L'utopie a-t-elle de l'avenir ? - 29/07/2017 - La Nouvelle République France-Monde\nDe Thomas More aux “ écolieux ”, la vision d’un monde plus beau et plus juste a toujours accompagné nos vies. De quoi se nourrit-elle ? Faut-il tenter de la réaliser ? Est-ce que ça marche ?\nPlaton est le premier à avoir conçu – en théorie – une cité idéale, dirigée non par des politiques et des généraux, mais par des philosophes. C'est Thomas More, historien, théologien et homme politique, qui popularise l'idée d'« utopie », avec son Utopia (1516), satire du système de gouvernement de son époque. L'utopie est en effet à l'origine un style littéraire dont la fonction est double : dénoncer l'état de choses existant et imaginer une société meilleure.\nLe goût de la communauté\nElle est à la fois constat d'un manque et mouvement créateur des pulsions de vie qui poussent à inventer un ailleurs sans défaut. Après Thomas More, c'est Rabelais, qui, dans son Gargantua (1534), conçoit l'abbaye de Thélème, dont la maxime est « Fais ce que voudras », et dont les résidents n'ont d'autres devoirs que boire, manger, chanter. Ils n'ont nul besoin de chef : leur instinct les rend capables de s'autogouverner.\nOn aimerait tous trouver des solutions pour que les gens aient, au moins, une existence décente. Au XIXe et au XXe siècle, l'essor des sciences et des techniques permet de bâtir des murs derrière lesquels s'élèveront nos chères utopies. Avec ses « phalanstères », lieux de vie collectifs, Charles Fourier entend édifier un « nouveau monde amoureux », réconcilier les deux sexes et éliminer les impasses du désir et de l'amour. La communauté d'Oneida, fondée en 1848 par John Humphrey Noyes dans l'État de New York, invente le mariage à plusieurs pour éradiquer les germes de la jalousie, propre à la vie de couple traditionnelle. Saint-Simon (1760-1825), économiste et philosophe, pose les bases du « socialisme utopique » qui influence Karl Marx. Au XXe siècle, dans les années 1960-1970, les communautés libertaires ou spirituelles se multiplient. Elles trouvent aujourd'hui leur prolongement dans les « écolieux ».\nUn idéal consolateur\nL'être humain appartient à l'espèce la plus imaginative qui soit. Nourrisson, quand il a faim, soif, peur, il est d'emblée capable d'halluciner le « bon sein » réconfortant. « Maîtresse d'erreur et de fausseté » pour Pascal, « folle du logis » pour Malebranche, notre imagination nous rend pourtant capables de concevoir des solutions à nos problèmes existentiels. Et nous console en nous projetant vers des lendemains enchanteurs. Pour le psychanalyste Olivier Douville, le constat précoce des injustices sociales (« le riche qui fraude impunément le fisc, quand le pauvre qui vole un litre de lait pour se nourrir est emprisonné ») est le moteur de la construction d'utopies. Et c'est à l'adolescence, période où l'on a besoin d'idéaux forts, que l'on est le plus sensibles aux utopies, surtout quand elles font appel à la compassion, à l'envie de réparer l'autre.\n« Dès que nous vivons ensemble, des hiérarchies apparaissent et, par là, des inégalités. La vie en société exacerbe l'envie : l'autre n'est-il pas plus heureux ? N'est-il pas mieux loti que moi ? Le rapport à l'autre est, par nature, ambivalent, analyse Freud dans Malaise dans la civilisation [Payot] : j'ai besoin de mon semblable pour survivre et, simultanément, il entrave ma liberté, ma jouissance. » Ce sont ces inégalités que veulent gommer les promoteurs d'utopies.\nLe Lalande, dictionnaire de philosophie qui fait autorité, définit l'utopie comme « un idéal politique ou social séduisant mais irréalisable, dans lequel on ne tient pas compte des faits réels, de la nature de l'homme et des conditions de la vie ». Effectivement, pratiquement toutes les utopies, les communautés tentant de donner corps à une société plus fraternelle, ont échoué.\nLe rôle des visionnaires\nElles se sont dissoutes, se sont isolées derrière des murailles, voire ont viré à la barbarie. La Chine de Mao aura l'ambition de faire éclore « cent fleurs » qui embelliront la vie des masses. On connaît la suite : les jardiniers seront souvent relégués en prison ou pendus. De même qu'atterriront au goulag nombre de bons citoyens du pays du « socialisme réel », l'URSS. Les utopies réalisées finissent mal, en général…\ndes vérités prématurées\n> « A nier les tendances profondément antisociales de l'humain, la pulsion de mort, l'agressivité, on court à l'échec », affirme le psychanalyste Olivier Douville. « L'obligation de s'aimer les uns les autres, le devoir d'être heureux, le déni des différences débouchent forcément sur des totalitarismes. »\n> Le bonheur pour tous, le « Fais ce qui te plaît », érigés en impératif catégorique, en obligation, ne peuvent que mener au malheur. Faut-il pour autant rejeter tous les grands idéaux, tous nos rêves d'améliorer l'existence ? « Pas du tout, à condition de penser suffisamment les théories que l'on veut faire passer, de se méfier des absolus, de ne jamais perdre de vue que chaque être, chaque désir est singulier et de ne pas étouffer le " je " sous le " nous " », estime le psychanalyste.\n> « Les utopies ne sont souvent que des vérités prématurées », affirme Lamartine. Les grands rêveurs sont souvent aussi des visionnaires, dont la passion contagieuse peut finalement contribuer à l'amélioration de la société. Les idéaux fouriéristes ont probablement permis de repenser la vie amoureuse, l'égalité hommes/femmes.\nIsabelle Taubes en partenariat avec Psychologies (wwwpsychologies.com)\nVous êtes ici : Actualité > Santé > L'utopie a-t-elle de l'avenir ?


Icon Hotel Istanbul | Avec l'tur, réservez maintenant vos Vacances Dernière Minute dans les plus beaux hôtels!\nCet hôtel de charme est situé à New City. Situé à 1000 mètre(s) du centre-ville, le logement permet d'accéder facilement à tous les sites d'intérêt de cette destination. Les voyageurs aimeront la proximité de l'établissement avec les principaux lieux de divertissement. Les clients peuvent facilement accéder à pied au réseau de transports en commun. Les voyageurs pourront trouver l'aéroport à 20. 0 kilomètre(s). Le logement est situé à 3. 0 kilomètre(s) du port. Ce logement offre un total de 65 ...Plus\nCet hôtel de charme est situé à New City. Situé à 1000 mètre(s) du centre-ville, le logement permet d'accéder facilement à tous les sites d'intérêt de cette destination. Les voyageurs aimeront la proximité de l'établissement avec les principaux lieux de divertissement. Les clients peuvent facilement accéder à pied au réseau de transports en commun. Les voyageurs pourront trouver l'aéroport à 20. 0 kilomètre(s). Le logement est situé à 3. 0 kilomètre(s) du port. Ce logement offre un total de 65 chambres. Les voyageurs pourront rester connectés grâce à l'accès Internet et Wi-Fi disponible dans les parties communes. Les chambres disposent également de l'accès Wi-Fi. Les clients séjournant dans cet établissement Les clients peuvent profiter d'une réception ouverte 24 heures sur 24. Les plus petits pourront profiter des lits d'appoint adaptés à leur âge (disponibles sur demande). Toutes les chambres de cet établissement adapté aux personnes à mobilité réduite sont accessibles en fauteuils roulants. Les personnes n'appréciant pas la compagnie des animaux pourront profiter pleinement de leur séjour, les animaux de compagnie étant interdits dans cet établissement. Ce logement dispose d'un parking et d'un garage pour le plus grand confort des clients. Un service de transfert est à la disposition des clients. Les clients séjournant dans cet établissement peuvent faire le plein d'énergie après une longue journée de travail ou de visites grâce à un délicieux repas servi aux restaurants. Les clients séjournant dans cet établissement pourront apprécier les services de remise en forme et de bien-être proposés par Icon Hotel Istanbul. Cet hôtel dispose d'un choix de salles de réunion permettant de mêler à la perfection confort et utilité pour un voyage d'affaires. Les clients séjournant dans cet établissement pourront profiter de l'offre de restauration proposée par la propriété.\nOffres Icon Hotel Istanbul


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Fête de Noël ❆ - ...\nAu-haras-du-Lilas, Posté le lundi 27 juillet 2015 04:03\nMarieSchleich a écrit : " Oww ! Je peux prendre ton idée de dessin de parcours s'il te plaît ? :)\nJ'adore l'article ! :3 "\nOui vas y de toute façon je ne pense pas que c'est moi qui ai eu l'idée en première ! Les vrais parcours sont parfois dessinés comme ça ;)\nMarieSchleich, Posté le mercredi 22 juillet 2015 17:04\nOww ! Je peux prendre ton idée de dessin de parcours s'il te plaît ? :)\nJ'adore l'article ! :3\nmissequidia, Posté le samedi 20 décembre 2014 11:44\nmissequidia a écrit : " ^^ en tout cas j'adore ton blog, et toi aussi d'ailleurs, je trouve que tu est pleine de vie, j'adoore !! "\nWinner-774 a écrit : " Supper ** "\nmissequidia, Posté le vendredi 19 décembre 2014 09:23\n^^ en tout cas j'adore ton blog, et toi aussi d'ailleurs, je trouve que tu est pleine de vie, j'adoore !!\nWinner-774, Posté le jeudi 18 décembre 2014 12:30\nAu-haras-du-Lilas, Posté le mercredi 17 décembre 2014 05:35\nmissequidia a écrit : " rho, mais j'ai juste adorééé !! tes créas sont super belles, le texte trop bien... enfin pas besoin de faire un roman pour te le dire, sa ma trop plus !!Les petits bonnets de noël sont cro bien fait, c'est trop mimiii !!! Et puis la bouille de Sunny, j'adooore !! "\nHihi merci j'avoue que moi aussi j'adore mes créations ! En plus je n'ai pas mis beaucoup de temps ! ^^ oui je trouve que du coté gauche il est à crooooquer !! <3 ^^\nAu-haras-du-Lilas, Posté le mercredi 17 décembre 2014 05:33\nschleich-s17122001 a écrit : " j'adore voilà un article qui te ressemble pus et perso j'adore l'avant dernière photo elle st *.* "\nmissequidia, Posté le mardi 16 décembre 2014 12:58\nrho, mais j'ai juste adorééé !! tes créas sont super belles, le texte trop bien... enfin pas besoin de faire un roman pour te le dire, sa ma trop plus !!Les petits bonnets de noël sont cro bien fait, c'est trop mimiii !!! Et puis la bouille de Sunny, j'adooore !!\nschleich-s17122001, Posté le mardi 16 décembre 2014 12:12\nj'adore voilà un article qui te ressemble pus et perso j'adore l'avant dernière photo elle st *.*


ÉCOLE MATERNELLE PUBLIQUE PAULINE KERGOMARD - OIGNIES\nCette page présente "École maternelle publique Pauline Kergomard", école maternelle, située Avenue John Kennedy 62590 Oignies, dépendante de l'Académie de Lille, dont l'identifiant national est 0620370R. Ce groupe est public.\nCette fiche présentant École maternelle publique Pauline Kergomard est consultable à l'intérieur de Les Ecoles .fr en parcourant les pages suivantes : école Hauts-de-France, école 62, école maternelle Oignies. Si jamais vous avez aimé les conseils de cette fiche, n'hésitez pas l'ajouter à vos signets, la partager sur vos réseaux sociaux ou bien l'envoyer par email à vos amis !\nÉcole maternelle publique Louise Michel - Oignies\nÉcole primaire privée Sainte-Henriette - Oignies\nÉcole maternelle publique Jean de la Fontaine - Oignies\nÉcole primaire publique André Pantigny - Oignies\nConsultez sur ce site d'autres écoles, maternelles ou élémentaires, à proximité de Oignies, comme : une école sur Arras, les écoles à Liévin, une école autours de Calais, les écoles dans Boulogne-sur-Mer, une école sur Lens, et y lire les données recherchées.


Curry de poulet et pois chiches - Mes petites recettes du quotidien\nAh que j'aime cette délicieuse odeur d'épices dans la cuisine ! Rien que de sentir ce curry de poulet et pois chiches on en a déjà l'eau à la bouche. Ce plat demande peu de préparation et est très facile à réaliser.\nC'est une recette à ma façon, que j'ai crée en combinant plusieurs recettes, je suis persuadée qu'elle va vous plaire !\n- 350 g de riz cru\n- une grande boite de pois chiches (800g net)\n- 300 g de tomates concassées\n- 1 cuillère à café d'épices à chili\n1°) Epluchez et hachez l'oignon finement\n2°) Dans une très grande poêle ou une sauteuse, faites chauffer l'huile et faites cuire les oignons quelques minutes jusqu'à ce qu'ils soient tendres.\n3°) Coupez les escalopes en morceaux\n4°) Ajoutez les aux oignons, saupoudrez des épices, du sel, du poivre, mélangez et laissez les dorer une dizaine de minutes, selon la taille.\n5°) Terminez par les pois chiches, le lait de coco et les tomates concassées. Couvrez et laissez cuire doucement durant 20 minutes.\n6°) Quand il ne reste que 15 minutes de cuisson, faites bouillir de l'eau salée dans une casserole et ajoutez le riz. Laissez cuire le temps indiqué sur le paquet. Egouttez.\n6°) Servez le curry de poulet et de pois chiches bien chaud accompagné du riz.\nToujours des plats chauds aux repas et c'est pas mon mari qui va refuser après avoir eu une journée de travail sous la pluie donc, j'ai "pris" ta recette qui est très "goûteuse", fondante et qui nous emmènent vers le soleil(à défaut de l'avoir à l'extérieur), il est dans la cuisine ;-) Belle journée de repos!


FIFA Coupe du Monde des Clubs : ES Sétif est très déçu - Africa Top Sports\nAfrique FIFA Coupe du Monde des Clubs : ES Sétif est très déçu\nLe 14 Déc 2014 à 16:30\nLa première aventure “mondiale” de l’ES Sétif s’est arrêtée dès le premier match. Quelques semaines après avoir été couronnés champions d’Afrique, les Algériens ont perdu l’occasion de prolonger l’euphorie et de terminer dans le dernier carré de Maroc 2014. Face à Auckland City, qui a déjà éliminé le Moghreb Tetouan, les champions d’Afrique 2014 se sont inclinés (1/0) et quittent le tournoi. L’ES Sétif tentera de sauver l’honneur en battant les Western Sydney Wanderers dans le match pour la cinquième place. La déception était énorme dans chez les joueur de Sétif.\nHassen Hamar (président de l’ES Sétif) : « Sincèrement, je n’ai pas reconnu mon équipe. Je ne m’attendais guère à ce qu’elle présente un football aussi médiocre que celui d’aujourd’hui. J’aurais aimé jouer notre jeu et perdre que d’être éliminés de cette façon. Je suis vraiment très déçu ».\nAbdelmalek Ziaya (attaquant ES Sétif) : « Nous sommes très déçu de cette défaite surtout que nous avions nourri de grosses ambitions pour ce match. Je reconnais que l’adversaire était plus volontaire que nous comme l’atteste l’agressivité avec laquelle ses joueurs ont évolué. Maintenant, nous devons nous concentrer sur la prochaine rencontre pour décrocher la cinquième place ».\nMohamed Benyettou (attaquant ES Sétif) : « Evidemment, cette défaite fait mal surtout que nos ambitions étaient grandes dans cette compétition. Nous sommes tombés sur une équipe qui était meilleure que nous dans ce match ce qui nous a joué un mauvais tour. Maintenant il nous reste de nous concentrer que sur la cinquième place que nous souhaitons décrocher pour faire plaisir à nos supporters que je remercie au passage de s’être déplacés à Rabat pour nous soutenir ».\nEl Hadi Belameiri (attaquant ES Sétif) : « On était moins bons que d’habitude sur le plan tactique ce qui a fait profiter à l’adversaire mieux organisé pour la circonstance. Ses joueurs ont plus d’expérience que nous dans cette épreuve, et cela leur a servi de bien gérer la rencontre. Nous regrettons de ne pas s’être exprimés sur notre véritable valeur. Cela dit, il nous reste maintenant cette cinquième place que nous devrons aller la chercher avec les tripes. Rassurez-vous que nous n’avons pas sous-estimé Aukland City ».\nArticle précédent Paul-Georges Ntep: Nominé pour le titre de meilleur joueur du mois de novembre\nArticle suivant Mondial des Clubs- ES Sétif : « Nous avons manqué de réalisme »


Ligue 1 France : la belle semaine de l'OM\nLigue 1 France : la belle semaine de l’OM\nBy xibaaru\t Last updated Sep 2, 2019\nDario Benedetto le puissant buteur de l’OM.\nAprès sa victoire à Nice (1-2) mercredi soir, l’Olympique de Marseille a décroché son deuxième succès de la saison, face à Saint-Etienne (1-0), en clôture de la 4e journée de Ligue 1.\nL’Olympique de Marseille fêtait ce dimanche soir ses 120 ans, et le Stade Vélodrome a été à la hauteur de l’événement, incandescent. Les joueurs d’André Villas-Boas, eux, sont loin d’avoir livré une prestation historique, mais ils ont assuré un bel essentiel en décrochant un succès 1-0 face à l’AS Saint-Etienne. Cela fait donc six points pris en quatre jours pour les Phocéens, qui avaient fait le plein à Nice (1-2) mercredi soir. Et six points pris, au passage, face à de possibles adversaires directs pour les places européennes.\nCette belle semaine porte le sceau de Dario Benedetto. Après avoir fait oublier son penalty manqué à Nantes (0-0) en ouvrant son compteur à l’Allianz-Riviera, l’attaquant argentin a marqué le seul but de la rencontre, à la conclusion d’un beau mouvement collectif où il est au départ, avec une belle remise pour Bouna Sarr, et à la conclusion, à la réception du centre de Morgan Sanson (1-0, 33e). Un vrai but d’avant-centre, de la part de la recrue phare de l’été, qui a montré de belles choses: une frappe lointaine dans le petit filet (55e) et une « Madjer » dans la surface (58e), pour faire passer quelques frissons dans le Vélodrome.\nL’OM a fini « sur les rotules »\nEn dehors des actions de Benedetto, et des rushs en fin de match d’Amavi (87e) et de Thauvin (90e+5), dont c’était la première entrée de la saison, l’OM s’est surtout contenté de subir. Avant le but, les Olympiens n’avaient pas touché le moindre ballon dans la surface, alors que les Verts étaient venus avec une composition prudence, en 5-3-2. En seconde période, les Ciel et Blanc ont montré une belle combativité et une belle résistance, à l’image de M’Vila (57e), Khazri ou Bouanga (63e), toute contrées. « On a fini sur les rotules, mais quand on a ça derrière nous (le public, ndlr), on est obligé de tout donner », expliquera Maxime Lopez sur Canal+ au coup de sifflet final.\nSi l’on excepte cette intervention très limite de Jordan Amavi, qui a esquinté la cheville de Palencia (sorti sur blessure) sans récolter plus qu’un carton jaune, et les deux arrêts de Steve Mandanda en fin de rencontre (78e, 81e), l’OM n’aura pas énormément tremblé. Avec sept points au compteur, soit autant que Lyon, plus que Lille et Saint-Etienne, et seulement deux de moins que les leaders (Paris, Rennes, Nice et Angers), la formation d’André Villas-Boas va pouvoir aborder la trêve internationale dans une position confortable, ce qui était loin d’être acquis après les deux premières journées. Cela permettra aussi à l’OM de vivre une dernière journée de mercato plus sereine, avec le probable départ de Luiz Gustavo en Turquie, et l’arrivée espérée de Valentin Rongier.\nReal Madrid : Bale égale un record de buts de Ronaldo\nRevue de presse…La crise au PUR et au Dialogue national à la UNE


BTLP Avocats | L’amour… ça n’a pas d’âge?\nL’amour… ça n’a pas d’âge?\nLa notion de consentement à des relations sexuelles ou à tout autre geste à caractère sexuel a été régulièrement mise de l’avant par les médias dans les dernières années pour diverses raisons.\nIl importe de rappeler que la notion de consentement sexuel comprend de multiples facettes qui ne seront pas traitées ici. La présente chronique s’attarde plutôt au consentement en fonction de l’âge.\nLe Code criminel du Canada prévoit qu’avant d’atteindre un certain âge, une personne peut ne pas être en mesure de donner un consentement légal valide.\nL’âge du consentement légal est présentement de seize (16) ans et plus, mais tel n’a pas toujours été le cas. Toutefois, dans certaines circonstances spécifiques, l’âge légal de consentement peut être moindre. Ces exceptions concernent exclusivement les attouchements et les relations sexuelles entre des jeunes du même âge.\nSpécifiquement, les adolescent(e)s âgé(e)s de quatorze (14) et de quinze (15) ans peuvent consentir à des relations sexuelles seulement si leurs partenaires sont de moins de cinq (5) ans leurs aînés.\nConcernant les adolescents âgés de douze (12) ans et de treize (13) ans, ils ne pourront légalement consentir que si leurs partenaires sont âgés de moins de deux (2) ans de plus.\nDans tous les cas où l’adolescent(e) a entre 12 et 15 ans inclusivement, le ou la partenaire ne devra jamais être une personne en situation d’autorité ou de confiance ni une personne à l’égard de laquelle il existe une situation de dépendance pour que le consentement soit valide.\nPour répondre à la question, lorsque les deux (2) partenaires sont âgés de 16 ans et plus, la notion de consentement relativement à l’âge des partenaires ne cause pas de problème. Toutefois, il importe de garder en tête que si votre partenaire à moins de 16 ans, il ne peut consentir à des relations sexuelles sauf dans les exceptions mentionnées ci-haut. Même si votre partenaire vous dit qu’il est d’accord et que vous signez un contrat à l’effet que tout le monde consent avant d’avoir une relation sexuelle, vous pourriez tout de même être accusé d’agression sexuelle, parce que le consentement n’est pas valide !\nCatégorie : Droit criminel et pénal Mots-clés : Accusations, Arrestation, Casier judiciaire, Code criminel, Enfants


1 Mai 2016 6:38\nEssayer Ford veut sa voiture électrique grand public ?\nConfigurez votre véhicule Ford veut sa voiture électrique grand public ou demandez un essai gratuitement.\nBien décidé à ne pas se laisser distancer par la Tesla Model 3 et la Chevrolet Bolt de General Motors, Ford envisagerait également de lancer une voiture électrique « grand public » excédant les 300 kilomètres d’autonomie.\nInterrogé sur les ambitions du groupe en matière de véhicules électriques et particulièrement sur la possibilité que Ford puisse un jour proposer un modèle excédant les 200 miles (320 kilomètres) d’autonomie, son directeur général, Mark Fields, a répondu par l’affirmative. « Comme je l’ai déjà dit, nous voulons nous assurer que nous ferons partie des meilleurs ou serons parmi les leaders dans le segment électrique. Quand vous regardez ce que les concurrents ont annoncé, ça c’est quelque chose que nous voulons, que nous développons » a-t-il assuré sans donner davantage de détails.\nPour rappel, Ford avait déjà annoncé en décembre dernier un plan d’investissements de 4.5 milliards de dollars dédié à l’électrification de sa gamme avec pour objectif de lancer 13 nouveaux modèles électriques et hybrides à l’horizon 2020.\nVers une Ford Model E ?\nSi Ford a plutôt bien développé sa technologie hybride, notamment en Amérique du Nord, le constructeur a toujours été beaucoup plus timide sur le tout électrique. Certains se rappelleront du passage éclair de la Ford Focus électrique sur le marché français. Le modèle doit d’ailleurs être renouvelé d’ici à la fin de l’année (voir notre article). Côté utilitaire, le constructeur avait également lancé une version électrique du Ford Transit sans jamais véritablement entamer sa commercialisation en Europe.\nS’il souhaite revenir dans la course à l’électrique, Ford va donc devoir faire beaucoup d’efforts, notamment sur la partie commerciale et auprès de son réseau. Quant aux caractéristiques et à la date de sortie de cette future voiture électrique « grand public », rien n’est encore annoncé. Certains médias américains évoquent une future Ford Model E, le constructeur ayant déposé le nom il y a quelques mois au grand désespoir d’Elon Musk qui a du rebaptiser sa compacte « Model 3 ».\nJ’ai essayé la Focus électrique à sa sortie.\nSi le comportement routier n’appelait pas de critique notoire, le positionnement tarifaire et surtout le volume du coffre, fortement amputé par la batterie lui faisait perdre tout intérêt.\nBref, si la TESLA S coûte 2 fois plus cher, elle dispose de 3 fois plus d’autonomie, de 2 grands coffres contre 1/2 coffre pour la Focus, dois-je aussi comparer la puissance moteur?\nFORD n’est pas un leader mais un suiveur… Comment peuvent-ils se raccrocher à la locomotive TESLA avec un tel retard technologique et, aux USA, avoir pour véhicules emblématiques la Mustang et le camionesque Pick Up F150…\noû en est FORD avec la Fiesta et les moteur roue ?\nS’ils avaient quelque chose de concret, pour disons 2017-18, pourquoi ne rien dire? C’est une tactique commerciale, surtout pour les automobiles, qui n’a pas de sens. Donc ils n’ont rien. Les constructeurs (et concessionnaires) se demandent tous non seulement comment faire le même profit comme d’habitude (tôt ou tard ils vont se rendre compte que ce n’est pas possible avec le même business model), mais comment avoir accès à assez des batteries, sans une ou deux, ou trois usines comme la Gigafactory. Tesla est le seul. Il y a un énorme pont à franchir entre au moins comprendre ce qu’il faut faire, ET ensuite le faire. Les autres ne semblent pas encore être même à un début de compréhension de ce qu’il faut faire. La question est qui des grands va être le premier Nokia?\nY-a-t-il un seul constructeur prêt à vendre plus de 50 000 VE par an, avec 300-400km d’autonomie? Pas un seul sauf Tesla. Ils n’auront pas les batteries même si la demande sera là. Mais même l’exemple de 400 000+ réservations ne leur a rien suggéré… Que les gens vont adopter la VE massivement si l’autonomie est au moins 300km.\nEntre l’hybride et le 100% électrique, il y’a un long taf a faire !\nFord va rafraichir sa Focus avec une batterie 30kWh, et selon les déclarations de Ford, c’est suffisant pour la majorité des gens et qu’une version 200 milles n’était pas nécessaire.\nFord sait qu’il vont devoir ramer sec en attendant une version 200 milles que les gens n’ont pas besoin, il y a ~2 semaines.\nLes constructeurs qui prenaient de haut Tesla sont en train de ravaler leurs fiertés et suivent le mouvement.\nNissan va arriver avec une Leaf 60kWh et Renault va certainement nous sortir une Zoé ~55kWh. En électrique pure on va avoir le choix avec au moins 5 modèles.\nIl ne reste plus qu’à attendre que les allemands laissent tomber la pile à combustible et se concentre sur l’électrique.\nOn attend toujours les modèles hybrides et hybrides rechargeables…\nIls sont sortis il y a plus de 2 ans en Amérique du Nord mais rien pour l’Europe.\nDonc wait & see, comme ils disent là bas.\nIls veulent tous faire des VE avec de grosses batteries mais un seul constructeur automobile a investi des sommes considérables dans la production de batteries. Alors pour moi pour le moment Tesla n’a pas de concurrent crédible, juste des pseudo-concurrents qui tentent de sauver la fasse devant les 400 000 réservations et leur absence de réponse crédible. Idem pour le réseau de charge.\nDécidement il se réveillent tous au même moment, merci Tesla ;)\nGénial :-) Les constructeurs commencent à se battre pour vendre des électriques abordables :-)\n« Ford envisagerait »\n« sans jamais véritablement entamer sa commercialisation »\n« cette future voiture électrique « grand public », rien n’est encore annoncé. »\nbref on attends de voir du concret….pourquoi ne pas améliorer dans un premier temps son modèle électrique existant « ford focus » avec une batterie de 30kw ? bien sur son coffre est un peu manger par cette batterie mais elle a un bon segment tel la Hyundai qui arrive également fin d’année…et elle a un tête passe partout !


Commission des jeux de hasard » FAQ » Interdiction d'accès\nComment puis-je demander une interdiction pour moi-même?\nComplétez ce formulaire d’exclusion\nJoignez une copie de votre carte d’identité recto-verso\nEnvoyez-le à la Commission des jeux de hasard, Cantersteen 47, 1000 Bruxelles.\nComment puis-je demander une interdiction pour un membre de mon entourage (enfant, partenaire, parent)?\nEnvoyez-le par recommandé à la Commission des jeux de hasard, Cantersteen 47, 1000 Bruxelles\nQue dois-je faire pour avoir à nouveau accès aux casinos et salles de jeux après m’être fait exclure?\nVous devez signer une lettre reprenant votre demande et l’envoyer par recommandé à la Commission des jeux de hasard, Cantersteen 47, 1000 Bruxelles, avec une copie de votre carte d’identité recto-verso.\nCombien de temps dois-je attendre avant de pouvoir retourner dans un casino ou une salle de jeux après avoir demandé l’annulation de ma demande d’interdiction?\nUne période de réflexion de trois mois est prévue après réception de votre demande par la Commission des jeux de hasard.\nPuis-je me faire exclure pour une période déterminée?\nUne interdiction a une durée indéterminée et ne peut se terminer que si vous en faites vous-même la demande par lettre recommandée. Par la suite, une période de réflexion de trois mois s’applique entre le moment de la demande de levée de l’interdiction et l’accès réel.\nVous devez signer la lettre contenant votre demande et l’envoyer par recommandé à la Commission des jeux de hasard, Cantersteen 47, 1000 Bruxelles, avec une copie de votre carte d’identité recto-verso.\nDes tiers (p.ex. la banque, mon employeur…) peuvent-ils obtenir des informations sur mon interdiction?\nNon. Vos données personnelles ne sont jamais communiquées à des tiers. Ces données sont fortement sécurisées, elles sont légalement protégées et ne sont transmises à personne. Les casinos et salles de jeux reçoivent uniquement une information signalant si un visiteur peut ou non être admis. Elles n’ont pas accès aux données personnelles de ce visiteur.\nQuel document d’identité dois-je présenter pour pouvoir entrer dans un casino, une salle de jeux ou une agence de paris?\nNous n’acceptons que les documents officiels délivrés par une instance compétente. La date de validité du document ne peut avoir expiré. Le document doit mentionner au moins votre nom, votre date de naissance, et porter votre signature et votre photo. Ces données doivent être intégrées au document.\nQuel est l’âge minimum pour participer à des jeux de hasard ou à des paris?\nPour avoir le droit de jouer dans un casino ou une salle de jeux (en ligne ou réels), vous devez avoir au moins 21 ans. Pour participer à des paris (en ligne ou réels) ou à des jeux téléphoniques, vous devez avoir au moins 18 ans.\nEst-ce que je peux travailler dans un casino ou dans une salle de jeux automatiques si je n'ai pas encore 21 ans?\nOui. L’âge minimum de 21 ans pour accéder aux casinos et salles de jeux automatiques est assorti d'une exception pour le personnel. Le travail dans un casino ou dans une salle de jeux automatiques est autorisé à partir de l’âge de 18 ans.\nAvant ou après les heures de travail, la présence de personnes de moins de 21 ans dans les casinos ou dans les salles de jeux automatiques n'est pas autorisée. De toute façon, un employé ne peut pas jouer dans la salle de jeux où il travaille et ne sait donc pas y faire grand-chose en dehors des heures de travail.\nEn tant que joueur exclu, est-ce que je peux travailler dans un casino ou dans une salle de jeux automatiques?\nOui. Il est strictement interdit aux employés d'un casino ou d'une salle de jeux automatiques de jouer dans la salle où ils travaillent. Un joueur exclu peut déterminer pour lui-même si l'exercice d'un job dans le secteur des jeux de hasard est une bonne idée ou non. L'interdiction de jouer dans le casino ou la salle de jeux automatiques qui les emploie vaut également pour les employés non exclus.\nMon règlement collectif de dettes est terminé. Comment puis-je faire pour avoir à nouveau accès aux établissements de jeux de hasard?\nDepuis le 1er septembre 2013, les personnes dont la demande de règlement collectif de dettes a été déclarée admissible sont automatiquement exclues des salles de jeux automatiques, des casinos et des sites de jeux en ligne (article 54, § 3.6, de la loi du 7 mai 1999 sur les jeux de hasard).\nLa nouvelle mesure d'exclusion cesse automatiquement d'exister dès que vous ne figurez plus sur la liste des personnes en règlement collectif de dettes.\nSi la fin du règlement collectif de dettes n'a, à tort, pas été enregistrée – la Commission des jeux de hasard travaille exclusivement sur la base de données officielles qui lui sont transmises, elle n'est donc pas en mesure de corriger elle-même ces données –, vous devez contacter votre médiateur de dettes (avocat ou assistant social). Celui-ci doit veiller à supprimer vos données de sorte que vous ne figuriez plus sur notre liste de joueurs exclus. Cela s'effectue en signalant la fin de votre médiation de dettes dans le fichier central des avis de saisie.\nSi vous ne savez plus qui était votre médiateur de dettes, vous pouvez vous adresser au greffe du tribunal de votre domicile, qui pourra vous fournir les coordonnées de votre médiateur de dettes.


Cumin Moulu - Les Magasins Solidaires Et Equitables\n> Alimentaire>Epices>Cumin Moulu\nAvec une saveur légèrement âcre, forte et terreuse, le cumin, utilisé par les Égyptiens, il y a plus de 4 000 ans, est la graine séchée de l'herbe Cuminum cyminum. De la famille du persil, le cumin est un ingrédient important dans l'assaisonnement des plats et la stimulation la digestion et l’élimination des spasmes de l'intestin.?\nCumin moulu 50 Gr\nAvec une saveur légèrement âcre, forte et terreuse, le cumin, utilisé par les Égyptiens, il y a plus de 4 000 ans, est la graine séchée de l'herbe Cuminum cyminum. De la famille du persil, le cumin est un ingrédient important dans l'assaisonnement des plats et la stimulation la digestion et l’élimination des spasmes de l'intestin.\nCumin moulu 100 Gr\nAvec une saveur légèrement âcre, forte et terreuse, le cumin, utilisé par les Égyptiens, il y a plus de 4 000 ans, est la graine séchée de l'herbe Cuminum cyminum. De la famille du persil, le cumin est un ingrédient important dans l'assaisonnement des plats...


Appartement de vacances à Les Sables-d'Olonne, en Pays-de-la-Loire pour 6 pers. - (75m²) | SeLoger vacances\nappartement 6 personnes - Les Sables-d'Olonne\nRéférence de la location : 430616SG\nDate de mise à jour : 22/08/2019 - Bel appartement très confortable de Type T3 situé au 1er étage, face mer, proche commerces et commodités, face à la grande plage. Entrée, pièce principale avec balcon , TV , wifi, cuisine aménagée et équipée (lave vaisselle, four, micro-ondes, réfrigérateur) chambre (1 lit de 140, 1 lit de 90 ), chambre (1 lit de 160, 1 lit de 90), salle d'eau (lave linge), WC.\nUn garage en sus à proximité de la location. Couchage : 6 personnes\n48, Promenade Clémenceau, résidence Calypso.


Le blog officiel de Bernard Lugan: L'Afrique Réelle n°131 - Novembre 2020\nL'Afrique Réelle n°131 - Novembre 2020\nL’Ethiopie va-t-elle disparaître ?\nDossier : La nouvelle situation politico-militaire dans la BSS\n- Califat régional ou ethno-islamisme ?\n- Les contradictions des islamistes de la BSS\n- Quand Barkhane s’adapte à la situation sur le terrain\nDossier : L’islam sud-saharien\n- L’islam sud-saharien pourra-t-il résister au wahhabisme ?\n- Islam africain contre islam arabe\n- La charia, une bulle « sécurisée » pour les trafics ?\nL’exemple éthiopien montre une fois de plus qu’en Afrique, l’économie est secondaire dans le déclenchement des évènements, l’essentiel étant à l’évidence l’ethnie. L’ethnie qui, certes n’explique pas tout, mais sans laquelle rien ne s’explique…\nEn effet, dans ce vieux pays, depuis 2005, la croissance est de plus de 7% par an et le revenu par habitant a été multiplié par 3. Les observateurs annonçaient même que l’Ethiopie allait franchir un cap dans le développement. Or, en dépit des courbes économiques ascendantes, le pays est au bord de l’éclatement. Pas pour des raisons socio-économiques, mais parce qu’un grave conflit de pouvoir oppose ses quatre principaux peuples, les Oromo, les Amhara, les Tigréens et les Somali. Mise en sommeil durant deux décennies sous la poigne de fer du Premier ministre tigréen Mélès Zenawi, la question des nationalités s’est brutalement réveillée après sa mort survenue en 2012.\nOr, si l’équilibre n’est pas trouvé entre ses peuples, l’Ethiopie éclatera, parce que la démocratie du «\none man one vote » donne le pouvoir aux plus nombreux. Or, devenus minoritaires, les Amhara et les Tigréens, peuples des hautes terres qui dominaient traditionnellement ceux des basses terres, à savoir les Oromo et les Somali, ont automatiquement perdu la bataille de l'ethno-mathématique électorale. Comme partout en Afrique, les mêmes causes produisent donc les mêmes effets. Mais en plus de cela, Amhara et Tigréens, pourtant peuples « cousins », se combattent et les seconds dont la moitié du territoire se situe en Erythrée (voir la carte à l’intérieur de la revue) menacent de faire sécession. En plus de cela, à tout moment, l’aviation égyptienne peut faire sauter le barrage éthiopien qui va dramatiquement faire baisser le débit du Nil. Pour l’Egypte, c’est une question de vie ou de mort comme nous l’avons montré dans le numéro 119 de l’Afrique Réelle.\nLe 28 novembre 2017, en voyage officiel au Burkina Faso, Emmanuel Macron déclara : « D’ici à cinq ans, je veux que les conditions soient réunies pour des restitutions temporaires ou définitives du patrimoine africain à l’Afrique ». Le 17 novembre 2019, à Dakar, fut donc remis le « sabre d’el-Hadj Omar » au président sénégalais Macky Sall - d’ethnie toucouleur comme el-Hadj Omar -, par le Premier ministre français Edouard Philippe. Or, la remise de cette arme qui, soit dit en passant, n’a rien d’africain puisqu’il s’agit d’un sabre d’infanterie de l’armée française modèle 1821 forgé à Kligenthal, en Alsace, honore la mémoire d’un conquérant « sénégalais » qui mit en coupe réglée et vendit comme esclaves les ancêtres de 90% de la population de l’actuel Mali… et d’une partie de celle du Burkina Faso... La remise suivante a porté sur la « restitution » au Bénin d’objets ayant appartenu à ses souverains esclavagistes, ce qui n’aura pas manqué de satisfaire les descendants des peuples qu’ils capturèrent pour les vendre aux négriers européens…\nL’on ne peut qu’être « pantois » devant l’ignorance historique des petits marquis qui « conseillent » le président Macron.\nDM 11 novembre 2020 à 11:22\nattention à cette vision réductrice de l'Afrique à ces aspects éthniques. Il faut vérifier s'il n'y a pas d'autres interets en jeu. Entre le Ruanda et le Congo-Kinshasa on parle de haine de tutsis, victimes du génocide de 1994. Mais nous savons qu'il n'en est rien. Tout ce qui s'est passé avait pour but finale les richesses du Congo dans ses provinces du Kivu, frontalières du Ruanda. Les questions éthniques sont utilisées et instrumentalisées par des leaders aux agendas loin des interets des peuples.\nattention à cette vision réductrice de l'Afrique à ces aspects éthniques. Il faut vérifier s'il n'y a pas d'autres interets en jeu. Entre le Ruanda et le Congo-Kinshasa on parle de haine de tutsis victimes du génocide de 1994. Mais nous savons qu'il n'en est rien. Tout ce qui s'est passé avait pour but finale les richesses du Congo. Les questions éthniques sont utilisées et instrumentalisées.\nAnonyme 12 novembre 2020 à 09:30\nLa moitié du territoire tigréen ne se situe pas en Erythrée, c'est le contraire. Même selon les frontières actuelles, certains territoires limitrophes avec la région de Badme appartiennent historiquement à l'Erythrée.\nPar ailleurs, tous les territoires occupés illégalement par les tigréens dans la région de Badme sont en train d'être récupérés en ce moment par l'armée érythréenne sans tirer un seul coups de feu car les soldats tigréens fuient ces terres. Aussi, nombre de tigréens se sont constitués prisonniers car ils ne souhaitaient pas combattre. Tandis que d'autres sont en train de commettre des crimes contre les populations civiles Amhara. Tout cela se passe en ce moment.\nL'Afrique Réelle n°132 - Décembre 2020\nPourquoi Emmanuel Macron se croit-il obligé de vol...\nUn nouvel exemple caractérisé de censure et d’exig...\nLa Première Guerre mondiale n'a pas pris fin le 11...\nA l’unanimité, les députés français bradent le pat...


28 octobre 2015 12 décembre 2016\nLa vente entre particuliers fait de plus en plus d’adeptes et ce, même dans le domaine du bois de chauffage. Beaucoup y voient une façon de réaliser des économies financières en n’ayant pas à payer diverses taxes comme la TVA et autres. Ainsi, pour ceux qui veulent trouver du bois de chauffage à petit prix, se tourner vers d’autres particuliers semble être la solution idéale.\nMais attention aux pièges ! De nombreuses annonces de vente de bois de chauffage de particulier à particulier mettent en avant des stères de bois vendus à 30 euros l’unité et parfois moins. Si ce sont des prix attractifs, il faut savoir que le prix moyen d’un stère de bois oscille normalement entre 50 et 70 euros. À 30 euros et moins, les risques qu’il s’agisse d’une arnaque au bois de chauffage sont donc bien réels.\nDe plus, le « vendeur » particulier ne peut garantir une qualité de combustible constante. Il en va de même sur le taux d’humidité. Nous vous rappelons qu’un bois de chauffage humide n’est pas performant et va encrasser votre appareil de chauffage !\nSi vous optez quand même pour la vente de bois de chauffage entre particuliers, mieux vaut donc faire preuve d’une grande prudence pour ne pas se faire arnaquer.\nVous pouvez aussi faire confiance au site lemarchedubois.com pour trouver un fournisseur professionnel proposant du bois de qualité. 😉\nAchat de bois de chauffage : pourquoi choisir lemarchedubois.com ?\nVous souhaitez acheter du bois de chauffage de qualité ? Ne cherchez plus, nous avons ce qu’il vous faut ! Spécialistes de la vente de bois énergie depuis plus de 6 ans, nous vous proposons un annuaire complet recensant de multiples fournisseurs de bois de chauffage, granulés de bois et bûches compressées.\nEn quelques clics seulement, trouvez un vendeur professionnel de bois de chauffage à côté de chez vous.\nFrance bois bûche est un label de qualité. Les professionnels qui se sont engagés dans la démarche vous garantissent un taux d’humidité inférieur à 20 %, un respect des quantités commandées et un bois d’origine française. Ces fournisseurs sont signalés sur lemarchedubois.com\nDécouvrir la marque de qualité « France Bois Bûche »\nVous vous demandez peut-être pourquoi il est préférable de passer par nous ? Si on vous dit que cela vous évite d’être arnaqué, que la qualité proposée par les marchands que nous vous recommandons est excellente et que cela préserve les emplois de la filière, vous êtes convaincus ?\nAlors, si vous souhaitez trouver un fournisseur de bois de chauffage près de chez vous, rendez-vous sur lemarchedubois.com.\nEn effet, il y a des escrocs partout. Notre site est justement là pour aider à faire le tri et assurer une qualité de produit et de service.\nConcernant les tarifs pratiqués, le bois de chauffage demande des investissements pour produire de facon professionnelle un combustible de qualité, cela à un coût qui se répercute forcément sur le prix de vente.\nEnfin, une entreprise (comme toutes les entreprises) doit supporter des charges et des impôts, il est donc difficile de comparer un prix proposé par un particulier sur un marché parallèle d’un prix proposé par un professionnel de qualité.\n1 décembre 2017 at 8 h 22 min\nje vend mon bois, 60€ livré coupé en 40, du frene, 3 ans de sechage dans un hangar ! jamais personne ne s’est plaint, une personne de ma commune m’a recemment confié qu’un professionel lui avait livré du bois dur, 2 ans de sechage, mais son bois degageait une fumée acre a la combustion et noircissait sa vitre ! ne venez pas bavez sur les particuliers pour mieux vendre vos m**** ! des escrocs y’en a partout, chez vous aussi ! et si vous ne pratiquiez pas des tarifs aussi élevés, vous n’auriez pas cette concurrence !\n26 octobre 2017 at 21 h 37 min\nLes agriculteurs disposent d’un statut particulier pour vendre un volume donné de stères par an et c’est tout à fait légal. La qualité de chauffe d’un bois dépend de son essence, mais aussi du lieu où poussent les arbres. Le meilleur est le charme et le chêne. La problématique des ventes entre particuliers c’est que le temps de séchage (minimum deux ans recommandé trois) n’est pas respecté. Le meilleur test pour savoir si un bois est sec. Prenez une bûche mettez la une nuit dans un sac plastique et le lendemain matin, vous saurez le taux d’humidité de votre bois. Si le sac plastique est sec, c’est un bois suffisamment sec. Si vous avez beaucoup d’humidité, vous le constaterez de visu.\n24 août 2017 at 14 h 52 min\ndifférence entre pro et particuliers ? Aucune se sont les mêmes arbres 😄\nLes particuliers font aussi bien voir mieux que les « pros » car leur travail n’est pas dicté par une logique économique qui ronge tout aujourd’hui. Alors bien sur cela dérange ces messieurs de là filière bois ce manque à gagner…….Mon bois est nickel , couper et exploité dans les règles de l’art. Et pour mon ramonage idem. Une belle fumisterie également les sois disant pro, j’ai testé, il fallait toujours que je passe derrière eux pour retirer plus de suie. Ni comment.\nJ’ai eu à faire plusieurs fois dans ma vie à des marchands de bois professionnels, et à chaque fois le bois n’était pas sec et le prix était délirant, elle est là l’arnaque, ce ne sont là, bien souvent, que des vendeurs pour le profit qui sont loin de respecter les règles de l’art en ce qui concerne l’abattage. Concernant « les ventes au noir » comme ça se dit, ça existe depuis toujours et certainement pas dans le but de s’enrichir (il suffit de compter les heures pour s’en rendre compte!). Non, c’est bien souvent pour dépanner , et contrairement aux « soi-disant » professionnels, il n’y a pas de concurrence il y a de la place pour tout le monde!\n16 janvier 2017 at 8 h 39 min\ncela n’est par normal cette concurrence car la moitie du bois de chauffage se vend au noir et personne ne dit rien


11 novembre 2009 en salle / 2h 02min / Fantastique, Aventure\n3,3 8217 notes dont 815 critiques\n735 588 vues\n275 764 vues\n10 880 vues\n13 955 vues\nHier soir à la télé : The Dark Knight : vous avez aimé ? On vous recommande...\nDu réchauffé pour un terry Gilliam qui aurait bien eu besoin d'aller faire un tour dans la machine du docteur Parnassus.L'imagination reste sur place,de plus les remplacent Heath Ledger,arrivent dans les scènes comme une moumoute dans une soupe tiède.Les effets spéciaux quand a eux sont carrément immonde.Il y a déjà un moment que Gilliam,n'est plus en phase avec son époque ni scénaristiquement et encore moins visuellement.L'auteur de ...\nL’imagination a toujours été chez Terry Gilliam sa marque de fabrique. Une imagination souvent folle et sombre. Gilliam a une imagination débordante et reprend le mythe de Faust dans un univers très poétique. Terry Gilliam est maudit cela s'est révélé sur le tournage de "Don Quichotte" (dont il a le projet de le refaire) et de nouveau avec "L'Imaginarium" puisque Heath Ledger est mort en plein milieu du tournage. Il y avait donc un ...\nL'Imaginarium du Docteur Parnassus est le dernier film d'Heath Ledger, décédé le 22 janvier 2008, alors que toutes ses scènes n'avaient pas encore été tournées. Sa disparition aurait même pu entraîner l'arrêt définitif du tournage, si Johnny Depp, Jude Law et Colin Farrell n'avaient pas accepté de le remplacer à chaque fois que son personnage traverse un miroir qui le conduit dans un monde parallèle. Ainsi terminé, le film est attribué à "He Lire plus\n"Le thème central est l'imagination, et l'importance qu'elle revêt dans notre vie et notre façon de penser. C'est un thème récurrent chez Terry [Gilliam]. Avec ce film, il est allé bien plus loin qu'il ne l'avait jamais fait. C'est vraiment son histoire", explique Charles McKeown, coscénariste du film avec Terry Gilliam. "Parmi tous les films qu'il a pu faire, L'Imaginarium du Docteur Parnassus est certainement celui qui lui ressem Lire plus\nNationalités France, United Kingdom, Canada\nBox Office France 519 274 entrées\nUn malheur de plus qui entoure la filmographie de Terry GILLIAM : la mort de Heath LEDGER...Réalisateur talentueux, passionné, mais maudit...


L'ESTAFETTE ¤ø,¸¸,ø¤º°`°º¤ø,¸¸, » 2018 » juillet » 29\n> Archives pour le Dimanche 29 juillet 2018\n« Ce malheureux Vandamme… »\nUne lettre de l’Empereur adressée au maréchal Gouvion Saint-Cyr, commandant le 4ème corps de la Grande-Armée.\nDresde, 1er septembre 1813.\nLe duc de Tarente [maréchal Macdonald] s’est laissé pousser sur Görlitz. Il sera possible que je sois obligé de marcher sur Bautzen demain ou après-demain. Occupez donc promptement les positions défensives. afin que le duc de Raguse [maréchal Marmont] et ma Garde soient disponibles pour marcher avec moi de ce côté.\nCe malheureux Vandamme, qui paraît s’être tué, n’avait pas laissé une sentinelle sur les montagnes, ni une réserve nulle part ; il s’était engouffré dans un fond, sans s’éclairer en aucune façon. S’il avait seulement eu 4 batillons et 4 pièces de canon sur les hauteurs en réserve, ce malheur ne serait pas arrivé [allusion à la bataille de Kulm (30 août 1813) au cours de laquelle le général Vandamme fut fait prisonnier ] . Je lui avais donné ordre positivement de se retrancher sur les hauteurs, d’y camper son corps, et de n’envoyer en Bohême que des partis isolés, pour inquiéter l’ennemi et avoir des nouvelles.\nIndépendamment des hommes qui vous sont arrivés de son corps, il en est arrivé beaucoup et il en arrive encore à Dresde.\n(« Lettres inédites de Napoléon 1er (An VIII-1815). Publiés par Léon Lecestre » Plon, 1897, tome II,p.288).


Par Gilles Furelaud, Yann Esnault\nScience Photo Library / Ktsdesign, Science Photo Library\nAprès quelques rappels sur la notion de séquence nucléotidique, cet article définit en quoi consiste le séquençage d'un génome et en présente les modalités et contraintes techniques (ainsi que les aspects statistiques). Il fait le point sur les avancées du séquençage dans la biodiversité du vivant et termine en présentant les différents débouchés apportés par la connaissance du génome complet d'un individu ou d'une espèce.\nLe but de ce document est de fournir quelques données sur les séquençages de génomes et leurs modalités de réalisation. Pour plus d’information, voir également le document le séquençage d’un ADN.\nRappel sur les séquences nucléotidiques\nLes nucléotides, maillons élémentaires de l’ADN, peuvent être de 4 types différents dans cette molécule. Ils sont constitués d’une partie constante (squelette sucre-phosphate) et d’une partie variable, une base, du point de vue chimique. Les 4 bases présentes dans l’ADN sont notées A, T, G et C (Adénine, Thymine, Guanine et Cytosine).\nLa succession des bases le long d’un brin d’ADN est la séquence de ce brin. On parle alors de séquence nucléotidique (figure ci-dessous).\nSéquence nucléotidique d'un acide nucléique\nAuteur(s)/Autrice(s) : Yann Esnault, Gilles Furelaud Licence : Pas de licence spécifique (droits par défaut)\nOn peut donc exprimer la taille d’une séquence en nombre de bases – kilobases (kb) pour milliers de bases, mégabases (Mb) pour millions de bases, gigabases (Gb) pour milliards de bases – et la taille d’une molécule d’ADN en nucléotides, ou en paires de bases, pour se souvenir qu’une molécule d’ADN est formée de deux brins antiparallèles complémentaires.\nQu’est-ce que le séquençage d’un génome ?\nLe séquençage d’un génome consiste en la détermination de la séquence nucléotidique de l’ADN présent dans chaque cellule d’un organisme donné.\nCette détermination est en général d’autant plus difficile que le génome étudié est grand et riche en séquences répétées.\nLes virus, qui possèdent de petits génomes dénués de séquences répétées (entre 3 000 et 150 000 paires de bases, souvent moins de 10 000), ont ainsi été les premiers « organismes » séquencés, et représentent aujourd’hui encore la majorité d’entre eux.\nLa première bactérie a été séquencée en 1995, et de nombreux autres procaryotes ont, depuis, été séquencés intégralement. La taille de leur génome est de l’ordre de quelques millions de paires de bases (mégabases, Mb). La difficulté est tout autre pour les organismes eucaryotes : la grande taille de leur génome (2 à 3 milliards de paires de bases pour les mammifères, par exemple) nécessite un travail cartographique préalable et, souvent, un effort concerté de plusieurs centres de séquençage. Toutefois, les « petits » génomes eucaryotes (tel celui de la paramécie, qui ne mesure « que » 100 Mb) peuvent aujourd’hui être séquencés sans cartographie préalable par un seul grand centre.\nSi les eucaryotes intégralement séquencés demeurent moins nombreux que les procaryotes et virus, leur nombre est en constante augmentation. Certaines séquences sont à l’état d’ébauches très fragmentaires et incomplètes ; d’autres donnent une vision beaucoup plus complète du génome. Cela reflète l’effort de séquençage consenti ainsi que la stratégie adoptée par les auteurs du séquençage, comme on le verra plus loin. Au mois de mars 2014, on comptait 12 919 génomes cellulaires complètement séquencés (hors virus), 27 399 en cours de séquençage et 996 en projet.\nPour ce qui est de l’Homme, la première séquence du génome humain, annoncée à grands cris médiatiques fin 2000, n’était en rien une séquence complète. Celle-ci est disponible depuis avril 2003, à quelques « trous » près.\nLa liste qui suit donne quelques exemples de génomes séquencés parmi les premiers qui le furent.\nVirus : 3 778 virus séquencés au 4 mars 2014, dont le VIH (virus d’immunodéficience humaine).\nArchaebactéries : 319 génomes entièrement séquencés et 447 partiellement, au 4 mars 2014.\nEubactéries : 12 286 génomes entièrement séquencés et 20 403 partiellement, au 4 mars 2014. Exemples :\nHaemophilus influenzae Rd. ( premier génome cellulaire séquencé, en 1995 )\nEucaryotes : 314 génomes entièrement séquencés et 6660 partiellement, au 4 mars 2014. Exemples (les 5 premiers cités sont les 5 premiers publiés, avec la réserve citée pour celui de l’Homme) :\nSaccharomyces cerevisiae (levure, premier eucaryote à être séquencé en 1997, plusieurs souches séquencées de nos jours)\nCaenhorabditis elegans (ver nématode)\nDrosophila melanogaster (mouche du vinaigre)\nArabidopsis thaliana (arabette, petite plante de la famille du chou)\nHomo sapiens (nous, l’espèce humaine : plusieurs individus séquencés dont Watson)\nNeurospora crassa ( champignon ascomycète )\nAnopheles gambiae (moustique)\nTakifugu rubripes (fugu, poisson-ballon consommé au japon)\nPlasmodium falciparum (parasite intracellulaire responsable du paludisme)\nOriza sativa (riz : deux sous-espèces séquencées ; japonica et indica)\nDe nombreux projets de séquencage sont actuellement en cours de réalisation, ou à l’étude. Ces projets se comptant par milliers, il serait trop long de tous les énumérer ici…\nPour plus d’informations à ce sujet le site GOLD (Genome OnLine Database) qui recense tous les génomes séquencés, ainsi que les projets en cours.\nLe séquençage d’un génome : comment ça marche ?\nDepuis la fin des années 1970 et l’avènement des techniques de la biologie moléculaire, il est possible de séquencer un brin d’ADN, c’est-à-dire de lire l’enchaînement, ou séquence, des nucléotides constitutifs de cette molécule. Cela se ramène en fait à déterminer la succession des bases, la seule partie variable des nucléotides (pour plus d’informations sur les principes de la lecture de l’ADN, voir le document « Le séquençage d’un ADN »). Cependant, les techniques actuelles ne permettent de lire, à chaque opération de séquençage, qu’un millier de bases au plus. Or la partie « séquençable » du génome humain comprend 2,9 milliards de paires de bases (gigabases, Gb) ! Il est donc impossible de lire l’ensemble d’un génome en une fois. Il est, de toute façon, impossible de manipuler des molécules d’ADN de plusieurs dizaines, voire centaines de millions de bases (l’ordre de grandeur de celles qui constituent les chromosomes humains).\nOn parle de « partie séquençable » du génome humain (2,9 Gb, pour un total de 3,2 Gb). En effet, il n’est pas possible, techniquement, de déterminer la séquence de certaines régions presque exclusivement constituées de séquences répétées, telles que les centromères, les télomères ou les bras courts de certains chromosomes. Il y a deux raisons à cela : d’une part, il est difficile d’isoler des fragments d’ADN de taille convenable issus de ces régions ; d’autre part, il n’est pas possible de reconstituer la séquence complète à partir de morceaux de séquences pratiquement identiques.\nDe ce fait, seule la séquence de la partie dite euchromatique du génome peut être effectivement déterminée.\nDans la suite, quand seront indiqués des pourcentages de l’ADN humain séquencé, c’est toujours à ces 2,9 milliards de paires de base que l’on se référera, et non aux 3,2 milliards du génome dans son entier.\nLe principe de base, dans tout séquençage d’un génome, consiste donc à fragmenter de façon aléatoire ce génome – ou de grands morceaux d’ADN dérivés du génome – pour obtenir des morceaux d’ADN de quelques milliers de paires de bases, faciles à manipuler. Les extrémités d’un grand nombre de ces petits fragments sont alors séquencées. La séquence complète du génome – ou du grand morceau de génome – est ensuite reconstruite à partir de ces séquences unitaires, ou lectures, sur la base des chevauchements entre les séquences (si les séquences sont chevauchantes, c’est que les fragments d’ADN dont elles dérivent ont une partie de leur longueur en commun ; la cassure étant aléatoire, les molécules d’ADN de l’échantillon ne sont pas toutes cassées aux mêmes endroits).\nPrincipe général du séquençage d'un génome\nCette méthode présente toutefois certaines difficultés : tout d’abord, pour obtenir suffisamment de séquences chevauchantes et pour réduire au maximum les erreurs de séquençage, il faut atteindre un certain niveau de redondance, c’est-à-dire produire une quantité de séquences aléatoires représentant plusieurs fois la longueur de la séquence d’intérêt. Ceci conduit à un nombre très important de séquences à réaliser… Dans nombre de projets de séquençage, on détermine ainsi la séquence de 10 fois plus d’ADN que n’en comporte le génome étudié : on parle d’une profondeur de 10X. Dans ce cas de figure, chaque base de la séquence cible a été lue 10 fois en moyenne, mais certaines l’ont été davantage, d’autres moins et d’autres encore pas du tout. Même à 10X, des « trous » peuvent donc subsister, laissant la séquence finale très légèrement incomplète.\nLe séquençage, compléments: fragments séquencés et lois statistiques\nDans un projet de séquençage, le rapport entre la longueur de l’ensemble des séquences lues mises bout à bout et la longueur du génome cible est nommé profondeur. Par exemple, si l’on séquence 25 millions de bases (Mb) pour un génome de 5 Mb, on a une profondeur de 5 équivalents génome, ce que l’on note 5X. Plus la profondeur est importante, plus nombreuses seront les lectures chevauchantes que l’on pourra assembler, et plus grande sera la fraction du génome couverte. Ceci permet d’obtenir une séquence finale la plus complète possible, avec un minimum de “trous”, régions non séquencées. Toutefois, si l’augmentation de la profondeur du séquençage permet de diminuer ces lacunes de séquence, il arrive un seuil où il est plus économique de boucher les quelques trous restants de façon ciblée. Par ailleurs, il peut y avoir des biais de représentations qui font que certaines régions sont moins couvertes, voire pas du tout.\nIl est possible de donner une représentation mathématique de ces trous dans la séquence finale. Cela demeure toutefois idéalisé et l’obtention d’une couverture donnée nécessite en pratique une profondeur souvent supérieure à la profondeur suffisante en théorie. C’est particulièrement vrai dans le cas de grands génomes comme celui de l’homme.\nSi la longueur moyenne n des lectures est très petite devant la longueur L de la séquence cible et que le nombre de lectures est très grand, alors on peut considérer que la probabilité qu’une base de la séquence cible soit représentée dans x lectures suit une loi de Poisson, Pxe -P / x ! où P est la profondeur. Voyons alors le résultat de l’assemblage pour deux valeurs de la profondeur, en choisissant comme séquence cible le génome humain.\nSoit L la taille de l’ADN étudié.\nSoit N le nombre de nucléotides total des lectures.\nL = 3.109 nucléotides\nN = 3.1010 nucléotides\nN = 9.109 nucléotides\nOn a donc la profondeur de lecture : profondeur P = N / L\nP = (3.1010) / (3.109) = 10 X\nP = (9.109) / (3.109) = 3 X\nSoit n la taille de chaque lecture.\nn = 1000 nucléotides\nFraction d’ADN représenté par au moins une lecture :\nADN lu = 1 – e -N/L\n(remarque : ceci dérive de la probabilité, selon la loi de Poisson donnée plus haut, qu’une base ne soit lue par aucune lecture)\nADN lu = 1 – e-10 = 0,9999546\nsoit plus de 99,99 %\nADN lu = 1 – e-3 =\nsoit un peu plus de 95 %\nN_trous = (N/n).e -N/L\n(3.1010/103) e-10 =\n3.107 e-10 =\n9.106 e-3 =\nTaille moyenne des trous :\nT_trous = L.n/N\n3.109 x 1000 / 3.1010 =\n3.109 x 1000 / 9.109 =\nCe calcul montre que pour un même génome de 3 milliards de paires de bases, on obtient une couverture finale très différente, selon qu’une profondeur de 3 ou de 10 est choisie pour le séquençage.\nCes parties de la séquence cible qui ne sont pas couvertes par les lectures effectuées au hasard constituent une seconde difficulté : du fait de ces trous, le résultat de l’assemblage des lectures chevauchantes ne donne pas une séquence continue, mais plusieurs blocs de séquence continue, ou « contigs », qu’il peut être difficile dans un premier temps d’orienter et d’ordonner les uns par rapport aux autres, et d’assigner à un emplacement dans le génome. Séquencer davantage améliore la situation, mais un travail ciblé peut être nécessaire pour combler certains trous.\nCes difficultés expliquent que les premiers génomes séquencés ont d’abord été des génomes de très petite taille : ceux de virus. Les progrès techniques (mise au point des séquenceurs automatiques, augmentation de la puissance des ordinateurs, algorithmes bio-informatiques pour l’assemblage des séquences…) ont ensuite rendu possible le séquençage de génomes de plus en plus grands : le premier génome bactérien ( Haemophilus influenzae) en 1995, puis le premier eucaryote entier (Saccharomyces cerevisiae) en 1996. La mise sur pied de grands centres de séquençage, l’afflux de fonds publics ou caritatifs et la réduction des coûts du séquençage, au cours de la décennie écoulée, ont permis de s’attaquer aux génomes des eucaryotes supérieurs, dont celui de l’Homme.\nDe façon schématique, deux stratégies de séquençage sont actuellement utilisées :\nla stratégie du séquençage aléatoire global, « whole genome shotgun » ;\nla stratégie « clone par clone », ou du « shotgun hiérarchique », qui suppose la construction préalable ou concomitante d’une carte physique. Cette dernière stratégie a notamment été utilisée par le consortium international en charge du séquençage du génome humain.\nEn fait, on voit se développer de plus en plus de stratégies « mixtes », comme celle utilisée par le consortium public responsable du séquençage du génome de la souris. L’opposition apparemment tranchée entre ces deux stratégies est de moins en moins nette. Pour plus de clarté, nous les expliquerons cependant séparément.\nStratégie du séquençage aléatoire global\nCette stratégie de séquençage « aléatoire » appliquée à l’ensemble du génome (ou « whole genome shotgun ») a été utilisée dès les débuts du séquençage, en 1982, pour venir à bout du génome du bactériophage lambda. C’est la stratégie retenue aujourd’hui pour tous les génomes bactériens. On l’associe plus volontiers aux sociétés privées, telles que Celera Genomics ou Syngenta, parce qu’elle est rapide et économique. Celera a ainsi accompli le séquençage de plusieurs organismes par une stratégie aléatoire globale. Toutefois, il faut remarquer que, pour de grands génomes comme celui de l’Homme, ces sociétés se sont souvent appuyées sur des données de cartographie établies par les chercheurs académiques. En outre, pour ces grands génomes, on tend aujourd’hui à utiliser des stratégies mixtes, mêlant séquençage aléatoire global et « clone par clone ».\nLe séquençage du génome humain a donné lieu à une lutte médiatique entre Celera Genomics et le consortium international responsable du « projet Génome humain », qui utilisait quant à lui une stratégie « clone par clone ». Celera Genomics a prétendu qu’elle avait procédé essentiellement par séquençage aléatoire global, mais la réalité est plus compliquée (voir plus bas). En revanche, des génomes comme celui de l’anophèle, à l’état d’ébauche, ont bien été séquencés selon cette seule stratégie. Les données du projet de séquençage du génome de ce moustique seront fournies ci-dessous à titre d’exemple, mais nous allons d’abord exposer le principe du séquençage aléatoire global à partir d’un projet plus modeste, celui de la première bactérie séquencée : Haemophilus influenzae Rd.\nLa technique « shotgun » repose sur un principe simple : découper un génome en un grand nombre de fragments de petite taille. Les extrémités d’une partie de ces fragments sont ensuite séquencées, puis ces séquences sont assemblées sur la base de leurs chevauchements grâce à des programmes informatiques pour essayer de produire une séquence complète. Les difficultés d’une telle technique sont à deux niveaux : (1) avoir assez de fragments pour couvrir le génome dans son entier, et (2) réussir l’assemblage.\nCombien de fragments pour un génome ?\nLe génome d’Haemophilus influenzae Rd comporte 1,8 millions de paires de bases (Mb). Le centre de séquençage privé TIGR (« The Institute for Genomics Research » de Rockville, dans l’état du Maryland aux États-Unis) en a déterminé la séquence et l’a publiée en 1995 dans la revue Science. Comment les chercheurs de TIGR s’y sont-ils pris ? Pour commencer, ils ont cassé le génome de cette bactérie par un moyen mécanique et ont constitué une « banque » de petits fragments d’ADN d’environ 2000 paires de bases (pb). Ils ont ensuite séquencé près de 20 000 de ces fragments, à une extrémité ou aux deux, et ont retenu, en vue de l’assemblage, plus de 24 000 lectures (produits d’une opération unitaire de séquençage). D’une longueur moyenne de 470 paires de bases, ces lectures représentent plus de 11,6 Mb séquencés, soit 6,3 fois la longueur du génome d’H. influenzae (profondeur de 6,3X).\nPourquoi avoir séquencé autant ? Un raisonnement naïf nous fait conclure qu’il suffit de 4000 lectures environ pour couvrir tout le génome d’ H. influenzae (4000 x 470 pb = 1,88 Mb). Il n’en est rien ! En effet, l’ADN est extrait de nombreuses cellules (pour disposer de quantités suffisantes) et cassé de façon aléatoire ; chaque copie du génome est donc cassée en des points différents et les fragments obtenus sont chevauchants, comme nous l’avons déjà indiqué. En outre, l’échantillonnage des fragments en vue du séquençage se fait, là encore, au hasard (chaque lecture peut être assimilée à un tirage aléatoire d’un morceau de la séquence du génome). Par conséquent, si l’on prend juste le « bon » nombre de lectures (profondeur de 1X), un grand nombre d’entre elles couvriront les mêmes régions… L’ensemble du génome ne sera pas couvert.\nMais un ensemble de 4000 lectures couvrant parfaitement le génome sans aucun chevauchement, à supposer qu’on puisse l’obtenir, ne serait pas non plus d’une grande utilité. Comment alors ordonnerait-on ces séquences entre elles pour reconstituer le puzzle ? Le fait de disposer de fragments qui se chevauchent permet « d’assembler » les séquences lues à partir de ces fragments sur la base de leur similitude, et d’obtenir des blocs de séquence de plus grande taille. Cela permet aussi de corriger les éventuelles erreurs de séquençage grâce aux différentes lectures couvrant la même zone. Avec la quantité de fragments que l’on séquence, croissent donc : la longueur des blocs de séquence que l’on est en mesure d’assembler, la fraction du génome couverte, ainsi que la précision de la séquence.\nPourquoi produire une quantité de séquence équivalent à plusieurs fois la longueur de l'ADN séquencé ?\nÀ partir d'un exemple très théorique, cette animation Flash (fichier swf) explique comment se réalise un séquençage. Une profondeur de 1X ne peut pas permettre d'obtenir une séquence complète. Il est ainsi nécessaire de séquencer bien plus d'ADN.\nL’assemblage laisse des trous\nRevenons à Haemophilus influenzae et voyons le résultat de l’assemblage de TIGR à 6X : la comparaison des 24 000 lectures entre elles (une opération gourmande en moyens informatiques) a permis d’assembler in fine 140 grands blocs de séquence continue, ou contigs (pour « contiguous sequence »). L’on pouvait s’attendre, sur la base d’un calcul statistique, à ce que les 140 trous correspondants soient petits : moins de 100 paires de bases en moyenne. Toutefois, on ne savait rien à ce stade de la position respective des contigs dans le génome : il restait à les ordonner et à les orienter.\nPour déterminer les relations de voisinage des contigs, les chercheurs de TIGR ont alors considéré les « liens clones », c’est-à-dire les lectures obtenues aux deux extrémités d’un même fragment d’ADN, et ont recherché parmi ces paires celles qui s’ancraient dans deux contigs différents. Cela permet de jeter un pont entre les deux contigs et de les orienter. En outre, le fragment d’ADN « à cheval » sur le trou entre les deux contigs peut faire l’objet d’un séquençage supplémentaire, ce qui permet de combler le trou.\nLes chercheurs de TIGR ont réussi par ce moyen à assembler les 140 contigs en 42 échafaudages plus vastes, et à combler les 98 trous ainsi enjambés. Restait donc 42 trous « physiques » que n’enjambait aucun fragment d’ADN parmi ceux retenus pour le séquençage. Diverses méthodes ont été utilisées pour les combler, dont le séquençage des extrémités de fragments d’ADN de plus grande taille (20 000 paires de bases), susceptibles de fournir des liens clones sur une plus grande échelle. Cet effort de finition a livré la séquence complète du génome : les 1 830 137 paires de bases du chromosome circulaire d’Haemophilus influenzae Rd ont été déposées dans les bases de données et livrées à la curiosité des scientifiques du monde entier.\nLa comparaison des séquences obtenues permet de reconstituer le génome\nAnimation Flash (fichier swf)\nLimites et intérêts de la stratégie du séquençage génomique aléatoire global\nLe séquençage aléatoire global s’est aujourd’hui imposé dans le cas des génomes bactériens. Comment s’applique-t-il aux génomes plus grands et plus complexes ? L’exemple du séquençage du moustique africain Anopheles gambiae, le vecteur principal du paludisme, va permettre d’éclairer certaines limites de cette stratégie.\nL’intérêt principal du séquençage aléatoire global réside dans le fait qu’il n’est pas nécessaire de réaliser une carte physique préalable, étape longue et fastidieuse, comme on le verra dans le chapitre suivant. Mais l’assemblage est rendu, de ce fait, particulièrement difficile : une très grande puissance de calcul est nécessaire, et le résultat n’est pas assuré… Un génome tel que celui de l’anophèle, long de 280 Mb (plus de 150 fois la taille du génome d’Haemophilus influenzae Rd), pose en effet de toutes autres difficultés que celui d’une bactérie : il est non seulement 100 fois plus long, mais aussi beaucoup plus riche en séquences répétées. Enfin, il est diploïde, et l’existence d’une hétérozygotie importante introduit des incertitudes et des erreurs lors de l’assemblage (les lectures assemblées dans la stratégie du séquençage aléatoire global peuvent en effet provenir de l’un ou l’autre des deux chromosomes homologues, ce qui n’est pas le cas, nous le verrons, dans la stratégie « clone par clone »). Comment déterminer alors, si deux séquences très similaires correspondent à des allèles d’un même locus (elles sont alors légitimement assemblées), ou à des séquences provenant de deux endroits différents du génome, issues d’une duplication récente et ayant peu divergé ?\nLe projet de séquençage de l’anophèle, achevé en 2002, a été conduit principalement par Celera (90 % des lectures) et par le Genoscope. Plus de 4,5 millions de lectures ont été produites, pour la plupart appariées, ce qui représente une profondeur de 10X. Une différence avec l’exemple précédent est que les lectures proviennent du séquençage des extrémités de fragments d’ADN de tailles plus variées : à une majorité de petits fragments (2,5 et 10 kb) s’ajoutent cette fois une part importante de fragments de 50 kb, voire 100 kb, qui procurent des liens clones « à longue portée ». Grâce à de tels liens clones, les 19 000 contigs produits par l’assemblage ont pu être réunis en 9000 « échafaudages ». On voit donc qu’il s’agit d’une version très morcelée de la séquence du génome de l’anophèle, même si 90 % de la séquence est comprise dans 300 grands échafaudages. Si la finition d’une telle ébauche génomique était entreprise (rien n’est moins sûr !), son coût et sa difficulté seraient sans commune mesure avec ceux de la finition de la séquence d’H. influenzae. Pour un tel génome, et a fortiori pour celui d’un mammifère, la stratégie du séquençage aléatoire global est donc rapide et économique… si l’on compte s’en tenir à une ébauche de la séquence du génome. Cela convient à certains usages de la séquence, beaucoup moins à d’autres. En particulier, l’annotation précise des gènes nécessite une séquence de qualité « finie ».\nPour aller plus loin, et pour revenir sur certains aspects très médiatisés de ces séquençages génomiques, lire ci-dessous les commentaires sur la version de la séquence du génome humain proposée par Celera genomics.\nCommentaires sur la version du génome humain obtenue par Celera\nLes difficultés évoquées au sujet du génome de l’anophèle sont plus épineuses encore dans le cas du génome d’un mammifère tel que l’homme, 10 fois plus grand et constitué à près de 50 % de séquences répétées (notons tout de même que le polymorphisme, chez l’homme, est moins important que chez l’anophèle). L’intérêt de la stratégie du séquençage aléatoire global, dans sa forme « pure », reste donc discuté pour de tels grands génomes. Les génomes de la souris et du rat ont d’ailleurs été récemment séquencés selon une stratégie « mixte », mêlant séquençage aléatoire global et effort cartographique.\nCette mise en garde pourra surprendre : certains lecteurs se souviennent peut-être des annonces spectaculaires de la société Celera Genomics en 2000. Le bouillant fondateur de Celera, Craig Venter, prétendait alors avoir obtenu une version de qualité du génome humain par la stratégie du séquençage aléatoire global. Du fait de ces annonces et de la polémique qui a suivi, il est intéressant de revenir sur quelques aspects de ce séquençage.\nCelera a effectivement produit près de 15 Gb de lectures aléatoires à partir de l’ADN de plusieurs individus, soit une profondeur de 5X. Toutefois, nous ignorons si Craig Venter et ses collaborateurs ont tenté d’assembler ces seules séquences, et, si oui, quel a été le résultat de cet assemblage à 5X… On peut penser qu’une telle tentative était vouée à l’échec : certains chercheurs estiment qu’il faudrait une profondeur bien supérieure à 10X pour atteindre une couverture satisfaisante du génome humain par une stratégie de séquençage aléatoire global.\nQuoi qu’il en soit, l’équipe de Celera ne s’en est pas tenue à ses seules données. Elle y a ajouté des données de séquence « empruntées » au consortium public, le plus légalement du monde, puisque ces données, contrairement aux leurs, sont librement accessibles aux chercheurs du monde entier. Pour effectuer cet emprunt, Venter et ses collègues ont cassé informatiquement, de deux façons différentes, les séquences assemblées par le consortium ; ils ont ainsi produit des pseudo-lectures régulièrement réparties et parfaitement chevauchantes, dont ils affirment qu’elles ne représentent « que » 2,9X – un petit appoint, selon eux, à leurs 5X de séquence. En fait, ces pseudo-lectures correspondent aux 7,5X de séquence publique qui avaient servi à assembler la séquence « décomposée » : elles retiennent l’essentiel de l’information d’assemblage. L’« emprunt » est donc bien plus conséquent que Venter veut bien le reconnaître. Mais l’utilisation des données du public ne s’est pas arrêtée là : Celera s’est également servi de la carte physique établie par le consortium international pour réaliser un assemblage « compartimenté ». Diviser la difficulté de l’assemblage en regroupant localement les lectures : une philosophie assez éloignée du séquençage aléatoire global.\nQuel a été le résultat de tous ces emprunts ? Étonnamment, la séquence assemblée par Celera et décrite dans un article de la revue Science, en février 2001, n’était pas spectaculairement meilleure que celle du consortium public, comme on aurait pu l’attendre. Elle ne couvrait que 90 % du génome humain, le reste étant sous la forme de millions de lectures d’environ 600 bases, inutilisables car non assemblées. Et surtout, il demeurait près de 170 000 trous…\nToutefois, ces querelles de chiffres ont pesé peu, à l’époque, face aux effets d’annonce qui ont fait grimper l’action de Celera.\nIl faut reconnaître que cette initiative privée a servi d’aiguillon au projet public : c’est en partie à Craig Venter que l’on doit de disposer, depuis avril 2003, d’une version de référence de la séquence du génome humain, gratuite et accessible sans restriction.\nStratégie « clone par clone »\nCette stratégie « clone par clone » (dite encore du « shotgun hiérarchique ») est celle qui a été adoptée par le consortium international pour le séquençage du génome humain (HGP : Human Genome Project). Il s’agit d’une démarche en deux temps : établissement d’une carte physique, ordonnant des clones de grande taille dans le génome humain, puis séquençage (de type « shotgun ») de ces clones. La carte peut aussi être construite en même temps que le séquençage progresse. Une aide essentielle dans la construction d’une carte physique est apportée par les cartes de liaison.\nLes cartes de liaison : pour se repérer dans le génome\nCes cartes permettent de disposer de marqueurs, c’est-à-dire de points de repère, ordonnés le long des chromosomes par la mesure de leur liaison deux à deux. La nature de cette liaison dépend de la nature de la carte. On utilise deux types d’approches pour construire une carte de liaison.\nUne première approche est l’utilisation de marqueurs génétiques polymorphes, qui sont ordonnés grâce à l’étude des fréquences de recombinaison génétique (mesure de leur « liaison génétique »). Les cartes obtenues de cette manière sont nommées « cartes génétiques ». La première carte génétique de l’ensemble du génome humain remonte à 1987 ; elle reposait sur des marqueurs de type RFLP, obtenus grâce aux enzymes de restriction. Les marqueurs privilégiés depuis le début des années 90 sont les microsatellites. En 1996, le laboratoire Généthon a publié une carte génétique de référence du génome humain, ordonnant 5264 microsatellites, qui est encore très utile aujourd’hui. Elle a notamment permis de cartographier de nombreux gènes associés à des maladies génétiques.\nDans le second type de cartes de liaison, on utilise des marqueurs moléculaires non nécessairement polymorphes. Il s’agit de séquences d’ADN présentes de manière unique dans le génome ( STS : Sequence Tagged Sites), ce qui inclut aussi les marqueurs génétiques. On ordonne ces marqueurs en mesurant la fréquence avec laquelle deux d’entre eux sont séparés par une cassure induite par rayons X. On parle dans ce cas de cartes obtenues par hybrides d’irradiation.\nLes marqueurs moléculaires des cartes de liaison sont précieux pour valider et ancrer les cartes physiques le long des chromosomes.\nLa carte physique : une collection de clones\nL’établissement d’une carte physique a principalement pour but de faciliter l’établissement de la séquence finale du génome. Dans la stratégie du séquençage « clone par clone », la phase de séquençage aléatoire est conduite sur chacun des grands fragments ordonnés de la carte, et non sur l’ensemble du génome. Cela permet de réduire la difficulté d’assemblage à des fragments de 300 milliers de paires de bases au maximum, au lieu des 3 milliards du génome entier. Cette stratégie permet aussi de focaliser le travail de finition : on peut repartir à volonté du fragment sur lequel on travaille pour parfaire le séquençage, boucher les trous, etc. Il est en outre plus facile de répartir le travail entre plusieurs collaborateurs avec un minimum de coordination, de vérifier la validité de la séquence assemblée, et d’éviter en partie les problèmes posés par le polymorphisme (dans un séquençage aléatoire global, même en partant d’un seul individu, on assemble en effet des séquences qui proviennent de deux chromosomes).\nPour construire une carte physique, on casse le génome (humain dans notre cas) en fragments de grande taille, afin de couvrir l’ensemble du génome avec relativement peu de fragments. La carte construite par le consortium international a permis ainsi de définir un « chemin de recouvrement minimal » de 26 614 fragments, pour un total de 2 841 366 484 paires de bases.\nLes fragments nécessaires à la réalisation d’une carte physique mesurent en moyenne plus de 100 000 paires de bases (100 kilobases). Le premier problème qui s’est posé à la communauté scientifique a été de trouver des vecteurs supportant des inserts d’une telle taille.\nFabrication d'une banque d'ADN génomique\nL’ADN génomique est fragmenté. Chaque fragment est inséré dans un vecteur, puis l’ensemble vecteur-insert est intégré dans une cellule (bactérie, levure…) qui, après étalement, se multiplie pour former une population de cellules toutes identiques (un clone), visible sous la forme d’une colonie.\nOn constitue alors une collection de clones cellulaires ayant intégré un couple insert-vecteur. Cette collection est nommée « banque d’ADN génomique », puisque ces clones constituent une représentation, que l’on espère la plus complète possible, de l’ADN génomique de l’organisme à séquencer.\nLes vecteurs les plus utilisés en biologie moléculaire, plasmides et cosmides, ne permettent pas de cloner des fragments de plus de 45 kilobases (45 000 paires de bases). Ils sont donc inadaptés au clonage d’inserts suffisamment grands pour réaliser une carte physique. Dans un premier temps, les chercheurs ont utilisé les chromosomes artificiels de levure ( YAC : Yeast Artificial Chromosome). Ces vecteurs permettaient l’insertion de fragments allant jusqu’à 1 000 kilobases. Mais ils ont été abandonnés : en effet, des échanges de fragments d’ADN avaient lieu… Certains clones « chimériques » ne correspondaient ainsi plus aux inserts clonés.\nLes vecteurs qui ont été utilisés pour établir la carte physique du génome humain sont principalement les chromosomes artificiels bactériens ( BAC : Bacterial Articifial Chromosome). Bien que de plus faible capacité que les YAC (seulement 300 kilobases au maximum, 150 kilobases en moyenne), ils n’en présentent pas les graves défauts. Des vecteurs dérivés du phage P1 (les PAC), de même capacité, ont aussi été utilisés.\nOrdonner les clones\nLa première étape a donc consisté à obtenir des clones de grande taille, de l’ordre de 100 à 200 kilobases. Il a fallu ensuite ordonner ces clones, c’est-à-dire les positionner les uns par rapport aux autres, et le long des chromosomes humains.\nLe positionnement des clones les uns par rapport aux autres fait appel à différentes techniques, dont le point commun est de rechercher les parties communes entre différents clones. Parmi ces techniques, on peut citer :\nl’utilisation des profils de restriction : on digère les clones grâce à des enzymes de restriction, puis on recherche si différents clones présentent des fragments de même taille. Il y a alors de bonnes chances que ces clones possèdent une région génomique en commun, que les enzymes de restriction coupent aux mêmes endroits.\nl’hybridation des clones entre eux : si deux clones peuvent s’hybrider, c’est qu’ils possèdent des séquences communes.\nl’utilisation des STS (Sequence Tagged Sites) : si deux clones peuvent s’hybrider avec l’une de ces séquences uniques du génome humain, c’est qu’ils possèdent une région commune.\nL’on peut alors positionner le long des chromosomes les groupes de grands clones chevauchants ainsi constitués, en particulier grâce aux cartes de liaison.\nUne fois tous les grands clones ordonnés et positionnés le long du génome humain, on dispose d’une carte physique du génome. On peut alors sélectionner un ensemble minimal de grands clones chevauchants (un chemin de recouvrement) en vue de les séquencer. Concrètement, le choix des grands clones à séquencer peut être réalisé en même temps que le séquençage progresse, ce qui permet, dans une certaine mesure, de minimiser les régions de chevauchement entre les grands clones.\nUne stratégie « shotgun » pour le séquençage final\nPour séquencer les clones de grande taille, une stratégie de type « shotgun » (séquençage aléatoire) est utilisée : chaque clone de grande taille est découpé en un grand nombre de fragments de petite taille (environ 2 kilobases – 2 000 paires de bases), dont les extrémités sont séquencées individuellement… Ces séquences sont ensuite assemblées, afin de fournir une séquence aussi complète que possible du clone de grande taille. L’assemblage des séquences des clones de grande taille (aux trous près, qui peuvent demeurer entre ces clones) donne la séquence du génome humain.\nAvancement du Projet Génome Humain\nLa carte physique a été achevée par le consortium international début 2000. Elle couvrait alors 97 % du génome humain. Le séquençage à 7,5X à partir de cette carte avait permis d’assembler une ébauche de la séquence qui couvrait, quant à elle, 87 % du génome, dont 28 % étaient déjà sous forme de séquence « finie ».\nGrâce au passage de 7,5X à 10 X et à une finition ciblée sur les zones de faible qualité et les trous, le consortium est passé de cette ébauche à une séquence complète du génome humain, célébrée en avril 2003. Cette séquence couvre 99 % du génome humain, avec une précision de 99,99 %.\nRésumé des méthodes de séquençage\nApport des génomes séquencés\nÀ quoi bon dépenser beaucoup d’argent public ou de dons pour séquencer des génomes ?\nC’est une question que l’on peut – et que l’on doit – se poser. La réponse n’est pas simple, car les séquençages complets de génomes peuvent avoir des utilités très diverses, aussi bien pour la médecine, la recherche appliquée, que pour la recherche fondamentale (sans laquelle, rappelons-le, il ne peut exister de recherche appliquée).\nNous proposons ici, en guise de conclusion de ce document sur le séquençage des génomes, quelques exemples succincts d’apports possibles des séquençages génomiques.\nConnaissance des gènes\nLa détermination de la séquence complète d’un génome n’est que la première étape de son étude. Il est en effet nécessaire de déterminer ensuite où, exactement, se situent les gènes et leurs régions régulatrices. Cette « annotation » est toujours en cours pour le génome humain, même si de très nombreux gènes ont déjà été repérés. On peut espérer dresser dans un avenir proche un inventaire relativement exhaustif et précis des gènes humains. Le séquençage complet du génome constitue une étape nécessaire pour arriver à ce résultat. L’étude des seuls ARN messagers s’est en effet avérée rapidement insuffisante. De plus, l’obtention d’une séquence complète du génome humain permet d’éviter que les chercheurs du monde entier se lancent dans des recherches de gènes de manière redondante, et donc moins efficace et plus onéreuse.\nCette connaissance exhaustive des gènes humains est un effort de recherche fondamental. De manière directe, ces résultats n’ont pas d’application. Toutefois, cette connaissance des gènes permet, ensuite, d’aboutir à de nombreuses applications pratiques.\nPar ailleurs la connaissance des génomes de plusieurs organismes permet, d’une part, de faciliter l’identification des gènes via des comparaisons entre séquences génomiques, et d’autre part, de comparer les gènes eux-mêmes. Ces recherches, qui peuvent être menées sur des gènes présents dans des organismes phylogénétiquement très distants (de nombreux programmes de séquençage étant en cours), permettent de mieux cerner la fonction et l’importance de ces gènes, ainsi que leur histoire évolutive. Ces futures découvertes devraient être profitables à toutes les branches des sciences de la vie, que cela soit le développement embryonnaire, l’immunologie, les neurosciences, etc.\nRecherche liée aux maladies génétiques\nDe nombreuses maladies humaines sont dues à l’expression (ou au défaut d’expression) d’allèles d’un unique gène (on parle en général d’allèles « mutés », même si cette terminologie est discutable) : ce sont les « maladies génétiques ». Pour espérer soigner et surtout diagnostiquer ces maladies, il est important de savoir quel est le gène impliqué (il arrive que ce ne soit pas toujours le même gène d’un malade à un autre), et quel est l’allèle (ou les allèles) responsable(s).\nSans séquence complète du génome, la tâche est souvent très difficile : à partir d’études menées sur des familles atteintes de ces maladies, les chercheurs remontent jusqu’à une « région » chromosomique portant la mutation en question. Il faut ensuite chercher « à l’aveugle » les centaines de gènes de cette région, pour essayer de trouver le gène impliqué. Avec la séquence complète annotée, dès lors qu’une région chromosomique est impliquée, on dispose immédiatement de la liste des gènes présents dans cette région. En se basant sur les propriétés connues (ou supposées, par analogie) de ces gènes, on peut alors très rapidement orienter les études vers les quelques gènes « candidats » qui ont le plus de chance d’être impliqués dans la pathologie étudiée (il arrive toutefois que le gène affecté soit un gène qu’aucun indice ne pouvait faire suspecter, et que seule l’étude génétique pouvait donc impliquer, ce qui fait toute la puissance de cette approche du « clonage positionnel »). L’ensemble de l’analyse est ainsi plus rapide, moins cher à réaliser.\nCeci devrait donc se traduire dans un avenir proche par l’isolement de très nombreux gènes responsables de maladies génétiques. Ces découvertes pourront alors être le premier pas vers la mise au point de meilleurs traitements de ces maladies, voire de propositions de thérapies définitives. C’est ainsi qu’un traitement prometteur de l’Ataxie de Friedreich, directement issu de la connaissance du gène et de sa fonction, a été développé en 1999 par une équipe française à l’Hôpital Necker.\nConnaître le génome humain dans son intégralité permet donc d’envisager la connaissance des allèles des gènes responsables de maladies génétiques. Ceci pourra faciliter la mise au point de test diagnostics à partir de l’ADN.\nPour les maladies les plus graves, le diagnostic génétique peut être pratiqué avant la naissance dans les familles à risque. De manière générale, la mise au point de diagnostics génétiques permet d’affiner l’identification précise de la maladie atteignant le patient ; ceci ne peut que conduire à une meilleure prise en charge de cette maladie.\nRecherches de susceptibilités\nConnaissant le génome humain, et après étude des positions variables d’une personne à une autre, il sera plus facile d’identifier les facteurs génétiques de susceptibilité à de nombreuses maladies.\nPar exemple, des maladies comme le diabète ou l’artériosclérose, ont une composante génétique correspondant à une multitude de facteurs. Chaque facteur ne contribue à la maladie finale que pour une faible part. De plus, la maladie est en fait causée par l’interaction complexe entre ces facteurs et les conditions de l’environnement. Tout ceci fait qu’il est encore extrêmement difficile de dire à l’heure actuelle ce qui cause ces maladies…\nArriver à identifier les facteurs génétiques impliqués, et démêler cet écheveau devrait permettre de mieux comprendre la genèse de ces maladies, et par là même d’aboutir à de nouveaux traitements, à des mesures de prévention plus efficaces.\nPuces à ADN et transcriptome\nLa connaissance de génomes complets, annotés, permet la réalisation de puces à ADN, et donc l’étude du transcriptome, au-delà de celle du génome. Les puces à ADN sont des outils permettant de mesurer et visualiser rapidement les différences d’expression entre les gènes, à l’échelle d’un génome complet. Il s’agit donc de l’étude directe et qualitative du transcriptome, c’est-à-dire de l’ensemble du matériel génétique exprimé dans une cellule donnée.\nLes puces à ADN (qui n’ont strictement rien à voir avec les ordinateurs et les puces électroniques !) sont des lames recouvertes de sondes correspondant aux gènes appartenant au génome d’un organisme. Chaque sonde, donc chaque gène, est placé à un endroit précis et identifié sur la plaque. La puce permet ensuite de comparer l’expression des gènes entre deux souches de cellules (une souche sert de témoin, l’autre correspondant à l’étude menée) : pour cela, les ARN de ces cellules sont extraits, rétro-transcrits en ADN, et marqués à l’aide d’un fluorochrome (vert pour une souche, rouge pour l’autre). L’ensemble est alors incubé avec la puce à ADN : les ADNc correspondants aux ARN des cellules s’hybrident avec les sondes portées par la puce. La puce est ensuite lue, gène par gène, à l’aide d’un laser. On « lit » ainsi trois types de gènes : (1) des gènes exprimés de manière plus importante dans la première souche, dont les sondes ont fixé un plus grand nombre d’ADNc issus de la première souche, et qui fluorescent donc essentiellement en vert ; (2) des gènes exprimés de manière plus importante dans la deuxième souche, qui apparaissent plutôt en rouge ; (3) des gènes exprimés à des niveaux comparables.\nLes trois grandes étapes du processus sont schématisées : la fabrication des puces, l’hybridation, puis l’obtention des résultats.\nAttention : ce schéma est extrêmement simplifié par rapport à la réalité !\nDe nombreuses études utilisant ces puces à ADN sont d’ores et déjà menées chez la levure, dont le génome est maintenant connu depuis plusieurs années. De telles études sont appelées à se développer chez l’Homme, ainsi que pour toutes les espèces modèles dont le génome est séquencé intégralement.\nQuelques informations, illustrations, etc. sont disponibles sur le site de la plate-forme transcriptome du service de génomique du département de biologie de l’École normale supérieure. Ce service commun réalise et exploite des puces à ADN pour le compte des laboratoires de biologie de l’École normale supérieure ou d’autres laboratoires du « pôle Montagne Sainte-Geneviève », à Paris essentiellement (Institut Curie, École supérieure de physique et chimie industrielle).\nPour d'autres informations sur le séquençage du génome humain, consultez le site de l'université d'Angers.\nLe Généthon. Des informations et des liens sur les banques d’ADN, les gènes, la recherche en thérapie génique.\nLe Génoscope. Centre national français de séquençage.\n« Bacterial Artificial Chromosome », chromosome artificiel de bactérie. Vecteur de grande capacité (de l’ordre de 300 kilobases), possédant les séquences permettant sa réplication et son maintien dans une bactérie E. coli.\nMolécule d’ADN circulaire comportant des séquences virales (et qui peut ainsi être véhiculé dans des enveloppes virales). Il permet de cloner des inserts jusqu’à 45 kilobases (45 000 paires de bases).\nEnzyme de restriction :\nEnzyme capable de digérer l’ADN (endonucléase) en un endroit présentant une séquence précise, spécifique de l’enzyme. La séquence d’ADN reconnue par l’enzyme de restriction est nommée « site de restriction ». Ces sites de restriction peuvent comporter de 2 à une vingtaine de paires de bases. Exemple : l’enzyme EcoR I reconnaît et hydrolyse l’ADN au niveau des séquences GAATTC.\nRépétitions de nombreuses fois d’une courte séquence de 2 à 6 paires de bases. Ces séquences d’ADN, présentes dans l’ensemble du génome humain, sont hautement polymorphiques.\nADN circulaire de quelques dizaines de kilobases en général. On en trouve essentiellement dans les bactéries. Les vecteurs utilisés dans le clonage de gènes sont, dans leur grande majorité, des plasmides (pBR 322, pBluescript, etc.). Ils permettent le clonage d’inserts de 20 à 30 kilobases au maximum.\nUn gène existe sous la forme de nombreux allèles. Il est dit polymorphe dès que deux allèles distincts, au minimum, sont présents dans une population avec une fréquence d’au moins 1 % (chacun). Par extension, si un fragment d’ADN quelconque (séquence répétée, microsatellite, etc.) existe sous différentes formes (= différentes séquences) dans une population avec une fréquence d’au moins 1 %, il est dit polymorphe.\n« Restriction Fragment Length Polymorphism ». Il s’agit d’une technique consistant à digérer l’ADN génomique par des enzymes de restriction. L’existence de différences de séquences entre les individus conduit à des différences dans les sites de digestion entre ces individus. Après séparation des fragments obtenus par électrophorèse, on observe donc des fragments de tailles diverses selon les individus. Par comparaison, on dispose ainsi de marqueurs répartis dans tout le génome.\n« Yeast Artificial Chromosome », chromosome artificiel de levure, obtenue en associant des séquences centromériques et télomériques issues de chromosomes de levures. Ces vecteurs acceptent des inserts de très grande taille (1 000 kilobases). Ils ont comme grave défaut d’être sujets à des réarrangements, une fois intégrés dans les cellules de levure.