais importantes na formação dos estoques:\nFundamentos da Gestão de Estoques e Classificação ABC\nO controle de estoque deve ser um procedimento rotineiro, a fim de cumprir uma política de estoques abrangendo as quantidades disponíveis em um local e o acompanhamento de suas variações ao longo do tempo.\nViana (2000) afirma que a gestão dos estoques é um conjunto de atividades que visa atender as necessidades da empresa, com o máximo de eficiência e ao menor custo, através do maior giro possível para o capital investido em materiais, tendo como objetivo fundamental a busca do equilíbrio entre estoques e consumo.\nA classificação ABC tem como fundamento principal a diferenciação dos produtos em categorias, onde determinados produtos necessitam de maior (ou menor) controle devido à seu impacto quanto ao preço, demanda (para produção e venda), facilidade de reposição ou competitividade.\nClasse A: São os principais itens em estoque de alta prioridade, foco de atenção do gestor de materiais, pois são materiais com maior valor devido à sua importância econômica. Estima-se que 20% dos itens em estoque correspondem a 80% do valor em estoque. Classe B: Compreendem os itens que ainda são considerados economicamente preciosos, logo após os itens de categoria A, e que recebem cuidados medianos. Estima-se que 30% dos itens em estoque correspondem a 15% do valor em estoque.\nTermos freqüentes relacionados a estoques\nPolítica de estoques: “normas sobre o que comprar ou produzir, quando atirar e quais as quantidades”. (BOWERSOX; CLOSS, 2001, p.228)\nEstoque médio (EM): “quantidade máxima de materiais, componentes, estoque em processo e produtos acabados normalmente mantida em estoque”. (BOWERSOX; CLOSS, 2001, p.229)\nEstoque em trânsito: ”estoque que se encontra em viagem ou aguardando transporte já sobre veículos”. (BOWERSOX; CLOSS, 2001, p.229)\nEstoque real (ER): “quantidade de material existente em estoque no almoxarifado da empresa” (VIANA, 2000, p.151).\nEstoque virtual (EV): estoque real acrescido das quantidades de encomendas em andamento.\nEstoque de cobertura (EC): relação entre estoques e consumo, indicando por quanto tempo o estoque suportará o consumo sem que haja reposição.\nPlanejamento de Estoque (Estoque de segurança, determinação do ponto de ressuprimento e lote de compra)\nSegundo Viana (2000) o estoque de segurança é “a quantidade minimizada possível capaz de suportar um tempo de ressuprimento superior ao programado ou um consumo desproporcional” (VIANA, 2000, p.150).\nOs estoques de segurança “diminuem os riscos do não atendimento das solicitações dos clientes internos e externos”.(MARTINS; ALT, 2000, p.201)\nSua quantidade é calculada em função do nível de atendimento fixado pela empresa, em função da importância operacional e do valor do material, além dos desvios entre os consumos estimados e os realizados e o prazo médio de reposição. Seu cálculo é feito conforme fórmula abaixo:\nES – Estoque de segurança. K – Fator de segurança.\nTR – Tempo de ressuprimento. CMM – Consumo médio mensal.\nFonte: Martins e Alt (2000)\nO ponto de ressuprimento determina “quando devem ser iniciadas as atividades de ressuprimento” (BOWERSOX; CLOSS, 2001, p.235), podendo ser estipulado em unidades que ou em dias de suprimento.\nOs autores afirmam que essa explicação “concentra-se na determinação de pontos de ressuprimento sob condições de certeza de demanda e de ciclo de atividades” (BOWERSOX; CLOSS, 2001, p.235).\nA fórmula básica para o cálculo do ponto de ressuprimento é:\nD – demanda diária média.\nT – duração média do ciclo de atividades.\nPara os casos em que o estoque de segurança é necessário, em vista de condições de incertezas a fórmula passa a ser:\nPR = D x T + ES, onde ES é estoque de segurança.\nA quantidade a ser comprada (QC) é definida quando é atingido o nível de reposição e a partir da quantidade prevista para o consumo durante o intervalo de cobertura.\nViana (2000) considera a fórmula abaixo como a fórmula clássica da quantidade a comprar, mas afirma que nem sempre atende, pois existem quatro situações distintas:\n Pedido inicial: “primeira aquisição para materiais recém incluídos no estoque” (VIANA, 2000, p.157):\nQC = CMM x TR x 2ES\n Saldo em estoque for ao nível de reposição:\nQC = NR x IC . CM – EV\nNR – nível de reposição.\nIC – intervalo de cobertura.\nEV – estoque virtual.\n Saldo em estoque for abaixo do nível de reposição:\n* Fórmula anterior acrescida da quantidade que ultrapassar o nível de ressuprimento.\n LEC – Lote econômico de compra.\nO lote econômico de compra é a “quantidade do pedido de ressuprimento que minimiza a soma dos custos de manutenção de estoques e de emissão e colocação de pedidos”.(BOWERSOX; CLOSS, 2001, p.236).\nA fórmula utilizada para o calculo do LEC é:\n2 x CA x CC\nLEC = CPA x PV\nCA – Consumo anual em quantidades\nCC – Custo unitário do pedido de compra\nCPA – Custo do material armazenado\nPV – preço unitário do material.\n“Os problemas mais freqüentes são relativos aos ajustes necessários para tirar vantagem de situações específicas de compra e de consolidação das cargas”. (BOWERSOX; CLOSS, 2001, p.237)\nOs autores afirmam que os três ajustes mais comuns são: descontos de taxas de frete por quantidade transportada, descontos por quantidade na compra e ajustes especiais.\nBALLOU, Ronald H., Gerenciamento da Cadeia de Suprimentos: planejamento, organização e logística empresarial. 4 ed. Porto Alegre: Bookman, 2001.\nPOZO, Hamilton, Administração de Recursos Materiais e Patrimoniais: uma abordagem logística. 2 ed. São Paulo: Atlas, 2002.\nVIANA, João José, Administração de Materiais: um enfoque prático. São Paulo: Atlas, 2000.


Trabalho de Junji beneficia filantrópicas - PSD - Câmara dos Deputados\nPSD – Câmara dos Deputados » Notícias Regionais » Trabalho de Junji beneficia filantrópicas\nO governo estadual autorizou a liberação de R$ 90 mil para duas entidades de assistência social, elevando para R$ 1,090 milhão o total dos repasses autorizados às filantrópicas de nove cidades do Alto Tietê e Vale do Paraíba. O benefício resulta do atendimento às indicações de autoria do deputado federal Junji Abe (PSD-SP). Ao todo, serão contempladas 19 instituições que funcionam em Mogi das Cruzes, Ferraz de Vasconcelos, Poá, Arujá, Suzano, Biritiba Mirim, Bertioga, Caçapava e Potim.\nDe acordo com Junji, as mais novas beneficiadas são o Reino da Garotada de Poá e a Vila Vicentina de Caçapava. Dirigida à assistência à criança e ao adolescente, a primeira receberá R$ 50 mil. Já a outra entidade, com atendimento voltado à Terceira Idade, será contemplada com R$ 40 mil. Assim como ocorreu com as demais instituições, os recursos virão da Secretaria Estadual de Desenvolvimento Social para aquisições de veículos, equipamentos e mobiliários, de acordo com as necessidades das organizações.\nAntes de sua posse na Câmara Federal, Junji se mobilizou para beneficiar as instituições. No início do ano passado, ele se reuniu com dirigentes das organizações que prestam atendimento a crianças e adolescentes, aos portadores de necessidades especiais, à Terceira Idade, moradores de rua, famílias carentes e a pacientes com diagnóstico de câncer, doenças neurológicas, esclerose múltipla e portadores do HIV, entre outros segmentos sociais.\nElogiando a sensibilidade do governador Geraldo Alckmin (PSDB) para seus pedidos, Junji observou que as instituições precisam de mais recursos para atender o grande número de pessoas que procuram ajuda. Porém, observou ele, as limitações orçamentárias do Estado não permitem repasses à altura das necessidades. “Todas contribuem para diminuir as desigualdades e amenizar as carências do poder público em variados setores”, assinalou, ao lembrar que “as entidades prestam indispensáveis serviços à sociedade”.\nDas verbas autorizadas pelo Estado, R$ 250 mil contemplam quatro Apae’s – Associações de País e Amigos dos Excepcionais. A unidade mogiana receberá R$ 100 mil para compra de um micro-ônibus e de equipamentos destinados a serviços especializados no tratamento de portadores de necessidades especiais.\nEm Arujá, Poá e Bertioga, estão as outras Apae’s beneficiadas com R$ 50 mil, cada uma. A primeira utilizará os recursos para adquirir a aparelhagem necessária à instalação de uma oficina de costura. Já a unidade poaense empregará a verba na compra de mobiliários e equipamentos para melhorar os serviços prestados aos excepcionais.\nO processo de repasse está adiantado, como informou o deputado. Boa parte das entidades já formalizou convênio com a Secretaria Estadual de Desenvolvimento Social, etapa que antecede o depósito dos valores. Outras tiveram acesso à verba e estão adquirindo os bens. Algumas até já colocaram os equipamentos em operação. É o caso da Apae de Bertioga que comprou 13 computadores, uma máquina para xerocópias e mobiliário para o refeitório – oito mesas e 32 cadeiras, além de dois equipamentos destinados a gerar renda para a instituição.\nOutras seis organizações mogianas receberão aporte financeiro que totaliza R$ 350 mil. O Tradef – Trabalho de Apoio ao Deficiente será beneficiado com recursos para compra de veículo. Voltado ao atendimento da Terceira Idade, o Instituto Pró+Vida São Sebastião pretende adquirir automóvel e mobiliário. Igual destino terá a verba a ser repassada para a Associação Manuel Maria Estância Renascer que também atende idosos. O Núcleo Aprendiz do Futuro investirá a verba na compra de equipamentos e móveis.\nO Gatem – Associação Alto Tietê de Portadores de Doenças Neurológicas, Autoimunes e Esclerose Múltipla pretende dotar suas instalações com mobiliário e equipamento para tratamento fisioterápico de pessoas com esclerose múltipla. A unidade mogiana do Cecam – Centro de Convivência e Apoio ao Paciente com Câncer terá recursos para garantir o transporte dos assistidos e agilizar os serviços administrativos, com a aquisição de um carro.\nA poaense Sociedade de Amparo ao Menor Paulo de Tarso contará com o repasse de R$ 50 mil para adquirir veículo e equipamento para cozinha. A unidade assistencial da Sociedade São Vicente de Paulo, localizada em Biritiba Mirim, receberá igual valor para investir em infraestrutura para o transporte e aparelhagem.\nNo município de Potim, Vale do Paraíba, funciona a ONG – Organização Não Governamental Orienta Vida que capacita mulheres para o desenvolvimento de bordados e peças de artesanato com o objetivo de garantir a elas uma fonte de geração de renda. A entidade será contemplada com repasse de R$ 100 mil para aquisição de equipamentos.


Sítios arqueológicos no Pará\nFoi anunciado por arqueólogos que estudam a região de Santarém (PA), durante 1º Simpósio de Arqueologia na Faculdade de Ciências e Letras da Unesp, em Araraquara (SP), a descoberta de 23 novos sítios arqueológicos ainda não explorados nos arredores da cidade. Isso foi possível através do projeto "Análise das Socio-cosmologias Amazônicas Pré-Coloniais", financiado pela Fapesp e coordenado pela arqueóloga Denise Maria Cavalcante Gomes, que escava outros sítios na região desde 2006.\n"Eu havia detectado 7 sítios em 2008 e agora surgiram mais 23", diz ela. "Na Amazônia, dois indicadores fortes para a identificação de sítios são a presença de terra preta e a de cerâmicas. Às vezes é possível ver a intervenção na superfície, sem necessidade de escavações."\nOs novos sítios arqueológicos estão localizados em um quadrilátero de 20 por 25 quilômetros, entre Santarém e Belterram, município vizinho. O grupo de pesquisadores deverá escolher cerca de 4 sítios para estudar mais a fundo nos próximos meses.\nO trabalho na região começou em 2006 com a pesquisa do sítio Aldeia, considerado um dos maiores sítios arqueológicos da Amazônia e o maior da região do Tapajós. Sua principal característica é que ele fica em área urbana e corta ao menos 2 bairros de Santarém. Por conta disso, os pesquisadores têm de escavar em quintais de moradores, fundos de estabelecimentos comerciais e jardins.\n"Ele tem 2 quilômetros de comprimento por 700 metros de largura. Mas acho que pode ser maior ainda", diz Denise. "Os resultados mostram que o sítio teve ocupação contínua, até por grupos anteriores aos tapajós". As populações mais antigas teriam vivido na região por volta de 3 mil anos atrás, segundo ela.


O hotel em Temple está convenientemente localizado perto da Interstate 35, a poucos minutos da University of Mary Hardin-Baylor. Este hotel situa-se perto de atrações de Temple, como o Belton Lake, o Santa Fe Railroad e o Stillhouse Hollow Lake. Existe a posssiblidade de praticar golfe e pesca nas proximidades. A estação de trem Amtrak fica a 3 km do hotel. O hotel Econo Lodge também encontra-se perto de uma variedade de restaurantes da área. Os hóspedes deste hotel, irão desfrutar do excelente serviço, incluindo pequeno-almoço continental gratuito e chamadas locais gratuitas. As instalações incluem serviço de lavandaria e salas para conferências. Todos os quartos estão completamente equipados com microondas, geladeiras e máquinas de café. Para o lazer, os hóspedes poderão desfrutar da piscina exterior.


Obrigado por subscrever! Subscreva a nossa newsletter para receber as novidades e o melhor da sua cidade. Os críticos da Time Out visitam os restaurantes anonimamente e pagam pelas suas refeições - o mesmo é dizer, como qualquer cliente — e, na melhor parte dos casos, repetem a visita antes de se pronunciar. O que é que isso vale? Ainda e sempre, é a si que cabe dizer. O que lhe podemos garantir é que todos os restaurantes que encontra nesta lista foram visitados pela nossa equipa pelo menos uma vez e que resulta de uma escolha, subjectiva como se espera, mas criteriosa como se exige. Como de costume, a coisa valeu discussões e zangas. Recomendado: Os melhores bares em Lisboa. Os que o chef Kiko serve no pequeno restaurante com um dos mais belos balcões da cidade continuam a estar entre os nossos favoritos.\nMelhor época em Cancún\nDay Care. Ver todos. Imersão e Tosquia Clique e Agende aqui. Retire e Troque na loja. Ao declarar uma entrevista para o podcast The Jess Cagle, James Liberal falou, pela primeira vez, sobre ter sido censurado por estudantes de atrevimento sexual durante as aulas no Studio 4. Durante o decurso que ensinei, eu. No início o conto foi investigado quanto suicídio, mas os familiares da vítima disseram que poderia ter sido um homicídio. Segundo. Exatamente.\nSou largamente carinhoso. Obs: Admitido mulheres solteiras ou casadas. Quero ser totalmente tomado, pode trabalhar o que quiser comigo. Patrão sugar buceta e cuzinho tbm, se tiver interesse único en…. Quero pegar sua esposa de jeito. Homem-feito de 32 procurando par sem fins financiero Sou homem-feito de 33 anos procurando par para realizar fantasia e uma amizade Boa sem fins financial Único por prazer Me flama no zap Mulheres para encontros. Garotas nuas pego com histórias pornôs franceses professor de prostitutas em prostitutas collblanc prostitutas imagens de massagem tailandesa cenas extremas prostitutas madri guria de sexo prostitutas venezuelanas. Sex encontrou mij o mercado de prostitutas. De la mancha levallois perret Dating site de contigüidade com vagabunda carla tórax grandioso.\nAos 50 anos, trabalha quanto representante mercantil. Adora ver a mesa rodeada de amigos se deliciando com a sua refeição. Juliana A. Promete surpreender os chefs.


Huawei Sound Joy: a coluna portátil inteligente desenvolvida pela Huawei e pela Devialet - ITO - NETthings\nHome » coluna » Huawei Sound Joy: a coluna portátil inteligente desenvolvida pela Huawei e pela Devialet\nHuawei Sound Joy: a coluna portátil inteligente desenvolvida pela Huawei e pela Devialet\nA nova coluna portátil apresenta excelentes recursos, tais como a facilidade de emparelhamento e o carregamento rápido.\nA Huawei lança hoje a Huawei Sound Joy, uma coluna portátil desenvolvida em parceria com Devialet, pensada para uma utilização diária e em movimento, pois oferece comodidade, ao ser portátil, sem descorar na experiência de som, que é de alta qualidade. A partir de hoje, é possível comprar a nova Huawei Sound Joy em Portugal, por um preço recomendado de 149,99€.\nDesenhada para ser fácil de transportar\nRevestida em tecido, a Huawei Sound Joy conta com a classificação IP67, que lhe garante resistência à poeira e à água, e uma superfície antiderrapante preparada para se adaptar a todo tipo de cenários. Com uma bateria integrada de grande capacidade e carregamento rápido, a Huawei Sound Joy é a coluna ideal para dar vida a qualquer festa ao ar livre.\nA nova coluna portátil da Huawei, que mede 202mm de altura e 73mm de diâmetro, pesa apenas 680g, e é indicada para levar para piqueniques, caminhadas ou mesmo passeios de bicicleta. Esta coluna é uma ótima companheira, que permite aos utilizadores levar as suas músicas favoritas a qualquer evento ao ar livre ou até mesmo acompanhar quem pratica atividades desportivas ou de entretenimento, tais como a dança, o skateboarding ou o parkour.\nDesenhada em conjunto com a Devialet para um som de qualidade\nO lançamento da Huawei Sound Joy combina os esforços da Huawei e da Devialet, conhecida pelos seus produtos premium. Potenciando a tecnologia Devialet SAM®, a Huawei Sound Joy proporciona uma experiência de áudio mais autêntica euma distorção minimizada. O icónico radiador passivo Push-Push inclui dois diafragmas que são colocados de trás para a frente para compensar ondas sonoras, proporcionando sons mais claros e sem distorção.\nEsta coluna também adota um sistema de som de 2 vias para fornecer frequências altas, assim como graves profundos, mesmo quando o volume está elevado. Apesar de ter apenas uma pequena cavidade sonora de 0,25L, pode chegar aos 79dBA mesmo a 2m . Mesmo em locais com muito ruído ou numa área exterior, a Huawei Sound Joy nunca falha aos utilizadores, partilhando a sua música com a máxima qualidade.\nExcelente autonomia da bateria e carregamento rápido\nCom uma bateria de longa duração de 8800mAh, a Huawei Sound Joy conta com até 26 horas de reprodução de música contínua, com a carga completa, possibilitando momentos de áudio sem preocupações quando se viaja ou quando não existe possibilidade de carregar a bateria. Mesmo quando a bateria está fraca, o carregamento rápido de 40W permite carregar a Huawei Sound Joy de forma rápida e segura. Com apenas 10 minutos de carregamento, pode ouvir música durante mais uma hora. Para obter um carregamento completo, necessita apenas de 3 horas.\nOuvir música de forma mais inteligente com a Huawei Sound Joy\nA Huawei Sound Joy inclui uma variedade de características inteligentes. A funcionalidade Abanar ativa o modo de Emparelhamento Stereo e faz com que duas unidades do dispositivo se emparelhem e se liguem, formando um sistema de som stereo e proporcionando uma experiência de áudio mais envolvente, especialmente, em festas. Graças à função de Transferência com um Toque, os utilizadores podem facilmente ligar o seu smartphone ou tablet à coluna e transferir de imediato os suportes de reprodução nele contidos, como músicas ou chamadas, entre outros. Para tal, basta tocar com o dispositivo emissor na parte superior da Huawei Sound Joy e está feito o emparelhamento.\nA forma como os utilizadores controlam a reprodução e o volume de som também se torna mais inteligente com a funcionalidade de Controlo através de um Relógio Huawei que permite pausar, saltar músicas e aumentar/diminuir o nível de volume diretamente a partir do pulso do utilizador. Devido à função Deteção Automática, é possível ligar um smartphone, portátil ou tablet próximo da Huawei Sound Joy com apenas um toque na janela pop-up que aparece no dispositivo. Não é necessário cabo ou configurações adicionais nos dispositivos, fazendo da Huawei Sound Joy uma excelente coluna, onde quer que esteja, no escritório, em casa ou ao ar livre. Este novo dispositivo conta ainda com um anel multicolorido para efeitos de iluminação que proporciona um ambiente agradável.\nPara mais informações e para comprar consulte: https://consumer.huawei.com/pt/audio/sound-joy/buy/


A receita do relacionamento bem sucedido | Agência Par Ideal - agência de namoro e casamento de Curitiba\nA receita do relacionamento bem sucedido\n23/07/2012 / Mariana Santos / Blog\nUm estudo realizado com 280 adultos nos Estados Unidos mostrou que os casais que fazem o caminho do trabalho juntos são mais felizes. Será? Acredito que para alguns casais conversar sobre sonhos comuns e planos para a vida a dois no caminho para o trabalho é agradável e pode ajudar no desenvolvimento da relação, mas isso não é uma regra. É importante lembrar que cada casal tem suas particularidades e nem todos gostam de passar tanto tempo juntos.\nA verdade é que não existe receita para a felicidade de um relacionamento. Aos poucos as pessoas se conhecem e de acordo com a realidade de cada um surgem novas situações que os casais aprendem a administrar de acordo com seu temperamento, preferências e necessidades. E muitos momentos podem ser compartilhados com o seu par ideal, o trajeto para o trabalho é apenas um deles.\nEntão, quero aproveitar o assunto para lembrar que sua relação amorosa é única e não deve ser comparada com outras! Aproveite o tempo ao lado do seu par ideal, mas não transforme isso em uma obrigação.\nA receita do relacionamento bem sucedido, caminho do trabalho juntos, casais, felicidade de um relacionamento, juntos, par ideal


Oceano atlantico TCC - Serviço oxtrabalhosfyco.asbvme.us\nCasos de ovnis e acidentes com aviões e navios ocorridos no oceano atlântico. Oceano atlântico o oceano atlântico é o segundo maior oceano do mundo em extensão, superado somente pelo pacífico o atlântico abrange uma área de. A divisão mais aceita refere-se à existência de cinco oceanos: o oceano Índico, o oceano atlântico, o oceano pacífico, o oceano Ártico e o oceano antártico. Definição de oceano atlântico no dicionário português online significado de oceano atlântico tradução oceano atlântico traduções de oceano atl. O atlântico é o segundo maior oceano da terra o primeiro é o pacífico no entanto, o oceano atlântico banha uma extensão maior de terra firme do que qualquer. Os apartamentos oceano atlântico em portimão, perto de praia da rocha, oferece os serviços de ginásio, piscina exterior para adultos e crianças e amplos.\nOceano pacífico o oceano pacífico é a maior e mais antiga massa marítima do planeta com 180 milhões de km², o pacífico cobre quase um terço da superfície. Significado de atlântico no dicionário online de português o que é atlântico: adj relativo ao oceano atlântico ou aos estados por ele banhados: as costas. O océano atlántico, o segundo do mundo en superficie e case enteiramente localizado no hemisferio occidental, alóngase no sentido norte-sur cunha forma que lembra. Oceano atlântico apartamentos turísticos 13k likes o oceano atlântico, é um empreendimento recente e moderno composto por um conjunto de apartamentos. O oceano Índico, que se distingue por suas dimensões relativamente reduzidas em comparação com as do oceano pacífico ou do oceano atlântico, estende-se em sua.\nImagens do fundo o oceano atlântico encontro do mar do caribe com oceano atlantico o quilómetro quadrado mais estranho do oceano - docspt. É possível que os primeiros humanos a atravessarem o oceano atlântico tenham sido os africanos, usando balsas e desembarcando no nordeste do brasil, há milhares. Jogos de tesouros do oceano místico, gratuitos para todo mundo explore a superfície do oceano para encontrar tesouros valiosos. Oceano atlântico apartments, just 5 minutes from praia da rocha and from the centre of portimão created to provide all the comfort of a second home for your. Baixar 100410 oceano atlântico imagens e fotos fotosearch - o arquivo mundial de fotografias - um website Único tm. Posts sobre oceano atlântico escritos por bruno gomes guimarães, pedrohprates, marcelafavila e isape.\nMapa do oceano atlântico sul com relevo fernando de noronha abrolhos. Oceano atlântico, características do oceano atlântico, cristóvão colombo, correntes marítimas, geografia, oceanos. O maior oceano do mundo é o pacifico depois vem o atlantico e depois vem o indico o pacifico é aquele que separa a america da asia e oceania, o.\nO oceano atlântico é o segundo maior oceano em extensão, com uma área de aproximadamente 106400000 km²,  cerca de um quinto da superfície da terra É o. Para alterar o mapa : clique nos botões verdes com uma cruz preta para aumentar o zoom no botão verde com uma pitada de zoom ou nas setas verdes para mapas. Situado em cabedelo, o oceano atlântico oferece acomodação independente com wi-fi gratuito o apartamento fica a 1,7 km da praia do jacar. O oceano atlântico é o segundo maior oceano em extensão, com uma área de aproximadamente 106200000 km², cerca de um quinto da superfície da terra. Confira um estudo detalhado sobre as características gerais dos oceanos que compõem o planeta terra.\nOceano atlântico apartamentos turísticos, portimão 1,3 mil curtidas o oceano atlântico, é um empreendimento recente e moderno composto por um conjunto.


# educação, escola, modelos de ensino. | Portal EMDiálogo - Ensino Médio em Diálogo\n# educação, escola, modelos de ensino.\nEnviado por mercyrodrigues em ter, 17/12/2013 - 13:47\nA formação dos professores de nossas escolas hoje\nEnviado por Valéria em qui, 28/11/2013 - 10:24\nGatti é uma brilhante pesquisadora brasileira que debate sobre a formação de professores, suas necessidades e carências diante do sistema educacional atual. Nessa entrevista ela fala sobre o panorama atual da educação se tratando da formação dos professores que atuam na educação básica pública de nosso país.\nÉ preciso falar, mas com a certeza de ser ouvido\nEnviado por Valéria em Sat, 05/10/2013 - 15:20\nTrago a música “A Próxima Parada” de Jota Quest a fim de levantar uma questão muito debatida hoje em dia no cotidiano escolar que é a de dar voz aos jovens. É de suma importância que isso seja feito, pois estes são os principais sujeitos do Ensino Médio e eles têm muito a dizer. Porém não se tem apenas a forma verbal de se expressar, mas pode-se falar com ações, gestos, corpo, etc.\nE quando a fala (seja verbal ou de qualquer outra natureza) acontece será que estes jovens são realmente ouvidos dentro da instituição escolar?\nEnviado por Valéria em Sat, 28/09/2013 - 10:13\nO vídeo “Mudando Paradigmas na Educação” nos mostra o quanto a escola atual ainda está calcada em modelos ultrapassados e que urge a renovação das metodologias, práticas e até mesmo da estrutura de nossas escolas, para que assim consigamos atingir nossas crianças e jovens com uma educação mais significativa. Acredito que estamos caminhando nessa direção. Um exemplo claro são as ações do EMDiálogo que objetiva dar voz aos sujeitos para os quais o ensino médio é voltado, ou seja, o jovem.\nEnviado por Alda Sousa em dom, 08/09/2013 - 09:22


Psicodinamica das cores Trabalhos Acadêmicos - Serviço Personalizado\nPalestras, cursos e livros do cientista osny ramos realiza estudos e pesquisas nos campos da física quântica, psicodinâmica das cores e epigenética. Livro - psicodinâmica das cores em comunicação em oferta na americanascom compre agora pelo menor preço. Osny ramos o efeito psÍquico das cores nos ambientes este livro é uma síntese de mais de 20 anos de estudos e pesquisas sobre o modo como as. A ação das cores umas sobre as outras, ao mesmo tempo que mostra a relatividade da aparência da cor • uma cor ao lado de outra mais escura. Psicod das cores na comunicação introdução as cores geradas podem produzir impressões, sensações e reflexos sensoriais.\nBem-vindo ao teoria das cores trazemos abaixo um traçado geral sobre a teoria das cores as cores são um dos temas mais fascinantes da teoria da arte. Sinopseconteúdo - 1 a natureza, o homem, a cor - a imersão nas cores os vitrais coloridos utilização da cor sintaxe das cores criação do espaço por. No século xix, o barroco conferiu à cor um caráter dinâmico, enquanto que o romantismo procurou as cores espirituais das paisagens foi quando ouve grande. Psicodinamica das coreso uso adequado de cores parece ser uma questão tão antiga quanto a própria escrita mas até hoje.\nNota de imprensa ggbrasil nota de imprensa a psicologia das cores como as cores afetam a emoção e a razão a socióloga, psicóloga e professora de teoria da. Scribd is the world's largest social reading and publishing site. A importância das cores na comunicação visual: você sabia que 84,7% dos consumidores acham que a cor é o fator mais decisivo na escolha de um produto. Psicodinâmica das cores a obra, dividida em 6 partes, começa com a natureza, o homem, a cor, um capítulo substancialmente introdutório às cores, a maneira como. Seu significado: considerando as cores como luz, a cor branca resulta da sobreposição de todas as cores, enquanto o preto é a ausência de luz. Veja grátis o arquivo psicodinâmica das cores em comunicação enviado para a disciplina de composição e projeto visual categoria: outros - 2092590.\nA cor está presente em nosso dia a dia, constantemente nos deparamoscom cores em nossa volta, o homem sempre vive com suas sensações.\nA psicologia das cores é muito importante no marketing e no dia-a-dia por ser fundamental para entendermos o significado das cores e como podemos usar uma. Todos os direitos reservados pela editora edgard blücher ltda segundo novo acordo ortográfico, conforme 5 ed do. Apesar do significado das cores serem diferentes em culturas diferentes, elas podem ser usadas para transmitir uma determinada mensagem o livro faz um apanhado do. Limeira/sp - ano 4, nº 12- de outubro à dezembro de 2007 psicodinâmica das cores em comunicação 1 ana karina miranda de freitas as cores. Psicodinamica das cores riffomar loading amanda gleaves - psicologia das cores - ignite algarve - duration: 5:29 ignite algarve 2,442 views.\nNenhuma cor é feia a cor é apreciável em si mesma, em absoluto, qualquer seja ela ainda que a atração de cada cor específica seja desigual, a referida. 5ª edição revista e ampliada psicodinâmica das cores em comunicação modesto farina maria clotilde perez rodrigues heliodoro teixeira bastos filho. A psicologia das cores é o estudo que mostra a forma como nosso cérebro identifica e transforma as cores em sensações a influencia das cores pode ser observada. Muito bacana darlan tenho aplicado teoria das cores e seus significados constantemente em meus projetos e outro dia ministrei uma.


Como plantar jaca - 8 passos\nPor Nídia Figueira. 9 março 2017\nA jaqueira, também conhecida como Fruta-pão, é uma árvore de fruto tropical cuja fruta é conhecida como jaca. A fruta da jaqueira é conhecida pelo seu tamanho notável, e a planta cresce facilmente e resiste a pragar, secas e temperaturas altas. Por ser rica em nutrientes, a jaca tem vindo a ganhar popularidade e a sua árvore produz até 100 frutos por ano, que variam entre 3 e uns incríveis 37 quilos! Ela pode ser usada para produzir polpa congelada, suco, sorvete, licores, doces em calda, geleias, entre outros produtos.\nA época deste fruto facilmente adaptado ao clima brasileiro é entre Dezembro e Abril. Se você gostaria de ter jaca em casa e beneficiar da sua riqueza em vitaminas e minerais, confira como plantar jaca nesse artigo do umCOMO!\nTambém lhe pode interessar: Como plantar graviola\nAntes de plantar jaca, você deve decidir se quer fazer um plantio de sementes ou se prefere comprar o pé em um viveirista ou em uma loja de produtos agropecuários. Caso opte pelas sementes, prefira escolher sementes de frutos que tenham origem em jaqueiras vigorosas, precoces e sadias.\nSe optar pelo pé de jaca, o preço vai depender do tamanho, variando entre 5 e 15 reais. O ideal é plantar mais do que uma variedade de jaqueiras no pomar para garantir uma produção mais eficaz.\nO próximo passo é escolher o local onde vai plantar a jaqueira. A árvore prefere ambientes quentes e úmidos, mas tem uma boa produção em locais com outras características como climas subtropicais e semiáridos, quando é instalado um sistema de irrigação. São recomendadas 2 a 3 plantas em pomares domésticos.\nO cultivo da planta deve dar-se em dias com muito sol, chuvas bem distribuídas e uma temperatura média de 25 º C. Se for plantada em locais com temperaturas elevadas, a semente da jaqueira pode até germinar espontaneamente.\nA melhor época para plantar a jaqueira é o início da estação das águas. A planta prefere solos drenados, profundos e férteis, como o tipo areno-argiloso (sem possibilidade de encharcamentos) com pH de 0 a 0.5.\nPara fazer o transplantio, deve colocar a muda em sacos pretos individuais com medidas de 30 x 20 centímetros preenchidos com uma mistura de terra areno-argilosa (ou, se preferir, 3/4 de terra de mata com 1/4 de esterco de curral. Quando atingirem os 5 centímetros de altura, é hora de desbastar as mudas para garantir que ficam mais fortes. Só quando as jacas atingirem os 20 centímetros de altura é que devem ser transplantadas para o seu ambiente definitivo.\nDica: Acesse esse artigo e descubra como fazer adubo natural.\nPara plantar jaca, é necessário abrir as covas dois meses antes do plantio, com medidas de 50 x 50 x 50 centímetros (ou 60 x 60 x 60). Use folhas de palmeiras para cobrir 50 % da área de cultivo, uma vez que as mudas necessitam de sombra parcial no começo do plantio. À medida que as jaqueiras vão crescendo, a incidência de luz no terreno ganha mais espaço.\nApesar de ser uma árvore muito resistente, a jaqueira pode ser atacada por besouro-do-furto, cochonilha, arlequim-da-mata e abelha-cachorro. Tenha também atenção para problemas como a podridão parda e antracnose.\nAntes de plantar jaca, tenha em conta que a frutificação só ocorre entre 3 e 5 anos após a sua implantação (normalmente). Você saberá que o momento de colher as jacas chegou assim que as frutas liberarem um perfume bem acentuado, o que acontecerá 180 a 200 dias após o florescimento. Para garantir que as frutas estão maduras, pressione a casca. Ela deve estar firme e com saliências amarelas e destacadas! Para conferir mais dicas, confira esse artigo e descubra como saber quando a jaca está madura.\nA árvore pode chegar a atingir os 20 metros altura e a sua longevidade pode ultrapassar os 80 anos! Agora que já sabe como plantar jaca e beneficiar das suas propriedades, confira outras frutas para plantar num pomar!\nSe pretende ler mais artigos parecidos a Como plantar jaca, recomendamos que entre na nossa categoria de Jardinagem e Plantas.\npreciso saber se as raizes da jaca podem se expandir e trazer danos a muros ou construções proximas,pois meu marido plantou bem perto de nossa casa e a 1 m. de um muro,desde já agradeço pela ajuda.


Diagnóstico Informativo: O que saiu na imprensa\nTerça - feira, 19 de maio de 2009\nEvento abre exposição sobre Arthur Sá Earp Neto\nDepoimentos emocionados e repletos de orgulho marcaram a solenidade de abertura da exposição Magnífica Causa, Centenário de Arthur Sá Earp Neto. A vernissage foi realizada no último sábado, no Centro Cultural da FASE – Casa Hercílio Esteves e reuniu autoridades municipais, amigos e familiares de Arthur Sá Earp Neto. A exposição fica aberta ao público até o dia 10 de julho, de segunda a sexta-feira, das 9 às 19h.\nA exposição traz documentos, fotos, objetos pessoais e arquivos que ajudam a contar um pouco da história de Arthur Sá Earp Neto, personalidade atuante na sociedade petropolitana nos mais diversos aspectos – político, religioso, estudantil.\nAdvogado por formação, Arthur Sá Earp Neto era um apaixonado pelo ensino. Um dos fundadores das Faculdades Católicas Petropolitanas (hoje Universidade Católica de Petrópolis), tinha entre seus sonhos a transformação de Petrópolis em um pólo universitário e a criação de uma faculdade de medicina na cidade.\n"Petrópolis era uma cidade basicamente de veraneio. Ele vislumbrou que esta podia ser uma cidade universitária. Dr. Arthur é uma pessoa a quem Petrópolis muito deve. Muitas pessoas fizeram muito por Petrópolis, mas poucos como ele. Quem funda uma universidade funda uma nação", comentou o historiador Joaquim Eloy, curador da exposição.\nFoi em busca da realização de seu sonho que Arthur de Sá Earp Neto fundou, em 1967, a Faculdade de Medicina de Petrópolis, instituição que consolidou seu nome, ao longo dos anos, como uma das mais renomadas instituições de ensino médico do País, atraindo estudantes de diversas regiões do Brasil.\nA abertura da exposição contou com depoimentos emocionados daqueles que conviveram com Arthur Sá Earp Neto, como o médico Guillermo Lopez Lopez, atual professor e diretor da instituição. "A gente só morre quando morre a última pessoa que se lembra da gente. Acho que Dr. Arthur vai continuar entre nós por muito tempo", comentou.\nAmigo pessoal de Arthur Sá Earp Neto, o Desembargador Miguel Pachá esteve presente à solenidade. "Dr. Arthur era uma pessoa ativa na sociedade. Ele sabia que Petrópolis era um local para se talhar uma cidade universitária. Ele lutou para que as faculdades petropolitanas e a Faculdade de Medicina de Petrópolis se tornassem uma realidade. Ele era ativo em todas as causas".\nO lado descontraído de Dr. Arthur e pouco conhecido das pessoas foi mostrado por suas filhas – Maria Isabel, Maria Thereza e Maria Luísa. "Eu vim falar de um Arthur que marcou muito a nossa família com o seu jeito de ser. A alegria era a marca de ordem de meu pai. Ele herdou de seus pais o dom a música. Meu pai era sinônimo de alegria, de simplicidade e de diversão. Com ele aprendemos que viver é tornar reais nossas paixões. Aprendemos esta lição", declarou Maria Thereza.\nA exposição Magnífica Causa fica aberta ao público até o dia 10 de julho, no Centro Cultural da FASE – Casa Hercílio Esteves (Av. Barão do Rio Branco, 1.003 – Centro). O espaço funciona de segunda a sexta-feira, das 9 às 19h. A entrada é franca.\nFASE participa do Conselho Municipal de Educação


Nossos planos | Avenue - Sua corretora de valores nos EUA\nUma Avenue, vários caminhos. Escolha o seu.\nSem mensalidades e sem mínimos, para abrir sua conta.\nPremium Acesso exclusivo aos relatórios e sugestões Tenha acesso exclusivo aos nossos relatórios e sugestões\nCorretagem zero Envie até 10 ordens mensais sem custo Usufrua de nosso plano de corretagem zero e envie até 10 ordens mensais sem custo\nCusto de manutenção mensal\nAté 10 corretagens mensais grátis. Finalizadas as 10 corretagens grátis, o valor será o descrito na tabela de preço padrão usada para o plano com corretagem, conforme descrito abaixo.\nAcesso ilimitado aos materiais disponibilizados em nossa plataforma. Corretagens seguem o valor progressivo da tabela abaixo.\nOperações até US$ 100,00\nUS$ 1,00 por ordem\nOperações de US$ 100,01 a 1.000,00\nUS$ 1,50 por ordem\nOperações de US$ 1.000,01 a 2.000,00\nUS$ 4,30 por ordem\nOperações acima de US$ 2.000,00\nUS$ 8,60 por ordem\nA execução de ordem de ações fracionadas terá o mesmo custo de corretagem das ordens referentes as compras das ações inteiras.\nFundos possui uma taxa de movimentação do produto para todas as operações de compra, recompra e venda.\nOperação de compra (primeira ordem)\nUS$ 50,00 por ordem\nOperação de recompra\nUS$ 20,00 por ordem\n*para operações de compra, recompra e venda temos um repasse de US$20,00 por ordem que é feito para a nossa custodiante, Apex. Esse valor já está incluso nos preços apresentados acima.\nAs carteiras administradas tem um custo de 0.75% ao ano.\n*Mínimo para aporte ou resgate varia por perfil e por alocação no trimestre.\nCusto para transferir\nEntrada: US$ 0\nSaída: US$ 75\nSaída: US$ 25 por posição\nDRS (local/ USA)\nEntrada: US$ 115\nSaída: US$ 115 por posição\n(somente conversão de Street Name\npara Person Name)\nDWAC (local/ internacional)\nEntrada: US$ 100 por posição\nSaída: US$ 100 por posição\nRejeitada: US$ 125\nCusto de depósito\nAtravés dos sistemas da Avenue não existem custos para realizar depósitos ou retiradas.\nSe você optar por depósitos ou retiradas via sistemas de terceiros.\nDepósito Doméstico USA\nRelatórios auxiliares de IR serão desabilitados\nRetirada Doméstica EUA\nCusto de devolução de Wire\nAs operações para envio ou retorno dos fundos a título de investimento no exterior são processadas diretamente pelo BEXS Banco de Câmbio S/A, instituição financeira devidamente autorizada pelo Banco Central do Brasil a operar no mercado de câmbio.\nIOF para criptoativos\nIOF para disponibilidade\nCartão virtual débito Mastercard\nTaxa de Entrega de Cartão Físico (7 a 15 dias úteis)\nSaque em ATM – EUA e Demais Países\nUS$ 2,00 + taxas regionais\nSaque em ATM – Dentro do Brasil\n3% + taxas regionais\nSpread para pagamentos que não sejam em dólar\n* cobranças adicionais pela Mastercard podem ser aplicadas\nCertificação de Imposto (W-8)\nUS$ 2,00 (cobrança única na primeira remessa para os EUA)\nEnvio de correspondência física (Correio)\nUS$ 2,00 por confirmação (nota de corretagem)*\nUS$ 5,00 por extrato mensal (Clearing account statement)*\n* Caso seu email não seja válido, informações transacionais serão enviadas via correspondência, sendo o custo repassado integralmente ao cliente.


O recrutamento de monócitos do sangue para os tecidos periféricos alvo é fundamental para o processo inflamatório durante a lesão tecidual, desenvolvimento de tumor e doenças auto-imunes. Isto é facilitado através de um processo de captura de fluxo livre para a superfície luminal das células endoteliais ativadas, seguido de sua migração de adesão e transendothelial (transmigração) no tecido afetado subjacente. No entanto, os mecanismos que suportam o recrutamento preferencial e contexto-dependente de subpopulações de monócitos são ainda não são totalmente conhecidos. Portanto, nós desenvolvemos um método que permite o recrutamento de subpopulações diferentes monócitos para ser visualizado e medido sob fluxo simultaneamente. Este método, baseado na imagem latente confocal lapso de tempo, permite a distinção inequívoca entre monócitos aderentes e transmigra. Aqui, descrevemos como esse método pode ser usado para estudar simultaneamente a cascata de recrutamento de monócitos pro-angiogênico e não-angiogênico in-vitro. Além disso, este método pode ser estendido para estudar as diversas etapas do recrutamento de até três populações de monócitos.\nOs monócitos constituem um componente fagocítica da imunidade inata que é essencial para o combate de patógenos, limpeza de tecidos danificados, angiogênese e a fisiopatologia de muitas doenças, incluindo câncer,1,2,3 . Os monócitos são células derivadas da medula óssea, compostas de subpopulações heterogêneas que circulam no sangue, mas podem ser recrutadas para o local da inflamação no tecido periférico, através de mecanismos moleculares específicos. As cascatas de recrutamento de monócitos, quanto aos leucócitos em geral, implica diferentes etapas, incluindo captura, rolando, rastejando, prisão, migração de transendothelial (transmigração) e migração através da parede do vaso (membrana basal e mural células)4. Estes passos envolvem principalmente moléculas induzida por inflamação na superfície luminal endotelial como selectinas, ligantes de glicoproteína, quimiocinas, moléculas de adesão intercelular e juncional e seus receptores em leucócitos como selectina ligantes e integrinas. Vias de tráfico através das junções de célula endotelial (paracellular) ou através do corpo de célula endotelial (transcellular) podem ser usadas por leucócitos de atravessar a barreira endotelial5. Enquanto os monócitos historicamente foram documentados a transmigrar através da rota de transcellular, potenciais divergências no seu percurso migratório têm sido propostas como os monócitos já não são considerados uma população celular homogênea. Agora está se tornando claro que a diversidade de monócitos podem ser definidos por cada uma das suas diferenças e semelhanças, com relação a sua distintivo extravasamento cascatas de3,6. Portanto, para inequivocamente discriminar entre subpopulações de monócitos, é crucial Visualizar e processar o fenótipo o comportamento de cada uma dessas subpopulações diferentes durante o recrutamento.\nMonócitos do humano, porco, rato e rato foram subdivididos em subpopulações fenotípicas com determinadas funções anexam e comportamentos migratórios específicos7,8,9. Por exemplo, em humanos, monócitos podem ser divididos em três subgrupos com base em sua expressão de superfície de CD14, um co-receptor para lipopolissacarídeo bacteriano e CD16, o receptor de Fc-gama III. Subpopulações de monócitos humanos incluem CD14 clássica+CD16-, intermediário CD14+CD16+ e não-clássica CD14dimCD16 células de+ 6,9. O CD14 clássica+CD16– monócitos foram mostrados para ser inflamatória principalmente considerando que a piscina de CD16+ monócitos coletivamente foram encontrados para apresentar TIE2 expressão e proangiogenic função10. Consistentemente, estimulação de células endoteliais com citocinas inflamatórias, tais como necrose de tumor humano fator α (TNF) ou interleucina (IL-1) beta (inflamação convencional) é suficiente para desencadear o recrutamento completo de CD14 clássica+CD16 monócitos – . No entanto, ações simultâneas de fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) A e TNFa (angiogênico orientada por fatores inflamação) são necessárias para provocar a transmigração do CD16+ proangiogenic piscina de monócitos3. Historicamente, o sistema tradicional de Transwell sob condições estáticas, a câmara de fluxo paralelo placa e câmaras de fluxo de µ-slide têm sido utilizados para analisar quantitativamente o recrutamento da população de leucócitos de um em um tempo em vitro11 ,12,13. Enquanto estes protocolos validados, um método mais robusto que permitiu a análise simultânea de várias subpopulações de monócitos seria considerado mais perspicaz. Tais metodologias devem contabilizar várias interações e as diferentes frequências de cada respectiva população e também fornecer uma compreensão mecanicista das semelhanças e especificidades para as cascatas de recrutamento que definem cada monócito subconjunto.\nAqui, apresentamos um método baseado sobre a lapso de tempo por imagens do recrutamento de monócitos sob fluxo que permite que o cascades migratórias de subpopulações diferentes monócitos para ser estudado simultaneamente usando microscopia confocal. Este método integra determinados recursos críticos que imitam a inflamação da célula endotelial, bem como a hemodinâmica de monócitos em vênulas pós-capilares, que circula o principal local de recrutamento de leucócitos em vivo. O método proposto utiliza células endoteliais veia umbilical humana (HUVEC), que são geradas através de um protocolo bem estabelecido de isolamento de cabos de cordão umbilical humanos. Este recurso clínico tem a vantagem de ser facilmente disponível como um subproduto biológico, e também proporcionar um rendimento razoável de células endoteliais, que podem ser isolados da veia umbilical. Também usamos corantes fluorescentes e imunofluorescência para distinguir entre os diferentes componentes celulares e microscopia confocal para definir inequivocamente monócito posicionamento (luminal vs abluminal) ao longo do tempo. O protocolo aqui apresentado foi desenvolvido a medida simultaneamente os níveis de transmigração de subpopulações de monócitos. Além disso, deve notar-se que esta metodologia pode ser estendida para estudar outras subpopulações de leucócitos e processos de recrutamento, pelo uso de diferentes biomarcadores e rotulagem.\nMateriais humanos foram usados com o consentimento dos doadores voluntários e de acordo com os suíços comités de ética em pesquisa clínica.\n1. isolamento e congelamento do Cordão Umbilical humano veia células endoteliais (HUVEC)\nAdicione 5 mL da solução de revestimento para um balão de T75 (0,1 mg/mL colágeno G e gelatina de 0,2% em tampão fosfato salino PBS pH 7,4) por 30 min a 37 ° C antes de iniciar o isolamento HUVEC.\nLimpe o cabo com PBS, limpe-a com compressas estéreis e colocá-lo em uma estéril 20 cm placa de Petri. Corte as extremidades do cabo com uma tesoura esterilizada.\nIdentifica a única grande veia e duas artérias pequenas. Suavemente Insira uma cânula com uma torneira de três vias ligada a ele em veia extremidades nas extremidades do cabo.\nAperte o cabo e a conexão da cânula firmemente com um comprimento de fio.\nPerfundir o cordão duas vezes com 20 mL de meio RPMI contendo 100 penicilina U/mL, de 100 U/mL Estreptomicina e de 250 ng/mL anfotericina B para lavar as veias do fio. Este processo faz a aparência do cordão mais brancos e mais clara. Esvazie a veia antes da adição de colagenase, recolhendo o RPMI com uma seringa em uma extremidade.\nPerfundir a veia com 12 mL de 1 mg/mL colagenase tipo eu (0,22 µm-filtrada).\nFechar a torneira na medula termina e incubar o cabo a 37 ° C por 12 min.\nMassageie suavemente o cabo para desanexar células endoteliais do lúmen da veia.\nTomar 30 mL de RPMI contendo 10% de soro fetal bezerro com uma seringa de 50 mL e conectá-lo a uma extremidade do cordão umbilical.\nConecte uma seringa vazia de 50 mL para a outra extremidade do cordão umbilical\nAbra a torneira e perfundir a veia de uma ponta, enquanto que coletando reciprocamente do outro lado.\nNota: A suspensão coletada contém células endoteliais.\nCentrifugar a suspensão celular a 200 x g por 5 min.\nDesprezar o sobrenadante e ressuspender as células com 10 mL de meio M199 completo (M199 suplementos contendo 20% FCS, crescimento das células endoteliais 15 µ g/mL, sódio de heparina 100 µ g/mL, 0,5 µM de hidrocortisona, 10 µ g/mL de ácido L-ascórbico, 100 penicilina U/mL, 100 U/mL estreptomicina e 250 ng/mL anfotericina B).\nRemover a solução de revestimento de balão T75 e lave uma vez com PBS.\nSementes das células colhidos passo 1.13 para o balão de T75 e colocá-lo na incubadora a 37 ° C com 5% de CO2.\nNo dia seguinte, lave o balão 3 vezes com o meio M199 completo para remover células vermelhas do sangue residuais e depois mudar o médio a cada 2 dias até a confluência.\nNa confluência de 80-90%, enxágue a monocamada HUVEC uma vez com 5 mL de PBS e separar as células com 5 mL de tripsina 0,05% em 1 mM EDTA a 37 ° C por 5 min. Adicione 4 mL de M199 e 1 mL de FCS para parar a ação da tripsina. Lave o balão para desanexar todos HUVEC.\nRecolha uma alíquota de 50 µ l para ser usado para coloração de VE-caderina, PECAM-1 e gp38 e analisar por citometria de fluxo para verificar a pureza HUVEC.\nColete o restante do HUVEC da etapa 1.18 em um tubo de 15 mL e centrifugar a 200 x g durante 5 min à temperatura ambiente.\nDescartar o sobrenadante da etapa 1.19, Ressuspender as células em congelamento solução (FCS contendo 10% de DMSO) com uma densidade de 5 x 105 células/mL em cryotubes e congelar a-80 ° C ou em nitrogênio líquido até o uso.\nPara verificar a pureza HUVEC:\nAdicione 1 µ l de anticorpo de VE-caderina-FITC anti-humano, 1 µ l de anticorpo de PECAM1-PE anti-humano e 1 µ l de anticorpo de Podoplanin-APC anti-humano a alíquota de 50 µ l de HUVEC coletado na etapa 1.18.\nIncube a temperatura ambiente por 10 min.\nAdicionar 100 µ l de PBS e centrifugar a 400 x g durante 30 s.\nDesprezar o sobrenadante e ressuspender em 100 µ l de PBS. Dados podem agora ser adquiridos por técnicas de citometria de fluxo.\nNota: HUVEC são positivas para VE caderina e PECAM-1 e negativo para Podoplanin.\n2. HUVEC descongelação\nNota: Usar HUVEC na passagem baixa para experimentos (máximos 5 passagens).\nRevesti um balão T75 com 1 mL da solução de revestimento, a 37 ° C por 30 min.\nRapidamente HUVEC de descongelar a 37 ° C por 2 min e ressuspender as células em 10 mL de M199 completa.\nCentrifugar as células a 200 x g em temperatura ambiente por 5 min e descartar o sobrenadante.\nRessuspender as células em 10 mL de M199 completa.\nTransferi a suspensão de eritrócitos no frasco pré-pintados. Coloque o frasco na incubadora a 37 ° C com 5% de CO2. Altere o meio de cultura celular a cada 2 dias.\n3. HUVEC cultura na câmara de 0,4 µ-Slide\nCinco dias antes de iniciar o experimento de fluxo, pre-revesti as câmaras de um 0,4 µ-slide com 30 µ l de PBS contendo colágeno de 0,1 mg/mL G, gelatina de 0,2% a 37 ° C por 30 min.\nLave as câmaras com 100 µ l de PBS.\nSepare as células de um HUVEC confluente de 80-90% de um balão T75.\nEnxágue HUVEC com 5 mL de PBS e desanexá-los com 5 mL de tripsina 0,05% a 37 ° C por 5 min.\nLave e coletar a suspensão de eritrócitos em M199 completa e contar as células pelo método mais conveniente. Centrifugar a 200 x g durante 5 min à temperatura ambiente.\nRessuspender as células em 106 células/mL e 30 µ l (30.000 células) por câmara de distribuir.\nIncube as células em uma incubadora a 37 ° C com 5% de CO2 por 1h.\nAdicionar 150 µ l de M199 completa para cada câmara e cultura das células durante 5 dias na incubadora a 37 ° C e 5% de CO2. Altere o meio em 2 dias.\n4. HUVEC mancha para ensaio de recrutamento de monócitos sob fluxo\nPrepare o suporte de rotulagem de M199 e 1 µM de CMFDA (5-chloromethylfluorescein diacetato) e aquecê-lo a 37 ° C por 5 min antes de rotulagem de célula.\nHUVEC lavar duas vezes com meio M199 aquecido a 37 ° C.\nSubstituir o medium com 30 µ l de aquecido médio rotulagem contendo 1 µM de CMFDA e coloque dentro da incubadora a 37 ° C e 5% de CO2 por 10 min.\nLave uma vez com M199 completa e incube as celulas com M199 completa na incubadora a 37 ° C e 5% de CO2 por 30 min.\nNota: É importante remover todos os vestígios de soro antes da adição da solução de etiquetagem, caso contrário ele pode alterar HUVEC coloração.\nSubstituir o medium com M199 completa contendo qualquer TNFa humana (500 U/mL) ou uma mistura de TNFa humana (500 U/mL) com a célula humana (1 µ g/mL) para 6 h na incubadora a 37 ° C e 5% de CO2.\n5. isolamento de monócitos humanos Pan e coloração de subpopulações\nUse um casaco de buffy de concentrado de sangue humano, ou 20 mL de sangue humano fresco isolado, coletado no dia do experimento em tubos vacutainer de EDTA.\nDiluir o sangue em PBS-1 mM EDTA (1:1) e suavemente Pipetar 20 mL do sangue diluído em cima a 20 mL de mídia gradiente de densidade. Centrifugar a 400 x g durante 30 min à temperatura ambiente com aceleração lenta e sem freio.\nRecolher a células mononucleares do sangue periférico (PBMC)-camada de plaquetas (entre mídia de gradiente de densidade e camadas de plasma) em um novo tubo de 50 mL contendo 40 mL de PBS - 1 mM EDTA. Top com PBS - 1 mM EDTA até 50 mL.\nCentrifugar a 200 x g em temperatura ambiente por 5 min. descartar o sobrenadante.\nRessuspender as células com 10 mL de tampão de coloração (PBS - 1 mM EDTA contendo albumina de soro bovino 0,5% BSA).\nRepita os passos de 5.5 e 5.6.\nRessuspender as células com 10 mL de tampão de coloração. Tome uma alíquota de 10 µ l para uma contagem de células.\nPopulações de PBMC de verificar e contar as células rapidamente com um citômetro de fluxo.\nNota: As populações de linfócitos e monócitos características podem ser observadas (figura 1A). De 50 mL de sangue humano fresco esperar sobre 50-100 x 106 PBMC.\nPara o recrutamento de CD14 + contra CD14-PBMC sob fluxo:\nLave o pellet três vezes com buffer de fluxo (M199 contendo 0,5% BSA) e ressuspender as células mononucleares no buffer de fluxo em 6 x 106 células / mL.\nFazer alíquotas de 200 µ l para cada ensaio. Incube a 37 ° C até 20 min antes do ensaio.\nAdicione 5 µ l de anti-CD14-PE e Hoechst 33342 em uma concentração final de 2 µM para cada alíquota. Misturar e incubar a 37 ° C por 10 min.\nCentrifugue a alíquota a 400 x g durante 30 s.\nDesprezar o sobrenadante e ressuspender o precipitado com 200 µ l de buffer de fluxo.\nPara o recrutamento de subpopulações de monócitos sob fluxo:\nIsole os monócitos com um kit de isolamento de monócitos pan de acordo com as instruções do fabricante.\nNota: O seguinte protocolo de isolamento é de 50 x 106 células. Pode ser escalado acima ou para baixo, enquanto está dentro as recomendações do fabricante.\nCentrifugar a suspensão de PBMC 200 x g em temperatura ambiente por 5 min.\nDesprezar o sobrenadante e ressuspender o precipitado com 400 µ l de tampão de coloração.\nAdicione 50 µ l de reagente de bloqueio de receptores Fc e 50 µ l de anticorpo Pan monócito cocktail.\nAdicione 400 µ l de tampão e 100 µ l de conjugado anticorpo de antimagnético biotina grânulos de coloração. Incube a temperatura ambiente por 15 min.\nAdicionar 2 mL de tampão de coloração e usar uma coluna de MACS LS juntamente com um ímã.\nColoque a coluna é sobre o ímã e adicionar 1 mL de tampão de coloração. Descarte o escoamento.\nPassar a suspensão PBMC na coluna e coletar o fluxo desobstruído, embora contendo os monócitos pan em um novo tubo de 15 mL.\nAdicione o buffer de coloração para cima até 5 mL.\nTomar uma alíquota e verificar a qualidade do isolamento de monócitos com um citômetro de fluxo.\nDetermine a contagem de monócitos do pan.\nNota: População de monócitos só pode ser observada (figura 1B).\nCentrifugue o restante de monócitos da etapa 5.11.11 a 200 x g por 5 min.\nDesprezar o sobrenadante.\nRessuspender as células em 5 mL de tampão de fluxo (M199 contendo 0,5% BSA).\nRepeti 5.11.13 para 5.11.14 duas vezes para eliminar qualquer vestígio de EDTA.\nFazer suspensão de monócitos no fluxo de buffer (M199 com 0,5% BSA) em 6 x 106 células/mL.\nFazer alíquotas de 200 µ l de monócitos para cada ensaio de recrutamento.\nManter a alíquota em 37 ° C na incubadora até 20 minutos antes da injeção.\nAdicione 5 µ l de anticorpo anti-CD16-PE e Hoechst 33342 (final de 2 µM) para cada alíquota.\nMisturar e incubar a 37 ° C por 10 min.\nDesprezar o sobrenadante e ressuspender o precipitado com 250 µ l de buffer de fluxo.\nAdicione 30 µ l de suspensão de monócitos em uma câmara do slide para servir para definir os parâmetros de aquisição em microscópio confocal.\nManter as alíquotas de suspensão de monócitos da etapa 5.18 a 37 ° C.\nNota: Esta suspensão está pronta para ser injetado no sistema de fluxo.\n6. preparação do sistema fluídico\nAssegurar que a incubadora de célula para a imagem, defina a 37 ° C.\nNota: Um diagrama do sistema de fluxo é mostrado na Figura 2.\nMontar a parte de tubulação i: inserir um macho do conector Luer para uma extremidade de um pedaço de tubo de silicone (8 cm comprimento e 3 mm de espessura) e ligue a outra extremidade a um conjunto de injeção de Luer em linha. Conecte o conector Luer este último para um pedaço de tubo de silicone (40 cm e 3 mm de espessura) em uma extremidade.\nNota: Opcionalmente, uma torneira de 3 vias, conectada a uma seringa de 5 mL pode ser inserida entre o conjunto de injeção de Luer em linha e o silicone tubulação para remoção de bolha de ar eventual.\nMontar a parte do tubo II: conectar uma extremidade de um comprimento de tubo de silicone (1 m de comprimento e 3 mm de espessura) com uma seringa de 20 mL. Inserir um macho do conector Luer para a outra extremidade do tubo.\nConectar parte I e parte de tubulação II, inserindo os machos de conector Luer para um acoplador de trava Luer fêmea (Figura 2A).\nColocar a extremidade livre do tubo de silicone no reservatório contendo o buffer de fluxo (M199 + 0,5% BSA) aquecido a 37 ° C.\nPuxe o êmbolo da seringa de 20 mL para encher o tubo com buffer de fluxo.\nColoque a seringa na bomba e fixá-lo.\nConjunto da bomba em retirar o modo (em oposição para infundir) e especificar a taxa de fluxo.\nDetermine a taxa de fluxo de acordo com o slide IBIDI usado, usando a seguinte fórmula:\nNota: O fator de slide é dependente o slide IBIDI usado para o experimento. Para o µ-slide eu0.4 Luer-lock usada neste exemplo, o fator de slide é 131,6. Para fatores de slide específico, consulte o site de empresa14. A viscosidade de buffer de fluxo é 0.0072 dyn.s/cm2. Tensão de cisalhamento nas vênulas pós-capilares é cerca de 0.5 dyn/cm2.\nConecte o slide (Figura 2B):\nPrenda o tubo de silicone ao redor o acoplador-fêmea Luer Lock e desconecte os dois machos de conector Luer o acoplador.\nConectá-los para os reservatórios do slide contendo estimulada HUVEC e encha-o com o meio. Evite bolhas de ar durante esta etapa.\nTire os grampos e certifique-se de que a conexão não está vazando.\nColoque a lâmina ao microscópio para a imagem latente de lapso de tempo e comece a bomba.\n7. imagem lapso de tempo de recrutamento de monócitos sob fluxo por microscopia Confocal\nUse um objectivo de 40x (ver Tabela de materiais) para a imagem latente.\nAtivar a 405 nm (núcleo de monócitos azul) 488 nm (células endoteliais verdes) e 561 lasers de nm (subconjunto CD16 + vermelho).\nUse a câmara que contém os monócitos para definir os parâmetros de aquisição.\nNota: Para detectar tanto não-transmigra e transmigra monócitos, a pinhole e intensidade de laser 405 nm são definidas altas. Assim, não transmigra os monócitos são ligeiramente visíveis no plano basal. Entretanto somente transmigra monócitos apresentam uma área imaculada ao redor do núcleo correspondente para o novo espaço ocupado por baixo de células endoteliais.\nColoque a câmara para ser adquirida sob o microscópio.\nEscolha 3 campos de pontos de vista num raio de 1 cm para a imagem latente confocal multi-posição.\nDefinir o basal e os lados apicais das células endoteliais\nDefina um z-pilha ao intervalo 10 – 12 µm (passo de 0,5 µm). Execute uma aquisição de lapso de tempo cada 1 min.\nApós 3 min da imagem latente, injete 200 µ l de suspensão de monócitos (6 x 106 células/mL) através do orifício de injecção de Luer em linha.\nNota: Rapidamente os monócitos aparecem no plano focal apical, aderir e começar a transmigração (trânsito do apical ao plano basal).\nImagem pelo menos 30 min. Uma vez terminado, parar a imagem e parar o fluxo. Fixe o tubo para desconectá-los a partir do slide.\nFixe o slide com paraformaldeído 4%, a 4 ° C por 10 min.\nLave o slide com PBS e armazenar o slide a 4 ° C para posterior análise, se necessário.\n8. analisar os dados com ImageJ\nConte o número de monócitos aderentes totais em cada campo. Determine a contagem de células por mm2.\nContagem de monócitos transmigra que estão presentes no plano basal por baixo de células endoteliais e identificados pela presença de um buraco negro (no canal verde) ao redor do núcleo.\nDivida a contagem de leucócitos transmigra pelo número total de leucócitos aderentes. A taxa de transmigração é apresentada como uma porcentagem de monócitos aderentes.\nPara ilustração, o apical e basais laterais podem ser mostradas simultaneamente para ilustrar os eventos que ocorrem em cada um desses compartimentos endoteliais.\nDeterminando o estado de ativação HUVEC induzida por TNFa\nA bio-atividade das citocinas inflamatórias TNFa pode ser variam de acordo com o lote e o repletion do ciclo de congelamento-descongelamento. É importante verificar o status de ativação de HUVEC com tratamento de TNFa. Isso poderia ser realizada pela coloração em paralelo algumas amostras de HUVEC confluente para a indução inflamatória de selectinas, ICAM-1 e VCAM-115,16,17. Uma maneira mais fácil e mais simples para verificar o status de ativação de HUVEC após o tratamento de TNFa é a alteração morfológica exibida por células endoteliais sob estresse inflamatório. Como mostrado na Figura 3, HUVEC alongar após 6-h na presença de TNFa em comparação com células unstimulated. Alongamento semelhante é observado quando HX é estimulados por uma mistura de TNFa e VEGFA. Gravar o status de ativação do HUVEC é importante, pois os resultados finais da transmigração de monócitos dependerá da qualidade da ativação de células endoteliais.\nTransmigração de monócito faz uma descontinuação característica em células endoteliais\nPara estudar a transmigração de monócitos sob fluxo, usamos a microscopia confocal com células endoteliais coradas em verde com CMFDA e os núcleos de monócitos isolados corados em azul com o corante Hoechst 33342 célula-permeável (Figura 4). A imagem latente confocal de lapso de tempo permitiu a visualização de monócitos no plano apical, onde seu fenótipo pode ser avaliada (Figura 4A-C, suplementar 1 filme). Células migratórias passando por transmigração mudou-se para o espaço intercelular correspondente junções célula-célula, antes que eles desapareceram do avião apical e apareceram no plano basal. As células transmigrated apresentaram um buraco negro em torno do núcleo correspondente para as formas de monócitos. Esta forma mudada constantemente durante a migração de monócitos por baixo de células endoteliais (Figura 4A-C, filmes suplementar 2-3). Este buraco negro dinâmico, feito pelo corpo por baixo das células endoteliais e o posicionamento de monócitos, monócitos permitiu a identificação inequívoca das células transmigra. Quantificação de recrutamento de monócitos, ao longo do tempo mostrou a adesão de monócitos, seguido de transmigração (Figura 4-E). Apesar de leucócitos podem extravasate através de rotas de transcellular e paracellular, só observamos a transmigração de paracellular sob o fluxo com este método. Isto é consistente com nossos anteriores observações3,11,18,19.\nFator angiogênico conduzido a inflamação promove a transmigração de CD16 + monócitos\nUsando esse método, analisamos a transmigração da proangiogenic humana versus não-angiogênico monócitos através de uma monocamada endotelial estimulado pelas citocinas inflamatórias TNFa sozinha ou em combinação com o fator angiogênico VEGFA. Proangiogenic humana monócitos podem ser identificados pela expressão de CD16 ou TIE2 na sua superfície. Aqui, o anticorpo anti-CD16-PE foi usado para discriminar entre pro - e não-angiogênico monócitos. Conforme mostrado na Figura 5A-B (filmes suplementar 4-5), a taxa de transmigração de CD16+ monócitos estava baixa quando as células endoteliais foram estimuladas com TNFa apenas. No entanto, esta taxa aumentou quando as células endoteliais foram estimuladas simultaneamente com TNFa e VEGFA (Figura 5Filmes suplementar-E, 6-7). A taxa de transmigração de monócitos não-angiogênico foi similarmente elevada em ambas as condições inflamatórias. Para ambas as subpopulações de células, a transmigração ocorreu exclusivamente através da rota de paracellular. Este método permite, portanto, as aptidões de transmigração de diferentes populações monocítica para ser investigados simultaneamente.\nA pureza de monócitos afeta a eficiência de transmigração\nAs células mononucleares do sangue periférico são compostas de células T, células B, células NK e monócitos. O método de isolamento de monócitos usado aqui exige o esgotamento de outras populações de leucócitos de PBMC. Para entender como a falta de pureza monócito afeta os resultados, usamos PBMCs e manchado por monócitos-pan com um anticorpo anti-CD14-PE antes de realizar o ensaio de recrutamento sob fluxo. Como mostrado na Figura 6, estimulação HUVEC com TNFa ou TNFa + VEGFA induzido a transmigração da população só monócitos. Outros leucócitos é composto por células T, células B e células NK não transmigrar sob TNFa ou TNFa + VEGFA. De fato, tem sido documentado que estes leucócitos precisam de outros sinais de transmigração. Assim, um isolamento ineficiente de monócitos conduzirá a uma subestimação da transmigração de monócitos, como os outros leucócitos poderia ser considerados como monócitos. Isso levaria a um resultado errôneo na transmigração de monócitos, devido a contaminação da população de monócitos com outros leucócitos.\nFigura 1: perfil de monócitos isolados por citometria de fluxo. (A) análise da morfologia de PBMC antes de depleção de linfócitos. O tamanho (dispersão direta: FSC) e granularidade (dispersão lateral: SSC) de sangue periférico, células mononucleares foram determinadas por citometria de fluxo. (B) o tamanho e a granularidade de monócitos isolados foram determinadas por citometria de fluxo após a depleção de linfócitos. Um isolamento eficiente de monócitos mostra uma completa depleção da população de linfócitos. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 2: diagrama do sistema fluídico. (A) visão geral esquemática do sistema de perfusão, antes e após a conexão do slide e montagem da bomba de seringa. (B) diagrama do processo de conectar o slide com a tubulação usando grampos. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 3: verificando a ativação eficiente das células endoteliais. A ativação do HUVEC por estímulos inflamatórios foi verificada, analisando a forma de células usando microscopia de contraste de fase. Após 6 horas de tratamento, HUVEC apresentam uma morfologia alongada quando estimulado com TNFa (500 U/mL) ou uma mistura de TNFa (500 U/mL) + VEGFA (1 µ g/mL) em comparação com células unstimulated. Esta alteração morfológica de HUVEC seguindo a estimulação inflamatória é um indicador de fácil de detectar de ativação celular, que deve ser assegurada para o ensaio de fluxo. Barra de escala = 120 µm clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 4: identificação dos transmigrated monócitos pela microscopia confocal. (A) diagrama de transmigração de monócitos com os pontos de vista esperadas para aviões apicais e basais. Os núcleos de monócitos manchados com Hoechst 33342 são representados em azul, e as formas teóricas de monócitos são representadas com linhas tracejadas em torno dos núcleos. Em vista da basal, os monócitos transmigrated planos são mostrados para ocupar um espaço por baixo da célula endotelial. Este espaço é exibido como um buraco negro em torno do núcleo de monócitos em imagens confocal. (B) localização de um monócito antes e após a transmigração. As vistas ortogonais são mostradas, e a aparência de um buraco negro (delineado com a linha branca tracejada) pode ser observada após a migração de monócitos para o compartimento abluminal endotelial. Uma seta vermelha indica a posição de um monócito antes de transmigração e a seta branca indica a mesma célula depois da transmigração. As vistas ortogonais mostram que o transmigrated monócito é debaixo da célula endotelial. Barra de escala = 40 µm. (C) Time-Lapse sequências de imagem (de 0 a 20 min) de horas extras de recrutamento de monócitos. São mostrados os pontos de vista apicais e basais. As sequências completa podem ser vistas em filmes suplementar 1, 2 e 3. Quadrados vermelhos destacam um monócito transmigrated com um núcleo azul. O buraco negro, correspondente ao corpo plano do monócito debaixo da célula endotelial é delineado por uma linha tracejada amarela. Barra de escala = 40 µm. (D) a quantificação da adesão de monócitos à TNFa-estimulada contra unstimulated HUVEC ao longo do tempo. (E) a quantificação da taxa de transmigração de monócitos ao longo do tempo. N = 3 repetições biológicas. Os dados são apresentados como média ± D.P. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 5: investigação simultânea da transmigração de subpopulações de monócitos sob fluxo. (A) sequências de imagem de lapso de tempo (de 0 a 20 min) do recrutamento de monócitos proangiogenic (CD16+) e não-angiogênico monócitos ao longo do tempo através de HUVEC TNFa está ativado. Barra de escala = 40 µm; são mostrados os pontos de vista apicais e basais. As sequências completa podem ser vistas em suplementar 4 filme para apical e suplementar 5 filme para vistas basais. (B) a quantificação da transmigração de monócitos humanos proangiogenic (HPMo: CD16 +) e monócitos humanos não-angiogênico (HNMo) através de uma monocamada HUVEC TNFa está ativado. N = 4 repetições biológicas, os dados são apresentados como média ± D.P. * p < 0,05; Teste de Mann-Whitney. (C) Time-Lapse imagem sequências (de 0 a 20 min) do recrutamento de monócitos proangiogenic e não-angiogênico horas extras através de HUVEC TNFa + VEGFA está ativado. Barra de escala = 40 µm; são mostrados os pontos de vista apicais e basais. As sequências completa podem ser vistas no Supplemental filme 6 para apical e suplementar filme 7 para vistas basais. (D) a quantificação da transmigração de monócitos humanos proangiogenic (HPMo: CD16 +) e monócitos humanos não-angiogênico (HNMo: CD16-) através de monocamada HUVEC TNFa + VEGFA está ativado. N = 4 repetições biológicas, os dados são apresentados como média ± D.P. * p < 0,05; Teste de Mann-Whitney. (E) localização de CD16+ monócitos antes (10 min) e depois (15 min) transmigração através de HUVEC TNFa + VEGFA-estimulado. As vistas ortogonais são mostradas. Barra de escala = 40 µm clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nFigura 6: Investigação simultânea da transmigração de CD14 + contra CD14 - PBMC sob fluxo. (A) adesão de CD14+contra CD14– PBMC de TNFa ativado HUVEC sob fluxo. (B) adesão de CD14+contra CD14– PBMC de TNFa + VEGFA ativado HUVEC sob fluxo. (C) transmigração taxa (%) de CD14+contra CD14– PBMC através de HUVEC TNFa ativado sob fluxo. (D) transmigração taxa (%) de CD14+contra CD14– PBMC através de HUVEC TNFa + VEGFA ativado sob fluxo. Dados são média ± D.P. N = 4 repetições biológicas. * p < 0,05; Teste de Mann-Whitney. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.\nSuplementar 1 filme: vista no plano apical do recrutamento de pan-monócito sob fluxo. Visão expandida do recrutamento de monócitos pan sob fluxo no plano apical. HUVEC estavam manchadas com CMFDA e os núcleos de monócitos foram viver-manchado com Hoechst 33342. Barra de escala = 50 µm clique aqui para baixar este arquivo.\nSuplementar Movie 2: exibição no plano basal do recrutamento de pan-monócito sob fluxo. Visão expandida do recrutamento de monócitos pan sob fluxo no plano basal. HUVEC estavam manchadas com CMFDA e os núcleos de monócitos foram viver-manchado com Hoechst 33342. Barra de escala = 50 µm clique aqui para baixar este arquivo.\nSuplementar Movie 3: projeção máxima de z-pilhas de recrutamento pan-monócito sob fluxo. Visão expandida do recrutamento de monócitos pan sob fluxo conforme suplementar filmes 1 e 2. HUVEC estavam manchadas com CMFDA e os núcleos de monócitos foram viver-manchado com Hoechst 33342. Barra de escala = 50 µm clique aqui para baixar este arquivo.\nSuplementar Movie 4: vista no plano apical do recrutamento de subpopulações de monócitos para TNFα-ativado HUVEC. Expandiu vista no plano apical da contratação simultânea de subpopulações de monócitos sob fluxo de TNFa ativado HUVEC sob fluxo. HUVEC estavam manchadas com CMFDA e os núcleos de monócitos foram viver-manchado com Hoechst 33342. Subpopulações de monócitos humanos proangiogenic foram identificadas pela expressão superficial de CD16. Barra de escala = 30 µm. clique aqui para baixar este arquivo.\nSuplementar filme 5: exibição no plano basal do recrutamento de subpopulações de monócitos para TNFα-ativado HUVEC. Visão expandida, no plano basal, da contratação simultânea de subpopulações de monócitos sob fluxo de TNFa ativado HUVEC sob fluxo. HUVEC estavam manchadas com CMFDA e os núcleos de monócitos foram viver-manchado com Hoechst 33342. A subpopulação de monócitos (HPMo) proangiogenic humana foi identificada pela expressão superficial de CD16. Barra de escala = 30 µm. clique aqui para baixar este arquivo.\nSuplementar filme 6: exibição no plano apical do recrutamento de subpopulações de monócitos para TNFα+ HUVEC VEGFA ativado. Visão expandida, no plano apical, da contratação simultânea de subpopulações de monócitos sob fluxo de TNFa + VEGFA ativado HUVEC sob fluxo. HUVEC estavam manchadas com CMFDA e os núcleos de monócitos foram viver-manchado com Hoechst 33342. A subpopulação de monócitos humanos proangiogenic foi identificada pela expressão superficial de CD16. Barra de escala = 30 µm clique aqui para baixar este arquivo.\nSuplementar filme 7: vista no plano basal do recrutamento de subpopulações de monócitos para TNFα+ HUVEC VEGFA ativado. Visão expandida, no plano basal, da contratação simultânea de subpopulações de monócitos sob fluxo de TNFa + VEGFA ativado HUVEC sob fluxo. HUVEC estavam manchadas com CMFDA e os núcleos de monócitos foram viver-manchado com Hoechst 33342. A subpopulação de monócitos (HPMo) proangiogenic humana foi identificada pela expressão superficial de CD16. Barra de escala = 30 µm clique aqui para baixar este arquivo.\nAqui, nós relatamos um método detalhando um estudo de como subpopulações de monócitos transmigrar através da monocamada endotelial inflamada. O método discutido usado microscopia confocal em vez de microscopia de contraste de fase, que também é usada para estudar o recrutamento de monócitos sob fluxo de11,3,19. Uma das principais vantagens do uso de microscopia confocal para a imagem latente de lapso de tempo é a capacidade de discriminar inequivocamente transmigração e forte adesão de monócitos. Embora o método baseado em microscopia de contraste de fase também é robusto, requer perícia a fim de evitar misturar transmigra pilhas e pilhas fortemente aderentes. Neste caso, é preciso estabelecer critérios rigorosos para análise a fim de fazer uma diferença clara entre estes dois Estados de cascata de recrutamento de monócitos. Além disso, também é importante realizar uma análise de ponto de extremidade pela microscopia confocal para confirmar as tendências globais observadas por microscopia de contraste de fase. Assim, o uso direto de microscopia confocal para investigar o recrutamento de monócitos sob fluxo fornece resultados claros sobre o status de transmigração real de monócitos capturados.\nUm dos principais gargalos na execução de recrutamento de leucócitos ensaios sob fluxo e usando um microscópio de contraste de fase é o tempo gasto para realizar a análise e localizar células individuais de captura de transmigração através da junção de celular. Automação da análise é possível, mas difícil de realizar devido a semelhanças de contraste de fase entre monócitos rastejando e transmigra. Aqui nós mostramos usando microscopia confocal que transmigração de monócitos foi acompanhada por uma interrupção da coloração no plano basal correspondente à forma dos monócitos transmigrated debaixo HUVEC endothelial da pilha. Este posicionamento foi confirmado pela projeção ortogonal. A transição de localização de monócitos ocorreu exclusivamente entre as junções célula-célula indicativas de uma transmigração de paracellular. Isto é consistente com nossos dados anteriores, que mostraram que sob fluxo in-vitro, monócitos transmigrar exclusivamente através da rota de paracellular com HUVEC3,18. Para complementar o método proposto aqui, é possível usar sem bloqueio de anticorpos contra proteínas juncionais como VE-caderina, compotas ou PECAM1 para imaginar os locais potenciais de transmigração de monócitos (paracellular vs. transcellular). Confirmamos que as formas pretas em torno dos núcleos de monócitos são uma característica robusta de células transmigra e um evento simples que pode ser detectável pelo software. Mesmo que uma célula manual sistema de contagem é demonstrada aqui, a formação de forma preta ao redor do núcleo dos leucócitos é um critério que poderia ser usado para definir a transmigração de leucócitos em análise automatizada, poupando assim muito tempo. Estamos atualmente trabalhando no desenvolvimento de uma aplicação automatizada para tal análise.\nFluorescência e microscopia confocal anteriormente foram utilizados no estudo de recrutamento de leucócitos. No entanto, eles não foram usados para investigar a contratação de subpopulações diferentes simultaneamente. Aqui propomos uma modalidade de usando microscopia confocal para estudar o recrutamento dos subtipos de leucócitos simultaneamente no microambiente da mesma. Mostramos que a microscopia confocal pode ser usada para investigar simultaneamente os comportamentos migratórios de subpopulações diferentes monócito. Por exemplo, nós usamos CD16 expressão para discriminar entre proangiogenic e não-angiogênico monócitos para estudar a capacidade de transmigração das duas subpopulações diferentes contextos inflamatória. Consistente com nossa recente publicação, usando a modalidade de microscopia confocal, mostramos que a taxa de transmigração de CD16+ monócitos foi menor quando a monocamada de células endoteliais foi estimulada somente por TNFa3. No entanto, a combinação de TNFa e VEGFA levou a um aumento na transmigração de monócitos proangiogenic. A taxa de transmigração foi da mesma forma alta para não-angiogênico CD16 monócitos– em ambas as condições inflamatórias. Anteriormente mostramos que monócitos manchando com o anticorpo anti-CD16 não apresentaram qualquer efeito significativo na transmigração, confirmando isto pela análise de monócitos sem rótulo após o ensaio de transmigração, utilizando microscopia confocal3. No entanto, para novos subtipos de leucócitos ou anticorpos usados para marcá-los, o efeito de rotulagem deve ser avaliada. Usando este método, até três diferentes populações de leucócitos podem ser simultaneamente estudou. Isto poderia ser subpopulações que são tipos de células imunes funcionalmente distintos ou similar. Embora o foco aqui é na transmigração de monócitos, outras etapas de sua contratação também podem ser analisadas por este método, incluindo o comportamento da célula antes de transmigração, como a captura e migração direcionalidade. Eventos pós-transmigração como abluminal retenção e transmigração inversa também podem ser investigados por populações diferentes de leucócitos, como uma extensão deste método. Uma limitação é a detecção de pobre da coloração no canal de far-red na imagem latente de lapso de tempo, bem como um transbordamento dos sinais de fluorescência que reduzir a resolução de z-pilha. Isto era principalmente relacionado ao instrumento usado para a imagem latente confocal. O uso de deconvolução imagem eventualmente poderia ajudar a melhorar a qualidade de imagem e permitir a análise das diferentes etapas do recrutamento de leucócitos.\nPara estudar o recrutamento de leucócitos em condições óptimas, é importante verificar o status de ativação da monocamada de células endoteliais. Com efeito, uma deficiente ativação de células endoteliais leva a uma redução global na adesão de monócitos e transmigração. Ativação de células endoteliais pode ser verificada através da análise do nível de expressão de moléculas de adesão na superfície de células endoteliais como ICAM1 e VCAM1. O nível destes adesão moléculas devem ser aumentadas em comparação com células endoteliais unstimulated. Se nenhuma mudança for detectável nessas moléculas de adesão endotelial, o culto HUVEC pode ser considerado como não ativado. Avaliação do nível de expressão de moléculas de adesão pode constituir um bom controle quantitativo entre diferentes experiências utilizando o mesmo lote de HUVEC. No entanto, o nível de expressão destas moléculas de adesão também pode variar entre diferente cultura primária de células endoteliais, limitando a consideração de um limite global de ICAM1 ou VCAM1. A mudança na forma de células endoteliais macrovascular como HUVEC também é um bom indicador da sua activação. Esta última mudança no fenótipo permite uma avaliação rápida e qualitativa de ativação HUVEC. No entanto, a análise de moléculas de adesão pode ser uma escolha melhor para células microvasculares que não mostram grande forma-mudança após a ativação com citocinas inflamatórias.\nPara estudos mecanicistas, controles negativos relevantes de transmigração de monócito podem ser realizadas utilizando-se anticorpos contra moléculas de adesão endotelial como ICAM1, VCAM1 ou na superfície de leucócitos como função leucócito-associado do antígeno (LFA) -1. O uso de um controle negativo relevante é essencial para tal estudo mecanicista em monócitos como eles expressam receptores de Fc em suas superfícies da célula. A pureza de monócitos após o isolamento também é importante, para evitar a contaminação por outras populações de leucócitos e subestimação da taxa de transmigração de monócitos. Outro parâmetro de crítico é a temperatura, que deve ser definida a 37 ° C, para todos os ensaios, a fim de garantir que todas as observações experimentais são relevantes e traduzir em conformidade ao humano na vivo celular tráfico.\nAgradecemos o Dr. Paul Bradfield para manuscrito lendo e feedbacks. A.s. recebeu apoio financeiro do senhor Jules Thorn caridade ultramarinos Trust reg.,


Fifa cobra R$ 59 por ingresso da Copa entregue em casa | De Letra | Tribuna do Paraná\n10/11/13 15h50 - Atualizado: 10/11/13 16h27\nA Fifa anunciou neste domingo (10), por meio de comunicado oficial, as condições de entrega dos ingressos da Copa do Mundo de 2014. A entidade, que resolveu disponibilizar um serviço de delivery aos torcedores interessados em receber entradas em suas respectivas residências, anunciou que fixou uma taxa de R$ 59,00 para bilhetes entregues no Brasil.\nO organismo que controla o futebol mundial ainda revelou que os ingressos do Mundial para torcedores que residem fora do Brasil serão entregues a um preço de US$ 41 (cerca de R$ 94 hoje).\n“Decidiu-se utilizar preços médios independentemente do país ou do estado para onde os ingressos serão enviados a fim de garantir as mesmas condições a todos os torcedores, independentemente de onde eles vivem no país-sede ou fora dele”, disse a Fifa, que ainda enfatizou que “a taxa de entrega cobre os custos de envio, bem como outros custos administrativos associados ao serviço e todos os tributos, também inclui até três tentativas de entrega dos ingressos”.\n“Este é um serviço opcional especial para os torcedores. Os ingressos são itens valiosos e, como tal, não podem ser simplesmente enviados por um serviço postal comum. É necessário assegurar que esses bens preciosos sejam entregues de forma segura e em condições justas para todos os torcedores no Brasil e no exterior. Estou muito contente por finalmente termos encontrado o que acreditamos ser uma solução justa e boa para todos os compradores que preferem receber os ingressos”, afirmou o diretor de marketing da FIFA, Thierry Weil, responsável pela venda dos ingressos.\nO organismo também prometeu que os ingressos solicitados por meio do serviço de delivery serão entregues dentro de um período de seis a oito semanas antes da Copa de 2014.\n“Por razões de segurança, a distribuição de ingressos vai começar apenas no início de abril de 2014, coincidindo em geral com a abertura dos Centros de Distribuição de Ingressos nas cidades-sede”, avisou o comunicado oficial da Fifa.\nA segunda fase de vendas de ingressos da Copa será reaberta nesta segunda-feira, às 9 horas (de Brasília), sendo que o primeiro estágio de comercialização terá 889.305 bilhetes destinados a torcedores de 188 países.\nNesta segunda fase de vendas, um total de 228.959 bilhetes estarão à disposição, mas desta vez os mesmos serão distribuído por ordem de pedido, e não mais por sorteio como ocorreu na primeira fase.


Embraer recebe seis novos pedidos por aeronaves; encomendas somam US$ 374 milhões | Seu Dinheiro\nA Embraer é uma das participantes do Dubai Airshow 2019, um importante encontro dos principais elos da indústria aeroespacial. O evento, realizado na capital dos Emirados Árabes Unidos, começou neste domingo (17) e vai até a próxima quinta-feira (21) — mas, já no primeiro dia, a empresa brasileira conseguiu fechar dois negócios.\nA fabricante de aeronaves recebeu seis encomendas: a companhia aérea nigeriana Air Peace assinou um contrato para três jatos E195-E2, no valor de US$ 212,6 milhões; a arrendadora egípcia CIAF Leasing pediu três aviões E190, avaliados em US$ 161,4 milhões. As ordens serão incluídas na carteira de pedidos da Embraer no quarto trimestre.\nA Air Peace já havia feito uma compra de 13 aeronaves E195-E2 em abril. O contrato ainda previa 17 direitos de compra para o mesmo modelo — assim, as encomendas fechadas hoje estão inseridas nessas opções que foram previamente acertadas. A primeira entrega está prevista para o segundo trimestre de 2020.\nA Air Peace é a maior companhia aérea da África Ocidental, com voos que conectam a Nigéria aos principais países da região. A empresa possui apenas uma rota transcontinental, conectando Lagos, a capital nigeriana, a Dubai, nos Emirados Árabes.\nA CIAF Leasing compra aeronaves e depois faz o arrendamento desses aviões para diversas companhias aéreas no mundo. Atualmente, a empresa possui em sua frota três jatos E170 da Embraer — ainda neste mês, serão entregues dois E195. Os novos E190 solicitados hoje chegarão à empresa entre abril e junho do ano que vem.


Oficina da Citroën no Morumbi - Mecânica de Citroën - Technic Oficina Especializada\nCaso esteja procurando por oficina da Citroën no Morumbi, Conheça os serviços que a Technic oferece, entre eles estão opções variadas do segmento de oficina especializada, como o de manutenção para Peugeot. Entre em contato com nossos profissionais e tenha todo o suporte que precisa.\nPara saber mais sobre Oficina da Citroën no Morumbi\nO conteúdo do texto "Oficina da Citroën no Morumbi" é de direito reservado. Sua reprodução, parcial ou total, mesmo citando nossos links, é proibida sem a autorização do autor. Crime de violação de direito autoral – artigo 184 do Código Penal – Lei 9610/98 - Lei de direitos autorais.


Instalação de equipamentos que mancham dinheiro de caixas eletrônicos durante furtos passa em terceira votação | GPC - Grupo Parana Comunicação\nInstalação de equipamentos que mancham dinheiro de caixas eletrônicos durante furtos passa em terceira votação\nEscrito em 15 de março de 2018 por Administrador\nOs deputados aprovaram em terceiro turno de votação, na sessão plenária de quarta-feira, dia 7, na Assembleia Legislativa do Paraná (Alep), o projeto de lei que torna obrigatória, para estabelecimentos bancários e financeiros, a instalação de equipamentos antifurto que manchem de tinta as cédulas de dinheiro em casos de tentativa e de explosão dos terminais de atendimento. A proposta recebeu 41 votos favoráveis e nenhum voto contrário.\nSegundo o projeto de nº 169/2015, de autoria do deputado Luiz Claudio Romanelli (PSB), os dispositivos instalados devem garantir o entintamento de pelo menos 98% das cédulas existentes nos caixas eletrônicos. O equipamento terá que ser acionado automaticamente no caso de explosão ou tentativa de abertura forçada dos terminais. O texto da proposta também prevê que a tinta a ser utilizada deve estar de acordo com a certificação e as orientações técnicas do Banco Central do Brasil.\nA matéria foi aprovada em forma de subemenda substitutiva geral de plenário, que determina que o órgão competente de Proteção e Defesa do Consumidor do Paraná – Procon-PR, será o responsável por fiscalizar o cumprimento das disposições previstas na lei. Em caso de descumprimento, essas instituições estarão sujeitas à advertência, multa e interdição. A multa será de 490 UPF/PR (Unidade Padrão Fiscal do Paraná) para as empresas que deixarem de sanar as possíveis irregularidades. Após 30 dias decorridos da aplicação da primeira multa, sem saneamento da irregularidade apontada, será aplicada uma nova multa no valor de 973 UPF/PR. Cada UPF/PR, em valores de março de 2018, segundo a Secretaria de Estado da Fazenda, corresponde a R$ 98,33.\nTambém em terceira discussão, foi aprovado o projeto de lei nº 20/2016, de autoria do deputado Nereu Moura (PMDB), que obriga a afixação de cartazes em estúdios de tatuagem informando a seus clientes o impedimento de doação de sangue por um ano a partir da data de aplicação da tatuagem. Ainda de acordo com o texto, em caso do descumprimento da lei, o estabelecimento estará sujeito a uma multa no valor de cinco UPF/PR.\nForam aprovados em segunda discussão, os projetos de resolução nº 1/2018, que dispõe sobre a aprovação do relatório final da Comissão Parlamentar de Inquérito (CPI) instituída para apurar a indústria dos atestados médicos nas redes pública e privada de saúde; e nº 2/2018, que trata da aprovação da prestação de contas das despesas dos deputados referente ao mês de novembro de 2017. Ainda em segunda votação passou o projeto de lei nº 833/2017, do deputado Schiavinato (PP), que concede o título de utilidade pública à Associação de Pais, Mestres e Funcionários do Colégio Estadual Professor Francisco Zardo, de Curitiba.