Démêlé les acteurs clés de l’immunité humorale :et optimisé protocole d’isolement de Lymphocyte de patchs murin de Peyer…\nL'isolement et la caractérisation parcytométrie en flux de l'intestin grêle Lymphocytes murine…\nÉvaluer le développement de cellules murinesendritiques plasmacytoïdes dans les plaques de Peyer Utiliser le transfert adoptif de progéniteurs hématopoïétiques…\nLes plaques de Peyer (PP) font partie intégrante des tissus lymphoïdes associées à l'intestin (GALT) et jouent un rôle central dans l'homéostasie intestinale et immunosurveillance. Antigènes particulaires et des microbes dans la lumière intestinale sont continuellement échantillonné par les cellules M PP dans l'épithélium folliculaire associée (EAF) et transportés vers un réseau sous-jacent des cellules dendritiques (CD), les macrophages et les lymphocytes. Dans cet article, nous décrivons les protocoles dans lesquels PP murins sont (i) dissociée en suspensions de cellules isolées et soumises à la cytométrie en flux et (ii) préparé pour découpe au cryostat et immunomarquage. Pour la cytométrie en flux, PPs sont dissociées mécaniquement et ensuite filtré à travers 70 pm à générer des membranes suspensions monocellulaires libres des cellules épithéliales et les gros débris. Démarrage avec 20-25 PP (à partir de quatre souris), cette méthode rapide et reproductible donne une population de> 2,5 x 10 6 cellules avec> 90% de viabilité cellulaire. Pour découpe au cryostat, fraisPP ly isolés sont immergés dans la température de coupe optimale (PTOM) moyen, composant logiciel enfichable congelés dans l'azote liquide, puis sectionnée à l'aide d'un cryomicrotome. Les coupes de tissus (5-12 um) sont séchés à l'air, fixées à l'acétone ou le méthanol, puis soumis à immunomarquage.\nLes plaques de Peyer (PP) sont des agrégats macroscopiques organisés follicules lymphoïdes présents tout au long de l'intestin grêle de l'homme et la souris (figure 1) et constituent les principaux sites à laquelle des réponses immunitaires muqueuses sont engagées contre des antigènes alimentaires, les bactéries commensales, les agents pathogènes microbiens et les vaccins oraux 1-4. Contrairement à d'autres tissus lymphoïdes périphériques tels que les ganglions lymphatiques mésentériques, PP manquent vaisseaux lymphatiques afférents. En tant que tels, des réponses immunitaires adaptatives en PP sont entraînés en réponse à des antigènes provenant de la lumière intestinale. L'échantillonnage des antigènes luminal est accomplie par l'épithélium du follicule-associé (EAF), qui se compose de deux entérocytes et l'antigène d'échantillonnage cellules appelées cellules M. Sous l'EAF, dans le dôme sous-épithélial (SED) région, se trouve un réseau de cellules dendritiques (CD) entremêlés avec les macrophages, les lymphocytes B et les lymphocytes T CD4 + 5-9. Au cœur de chaque follicl PP lymphoïdee sont des cellules dendritiques folliculaires (FDC) et un B riche en cellules germinales centre central, flanqué de zones T interfolliculaires cellules riches. D'échantillonnage de l'antigène par les résultats PP dans le développement de plasmablastes + IgA cellules B et cellules CD4 + mémoires et effectrices que les semences de la lamina propria environnante et offrir une immunité à un large éventail d'envahisseurs muqueuses.\nDisséquer les événements immunologiques complexes associées à l'échantillonnage antigène, le traitement et la présentation de PP est une tâche ardue, étant donné que les cellules PP ne constituent qu'une infime partie de la totalité des cellules lymphoïdes dans la muqueuse intestinale. Pour aider à la caractérisation in vitro de cellules dans ce contexte, nous proposons un protocole de préparation total des cellules de souris PP pour la cytométrie en flux et fonctionnelles, ainsi que d'un protocole de préparation PP cryosections pour la microscopie d'immunofluorescence et immunohistochimie. Notre protocole pour l'isolement, la caractérisation et immunomarquage des protocoles d'ententee cellules PP n'est pas nouvelle en soi, comme en témoigne le fait qu'il ya de nombreuses références datant de plus de 25 ans qui citent ces techniques 5,6,9-11. Au contraire, notre protocole prévoit une procédure simplifiée (et visuel) méthode de collecte des enquêteurs PP pour la première fois. Les techniques que nous décrivons sont faciles à maîtriser et facile à produire un grand nombre de cellules avec> 90% de viabilité cellulaire. Le protocole de découpe au cryostat donne hautement reproductibles coupes sériées parfaitement adaptés pour immunofluorescence et la microscopie confocale. En outre, notre protocole complète deux autres articles Jove dernières années. La première, par Fukuda et ses collègues, décrit l'utilisation de tests anse iléale ligaturée à évaluer l'absorption de bactéries pathogènes par les cellules M PP 12. L'autre, par Geem et ses collègues, décrit l'isolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de la muqueuse intestinale de la souris, mais exclut explicitement les PP à partir de leur analyse 13.\nLes animaux ont été logés dans des classiques, spécifiques exemptes d'agents pathogènes conditions et ont été traitées en parfaite conformité avec les soins du Centre Wadsworth animaux institutionnel et l'utilisation des comités (IACUC) des lignes directrices.\n1. Gavage oral\n(Facultatif) souche de souris Gavage de choix avec un antigène ou microbes d'intérêt en utilisant un G 22 x1.5-in. aiguille d'alimentation en extrémité franche (Popper scientifique, New Hyde Park, New York). Les volumes de livraison ne doit pas dépasser 400 pi par souris.\n2. Isolement de cellules PP pour cytométrie en flux\nEuthanasier les souris par le CO 2 asphyxie, selon des soins aux animaux et utilisation comité (IACUC) des lignes directrices.\nNettoyer l'abdomen avec de l'éthanol à 70% ou Bétadine avant la chirurgie. Réaliser une laparotomie standard qui implique un seul (1 cm) incision à l'aide de ciseaux chirurgicaux de qualité le long de la ligne médiane début d'environ 1,5 cm de la base de la cage thoracique. Exposez le parcavité itoneal et identifier le caecum. Snip l'intestin petit terminal à la jonction iléale-caecal et retirez délicatement l'intestin dans son intégralité. Veillez à ne pas hyperextension du tissu intestinal car il est retiré de la cavité péritonéale.\nPosez l'intestin grêle sur un lit de serviettes en papier humides ou Kimwipes. Mouiller doucement l'intestin grêle avec une solution saline pour prévenir la déshydratation des tissus. Identifier visuellement PP individuelles situées du côté anti-mésentérique de l'intestin (figure 1). En règle générale, une seule souris de 5 à 10 PP visibles qui sont uniformément réparties dans le duodénum (proximale) à l'iléon (distale). En moyenne, quatre souris va rendement de 23 PP.\nUtilisation courbes ciseaux chirurgicaux, doucement d'accise PP individuels et les placer dans une solution froide saline équilibrée de Hank (HBSS). Remarque, les ciseaux doivent être placés courbe vers le haut juste au-dessus du PP et puis doucement appliquée au tissu. D'accise que le PP (pas surrounding tissus) et transfert à l'HBSS froid.\nRemarque: Toutes les incubations et les étapes de centrifugation de ce point de l'article 2 doit être effectuée à 4 ° C afin de préserver la viabilité des cellules.\nTransfert PP en 5 ml Spleen dissociation moyen et incuber pendant 15-20 min à 37 ° C tout en agitant vigoureusement à 250 rpm. Le temps d'incubation plus longue affectera négativement la viabilité cellulaire.\nÀ générer une suspension de cellules individuelles, sur un lieu PP stérile (autoclave) 70 um tamis en nylon maille et de force broyer le tissu dans la maille à l'aide de la base d'un plongeur d'une seringue de 1 cc. Alternativement, PP sandwich entre deux givrés stériles lames de microscope (autoclavés dans des enveloppes) et doucement broyer les tissus avec un mouvement de va-et-vient. Utiliser une pipette de transfert stérile pour transférer la suspension de cellules dans un tube de 5 ml Falcon.\nAjouter de l'EDTA à une concentration finale de 1 mM à la suspension cellulaire. Incuber sur un agitateur pour5 min à température ambiante.\nSuspension cellulaire décanter à travers un second filtre 70 cellules um pour éliminer les agrégats cellulaires ou autres débris tissulaires. Prélever des cellules dans un tube de 15 ml ou 50 conique.\nCellules soumises à une centrifugation douce (5 min à 500 xg). Décanter le surnageant et remettre en suspension les cellules dans un tampon de flux, ce qui est un tampon phosphate salin (PBS) contenant 1% de sérum de veau foetal (FCS).\nPour déterminer le nombre et la viabilité cellulaire, diluer les cellules 1:10 dans du bleu trypan et inspecter visuellement les cellules en utilisant un microscope optique et d'un hémocytomètre. Alternativement, un compteur de cellules comtesse (Invitrogen) ou un instrument similaire peut être utilisée pour énumérer automatiquement le nombre de cellules et leur viabilité.\nDémarrage avec 20-25 PP, ce protocole devrait donner> 2,5 x 10 6 cellules totales. Cela équivaut à ~ 0.8 à 1,2 x 10 6 cellules par souris.\nMarquage de l'anticorps de cellules de cytométrie en flux\n<début ol = "11">\nDistribuer des cellules (10 5 par puits) dans les puits d'une plaque de 96 puits à fond rond.\nSous réserve de la plaque centrifugation douce (5 min à 1000 xg), et le surnageant décanter en retournant doucement la plaque.\nRemettre en suspension les cellules dans un tampon de bloc Fc et incuber sur de la glace pendant 15 min. Bien qu'il existe un certain nombre de blocs de buffers disponibles dans le commerce Fc (par exemple chez le rat anti-souris CD16/CD32, BD Biosciences), nous utilisons simplement milieu usé d'un rat de cellules d'hybridome B (ATCC 2.4.G2) qui sécrète un anticorps monoclonal murin IgG 1 contre Fcy récepteurs pour cette étape.\nSous réserve de la plaque centrifugation douce (5 min à 1000 xg) comme ci-dessus, et le surnageant décanter en retournant doucement la plaque.\nAjouter fluorophore anticorps conjugués directement à des suspensions cellulaires lors de la dilution désirée, et incuber sur de la glace pendant 30 min avec balancement continu.\nSous réserve de la plaque centrifugation douce (5 min à 1000 xg), et décantersurnageant en retournant doucement la plaque.\nLaver les cellules avec 100 pi de tampon de flux.\nCentrifuger la plaque à 1.000 xg pendant 5 min, et le surnageant décanter en retournant doucement la plaque.\nResuspendre les cellules tampon 400 ul de fixation, qui se compose de 300 pi de tampon de flux et 100 pi de 1% de paraformaldéhyde dans des MEHP tampon (60 mM PIPES, HEPES 25 mM, 10 mM EGTA, 4 mM de MgCl2 à pH 6).\nCellules soumises à la cytométrie de flux en utilisant un FACSCalibur ou équivalent. Analyser les résultats à l'aide du logiciel Cell Quest Pro version 5.2.\n3. Préparation de cryosections PP\nEn prévision de la collecte de tissus, ajoutez une température optimale de coupe (PTOM) composé de 7x7x5 mm moules à base de plastique. Préparer également une piscine de l'azote liquide (> 750 ml) dans un seau dewar ou la glace.\nEuthanasier souris et effectuer un laparotamy, comme décrit ci-dessus. Enlever l'intestin et les placer sur du papier absorbant humide.\nÀPP pour isoler cyrosectioning, couper 0,5 cm segments transversaux de l'intestin grêle contenant un seul PP et les tissus transfert à une boîte de Pétri contenant du PBS. Rincer délicatement la lumière de ces segments avec du PBS pour éliminer les débris indésirables fécale.\nPlacez les segments de tissus intestinaux verticalement à l'intérieur des moules de base contenant octobre Plongez les moules dans de l'azote liquide et permettre au tissu de geler complètement (1-2 min). La couleur de l'OPO va changer du clair au blanc lorsque le tissu est complètement gelé. . Pour un refroidissement plus progressive (par exemple, pour réduire la fissuration des PTOM), les moisissures immerger dans un bain d'isopentane refroidi avec de vapeurs d'azote liquide Remarque: Porter des lunettes de sécurité appropriées lorsque vous travaillez avec de l'azote liquide.\nRetirer les moules de base congelée de l'azote liquide en utilisant une pince et de permettre le moule à réchauffer à la température ambiante juste assez longtemps (~ 10-15 secondes) pour permettre aux bords du bloc octobre à ramollir. Pour retirez le bloc congelé de l'OCT dele moule, retourner le moule et appuyez doucement sur le dos pour éjecter le bloc sur un chiffon propre 4 pièces x 4 cm de papier d'aluminium. Immédiatement envelopper le tissu de la feuille et les placer dans un sac spécimen étiqueté stockés dans de l'azote liquide ou de la neige carbonique. Sinon, le transfert de tissus dans un congélateur (<-20 ° C). Utilisez le tissu à l'intérieur d'une semaine, sinon les blocs deviennent fragiles avec l'âge.\nDécoupe au cryostat\nCoupe à congélation du tissu en utilisant un Leica CM3050S cryomicrotome ou équivalent. La température de la chambre sur le cryostat doit être réglé à -21 ° C.\nEfforcez-vous de sections qui sont 12-14 um d'épaisseur.\nRecueillir des sections sur Fisher SuperFrost Plus (ou équivalent) des lames de microscope en verre et d'inspecter visuellement à l'aide d'un microscope à faible niveau de lumière électrique. Si plusieurs sections sont recueillies sur une lame, assurez-vous qu'ils sont regroupés pour des applications en aval de coloration.\nMagasin de til glisse à température ambiante dans une boîte à lames et, idéalement, de les utiliser dans quelques jours.\nÉtiquetage des anticorps cryosections et analyse par microscopie confocale\nImmerger les lames dans de l'acétone (ou méthanol) en cuve de coloration des tissus ou supports pendant 2 min. Une incubation prolongée peut causer des tissus à se détacher de la lame.\nTransfert de diapositives à cuve de coloration nouvelle et laver 3 fois avec du PBS-T (PBS 1X avec 0,05% de Tween-20) pendant 3 minutes chacun.\nEncercler les sections avec un stylo hydrophobe ImmEdge. Cela permettra d'assurer que les réactifs et les anticorps restera confiné à cette région pendant les incubations.\nIncuber les lames dans un tampon de bloc (sérum de chèvre 2% dans du PBS) pendant 30 min à 37 ° C dans une chambre humidifiée à l'abri de la lumière.\nIncuber les lames avec un tampon de bloc Fc (voir ci-dessus) pendant 10 min à 37 ° C.\nTremper dans du PBS-T et sec autour de sections à l'aide Kimwipes ou d'autres tissus absorbant.Prenez soin de ne pas toucher les coupes de tissus réels.\nCoupes de tissus de recouvrement avec une solution d'anticorps primaire et incuber pendant 30 min à 37 ° C dans une chambre humidifiée. Anticorps primaire est généralement dilué dans un tampon de bloc à une concentration finale de 20 pg / ml. L'utilisation d'anticorps directement marqués primaires est souhaitable, car pas moins de trois anticorps peuvent être combinés directement à cette étape. Anticorps directement marqués également d'éliminer la nécessité de mesures supplémentaires d'incubation d'anticorps.\nLaver les lames 3 fois (5 min chacun) par immersion dans du PBS.\nSi nécessaire, des diapositives incuber avec les anticorps secondaires pendant 30 min à 37 ° C dans une chambre humide.\nIncuber les lames pendant 4 min dans du paraformaldéhyde à 1% dans un tampon de MEHP, comme décrit ci-dessus.\nRincer les lames dans du PBS pendant 1 min.\nZone sèche autour des sections à l'aide Kimwipes ou d'autres absorbentent des tissus. Prenez soin de ne pas toucher les coupes de tissus réels. Avec une pipette ou compte-gouttes, placer délicatement une goutte de prolonger à moyen Or montage direct sur la section. Recouvrir d'une lamelle de verre sur le support de montage en prenant soin d'éviter les bulles. Utilisez du papier buvard pour absorber l'excès n'importe quel support de montage.\nJoint à lamelles lames de microscope avec vernis à ongles commerciale et laisser sécher à l'air.\nAfficher les diapositives avec un Leica TCS SP5 ou équivalent microscope confocal.\nL'analyse par cytométrie en flux des suspensions monodisperses de cellules PP totaux révèle une nette distinction entre les préparations de cellules bons et les mauvais. Dans les préparations cellulaires de bonnes relations avec plus de 80% de viabilité, la grande majorité des cellules démontrent une forte diffusion vers l'avant (FSC), un indicateur de volume cellulaire élevée et à faible dispersion latérale (SSC), un indicateur de granularité cellulaire faible (figure 2A). Dans cette expérience, nous avons également volontairement préparé une «préparation cellulaire pauvres» en incubant les cellules PP pendant les étapes d'isolement à la température ambiante (au lieu de sur la glace) et, dans la dernière étape, l'incubation des cellules avec du PBS + 1% de SVF (au lieu de MEHP mémoire tampon). Dans ces préparations cellulaires pauvres, la majorité des cellules présentent une faible FSC et SSC élevé et sont en dehors de la porte indiquée R1 (figure 2B). Ces cellules sont susceptibles apoptose et / ou la nécrose.\nLa figure 3 illustre l'utilisation d'un cocktail de jusqu'à quatre différents fluorophore anticorps monoclonaux conjugués à une discrimination entre une variété de types de cellules dans des suspensions cellulaires simples PP. Le marquage avec cluster de différenciation (CD) des marqueurs CD19 et révèlent que les cellules B B220 constituent environ 60% de la population PP cellule fermée (figure 3A). Spécifiques des sous-ensembles de lymphocytes T peuvent être facilement énumérés par double marquage avec des anticorps contre CD3 et CD4 (figure 3B) ou CD3 et CD8 (Figure 3C). CD4 + et CD8 + T constituent ~ 23% et ~ 9%, respectivement, des cellules PP total. DC CD11c + sous-ensembles marqués (figure 3D) et CD103 + (non représenté) peut également être énumérés par cette méthode. CD CD11c + contribuent à environ 8% de la population totale fermée, ce qui équivaut approximativement à 10.000 contrôleurs de domaine par PP. Cette s'accorde exactement avec le nombre de PED observés par autrui 14.\nParmi la population de CD11c + +. Des résultats similaires sont obtenus lorsque les cellules sont collectées à partir PP C57B / 6 souris (figure 3E).\nPréparations cellulaires «mauvais» peut conduire à des résultats très trompeurs, en grande partie parce que les cellules mortes ou mourantes ont tendance à lier les anticorps non spécifique. Comme le montre la figure 4, la population de cellules qui se colorent positif à la fois pour le marqueur des cellules B (B220) et les marqueurs de cellules T (CD3, partie A, CD4, panneau B) peut varier de plus de 3 fois entre un bon et préparation cellulaire mauvais. La figure 4 montre une surreprésentation des B220 + et CD3 + double-cellules positives (Groupe A), ainsi que B220 + cellules B et cellules T CD4 + double-positives cellules (partie B) dans les préparations cellulaires pauvres. Comme mentionné ci-dessus, la disparité B relative et le nombre de cellules T dans le bien et le pauvre est probablement dû à la liaison non spécifique des anticorps cellules mourantes.\nNotre protocole démontre également que la souris cryosections PP se prêtent à l'analyse histopathologique, ainsi que immunomarquage. Figure 5 compare coloration H & E de la souris PP paraffine (panneaux A, B) et des coupes congelées (partie C). Bien que les sections de paraffine fournir plus de résolution au niveau cellulaire lorsqu'elles sont colorées par H & E, les zones claires et sombres de PP centres germinatifs sont plus facilement délimitées dans les sections cryosection (figures 5A-C). Cryosections H & E teinté sont utiles pour side-by-side de comparaison avec cryosections immunomarquées. Un cryosection typique PP coloré avec anticorps anti-CD3 pour marquer les cellules T, anti-CD11c pour mettre en évidence des anticorps anti-DC et B220 pour mettre en évidence les anticorps des cellules B est illustré à la figure 6.\nFigure 1. Souris Peyer patches. l'image d'un intestin de souris fraîchement excisée petit compartiment à trois PP visibles (flèches blanches). Les PP apparaissent comme des structures de type blister (5 x 5 mm) sur le côté anti-mésentérique de l'intestin séreuse.\nFigure 2. Total des cellules PP analysés par cytométrie en flux. Une suspension monodisperse de cellules PP total a été soumis à la cytométrie en flux en utilisant un FACSCallibur BD. (A) Exemple d'une bonne préparation cellulaire. La grande majorité des cellules démontrent une forte diffusion vers l'avant (FSC), un indicateur de volume cellulaire élevée et à faible dispersion latérale (SSC), un indicateur de granularité cellulaire faible. Ces cellules sont encadrés dans R1. Les cellules ayant un faible FSC et SSC haute, située à l'extérieur de la porte R1, sont considérés comme morts ou mourants cellules. (B) Exemple d'une préparation pauvre cellule, dans laquelle la majorité des cellules sont en dehors de la porteR1 raison de la faible FSC et SSC élevé.\nFigure 3. L'analyse par cytométrie de flux représentant des lymphocytes PP. Monodisperses suspensions de cellules incubées avec PP totaux fluorophore conjugué anticorps primaires, puis soumis à la cytométrie en flux. (A) et B220 étiquetage CD19 des cellules B PP. (BC) double marquage des populations de cellules totales avec CD3 et CD4 (B) ou CD8 (C) des sous-ensembles spécifiques de dénombrer des cellules T. (D) double marquage des populations de cellules totales pour B220 (marqueur des cellules B) et CD11c (marqueur DC). (E) Comparaison B220, CD3 , CD4 et la coloration des cellules CD11c PP de souris BALB / c et les souris C57B / 6.\nFigure 4. Trompeuses données de cytométrie en flux à la suite de mauvaises préparations de cellules PP. Good (à gauche) et pauvres (panneaux de droite) préparations cellulaires PP ont été colorées avec (A) anticorps B220 et CD3 pour différencier les populations de cellules B et T ou (B) anticorps à B220 et CD4 pour différencier les cellules B à partir d'un sous-ensemble de cellules T. Il ya généralement très peu de cellules de cellules qui se colorent positifs pour CD4 et CD3 ou B220, comme indiqué dans les panneaux de gauche. En revanche, dans des préparations de cellules double-positives pauvres cellules constituent près de 20% du nombre total de cellules. Voir le texte pour plus de détails sur ce qui constitue une préparation "mauvaise" cellule.\nFigure 5. Représentant H & E coupes colorées PP. Inclus en paraffine sections (A, B) ou cryosections (C) de l'iléon PPs ont été colorées avec H & E et visualisés par microscopie optique. Notez que les zones claires et sombres des follicules lymphoïdes sont facilement délimitées dans les cryosections, en comparaison avec les coupes en paraffine. Abréviations: V, villeux; FAE, follicule associée à l'épithélium; SED, sous-épithéliale dôme; LF, follicules lymphoïdes.\nFigure 6. Marquage immunofluorescent de cryosections PP murins. Fraîchement coupé coupes de tissus de souris à un seul PP ont été séchés à l'air, fixé à l'acétone, et colorées avec (A) conjugués au FITC anticorps anti-CD3 pour marquer les cellules T dans les régions inter-folliculaires et lamina propria; (B) PE-conjugués d'anticorps anti-CD11c pour mettre en surbrillance le CD dans SED, et (C) APC-conjugués d'anticorps anti-B220 de mettre en évidence les cellules B (D) o Un composite.f images dans des panneaux AC générées à l'aide du logiciel Fidji. La barre d'échelle est de ~ 100 um.\nDans cet article, nous avons fourni des protocoles parallèles pour la préparation PP préparations de cellules uniques pour l'analyse par cytométrie en flux et fonctionnelle et cryosections pour immunomarquage. Les deux méthodes sont hautement reproductibles et facilement accessible, à condition d'un cytomètre en flux et cryostat sont disponibles. Pour les enquêteurs première fois, il convient de souligner que, par rapport à la rate, les rendements cellulaires totaux provenant PP sont relativement maigres. Néanmoins, le protocole, nous présentons généralement des rendements compris entre 0,8 à 1,2 x 10 6 cellules totales PP d'une souris. Mise à l'échelle est possible, bien que nous ne tiennent généralement pas plus de 20-25 piscine PP, parce que, dans notre expérience, l'agrégation se produit et les rendements cellulaires (et viabilité) baisse fortement. D'autre part, nous ne recommandons pas d'utiliser moins de 15 PP pour ce protocole, une masse critique est nécessaire pour mener à bien les cellules à travers la procédure d'isolement complet. Si la viabilité cellulaire maximale est une priorité pour aval fonctionnelletests, nous recommandons qu'un petit échantillon de cellules isolées être soumis à une coloration iodure de propidium pour permettre de déclenchement plus précis de la piscine viable de cellules de la population PP total de cellules. Enfin, il convient de noter que notre méthode se prête à des applications de tri cellulaire si un sous-ensemble de cellules spécifique est souhaitée pour le transfert adoptif ou l'analyse in vitro, par exemple.\nLa collection des PP pour découpe au cryostat est relativement simple, même si le découpage réel de tissus PP peut être difficile. Il est impératif, par exemple, que les tissus PP sont correctement orientées dans des moules (ie perpendiculaire à la base du moule) pour s'assurer que les sections transversales sont de véritables obtenu. Nous proposons composant logiciel enfichable congélation des tissus en PP et en soumettant ensuite les cryosections à précipiter fixateurs tels que l'acétone ou le méthanol afin de préserver la réactivité des anticorps («antigénicité"), même si la précipitation résultat fixateurs une diminution de la résol cellulaire et sub-cellulaire globaleution. Si la préservation de l'antigénicité n'est pas un problème particulier, nous vous recommandons l'utilisation de réticulation fixateurs tels que le paraformaldéhyde (PFA), qui se traduisent par une meilleure préservation des structures cellulaires et sous-cellulaires. En effet, l'IFP peut être utilisé pour fixer les tissus avant découpe au cryostat. Il suffit de plonger fraîchement excisées PP et abondamment à l'PFA à 4% pour> 2 heures, laver le tissu avec du PBS pour éliminer l'excès de fixateur, équilibrer les tissus en saccharose (15%) si vous le souhaitez, puis incorporer dans un PTOM, tel que décrit ci-dessus. Le tissu peut ensuite être cryosectioned, mais doit être bloqué avec une solution de glycine (0,1 M dans du PBS pendant 15 min) pour étancher réactive résiduelle PFA avant l 'immunomarquage.\nEnfin, alors que nous avons décrit les protocoles de marquage par immunofluorescence de cryosections PP, ces mêmes sections se prêtent à l'immunohistochimie (IHC) en utilisant des kits disponibles dans le commerce IHC (Vector Labs par exemple, Burlingame, CA). Pour IHC, il est indispensable de prévoir une peroxydase de blocage ou QuEnching étape dans le protocole, que les peroxydases endogènes sont très répandues dans la muqueuse intestinale. D'autres ont fait remarquer que pour l'IHC, la perfusion cardiaque des souris avec du paraformaldéhyde à 4% dans du PBS améliore la préservation des tissus.\nEn résumé, nous avons fourni des protocoles parallèles et complémentaires pour l'analyse quantitative et fonctionnelle des cellules murines PP, y compris les lymphocytes et les PED. La préparation des suspensions cellulaires simples permet quantitative et fonctionnelle dans l'analyse in vitro des principaux types de cellules dans les PP, tandis que immunomarquage de coupes congelées fournit des informations concernant la localisation de types cellulaires spécifiques, ainsi que des interactions cellule-cellule qui existent sur place. La principale limite de ces deux approches est que ni représente «temps réel» la visualisation de PP interactions cellule-cellule. Pour le moment du moins, PP ont prouvé imperméable à intravitale imagerie, une technique qui a révolutionné la compréhension des lymphocytes dynamiquementcs dans les ganglions lymphatiques périphériques. Jusqu'à ce que les barrières techniques limitant l'imagerie intravitale de PP sont surmontés, les protocoles décrits dans cet article pour la préparation PP préparations de cellules uniques pour l'analyse par cytométrie en flux et fonctionnelle et cryosections PP immunomarquage restera le principal moyen d'enquêter et de comprendre les fonctions immunologiques de certains sous -populations de cellules en SPA, les sites principaux inducteurs de l'intestin tissus lymphoïdes associés.\nNous remercions chanson Renjie (Wadsworth Center de base de cytométrie en flux) de l'aide pour l'analyse cellulaire et Helen Johnson (Wadsworth Center animale Histopathologie de base) pour la préparation de coupes en paraffine. Nous remercions le Dr Richard A. Cole (Wadsworth Center de base Light Microscopy) de l'aide pour la microscopie confocale et collection d'images. Nous tenons à remercier Andy Bentley (Wadsworth Center Photo et illustration) à l'aide d'animations.\nMDJ est soutenu par la Fondation Life Sciences Research, Howard Hughes Medical Institute (HHMI) Fellowship. SA est soutenu par un Wadsworth Center-Health Research Inc bourse de recherche postdoctorale intra-muros. Ce travail a été financé en partie par des subventions du NIH HD061916 et GM082978.


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L'ouvreuse - T'Aime\nD'autres ajoutent que cette même histoire prend une forme circulaire, le temps qui s'écoule ne pouvant se résumer qu'à une suite de cycles répétitifs, d'événements similaires, encore et toujours.\n"Mettons." (Moby Dick, Herman Melville).\nEn l'an de grâce 1955, un fameux acteur / auteur / homme du spectacle boucle son premier film en tant que metteur en scène. Son nom ? Charles Laughton. L’œuvre en question ? La Nuit Du Chasseur. Un échec cinglant qui met définitivement fin aux rêves de réalisateur de l'artiste, son premier essai devenant également... son seul et unique. Un film trop radical, trop différent, trop en avance sur son temps ? Toujours est-il que l'historien est en droit de se demander si, des siècles après, le public réagira de la même manière aux mêmes types d’œuvres peu anodines. Depuis, le Laughton est considéré comme ni plus ni moins qu'un chef-d’œuvre, et ceci, bien trop tard, forcément. Quarante-quatre ans après, c'est un autre homme du spectacle / acteur qui signe son premier "bébé", à l'aune du vingt-et-unième siècle. Le dénommé Patrick Sébastien. Son film ? T'Aime, un ovni totalement kamikaze. De nouveau, échec incontestable, fiasco des fiascos, mise au ban de l'artiste. De là à dire que tout se répète...\nCélèbre personnage du cube cathodique, guignol enfoui sous ses perruques et autres artifices d'imitation, schizo tiraillé entre son air mi-agaçant mi-attachant de grand enfant naïf et ses discours de rebelle criant à l'imposture d'un milieu, Patrick Sébastien peut se vanter d'être tout cela à la fois. Petit bonhomme (en mousse ?) dans sa tête, qui, chaque semaine, s'émerveille devant les acrobaties et les numéros de clowns, tout animé d'un éternel esprit de gosse, ou bien faux-cul sensationnel bassinant des millions de spectateurs à coups d'exécrables "Tout le monde il est beau, tout le monde il est gentil"(© Jean Yanne).\nLedit gus n'entre t-il pas dans les deux catégories, homme aussi sincère que prodigieusement gonflant ? Une fois posé le cas spécifique du témoin, restent les faits, madame la juge. Le présumé coupable décide, un beau jour, d'entrer dans la cour des grands, qu'importe la porte qu'il faudrait franchir avec fracas : peut-être lessivé par son jeu à l'antenne et motivé par d'immenses ambitions, il se lance dans la mise en place DU projet cinématographique du siècle. Et puisque personne ne semble le prendre au sérieux, et ce, malgré son passif notable d'acteur (chez Mocky, voir Le Pactole), le zoziau court manger à toutes les gamelles, afin de construire son Citizen Kane à lui.\nScénariste, dialoguiste, acteur, metteur en scène, c'est la formation du témoignage filmique de toute une vie qui débarque pour cet homme complexe, soit ce qui relève, en définitive, d'une pure auto-analyse psychiatrique. Tout comme Kane / Welles lui-même, Sébastien se terre dans son Xanadu…\n"Amazing!"(John Waters) (source inconnue)\nSubjugué autant que consterné par le film en question, le spectateur est comme pris en sandwich par deux impressions contradictoires, celle de voir en une même oeuvre un nanar hilarant comme on en voit tant, ou bien un véritable objet filmique non identifié, ahurissant et inédit. Soit c'est un cas extrême d'aliénation mentale, enfuit par mégarde de l'asile du cinéma français, soit c'est une monstruosité à la Frankenstein, dénué de toute notion de bon sens.\nL'histoire, déjà, relève de la folie, comme si Charles Manson ou Jeffrey Dammer en étaient les co-scénaristes. C'est lors d'une fête de village qu'un gus, un chouia handicapé mental - ce qui est affreusement clair à l'écran - seulement capable de bégayer le mot "T'aime", surprend en flagrant délit sa sœur, laquelle est en train de se livrer à... hum... disons... une petite séance particulièrement sauvage avec le Gérard - Marcel ? - du patelin, ce dernier ne lésinant pas sur les mots doux qui font tout le sel des plus grandes histoires d'amour ("T'aime ça, hein, salope", ce genre).\nTout émoustillé (dans un sens, c'est compréhensible) par ce qu'il vient de voir, le gogo déambule en pleine nuit, l'air ahuri, afin d'offrir à une belle fille de bourges une jolie poupée. Cette fille, c'est son amour de toujours, dès le premier regard. Quelques minutes plus tôt, un villageois lyrique lui a subtilement conseillé d'avoir des rapports sexuels avec l'objet en plastique. La sexualité dévorante n'a-t-elle aucune limite ? C'est là ce que semble annoncer l'auteur, hanté par l'esprit obsédé du psychanalyste Sigmund Freud, voir même par les fantasmes d’un Marquis de Sade dans sa représentation hargneuse de la Chair. Bref. Mais ne voilà-t-y pas que cet idiot du village - Shyamalan a tout plagié ! - face à la jeune fille, s'excite quelque peu, et commence à légèrement frapper et violer son amoureuse, reproduisant par là même la scène ) laquelle il a assisté auparavant. Mais sans le faire exprès, hein, c'est important. Un bon synopsis qui laisserait entrevoir un rape and revenge dans la plus pure tradition.\n"Ah ah ah… What da fuck?" (Bret Easton Ellis) (source inconnue)\nMais non ! Car Patrick Sébastien n'est pas un adepte du classicisme, si ce n'est par le biais d'une réalisation académique, reproduisant le statisme des téléfilms France 3 comme pour mieux atomiser les normes de l'intérieur, le visuel n'étant que pure façade face au contenu plutôt peu anodin. Un McTiernan francais (Rollerball), ou même un Verhoeven de chez nous, ce Sébastien ? La question mérite d’être posée. Ainsi, le docteur maboul est enfermé dans une sorte de mouroir pour dingues - déclaration d'amour à Vol Au Dessus D'Un Nid De Coucou ? - et quotidiennement maltraité par un sadique Jean-Francois Derek, tandis que la donzelle, de son côté encore traumatisée, est progressivement soignée par un docteur aux méthodes (vraiment, vraiment, vraiment) peu orthodoxes. Ce médecin, c'est Pat' en personne, ni plus ni moins, qui s'est attribué le rôle d'un gourou mystique hallucinant, lequel, pour guérir sa patiente, ne trouve qu'une solution : confronter la femme juvénile à son agresseur, chaque jour que Dieu fait, pour lui démontrer progressivement que ce détraqué mental est empli des meilleures intentions et de la plus grande affection, malgré la bave qui dégouline en permanence de ses lèvres humides. Ce fou, c'est l'amour de sa vie. Trop en dire serait alors sacrilège... (mais c'est déjà pas mal) Même après vision, il est encore difficile de cerner un film qui, dès les premiers instants, peut se targuer d’être une ode au pathétique, doté d’un sens du désespoir sartrien, d’une absurdité kafkaienne voir même d’un surréalisme bretonien…\nLove-story déglinguée, pamphlet d'une poésie particulièrement déviante, film d'horreur pur et dur empruntant aussi bien à Massacre A La Tronçonneuse (la "comédie" de Tobe Hooper) qu'à 2000 Maniacs de Herschell Gordon Lewis (les villageois sont des ploucs, des pervers, des tronches de foire aux monstres, et l’ambiance générale met autant mal à l’aise qu’un repas chez Leatherface), intense cri humaniste adressé à une humanité sur la corde raide, T'Aime est un film de déviant, suintant le glauque par tous les pores, et ce pour le grand plaisir de l’aventurier intrépide des pelloches maudites.\nFascinant d'assister à un tel spectacle, terrain de métaphores sorties d'un esprit dérangé ("L'amour est un épouvantail qui attire les oiseaux", message du film, et ce dès la première image) et aire de jeu de grands acteurs se suicidant artistiquement au fur et à mesure que la pellicule défile (Balmer, Girardot, Myriam Boyer). Patrick Sébastien se livre à un exorcisme d'une rare violence, ponctuant le film de ses monologues mégalos, s'étant octroyé les basques d'un fêlé dont les ambitions démesurées ("J'agis au nom de l'amour absolu !") font de l'idéologie scientologue un modèle de Raison. Ardu d’imaginer les réactions des bien-pensants de France 2 face à une œuvre si pleine de folie qu’elle contamine le bon goût du spectateur.\nCritique acerbe des communautés sectaires ou bien mise an avant des bienfaits d'une idéologie inquiétante ? Le spectateur ne sait pas, le cerveau peu à peu rongé par cette bombe sensorielle sans concession, où le morbide se mêle au rire gêné, la mort à la vie, l’orgasme au trépas (voir la "chute" finale dépressive). La condition humaine selon Patrick Sébastien se résume à un espoir passionné brisé dans l'os, à un idéal de bonheur massacré, à un désir impossible d'échappatoire. Chez Sébastien, ce monde est peuplé de tarés, et les seuls êtres heureux sont fous dès la naissance. D'un clip dégradant bercé par la voix de Patrick Fiori à des séquences d'une poisse dérangeante (un couple s'enlace devant le cadavre pendu d'un vieux fou noir chanteur de blues), des plus éculés clichés (l'image obsédante de l'oiseau, symbole d'amour, de grâce et de liberté) à la plus forte perversité (violence omniprésente, qui conclut, sans explication aucune, un film aux relents des Chiens De Paille), T'Aime est un coup de poignard dans la gorge, un trip à l'acide qui ne pouvait qu'être incompris par des journalistes déroutés comme jamais.\nSébastien prône les vraies valeurs, critique sans concessions le capitalisme (personnage matérialiste de Balmer), dénonce la superficialité d'un monde qui a perdu toute émotion au profit d'une certaine morale. Il signe là son Evangile, son Testament, le récit d'une race perdue pour toujours, destinée à la chute. Que ceux qui demeurent fascinés par sa Foi le suivent. C'est un voyage que propose l'homme. Un voyage sans début ni fin, seulement une route venue de nulle part. Avertissement aux curieux : T'Aime, définitivement, dépasse les mots. L’œuvre est complexe dans sa faculté à encourager aussi bien l’indignation que l’admiration, et il en faut peu pour sombrer dans la complète perplexité, face à cette idée du cinéma français tellement anti-conformiste malgré elle.\n"Ah non mais moi j’aime bien." (Pascal Vincent)\nL'affiche montre la frimousse joviale de l'animateur, collée auprès de la photo d'un neuneu déguisé en épouvantail. Si ce n'est pas de la schizophrénie... Le couple parfait, selon l'auteur, le voici : une traumatisée de la vie qu'on croirait revenue des expérimentations "médicinales" des camps nazis et un attardé mental qui mange des tartines et aborde une sourire en forme de croissant de lune. Indéfinissable. "On peut lire dans les mains des hommes, mais pas dans le cœur des femmes" prononce une Annie Girardot apparemment un peu sénile, tandis que dans un ultime jet d’agressivité, l’auteur / réalisateur / acteur est décrit, à travers son personnage, comme un "sale petit con d’humaniste de merde !". La boucle est bouclée, et c’est encore tout endolori que le cinéphile court prendre une douche, avaler ses calmants, et réciter à tue tête la maxime d’Eggar Allan Poe : "On a remarqué que tous les fous étaient philosophes et que tous les philosophes étaient fous."\nPS : T'Aime, contrairement à l'intégrale de Dolph Lundgren, n'a même pas connu l'honneur d'une sortie DVD, c'est dire. Mais il y a bien d'autres moyens de se le procurer... Réfléchissez.\nScénario : Patrick Sébastien\nProduction : France 2 Cinéma, Case Production et Studio Canal\nPhotographie : André Diot & Henri Habans\nBande originale : René Coll & Patrick Fiori\nSortie française : 26 avril 2000


Biens de Julien BEURET - OPEN HABITAT, Saint-Maurice-Colombier\nBiens de Julien BEURET\nRef. VA2442 : Venez vite découvrir ce spacieux appartement de 90M² avec sa situation privilégiée au DERNIER ETAGE dans un immeuble de caractère. Idéalement situé au coeur du vieux centre ville de Baume les Dames. Vous profiterez à proximité de tous les commerces et services nécessaires et d'un accès rapide à l'A36 en moins de 5 minutes. Vous trouverez au deuxième étage sur un premier niveau: - Entré...\nDuplex Baume-les-Dames 90 m²\nRef. VM2492 : Venez vite découvrir cet ensemble immobilier à rénover sur plus de 8 ares. Situé à 10mn de Rougemont et 10mn de l'A36, cet ensemble est composé de 3 parties. *Une maison à usage d'habitation d'environ 120M² avec en rez de chaussée : - Une cuisine de plus de 16M² - Une salle de bain de 7M² - Un wc indépendant - Une salle à manger de 20M² à l'étage, - Une chambre de 15M² - Une ch...\nRef. VM2238 : Venez vite découvrir cette ferme à rénover bénéficiant d'un gros potentiel. De grands volumes sont à disposition pour rénover cette maison à votre goût. Située dans un village au calme à 15mn de l'A36, 10mn de Rougemont, 20mn de Baume les Dames. Vous trouverez en rez de chaussée, - Une cuisine de 19M² - Une chambre de 20M² - Une pièce de 17M² Sur un second niveau, - Une pièce de 16M²...\nRef. VM2494 : Venez vite découvrir cette maison en pierre de 116M² posée sur un terrain de 8 ares. Idéalement située, vous bénéficierez d'un accès rapide à l'A36 en 10mn. (Rougemont se trouvant à 5mn et Baume les Dames à 15mn, A 5mn également, une boulangerie et un magasin de produits régionaux). Vous trouverez en rez de chaussée, - Une cuisine de 15M² à équiper - Un grand séjour de 40m² avec...\nRef. VM2420 : RARE !!! Venez vite découvrir cette maison individuelle à rénover de 95M² habitable de plain pied sur sous-sol. Posée sur un terrain de 1857M². Ce bien bénéficie d'un emplacement exceptionnelle sur les hauteurs de Clerval sans aucun vis vis. De nombreux commerces et services sont à votre disposition. Idéalement situé à 10mn de l'A36, 10mn de L'Isle sur le Doubs et 15mn de Bau...\nRef. VM2098 : Venez vite découvrir cette maison de ville partiellement rénovée en 2012. Disposant actuellement de 84M² habitable très lumineux, vous aurez possibilité de développer cette surface avec 63M² supplémentaire permettant la création éventuelle d'un 2ème appartement (gros oeuvre achevé). Situé à Rougemont, vous disposerez de nombreux commerces et services à proximité. Vous trouverez en sous-...\nMaison mitoyenne 2 côtés Rougemont Secteur Rougemont 84 m²\nRef. VM2144 : Venez vite découvrir cet ensemble immobilier à très fort potentiel. Il comprend une partie habitation sur plus de 160M² et un ancien local commercial sur 2 niveaux de plus de 100M² chacuns, un espace vierge où tout est possible. En complément, une surface de plus de 100M² d'un seul tenant en combles aménageables. Plusieurs possibilités d'aménagement s'offrent à vous (Loft, stockage, sall...\nRef. VM2324 : Venez vite découvrir cette maison individuelle de 137M² à rénover. Cette propriété dispose d'un très fort potentiel et d'un terrain de 2427M². Situé dans un village calme à 5mn de l'A36, 10mn de Baume les Dames et 10mn de Rougemont. Les différents niveaux sont désservis par un bel escalier, vous trouverez en rez de chaussée, - Une salle de bain de 7M² avec baignoire, douche et vasque...\nRef. VM2468 : Venez vite découvrir cet ensemble à rénover à très fort potentiel comprenant 2 bâtiments, un premier mitoyen sur la gauche bénéficiant d'une surface habitable de 140M² et un second de 170M² au sol permettant la réalisation de niveaux supplémentaires. Ces biens sont situés dans un agréable village en pleine expansion situé à 5 mn de l'A36, 10mn de Baume les Dames et 5mn de Rougemont. Les ...\nRef. VM2246 : Venez vite découvrir cette maison de ville de 138M², posée sur un terrain plat attenant de plus de 10 ares. Située dans un petit bourg à 10mn de l'A36, 15mn de Baume les Dames et 40mn de Besançon, vous disposerez sur place de toutes les commodités nécessaires (boulangerie, supérette, maison médicale...). Vous trouverez en rez de chaussée, - Un hall d'entrée de plus de 6M² - Une c...\nRef. VM2474 : Venez découvrir cette jolie maison individuelle de 51M² rénovée en 2020 avec une extension de 126M². Situation sans vis à vis dans secteur très calme, jardin agréable et spacieux. Maison de 51M² de plain pied sur sous-sol comprenant: - Une chambre de 11M² - Un bureau de 8M² - Un Séjour de 26M² - Une salle d'eau En rez de sol, - Une garage de 25M² - Une cave de 27M² Extension de ...\nRef. VI092 : Venez vite découvrir cet ensemble immobilier composé de 3 appartements rénovés entre 2005 et 2010 avec possibilité de créer 2 appartements supplémentaires sur une surface de plus de 200M² (gros oeuvre réalisé). Le tout posé sur un terrain de 18 ares 80 ca. Idéalement situé sur l'axe Baume - Rougemont, vous profiterez du calme de cette situation à 5mn de L'A36, moins de 10mn de Baum...\nRef. VI084 : Venez vite découvrir cette propriété exceptionnelle , disposant de près de 300M² habitable sur un terrain arboré d'environ 1 hectare et 42 ares. idéalement située à proximité d'une source dans la vallée du Cusancin sur l'axe Baume les Dames - Pontarlier. Vous trouverez sur 3 corps de bâti distincts, * Un bâtiment d'habitation disposant de 3 logements rénovés en 2012, comprenant: - Log...\nRef. VT300 : Venez vite découvrir ce terrain de 1510M² Situé dans un village calme sans vis à vis à 15mn de l'A36, 20mn de Baume les Dames, 20mn de Villersexel et 10mn de Rougemont. Une belle surface plane pour votre projet de construction. A viabiliser, réseaux à proximité et tout à l'égoût sur la commune. A découvrir sans tarder !


L’apprentissage change de look - Causeur\nHome Économie L’apprentissage change de look\nLa maison Maniatis incarne depuis 1974 une certaine idée de la haute coiffure française. Sa marque de fabrique ? La formation\nSéance de training dans le salon Maniatis de la rue de Sèvres (Paris 6e). Transmission du geste et d'un savoir-faire. ©Hannah Assouline\nLongtemps synonyme de filière pour cancres « dont il faut bien faire quelque chose », l’apprentissage séduit de plus en plus de jeunes dans tous les secteurs, et certains, comme la coiffure, en font même une formation d’excellence.\nDans Chacun pour toi, film réalisé par Jean-Michel Ribes en 1994, un vieux coiffeur (Jean Yanne) sauve du suicide un jeune type déphasé (Albert Dupontel). Ce dernier découvre que son bienfaiteur a été autrefois un virtuose de la coiffure et l’encourage à retrouver sa splendeur passée en participant à un concours international. Dire qu’il le remporte en exécutant une incroyable coiffure « Renaissance » inspirée d’un tableau qu’ils ont vu au Louvre n’est pas divulgâcher une histoire qui puise son intérêt dans le rapport qui unit ces deux hommes, une relation basée sur la transmission, celle du savoir et du regard.\nCette transmission est le fondement d’un savoir-faire « à la française » réputé dans le monde entier mais qui n’a pas, au contraire de la gastronomie, hystérisé les médias : la coiffure. Pourtant, il en va dans l’univers du cheveu comme dans celui de la restauration, il y a les bons et les mauvais, les hauts de gamme et les low cost. Et puis, un brushing réussi est nettement plus glamour qu’une toque.\nLa maison Maniatis incarne depuis 1974 une certaine idée de la haute coiffure française. Inventeur d’une technique absolument novatrice, celle de la coupe sur cheveux secs, Jean-Marc Maniatis comprend rapidement l’intérêt qu’il a à former ses propres coiffeurs. Outre un enseignement précis, ses apprentis s’approprient une part de l’aura du maître et gagnent en confiance. Celle-ci alimente leur passion du métier et la fierté de représenter l’excellence de la profession.\nLe succès est au rendez-vous et cette formation-transmission est devenue une marque de fabrique de la maison.\nAujourd’hui, le directeur opérationnel des salons et de la marque Maniatis Paris, Alexandre Protti, mise plus que jamais sur ces jeunes apprentis qui sont « passionnés, motivés et pleins d’énergie ». Et pour dynamiser davantage ses troupes, il a mis sur pied des séances de « training ». Une fois par mois environ, coiffeurs confirmés et apprentis en formation dans ses différents salons se retrouvent durant plusieurs heures, à l’issue de leur journée de travail, pour approfondir davantage la transmission de leur passion commune. Transmettre un savoir-faire, c’est ici aiguiser la mémoire du geste et du coup de ciseau, développer le sens artistique des futures recrues, leur capacité d’initiative mais aussi d’écoute, afin de comprendre au mieux le désir des clientes. Autour de chaque modèle venu se prêter au jeu – et bénéficier d’une coupe gratis ! – un apprenti et un « formateur ». Sous la lumière crue des spots, malgré un fond musical de rigueur et le vrombissement continu des sèche-cheveux, la concentration est totale, et la bonne humeur aussi. Les conseils s’échangent, les gestes sont repris, décomposés et détaillés pour maîtriser le fameux « mèche à mèche » ou les secrets d’une bonne coloration « qui change tout ». Alexandre Protti passe de l’un à l’autre, prodigue lui-même des conseils, manie le peigne, et s’émeut de cette complicité intergénérationnelle. « Certains ont vingt, trente, voire quarante ans de maison, dit-il avant de nous présenter Laura, elle est arrivée à 15 ans en tant qu’apprentie, a passé son brevet professionnel puis a été embauchée comme coiffeuse. À 30 ans, elle est aujourd’hui formatrice et transmet à son tour à des plus jeunes. » Ces trainings sont aussi une sorte de formation continue, une remise à niveau permanente : « Je suis coiffeur depuis cinq ans mais j’apprends toujours », lâche Jonas, appliqué à suivre la coupe qu’exécute son apprenti du jour. Pour Hector, 21 ans, en alternance chez Maniatis dans le cadre de son brevet professionnel, ces échanges entre coiffeurs de tous âges constituent un avantage qu’on ne trouverait pas ailleurs : « Ici, on apprend tout mais en mieux, on prend vraiment une avance que n’ont pas les autres, on gagne plein d’astuces. En plus, on arrive à se projeter dans l’avenir, on se sent concerné par la boîte. »\nAutour de chaque modèle, un apprenti et un formateur ©Hannah Assouline\nDe fait, quand on entre chez Maniatis, on y fait sa carrière. Rares sont les grandes enseignes de coiffure à pouvoir fidéliser aussi bien leurs clients que leurs employés. Même les fameux modèles de ces trainings du soir sont des habitués. « On les fidélise, s’en amuse Alexandre, elles viennent chez nous lorsqu’elles sont étudiantes en tant que modèles, et nous les retrouvons clientes lorsqu’elles entrent dans la vie professionnelle ! »\nLongtemps considéré comme une filière de seconde zone, l’apprentissage acquiert progressivement ses lettres de noblesse par le sérieux de la formation en alternance qu’il permet, et la motivation des jeunes qui en bénéficient. Les employeurs ont saisi le filon, et 2020 a battu un record historique avec plus de 500 000 contrats signés, dont 495 000 dans le secteur privé (principalement des TPE). Malgré la crise, l’apprentissage a ainsi connu une hausse de 40 % en un an. Un accroissement qui témoigne d’une réelle mobilisation des entreprises, encouragées il est vrai par l’État à recruter des apprentis dans le cadre du plan « 1 jeune, 1 solution ». Celui-ci prévoit notamment comme avantage une prime de 5 000 euros pour l’embauche d’un mineur et de 8 000 euros pour celle d’un majeur.\nLa nouveauté est aussi le profil de ces jeunes recrues, car elles sont de plus en plus nombreuses à avoir un niveau d’études supérieures : en 2020, elles étaient 22 % à avoir un niveau bac+2. Les chiffres publiés par le ministère du Travail révèlent une autre surprise : malgré les vagues de Covid et les conséquences que l’on connaît, l’embauche d’apprentis dans l’hôtellerie-restauration a progressé de 6 %.\nLes coiffeurs ne se poilent pas\nPrevious article Sleeping Giants contre Corsaires\nNext article Prises d’otage en VO et en VF


Que voir lors d'un voyage de deux semaines en Australie ? - Monde Authentique\nQue voir lors d’un voyage de deux semaines en Australie ?\nVous ne voulez rater aucun site incontournable de l’Australie ? Au minimum, passez 2 semaines sur cette sublime île aux nombreuses facettes ! Ainsi, vous pourrez exercer plusieurs activités à la fois passionnantes et amusantes : plongée sous-marine, balade à cheval, randonnée dans la forêt tropicale, survol de la grande barrière de corail, surf… De même, vous pourrez faire des découvertes insolites pour vivre des expériences inoubliables:\nL’Uluru ou la roche mythique au cœur du désert\nLes animaux mythiques : kangourous, wallabys, koalas…\nLes spots de surf et de plongée\nPour vous garantir un séjour inoubliable, faites appel à notre agence de voyages. Contrairement aux idées reçues, le tarif est de plus en plus attrayant. Un séjour all inclusive de deux semaines sera accessible à partir de 3 500 euros comprenant le vol international, quelques vols intérieurs, l’hébergement, les repas et quelques activités.\nL’Australie suscite l’intérêt de nombreux touristes ! Effectivement, c’est un pays continent sis entre l’océan Indien et le Pacifique Sud. On dirait que mère nature a vraiment gâté cet État que l’on peut considérer comme un petit paradis terrestre. Par ailleurs, vous pourrez y pratiquer divers types de sports et activités hors du commun pour perfectionner vos vacances en Australie. Les personnes de tout âge auront la chance d’y passer des vacances inoubliables. Il est impensable de s’embêter, quelle que soit la longueur de votre séjour. Son charme original et ses sites mythiques vont vous fasciner : la grande barrière de Corail, les spots de snorkeling et de plongée sous-marine, le désert, la forêt sauvage… Personne ne peut rester indifférent à son attrait, bordé par des plages intactes, offrant un paysage des plus impressionnants sur terre. Terre de contraste, c’est une destination ensoleillée parfaite pour les voyages en couple, en famille ou entre amis. Les amoureux de la nature tomberont sous le charme en découvrant une telle richesse naturelle. D’ailleurs, les visiteurs qui veulent pratiquer de l’exploration peuvent s’orienter vers les destinations originales !!! Pour conclure, on avoue que l’Australie a le potentiel nécessaire pour se mesurer aux plus belles destinations touristiques.\nVous envisagez de partir en Australie prochainement ? Pour rendre votre séjour exceptionnel, voici 10 lieux incontournables lors de votre voyage :\n2. Le parc naturel de Whitsunday : Fraser Island\n3. L’opéra de Sydney, le centre artistique le plus fréquenté en Australie\n4. Le Ningaloo Reef et ses nombreux lagons\n5. Le Blues Mountains National Park avec ses falaises spectaculaires, ses canyons et ses cascades\n6. Le Botanic Garden au Sydney qui abrite toute une diversité d’espèces végétales\n7. Le phare de Byron Bay et ses spots de surf légendaires\n8. La Tasmanie et sa forêt tropicale d’une beauté rare\n9. L’île de Lord Howe et ses petits coins paradisiaques\n10. L’Ayers Rock, la montagne sacrée des Aborigènes située au cœur du désert australien\nLa Tasmanie n’est pas qu’une zone protégée. Non ! C’est avant tout un lieu touristique bordé par l’océan Indien et la mer de Tasman. Le moyen de transport le plus pratique pour atteindre l’île est le Ferry. Sise au sud de Melbourne, elle possède de nombreuses plages idylliques. En outre, dans la forêt tropicale, les visiteurs peuvent également rencontrer une faune australienne riche et une végétation luxuriante. En outre, elle détient également plusieurs parcs impressionnants qui méritent un petit détour comme le Cradle Moutain National Park, le Tasman national Park ou le Freycinet National Park. Bref, pour faire des découvertes sensationnelles, pratiquez des randonnées pédestres dans les meilleurs sentiers de l’île…\nUne route mythique qui a une réputation mondiale relie la ville de Melbourne et d’Adelaïde. C’est le Great Ocean Road. Le meilleur moyen pour longer l’autoroute en toute tranquillité jusqu’au Kangaroo Island est le road-trip. Quoi qu’il en soit, le paysage est vraiment ahurissant : des plages paradisiaques, des falaises impressionnantes, des villes… Tout est parfait ! Avant de rejoindre votre chambre d’hôtel, finissez cette belle journée en faisant un arrêt aux 12 apôtres pour contempler le coucher du soleil sous un autre angle.


Steed Tchicamboud est satisfait\n1 septembre 2013, 15:10 par BasketActu\nAprès la victoire face à Bourg-en-Bresse en match amical, les Chalonnais se sont plutôt montrés satisfaits du résultat. « On a fait ce qu’il fallait. Les jeunes ont bien assuré. Mais notre fin de match est en demi-teinte. On s’est un peu trop reposé sur nos lauriers… Globalement, c’est très satisfaisant même si l’on manque encore de cohésion dans nos systèmes » a ainsi expliqué le meneur Steed Tchicamboud. Une position qui rejoint celle de Mickael Hay qui a précisé qu’il restait encore beaucoup de travail à faire pour que l’équipe soit prête.\nSénégal vs Côte d’Ivoire : L’action de la rencontre\nOrléans pense à un retour de Torrell Martin\nPour l’OLB, la reprise ne se fait pas sans coup dur. En effet, l’arrêt de Chris Hill a été confirmé obligeant Philippe Hervé et son staff à chercher un pigiste médical. Si la piste de l’ancien de la maison Torrell Martin est envisagée, rien ne dit qu’elle aboutira. « Le marché dictera notre choix » a ainsi précisé le technicien orléanais.\nL’Angola remporte l’Afrobasket\nCela devient un habitude…Encore une fois c’est l’Angola qui se retrouve sur la plus haute marche de l’Afrobasket. Cette année, Carlos Morais (21 points en finale) et ses coéquipiers sont venus à bout de l’Egypte sur le score de 57 à 40 pour remporter leur onzième titre continental. Les Angolais et les Egyptiens ont par ailleurs validé leur billet pour le Mondial 2014. Les Sénégalais se sont eux aussi qualifiés pour la compétition après avoir battu sur le fil la Côte d’Ivoire sur le fil 57 à 56 dans la petite finale.\nBasket Actu : Steed Tchicamboud à Roanne, Le mix Court Cuts du mois de janvier


Prendre soin du frère croisé sur le chemin\nVous êtes ici : AccueilSpiritualitéL'édito de Mgr Benoist de SinetyPrendre soin du frère croisé sur le chemin\nPrésentée par Mgr Benoist de Sinety UA-143334\njeudi 22 octobre à 7h55\nLes veillées d’automne en temps de couvre-feu sont sans doute plus lourdes que les jours de confinement du printemps passé. Pas seulement à cause du ciel plus gris et plus humide, mais parce que cette période de semi-liberté nous impose de regarder en face ce que nous préférions ne pas voir de trop près, nous réfugiant, pour les plus chanceux, dans une atmosphère de fête érigée en principe d’action.\nIl y a dans notre société deux catégories de citoyens ordinaires. Je ne parle ni des très riches ni des misérables, mais de la masse que nous formons entre ces deux extrêmes. Dans cette masse-là il y a ceux, peut-être 30%, qui se retrouvent plutôt bien, même s’ils n’ont pas très bonne conscience, dans cette logique festive, et qui font à grand peine le deuil des dîners de copains au resto et des bars sympas ou boire une bière et refaire le monde, entre une soirée au théâtre et une nocturne pour visiter une expo à la mode. Sortant du travail à 20h, ils peinent à découvrir que leur supermarché puisse fermer avant 23h et se replient sur les livraisons tardives, choisissant leur menu dans le Uber qui les ramène du bureau à leur domicile de centre-ville.\nEt puis, il y a les autres, tous les autres, qui ne vont pas au restaurant parce qu’ils n’en ont pas les moyens, ni au théâtre non plus d’ailleurs. Leur inquiétude, c’est que la fermeture de ces établissements ne les pousse vers le chômage, eux ou leurs enfants.\nDans ce même groupe, il y a aussi tous ceux qui vivent dans ces fameuses zones d’éducation prioritaire et qui se sentent, tous, globalement, abandonnés. On leur a construit des stades, on leur a payés des tas de choses jugées souvent épatantes depuis les bureaux où elles avaient été pensées. "Ça a coûté un pognon de dingue", comme le dit la formule consacrée : mais a-t-on jamais pensé à leur dire qu’ils étaient utiles, qu’on avait besoin d’eux ?\nComme des parents qui, un jour, se retrouvent stupéfaits devant l’ingratitude d’un enfant qui claque la porte "après tout ce qu’on a fait pour lui, tout l’argent qu’on a dépensé pour lui, sans refuser aucun caprice…" mais à qui on n’a sans doute jamais su dire qu’on l’aimait pour ce qu’il est.\nNous vivons les uns à côté des autres, chacun "dans son silo", comme le dit l’expression du moment. Hier, traversant le boulevard au milieu d’une circulation chaotique, un homme à moitié nu, le regard perdu, les yeux emplis de larmes, semblait ne plus rien voir. Devant moi, un motocycliste s’arrête, range son scooter, le rejoint, lui prend le bras et sans un mot le ramène sur le trottoir. Comme le prêtre de la parabole, je continuais mon chemin, trop occupé par les affaires urgentes. Mais au fond de mon cœur, ému d’avoir bénéficié de ce témoignage d’une humanité trop rare, je priais pour que le malheureux soit conduit dans l’auberge où l’on prendra soin de lui.\nUne phrase habite depuis lors ma conscience. Une phrase, ou plutôt une question : "Qu’y a-t-il de plus urgent que de prendre soin du frère croisé et qui a besoin de toi ?" La charité n’est-elle pas le premier devoir, le devoir d’état de tout baptisé ? La charité qui consiste d’abord à ne pas nous ranger les uns les autres dans des boîtes hermétiques en faisant par exemple de tout collégien de banlieue un terroriste en puissance, de tout arabe un voleur, de tout chômeur un incapable, de tout policier un fasciste, de tout noir un envahisseur, et même… de tout blanc un bon chrétien.\nAu milieu de la fureur de ce temps, plutôt que les pétitions de principe et les déclarations martiales, si, chacun à notre niveau, nous nous décidions à poser plus d’actes d’amour en chacun de nos jours ? Avons-nous si peu de foi pour ne pas être certain que ce serait là le meilleur moyen de faire advenir ce monde nouveau dont nos églises chaque dimanche annoncent la venue ?\nMgr Benoist de Sinety rend hommage à un jeune Soud...


Meilleur lampe d'allée solaire - Home Lighting Replica\nHomeMeilleur lampe d'allée solaire\nMeilleur lampe d’allée solaire\nVoici nos conseils pour le lampe d’allée solaire de 2021\nQuelle est la meilleure façon d’acheter le lampe d’allée solaire\nÊtes-vous prêt à acheter un lampe d’allée solaire pour vous-même? Ce processus d’achat vous fait-il tourner la tête? Si tel est le cas, nous savons exactement ce que vous ressentez. Nous avons vécu tout le processus et compilé une liste des lampe d’allée solaire les mieux notés qui sont actuellement en vogue sur le marché. Parallèlement à ces produits, nous avons également répondu à certaines des nombreuses questions qui vous ont peut-être traversé l’esprit avant d’effectuer un achat. Comprenons ces questions:\nQuels sont les avantages du lampe d’allée solaire?\nVaut-il la peine d’investir dans un lampe d’allée solaire ces jours-ci?\nQuels facteurs devriez-vous considérer avant d’acheter un lampe d’allée solaire?\nQu’est-ce qui rend l’achat du lampe d’allée solaire si important?\nQuels sont les meilleurs lampe d’allée solaire sur le marché aujourd’hui?\nOù pouvez-vous obtenir toutes les informations pertinentes sur lampe d’allée solaire? Oui, vous avez bien entendu – vous pouvez tout obtenir en ligne et hors ligne à partir de diverses sources. Cela peut inclure tout, mais sans s’y limiter, les avis clients, le bouche à oreille, les forums de consommateurs en ligne, les guides d’achat, les sites d’avis clients, etc. Ces sources étancheront votre soif. L’art consiste à choisir des sources 100% réelles et authentiques lors de l’avancement de votre processus de recherche. La fiabilité et un site Web digne de confiance vous fourniront les informations les plus récentes et les plus précises.\nNous pouvons également étancher votre soif – et comment? Nous avons un guide d’achat des meilleurs lampe d’allée solaire disponible sur le marché 2020. Nos informations sont vérifiées et vérifiées par des plateformes de données et de correction AI pour les autorités Big Data. La question suivante est de savoir comment avons-nous créé ce guide d’achat? Nous disposons d’un ensemble d’algorithmes technologiques de conception unique basés sur les facteurs suivants:\nPrevious articleMeilleur lampe beton look\nNext articleMeilleur lustre lampe marocaine\nMeilleur lampe hubsch noire\nMeilleur lampe torche 1950\nMeilleur lampe en verre de biot\nMeilleur suspension en rotin kapela\nMeilleur quand passer la visite medicale suspension permis\nMeilleur lustre vertigo diy\nMeilleur pipistrello lampe klein


Les fruits et légumes s’abîment vite et ne restent pas beaux longtemps : frigo ou pas frigo ? Comment éviter l’oxydation ? Il existe quelques petites astuces pour conserver fruits et légumes plus longtemps et, ainsi, éviter de les jeter.\nNos conseils pour éviter que les fruits s’abîment trop vite\nSéparer les fruits et les légumes\nBananes et pommes sont de grands producteurs d’éthylène, qui abîment vite les autres fruits et légumes. Ainsi, si vous mélangez pommes et bananes dans votre corbeille de fruits, vos bananes vont mûrir puis pourrir à grande vitesse.\nConserver vos fruits avec du liège\nLe liège absorbe l’humidité trop abondante des fruits et des légumes. Il permet aux fruits de ne pas mûrir et pourrir trop vite. Le liège repousse de plus les moucherons qui détestent son odeur.\nTourner les fruits du bon côté\nPour bien conserver vos pommes et poires, il faut toujours placer les pommes « à l’envers » (c’est à dire avec la queue vers le bas) et les poires « à l’endroit » (c’est à dire la queue vers le haut). Cela empêche leur acidité de prendre le dessus, retardant ainsi la maturation du fruit.\nEmballez les queues des bananes\nSéparer les bananes et enrouler de film plastique chacune des queues permet d’allonger leur durée de vie de 4 à 5 jours. Pensez à bien serrer le film autour des queues, plus c’est serré, mieux c’est!\nConserver des tomates bien fraîches\nNe mettez pas vos tomates mûres au réfrigérateur, le froid tue leurs arômes. Conservez-les tiges en haut, à température ambiante, pas trop serrées et sans autres fruits.\nPour les tomates encore vertes, et qu’il faut au contraire faire mûrir, placez-les dans un endroit frais, pédoncule en bas. Elles mûriront plus vite si vous mettez une pomme parmi elles.\nCouper les feuilles de vos légumes\nCarottes, radis et compagnie n’ont pas besoin de leurs feuilles pour être mieux conservés. Au contraire, les feuillages entraînent la déshydratation des légumes. Coupez donc les feuilles avant de mettre les légumes au réfrigérateur !\nConserver la salade fraîche et croquante\nLavez et essorez votre salade. Puis glissez la dans un grand sac congélation hermétique que vous refermerez avec un film plastique. Déposez une serviette en papier ou un essuie-tout dans le sac avant de refermer hermétiquement. Le papier retiendra l’humidité et conservera sa fraîcheur à la salade.


Les séjours pour enfants - Communauté de Communes Sud Hérault\nAccueil > Enfance jeunesse et Famille > Enfance > Les séjours pour enfants\nDes séjours sont proposés durant certaines périodes de vacances scolaires. Les modalités d’inscriptions sont identiques à celles des ALSH. Ces séjours sont organisés par tranche d’âge (6-8 ans et 9-11 ans) afin d’être le plus proche possible des capacités et envies des enfants.\nLes thématiques proposées sont diverses et variées et portent les valeurs fortes de la Communauté de Communes :\nLe développement de l’autonomie et de la responsabilisation,\nL’apprentissage de la vie en société et de la citoyenneté.\nChaque séjour fait l’objet d’un projet pédagogique avec des objectifs qui lui sont propres. C’est l’occasion pour les enfants d’être entre eux, sans leurs parents, pour souvent vivre une de leur première expérience loin du foyer familial.\nAinsi, les enfants sont encadrés par des animateurs diplômés avec qui ils vont vivre de nouvelles expériences de vie en collectivité. Les moments de vie quotidienne (se laver, manger, s’habiller, ranger ses affaires…) font partie des préoccupations majeures des animateurs.\nCes séjours sont l’occasion de découvrir des lieux inédits, de pratiquer des activités sportives (variées mais surtout nouvelles pour beaucoup d’enfants), ainsi que d’autres activités comme des balades, des baignades, des créations d’objets, des visites de lieux culturels ainsi que la participation à des veillées dont les activités sont adaptés à cette période spécifique de la journée.\nC’est aussi l’occasion pour les enfants de se reposer, de vivre des moments sans contraintes particulières pour que chacun puisse être à son propre rythme et non à celui de la vie en collectivité.\nTél : 04.67.93.52.17 (administration)\nDIGITAL Livret 8p Alsh Ete2021\t2,39 Mo, pdf


Avantage de photographie corporate – information active et interactive avec Pascal Cointreau\nLa photographie d’entreprise est tout type de photographie (ou de vidéographie) utilisé pour promouvoir la marque, les produits et les services d’une entreprise. Les sociétés emploient aussi la photographie et la vidéo de l’entreprise pour enregistrer les événements sociaux et instaurer du contenu visuel pour les newsletters internes, les rapports trimestriels et des supports marketing. Quels sont les avantages de ce processus publicitaire pour les entreprises ? Lisez cet article pour en savoir plus.\nAmélioration de l’image de votre marque\nAfin de maintenir l’image de marque et de faire croire aux clients qu’elle est plus crédible, la photographie corporate est de nos jours nécessaire. En fait, cela pourrait mieux informer sur votre marque et sur vos activités que les paroles ou les arguments que vous pourrez utiliser pour les persuader. Afin de faire ressortir toutes les qualités, vous devez travailler avec un photographe corporate vraiment compétent. Si vous souhaitez améliorer l’image du bâtiment grâce à la photographie d’entreprise, vous pouvez choisir Gabriel GORGI photographe corporate spécialisé « headshot » à Paris.\nImaginez tous les problèmes que vous avez rencontrés pour attirer les clients ? Il est temps de les garder pour les empêcher d’aller vers vos concurrents. Avec la photographie d’entreprise, les clients peuvent déjà avoir une compréhension préliminaire du sérieux de votre entreprise, du degré d’accueil au sein de l’entreprise et même de la qualité des produits ou services que vous leur fournissez.\nEntretenir l’image de vos travailleurs\nContrairement à la croyance de la plupart des entreprises, l’image de vos employés est essentielle dans le succès de votre entreprise. En fait, c’est avec votre personnel de travail que les clients auront la plupart à fréquenter. Par conséquent, quand vous entretenez l’image de vos collaborateurs, cela rassurera vos clients. Si les clients apprécient l’impression que vous donnez aux employés, ils n’hésiteront pas à solliciter votre service. De cette manière, votre entreprise pourra attirer plus de clients.\nAttirer de nouveaux employés talentueux\nÀ travers l’image de vos salariés véhiculée dans les photos et vidéos d’entreprise, vous aurez un impact positif sur de nouveaux employés talentueux qui étaient autrefois difficiles à convaincre. Un employé qui voit à travers l’image d’un autre employé tout le sérieux de votre société aura certainement envie de faire partie de votre personnel de travail.\nAttirez plus facilement les investisseurs sur les réseaux sociaux\nGrâce à la photographie d’entreprise, vous pouvez également publier sur les réseaux sociaux professionnels (comme LinkedIn), une photo de vous qui reflète tout le sérieux de votre entreprise. En effet, il faut noter que si votre photo de profil n’est pas attractive, aucun investisseur n’osera en savoir quelque chose sur vous. En effet, selon « Welcome to the Jungle », les profils LinkedIn avec photos sont plus susceptibles d’être visionnés 14 fois que les profils sans photos.\nMontrez la valeur de votre entreprise\nPar exemple, lorsque vous prenez une photo de groupe de tous les employés, cela permet à vos clients de voir l’esprit de travail d’équipe qui se répand dans votre entreprise, ce qui est très utile pour l’image de votre entreprise. Ces conseils ajoutent de la valeur à votre entreprise.\n« Réduction des embouteillages à Moscou : le nouveau métro espoir de toute une ville\nPourquoi poursuivre des études supérieures ? »


Soirée à la Suite Gourmande no 2 - Mamans Avec Opinions\nAccueil Activités Soirée à la Suite Gourmande no 2\nSoirée à la Suite Gourmande no 2\nPartager la publication "Soirée à la Suite Gourmande no 2"\nDes découvertes culinaires pour tous les goûts !\nLa semaine dernière, j’ai eu le plaisir d’être invité à visiter la Suite Gourmande no 2 et je dois vous avouer que ce fut une expérience enrichissante pour l’amateur de cuisine en moi!\nSuite Gourmande, qu’est-ce que c’est?\nOrganisée par NATA, une compagnie de relations publiques, la Suite Gourmande est un mini-salon où des artisans, des producteurs et des distributeurs de produits de la table viennent nous présenter leurs produits. Cette fois-ci, une dizaine d’exposants nous attendaient dans un local à l’atmosphère conviviale et chaleureuse.\nLes Exposants à la Suite Gourmande no 2\n1- Tout d’abord, nous avons visité les charcuteries duBreton qui nous ont présenté un bacon et du jambon biologiques et sans nitrites.\nLa représentante m’a parlé de ses produits, m’a expliqué que les animaux provenaient d’éleveurs exclusifs contrôlés par l’entreprise afin de s’assurer de la qualité et des standards demandés par le producteur.\nLe gout était excellent, et le prix bien dans la moyenne des prix de produits biologiques. Pour plus de détails, visitez le site Internet de l’entreprise.\n2-Un de mes coups de cœur découvert à la table gourmande, c’est le vin rosé Cantini (offert en épicerie pour seulement 9,99$). Il est également disponible en rouge et en blanc, mais pour la saison estivale, un bon rosé sur le bord de la piscine, ça se prend très bien.\n3- Ma conjointe Karine et moi avons découvert les thés glacés Elikxir Kombucha, qui nous ont offert quatre saveurs de thés biologiques faibles en calorie au goût assez intéressant et rafraîchissant: racinette, gingembre, lavande et orange cardamome.\n4- Par la suite, nous avons visité un vieil ami, et ses machines à espresso Caffitaly, qui m’a fait retomber en amour avec ma machine à café et me démontrant un tas de nouvelles façons de l’utiliser. Pour lire mon article sur le sujet, cliquez ici.\nPour plus de détails sur les machines à espresso Caffitaly, visitez le site Internet de l’entreprise.\n5- Le Marché Goodfood était aussi présent pour nous annoncer son entrée en bourse. Pour ceux qui n’ont pas toujours le temps de faire l’épicerie, qui se retrouvent en panne d’inspiration quand vient le temps de planifier les repas ou qui n’ont aucune aptitude culinaire, Marché Goodfood offre une grande variété de repas que vous pouvez cuisiner à la maison à un prix très raisonnable.\n6- Exposant quatre produits à la Suite Gourmande, la compagnie de vins et spiritueux BellaVita nous a proposé de revisiter l’absinthe, une boisson inspirée du 19e siècle qui goûtait comme un bonbon, mais qui renfermait 53% d’alcool (nous l’avons bue diluée). Nous avons également goûté à un gin et à un rhum.\n7- Pour sa part, François Chartier, producteur de vin, nous a proposé deux grands crus : le fronsac et le rosé. Pour les amateurs de vin, je vous invite à visiter ce site.\n8- Et finalement, ma plus belle découverte, celle qui a fait ma soirée : l’huile de Caméline offerte par la compagnie Oliméga. Une huile qui va remplacer l’huile d’olive dans ma cuisine grâce à son goût léger, ses omégas 3, 6 et 9 et surtout grâce au fait que c’est un produit d’ici fabriqué par le producteur de cette jolie fleur jaune.\nAvec un point de fumée de 475 degrés ̊F (100 degrés de plus que l’huile d’olive), elle est parfaite pour la cuisson de viandes, et son goût parfumé rehausse à merveille les vinaigrettes.\nCe fut une superbe soirée, pleine de découvertes, et j’ai très hâte d’être invité à la prochaine Suite Gourmande. Merci beaucoup à NATA relation publique de m’avoir invité et à tous les exposants de nous avoir si bien accueillis.\nPour lire mes autres articles sur le blogue Papas avec opinions, cliquez ici.\nSuite Gourmande no 2


Le Conseil du patronat récidive dans sa charge contre les régions en s'appuyant sur une étude sur la prospérité qu'il a menée et qui démontre que l'Est du Québec est la région où il s'est créé le moins d'entreprises de 2001 à 2010. Il établit un ratio de 7,9 entreprises créées par 1000 habitants au Bas-Saint-Laurent contre 14 pour l'ensemble du Québec. Ce fait est d'emblée questionnable puisqu'il ne considère que les entreprises dites manufacturières. C'est toutefois ce que le Conseil en déduit qui est réducteur: Devant ces chiffres, les auteurs de l'étude parlent d'un potentiel entrepreneurial non exploité dans plusieurs régions du Québec. Donc, s'il se crée moins d'entreprises manufacturières au Bas-St-Laurent, c'est parce que les gens y sont moins entreprenants. On oublie toutes les variables contextuelles, les effets des politiques publiques, les caractéristiques des régions, le phénomène centre-périphérie. Non: légitimé en cela par l'individualisme méthodologique, le Conseil du patronat décrète que la cause en est que les individus n'exploitent pas leur potentiel entrepreneurial. Parions que la phase 2 de ce discours consistera à suggérer d'abolir les cours de philo (qui apprennent à réfléchir avant l'action) pour les remplacer par des cours d'entreprenariat (qui mobilisent l'action).\nBien sûr, nous pouvons utiliser les méthodes et les approches qui nous conviennent pour interpréter les phénomènes sociaux. Mais la rigueur impose toutefois certaines nuances, ce dont semble incapable le Conseil du patronat.(source de la photo de Yves-Thomas Dorval, PDG du Conseil du patronat).\nabécédaire méthodologie. Conseil du patronat


Mélie Grey: Confess de Colleen Hoover\nJ'avais choisi ce roman, le jour de sa sortie, pour son auteure. Colleen Hoover écrit d'une manière que j'adore vraiment donc je me suis lancée dans cette lecture sans savoir à quoi m'attendre. Et autant dire que j'ai été bluffée, j'ai juste adoré l'histoire !\nOn découvre l'histoire de Auburn, une jeune femme qui a perdu son amour de jeunesse à quinze ans à cause d'une maladie. Pour autant elle ne s'est pas laissée abattre, même on sent bien qu'elle aime toujours Adam. Elle vient de déménager à Dallas alors qu'elle vivait à Portland, même si on ne découvre pas tout de suite la raison pour laquelle elle a quitté sa ville d'origine. Elle va rencontrer Owen par hasard et va être fascinée par lui, même si elle ne le connait presque pas. Ils vont commencer à se voir même si dès le début leur histoire va être entravée et notamment par Trey, le beau-frère de Auburn, grand frère de Adam.\nAuburn est une jeune femme très secrète. D'ailleurs elle cache quelque chose que l'on ne découvre qu'au milieu voire plus loin, du roman et qui nous prend par surprise. J'ai adoré ce personnage, elle est juste top. Par amour elle est prête à faire beaucoup de choses et notamment un travail que pourtant elle déteste. On ne comprend pas tout de suite pourquoi elle est revenue à Dallas puisque la dernière fois qu'elle y était ce fut pour voir son petit ami mourant à l'hôpital, mais une fois que c'est expliqué, j'ai juste été bluffée. Elle est entourée par des gens qui la font se sentir vraiment mal mais pour autant elle continue d'avancer, avec un objectif bien en tête, qu'Owen va venir quelque peu contrecarrer.\nOwen a un passé aussi lourd voire plus qu'Auburn. Il a perdu sa mère et son frère dans un accident de voiture alors qu'il conduisait. Cela a détruit son père, un grand avocat, et Owen doit sans cesse le tirer d'affaire. Il est peintre et il est vraiment doué, il a un principe c'est qu'il récolte des 'confessions' de personnes et il peint et associe une confession à chaque toile. Et j'ai trouvé ce principe juste génial. D'ailleurs il y a des peintures au sein du roman, on peut donc en voir plusieurs au cours de la lecture, ce que j'ai trouvé juste génial.\nL'écriture de l'auteure est juste géniale, descriptive et elle permet vraiment de plonger dans l'histoire. Ce roman se lit sans que l'on voit les pages passer. L'histoire est passionnante et intrigante. J'ai eu beaucoup de mal à fermer le livre pour aller dormir tellement je voulais savoir tout ce qu'il s'était passé et tout ce qu'il allait se passer. Je suis passé du rire aux larmes, comme souvent dans un Colleen Hoover et j'ai aussi éprouvé une forte colère et une grande crainte en présence de Trey, qui est un vrai con, il faut bien l'avouer (même si ce n'est pas trop gentil de dire cela... mais quand même !!).\nEn bref, un vrai coup de coeur pour cette histoire juste géniale !! Colleen Hoover a encore réussi à me transporter dans son univers que j'adore. Je le recommande il est génialement top !\nFeathersandbooks 12 avril 2016 à 22:01\nColleen Hoover, je fais tellement confiance à cette auteure! En tout cas j'ai hâte de le lire :)\nMélie Grey 12 avril 2016 à 22:14\nColleen Hoover écrit tellement bien ^^ Et ses romans sont juste top :) J'espère qu'il te plaira !!\nMi-Hi 13 avril 2016 à 15:50\nEt dire que je n'ai encore rien lu de cette auteure... En tout cas, j'entends beaucoup parler d'elle (et plus particulièrement de son livre Confess) en bien, et tu confirmes ça, alors si j'en ai l'occasion, je le lirais bien ses livres. :-)\nCette auteure tu peux y aller les yeux fermés ^^ Et Confess est juste génial !!\nFifty Shades Darker 13 avril 2016 à 20:28\nMais il est tellement génial celui-ci encore un Colleen Hoover quoi :D Bref, j'ai hate de lire un prochain roman d'elle ♥\nMélie Grey 14 avril 2016 à 17:16\nOui !!! Me too :)


Pack Ocean Duo - kayak rigide 2 places - Kayak rigide\nRéférence : 140201\nDimensions: 370 x 88 x 33 cm\nCapacité: 2 + 1 enfant\nPack Rotomod Ocean Duo Soleil\nUn kayak tout équipé prêt à l'emploi\nRéférence des kayaks sit on top rigides, l'Ocean Duo est le bateau le plus polyvalent qui soit. Autovideur, pratique, confortable, robuste et sûr, il s'utilise seul, à 2 ou à 3. Idéal pour la famille, ce kayak sera votre compagnon parfait de la ballade au surf, en mer comme en rivière.\nLe pack est livré avec 2 sièges Luxe et 2 pagaies asymétriques démontables noires. Il est complet pour le mettre en eau et en profiter immédiatement! c'est un véritable bateau passe partout, que ce soit en bord de mer, dans les vagues ou en rivière. Il est très simple d'utilisation, maniable dans la direction tout en restant extrêmement stable dans les eaux difficiles.\nLa kayak Ocean Duo peut désormais évoluer au delà des 300m, suite à la modification de l'arrêté du 28 avril 2014, et jusqu'à 2 milles d'un abri (sans être immatriculé mais avec la dotation basique de matériel de sécurité) ou jusqu'à 6 milles (Kayak immatriculé et avec la dotation côtière de matériel de sécurité).\n3 espaces de rangement (sac, bidon)\n2 sièges luxe\n2 pagaies asymétriques démontables noires