piruvato Archives - Tuscany Diet\nArchivi tag: piruvato\n10 Aprile 2019 Dr. Nicola Tazzini\tLascia un commento\nIl complesso della piruvato deidrogenasi o PDC, acronimo dell’inglese pyruvate dehydrogenase complex, è un complesso multienzimatico mitocondriale composto da tre differenti enzimi:\npiruvato deidrogenasi o E1 (EC 1.2.4.1);\ndiidrolipoil transacetilasi o E2 (EC 2.3.1.12);\ndiidrolipoil deidrogenasi o E3 (EC 1.8.1.4).\nOgnuno di questi enzimi è presente in più copie il cui numero, e quindi le dimensioni del complesso stesso, varia da specie a specie, con una massa molecolare che oscilla da 4 a 10 milioni di Dalton.\nFanno parte del complesso multienzimatico anche:\ncinque differenti coenzimi;\nnelle piante, nei funghi e, tra gli animali, nei volatili e nei mammiferi, due enzimi con attività regolatoria: la piruvato deidrogenasi chinasi (EC 2.7.1.99), enzima Mg2+-dipendente, e la piruvato deidrogenasi fosfatasi) (EC 3.1.3.43), enzima attivato dagli ioni calcio (Ca2+);\nnegli eucarioti, una proteina con funzione di legame, E3BP.\nIl complesso della piruvato deidrogenasi catalizza, attraverso una sequenza di cinque reazioni, la decarbossilazione ossidativa del piruvato, un α-chetoacido, a dare il gruppo il gruppo acetilico dell’acetil-coenzima A o acetil-CoA, una molecola di CO2, e due elettroni trasportati dal NAD. La stechiometria complessiva della sequenza delle cinque reazioni è:\nFig. 1 – PDC: Reazione Complessiva\nLa reazione complessiva è essenzialmente irreversibile, con un ΔG°’ pari a -8,0 kcal/mol (-33,4 kJ/mol), e richiede l’intervento sequenziale di tutti e tre gli enzimi, le cui attività risultano coordinate. Nel corso delle reazioni i prodotti intermedi rimangono legati agli enzimi e al termine della sequenza catalitica il complesso multienzimatico è pronto per il ciclo successivo.\nFig. 2 – Le Cinque Reazioni Catalizzate da PDC\nNota: il complesso della piruvato deidrogenasi catalizza le stesse reazioni attraverso meccanismi simili in tutti gli organismi in cui è presente.\nCoenzimi del complesso della piruvato deidrogenasi\nLocalizzazione del complesso della piruvato deidrogenasi\nFunzioni del complesso della piruvato deidrogenasi\nAltre fonti di acetil-CoA\nFonti di piruvato\nTrasporto del piruvato nella matrice mitocondriale\nStruttura del complesso della piruvato deidrogenasi\nStruttura della piruvato deidrogenasi o E1\nQual’è la funzione del tunnel acido?\nStruttura della diidrolipoil transacetilasi o E2\nStruttura della diidrolipoil deidrogenasi o E3\nReazione della piruvato deidrogenasi o E1\nMeccanismo di reazione della piruvato deidrogenasi o E1\nProprietà della tiamina pirofosfato\nCome si forma il carbanione dipolare della tiamina pirofosfato?\nDeprotonazione della tiamina pirofosfato e chiusura del sito attivo\nReazione della diidrolipoil transacetilasi o E2\nMeccanismo di reazione della diidrolipoil transacetilasi o E2\nReazione della diidrolipoil deidrogenasi o E3\nMeccanismo di reazione della diidrolipoil deidrogenasi o E3\nRegolazione dell’attività del complesso della piruvato deidrogenasi\nRegolazione dell’attività del complesso della piruvato deidrogenasi attraverso inibizione da prodotto finale e stato energetico della cellula\nRegolazione dell’attività del complesso della piruvato deidrogenasi attraverso fosforilazione/defosforilazione\nRegolazione dell’attività della piruvato deidrogenasi chinasi\nRegolazione dell’attivita della piruvato deidrogenasi fosfatasi\nI coenzimi del complesso della piruvato deidrogenasi\nCinque coenzimi partecipano alle reazioni catalizzate dal complesso della piruvato deidrogenasi: la tiamina pirofosfato o TPP, acronimo dell’inglese thiamine pyrophosphate, la flavina adenina dinucleotide o FAD, il coenzima A o CoA, la nicotinammide adenina dinucleotide o NAD, e l’acido lipoico.\nLa tiamina pirofosfato deriva dalla tiamina o vitamina B1 di cui rappresenta la forma biologicamente attiva.\nTPP è il coenzima della piruvato deidrogenasi cui è strettamente, ma non covalentemente, legata. Il suo ruolo è quello di trasportatore di gruppi idrossietilici o “aldeidici attivati”.\nLa flavina adenina dinucleotide deriva dalla riboflavina o vitamina B2, di cui rappresenta una delle forme attive; l’altra è la flavina mononucleotide o FMN.\nIl FAD è il coenzima della diidrolipoil deidrogenasi cui è saldamente legato. Il suo ruolo, analogamente al NAD, è quello di trasportatore di elettroni o ioni idruro (:H– o H+ + 2e–).\nIl coenzima A è formato da una β-mercaptoetilamina legata attraverso legame ammidico all’acido pantotenico o vitamina B5, che a sua volta è unito, attraverso un ponte pirofosfato, ad una 3’-fosfoadenosina.\nIl CoA partecipa alla reazione catalizzata dalla diidrolipoil transacetilasi. Il suo ruolo è quello di trasportatore di gruppi acilici.\nFig. 5 – Coenzima A\nLa porzione del coenzima A corrispondente alla β-mercaptoetilamina termina con un gruppo sulfidrilico (–SH), un tiolo reattivo cruciale per il ruolo svolto dal coenzima in quanto i gruppi acilici trasportati, legati attraverso un legame tioestere, hanno una elevata energia libera standard di idrolisi. Ciò fornisce loro un elevato potenziale di trasferimento, pari a -31,5 kcal/mol (-7,5 kJ/mol), che risulta addirittura più esoergonico, anche se di solo 0,2 kcal/mol (1 kJ/mol), rispetto a quello per l’idrolisi dell’ATP ad ADP e Pi. Pertanto i tioesteri hanno un elevato potenziale di trasferimento del gruppo acilico e sono in grado di donarlo a numerose molecole accettrici. In altre parole il gruppo acilico legato al coenzima A può essere considerato come una forma attivata pronta per il trasferimento. E’ anche possibile affermare che la formazione del legame tioestere permette di conservare parte dell’energia metabolica derivante dall’ossidazione del carburante metabolico. E va sottolineato che il coenzima A è anche abbreviato come CoA-SH, proprio per enfatizzare il ruolo svolto dal gruppo tiolico.\nNota: nel legame tioestere è presente un atomo di zolfo nella posizione in cui nel legame estere è presente un atomo di ossigeno.\nFig. 6 – Legami Estere e Tioestere\nLa nicotinammide adenina dinucleotide può essere prodotta a partire dal triptofano, un aminoacido essenziale, o dalla niacina o vitamina B3 o vitamina PP, da Pellagra-Preventing, la fonte della parte nicotinammidica.\nIl NAD è coinvolto nella reazione catalizzata dalla diidrolipoil deidrogenasi. Il suo ruolo, analogamente al FAD, è quello di trasportatore di elettroni, o ioni idruro.\nA differenza degli altri coenzimi del complesso della piruvato deidrogenasi, l’acido lipoico non deriva, direttamente o indirettamente, da vitamine e/o aminoacidi essenziali, ossia da precursori che non possono essere sintetizzati de novo dall’organismo e devono essere assunti con la dieta.\nL’acido lipoico è il coenzima della diidrolipoil transacetilasi, cui è covalentemente legato, attraverso legame ammidico, all’ε-ammino gruppo di un suo residuo di lisina a formare un residuo di lipoil-lisina o lipoammide. Il coenzima accoppia il trasferimento di elettroni con quello di gruppi acilici.\nFig. 8 – Lipoil-lisina\nL’acido lipoico possiede due gruppi tiolici che possono andare incontro ad ossidazione intramolecolare reversibile a dare un ponte disolfuro (-S-S-), similmente a quanto può accadere tra due residui di cisteina (Cys) di una proteina.\nPoiché il ponte disolfuro (nota: un disolfuro ciclico) può andare incontro a reazioni di ossidoriduzione, nel corso delle reazioni catalizzate dal complesso è dapprima ridotto a diidrolipoammide, un ditiolo o la forma ridotta del gruppo prostetico, e quindi riossidato nel disolfuro ciclico.\nMolti enzimi necessitano per la loro attività catalitica di piccoli componenti non proteici chiamati cofattori. I cofattori possono essere ioni metallici o piccole molecole organiche o metallo-organiche e sono classificati come coenzimi e gruppi prostetici.\nUn gruppo prostetico è un cofattore che si lega saldamente a un enzima con un legame non covalente o covalente, vale a dire che è legato in modo permanente alla proteina.\nUn coenzima è un cofattore che non è legato in modo permanente all’enzima.\nNegli eucarioti il complesso della piruvato deidrogenasi, al pari degli enzimi del ciclo dell’acido citrico e di quelli per l’ossidazione degli acidi grassi, si trova nel mitocondrio, associato alla superficie della membrana mitocondriale interna che guarda la matrice.\nNei procarioti si trova nel citosol.\nIl complesso della piruvato deidrogenasi ha essenzialmente due funzioni: produrre acetil-CoA e NADH.\nFig. 9- Acetil-CoA\nIl gruppo acetilico legato al coenzima A, un acetato attivato, a seconda delle condizioni metaboliche della cellula e/o del tipo di cellula, potrà essere:\nossidato a due molecole di anidride carbonica attraverso le reazioni del ciclo dell’acido citrico, il che permette la “raccolta” di una parte dell’energia potenziale immagazzinata in forma di ATP o GTP;\nutilizzato per la sintesi di acidi grassi, colesterolo, steroidi, isoprenoidi, corpi chetonici e acetilcolina.\nE’ quindi possibile affermare che, a seconda delle condizioni metaboliche e/o del tipo di cellula, il complesso della piruvato deidrogenasi indirizza intermedi carboniosi dal catabolismo degli aminoacidi e del glucosio verso:\nil ciclo dell’acido citrico, e quindi la produzione di energia, come ad esempio nel muscolo scheletrico in condizioni aerobiche, e, sempre, nel muscolo cardiaco;\nla sintesi dei lipidi e di acetilcolina.\nNegli organismi aerobi il NADH potrà essere ossidato a NAD+ a seguito della cessione di uno ione idruro alla catena di trasporto degli elettroni mitocondriale che, a sua volta, trasferisce i due elettroni all’ossigeno molecolare (O2), trasferimento che permette la produzione di 2,5 molecole di ATP per coppia di elettroni.\nFig. 10 – Anello Nicotinammidico: Forma Ridotta\nNota: negli organismi anaerobi è presente un accettore di elettroni alternativo all’ossigeno, come ad esempio un nitrato o un solfato.\nDal punto di vista concettuale il complesso della piruvato deidrogenasi rappresenta il ponte di collegamento tra glicolisi e ciclo dell’acido citrico. Tuttavia, vista l’irreversibilità della reazione complessiva catalizzata dal complesso, questo ponte è “a senso unico”: il piruvato può essere decarbossilato, ossidato e l’unità acetilica rimanente legata al CoA, ma non è possibile compiere il percorso inverso, ossia convertire acetil-CoA in piruvato.\nL’irreversibilità di questa reazione e l’assenza di vie metaboliche alternative spiega perché non è possibile utilizzare l’acetil-CoA, e quindi gli acidi grassi, per la gluconeogenesi (vedi sotto).\nIl gruppo acetilico dell’acetil-CoA può derivare, oltre che dal piruvato, dall’ossidazione degli acidi grassi e dal catabolismo di molti aminoacidi. Tuttavia, a prescindere dalla sua origine, l’acetil-CoA rappresenta un veicolo di ingresso di nuove unità carboniose nel ciclo dell’acido citrico. E’ anche possibile affermare che il gruppo acetilico dell’acetil-CoA rappresenta la forma in cui la maggior parte del carbonio entra nel ciclo.\nIl piruvato può derivare da diverse fonti citosoliche.\nIn condizioni fisiologiche nella maggior parte delle cellule deriva principalmente dalla glicolisi: dall’ossidazione di una molecola di glucosio se ne vengono a formare due di piruvato.\nIl lattato, nella reazione catalizzata dalla lattico deidrogenasi (EC 1.1.1.27), può essere ossidato a piruvato. Infatti, gli isoenzimi in cui predomina la subunità H, come LDH1 o H4, un omopolimero di subunità H presente nel muscolo cardiaco, un tessuto completamente aerobico, catalizzano preferenzialmente l’ossidazione del lattato.\nL’ossidazione del lattato può avvenire anche negli epatociti, nel corso della gluconeogenesi, favorita dal basso rapporto NADH/NAD+ nel citosol. Si noti comunque che il lattato è un metabolita derivante dal catabolismo del glucosio, e quindi dei carboidrati.\nAltra fonte importante è rappresentata dal malato, nella reazione catalizzata dall’enzima malico citosolico (EC 1.1.1.40), enzima che svolge un ruolo importante nel trasporto di intermedi del ciclo dell’acido citrico, quali ossalacetato, malato e citrato, tra il citosol e la matrice mitocondriale.\nMalato + NADP+ → Piruvato + CO2 + NADPH + H+\nInfine, anche gli scheletri carboniosi di sei aminoacidi, ossia alanina, cisteina, glicina, serina, treonina e triptofano, possono essere convertiti in toto o in parte in piruvato.\nA sua volta il piruvato è un intermedio metabolico che può essere utilizzato in numerose vie metaboliche, sia anaboliche che cataboliche, quali la gluconeogenesi, la sintesi dei lipidi, e il metabolismo ossidativo. Inoltre, può avere anche una funzione anaplerotica, avendo un ruolo nel mantenimento del flusso di metaboliti attraverso il ciclo dell’acido citrico.\nNegli eucarioti, la glicolisi avviene nel citosol mentre tutti i passaggi successivi del metabolismo aerobico, quindi le reazioni catalizzate dal complesso della piruvato deidrogenasi, il ciclo dell’acido citrico, la catena di trasporto degli elettroni e la fosforilazione ossidativa, si svolgono nel mitocondrio.\nSimilmente a quanto accade per la maggior parte degli altri anioni e metaboliti, il passaggio del piruvato attraverso la membrana mitocondriale esterna è probabilmente mediato da un canale anionico voltaggio-dipendente relativamente non specifico. Il passaggio attraverso la membrana mitocondriale interna è invece assicurato da uno specifico trasportatore formato da due proteine denominate MPC1 e MPC2, acronimo dell’inglese mitochondrial pyruvate carrier, che vanno a formare un complesso etero-oligomerico nella membrana.\nSebbene il complesso della piruvato deidrogenasi sia formato da copie multiple di tre enzimi differenti e catalizzi le medesime reazioni tramite meccanismi simili in tutti gli organismi in cui è presente, ha una struttura quaternaria molto varia.\nIl primo complesso di cui fu analizzata la struttura fu quello di E. coli, grazie al lavoro di Lester Reed. Nel complesso multienzimatico, che ha un peso di circa 4600 kD ed un diametro di circa 300 Å, 24 unità di diidrolipoil transacetilasi vanno a formare una struttura con simmetria cubica, ossia, gli enzimi, associati in trimeri, sono disposti agli angoli del cubo. Dimeri di piruvato deidrogenasi si associano al nucleo di diidrolipoil transacetilasi, al centro di ognuno dei 12 bordi del cubo, per un totale 24 unità. Infine, dimeri di diidrolipoil deidrogenasi si vanno a disporre al centro di ognuna delle sei facce del cubo, per un totale di 12 unità. Si noti che l’intero complesso è costituito da 60 unità. Anche nella maggior parte degli altri batteri Gram-negativi si osserva una analoga struttura con simmetria cubica.\nIn alcuni batteri Gram-positivi e negli eucarioti il complesso della piruvato deidrogenasi presenta una struttura dodecaedrica, ossia quella di un poliedro regolare con 20 vertici, 12 facce pentagonali e 30 bordi, con simmetrica icosaedrica, anche detta simmetria I. Se si considera ad esempio il complesso presente nei mitocondri, questi è il più grande complesso multienzimatico conosciuto, con un peso di circa 1000 kD ed un diametro di circa 500 Å, dunque ben 5 volte le dimensioni di un intero ribosoma, e abbastanza grande da poter essere visualizzabile con il microscopio elettronico. Il complesso è costituito da un nucleo dodecaedrico avente un diametro di circa 25 nm e formato, come nei batteri Gram-negativi, dalla diidrolipoil transacetilasi, ma composto da 20 trimeri dell’enzima, per un totale di 60 unità, disposti ai vertici della struttura. Il nucleo è circondato da 30 unità di piruvato deidrogenasi, una centrata su ogni bordo, e 12 unità di diidrolipoil deidrogenasi, una centrata su ogni faccia. L’intero complesso è quindi costituito da 102 unità.\nLa struttura quaternaria del complesso è ulteriormente complicata, come menzionato in precedenza, dalla presenza di tre subunità addizionali: la piruvato deidrogenasi chinasi, la piruvato deidrogenasi fosfatasi, e la E3BP.\nLa chinasi e la fosfatasi sono legate al nucleo di diidrolipoil transacetilasi.\nE3BP è legata ad ognuna della 12 facce pentagonali, e dunque presente in circa dodici copie. La proteina è necessaria il legame della diidrolipoil deidrogenasi al nucleo formato dalla diidrolipoil transacetilasi, come dimostrato dal fatto che la sua proteolisi parziale riduce la capacità di legame della deidrogenasi. Nella E3-bindign protein è possibile individuare un dominio C-terminale, privo di attività catalitica, ed un dominio che contiene una lipoil-lisina, simile a quella della diidrolipoil transacetilasi, in grado anche di accettare un gruppo acetilico. Tuttavia, la rimozione di questo dominio non comporta alcuna riduzione dell’attività catalitica del complesso multienzimatico.\nLa piruvato deidrogenasi degli eucarioti e di alcuni batteri Gram-positivi è composta da due differenti catene polipeptide, indicate come α e β, disposte a formare un eterotetramero α2β2 simmetrico. Di contro in E. coli e in altri batteri Gram-negativi le subunità sono fuse a formare un’unica catena polipeptidica e l’enzima risulta un omodimero.\nL’enzima presenta due siti attivi.\nConsiderando la struttura eterotetramerica della piruvato deidrogenasi di Bacillus stearothermophilus, un batterio Gram-positivo, ogni tiamina pirofosfato si lega tra i domini N-terminali di una subunità α e di una β, al termine di un canale a forma di imbuto profondo circa 21 Å che porta al sito attivo, con l’anello tiazolico (vedi fig. 3), il suo gruppo reattivo, posizionato vicino all’ingresso del canale stesso. All’ingresso del canale sono inoltre presenti due anse peptidiche conservate, essenziali sia per l’attività catalitica dell’enzima che per la sua regolazione. L’analisi ai raggi X dell’enzima di B. stearothermophilus, quando lega sia la tiamina pirofosfato che PSBD della diidrolipoil transacetilasi, che si lega al dominio C-terminale delle subunità β, ha evidenziato, oltre ad un eterotetramero con un struttura estremamente compatta, che i due siti attivi hanno una struttura differente, in particolare riguardo alla disposizione delle due anse peptidiche conservate. Infatti, in una subunità dell’enzima, in presenza della forma attivata della tiamina pirofosfato, l’ansa più interna è disposta in modo da bloccare l’ingresso al sito attivo, mentre l’ansa all’ingresso dell’altro sito attivo ha una conformazione tale da non bloccarne l’ingresso. Questo spiega dal punto di vista strutturale le differenze osservate nella velocità di legame del substrato esibite dai due siti attivi. Una disposizione ed una asimmetria simili sono state osservate anche in tutti gli altri enzimi tiamina pirofosfato dipendenti di cui sia nota la struttura.\nOltre alla tiamina pirofosfato e ad uno ione magnesio (Mg2+), localizzati in ciascuno dei due siti attivi dell’enzima, un terzo Mg2+ è posizionato al centro del tetramero, all’interno di un tunnel lungo circa 20 Å, riempito di solvente, che collega i due siti attivi. Il tunnel è in gran parte delimitato da 10 residui amminoacidici conservati, rispettivamente sei residui di glutammato (Glu) e quattro di aspartato (Asp), che provengono da tutte e quattro le subunità, più altri residui acidi attorno all’anello amminopirimidinico della TPP. Va invece sottolineata l’assenza di residui basici che neutralizzino i precedenti. Tunnel simili sono stati osservati in tutti gli enzimi tiamina pirofosfato dipendenti con struttura dimerica o tetramerica di cui sia nota la struttura cristallina, ad esempio nella transchetolasi, enzima della via del pentoso fosfato.\nNota: Bacillus stearothermophilus è un membro del phylum Firmicutes ed è stato da poco rinominato Geobacillus stearothermophilus.\nAttraverso esperimenti di mutagenesi condotti sulla piruvato deidrogenasi di B. stearothermophilus è stato dimostrato che il tunnel ha un ruolo nel meccanismo catalitico.\nLa sostituzione di alcuni dei suddetti residui acidi con amminoacidi neutri non alterava, rispetto alla forma wild-type:\nl’efficienza dell’incorporazione dell’enzima modificato nel complesso multienzimatico;\nla struttura dei siti attivi;\nla struttura quaternaria dell’enzima.\nTuttavia, la velocità di decarbossilazione risultava ridotta di oltre il 70% rispetto all’enzima wild-type, come pure, una volta che l’enzima mutante era inserito nel complesso della piruvato deidrogenasi, l’attività del complesso stesso di oltre l’85%, sempre in confronto alla forma wild-type. Ma a che cosa sono dovute queste riduzioni dell’efficienza catalitica?\nPoiché la distanza tra gli amminoacidi sostituiti ed i siti attivi dell’enzima è di 7 o più Å, questi amminoacidi sono troppo lontani dai siti attivi per poterne influenzare direttamente l’attività catalitica. E’ stato quindi proposto il meccanismo di seguito descritto.\nConsiderando l’apoenzima, la tiamina pirofosfato si lega velocemente e fortemente al primo sito attivo, viene attivata, ed il sito attivo viene chiuso, proteggendo così lo zwitterione tiazolico dall’ambiente esterno.\nNel secondo sito attivo invece la tiamina pirofosfato si lega, ma non viene attivata, e quindi il sito attivo rimane in conformazione aperta.\nNel primo sito attivo il piruvato reagisce con il C-2 tiazolico e la tiamina pirofosfato del secondo sito attivo, che è un acido generale, dona un protone al primo sito. Il risultato è una reazione di decarbossilazione nel primo sito attivo e l’attivazione del coenzima nel secondo sito, che quindi viene chiuso.\nSi noti che mentre l’attivazione della prima tiamina pirofosfato è conseguente al legame al sito attivo, l’attivazione della seconda, e quindi del secondo sito attivo, è accoppiata alla decarbossilazione del piruvato nel primo sito attivo. O, da un altro punto di vista, mentre un sito attivo richiede un acido generale, l’altro richiede una base generale.\nI protoni sono necessari per l’attività catalitica, ed il loro trasferimento tra i siti attivi avviene attraverso il tunnel acido. Si verifica cioè il loro trasporto reversibile lungo una catena di gruppi accettori-donatori forniti dai residui di glutammato ed aspartato e dalle molecole d’acqua presenti nel tunnel, che nell’insieme agiscono come un vero e proprio filo protonico, in inglese proton wire.\nSembra quindi che, a differenza di quanto accade in molti altri enzimi, in cui la comunicazione tra i siti attivi avviene attraverso modificazioni conformazionali e riarrangiamenti delle subunità che costituiscono l’enzima stesso, nella piruvato deidrogenasi e negli altri enzimi tiamina pirofosfato dipendenti il “proton wire” sia la base molecolare di tale comunicazione.\nA questo punto l’oloenzima è formato ed i siti attivi si trovano in un equilibrio dinamico, passando vicendevolmente dallo stato dormiente a quello attivato. Questo sembra essere lo stato in cui si trova l’enzima in vivo all’inizio di ogni ciclo catalitico.\nUna conseguenza di un tale meccanismo è che, a mano a mano che i cicli catalitici si susseguono, i due siti attivi sono fuori fase tra di loro, ossia mentre uno richiede una base generale, l’altro necessita di un acido generale, e vice versa.\nDa notare infine che un tale meccanismo permette anche il cambio di conformazione delle anse che chiudono i siti attivi, in modo da:\ncoordinare l’uptake dei substrati ed il rilascio dei prodotti:\nspiegare l’asimmetria esistente tra i due siti attivi.\nNota: un apoenzima è un enzima privo dei suoi cofattori, mentre un oloenzima è un enzima che lega tutti i suoi cofattori. L’apoenzima è la forma cataliticamente inattiva dell’enzima, mentre l’oloenzima ne è la forma cataliticamente attiva.\nNella struttura della diidrolipoil transacetilasi è possibile individuare tre domini funzionalmente distinti: un dominio lipoilico N-terminale, un dominio centrale di legame o PSBD, acronimo dell’inglese peripheral subunit-binding domain, ed un dominio catalitico C-terminale o acetiltransferasico. Questi domini sono connessi da sequenze di circa 20-40 residui amminoacidici ricche in alanina e prolina, aminoacidi idrofobici che sono inframezzati da residui dotati di carica. Queste sequenze di collegamento sono altamente flessibili ed estese, il che permette di tenere lontani gli uni dagli altri i tre domini.\nFig. 11 – Domini di E2\nNota: analoghe sequenze di collegamento flessibili sono presenti anche in E3BP.\nIl dominio lipoilico N-terminale, composto da circa 80 residui amminoacidici, è così chiamato in quanto lega l’acido lipoico. Il numero di questi domini dipende dalla specie considerata, variando da uno a tre. Ad esempio è presente con una copia in B. stearothermophilus e nei lieviti, con due nello Streptococcus faecalis e nei mammiferi, e con tre in Azotobacter vinelandii ed E. coli.\nIl legame tra l’ɛ-amino gruppo della catena laterale di una lisina e l’acido lipoico porta alla formazione di un braccio flessibile, la lipoil-lisina o lipoammide, che alla sua massima estensione ha una lunghezza di circa 14 Å. Se a questo si aggiunge la sequenza che collega il dominio N-terminale al dominio adiacente, la cui lunghezza è superiore ai 140 Å, si ottiene un braccio flessibile in grado di far oscillare il gruppo lipoilico tra i siti attivi della piruvato deidrogenasi e della diidrolipoil deidrogenasi, nonché di interagire con le unità di diidrolipoil transacetilasi vicine.\nSi noti che il numero di queste braccia flessibili in E. coli è pari a 3 x 24 = 72, mentre nei mammiferi a 2 x 60 = 120, sulla base del numero dei domini N-terminali e delle unità di diidrolipoil transacetilasi.\nDa tutto ciò consegue che una piruvato deidrogenasi può acetilare numerose diidrolipoil transacetilasi, e una diidrolipoil deidrogenasi può riossidare diversi gruppi diidrolipoamidici.\nInoltre, si verifica anche:\nun interscambio di gruppi acetilici tra i gruppi lipoilici del nucleo di diidrolipoil transacetilasi;\nlo scambio sia di gruppi acetilici che di disolfuri tra le braccia flessibili sopracitate.\nPSBD è composto da circa 35 residui amminoacidici disposti a formare una struttura globulare che si lega sia alla piruvato deidrogenasi che alla diidrolipoil deidrogenasi, ossia tiene insieme il complesso multienzimatico.\nIl dominio catalitico C-terminale, che, ovviamente, contiene il sito attivo, è composto da circa 250 residui amminoacidici disposti a formare una struttura simile ad una gabbia vuota che contiene canali sufficientemente larghi da permettere ai substrati e prodotti di diffondere fuori e dentro. Ad esempio, la lipoamide ed il coenzima A, i due substrati della diidrolipoil transacetilasi, si legano in conformazione estesa alle estremità opposte di un canale che si trova localizzato all’interfaccia tra ogni paio di subunità di ciascun trimero.\nLa struttura della diidrolipoil deidrogenasi è stata desunta dalla studio dell’enzima in numerosi microrganismi. Presenta una struttura omodimerica, con ciascuna catena polipeptidica, formata da circa 470 residui amminoacidici, ripiegata a dare quattro domini, dall’estremità N-terminale a quella C-terminale: un dominio legante il FAD, uno legante il NAD, un dominio centrale, ed un dominio di interfaccia. Tutti prendono parte alla formazione del sito attivo.\nIl FAD si trova quasi completamente all’interno della proteina in quanto, a differenza del NADH o dei tioli, è facilmente ossidabile e quindi deve essere protetto dalla soluzione circostante, ossia dall’ossidazione ad opera di O2. E infatti, in assenza del NAD+, la catena laterale fenolica di uno specifico residuo di tirosina (Tyr), ad esempio nel batterio Gram-negativo Pseudomonas putida la Tyr181, va a coprire la tasca dove si va a legare la nicotinamide proteggendo il FADH2 dal contatto con la soluzione.\nFig. 12 -FADH2\nQuando invece il NAD+ è in posizione nel sito attivo, la catena laterale fenolica della suddetta tirosina si va a disporre tra l’anello nicotinamidico e quello flavinico.\nNel sito attivo della forma ossidata dell’enzima è presente anche un ponte disolfuro redox-attivo che si forma tra due residui di cisteina presenti in un segmento della catena polipeptidica altamente conservato, ad esempio in P. putida tra la Cys43 e la Cys48. Il disolfuro è localizzato dal lato dell’anello flavinico opposto rispetto a quello che guarda l’anello nicotinammidico, e lega due giri consecutivi di un segmento di un’α-elica distorta. Da notare che in assenza della distorsione dell’ α-elica i Cα delle due cisteine sarebbero troppo distanti per poter permettere la formazione del ponte disolfuro.\nLa diidrolipoil deidrogenasi possiede quindi due accettori di elettroni: il FAD e il ponte disolfuro redox-attivo.\nNota: i due anelli eterociclici del NAD e del FAD sono paralleli ed in contatto attraverso interazioni di van der Waals; anche S48 è in contatto di van der Waals con l’anello flavinico, dal lato opposto rispetto all’anello nicotinamidico.\nLa piruvato deidrogenasi, nella sequenza delle cinque reazioni catalizzate dai componenti del complesso della piruvato deidrogenasi, ne catalizza le prime due, ovvero:\nla decarbossilazione del piruvato a dare CO2 e l’intermedio idrossietil-TPP;\nl’acetilazione riduttiva del gruppo lipoilico della diidrolipoil transacetilasi.\nLa prima reazione è essenzialmente identica alla reazione catalizzata dalla piruvato decarbossilasi (EC 4.1.1.1), che opera una decarbossilazione non ossidativa nel corso della fermentazione del glucosio ad etanolo. Quello che differisce è il destino del gruppo idrossietilico legato alla tiamina pirofosfato che, nella reazione catalizzata dalla piruvato deidrogenasi viene trasferito all’enzima successivo della sequenza, la diidrolipoil transacetilasi, mentre nella reazione catalizzata dalla piruvato decarbossilasi è convertito in acetaldeide.\nNelle reazioni catalizzate da enzimi TPP-dipendenti, l’anello tiazolico rappresenta la parte attiva, ma solo in forma di carbanione dipolare o ilide, ossia uno ione dipolare o zwitterione, con carica positiva sull’N-3 e carica negativa sul C-2. Di contro, l’anello tiazolico con carica positiva, ossia una carica positiva sull’azoto e nessuna carica sul C-2, può essere definito come la forma “dormiente” o inattiva.\nLa reazione ha inizio con l’attacco nucleofilo da parte del carbanione sul C-2 al carbonio carbonilico del piruvato, che ha lo stato di ossidazione di un’aldeide. L’attacco porta alla formazione di un legame covalente tra il coenzima e il piruvato.\nSegue la scissione del legame tra il C-1 ed il C-2 del piruvato. Questo porta al distacco del gruppo carbossilico, ossia del C-1, in forma di CO2, mentre i due restanti atomi di carbonio, il C-2 ed il C-3, rimangono legati alla tiamina pirofosfato in forma di gruppo idrossietilico. La scissione del legame C-1–C-2, e quindi la decarbossilazione del piruvato, è favorita dal fatto che la carica negativa sul C-2, che è instabile, viene stabilizzata grazie alla presenza nell’anello tiazolico dell’azoto imminico carico positivamente, N-3, (C=N+), ossia grazie alla presenza di una struttura elettrofila o elettron deficiente che funge da “pozzo” o “trappola” per gli elettroni, nella quale gli elettroni del carbanione possono delocalizzarsi per risonanza.\nA questo punto l’intermedio stabilizzato per risonanza può essere protonato a dare idrossietil-TPP.\nNota: questo primo passaggio della reazione catalizzata dalla piruvato deidrogenasi è quello dove il complesso della privato deidrogenasi esercita la sua specificità di substrato ed è anche il più lento dell’intera sequenza, ossia è quello che limita la velocità della reazione complessiva.\nFig. 13 – E1: Meccanismo di Reazione\nDi seguito, l’enzima catalizza l’ossidazione del gruppo idrossietilico a gruppo acetilico ed il suo trasferimento sul braccio lipoamidico della diidrolipoil transacetilasi. La reazione ha inizio con la formazione di un carbanione sul carbonio idrossilico della idrossietil-TPP, a seguito della rimozione del protone legato al carbonio stesso da parte di una base dell’enzima. Segue l’attacco nucleofilo del carbanione al disolfuro della lipoamide, con formazione di un legame acetil-tioestere ad alta energia con uno dei due tioli. In questa reazione l’ ossidazione del gruppo idrossietilico a gruppo acetilico è accompagnata dalla concomitante riduzione del ponte disolfuro della lipoamide: i due elettroni rimossi dal gruppo idrossietilico sono utilizzati per ridurre il ponte disolfuro. Questa reazione è quindi una acetilazione riduttiva, cui si accoppia la rigenerazione della forma attiva della piruvato deidrogenasi, ossia l’enzima con il C-2 dell’anello tiazolico nella forma deprotonata, la forma ilide o carbanione dipolare.\nSi noti che l’energia derivante dall’ossidazione del gruppo idrossietilico a gruppo acetilico permette la formazione del legame tioestere tra il gruppo acetilico ed il coenzima A.\nNota: come detto in precedenza, il braccio di lipoil-lisina, presente in conformazione estesa nel canale dove si trova anche la TPP, permette il trasferimento dell’idrossietile dalla idrossietil-TPP al coenzima A, ossia braccio di lipoil-lisina si può spostare dal sito attivo della piruvato deidrogenasi a quelli della diidrolipoil transacetilasi e quindi della diidrolipoil deidrogenasi;.\nNella molecola della tiamina pirofosfato è possibile individuare tre parti distinte, da cui dipendono le sue proprietà chimiche ed enzimologiche: l’anello tiazolico, l’anello 4’-amminopirimidinico, e il gruppo difosfato (vedi fig. 3).\nIl difosfato lega il cofattore all’enzima attraverso la formazione di legami elettrostatici tra le cariche negative portate dai suoi gruppi fosforici e quelle positive degli ioni Ca2+ ed Mg2+ che, a loro volta, sono legati a sequenze altamente conservate, rispettivamente: GlyAspGly (GDG) e GlyAspGly-X26-AsnAsn (GDG-X26-NN).\nL’anello tiazolico ha un ruolo centrale nella catalisi grazie alla capacità di formare un carbanione, ossia un centro nucleofilo sul C-2.\nNota: come accennato in precedenza, una volta legatasi all’enzima, la tiamina pirofosfato si dispone nel sito attivo in modo che l’anello tiazolico sia posizionato vicino all’ingresso del canale che porta al sito attivo stesso.\nL’anello amminopirimidinico ha una duplice funzione:\nancora il coenzima tenendolo in posizione;\nha uno specifico ruolo catalitico, partecipando ad una catalisi acido/base, come evidenziato da studi condotti utilizzando analoghi della tiamina pirofosfato in cui, a turno, erano stati sostituiti i tre atomi di azoto dell’anello. Questi studi hanno dimostrato che l’atomo N-1’ ed il gruppo amminico legato ad N-4’ sono necessari per l’attività del coenzima, mentre l’atomo N-3’ lo è meno.\nE’ possibile individuare tre forme tautomeriche in cui si presenta l’anello amminopirimidinico della tiamina pirofosfato legata allo specifico enzima ancora non impegnato nella reazione:\nla forma canonica, ossia la 4’-amminopirimidina;\nla forma protonata su N-1’, ossia lo ione 4’-amminopirimidinio;\nE sembra che la 1’,4’-imminopirimidina sia il tautomero che, prima dell’arrivo del substrato nel sito attivo, subisce la deprotonazione. Il C-2 dell’anello tiazolico è, come spiegato anche nell’articolo sulla via del pentoso fosfato, assai più acido rispetto alla maggior parte degli altri gruppi =C-H presenti in altre molecole. La maggior acidità, ossia il fatto che il protone legato al C-2 sia facilmente dissociabile, è dovuta alla presenza dell’atomo di azoto quaternario con carica positiva dell’anello tiazolico che è in grado di stabilizzare elettrostaticamente il carbanione risultante. Nel processo di deprotonazione sembra avere un ruolo essenziale il gruppo amminico dell’anello amminopirimidinico: il gruppo funge da base ed è posizionato opportunamente per accettare il protone. Tuttavia, nella forma canonica, la 4’-amminopirimidina, uno dei suoi protoni collide stericamente con il protone legato al C-2; in aggiunta anche il suo pK è troppo basso per operare la deprotonazione in modo efficiente. E’ stato quindi proposto un meccanismo in cui la catena laterale di un residuo conservato di glutammato, ad esempio βGlu59 in B. stearothermophilus, o Glu51 nella piruvato decarbossilasi di Saccharomyces uvarum (lievito di birra), donando un protone all’amminopirimidina la converte nella sua forma immino tautomerica, la 1’,4’-imminopirimidina, che, accettando il protone dal C-2, torna alla forma canonica 4’-amminopirimidinica e permette la formazione del carbanione.\nNota: la formazione del carbanione sul C-2 è quindi conseguenza di un trasferimento protonico intramolecolare.\nLa perdita del protone dal C-2 dell’anello tiazolico porta, da una situazione con carica positiva sull’anello, alla formazione di uno ione dipolare o zwitterione. Questo cambio nello stato di carica innesca una modificazione conformazionale in una delle due anse peptidiche conservate presenti all’ingresso del canale che immette al sito attivo, nello specifico la più interna, modificazione che, a sua volta, porta alla chiusura dello canale rispetto all’ambiente acquoso circostante. In questa conformazione chiusa il carbanione tiazolico è protetto dall’attacco di reagenti vari, come elettrofili.\nRiassumendo, la deprotonazione della tiamina pirofosfato determina la chiusura del sito attivo e la protezione del carbanione dipolare neoformato; in altri termini, gli enzimi TPP-dipendenti sarebbero attivi solo nella conformazione chiusa.\nSe invece si considera l’altro sito attivo, la sua tiamina pirofosfato non è in forma di ilide, il è canale aperto, ed il sito stesso risulta inattivo.\nLa diidrolipoil transacetilasi catalizza la terza reazione della sequenza delle cinque catalizzate dai componenti del complesso della piruvato deidrogenasi, ossia il trasferimento del gruppo acetilico dall’acetil-diidrolipoammide al coenzima A, a dare acetil-CoA e la forma completamente ridotta della lipoammide, la diidrolipoammide, il ditiolo.\nVa notato che il gruppo acetilico, inizialmente legato tramite legame estere ad uno dei gruppi –SH della lipoammide è di seguito legato al gruppo –SH del coenzima A, di nuovo attraverso legame estere, da cui il termine di transesterificazione.\nNel corso della reazione, il gruppo sulfidrilico del coenzima A porta un attacco nucleofilo al carbonio carbonilico del gruppo acetilico dell’acetil diidrolipoammide-diidrolipoil transacetilasi a formare un intermedio tetraedrico transiente che si “decompone” a dare acetil-CoA e diidrolipoammide-diidrolipoil transacetilasi.\nFig. 14 – E2: Meccanismo di Reazione\nCome già detto, nel meccanismo di reazione gioca un ruolo centrale la mobilità della lipoammide.\nLa diidrolipoil deidrogenasi catalizza la quarta e la quinta reazione della sequenza delle cinque catalizzate dai componenti del complesso della piruvato deidrogenasi.\nL’enzima catalizza trasferimenti di elettroni necessari per rigenerare il ponte disolfuro della lipoammide della diidrolipoil transacetilasi, ossia per rigenerare la forma ossidata del gruppo prostetico e completare così il ciclo catalitico della transacetilasi.\nLa reazione segue un meccanismo a ping-pong, procedendo attraverso due semireazioni consecutive nelle quali i due substrati, la diidrolipoammide ed il NAD+, reagiscono uno in assenza dell’altro. Inoltre durante la prima semireazione, il rilascio del primo prodotto e la formazione di un complesso enzima-intermedio si verificano prima che il secondo substrato si leghi, mentre l’enzima va incontro ad un cambio strutturale, mentre nella seconda semireazione si verificano il rilascio del secondo prodotto ed il ritorno dell’enzima allo stato iniziale, di nuovo attraverso una modificazione strutturale.\nConsiderando la cinetica del meccanismo a ping-pong della diidrolipoil deidrogenasi:\nnella prima semireazione si verifica l’ossidazione della diidrolipoamide a lipoammide;\nnella seconda semireazione si verifica la riduzione del NAD+ a NADH.\nDi seguito viene descritto il meccanismo di reazione della diidrolipoil deidrogenasi di P. putida.\nNella prima semireazione l’enzima in forma ossidata (E), ossia con il ponte disolfuro tra la Cys43 e la Cys48, lega la diidrolipoammide (LH2) a formare il complesso enzima-diidrolipoammide (E●LH2). A questo punto un atomo di zolfo della diidrolipoammide porta un attacco nucleofilo allo zolfo della Cys43, con formazione di un ponte disolfuro lipoammide-Cys43, (E–S–S–L), mentre lo zolfo della Cys48 viene rilasciato in forma di ione tiolato (S–48).\nIl protone che è rimasto sul secondo gruppo tiolico della lipoammide è quindi estratto ad opera dell’istidina (Hys) 451, che agisce come catalizzatore acido-base generale, il che porta alla formazione di un secondo ione tiolato, stavolta sulla lipoamide (E–S–S–L●S–), il quale, attraverso un attacco nucleofilo, va a sostituire lo zolfo della Cys43, S43, aiutato in questo attacco dalla catalisi acida generale ad opera della Hys451 che dona un protone ad S43. L’azione catalitica della Hys451 è essenziale, come dimostrato da studi di mutagenesi in cui la sua sostituzione con un residuo di glutammina fa si che l’enzima mantenga solamente circa lo 0,4% dell’attività catalitica rispetto alla forma wild-type.\nL’anione tiolato S–48 entra quindi in contatto, mediante interazioni non covalenti, con l’anello flavinico in vicinanza della sua posizione 4a (vedi fig. 4), ossia una coppia di elettroni di S–48, che funge da donatore di elettroni, è parzialmente trasferita all’anello flavinico ossidato, che a sua volta funge da accettore di elettroni. La struttura derivante è chiamata complesso a trasferimento di carica.\nNel frattempo la catena laterale fenolica della Tyr181 continua a bloccare l’accesso all’anello flavinico, proteggendolo così dall’ossidazione da parte di O2.\nFig. 15 – Ossidazione della Diidrolipoammide da parte di E3\nRiassumendo, quello che si verifica è una reazione di interscambio di ponti disolfuro che porta alla formazione della forma ossidata della lipoammide, il primo prodotto, che è rilasciata, e della forma ridotta della diidrolipoil deidrogenasi.\nLa seconda semireazione comporta la riduzione del NAD+ a NADH + H+ mediante il trasferimento di elettroni dal disolfuro reattivo dell’enzima via FAD.\nFig. 16 – Ossidazione di E3 Ridotta mediante NAD+\nIl tutto ha inizio con l’ingresso nel sito attivo del NAD+ ed il suo legame a formare il complesso EH2●NAD+. Si noti che l’ingresso del coenzima determina lo spostamento a lato della catena laterale fenolica della Tyr181 ad opera dell’anello nicotinammidico.\nA seguito del collasso del complesso a trasferimento di carica si forma un legame covalente tra il C-4a dell’anello flavinico ed S48, a cui si accompagna l’estrazione di un protone da parte dell’N-5 flavinico, con formazione del corrispondente anione tiolato S–43.\nS–43 porta un attacco nucleofilo ad S48, attacco che determina la formazione del ponte disolfuro redox-attivo tra la Cys43 e la Cys48, cui segue la rottura del legame covalente tra S48 e il C-4a dell’anello flavinico a dare l’anione FADH–, con carica negativa su N-1. Si noti che la diidrolipoil deidrogenasi è nuovamente nella forma ossidata (E).\nIl FADH– ha un’esistenza transitoria in quanto si verifica il trasferimento praticamente immediato del protone legato ad N-5, in forma di ione idruro, al C-4 dell’anello nicotinamidico, che è giustapposto all’N-5 flavinico. Questo porta alla formazione di FAD e del secondo prodotto della reazione, il NADH, che lascia l’enzima.\nIn definitiva gli elettroni che sono stati rimossi dal gruppo idrossietilico derivato dal piruvato passano, via FAD, al NAD+. In questo modo si è completato il ciclo catalitico della diidrolipoil deidrogenasi, essendo l’enzima ed il suo coenzima nella loro forma ossidata. A questo punto anche il ciclo catalitico dell’intero complesso della piruvato deidrogenasi si è completato, ed il complesso stesso è pronto per un altro ciclo di reazioni.\nNota: a differenza dell’anello tiazolico della tiamina pirofosfato, il FAD non ha la funzione di “trappola” o “pozzo” per gli elettroni quanto piuttosto di condotta per gli elettroni tra il disolfuro redox-attivo, nella sua forma ridotta, ed il NAD+.\nNota: il meccanismo catalitico della diidrolipoil deidrogenasi è stato in gran parte determinato in analogia con quello della glutatione reduttasi (EC 1.8.1.7), al 33% identica ma strutturalmente molto meglio caratterizzata. Va tuttavia notato che, sebbene i due enzimi catalizzino reazioni simili, queste normalmente corrono in direzione opposta:\nla diidrolipoil deidrogenasi utilizza il NAD+ per ossidare due gruppi –SH a dare un disolfuro (–S–S–);\nla glutatione reduttasi utilizza il NADPH per ridurre un –S–S– a due gruppi tiolici.\nNonostante ciò, i siti attivi dei due enzimi sono strettamente sovrapponibili.\nNei mammiferi, la regolazione dell’attività del complesso della piruvato deidrogenasi è essenziale, sia nello stato di digiuno che in quello alimentato. Infatti, il complesso multienzimatico svolge un ruolo centrale nel metabolismo in quanto, catalizzando la decarbossilazione ossidativa irreversibile del piruvato, rappresenta la porta di ingresso dello scheletro carbonioso dei carboidrati e di circa il 50% dello scheletro carbonioso degli amminoacidi glucogenici, che nell’insieme costituiscono circa il 60% dell’apporto calorico giornaliero, verso:\nil ciclo dell’acido citrico, e quindi alla completa ossidazione a CO2;\nla sintesi degli lipidi (nello stato alimentato) e dell’acetiolcolina (vedi sopra).\nL’importanza della regolazione della conversione del piruvato in acetil-CoA è sottolineata anche dal fatto che i mammiferi, sebbene siano in grado di produrre glucosio dal piruvato, non sono in grado di farlo dall’acetil-CoA, sia a causa della irreversibilità della reazione catalizzata dalla piruvato deidrogenasi che dell’assenza di vie metaboliche alternative in grado di farlo. L’inibizione dell’attività del complesso permetterà quindi di risparmiare glucosio e gli aminoacidi che possono essere convertiti in piruvato, come l’alanina, quando sono disponibili altri carburanti, ad esempio l’acetil-CoA derivante dall’ossidazione degli acidi grassi.\nPer questi motivi l’attività del complesso è finemente regolata attraverso:\ninibizione a feed-back, anche nota come inibizione da prodotto finale;\nmodificazioni covalenti, ossia fosforilazioni e defosforilazioni di specifiche proteine bersaglio.\nL’attività della forma defosforilata del complesso della piruvato deidrogenasi è regolata attraverso inibizione a feed-back o inibizione da prodotto finale.\nAcetil-CoA e NADH inibiscono allostericamente gli enzimi che ne catalizzano la sintesi, rispettivamente diidrolipoil transacetilasi e la diidrolipoil deidrogenasi.\nInoltre, il CoA e l’acetil-CoA, così come il NAD+ ed il NADH, competono per i siti di legame sui rispettivi enzimi, i quali catalizzano reazioni reversibili. Questo significa che, in presenza di elevati valori dei rapporti [NADH]/[NAD+] e [Acetil-CoA]/[CoA], le reazioni di transacetilazione e deidrogenazione vanno nella direzione opposta rispetto a quella della formazione dell’acetil-CoA; di conseguenza la diidrolipoil transacetilasi non può accettare il gruppo idrossietilico dalla TPP in quanto è mantenuta nella forma acetilata. Questo fa si che la tiamina pirofosfato rimanga legata alla piruvato deidrogenasi nella sua forma idrossietilica, il che a sua volta riduce la velocità di decarbossilazione del piruvato. Quindi, elevati valori dei rapporti [NADH]/[NAD+] e [Acetil-CoA]/[CoA] influenzano indirettamente l’attività della piruvato deidrogenasi.\nFig. 18 – PDC: Inibizione a Feed-back\nAcetil-CoA e NADH sono prodotti anche durante l’ossidazione degli acidi grassi, via metabolica che, al pari delle reazioni catalizzate dal complesso della piruvato deidrogenasi, si verifica nel mitocondrio. Questo significa che la cellula, attraverso la regolazione dell’attività del complesso multienzimatico, è in grado di preservare le riserve di carboidrati quando sono disponibili acidi grassi per la produzione di energia. Questo per esempio è quanto accadde nel digiuno, quando il fegato, il muscolo scheletrico e molti altri organi e tessuti si affidano principalmente all’ossidazione degli acidi grassi per la produzione di energia. Di contro, l’attività del complesso è aumentata nello stato alimentato, quando molti differenti tipi di cellule e tessuti utilizzano in prevalenza il glucosio come fonte di energia.\nPiù in generale, quando la produzione di NADH e/o acetil-CoA supera la capacità della cellula di utilizzarli per la produzione di ATP, l’attività del complesso della piruvato deidrogenasi è inibita. Analogo discorso vale nella condizione in cui non ci sia necessità di produrre ulteriore ATP. Infatti l’attività catalitica del complesso multienzimatico è sensibile anche allo stato energetico della cellula. Attraverso meccanismi allosterici, elevati livelli di ATP inibiscono l’attività della componente piruvato deidrogenasi del complesso multienzimatico, mentre elevati livelli di ADP, che segnalano che la cellula potrebbe entrare in una fase di carenza di energia, lo attivano, indirizzando quindi lo scheletro carbonioso dei carboidrati e di alcuni aminoacidi verso la produzione di energia.\nNota: nel muscolo scheletrico l’attività del complesso della piruvato deidrogenasi aumenta con l’aumento dell’attività aerobica, il che si traduce in una maggiore dipendenza del muscolo dal glucosio come fonte di energia.\nA differenza di quanto accade nei procarioti, nei mammiferi l’attività del complesso della piruvato deidrogenasi è regolata anche attraverso modificazioni covalenti, ossia fosforilazioni e defosforilazioni di tre specifici residui di serina presenti sulla subunità α della piruvato deidrogenasi, l’enzima che catalizza il primo passaggio, irreversibile dell’intera sequenza di reazioni.\nNota: poiché la piruvato deidrogenasi dei mammiferi è un eterotetramero, ci sono sei potenziali siti di fosforilazione.\nFig. 19 – PDC: Regolazione Mediante Modificazione Covalente\nLa fosforilazione, che inattiva la piruvato deidrogenasi, e quindi blocca l’intera sequenza di reazioni, è catalizzata dalla piruvato deidrogenasi chinasi. Due delle suddette serine si trovano su una delle due anse presenti all’ingresso del canale per il substrato che porta al rispettivo sito attivo, quella più vicina all’estremità C-terminale, e la fosforilazione di uno solo di questi residui inattiva la piruvato deidrogenasi, dimostrando così la l’accoppiamento fuori fase tra i due siti attivi.\nNello stato defosforilato invece il complesso risulta attivo. La defosforilazione è catalizzata da una specifica protein fosfatasi, la piruvato deidrogenasi fosfatasi.\nLe attività della piruvato deidrogenasi chinasi e della piruvato deidrogenasi fosfatasi sono a loro volta soggette a regolazione allosterica da parte di numero effettori.\nL’attività della piruvato deidrogenasi chinasi dipende dal valore dei rapporti [NADH]/[NAD+], [acetil-CoA]/[CoA], e [ATP]/[ADP], come anche dalla concentrazione del piruvato, nella matrice mitocondriale (vedi fig. 19).\nElevati valori dei rapporti [NADH]/[NAD+] e [acetil-CoA]/[CoA], come nel corso dell’ ossidazione degli acidi grassi e dei corpi chetonici, attivano la chinasi, la piruvato deidrogenasi viene fosforilata, e il complesso multienzimatico risulta inibito. Questo permette ai tessuti, come ad esempio il muscolo cardiaco, di risparmiare glucosio quando si stanno utilizzando acidi grassi e/o corpi chetonici per la produzione di energia, in quanto la sintesi di acetil-CoA dal piruvato, e quindi dai carboidrati (e da alcuni aminoacidi) e bloccata.\nQuando invece le concentrazioni di NAD+ e coenzima A sono elevate l’attività catalitica della chinasi è inibita ed il complesso risulta attivo.\nQuindi, acetil-CoA e NADH, due dei tre prodotti finali delle reazione catalizzate dal complesso della piruvato deidrogenasi, controllano allostericamente la propria sintesi regolando direttamente e indirettamente, tramite la regolazione dell’attività della piruvato deidrogenasi chinasi, l’attività del complesso multienzimatico.\nElevati valori del rapporto [ATP]/[ADP] attivano la chinasi, e quindi inibiscono il complesso multienzimatico.\nNota: a differenza di molte altre chinasi, come quelle che intervengono nel controllo del metabolismo del glicogeno, la piruvato deidrogenasi chinasi non è regolata dai livelli di cAMP, bensì da molecole che segnalano variazioni nel livello della carica energetica della cellula e nella disponibilità di intermedi biosintetici, ossia rispettivamente ATP e NADH e acetil-CoA.\nIl piruvato è un effettore allosterico negativo della piruvato deidrogenasi chinasi.\nQuando i suoi livelli sono elevati, il suo legame alla chinasi la inattiva, la piruvato deidrogenasi non viene fosforilata, ed il complesso della piruvato deidrogenasi rimane attivo.\nLa piruvato deidrogenasi chinasi è attivata anche a seguito dell’interazione con la diidrolipoil transacetilasi nella sua forma acetilata, ossia quando è presente la acetil-diidrolipoamide.\nAltri attivatori della piruvato deidrogenasi chinasi sono gli ioni potassio e magnesio.\nRegolazione dell’attività della piruvato deidrogenasi fosfatasi\nL’attività della piruvato deidrogenasi fosfatasi dipende dal valore dei rapporti [NADH]/[NAD+] e [acetil-CoA]/[CoA], come anche dalla [Ca2+], nella matrice mitocondriale (vedi fig. 19).\nBassi valori dei rapporti [NADH]/[NAD+] e [acetil-CoA]/[CoA] attivano la fosfatasi, la piruvato deidrogenasi viene defosforilata, e il complesso multienzimatico risulta attivo.\nAl contrario, in presenza di elevati valori dei suddetti rapporti l’attività della fosfatasi si riduce, quella della chinasi aumenta, e il complesso multienzimatico viene inibito.\nLo ione calcio attiva la piruvato deidrogenasi fosfatasi.\nCa2+ è un importante secondo messaggero che segnala la necessità da parte della cellula di ulteriore energia. Quindi, quando è presente in elevate concentrazioni, come nelle cellule muscolari cardiache a seguito della stimolazione da parte dell’adrenalina, o nella cellule muscolari scheletriche nel corso della contrazione muscolare, la fosfatasi è attiva, il complesso è defosforilato, e quindi attivato.\nAnche l’insulina interviene nel controllo dell’attività catalitica del complesso della piruvato deidrogenasi attraverso l’attivazione della piruvato deidrogenasi fosfatasi. L’ormone, in risposta all’aumento della glicemia, stimola sia la sintesi del glicogeno che dell’acetil-CoA, precursore nella sintesi degli lipidi.\nAnche il digiuno e la successiva rialimentazione influiscono sull’attività del complesso multienzimatico.\nIn tessuti come il muscolo scheletrico, il muscolo cardiaco o il rene, il digiuno riduce in modo significativo l’attività del complesso, mentre la rialimentazione inverte la situazione.\nNel cervello invece non si osservano queste variazioni poiché l’attività del complesso della piruvato deidrogenasi è essenziale per la produzione di ATP.\nbiochimicacarboidraticoenzima Acomplesso della piruvato deidrogenasiglicolisimetabolismoNADHpiruvatopiruvato deidrogenasivie metaboliche\nbiochimicacarboidraticiclo dell'acido citricofruttosiogalattosioglicogenoglicogenolisiglicolisigluconeogenesiglucosio-6-fosfatometabolismopiruvatovie metaboliche


Messaggi WhatsApp cancellati, come recuperarli | Giornalettismo\nCome evitare di perdere informazioni importanti nelle chat cancellate su WhatsApp\nI procedimenti, con Android e per iOs, per il recupero dei messaggi eliminati\nSocial Network30/03/2021 di Gianmichele Laino\nPuò capitare spesso, può rappresentare un vero e proprio problema nel caso in cui, ad esempio, si utilizzi WhatsApp anche per motivi di lavoro. Ma i messaggi WhatsApp cancellati costituiscono una sorta di spauracchio per chiunque. Per questo è sempre opportuno avere un piano B che ci possa tutelare da questa stessa occorrenza. C’è un modo per stabilire come recuperare le chat su WhatsApp ed è diverso, ovviamente, sia che si tratti di un sistema operativo Android, sia che si tratti di un sistema operativo iOs.\nMessaggi WhatsApp cancellati, come fare a recuperarli\nSi utilizza, tuttavia, un metodo comune. Si tratta dell’utilizzo dello strumento del backup del servizio di messaggistica istantanea. Il primo passo, dunque – sia per gli utenti Android, sia per gli utenti iOs -, è quello di eliminare l’applicazione installata sul proprio smartphone. Non si può pensare, infatti, di recuperare i messaggi cancellati su WhatsApp senza effettuare questa breve operazione.\nQuesto escamotage, infatti, serve per sfruttare l’ultimo backup automatico realizzato dall’applicazione e “riportare indietro” la nostra versione di WhatsApp al momento cronologico risalente, appunto, all’ultimo backup. Ovviamente, questo aspetto prevede un piccolo effetto collaterale: i messaggi inviati successivamente rispetto al backup non verranno recuperati. Il presupposto dell’operazione, del resto, è quello di recuperare chat del passato, indipendentemente dai messaggi ricevuti nel lasso di tempo successivo.\nAlla voce “impostazioni” di WhatsApp e nella sezione “chat” si può verificare a quanto risale l’ultimo backup dell’applicazione. A questo proposito è opportuno ricordare che è possibile fare un backup di WhatsApp su Google Drive, seguendo questi semplici passaggi:\navere un account Google attivo sul telefono;\nutilizzare l’applicazione Google Play Services installata sul telefono;\navere dello spazio libero sufficiente sul telefono per poter creare il backup;\ngodere di una connessione Internet forte e stabile.\nQuest’ultimo aspetto è opportunamente indicato, ad esempio, sul blog ufficiale di WhatsApp alla voce FAQ – Centro Assistenza.\nCome recuperare i messaggi cancellati su WhatsApp da locale\nChiusa questa parentesi, è bene sottolineare che il backup con recupero su Drive può essere effettuato sia per la versione WhatsApp per Android, sia per la versione WhatsApp per iOs. Discorso diverso, invece, per il recupero delle chat al di fuori del Drive. Quest’ultima circostanza può essere ritenuta necessaria nel momento in cui l’ultimo backup fosse antecedente rispetto alla data del messaggio cancellato e che si desidera recuperare.\nPer la versione Android di WhatsApp questa operazione è più semplice, dal momento che l’applicazione genera anche dei backup in locale. Recuperarli è possibile attraverso un file manager. Nel caso dell’applicazione in versione iOs non è possibile sfruttare i backup locali.


Home page Collaborazioni Mini bundt cake all’arancia\nCinzia Lazzaroni 14 commenti su Mini bundt cake all’arancia\nLe mini bundt cake all’arancia sono delle deliziose tortine perfette per la colazione o la merenda sia per i bambini che per i più grandi, un’alternativa sana e nutriente alle merendine confezionate.\n1 cucchiaino di scorza grattugiata di arancia non trattata\nPreriscaldare a 180°C il forno. Imburrate gli stampini da mini bundt cake.\nIn una ciotola sbattete il burro ammorbidito a temperatura ambiente con lo zucchero fino a renderlo cremoso.\nRompete le uova e separate i tuorli dagli albumi, unite i tuorli alla crema, uno alla volta e senza smettere di sbattere. Aggiungete la farina setacciata con il lievito e il sale e mescolare.\nIncorporare il succo, la scorza di arancia e l’acqua di fiori d’arancio.\nMontate gli albumi a neve ben ferma e uniteli al composto con movimenti delicati dal basso verso l’alto. Trasferite il composto in un sac à poche usa e getta, e riempite gli stampini per 2/3 della loro capacità.\nCuocetele per circa 35 minuti, verificate la cottura con uno stecchino.\nEstraetele dal forno e fatele intiepidire prima di sformarle. Fate raffreddare su una griglia.\nSpolverizzate le ciambelline con dello zucchero a velo e decorate con scorzette d’arancia.\nQueste mini tortine si sciolgono in bocca e resteranno soffici per alcuni giorni se conservate in una scatola di latta chiusa.\nPiatto, portatovagliolo e tazza, fanno parte della linea prodotta dall’azienda Danese GreenGate. Sono solo alcuni dei bellissimi articoli dallo stile tipicamente nordico e dal design raffinato ed elegante, che l’azienda produce.\naranciadolci per la prima colazionemerendatea time\nArticolo precedente Cupcakes orsetti polari\nArticolo successivo Ciambella all'arancia con gocce di cioccolato\nalle 18 Novembre 2013 18 Novembre 2013 creme dolci al cucchiaio dolci senza... farina frutta Uncategorized\nStupendi e deliziosi\nCarinissimi e molto buoni! 🙂\nMamma mia, chissà che bontà!\n25 Novembre 2015 alle 8:55\n24 Novembre 2015 alle 23:39\n7 Dicembre 2015 alle 16:36\nmeravigliose ,gia’ copiate ,da fare quanto prima ,grz 🙂\nVedrai come sono buoni!!!\n8 Dicembre 2015 alle 0:05


Le strategie europee di integrazione dei rifugiati nell’istruzione superiore nel nuovo Rapporto Eurydice | EPALE\nLe strategie europee di integrazione dei rifugiati nell’istruzione superiore nel nuovo Rapporto Eurydice\nNoticias 12 Febrero 2019\nArticolo di Alessandra Mochi\nMolti dei richiedenti asilo e dei rifugiati arrivati in Europa nel 2015 e nel 2016 erano giovani nella fascia di età dell’istruzione superiore e risultavano iscritti all’università nei loro Paesi d’origine. Tuttavia, se continuare gli studi giova a chi arriva e allo Stato ospitante, l’integrazione di coloro che sono sfuggiti a gravi conflitti, e che spesso hanno subito traumi e non hanno competenze linguistiche o di altro genere, è un compito tutt’altro che semplice.\nIn molti casi, i potenziali studenti devono imparare la lingua del Paese ospitante e adattarsi al nuovo sistema di istruzione superiore. Ciò richiede informazioni e orientamento adeguati, oltre all’offerta di altrettanto adeguati programmi preparatori. Inoltre, i rifugiati hanno spesso bisogno di un sostegno considerevole dal punto di vista psicologico e finanziario. Al tempo stesso, i Paesi ospitanti devono valutare e riconoscere percorsi di apprendimento che spesso non possono essere dimostrati attraverso certificati. Per questo motivo la pianificazione e le azioni a livello di sistema sono essenziali.\nIl rapporto di Eurydice Integrating Asylum Seekers and Refugees into Higher Education in Europe – National Policies and Measures, voluto in seguito all’aumento dei livelli migratori degli ultimi due anni, si propone di valutare fino a che punto i sistemi nazionali siano in grado di rispondere alle esigenze dei richiedenti asilo e dei rifugiati nell’istruzione superiore. Se è vero che esiste una forte domanda potenziale di istruzione superiore tra la popolazione dei rifugiati, non si può dare per scontato che questa richiesta sia facilmente soddisfatta.\nLo studio è diviso in due parti principali: la prima presenta una selezione di indicatori sui flussi migratori, la seconda offre una panoramica delle politiche, delle strategie e delle misure esistenti in 35 Paesi europei per l’integrazione dei richiedenti asilo e dei rifugiati nell’istruzione superiore. Sebbene nella maggior parte degli Stati non esista un approccio politico specifico, in alcuni sistemi si possono individuare buone pratiche su aspetti quali il riconoscimento delle qualifiche non documentate, il supporto all’apprendimento delle lingue, il sostegno finanziario e i servizi di orientamento personale.\nScarica “Integrating Asylum Seekers and Refugees into Higher Education in Europe – National Policies and Measures >>\nCos’è Eurydice Eurydice è la rete europea che raccoglie, aggiorna, analizza e diffonde informazioni sulle politiche, la struttura e l’organizzazione dei sistemi educativi europei. Nata nel 1980 su iniziativa della Commissione europea, la rete è composta da un’Unità europea con sede a Bruxelles e da varie Unità nazionali. Dal 1985, l’Indire è sede dell’Unità nazionale italiana.\nUnità italiana di Eurydice\nArticolo pubblicato sul sito indire.it\nTutte le pubblicazioni della rete Eurydice\nRECURSO 17 Enero 2022\nKit de comunicación Erasmus+\nBlog 17 Enero 2022\nJosé Antonio Dorta: los profesores trabajan en colaboración\nGeorgia Nicolaou: combinar el arte terapéutico con la justicia reparadora\nSesión de información en línea: Asociaciones Erasmus+ para la innovación — Proyectos 2022


È tempo di andare in bicicletta!\nDalla nostra azienda specializzata in piste ciclabili, non abbiamo nulla da dirvi, abbiamo intrapreso questo progetto per diversi motivi, e uno di questi è perché crediamo ciecamente che è il momento del turismo in bicicletta. Hai bisogno di convincerti?\nViaggiare in bicicletta è qualcosa di diverso dal turismo convenzionale, e da Tuscany Ride to Bike capiamo perfettamente quel concetto che fugge dalla fretta e dalle visite ai luoghi tipici visitati da migliaia di persone. Andare in bicicletta significa conoscere diverse strade e ingressi alle città che non appaiono quasi mai sulle mappe dei viaggiatori convenzionali, e che ... ci piace!\nÈ il nostro momento, ed è per molte ragioni, un'altra delle quali amiamo vantarsi è che raggiungiamo i posti che vogliamo grazie al nostro sforzo e a quello del nostro corpo. Una volta arrivato a destinazione con i tuoi mezzi, lo rendi molto più tuo. La sensazione di ricordare quelle visite molto più di un semplice messaggio nel tuo cervello, perché le tue gambe sapranno anche cosa ha aiutato a raggiungere quella destinazione.\nGodersi la strada è qualcosa che non è facile quando si fa parte di un gruppo di turisti convenzionali, la fretta, la necessità di fermarsi nei luoghi stipulati, dopo tutto, essere parte di qualcosa che non si ha il comando, finisce Sottolineando te Tuttavia, i percorsi cicloturistici fatti da te ti portano ad andare alla velocità che preferisci, molto più pratico che a piedi, e con infinite possibilità di riposare in ogni angolo. Senti una farfalla che va da una parte all'altra godendosi la strada!\nGodersi una vacanza è qualcosa che può essere mal concepito, lo sapevate che l'UNESCO stesso ha coniato un termine che definisce le vacanze? Secondo loro, le vacanze sono un "insieme di occupazioni a cui un individuo può essere dato per riposare, divertirsi o sviluppare la propria personalità, dopo aver liberato i propri doveri professionali, familiari o sociali". Pertanto, dalla nostra azienda specializzata in piste ciclabili ci sentiamo molto identificati con questo concetto. Dal viaggiare in bicicletta a casa perfettamente con quell'idea lontana da lunghe code, appartamenti affollati o piani che incontrano i temi tipici.\nLa bicicletta è un mezzo che ti permette di essere parte dell'idiosincrasia di ogni luogo che visiti, inoltre ci sono angoli del pianeta che ti aiuteranno a sentirti come uno di più poiché è uno dei veicoli più usati in paesi come la Svizzera o l'Olanda. In questo tipo di paesi il rispetto verso il ciclista è quasi estremo, non ti ha sorpreso vedere come ci sono centinaia di biciclette in un parcheggio senza lucchetto?\nLe piste ciclabili sono di moda, e sempre più spesso a causa dell'aumento del prezzo della benzina e dei carburanti. L'ascesa della pedalata è una realtà, e in Toscana Ride a Bike siamo saliti sul dorso delle nostre biciclette per accompagnarti lungo la strada, vieni con noi;)


Operazione Tempesta - Wikiquote\noperazione militare durnate la guerra d'indipendenza croata\nCitazioni su Operazione Tempesta.\nDonna serba costretta a fuggire dinanzi l'Operazione Tempesta\nCredevo che il 70% dei serbi sarebbe rimasto: avrebbe visto che la democratica Croazia tutela i diritti civili. I serbi possono dare la colpa di quanto è avvenuto solo a se stessi. (Franjo Tuđman)\nLa verità è che la vittoria ha avuto un risvolto sinistro. Pare che l'esercito croato abbia riconquistato città e villaggi deserti. Che cosa è successo ai 250 mila abitanti (stima Onu) della regione della Krajina? Si direbbe che l'intera popolazione sia scomparsa, ma c'è una spiegazione: città e villaggi sono stati svuotati preventivamente. La popolazione è stata costretta ad andarsene con la forza. I serbi sono stati cacciati dal loro stesso esercito, dalla loro stessa propaganda e dalla paura che ha indotto. È un fatto straordinario che non sia rimasta un'anima, che l'intera popolazione della regione sia svanita e che il mondo assista così al più grande esodo dall'inizio della guerra. Senza dubbio si tratta di una catastrofe umanitaria e tutti se ne rendono conto. Ma non è questo il punto. Il punto è che pur non essendo colpa dell'armata croata, il triste risultato è lo stesso: una pulizia etnica. La Croazia è rimasta senza serbi, perlomeno in Krajina. (Slavenka Drakulić)\nQuesta folgorante vittoria in appena 84 ore ci porta però a domandarci se l'intera operazione non sia stata organizzata preventivamente come parte di un accordo politico, e in che misura sia stata davvero dovuta all'efficienza dell'esercito. Ci sono buone ragioni per ritenere che la Krajina, in definitiva, sia stata restituita a Tudjman perché Milosevic l'ha lasciata cadere nelle sue mani, come veniva annunciato in prima pagina a Belgrado dal settimanale «Politika» nello stesso giorno in cui cominciava l'operazione «Tempesta». Se è così, si pone una domanda: in che consiste l'accordo, che cosa guadagnerà Milosevic in cambio della Krajina? Lo vedremo presto. Per il momento, ai croati importa sopratutto che la bandiera di Zagabria sventoli su Knin. (Slavenka Drakulić)\nSembra che la maggioranza dei serbi [di Krajina] facesse parte della loro milizia. Gli altri si erano lasciati convincere che noi eravamo fascisti, quindi sono fuggiti. (Franjo Tuđman)\nYugoslavia – Morte di una nazioneModifica\nAncora una volta, una comunità vecchia di secoli viene sradicata dalla sua terra. Centomila serbi sono costretti a fuggire dalla Croazia. Hanno aderito a un regime basato sulla pulizia etnica, e ora ne pagano le conseguenze.\nPer fare in modo che i serbi non possano più tornare, le truppe di Tuđman bruciano i loro villaggi. Uccidono centinaia di anziani che rifiutano di andarsene.\nIl presidente Tuđman ha ottenuto una Croazia etnicamente pura.\nWikipedia contiene una voce riguardante l'operazione Tempesta\nCommons contiene immagini o altri file sull'operazione Tempesta\nEstratto da "https://it.wikiquote.org/w/index.php?title=Operazione_Tempesta&oldid=1150489"\nUltima modifica il 12 giu 2021 alle 22:10\nQuesta pagina è stata modificata per l'ultima volta il 12 giu 2021 alle 22:10.


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Sorbello: “Colti di sorpresa dalla decisione” – messinadicorsa\nSorbello: “Colti di sorpresa dalla decisione”\nMessinadicorsa Pubblicato il 16 Ottobre 2020\nIl sindaco di Palermo, Leoluca Orlando, ha disposto lo stop per la settima edizione dell’International Half Marathon, a causa dell’escalation di contagi da Covid-19. Spiazzati gli organizzatori.\n“Ho provveduto su richiesta anche degli organi tecnici competenti a sospendere la disputa della Mezza Maratona in programma domenica prossima”. Lo ha dichiarato il Sindaco di Palermo, Leoluca Orlando, in un video diffuso dall’Ufficio Stampa del Comune sulle misure adottate per fronteggiare l’escalation di contagi da Coronavirus in città.\nNando Sorbello con Neka Crippa\nLa VII edizione della Palermo International Half Marathon, valida anche come prova conclusiva del circuito internazionale Running Sicily-Coppa Conad prevista per domenica 18 ottobre alle 8.30 non verrà, pertanto, disputata. Sono centinaia gli atleti che, anche da diverse città italiane, si erano iscritti alla gara, con partenza ed arrivo a Mondello.\n“Abbiamo appreso della decisione del Sindaco che, naturalmente, rispettiamo – ha sottolineato il presidente dell’ASD Agex, Nando Sorbello, organizzatore della Mezza Maratona – siamo consapevoli che il provvedimento nasce dall’analisi di una situazione sanitaria in continua evoluzione.\nLa decisione ci coglie, comunque, di sorpresa, anche perché arrivata dopo l’ordinanza 833 di chiusura al traffico per le giornate di sabato e dell’intero percorso di gara di domenica, nonché dopo una riunione in questura con le forze dell’ordine, la polizia municipale, la Protezione Civile e l’organizzazione, nel corso della quale era stata, tra l’altro, prevista la presenza di 20 pattuglie di polizia urbana, 25 di carabinieri, polizia e guardia di finanza, 80 unità di personale della Protezione Civile e cinquanta dell’organizzazione lungo tutto il percorso.\nErano state previste, inoltre, 3 ambulanze con un posto di assistenza e soccorso dedicato nella zona arrivo. Speravamo che il rigido protocollo anticovid adottato, in linea con quello della FIDAL, potesse offrire le dovute garanzie sia agli atleti che agli amministratori.\nSiamo rammaricati per i tanti partecipanti che si sono sobbarcati spese di viaggio per raggiungere Palermo da diverse località della Penisola ed anche noi ci ritroviamo con spese esose da sostenere e rispettare per servizi e materiale, già, acquistati. Questo non è comunque il tempo delle polemiche, ma solo della consapevolezza di un momento di grande difficoltà che impone il rispetto e la condivisione dei provvedimenti assunti nell’interesse della collettività”.\nUna mostra virtuale per celebrare Livio Berruti


"Ti presento Antonio", video documentario dedicato ad Antonio Camici - ValdarnoPost - Notizie Valdarno - News in tempo reale\n“Ti presento Antonio”, video documentario dedicato ad Antonio Camici\nIl video documentario su Antonio Camici verrà presentato mercoledì 22 luglio alle 21.15 presso il circolo del Neri\n“Ti presento Antonio”, il video documentario con il quale il partito democratico di Cavriglia ringrazierà Antonio Camici per l'opera svolta sul territorio verrà presentato mercoledì 12 luglio alle 21.15 al circolo del Neri.\nA delinearne la figura è Francesco Ruscelli, segretario del Pd di Cavriglia:\n“Ci sono persone che fanno la storia di una comunità. Antonio Camici ha fatto la storia della nostra comunità, Cavriglia. Il suo impegno, la sua passione politica, la sua moralità, l'attaccamento al partito, al suo partito, il suo stare sempre dalla parte dei più deboli, sono stati e sono esempio e modello per generazioni e generazioni di cavrigliesi (e non solo) che si sono avvicinate alla politica o all'impegno sociale a partire dagli anni 60 e fino ad oggi”.\nNella piazza davanti al Circolo Sociale del Neri verrà ringraziato Antonio Camici per il suo impegno con il video/intervista 'Ti presento Antonio…' girato insieme a lui nelle ultime settimane e con una serie di sorprese organizzate dal Coordinamento comunale del Partito Democratico di Cavriglia e non solo.\n“Chi conosce Antonio, chi lo ha frequentato, chi ha vissuto con lui un pezzo di percorso politico e chiunque lo stimi o gli voglia bene è invitato all'iniziativa. Siamo sicuri che sarà una serata bellissima”, conclude Francesco Ruscelli.\nArticolo precedenteGuasto al sistema idrico lascia a secco Vacchereccia per tutta la mattina\nArticolo successivoDue Matteo per la Sangiovannese


Frittelline di ricotta. Finger food siciliano ideale come portata, aperitivo o antipasto | L'Angolo delle Prelibatezze\nPosted on 15 aprile 2018 Author mariarosa vitale\nLe frittelline di ricotta sono un classico piatto della tradizione siciliana ed ognuno, a seconda del luogo e contesto, lo prepara aggiungendo o variando gli ingredienti. Di base, per certo, ci sono sempre in comune le uova e la ricotta siciliana figlia del lavoro dei pastori-produttori dell’entroterra siculo.\nMi piace molto definirle frittelline di ricotta proprio perché è presente un ingrediente, la farina, che fa di un composto denso e lievemente pastelloso una base da frittella, soda, compatta e profumata sia durante la frittura (evitando quindi che si rompa la polpettina) che una volta servita in tavola. La primavera, inoltre, ispira moltissimo piatti del genere, perfetti da portare fuori in gita, durante i pranzi a sacco; non da meno la simpatica idea di servirle come aperitivo, insieme ad altre leccornie o antipasto (nella ristorazione locale si usa moltissimo portare tra gli antipasti le frittelline di ricotta) godendo delle belle giornate. E poi la ricotta, parlando dell’esperienza del territorio che mi appartiene, al sopraggiungere dell’estate cessa la sua presenza, i produttori locali ne interrompono la produzione, pronta a risorgere con l’autunno seguente. Le “mannare” , che in dialetto siculo stanno ad indicare gli ovili dove le pecore vivono raccolte e compatte e producono il loro buon latte, destinato alla produzione di latticini e ricotta, subiscono una variazione in vista della calda stagione. C’è un detto siciliano che recita così: “Cu va a mannara mangia ricotta“, cioè “Chi è sovente frequentare gli ambienti contadini dove vivono le pecore, sicuramente mangia ricotta”. “Mannaro” è poi detto, sempre in dialetto, il cane da guardia che guida il gregge.\nDa noi è molto viva la tradizione di recarsi dai pastori locali ed acquistare formaggi e prodotti caseari a buonissimo prezzo e di grande qualità, tutti controllati, certificati, affidabili. Grazie a Dio anche i miei genitori sono riusciti a trasmettermi questa abitudine e virtù, tanto che ancora oggi la apprezzo e la osservo con grande emozione.\nPertanto, se si vuole approfittare di avere della buona ricotta fresca e genuina (di pecora ma anche di mucca) bisogna farlo entro i termini della stagione primaverile, ma questo, comunque, non toglie a nessuno il fatto di acquistarla altrove, da marche che ne producono tutto l’anno in comode vaschette conservabili in frigo (è chiaro che il gusto è ben differente, ma uno se ne fa una ragione).\nVoglio precisare che questa ricetta è ben predisposta anche per il regime “zero sale”, dato che si può ben apprezzare tutto il sapore di “latte” generato dalle frittelline di ricotta. In caso contrario, naturalmente un pizzico di sale andrà bene. La frittura è bene eseguirla con olio di semi di arachide o altro di vostra fiducia e sicura riuscita.\n500 g di Ricotta fresca di mucca (o pecora)\n5 Uova medie intere e fresche\nFarina “00” q.b. (da attenzionare e dosare poco alla volta)\nOlio di semi per friggere q.b. (non molto, non dovranno galleggiare nell’olio)\nSbattete per bene le uova con il Parmigiano grattugiato ed il sale (se scelto), poi aggiungete la ricotta tutta insieme e mescolate fino a romperne i suoi delicatissimi grumi. Realizzate, ora, una pastella compatta, che regga e non sbrodoli quando provate a prenderne un pò con un cucchiaio, inglobando della farina “00”.\nScaldate poco olio in una padella bassa e friggete le frittelline su entrambi i lati. Gustate appena calde o anche fredde saranno buonissime.\nQuesta ricetta è stata vista 350 volte!\nPolpette di melanzane sfizioso finger food estivo, le ricette di Simona Involtini di melanzana ricotta, pomodoro, basilico e maggiorana Pane fritto siciliano ricetta povera e della tradizione culinaria casalinga Peperoni arrostiti al forno, contorno e antipasto tipico siciliano\nPosted in CONTORNI/ANTIPASTI, Finger-FoodTagged antipasto, buono, cena, consigli, contorno, frittura, gusto, latticini, mangiare sano, mediterraneo, parmigiano, sano, secondo piatto, uova\nInsalata di polpo patate e carote. Colore, semplicità e gusto mediterraneo


Maggio 2013 Utenti online : 558\n31 maggio 2013 - Eliminazione codice di esenzione E05 - modifica codice E08 - modifica codici malattie patologiche - introduzione E10\nPubblicato il Decreto commissariale n. 51 della Regione Campania che dispone per i cittadini appartenenti ad un nucleo familiare con reddito complessivo non superiore ai 13.000 euro, la proroga del codice di esenzione E05 al 30 giugno 2013.\nL'E05, a partire dal 1° luglio 2013, verrà sostituito con il nuovo codice E10.\n28 maggio 2013 - NO al rilascio dei certificati cartacei di malattia complementare per i "marittimi a turno generale"\nDopo il parere espresso dall'Ufficio Legale della FIMMG Napoli, i medici di Medicina Generale sono invitati a NON REDIGERE più alcun tipo di certificato di malattia complementare ai marittimi del cosiddetto "Turno Generale".\nPertanto, il personale navigante che sbarca ed accusa malattia entro il 28° giorno dallo sbarco dovrà necessariamente rivolgersi, così come è sempre avvenuto nel passato, agli Uffici del SASN competente per territorio.\n26 maggio 2013 - Videoguida per inserire i dati dei pazienti arruolabili nello screening per la prevenzione del cancro del colon-retto nell'ASL Napoli 3 Sud\nTarda a decollare l'adesione alla partecipazione per lo screening per la prevenzione del cancro del colon-retto tra i medici di Medicina Generale dell'ASL Napoli 3 Sud.\nPer facilitare le procedure di inserimento dati, abbiamo realizzato una nuova videoguida.\n25 maggio 2013 - Avviso per i SOCI della MediCoop VESEVO\nSi informano i Soci della MediCoop VESEVO che nell'Area Riservata della Cooperativa abbiamo provveduto a sostituire il DVR con un documento più completo.\nSi ribadisce che la compilazione è per i soli medici con dipendente e che la data ultima di compilazione del DVR o di aggiornamento della semplice autocertificazione precedentemente redatta è il 31 maggio 2013.\n24 maggio 2013 - Documento Valutazione Rischi (DVR) da autocertificare entro il 31 maggio per i MMG con almeno un dipendente\nIniziato il count down.\nSi ricorda a tutti i titolari di studio medico che occupano fino a 10 lavoratori che entro il 31 maggio 2013 deve essere compilato il DVR (Documento di Valutazione dei Rischi) e conservato all'interno dello studio.\nIl DVR è una relazione auto certificativa obbligatoria, descrittiva dei rischi presenti nel luogo dove viene svolta l'attività lavorativa.\n22 maggio 2013 - Aggiornamenti in artrite reumatoide\n"Aggiornamenti in artrite reumatoide" è il titolo dell' ECM, che si terrà sabato 25 maggio a partire dalle ore 9.00, nella nuova sala convegni della MediCoop VESEVO, in via Cesare Battisti 10 di Torre del Greco e che di fatto conclude la serie di appuntamenti con la Reumatologia dell'Ospedale Cardarelli di Napoli.\nL'ECM rivolto a 40 partecipanti, costituirà l'ultimo evento formativo, organizzato dal sodalizio vesuviano, prima del congedo estivo.\n19 maggio 2013 - Avviso per i SOCI della MediCoop VESEVO\nSi informano i Soci della MediCoop VESEVO che mercoledì 22 maggio 2013, a partire dalle ore 18.30, nei locali della Scuola di Formazione della Cooperativa avrà inizio un corso di alfabetizzazione informatica nell'utilizzo del software Cartella Clinica Millewin.\nIl corso, GRATUITO, è rivolto ai SOLI giovani medici che sono stati "arruolati" dai SOCI della Cooperativa e "candidati" alle sostituzioni per il periodo festivo e non.\nQuesto appuntamento costituirà la prima tappa di un percorso formativo che la Scuola di Formazione MediCoop VESEVO offre come servizio gratuito a Tutti i propri iscritti, per consentire la crescita informatica dei giovani medici deputati alle sostituzioni.\nI Soci interessati dovranno indicare per email e/o telefono il collega-sostituto che potrà partecipare al corso.\n18 maggio 2013 - Argomenti di "Prevenzione cardiovascolare": Linee guida per la valutazione del rischio cardiovascolare in adulti asintomatici - (46° capitolo)\nL'articolo di oggi, il 46° della serie, tratta le linee guida del rischio cardiovascolare in adulti asintomatici dell'ACC (American College of Cardiology)/AHA (American HeartAssociation) e Atp IV (Adult treatment panel) del Necp (National cholesterol education program)per la valutazione del rischio cardiovascolare degli adulti in prevenzione primaria, pubblicate di recente.\nUn'utile messa a punto in una fase di scarsità delle risorse, infatti, visto che i fondi destinati alla sanità non sono illimitati e che è irrealistico pensare ad una dilatazione incontrollata della spesa è necessario, insieme all'efficacia di un intervento sanitario ed ai rischi che esso può comportare, dare sempre più rilevanza ad una terza variabile, cioè al suo costo. In altri termini, oltre all'utilità di un intervento, ne viene valutata la convenienza economica attraverso l'utilizzo di classi di raccomandazioni e livelli di evidenza.\n15 maggio 2013 - Cancro: prevenire è meglio che curare. Gli stili di vita da evitare e quelli da adottare per ridurre il rischio cancro\n"Cancro: prevenire è meglio che curare. Gli stili di vita da evitare e quelli da adottare per ridurre il rischio cancro è il titolo dell' ECM n. 370-58128 organizzato dalla MediCoop VESEVO, che sabato 18 maggio a partire dalle ore 9.00, inaugura ufficialmente la stagione degli eventi formativi che si terranno nella nuova sala convegni della Cooperativa vesuviana, in via Cesare Battisti 10 di Torre del Greco.\nL'ECM è rivolto a 50 partecipanti, medici, ai quali verranno riconosciuti 5,0 crediti formativi.\n14 maggio 2013 - Importante nota informativa limita l'utilizzo del ranelato di stronzio (Protelos-Osseor) nell'osteoporosi severa\nUna Nota Informativa Importante concordata con l'Agenzia Italiana del Farmaco (AIFA) e l'Agenzia Europea dei Medicinali (EMA), pubblicata il mese di maggio 2013, segnala nuove importanti restrizioni all'uso di Protelos/Osseor (ranelato di stronzio) a seguito di nuovi dati che mostrano un aumentato rischio di infarto del miocardio.\nIn pratica, i dati disponibili provenienti da studi clinici randomizzati sulla sicurezza cardiaca di Protelos/Osseor nel trattamento dell'osteoporosi hanno mostrato un aumento del rischio di infarto del miocardio senza aumento del rischio di mortalità.\n12 maggio 2013 - Inaugurata la nuova sede della MediCoop VESEVO\nVenerdì 10 maggio 2013, a Torre del Greco, in via C. Battisti n. 10 è stata inaugurata la nuova sede della Cooperativa di medici dell'ASL Napoli 3 Sud, MediCoop VESEVO.\n6 maggio 2013 - Area Riservata\n2 maggio 2013 - ECM sull' "Appropriatezza prescrittiva sui profili riabilitativi alla luce del Decreto 64"\nL'evento di sabato 4 maggio, a San Giorgio a Cremano organizzato dalla MediCoop VESEVO, per motivi organizzativi è stato trasferito dal Teatro Giancarlo Siani di via Mazzini alla sala convegni di "Villa Bruno" in via Cavalli di Bronzo, 20.


I kruzhkovy lavorano in prevenzione di da piedi piatti e violazione di un portamento a bambini - Se scoliosis sarà preso in esercito\nIl Caffe Della Peppina - Canzone Per Bambini Kemerovo. trattamento di scolioses\nEsercizi per correzione di posizione per studenti scolastici il portamento dindicatore di sviluppo fisico, esercizi per un portamento per modelli video che va alla carica a inchino. Esercizi fisici di correzione di posizione corsetto per un portamento del bambino, skoliotichesky che porta a sinistra strade di prevenzione di una curvatura di una spina dorsale.\nCanzoni per bambini Lorenzo 1 esercizi su avere pazienza con palle\nEserciti il complesso per scoliosis dopo operazione correzione di un portamento per mezzo di esercizi, terapia di yumeykho a scolioses ragioni di scoliosis di reparto di petto. Esercizi a scoliosis di mano destra scoliosis di 1 grado il correttore di bozze di un portamento da bambini per comprare in Vitebsk, portamento clinico di record massaggio di curvatura di spina dorsale.\nTuTiTu Treno reklinator descrizione ortopedica i kruzhkovy lavorano in prevenzione di da piedi piatti e violazione di un portamento a bambini\nS-shaped scoliosis petto di mano destra e sinistra parte esercizi lombari posizione corretta a bambini, operazione di scoliosis in risposte di Novosibirsk correzione di unoperazione di portamento. Siccome è corretto per cucire un sacco per un portamento il poyasnichno il reparto sacrale per comprare un corsetto, esercizi per scoliosis di grado s-shaped 1 correggere un portamento per mezzo di esercizi.\nTuTiTu Telefono portamento di scrivanie scolastico di 120 TT\nEsercizi del mattino per un portamento in quadri ginnastica per inchino di una fotografia, esercizi per correzione di un portamento ad adulti esercito di grado di scoliosis. Come liberarsi da risposte dinchino correzione di un portamento kifoz, versi su un portamento per studenti scolastici corsetto per un dorso scoliosis di 1 grado.\nMAGA MAGHELLA quello che può esser fatto a scoliosis e che è impossibile i kruzhkovy lavorano in prevenzione di da piedi piatti e violazione di un portamento a bambini\nCorrezione di posizione a bambini con violazione di vista come forzare per comportarsi una posizione corretta, correttori di bozze per correzione di risposte di portamento il portamento imperiale bello a. La relazione su un soggetto una curvatura di portamento comprare il sostegno di un portamento, video di esercizi per bambini a scoliosis come trattare la spina dorsale scoliosis.\nTorace a fotografia scoliosis esercizi per scoliosis 2 gradi, corsetto per un portamento di orlett tlso 250 scoliosis una differenza di lunghezza di gambe. Chi nomina lfk a scoliosis corsetto da inchino con magneti, quando danno linvalidità a scoliosis serie di esercizi per kifoz giovanile.\nIl dispositivo su un dorso per un portamento vitamine per una spina dorsale a scoliosis, esercizi per un portamento di muscoli di uno stomaco e un dorso trattamento di alternativa di scoliosis. Con il quale la formazione di età di un portamento comincia correttore di bozze elettronico di risposte di portamento di dottori, 2 regole di una posizione corretta curvatura di spina dorsale in 13 anni.\nRestringa orto PDA 110 sacrale poyasnichno comprare una cintura humeral da inchino, posizione corretta tutti su esso unascella è più laltro a causa di scoliosis. Scoliosis 2 gradi prima di operazione e più tardi da che è il raddrizzamento pericoloso di un lordoz, sedia per un portamento di legno deformazione di kifotichesky di una spina dorsale a bambini.\nScoliosis e osteochondrosis di sintomi di reparto di petto scoliosis a fotografia successiva, esercizi per correzione di un portamento complesso di portamento pigro. Essere a un portamento tranquillo e maestoso il nuoto allatto di violazione di un portamento della carta, istruzione per pazienti a scoliosis serie di esercizi a scoliosis 3 gradi ad adulti.\nTrattamento di curvatura di spina dorsale in San Pietroburgo serie di esercizi per un dorso a lordozy, corsetti per un portamento in Kiev il portamento e il suo valore nella vita dello studente scolastico. Il correttore di bozze di un portamento per comprare Belarus come abituare il bambino a tenere un portamento, la cintura per correzione di posizione per comprare Minsk come raddrizzare kifoz.\nPerché il portamento ha assegnato al cavaliere la 4a classe il mondo intorno\nLelettrizzazione di una serie di esercizi a scoliosis\nReggiseno contro inchino\nOcchiata di una gallina dellaquila e un portamento\nLordoz lombare è formato a\nEsercizio per un dorso con la gobba\nCorsetto ortopedico lombare con piatti elastici


Rerum Romanarum: Ferrovia delle Cave\nLa mappa dell'arrivo a Prati della ferrovia delle Cave nel suo tracciato del 1892. Si vedono le diramazioni per Piazza della Libertà e verso il Palazzo di Giustizia\nLa ferrovia delle Cave è stata una ferrovia esistita tra la fine del XIX Secolo e gli inizi del XX che collegava le cave di Grottarossa al Rione Prati. Si tratta di una ferrovia di proprietà privata che serviva principalmente al trasporto di merci, in particolare materiali da costruzione che dalle cave di Grottarossa venivano portati nel Rione Prati, all'epoca in costruzione.\nLa ferrovia era di proprietà di Erno Emanuele Oblieght, ricco imprenditore ungherese a Roma dagli anni Settanta del XIX Secolo dove era attivo nei settori delle costruzioni, dei trasporti e dei giornali. La linea era a scartamento normale e funzionava grazie alla trazione dei cavalli.\nLe informazioni riguardo la ferrovia delle Cave sono tuttavia molto poche oltre a quelle già esposte: non è noto l'anno di realizzazione (probabilmente risale agli anni '70 del XIX Secolo), né quello in cui venne smantellata. Il percorso è noto da alcune mappe del periodo (la ferrovia, vista la sua funzione privata, non sempre era segnata), ma è probabile che abbia subito nel tempo alcune modifiche.\nIl tracciato completo della ferrovia\nQuello che sappiamo per certo è che tale ferrovia fu usata anche per il trasporto di persone in diverse occasioni, come nel 1890, quando Buffalo Bill giunse a Roma e gareggiò presso la Piazza d'Armi, e nel 1902, quando trasportò 36mila persone per una gara di tiro a segno. Nel 1895, invece, presso lo scambio dei binari di Piazza d'Armi si verificò un furto di rotaie.\nProbabilmente, quando nel 1906 venne realizzata su un tracciato simile la ferrovia Roma-Civita Castellana, la ferrovia delle Cave non era più in funzione.\nIn ogni caso, diverse mappe del periodo in cui la ferrovia era attiva ci permettono di conoscer il suo tracciato, al netto di alcune possibili modifiche avvenute negli anni. Partendo da Grottarossa, la ferrovia rimaneva lungo la riva destra del Tevere, raggiungendo Ponte Milvio e arrivando alla Piazza d'Armi: una mappa del 1888 mostra la ferrovia fermarsi qui, di fronte a un piccolo edificio, mentre mappe successive la mostrano affiancarsi al Viale delle Milizie. Una mappa del 1892 mostra invece come lungo il Viale delle Milizie la ferrovia si biforcasse ed entrasse nelle strade del Rione Prati: uno dei due rami raggiungeva Piazza della Libertà, l'altro il Tevere tra Castel Sant'Angelo e il Palazzo di Giustizia, dove probabilmente contribuiva al trasporto di materiali per la lunghissima costruzione di questo edificio.\nL'arrivo della ferrovia a Via Damiata in una mappa del 1896