Pgo Conseil (Montesson, 78360) : siret, TVA, adresse...\nEntreprise Pgo Conseil à Montesson (78360)\nGRATUIT : Recevez par e-mail toutes les nouvelles informations sur Pgo Conseil.\nSiren Pgo Conseil\nSiret Pgo Conseil\nNumero TVA Pgo Conseil\nAdresse Pgo Conseil\nAnnonces légales gratuites Pgo Conseil\nInformations sur l'entreprise Pgo Conseil\n80765360500012 (siège de l'entreprise)\nFR58807653605 (en savoir plus)\n11 Avenue DES TERRES BLANCHES\nActivité : conseils aux entreprises, direction de projets informatiques et opérationnels, gestion, organisation et conseil en Entrepreneuriat.\nDénomination : PGO CONSEIL\nCode Siren : 807653605\nMandataires sociaux : Président : NARCY Stéphane\nAdresse : 11 avenue des Terres Blanches\nPar acte SSP du 23/10/2014, il est constitué une SAS, Dénomination sociale : PGO CONSEIL Capital : 1.000 Euros Durée : 99 ans Siège social: 11, Av. des terres blanches, 78360 Montesson Activité : conseil aux entreprises Présidente: Stéphane Narcy, 11 Av. des terres blanches, 78360 Montesson Exercice du droit de vote : tout actionnaire participe aux décisions et a autant de voix qu'il possède d'actions, sans limitation. Transmission des actions sans agrément. Immatriculation au RCS de versailles\nNom : PGO CONSEIL\nMandataires sociaux : Nomination de M Stéphane Narcy (Président)\nAnnonce publiée dans Parisien (Le) /Edition des Yvelines n°78490 du 06/11/2014\nSerge Airaudi Consulting (75007)\nVerdi Consulting (75116)\nMS Consulting (93500)\nMadame Bernadette Richard (59210)\nConsulting RH (78470)\nTake Off Coaching Et Bien-Etre (95220)\nFocus Performance (78600)\nSwell Conseil (44600)\nDecagone Conseil (59910)\nAmplitude Manager (13290)\nLe numéro de TVA intracommunautaire présenté pour Pgo Conseil a été calculé automatiquement et est fourni à titre indicatif. Il ne peut en aucun cas constituer une confirmation officielle de l'assujettissement ou non de cette entreprise à la TVA.


2022 - Viola Davis et le pouvoir de retirer la perruque d'Annalize Keating sur la façon de s'en tirer avec un meurtre - Actual News Magazine\nViola Davis et le pouvoir de retirer la perruque d’Annalize Keating sur la façon de s’en tirer avec un meurtre\nAnnalise Keating est difficile à cerner, et au fur et à mesure que « Comment s’en tirer avec le meurtre », elle devient de plus en plus désordonnée et complexe. Elle saute d’une dissimulation de meurtre à l’autre, se retrouvant dans des circonstances de plus en plus désastreuses et tombant en disgrâce saison après saison avant de se relever pour revendiquer son trône. Mais quand nous la rencontrons pour la première fois, rien de tout cela n’est clair.\nLaissez-moi planter le décor : imaginez Viola Davis dans son maquillage le plus pointu et son blazer le plus impeccable, avec des lèvres pincées et un regard qui pourrait tuer. Annalise est une avocate de la défense pénale et une professeure d’université au sommet de son art. Elle est une force de la nature, terrifiante pour ses étudiants et ses collègues, avec une réputation immaculée et un succès parfait, un mari trophée et tout. Ou du moins, c’est ce qu’il semble. En réalité, le succès d’Annalise est durement gagné et Davis avait l’intention de prouver ce point – les femmes noires ne réussissent pas facilement dans le monde universitaire blanc, mais Annalise a réussi et l’a rendu facile. Comment? En étant une personne en public et une autre en privé. Alors bien sûr, une scène où elle met à nu son âme en se dépouillant de sa personnalité publique était nécessaire.\nDavis a reçu un appel de Shonda Rhimes au début du processus alors que Rhimes et le co-créateur Nowalk développaient encore le feuilleton sexy aux heures de grande écoute. Elle était leur choix de rêve et ils étaient ravis quand elle a accepté une rencontre. Mais avant de signer officiellement, Davis avait une demande – elle a demandé une scène où Annalise retirerait sa perruque. Et ainsi nous avons le cadeau d’Annalise Keating déshabillant son armure. Davis a expliqué son processus de pensée dans un profil du New York Magazine, en disant :\n« Le secteur de la télévision et du cinéma est saturé de gens qui pensent qu’ils écrivent quelque chose d’humain alors que c’est vraiment un gadget. Mais si j’enlevais la perruque dans un moment brutal et privé et que j’enlevais le maquillage, cela les obligerait à écrire pour Cette femme. »\nUne partie de cette scène qui a résisté à l’épreuve du temps est le bouton à couper le souffle (et très mémorable) sur lequel elle se termine : Pourquoi ton pénis est-il sur le téléphone d’une fille morte ? Ces neuf mots sont une beauté, tout comme tout ce qui les mène. (Vous pouvez le regarder ici.) Annalise a réalisé que son mari avait une liaison avec un étudiant récemment assassiné et a décidé de l’appeler. Mais avant cela, elle s’assoit devant sa coiffeuse, retire sa perruque pour révéler ses cheveux naturels et essuie son maquillage. Elle couronne le tout en brisant le beurre de cacao, en regardant dans le miroir en attendant l’arrivée de son mari.\nVoir sa routine nocturne est si simple mais si revigorant – nous nous sommes glissés dans la maison d’Annalise et avons vu une toute nouvelle facette d’elle, libérée de l’armure qu’elle porte pour le reste du monde. Et puis, quand la confrontation arrive et que ces neuf mots magiques sont prononcés, sa force est toujours limpide – mais vient maintenant de sa vulnérabilité.\nÉtiqueté avec avecdAnnalizeDavisfaçonKeatingmeurtreperruquepouvoirretirerSensurtirerViola\nIl s’avère que la Nintendo Game Boy est le pire moyen possible de regarder des films\nComment Kena: Bridge of Spirits est thématiquement similaire au masque de Majora\nÀ l’intérieur de l’effort international pour sauver un petit poisson mexicain\nThe Last Of Us Part 2 Modder démystifie certains des mythes les plus étranges du jeu\nMeilleure tablette 2022 – IGN\nRocky d’EastEnders subira une autre crise de santé après la révélation de Noël


Les plus beaux h�tels, les meilleurs restaurants, les plus fins marqueteurs et les plus grandes gueules de toute la Baie de Naples.\n2. CAPRI et POSITANO\nLe royaume de Naples, le pays de Pos�idon le dieu de la mer, et des milliardaires de la belle �poque.\n3. PAESTUM et POMPEI\nUne �mission toute en ruines et en grandeur antique, au parfum de mozzarella.\nLa Rome Antique et Romantique, de Jules C�sar � Jean XXIII, en passant par des centurions plut�t rock�n�roll et des papes assez loufoques�\nDe C�sar aux M�dicis en passant par Dante et Michel Ange. Beaucoup de g�nie pour une petite ville de province�\nLa S�r�nissime, cent canaux et quatre cents ponts - les palais les plus extravagants et les places les plus charmantes�\nLa tendre Toscane. Deux villes petites mais d�mesur�ment ambitieuses. New York au Moyen Age, bienvenue � Sienne et � San Gimignano !\n8. LAC DE C�ME\nDans le nord de la Lombardie, sur le l�gendaire lac de C�me : avec Stendhal et Manzoni dans une profusion de luxe et de luxuriance�\n� G�nes la superbe sur les traces de Christophe Colomb et de Renzo Piano en passant par Andr� Doria� Une Renaissance dor�e sous le chaud soleil de la Ligurie.\n10. LIGURIE (Porto Fino, les Cinque Terre)\nCabotage sur la riviera du Levant de Porto Fino, l�escale des milliardaires, aux Cinque Terre, villages du patrimoine mondial de l�humanit�.\n11. TURIN VILLE CULTURELLE\nDeux phares turinois : le gigantesque mus�e du cin�ma de la Mole Antonelliana, mais surtout, les inventeurs du pingouin, bienfaiteurs de l�humanit�.\n12. TURIN VILLE OLYMPIQUE\nSur les sites des c�r�monies et des comp�titions du grand rendez-vous sportif de 2006, en avant-premi�re sur les chantiers de l�avenir�\n13. SALUZZO LA VILLE DES MARQUIS\nUn petit bijou pos� au c�ur du Pi�mont, en musiques et en peintures en passant par l�un des plus vieux vins d�Italie.\n14. TURIN ET MILAN LES MOTEURS DU NORD\nDeux villes qui se d�testent et que nous adorons. Visite au mus�e de l�auto de Turin et promenade � pied dans les plus beaux quartiers de Milan.\n15. LES LANGHE\nDans le Pi�mont, l�un des plus beaux vignobles italiens : la merveilleuse r�gion des Langhe, des caves de Fontanafredda aux jolies rues d�Alba.\n16. HARPES ET CIGOGNES EN PI�MONT\nLes cigognes migrantes s�arr�tent de plus en plus sur les terres d�une famille d�originaux � Racconigi. M. Salvi commande de plus en plus de bois de la Colombie-britannique � Piasco, pour fabriquer ses harpes, les meilleures du monde.\n17. SANT�ANNA DE VINADIO\n� Vinnadio sur la fronti�re de la France et de l�Italie, se trouve le plus haut sanctuaire d�Europe, d�di� � Saint Anne, qui domine la magnifique vall�e de la Stura.\n18. VICOFORTE ET CASOTTO\nReligion et royaut� en Pi�mont. Le somptueux sanctuaire de Vicoforte, qui devait �tre le tombeau des Savoie ; le ch�teau de Casotto, ancien pavillon de chasse du roi Victor Emmanuel II, o� s�est jou� le sort de l�Italie unifi�e.\n19. GIANMARIA TESTA\nUn moment d�intimit� avec le plus illustre fils de Cuneo dans un joli caf� de la ville. Gr�goire Viau nous pr�sente son chanteur italien favori, le grand Gianmaria Testa�\n20. CUNEO AVEC SIMONA\nGr�goire Viau marche � Cuneo dans les traces de Giuseppe Garibaldi, le grand lib�rateur de l�Italie ; et il fait plus ample connaissance avec une native de cette belle ville aper�ue quelque part en Italie�


L’archidiocèse de Lubumbashi, dans la province du Katanga, a ouvert son deuxième Synode diocésain le dimanche 11 mars dernier. Lors de la messe d’inauguration qu’il a présidée sur le parvis de la cathédrale saints Pierre et Paul de Lubumbashi, Mgr Jean-Pierre Tafunga a remis officiellement au Vicaire général et au Président de la Commission de l’organisation du Synode\nL'internet parle beaucoup de Joseph Kony ces jours-ci, grâce au film vidéo "Kony 2012" de l'ONG américaine Invisible Children. C'est l'occasion de rappeler qu'en mars 2009, des évêques congolais sont allés en visite de solidarité et de réconfort au diocèse de Dungu-Doruma, dans la Province Orientale.\nLors de la messe des prémices d'un prêtre du village, elles ont porté un nouvel uniforme. L'ancien, elles l'ont prêté à la chorale. Les "femmes paysannes" de Lozo-Munene, dans la province du Bandundu, étaient fières de se présenter ainsi en public, vêtues d'un nouveau pagne. C'est le résultat du travail et de l'organisation.\nLe Comité permanent des évêques et le partenariat entre l’Eglise et l’Etat\nLes évêques membres du Comité permanent de la Conférence épiscopale nationale du Congo ont terminé, le vendredi 2 mars, les travaux d’une session ordinaire entamée le lundi 27 février au Centre Caritas de Kinshasa. La session du mois de février est toujours consacrée à des questions budgétaires. Les évêques ont ainsi examiné les finances de la Conférence épiscopale, et ils ont abordé des questions pastorales urgentes.\nVient de paraître : Philosophie africaine, philosophie de la communication\nVient de paraître aux Editions Baobab, à Kinshasa 543 pages Jean-Baptiste MALENGE Kalunzu Philosophie africaine, philosophie de la communication L’universel au cœur du particulier Présentation par le professeur Célestin Dimandja Préface du professeur Théodore Mudiji


Secret Story 6 - estimations : Le sondage est serré, mais Virginie est mal barrée ! - Purebreak\nPar Allison Fourrier - le 13/07/2012 à 11h21 - 0 partages\nVirginie mérite-t-elle de continuer l'aventure Secret Story 6 ?\nVirginie a perdu sa joie de vivre au fil des jours...\nVirginie pourrait-elle quitter Secret Story 6 ce soir ?\nEn quelques jours, Vivi a tout perdu : amis, mec, avantage et sécurité dans Secret Story 6 !\nLa septième semaine passée au sein de la Maison des Secrets s'achève. Même si l'ambiance n'est pas au top, les candidats de Secret Story 6 sont plutôt sereins à l'approche du huitième prime, exceptée Virginie. Seule nominée de la semaine, Vivi risque de perdre sa place dans l'aventure, selon les premières estimations.\nLa septième semaine passée au sein de la Maison des Secrets s'achève. Même si l'ambiance n'est pas au top, les candidats de Secret Story 6 sont plutôt sereins à l'approche du huitième prime, exceptée Virginie. Seule nominée de la semaine, Vivi risque de perdre sa place dans l'aventure selon les premières estimations de notre SONDAGE !\nLa Voix a pris une sanction exceptionnelle à l'égard de Virginie. En effet, la blondinette a triché cette semaine en révélant à plusieurs candidats de Secret Story 6 l'existence de la carte des nominations inversées qu'elle avait décidé d'utiliser afin de protéger son homme. Aujourd'hui, la belle a donc tout perdu. Non seulement elle n'a tiré aucun bénéfice de son avantage accordé par Marc, le candidat virtuel animé par le public, mais en plus, elle est la seule nominée de la semaine, s'est séparée de son mec, a perdu son amie Audrey et se trouve en mauvaise posture au regard de notre sondage.\nLes Internautes ont voté en masse sur Purefans.com. A 10h15, vous étiez 4051 votants et le moins que l'on puisse dire, c'est que vous avez des avis très partagés : 54% des Purefans pensent que la blondinette ne mérite pas de poursuivre son aventure et voudraient donc la voir quitter la Maison des Secrets. Malgré des estimations plutôt serrées, Vivi est donc mal barrée pour continuer Secret Story 6. Néanmoins, tout peut changer d'ici les résultats des votes officiels à la fin du prime : quelques centaines de votes pourraient faire la différence. Rien est donc encore joué pour Virginie, les prochaines heures seront décisives. (Allison Fourrier)


La régulation pharmacologique des réponses des récepteurs Toll-like (TLR) est très prometteuse dans le traitement de nombreuses maladies inflammatoires. Cependant, des composés limités ont été disponibles jusqu'ici pour atténuer la signalisation TLR et il n'y a pas eu d'inhibiteurs cliniquement approuvés de TLR (à l'exception de l'hydroxychloroquine antipaludique) en usage clinique. À la lumière des progrès rapides de la nanotechnologie, la manipulation de la réactivité immunitaire à l'aide de nano-dispositifs peut constituer une nouvelle stratégie pour traiter ces maladies. Nous présentons ici une méthode de dépistage à haut débit pour identifier rapidement de nouvelles nanoparticules bioactives qui inhibent la signalisation TLR dans les cellules immunitaires phagocytaires. Cette plate-forme de criblage est construite sur des cellules rapporteurs à base de cellules THP-1 avec des tests colorimétriques et de luciférase. Les cellules rapporteurs sont conçues à partir de la lignée cellulaire monocytaire THP-1 humaine par intégration stable de deux constructeurs de rapporteurs inducibles. On exprime un gène de phosphatase alcaline embryonnaire sécrétée (SEAP)Sous le contrôle d'un promoteur inducible par les facteurs de transcription NF-κ B et AP-1, et l'autre exprime un gène rapporteur de luciférase sécrété sous le contrôle de promoteurs inducibles par des facteurs régulateurs d'interféron (IRF). Lors de la stimulation TLR, les cellules rapporteurs activent Facteurs de transcription et ensuite produire SEAP et / ou luciférase, qui peuvent être détectés en utilisant leurs réactifs de substrat correspondants. En utilisant une bibliothèque d'hybrides peptides-or nanoparticules (GNP) établis dans nos études précédentes comme exemple, nous avons identifié un hybride peptide-GNP qui pourrait inhiber efficacement les deux bras de la cascade de signalisation TLR4 déclenchée par son ligand prototypique, le lipopolysaccharide (LPS). Les résultats ont été validés par des techniques biochimiques standard, y compris l'immunoblot. Une analyse plus approfondie a montré que cet hybride responsable avait un large spectre inhibiteur, agissant sur plusieurs voies TLR, y compris TLR2, 3, 4 et 5. Cette approche expérimentale permet une évaluation rapide deLa nanoparticule (ou d'autres composés thérapeutiques) peut moduler une signalisation TLR spécifique dans des cellules immunitaires phagocytaires.\nLes récepteurs Toll-like (TLR) sont l'un des éléments clés du système immunitaire inné contribuant à la première ligne de défense contre les infections. Les TLR sont responsables de la détection des agents pathogènes envahissants en reconnaissant un répertoire de motifs moléculaires associés aux pathogènes (ou PAMP) et en augmentant les réactions de défense par une cascade de transduction de signal 1 , 2 . Il y a 10 TLR humains identifiés; Sauf TLR10 pour lequel le ou les ligands restent incertains, chaque TLR peut reconnaître un groupe distinct et conservé de PAMP. Par exemple, TLR2 et TLR4, principalement situés sur la surface de la cellule, peuvent détecter les lipoprotéines et les glycolipides à partir de bactéries Gram-positives et Gram négatives, respectivement; Tandis que TLR3, TLR7 / 8 et TLR9, principalement présents dans les compartiments endosomaux, peuvent détecter les produits d'ARN et d'ADN à partir de virus et de bactéries 3 . Lorsqu'ils sont stimulés par les PAMP, les TLR déclenchent des réponses immunitaires essentielles en libérant pro-infLes médiateurs lammatoires, le recrutement et l'activation des cellules immunitaires effectrices, et la coordination des événements immunitaires adaptatifs subséquents 4 .\nLa transduction de signalisation TLR peut être simplement classée en deux voies principales 5 , 6 . L'un dépend du facteur de différenciation myéloïde de la protéine adaptateur 88 (MyD88) - la voie dépendante de MyD88. Tous les TLR, à l'exception de TLR3, utilisent cette voie pour activer le facteur nucléaire Kappa-chaîne légère activatrice de cellules activées B (NF-κB) et de protéines kinases associées à des mitogènes (MAPK), conduisant à l'expression de médiateurs pro-inflammatoires tels que le TNF- Α, IL-6 et IL-8. La deuxième voie utilise l'interféron-β inducteur d'adaptateur contenant le domaine TIR (TRIF) - la voie indépendante de la dépendance de TRIF ou de MyD88 - pour activer les facteurs de régulation de l'interféron (IFN) et NF-κ B, ce qui entraîne la production de IFN de type I. Signalisation TLR intacteEst essentiel à notre protection quotidienne contre les infections microbiennes et virales; Les défauts dans les voies de signalisation TLR peuvent entraîner une immunodéficience et sont souvent préjudiciables à la santé humaine. 7\nCependant, la signalisation TLR est un «épée à double tranchant» et une activation excessive et non contrôlée de TLR est nocive. Les réponses TLR hyperactives contribuent à la pathogenèse dans de nombreuses maladies inflammatoires humaines aiguës et chroniques 8 , 9 . Par exemple, la septicémie caractérisée par une inflammation systémique et une lésion multi-organique est principalement due à des réponses immunitaires aiguës et écrasantes à l'égard des infections, avec TLR2 et TLR4 jouant un rôle crucial dans la pathophysiologie du septicémie 10 , 11 , 12 . En outre, TLR5 a contribué à l'inflammation pulmonaire chronique de patients atteints de fibrose kystique 13, 14 . En outre, la signalisation TLR endosomale dysregulée (par exemple, TLR7 et TLR9) est fortement associée au développement et à la progression de plusieurs maladies auto-immunes, y compris le lupus érythémateux systémique (SLE) et la polyarthrite rhumatoïde (RA) 15 , 16 . Ces lignes convergentes de preuve identifient la signalisation TLR comme une cible thérapeutique potentielle pour de nombreuses maladies inflammatoires 17 .\nBien que la régulation pharmacologique des réponses TLR soit avantageuse dans de nombreuses conditions inflammatoires, malheureusement, il existe actuellement très peu de composés cliniquement disponibles pour inhiber la signalisation TLR 9 , 17 , 18 . Cela s'explique en partie par la complexité et la redondance des voies TLR impliquées dans l'homéostasie immunitaire et la pathologie pathologique. Par conséquent, la recherche de roman, potenLes agents thérapeutiques pour cibler de multiples voies de signalisation TLR pourraient combler une lacune fondamentale et surmonter le défi d'avancer les inhibiteurs de TLR dans la clinique.\nÀ la lumière des progrès rapides de la nanocience et de la nanotechnologie, des nanodispositifs apparaissent comme les modulateurs TLR de nouvelle génération en raison de leurs propriétés uniques 19 , 20 , 23 . La taille nanométrique permet à ces nano-thérapeutiques d'avoir une meilleure distribution biologique et une circulation soutenue 24 , 25 , 26 . Ils peuvent être encore fonctionnalisés pour répondre aux profils pharmacodynamiques et pharmacocinétiques souhaités 27 , 28 , 29 . Plus activement, la bioactivité de ces nouveaux nanodispositions provient de leurs propriétés intrinsèques, qui peuvent être adaptées pourDes applications médicales spécifiques, plutôt que d'agir simplement comme un véhicule de livraison pour un agent thérapeutique. Par exemple, une nanoparticule à forte densité de lipoprotéines (HDL) a été conçue pour inhiber la signalisation TLR4 en éliminant le ligand TLR4 LPS 23 . De plus, nous avons développé un système hybride peptidique-nanoparticule d'or, où les peptides décorés peuvent altérer les propriétés de surface des nanoparticules d'or et leur permettre d'avoir diverses activités biologiques 30 , 31 , 32 , 33 . Cela en fait une classe spéciale de médicament (ou "nano-drogue") comme la nouvelle génération de nano-thérapeutique.\nDans ce protocole, nous présentons une approche pour identifier une nouvelle classe d'hybrides peptide-or nanoparticules (peptide-GNP) qui peuvent inhiber de manière efficace de multiples voies de signalisation TLR dans les cellules immunitaires phagocytaires 32 , 33 . L'approche est basée sur des lignées de téléphone journalières THP-1 disponibles dans le commerce. Les cellules rapporteurs sont constituées de deux constructeurs régulateurs stables et inducibles: l'un porte un gène de phosphatase alcaline embryonnaire sécrétée (SEAP) sous le contrôle d'un promoteur inducible par les facteurs de transcription NF-κB et la protéine activatrice 1 (AP-1); L'autre contient un gène rapporteur de luciférase sécrété sous le contrôle de promoteurs inducibles par des facteurs de régulation d'interféron (IRF). Lors de la stimulation par TLR, la transduction du signal conduit à l'activation de NF-κB / AP-1 et / ou IRF, ce qui active les gènes rapporteurs sur le SEAP secret et / ou la luciférase; De tels événements peuvent être facilement détectés en utilisant leurs réactifs de substrat correspondants avec un spectrophotomètre ou un luminomètre. À l'aide de cette approche pour l'affichage de notre bibliothèque préalablement établie d'hybrides peptidiques-GNP, nous avons identifié des candidats principaux qui peuvent inhiber de manière potentielle les voies de signalisation TLR4. L'activité inhibitrice du peptide plomb-Les hybrides GNP ont ensuite été validés en utilisant une autre approche biochimique de l'immunoblot et évalués sur d'autres voies TLR. Cette approche permet un dépistage rapide et efficace de nouveaux agents ciblant les voies de signalisation TLR.\n1. Préparation des milieux de culture cellulaire et des réactifs\nPréparer le milieu de culture cellulaire complet R10 en ajoutant les suppléments de 10% de sérum bovin fœtal (FBS), 2 mM de L-glutamine et 1 mM de pyruvate de sodium dans le milieu RPMI-1640.\nPréparez le milieu de culture de sélection R10-Z en ajoutant les antibiotiques Zeocin (200 μg / mL) à R10 pour maintenir l'expression de SEAP sous le contrôle de l'activation NF-κB / AP-1. Pour sélectionner les cellules exprimant les gènes journalistes SEAP et luciférase, ajouter à la fois la zéocine (100 μg / mL) et la blasticidine (10 μg / mL) à R10 (comme R10-ZB).\nPréparer la solution de substrat SEAP en dissolvant un sachet de poudre de substrat (par ex., Quanti-bleu) dans 100 ml ultrapure, de l' eau sans endotoxine dans un ballon en verre de 125 ml propre.\nFaire tourner doucement la solution et l'incuber à 37 ° C pendant 1 h pour assurer la dissolution complète des substrats.\n<Li> Filtrer la solution à l'aide d'une membrane de 0,2 μm pour assurer sa stérilité (optionnelle) et la conserver à 4 ° C jusqu'à 2 semaines avant l'utilisation.\nPréparer la solution de substrat de luciférase en dissolvant une poche de la poudre de substrat ( par exemple , QUANTI-Luc) dans 25 ml d'eau ultrapure, sans endotoxine dans un tube de centrifugeuse stérile de 50 ml.\nAprès avoir dissous complètement la poudre, utilisez la solution immédiatement. Sinon, conservez la solution à 4 ° C (jusqu'à une semaine) ou à -20 ° C (jusqu'à un mois) avant utilisation.\nATTENTION: les deux solutions de substrat sont sensibles à la lumière et devraient éviter toute exposition à la lumière chaque fois que cela est possible. Les cycles multiples de congélation-décongélation de la solution peuvent provoquer une instabilité du substrat et raccourcir sa durée de conservation.\nPréparer la solution mère de 13-acétate de 13-myristate de phorbol (PMA) dans du diméthylsulfoxyde de qualité moléculaire (DMSO) pour avoir une concentration de 500 μg / mL. Faire des aliquotes de la solution mère (10 μL dans un tube de 500 μL) et les stocker à -20 ° C.\nPréparez la solution mère LPS (E-coli K12) dans de l'eau stérile et sans endotoxine à une concentration de 5 mg / mL, et faites des aliquotes pour un stockage à long terme à -20 ° C. Préparez une solution LPS fonctionnant en diluant le LPS stock dans une solution salée tamponnée au phosphate (PBS) à une concentration de 100 μg / mL et stockez à -20 ° C avant l'utilisation.\nATTENTION: La préparation de réactif pour les utilisations de culture doit être effectuée dans un coffret de sécurité biologique et tous les récipients doivent être stérilisés avant utilisation. Les cycles de congélation-décongélation répétés des solutions PMA et LPS devraient être évités.\n2. Culture des macrophages dérivés des cellules rapporteurs THP-1\nUtilisez deux lignées de téléphone journalières THP-1: cellules THP-1-XBlue et THP-1-Dual. Le premier a un gène régulateur SEAP contrôlé par NF-κB / AP-1, et ce dernier a un système de gènes rapporteurs, le même gène rapporteur SEAP et un gène luciférase contrôlé par IRF. leLes procédures de culture ir sont identiques sauf les médias de culture de sélection.\nDécongeler un stock de cellules de travail (~ 5 x 10 6 cellules) dans 10 ml de milieu R10, faire basculer les cellules à 300 xg pendant 5 min. Remettre en suspension les cellules dans 10 ml de milieu R10 et les transférer dans un flacon de culture T75. Échangez le milieu de culture tous les 2-3 jours jusqu'à ce que les cellules atteignent une densité de 1 x 10 6 cellules / mL.\nLorsque la croissance cellulaire atteint sa capacité, les cellules de passage réduisent la densité cellulaire dans la gamme de 2-5 x 10 5 cellules / mL, de sorte que les cellules peuvent continuer à croître.\nAprès au moins 1 passage, commencez à cultiver les cellules dans le milieu de culture de sélection: R10-Z pour THP-1-XBlue et R10-ZB pour THP-1-Dual. Après culture des cellules avec un milieu de culture de sélection pour au moins 1 passage, les cellules sont prêtes pour l'expérience.\nATTENTION: le surcroissance cellulaire peut entraîner une mort cellulaire significative; La viabilité cellulaire devrait maintenir> 98%. Gardez un registre du numéro de passage en tant que celCela peut s'avérer différent après de nombreux passages (> 20 passages).\nNOTE: Les flacons de culture cellulaire peuvent être réutilisés plusieurs fois pour économiser des coûts; Cependant, cette pratique peut augmenter le risque de contamination générale et de contamination croisée entre différents flacons (si vous manipulez différentes lignées cellulaires en même temps). Pendant l'échange de média et le passage de la cellule, la centrifugation est réglée à 300 xg pendant 5 min.\nPour effectuer un test de cellule rapporteur, les cellules de graines dans une plaque de culture cellulaire à fond plat à 96 puits et les différencier en macrophages. Les procédures sont décrites ci-après.\nTransférer les cellules du ballon à un tube de centrifugation, centrifuger les cellules à 300 xg pendant 5 minutes et les remettre en suspension dans le milieu R10 à une concentration de 1 x 10 6 cellules / ml. Ajouter des aliquotes de la solution PMA dans les suspensions cellulaires avec une concentration finale de 50 ng / mL.\nTransférer 100 μL des suspensions cellulaires dans chaque puits du 96-weLl en utilisant une pipette multicanaux. Incuber la plaque à 37 ° C (dans un incubateur à culture cellulaire) pendant 24 h.\nAprès l'incubation, retirer soigneusement le milieu de culture à l'aide d'un aspirateur (ou avec une pipette à plusieurs canaux), et laver délicatement les cellules avec du PBS (100 μl / puits) deux fois; Ajouter 100 μL de milieu R10 frais dans chaque puits. Reposer les cellules pendant 2 jours dans un incubateur avant de mener le test du journaliste.\nATTENTION: L'étape de repos est très importante pour permettre aux cellules de se calmer après la stimulation PMA dans leur état de tranquillité normale. Cela peut réduire considérablement les signaux de fond des gènes rapporteurs dans des conditions non stimulées.\nNOTE: Après une stimulation 24 avec PMA, les cellules sont différenciées en phénotype de type macrophage, avec une caractéristique de l'adhésion cellulaire au fond du puits et une caractéristique morphologique des pseudopodes.\n3. Dépistage des Nano-inhibiteurs TLR4 potentiels à l'aide des Cellules Reporter\nREMARQUE: Étant donné que la signalisation TLR4 utilise les voies dépendantes de MyD88 et dépendantes de TRIF, elle est sélectionnée comme cible principale pour englober une large gamme de voies de signalisation TLR. Les cellules journalières THP-1-XBlue sont utilisées pour examiner principalement l'activation NF-κB / AP-1 alors que les cellules THP-1-Dual sont destinées à l'activation IRF à partir de la transduction du signal dépendant de TRIF.\nIdentifiez la dose optimale de LPS en générant une courbe dose-réponse avant le dépistage.\nDiluer la solution LPS fonctionnelle à une concentration finale de 0,01 à 100 ng / mL dans du milieu R10 (faire une dilution dans l'échelle log10). Concevez la conception de la plaque et faites la dilution dans une plaque de culture à fond de 96 puits. Assurez-vous que chaque puits a un minimum de 110 μl de solution après dilution.\nRetirez doucement le milieu de culture de la plaque à semences cellulaires (à partir de 2.2.3) en utilisant un aspirateur à vide.\nTransférer le LPS contenant le milieu R10 préparé dans la plaque de dilution (3.1.1) iDans la plaque de culture selon la disposition des échantillons. Incuber la plaque à 37 ° C (dans un incubateur à culture cellulaire) pendant 24 h.\nÀ 24 h, transférer soigneusement les surnageants (80 μL / puits) dans une nouvelle plaque à fond rond à 96 puits. Effectuer le dosage de luminescence colorimétrique et / ou luciférase sur ces solutions immédiatement ou les stocker à 4 ° C (plusieurs heures) ou -20 ° C (jours) avant le développement du dosage.\nREMARQUE: La conception de la disposition des plaques doit être simple et claire pour l'expérimentation et l'analyse des données. Pour chaque condition, 2-4 répétitions doivent être prises en considération. Toujours inclure un groupe témoin négatif (LPS null). Il est recommandé d'utiliser les cellules THP-1-XBlue pour l'activation NF-κB / AP-1 car les cellules Dual ont un fond relativement élevé de l'activation NF-κB / AP-1 après avoir été différenciées en macrophages. Cependant, il est possible d'utiliser les cellules Dual pour signaler l'activation NF-κB / AP-1 et IRF.\nDéveloppez la couleurDosage imétrique pour l'activation NF-κB / AP-1 et le test de luminescence luciférase pour l'activation IRF.\nPour évaluer l'activation NF-κB / AP-1, transférer 20 μL de surnageant de chaque échantillon dans une nouvelle plaque de culture à fond plat de 96 puits; Et ajouter 180 μL de solution pré-chauffée de substrat SEAP dans chaque puits. Incuber la plaque à 37 ° C pendant 1 - 2 h pour permettre le développement de la couleur (rose à bleu foncé). Recueillir l'absorption à 655 nm sur un lecteur de plaques.\nATTENTION: Le temps d'incubation peut varier en fonction du développement de la couleur (30 minutes jusqu'à l'incubation durant la nuit). Il est recommandé d'attendre jusqu'à ce que la densité optique (OD) de la couleur la plus sombre dépasse 1, tout en évitant la saturation du développement de la couleur (OD> 3).\nPour l'analyse de l'activation de l'IRF, transférer 10 μL de surnageant de chaque échantillon dans une plaque blanche à fond plat à 96 puits. Ajouter la solution de luciférase (50 μL) et collecter immédiatement la luminescence wPar le puits.\nREMARQUE: Il est fortement recommandé d'utiliser un lecteur de plaque à luminescence avec une fonction d'auto-injection pour assurer la cohérence dans la lecture de la luminescence du bien au puits et de la plaque à la plaque. Si les solutions de substrat sont injectées manuellement, assurez-vous un temps d'incubation constant et une configuration de lecture pour chaque puits.\nEffectuer le test de criblage sur divers hybrides peptidiques-GNP avec une stimulation LPS de 10 ng / mL (basée sur 3.1). Suivez la même procédure en 3.2 pour le développement du test journaliste.\nConcentrer les hybrides peptide-GNP à 200 nM dans un milieu R10 en utilisant la méthode de centrifugation. Centrifuger 20 volumes de la solution hybride (10 nM) à 18 000 xg pendant 30 min, et jeter soigneusement les surnageants. Collectez les hybrides (au bas du tube) dans un tube, lavez-les avec PBS deux fois et ré-suspendez les hybrides dans un volume du milieu R10.\nMélanger les volumes égaux des hybrides concentrés et lesLPS (20 ng / mL) contenant du milieu R10 pour avoir une concentration finale des hybrides et LPS à 100 nM et 10 ng / mL, respectivement.\nRetirer le milieu de culture de la plaque cultivée (2.2.3) et ajouter 100 μL de la solution mélangée dans chaque puits (3 répétitions pour chaque condition); Inclure un contrôle négatif (moyen seulement) et un contrôle LPS (10 ng / mL LPS sans hybrides).\nAprès 24 h d'incubation à 37 ° C, transférer le milieu de chaque puits dans un tube et centrifuger les tubes à 18 000 xg, 4 ° C pendant 30 min. Recueillir les surnageants (50-80 μL / tube) dans une plaque à fond rond à 96 puits, et effectuer l'analyseur rapporteur comme décrit dans 3.2.\nATTENTION: Lors du rejet des surnageants après centrifugation, ne pas agiter les hybrides au bas du tube.\nNOTE: La centrifugation à l'étape 3.3.4 est très importante pour éliminer les hybrides de nanoparticules non internalisées du milieu de culture et peut éviter l'interférence des hybrides avec le coLectures lorimétriques / luminescence. C'est parce que les nanoparticules d'or peuvent absorber de larges longueurs d'onde en fonction de leur taille et de leur agglomération.\n4. Validation de l'effet inhibiteur des candidats potentiels\nNOTE: Pour confirmer l'effet inhibiteur des candidats potentiels à partir du dépistage, deux approches sont utilisées. L'un consiste à examiner les réponses de dose des stimulants (LPS) à une concentration hybride fixe (ou l'inverse); L'autre est de regarder directement l'inhibition sur les signaux NF-κB / AP-1 et IRF3 via immunoblot.\nDans l'approche un, effectuez le dosage du journaliste avec 100 nM des hybrides de plomb et deux concentrations de LPS à 1 ng / mL et 10 ng / mL selon les mêmes procédures décrites dans 3.3. Inclure un hybride inactif (basé sur les résultats du dépistage) comme un contrôle hybride pour comparaison.\nPour l'approche d'immunoblot, suivez la norme eProcédures expérimentales.\nCulturez les cellules THP-1 dans un milieu R10, graissez les cellules dans une plaque de culture à 12 puits (2 x 10 6 cellules / puits) et différenciez-les en macrophages en traitant les cellules avec 50 ng / mL de PMA pendant 24 h suivi d'un repos pendant 2 jours.\nAprès la différenciation cellulaire, stimuler les cellules avec 10 ng / mL de LPS avec / sans les hybrides (100 nM) dans le temps (jusqu'à 4 h). Dans différents points de temps (0, 5, 15, 30, 60, 120 et 240 min), préparer les lysats cellulaires pour immunoblot. Inclure un hybride inactif comme contrôle.\nProtestez les signaux de IκBα, p65 phosphorylé et IRF3 phosphorylé pour examiner l'effet inhibiteur des hybrides de plomb sur l'activation de NF-κB et IRF3. Probez les signaux de β-actine et IRF3 totaux en tant que contrôles internes.\nNOTE: La transduction du signal se manifeste souvent beaucoup plus rapidement (en quelques heures) puis l'expression des enzymes rapporteurs SEAP et luciférase (24 h). Il est fortement recommandé de perforerLe test de viabilité des hybrides testés à 24 h comme autre méthode de validation.\n5. Évaluation de la spécificité TLR\nNOTE: Pour étudier la spécificité TLR du peptide lead-GNP, d'autres voies de signalisation TLR sont testées, y compris TLR2, TLR3 et TLR5. TLR7, 8 et 9 sont exclus parce que les macrophages dérivés de THP-1 ne répondent pas bien à la stimulation de ces TLR en raison du manque d'expression de TLR7, 8 et 9 dans les macrophages 34 .\nTestez diverses concentrations (1 ng / mL à 25 μg / mL) des ligands spécifiques à TLR2 (Pam3CSK4), TLR3 (poly I: C) et TLR5 (flagelline) sur les deux cellules rapporteurs des macrophages dérivés pour obtenir la concentration optimale suivant la même Procédure de 3.1 et 3.2.\nTraiter les cellules avec les mélanges de l'hybride plomb (100 nM) et chaque ligand TLR à la concentration obtenue à partir de 5,1 pour évaluer la spécificité inhibitrice du plomb hYbrid selon la procédure expérimentale décrite au 3.3. Incluez l'hybride inactif comme témoin de comparaison.\nL'approche expérimentale globale est illustrée à la figure 1 . Les deux lignées de journalistes THP-1, THP-1-XBlue et THP-1-Dual, sont utilisées pour écouter rapidement les réponses TLR en sondant l'activation de NF-κB / AP-1 et IRF, respectivement. L'activation de NF-κB / AP-1 peut être détectée par le test colorimétrique SEAP, alors que l'activation IRF est surveillée par la luminescence luciférase. Les cellules monocycliques de THP-1 peuvent être facilement dérivées en macrophages pour filtrer les nanodispositifs pour leur activité immunomodulatrice sur les cellules immunitaires phagocytaires innées. Avec le système de journaliste, le dépistage peut se faire de manière à succès; Une telle approche est polyvalente pour la découverte de nouvelles immunothérapies, en particulier le ciblage sur la signalisation immunitaire innée, comme la signalisation TLR.\nLa procédure de sélection et les résultats représentatifs sont présentés dans figure 2A Et 2B ). Des concentrations différentes des ligands TLR (TLR4 à titre d'exemple) sont d'abord testées pour obtenir la concentration optimale pour le dépistage réel des hybrides peptidiques-GNP. La stimulation TLR4 par LPS a entraîné l'activation de NF-κB / AP-1 et la production de SEAP. Le SEAP libéré a converti le substrat et a changé sa propriété photophysique, qui pourrait être surveillée par le décalage dans l'absorption de la lumière, ce qui entraînait le changement de couleur de la solution ( Figure 2C ). Une telle modification est proportionnelle à la quantité de SEAP libérée lors de la stimulation et peut être quantifiée en mesurant l'absorbance à 655 nm sur un spectrophotomètre ( Figure 2D ). De même, l'activation des IRF (déclenchée par LPS) a conduit à l'expression de luciferasE, qui a catalysé le substrat pour produire de la luminescence ( figure 2E ). Sur la base de ces réponses à la dose, une concentration optimale de LPS (10 ng / mL) a été utilisée pour cribler une petite bibliothèque préalablement établie d'hybrides peptidiques-GNP ( tableau 1 ). La fabrication des hybrides et leurs caractéristiques physico-chimiques ont été décrites dans nos publications précédentes 30 , 31 , 32 . À partir du dépistage, un groupe d'hybrides (P12 et ses dérivés) ont été identifiés pour leur activité inhibitrice puissante sur l'activation NF-κB / AP-1 et IRF déclenchée par LPS ( Figure 2F ); De façon intéressante, le P13 hybride, légèrement différent de P12 dans les revêtements peptidiques, n'a eu aucune activité inhibitrice, ce qui pourrait être considéré comme un contrôle hybride à des fins de comparaison. Les dérivés de P13 ont montré un certain degré d'activité inhibitrice légère selon l'otheR peptide décoré à la surface.\nAprès avoir identifié l'hybride principal, il est important de valider l'activité inhibitrice. L'inhibition a d'abord été confirmée en examinant les différents ratios de l'hybride à LPS pour exclure les résultats faussement positifs potentiels en raison d'artefacts techniques. À mesure que la concentration de LPS augmentait, l'effet inhibiteur de l'hybride (à une concentration fixe) a diminué comme prévu ( figure 3A Et 3B ). Pour assurer en outre que l'inhibition observée des essais de journalistes était en effet le résultat d'une régulation négative de la signalisation NF-κB et IRF par l'hybride conducteur, l'immunoblot a été conduit pour évaluer directement la transduction du signal protéique dans le temps. L'activation de NF-κB et IRF3 a été examinée en sondant la phosphorylation de la sous-unité NF-kB p65 et la dégradation de l'inhibiteur NF-κB IκBα et du phosphoreDe IRF3, respectivement. Comme le montre la figure 3C , l'hybride P12 pourrait réduire la phosphorylation de p65, inhiber la dégradation de IκBα et la phosphorylation IRF3 retardée, alors que le P13 hybride inactif ne pouvait pas (données non représentées). Tous ces résultats ont confirmé que l'hybride principal identifié était capable d'inhiber la signalisation TLR4 à médiation par LPS en régulant à la baisse l'activation NF-κB et IRF3.\nEn plus de la signalisation TLR4, l'activité inhibitrice de l'hybride-plomb a encore été évaluée sur d'autres voies TLR incluant TLR2, TLR3 et TLR5 pour répondre à la spécificité TLR. Comme le montre la figure 4 , l'hybride P12 principal a pu réduire la signalisation NF-κB / AP-1 à médiation par TLR2 et TLR5, ainsi que l'activation IRF à médiation par TLR3; Encore, le P13 hybride inactif n'a pas montré d'activité inhibitrice. Ces résultats ont suggéré que l'hybride meneur identifié présente un inhibiteur puissant Sur les multiples voies de TLR.\nFigure 1: Approche expérimentale globale du dépistage à haut débit des inhibiteurs de TLR en utilisant le test de la cellule rapporteur. Deux lignes cellulaires rapporteurs sont utilisées: THP-1-XBlue et THP-1-Dual. Le premier a un gène rapporteur SEAP sous le contrôle de l'activation NF-κB / AP-1, alors que le système Dual a un gène rapporteur de luciférase supplémentaire sous le contrôle de l'activation des IRF. Ces cellules peuvent être facilement différenciées en macrophages pour le dépistage à haut débit de nanoparticules immunodéprimantes sur la signalisation immunitaire innée. Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 2: Criblage à haut débit de nano-inhibiteurs sur la signalisation TLR4.\n( A ) Un schéma de procédures expérimentales. ( B ) Une image microscopique optique de macrophages différenciés (amplification 200x). ( C ) Une image représentative du changement de couleur de la solution à partir du test de journalisation SEAP; La couleur de la solution de substrat est transformée en violet ou bleu foncé (d'origine rose) en fonction de l'expression SEAP dans le milieu de culture. ( D ) Analyse quantitative de l'absorption du substrat SEAP à 655 nm en réponse à la stimulation LPS. ( E ) La luminescence de la luciférase du système repère IRF proportionnellement à la stimulation LPS. ( F ) Détection à haut débit identifiant le peptide plomb-GNP hybride P12 et ses dérivés dans l'inhibition des voies NF-κB / AP-1 et IRF de la signalisation TLR4; La concentration hybride = 100 nM; Le LPSConcentration = 10 ng / mL; La barre représente la moyenne ± écart-type; N = 2. Cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nFigure 3: Validation de l'activité inhibitrice de l'hybride-plomb. Confirmation de l'effet inhibiteur de l'hybride-plomb avec diverses concentrations de LPS sur les deux systèmes de signalisation ( A ) SEAP et ( B ) luciférase. ( C ) Confirmer l'inhibition de l'hybride-plomb sur la signalisation NF-κB et IRF3 par immunoblot. L'hybride P13 inactif a été utilisé comme témoin hybride pour comparaison. La concentration hybride = 100 nM; La concentration de LPS = 10 ng / mL; La barre représente la moyenne ± écart-type; N = 3; * Et *** désignent p <0,05 aNd p <0,001, respectivement, en utilisant une analyse ANOVA à sens unique. Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 4: Effet inhibiteur de l'hybride principal sur d'autres voies de signalisation TLR.\nL'inhibition de NF-κB / AP-1 par l'hybride-plomb suite à la stimulation TLR2 (Pam3CSK4 = 1 ng / mL) ( A ) et la stimulation TL5 (flagellin = 100 ng / mL) ( B ). ( C ) La réduction de la signalisation NF-κB / AP-1 et IRF par l'hybridome au plomb suite à la stimulation TLR3 (poly I: C = 25 μg / mL). La concentration hybride = 100 nM; La barre représente la moyenne ± écart-type; N = 3; *, ** et *** désignent p <0,05, p <0,01 et p <0,001, respectivement, en utilisantAnalyse ANOVA à sens unique; Ns: non significatif. Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nTableau 1: Une petite bibliothèque d'hybrides peptidiques-GNP établie dans nos premières études.\nLes hybrides sont constitués d'un noyau de nanoparticules d'or (~ 13 nm de diamètre) et de divers revêtements hexapeptidiques à la surface. Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nÉtant donné que les TLR sont impliqués dans la pathogenèse de nombreuses maladies inflammatoires, ils sont apparus comme des cibles thérapeutiques pour la modulation des réponses immunitaires et des affections inflammatoires. Cependant, le développement clinique de la thérapeutique pour inhiber les voies de signalisation TLR a connu un succès limité à ce jour. Le médicament antipaludique hydroxychloroquine qui inhibe TLR7 et TLR9 est en usage clinique 35 , 36 . De même, seul un nombre limité de composés ont progressé dans des essais cliniques, dont eritoran, un antagoniste de TLR4, qui a montré des effets inhibiteurs puissants sur les réponses inflammatoires médiées par le LPS dans les études précliniques 37 , 38 , ont montré des résultats positifs dans la phase I / II clinique Essais 39 , 40 , 41 , mais finalement l'essai de phase III n'a pas permis de réduire la mortalitéDes patients atteints de sepsie sévère 42 . Cette défaillance a de nombreuses raisons possibles, l'une étant que les réponses inflammatoires associées à la septicémie sont souvent déclenchées par plusieurs voies TLR et, par conséquent, le blocage de TLR4 peut ne pas être suffisant pour réduire l'inflammation accablante. Par conséquent, le développement de nouveaux inhibiteurs de poly-TLR puissants pourrait surmonter ces défis cliniques et devenir la prochaine génération de thérapies anti-inflammatoires. La stratégie de dépistage et le protocole décrit ici devraient servir d'outil expérimental efficace dans l'étude de la signalisation TLR et, plus important encore, comme plate-forme de découverte de médicaments pour accélérer la recherche des inhibiteurs de TLR de prochaine génération.\nCette approche de dépistage offre plusieurs avantages dans la recherche de nouveaux inhibiteurs de TLR. Tout d'abord, le dépistage peut être réalisé à grande vitesse en utilisant les systèmes de télécommande qui sont rapides, sensibles et quantitatifs. Deuxièmement, avec les deux lignées de téléphone rapporteurs,Le dépistage peut être effectué pour couvrir une large gamme de cascades de signalisation TLR, y compris la voie NF-κB / AP-1 et la signalisation interféron de type I (via IRF); Ainsi, ils sont idéaux pour le dépistage de plusieurs voies TLR. Troisièmement, ces cellules rapporteurs sont génétiquement modifiées à partir de la lignée cellulaire monocytaire THP-1 humaine, qui est un bon système modèle pour étudier les interventions ciblant la réponse immunitaire innée. Quatrièmement, la ligne cellulaire est facilement maintenue, et en particulier, peut être différenciée en macrophages; Et puisque les macrophages jouent un rôle clé dans de nombreuses affections inflammatoires associées à la maladie, ils constituent une cible idéale pour le dépistage des immunothérapies ciblant la signalisation TLR. Cinquièmement, les monocytes et les macrophages ont une capacité phagocytaire impressionnante, ce qui permet une absorption cellulaire élevée des nanoparticules, ce qui les rend particulièrement adaptées à l'étude des agents thérapeutiques à l'échelle nanométrique. En outre, ce protocole de sélection peut être appliqué pour rechercher non seulement le nano-based therDes agents thérapeutiques, mais aussi d'autres types de composés bio-actifs.\nBien que cette plate-forme de dépistage soit très polyvalente et robuste, il faut faire preuve de prudence pour éviter de fausses découvertes. Le dépistage repose principalement sur le dosage du journaliste, qui repose sur l'expression du gène rapporteur sous le contrôle d'événements de signalisation spécifiques. Idéalement, l'expression du gène rapporteur (SEAP et luciférase) est proportionnelle à l'intensité de la voie de transduction du signal d'intérêt et l'impact des candidats médicaments se reflète dans les lectures du test. Cependant, en réalité, tout événement biologique se produisant en amont de l'expression du gène rapporteur pourrait affecter le résultat, conduisant parfois à une découverte faussement positive. Par exemple, une faible expression de SEAP pourrait résulter de l'inhibition du processus de synthèse des protéines plutôt que de la régulation vers le bas de la signalisation TLR 43 . Pour éviter une telle découverte fausse, l'activité inhibitrice de l'identitéD candidats doivent toujours être validés, et la méthode de la norme or est de regarder directement les voies de signalisation via immunoblot. Un autre aspect important du dépistage des agents thérapeutiques à base de nanoparticules est la propriété de surface de ces nanodispositifs. Sur la base des modificateurs de surface, les nanodispositifs peuvent avoir diverses activités biologiques. Cependant, ils peuvent également avoir une capacité de liaison non spécifique à certaines biomolécules. Dans le cas d'une liaison non spécifique au SEAP ou à la luciférase, l'activité catalytique des substrats pourrait être compromise par ces nanodispositifs, ce qui entraînerait une fausse découverte potentielle. Y compris les groupes de contrôle supplémentaires ( p . Ex. , Nanodispositif uniquement) dans le dépistage réduit le risque de fausses découvertes. Enfin, la cytotoxicité des candidats principaux identifiés doit être examinée pour exclure la cytotoxicité en tant que facteur contribuant à la découverte fausse. Cela peut se faire simultanément pendant le processus de criblage en utilisant un dosage de viabilité standard ( p . Ex .MTS ou MTT), ou dans une expérience distincte.\nLes auteurs souhaitent remercier le programme de professeur de nomination spéciale (Eastern Scholar) aux établissements d'enseignement supérieur de Shanghai (HY), le fonds de départ de Shanghai First People's Hospital (HY), le soutien de la médecine clinique Gaofeng de Shanghai Jiaotong La Faculté de médecine de l'Université (HY) et le financement de la Fondation canadienne de la maladie de Crohn et de la Colite (CCFC) (SET et HY).


Bayonne : Phillips n'est plus suspendu\nBanques CentralesBayonne : Phillips n'est plus suspenduSPORT365 le 08/10/2012 à 20:450\nBayonne : Phillips n'est plus suspenduBayonne : Phillips n'est plus suspenduSuspendu jusqu?à nouvel ordre le 28 septembre pour des écarts extra-sportifs, le demi de mêlée gallois Mike Phillips a réintégré le groupe bayonnais et postule pour le match contre les Italiens de Mogliano vendredi en Challenge européen. « Il va recevoir sa sanction financière, mais il a fait des efforts et s'est bien tenu, a déclaré le vice-président Philippe Ruggieri à nos confrères de Sud Ouest. On ne veut pas tuer notre joueur. Apparemment, il a retenu la leçon. La preuve : il a passé le week-end avec papa et maman. C'est un geste fort ! » Blessé à la main gauche le 27 septembre, il est de nouveau opérationnel après avoir raté les matchs gagnés contre Biarritz et Agen.


Les groupes oecuméniques, Diocèse de Grenoble - Vienne\nGroupes bibliques oecuméniques\nGroupe biblique des Abrets\nGroupe de Pont de Chéruy, contact : Mme Solange Gondras, 11 rue du Mont Blanc, 38230 Chavanoz\nEcrire Solange Gondras\nGroupe de St Genis sur Guiers\nGroupe de la Bièvre\nMme Françoise de La Tour, 5 rampe Chuzeau 38260 La Côte St André\nParoisse Sainte Anne, Maison paroissiale, place de l'église, 38110 La Tour du Pin\nEcrire à la paroisse Sainte Anne\nGroupes œcuméniques de jeunes\nACAT: Action des Chrétiens pour l'Abolition de la Torture et des éxécutions capitales\nQu'est ce que l'ACAT ?\nPlus de 100 pays dans le monde justifient ou tolèrent la torture et des traitements inhumains et dégradants. L’ACAT rassemble des Chrétiens convaincus que ces pratiques défigurent la personne créée à l’image de Dieu et déshumanisent aussi ceux qui s’en rendent coupables.\nL’ACAT s’engage donc à combattre la torture, lutter contre la peine de mort protéger et soutenir les victimes de la torture.\nDès sa création en 1974, l’ACAT s’est voulue œcuménique en rassemblant des chrétiens de différentes confessions : protestants, catholiques, orthodoxes, et en les aidant à progresser sur le chemin de l’unité qu’ils vivent déjà dans l’engagement humanitaire.\nQuelle est l'action de l'ACAT ?\nLes membres de l’ACAT s’informent sur la situation des Droits de l’Homme grâce au « Courrier de l’ACAT » mensuel, interviennent par lettre auprès des responsables des pays qui pratiquent ou tolèrent les mauvais traitements, soutiennent les prisonniers maltraités, prient pour les victimes et aussi pour les bourreaux.\nComment rejoindre l'ACAT ?\nPour se joindre à un groupe dans l'Isère:\nEcrire Grenoble-Centre (04 76 54 01 52)\nEcrire Grésivaudan (04 76 51 65 16)\nEcrire Drôme des Collines (04 75 31 75 27)\nTel Nord-Isère (04 76 37 26 39)\nEcrire Vienne (04 74 78 07 20)\nEcrire Villefontaine (04 74 94 76 87)\nou en étant adhérant individuel:\nEcrire Correspondant départemental (04 38 92 11 70)\nEcrire ACAT Isère\nPour plus d'information, consulter le site national de l'ACAT .


Optimisation de design : DATADVANCE annonce pSeven 6.14 - CAO.fr\nDATADVANCE annonce le lancement de pSeven 6.14 avec son cortège de nouveautés, dont le nouveau bloc d’exploration de l’espace de design, l’intégration directe de STAR-CCM+ et du bloc modèle FMI.\nDATADVANCE présente les nouveautés de pSeven 6.14\nAméliorations des fonctions d’exploration de l’espace de design\nLe tout nouveau module d’exploration de l’espace de design offre plusieurs nouvelles fonctionnalités :\nPlans d’expériences et optimisation sont accessibles maintenant via le même bloc et l’on peut aisément basculer de l’un à l’autre en restant dans le même espace de travail lors de l’exploration de l’espace de design.\nLa SmartSelection est maintenant activable et débrayable via un seul bouton ;\nQuatre nouvelles techniques voient le jour dans ce bloc avec en plus la prise en charge de variables discrètes et catégorielles, et de DoE adaptatif à partir d’échantillons ;\nUne interface repensée pour être plus réactive et conviviale.\nAmélioration de la construction et de l’exploitation des modèles d’approximation (Amélioration globale de la fonctionnalité modélisation prédictive)\nLes performances du « Model builder » en mode SmartSelection ont été améliorées drastiquement, avec notamment :\nL’implémentation d’une méthode de parallélisation pour accélérer l’entrainement des modèles lors de cas à multiples variables de sortie ou l’utilisation de variables catégorielles;\nNouvelle possibilité d’accroitre la précision des modèles en cas de distribution exponentielle des sorties;\nl’algorithme permettant de limiter les oscillations sur les sorties a été amélioré lorsque l’option « smooth » est activée.\nLa famille de bloc d’intégration s’agrandit avec le nouveau module STAR-CCM+, et le nouveau bloc FMI qui permettra d’intégrer ces modèles pour favoriser la Co-simulation dans les workflows.\nEnfin disponible, l’option de sélection synchronisée, permet désormais de relier des sélections en provenance du Sample viewer, des tracés 2D et des coordonnées parallèles (à condition de partager au moins une source de données commune), pour une interactivité accrue.\nNavigation vers une ligne spécifique dans le Sample viewer par Ctrl + G pour accélérer la visualisation de grands datasets.\nL’ajout d’un préfixe lors de l’importation de données de fichiers CSV ou Excel ;\nIntégration de workflow en batch par ligne de commande : Il est désormais possible de lancer des workflows en utilisant le mode batch pSeven (p7batch), en permettant ainsi l’intégration dans d’autres processus. Lors de l’exécution du mode batch, l’interface graphique pSeven ne s’affiche pas. En terme de licence, il est donc possible dans ce cas de n’utiliser qu’une licence pSeven Runner au lieu d’une licence complète.\nNouveau format de licence\nEvoluer vers la version pSeven 6.14 nécessite obligatoirement une mise à jour du fichier de licence. Les clients sous maintenance devraient recevoir très prochainement leur nouvelle licence.\nLa nouvelle version inclut également de nombreuses mises à jour du manuel utilisateur et son lot de corrections de bugs. Pour une liste exhaustive des mises à jour, merci de consulter le changelog.


Le 05/07 : La rando VTT de Porcheville (78) - Truc astuce essai test VTT Canyon reportage randonnée vidéo Gopro\nLe 05/07 : La rando VTT de Porcheville (78)\n686m de D+\nMoyenne 18,1 km/h\nNous voici à Porcheville. Bébel m'a motivé à minuit pour qu'on se la fasse. Je n'étais pas motivé car du monde à la maison le dimanche midi. Il a réussi à être convaincant. Faut dire que je ne me suis pas trop fait prier. :P\nJ'annonce qu'il faut que je sois rentré pour 11h00. Il me dit pas de problème, on démarre à 7h30, on se met en mode "poursuite", et 3h après nous voilà de retour. Marché conclus. :)\nRappelez-vous l’an dernier sur cette rando, en solo, je m'étais mis en mode "perf". Alors là, avec le Bébel en ligne de mire, ça ne pourra être que mieux. :)\n7h30 : me voilà au départ et pas de Bébel. J'en profite pour taper la discute avec des potes d'enfance car c'est ici que j'ai grandi.\n7h45 : voilà mon Bébel tout frais. A noter que c'est encore une journée sublime. Je me répète, mais cette année est vraiment extraordinaire. Ca va encore être sec de chez sec. :)\nNous voilà partis tous les deux. Mon objectif faire mieux que les 16,5km/h de moyenne de l'an passé. Je préviens Bébel. Et le voilà tel un chien fou à qui on aurait décroché sa laisse. Nous sommes partis comme des balles. D'abord un tour le long de la seine, puis c'est parti pour grimper à Issou et attaquer le bois de Gargenville-Juzier. La moyenne est bonne, nous sommes au dessus de 18,5. A chaque bifurcation nous suivons le grand parcours. Le terrain est connu, mais le tracé est sympa. Nous sommes tellement rapide, que le premier ravito pointe son nez après moins de 45 minutes du départ. Normal, il est situé à 15km du départ. Nous nous sentons bien. Du quatre quart, du chocolat noir, on échange 2-3 mots avec les personnes très aimables de l'organisation, et nous voilà reparti.\nLe fléchage est bon. Nous empruntons des singles bien ludique. Le terrain de jeu a beau être le même que pour la rando d’Issou, la rando de Porcheville est beaucoup plus sympa, beaucoup plus de chemin en forêt, de single, et beaucoup moins de champs que pour Issou. Les km défilent, nous tenons toujours notre moyenne au dessus des 18km/h. On emprunte un single que j'avais pris soin de nettoyer quelques semaines auparavant, et il est resté nickel. Arrive le deuxième et dernier ravitaillement. Toujours très bien garnis. Il est placé à environ 10km de l'arrivée. Donc GAZ! A quelques km de l'arrivée, un participant nous demande si on est sur le parcours, je lui répond "Yes!", il me répond "moi aussi. Vous êtes parti à quelle heure ?" moi "7h45", lui "punaise vous n'avez pas chômé, je suis parti à 7h15", et moi intérieurement je suis tout fière de cette "perf".\nA l'arrivée sandwich et boisson. Voilà, une rando bien organisé, avec un tracé assez recherché, avec une alternance de chemin et de single. Le tout pour 6€, Merci !\nEt merci à Bébel de m'avoir motivé à la faire, et de m'avoir entrainé à cette allure pendant toute la rando. :)\nLe 26/04 : La Viking à Bonnières sur Seine\nLe 21/06 : La Faut pas Mollir à Plaisir (78)\nLe 28/06 : L'Epone Hôpital 2015 par Gump


INTERVIEW - Le sinologue François Godement estime que le pouvoir chinois met l’exécutif hongkongais sous pression pour qu’il agisse de façon plus ferme contre les manifestants pro-démocratie.\nFrançois Godement, conseiller pour l’Asie à l’Institut Montaigne: «Il y a une politique absolument assumée par Pékin d’autoritarisme, et même au-delà, de dictature, sans fard.» François BOUCHON/Le Figaro\nLE FIGARO. - La violence s’est beaucoup accentuée à Hongkong, tant du côté\ndes manifestants que de la police: a-t-on atteint un point de non-retour?\nFrançois GODEMENT. -On est dans une situation explosive, puisque les immenses manifestations pacifiques qui ont eu lieu pendant des mois n’ont abouti qu’à un seul véritable résultat: le retrait du projet de loi d’extradition vers la Chine, sans que les autres demandes ne soient satisfaites. On voit émerger des protestataires plus radicaux, qui ont franchi plusieurs crans dans l’utilisation de la violence, ce qui n’empêche pas une part importante de la population de continuer à soutenir le mouvement. De l’autre côté, tant l’exécutif à Hongkong - qui est passé à des moyens beaucoup plus brutaux - que le pouvoir central sont sous haute pression. Pékin a un temps envisagé que la mobilisation déclinerait, puis qu’elle finirait par s’éteindre d’elle-même, mais ce n’est pas le cas.\nRépression Au Xinjiang\nle 19/11/2019 à 10:41\nc'est toi qui est explosive JOJO.


Cessez le feu ! appel de Pierre Lellouche. Paris veut calmer le jeu et éteindre l’incendie qu’il a lui-même allumé. Offre de services du Conseil de l’Europe. Nouvelle prise de position du Haut commissaire aux droits de l’home du Conseil de l’Europe, Thomas Hammarberg. - Le portail de référence pour l'espace de liberté, sécurité et justice\nAux côtés du secrétaire général du Conseil de l’Europe, le secrétaire d’Etat français aux Affaires européennes appelle à « travailler concrètement » et à cesser de « faire des polémiques ».Interrogé sur l’échange entre Nicolas Sarkozy et Angela Merkel sur les Roms, au Conseil européen, le secrétaire d’Etat : «Je n’ai aucun commentaire à rajouter sur ce qu’a dit le président de la République», a-t-il laconiquement répondu.\nIl faut éteindre l’incendie. A l’occasion de la visite à Paris du nouveau secrétaire général du Conseil de l’Europe, le Norvégien Thorbjorn Jagland, le secrétaire d’Etat aux Affaires européennes, Pierre Lellouche, a tenté de siffler la fin de la partie. Au lendemain des discussions agitées du Conseil européen, Paris semble vouloir dépasser les polémiques sur les Roms.«Toutes les bonnes volontés sont nécessaires pour sortir de cette crise par l’action», a martelé Pierre Lellouche. «Envoyer des noms d’oiseaux ne change rien à la vie des enfants roms», a-t-il lancé, sur le ton de l’apaisement.\nAux côtés de Pierre Lellouche, le secrétaire général du Conseil de l’Europe a annoncé que son institution dresserait prochainement une liste des engagements que les Etats ont promis de remplir dans le domaine de l’intégration des Roms.Le Conseil compte donc, non seulement surveiller, mais aussi contrôler les réalisations en la matière de ses 47 pays membres. «Nous attendons des actions collectives, en partenariat avec l’Union européenne et les Etats membres», a confirmé le secrétaire général du Conseil de l’Europe. En ce sens, Thorbjorn Jagland a l’intention de convoquer une «réunion à haut niveau», à Strasbourg.\nDe son côté, Pierre Lellouche affirme lui aussi vouloir inviter ses homologues européens à Paris, afin de soutenir cette initiative du Conseil de l’Europe. «Si nous y arrivons, cette crise aura au moins permis ceci de bien: percer cette bulle d’hypocrisie sur les Roms, qui était présente dans toute l’Europe», a souligné le secrétaire d’Etat.\n« Arrêter de faire des polémiques ! » «Le mot « rom » n’a pas été prononcé pendant les 10 ou 15 ans qu’ont duré les négociations d’adhésion des pays concernés», a déploré Pierre Lellouche, invitant à poser un regard européen sur cette «minorité considérable dont personne ne s’est occupé pendant des années». En marge de la conférence de presse, le secrétaire d’Etat en a profité pour fustiger la presse. «Arrêtez de faire des polémiques de petites phrases sur un sujet aussi grave. C’est pas sérieux», a-t-il lancé à un journaliste. Il s’est également défendu d’avoir «brocardé» la Commission européenne. «La France respecte les institutions européennes: la Commission européenne, le Parlement européen. Je travaille très étroitement avec eux», a-t-il martelé.\nLe Secrétaire Général du Conseil de l’Europe, Thorbjørn Jagland, a présenté au Comité des Ministres une initiative pour aider à surmonter les problèmes immédiats et à long terme concernant les droits et obligations des communautés roms dans toute l’Europe.\n« Le Conseil de l’Europe est résolu à travailler avec ses partenaires dans les Etats membres pour garantir le respect de ses normes. Il ne s’agit pas seulement d’un impératif juridique et moral ; le respect des droits de l’homme est un atout pour la conduite de toute action publique, y compris dans le domaine des migrations. Le Conseil de l’Europe offre son expérience et son soutien. Pour commencer, je rencontrerai demain le secrétaire d’Etat français chargé des Affaires européennes, Pierre Lellouche, pour discuter de notre initiative » a-t-il ajouté. (cf. sur www.coe.int l’interview video du secrétaire général du Conseil de l’Europe.\nLe renvoi de Roms, citoyens de l’Union européenne, est désormais courant dans plusieurs pays européens, a déclaré le Commissaire aux droits de l’homme du Conseil de l’Europe, Thomas Hammarberg, dans le dernier article de son carnet des droits de l’homme\nLa lutte engagée par la France contre la criminalité a particulièrement visé les Roms originaires de Roumanie et de Bulgarie. Et la France n’est pas un cas isolé : l’Italie, par exemple, a arrêté et expulsé un nombre considérable de Roms roumains ces dernières années. Récemment, des Roms ont également été expulsés vers leur pays d’origine depuis le Danemark et la Suède.\nRenvoyer des familles roms d’un pays européen à l’autre ne résout rien. Il s’agit de reconnaître que des membres de la minorité rom ont des raisons de tenter de s’installer à l’étranger, en quête d’une vie meilleure, et que ces problèmes concrets doivent être traités. En effet, la majorité des Roms d’Europe vivent dans une misère sordide et sont très défavorisés en matière d’emploi, de logement et d’accès aux soins.\nDans certains pays, les enfants roms, considérés comme des élèves en difficulté, sont systématiquement placés dans des classes spéciales. Beaucoup subissent des brimades à l’école et le taux d’abandon scolaire est élevé chez ces enfants. En Europe, des dizaines de milliers de Roms sont apatrides, ce qui aggrave encore leurs difficultés d’accès aux services sociaux.\nLa discrimination des communautés roms en Europe est une longue et douloureuse histoire. La répression a atteint son apogée dans les années 1930 et 1940, lorsque les Roms sont devenus la cible de régimes fascistes, en Roumanie et en Italie. Dans les zones contrôlées par les nazis allemands, plusieurs centaines de milliers de Roms ont été arrêtés, envoyés en camp de concentration ou directement exécutés. Ce génocide n’a même pas retenu l’attention au procès de Nuremberg et l’indemnisation des survivants ou des familles des victimes a été tardive, voire inexistante.\nLes Etats européens et leurs dirigeants doivent reconnaître leur responsabilité dans la situation actuelle des Roms. Il faut mettre fin au discours stigmatisant et mener des actions pour contrer la discrimination à l’égard des Roms, en premier lieu dans leurs pays d’origine. Des mesures énergiques sont nécessaires pour réparer les injustices qui font des Roms des Européens de seconde classe. Ainsi, il faudrait commencer par donner aux enfants une chance de s’instruire, et aux adultes, une chance de trouver un emploi. Les réformes visant à garantir aux Roms la protection des droits de l’homme ne donneront de résultats que si elles sont menées dans le cadre d’un dialogue avec les représentants roms. L’initiative de certains changements devra être prise par les communautés roms elles-mêmes. Cependant, rien ne changera tant qu’elles resteront la cible d’un discours de haine, tenu notamment par des responsables politiques. »


Recettes avec du caramel - Ingénieuse pâtisserie\nAccueil / Recettes par parfums / Recettes avec du caramel\nTwix maison (la fameuse barre chocolatée)\nLe goût n’est pas ce qu’il y a de plus fidèle mais c’est 100 fois meilleur.\nVous voyez ce caramel bien coulant qui donne envie d’y plonger son doigt ?\nUn Naked Cake tout en gourmandise qui peut aussi bien régaler une famille nombreuse qu’une petite famille de gourmands.\nDe la pâte à choux, de la vanille et du caramel … Personne ne peut y résister ! Alors c’est parti : on court dans la cuisine faire cette recette pour régaler tout le monde !


Offres de Location chambre d'hôtes de vacances France. Annonces de location chambre d'hôtes France. Chambres d'hôtes, Etoile d'hôtes en Mercantour : chambres d'hôtes et table naturelle, Villa Juliette Chambres d'hôtes à Pézenas, Lauphanie, votre chambre d'hôtes dans l'Hérault, entre Montpellier et la mer., La Baudonnière - Chambre d'hôtes en baie du mont Saint Michel\nFrance. Maison de caractère du XIX° siècle inondée de lierre, chèvrefeuille et de soleil à proximité de grands vignobles tels que Saint Emilion, le Fronsadais , Pomerol et à 24 kms de Bordeaux; 4 chambres spacieuses et confortables avec capacité maximale de 10 personnes; tarif: 45€ par chambre pour 2 personnes avec petits déjeuners inclus, 15€ par personne supplémentaire, gratuit pour les enfants de moins de 8 ans ...\nFrance. Située à 1500 m. d'altitude à 90 km de Nice , prés d'Auron(stations de ski du Mercantour) et du col de la Bonnette , aux portes du Parc National du Mercantour ; la maison de l'étoile propose de jolies chambres avec leurs sanitaires privatifs et sa table à base de produits frais et naturels ...\nFrance. Villa Juliette est l’un des petits bijoux de Pézenas. 5 chambres d’hôtes dans notre jolie maison située au cœur de la ville. Petits déjeuners servis dans notre jardin méditerranéen, avec ses arbres centenaires et une originale piscine en pierres ...\nFrance. Lauphanie, deux jolies chambres d'hôtes climatisées, dans villa, au calme, située à 5 km de Montpellier et de la mer. Piscine, salle de remise en forme, parking privé. Aux portes de la Camargue, devant les plus belles plages du Languedoc et proche des merveilleux sites cévenols ...\nFrance. Située dans la campagne mais proche du mont Saint Michel et des plages de Normandie, dans cette ancienne ferme en granit entièrement restaurée, vous trouverez calme et sérénité. La chambre d'hôte et le gîte ont une belle vue sur l'étang et la campagne environnante ...


Engagé … au service de la transmission de la foi, en témoin vivant de la foi\nAccueil > Lire > Engagé … au service de la transmission de la foi, en témoin vivant de la foi\nVoilà sans doute une définition du catéchète qui pourrait résumer les travaux des Journées Mondiales des Catéchistes qui se sont tenues à Rome auprès du pape François du 26 au 29 septembre.\nA l’invitation du Saint Père et du Conseil pontifical pour la nouvelle évangélisation, 1 500 responsables et spécialistes de la catéchèse venus du monde entier ont convergé vers Rome pour un congrès de quatre jours. Cinq membres de l’IIFAC et vingt-cinq délégués diocésains représentaient le Nord - Pas de Calais. Parallèlement, 20 000 catéchistes pèlerins suivaient des catéchèses par pôles linguistiques animées par les trente évêques présents, et découvraient l’histoire et les richesses artistiques de la Ville éternelle.\nExposer le contenu de la foi dans toute sa profondeur, lire et méditer l’Écriture, se référer à la pédagogie de Dieu à travers l’histoire, de l’Ancien au Nouveau Testament, redécouvrir l’Histoire de l’Église et sa Tradition vivante, intégrer la vie sacramentelle et liturgique à la démarche catéchétique, telles furent les principales contributions de plusieurs spécialistes en théologie et pédagogie catéchétiques, encourageant à utiliser les outils communs (Bible, Catéchisme de l’Église catholique, Directoire Général pour la Catéchèse) tout en usant des moyens modernes les plus adéquats pour toucher tous ceux qui aspirent à connaitre Dieu. Enfants, jeunes ou adultes, première annonce, catéchumènes ou « vieux chrétiens » tout homme, toute femme est concerné et doit faire l’objet de l’attention catéchétique.\nLes soirées offraient des présentations artistiques dans différentes églises romaines, notamment une mise en perspective des trois tableaux du Caravage installés à St Louis des Français.\nLe pape François, au cours de sa visite aux congressistes, a insisté sur la nécessité non pas de « faire la catéchèse », de rechercher moyens ou méthodes, mais de vivre sa foi comme témoin en vérité pour faire connaître Jésus-Christ, image et envoyé du Père, sauveur du monde. « Vous êtes des passeurs, des sentinelles ! » a-t-il lancé. « Aider les enfants les jeunes, les adultes à connaitre et à aimer toujours le Seigneur est une des plus belles aventures éducatives, on construit l’Église !»\nDimanche 29, la messe présidée par le Saint Père concluait ces quatre jours denses et précieux, où pèlerins et congressistes furent rejoints par plus de 130 000 catéchistes venus de toute l’Italie, de Suisse, d’Autriche et du sud de la France. D’autres rencontres similaires devraient suivre dans les prochaines années, toujours dans le but de soutenir la démarche de transmission de la foi.\nClaire de la Bretesche\npour l’équipe de l’IIFAC\nPour suivre les actes du congrès et les homélies de ces journées : www.catechese.catholique.fr\n0 commentaires sur Engagé … au service de la transmission de la foi, en témoin vivant de la foi\njeunesse Homélie humanisme handicap éthique art avenir forum colloque histoire mort catéchèse génération y chrétiens famille christianisme religion Pâques aumônerie solidarité


Le World Travel & Tourism Council (WTTC) a créé il y a quelques semaines le label « Safe Travels ». Ce label sera décerné à tous les pays où la gestion de la crise du coronavirus aura été suffisamment efficace pour permettre aux touristes de voyager en sécurité. Une initiative qui pourrait relancer le tourisme plus rapidement que prévu.\nPour beaucoup de pays, le tourisme est une ressource essentielle. Une crise du secteur pourrait rapidement entraîner une crise économique globale pour eux. Le label Safe Travels a été créé pour aider tous les pays qui le souhaitent à convaincre plus facilement les touristes de s’y rendre. Bien entendu, ce label ne peut pas être obtenu sans effort.\nPour obtenir le label, le pays doit démontrer une gestion efficace de la crise du coronavirus, en présentant des statistiques positives, mais également des mesures sanitaires. Ainsi, beaucoup de pays qui dépendent du tourisme ont mis en place les mesures nécessaires pour accueillir les touristes. Par exemple, les plus belles plages de Madagascar se préparent à émerveiller les touristes cet été. Les statistiques y sont bonnes et la distanciation sociale y sera appliquée.\nSera-t-il possible de voyager en dehors de l’Europe ?\nSi un pays comme Madagascar se prépare à accueillir des touristes dans les meilleures conditions possibles, cela ne dépend malheureusement pas que du pays d’accueil. Tout porte à croire qu’il sera possible de voyager hors de l’Europe cet été, mais il est impossible de s’exprimer à l’avance sur les conditions nécessaires à remplir.\nCertains pays d’accueil ouvriront leurs frontières et imposeront des tests. Pour le retour en France, il sera également possible de se voir imposer un test et/ou une quatorzaine. Toujours dans le cas de Madagascar, il est encore trop tôt pour savoir exactement quelles seront les conditions d’accès. Les Français qui y avaient prévu un séjour sont néanmoins encore en mesure d’espérer y passer leurs vacances.\nLe Portugal, premier pays d’Europe labellisé Safe Travels\nActuellement, le Portugal est le premier et le seul pays d’Europe à avoir reçu le label Safe Travels. Le gouvernement a réagi promptement en fermant les frontières et en imposant le confinement dès l’apparition du premier cas de coronavirus le 16 mars 2020. Résultat, les statistiques du pays sont excellentes, l’épidémie a presque disparu et les frontières ont ouvert dès le 22 mai.\nMalgré tout, le pays continue à imposer de nombreuses mesures de prudence. Les gestes barrières sont toujours d’actualité et les libertés continuent à être limitées pour éviter que l’épidémie reprenne. Si les touristes peuvent encore espérer voyager cet été, il est certain que ce ne sera pas des vacances comme les autres. Les pays offrant d’immenses plages désertes pourraient tout à fait tirer leur épingle du jeu.\n← 3 circuits incontournables aux Etats-Unis\nVoyages insolites dans trois belles régions de France →


Heineken confie sa logistique e-commerce à LOG_VAD - Applica\nLOG_VAD, prestataire logistique franco-belge spécialisé dans le e-commerce, expédiera début Novembre les commandes de beetender.fr, site marchand français émanant du brassage Heineken.\nLe Beertender est un système de machine pression design et simple d’utilisation permettant aux particuliers comme aux professionnels de bénéficier de la qualité d’une bière pression sans contrainte d’entretien, d’installation, ou de stockage.\nC’est au sein de ses entrepôts de Leers (périphérie de Roubaix) et d’Estaimpuis (Belgique), que LOG_VAD généra la logistique e-commerce de Beertender.fr (réception, stockage, gestion des stocks, préparation des commandes, livraison, gestion des retours).\nLa relation client sera également prise en charge par LOG_VAD et son partenaire Com’Plus.\nCette signature avec le 3ème brasseur mondial (en volume), leader français* du marché brassicole démontre la capacité des équipes de LOG_VAD à apporter des solutions sur-mesure à l’ensemble des acteurs du e-commerce qu’ils soient pure players, retailers ou marques leaders sur leur marché.\n*1ère entreprise nationale, en valeur et en volume, de fabrication et de commercialisation de bières et distributeur intégré de boissons pour la Consommations Hors Domicile.\nTel: 03 20 89 44 81 / 06 85 18 23 71\nAllocine.com l'encyclopédie du cinéma\n03/06/2008 F. Warembourg\nLa marque sud-coréenne lance son nouveau smartphone Galaxy S3, fervent concurrent de l’iPhone d’Apple !\n14/06/2012 F. Warembourg


Frédéric DEVELAY : "POURPRE VERT AUX OMBRES PARAISSANTES"\nPOURPRE VERT AUX OMBRES PARAISSANTES\nD’une considération intempestive où l’esquive des tempes est la nef de l’exquise tempête dans les intempéries de l’instant où le temps périt :\n– entendre les licornes mortuaires axant le défilé des énigmes prononcées à l’aube des fontanelles.\n– lire l’arrêt des morts dans l’assaut des transes redoublées.\n– voir le bris des miroirs traçant la chute des inconnaissances.\nAssis au thé dans la pièce au Bardö, dissolvant les mois et en tirant l’or du temps, mort aux reflets des murs de verre. L’âme erre parmi les masques. Ni passé ni avenir/révolte de la révolte/je est un autre/vide du vide.\nConnaître qu’à chaque éthernité je suis toute instance par l’intensité d’un solve coagula dans la nuit d’expériences des limites. Je suis la mort dans la vie la vie dans la mort. Au septième coup il sera lotus s’intensifiant dans le courant des portes. De tout temps je suis l’errant, vivant/Bardö dans l’île aux oiseaux. Sur les grilles du monde meurent les clochards du Dharma/Métro. Déluge/acide dissolvant de l’âge. Je suis le fou du roi mort REBIS dans la brise sibérienne peuplée d’égrégores — trop (in)connu (e) (s) — vallée intérieure au souffle d’argent, voie entendue de soi.\nDéchiré embrasure aperçue oscillant Babel. Écrire la mort du je analogue dans le dédale des cieux d’ossatures du jeu comète errant l’écrire. Pierres brûle blanches l’illusion des temps simultanés aux syncopes du devenir, équilibre mourant le nom du vide. Coulent les plaintes de métal mou. Guerre sainte puisée de l’intense épuise entre le chaos et le reflet des gnomes qui coulent le fleuve assaillit des veines en l’éclair du corps enlacé.\nVille céleste de la nuit au lotus. Illusion des blues du decameron. La répétition du nom dans les empires de volupté n’accueille plus les veines désabusées des illusionnés écarlates. Ciel noir/galaxie arcane/la nuit bleue de la révolte sang/gouffre. La croix orbite les yeux dans le voyage labyrinthique du songe des sphères. Le corps onde aux visions des sons telluriques, écho de l’ombre dans la nuit perçoit les yeux.\nDérive la lande, Dame Blanche de l’unsouffle des sept sens. Laisser naître et laisser mourir pour mourir et naître.\nÉcho cyclone sur les cônes de silice génétique la vision des gouffres néantise le rêve/étant de songe. Noûs intense miroir sommes multiple absolu illuminant le vide par l’éclair d’une instantanéité abrupte. Dans le déhanchement des intervagues trouver la passe étroite entre le visible et l’invisible matrice où les mots de la bouche du dragon visionnant l’œil octogonal jaillissent le soma du sang coagulé.\nLa mise en rapport du visible et de l’invisible n’est que le questionnement illusoire sur l’invisible. Moment de l’errance non reconnue. La pensée danse la mise en proportion du visible et de l’invisible à l’angulaire pierre de feu. Dialectique pyramidale. Bases façonnées au marteau des courants telluriques. Dans l’intensité de la verticalité naissante l’être débouche sur une béance, marais nommé Kali’s Land par ceux qui ont encore un nom, ne sachant pas que le nom crée la chose qui tue le mot. Les coagulations du moi dialectisées se dissolvent à l’image des infinis cosmiques.\nConjonction conscience-intensité puissance du non-agir. Au point immobile de la roue Ouroboros les mancies disent mouvance vitale, être et non-être dialectisés dans l’invisible silence. Parle jeu l’homme-tao crée l’univers expir dans le lieu du temps où il s’aspire.\nLes errances de la poésie sont alors la réalité de tout ce qui obscurcit la nuit du poète. Mouvances et illuminations jusqu’au complet vertige.\nDescente aux enfers, dans le tourbillon de l’esprit se crée un vide central, le moi ne cherche plus les voies de sa transfiguration, il la vit. L’œuvre traque l’image du moi, le poète entretient le feu par l’étincelle jusqu’à s’y brûler blanc alchimiste.\nL’activité poétique ouverte à son devenir actif-passif passif-actif éclate en un non-agir où l’homme et le cosmos ne sont qu’un.\nLe poème est pierre philosophale. L’écriture de la vitesse explose en l’écriture lumière. L’invisible abreuver du sang des regards déréalisants invite l’être au banquet du non-être. Il n’y a de connaissance que celle que l’on est.\nAu matin je prends le courrier dans la boîte à l’être. L’éveil, dissolution de l’avoir dans les connaissances, coagulation de l’être dans la non-connaissance. Intemporalité de l’instant, image du renversement vertical où je réintègre le centre. Les glaces transparentes, l’écriture du mourir qu’est l’écrire :\nVitriol aux faces appesanties par\ndes matins monochromes où le\nDans la chambre vie où tout est vide vingt-deuxième nuit d’un moi de vingt et un jours sous les orbites Chronos des lagons blancs exerguent le sol des tremblements. Dictionnaire vide dans le bleu pôle horizontal des nuits passées de l’autre côté de grands cris blancs détrempent le ciel. Du temps dans le silence articulé des mots gelés le corps de verre tinte aux écumes sur des novaes bien déhanchées.\nApproche de l’aube non-ordinaire sous masques de reconnaissance. Des volutes jadent l’esprit en feu sans que les ombres délavées visions prismiques obscurcissent les schismes babyloniens aux soirs de galaxie. Les arcanes dansent, la nuit s’agite. Noces agonisiaques sur la noirceur de l’horizon, immaculées au bord du gouffre comme si quelqu’un ouvrait de l’intérieur l’envers du vide dans les yeux pâles de cénesthésies aux résurgences de jade héliotropique. Thés des saveurs, trois feuilles de menthe dans le verre en triangle. À chaque instant je bois du thé Chidher dans la boutique où nul n’entre s’il n’est fou. L’androgyne image de l’image non image. Deux étoiles de la multiplicité.\nRien n’est vrai tout est\npermis tout rien n’est tout\n— — ——–\nJe——Je— —Je boues materia prima de me voir si belle en ce miroir au soir. Ne plus penser après avoir cru penser le tout en pensant tout. Le vide pense je. Au paroxysme de l’accommodation le regard se renverse. Les pas lourds sur le pavé le ventre vide éloigné la saveur subtile sourd intensément émergence désignant tout ce qui est peur. Terrible synesthésie où il faudrait qu’il n’y ait plus rien. Peur de tuer le Buddha car Hassan sait qui sait. Lac glacé fondre au soleil des nuits blanches de Dame Pernelle, aux ailes des seins myrrhe et destin. Je plante la flèche dans le livre jaune et dans la chambre mystère je vais. Son des îles dans le flot des soupirs. Encavement fantomatique dans les artères séphirotiques. Moiré des effusions galactérales, Dedalus se donne en proie aux gnomes du labyrinthe, se bat et se débat. Lucifer voyage au bout de la nuit, l’esprit flèche au solstice d’un soleil de plomb qui rajeunit Saturne.\nLe vent enveloppe parmi les nombres, corps caressant, effluves disant le rien. Le XXIIème est le 1er, la folie est science. L’immeuble me regarde, je me vois me voir. Danse au caveau centrale des labyrinthes éternisés. Dans la ville Mandala quelques morts-vivants déambulent équilibristes sur le fil d’Ariane. L’ange est à la fenêtre d’occident. Les mutants aseptisés avalent leur squelette, pour eux la femme n’est plus un dépotoir, territoire interdit, mais non-lieu naissant matrice. Rouillent les grilles passent les licornes.\nbéances béates/bouvriers trempés.\nOnze marches menaient à Notre-Dame. La vie souterraine abandonne le chemin des errances tracées en surface pour les surfaces tracées en errance sur le sol des cathédrales intérieures. La voix de son maître est la voie de soi, transparescent là voir de soie. Brûle les pensées en devenir feu des sphères célestes. Transparente blancheur de l’athanor trouvant le je entre deux descentes uni serpent. À la concentration du vitriol si les dires sont trouvés minimum c’est qu’il faut les humidifier de notre sang. À cela seul est propice l’œuvre (qui est ce qu’elle est) qui hait ce qu’elle hait.\nLes révolutions bourgeoises créent les morts à qui l’on ne donne pas les perles. Mais ce on est eux séparés à la hache de l’honteux.\nAux jouets qui ont obscurci le ciel de nos enfances pourrait bien répondre le phénomène qui ferait que votre seule peur serait de ne plus avoir peur d’être ce que vous croyez être.\nSur les pierres au feu de midi les empreintes figurant l’éclat de la révolte énergisant le nudissement du Chevalier prométhéen sont traces de l’intensification des sons par les sens en une transe/figuration alchimique. Noires calcinations tirant l’écho des verdoyances de la langue sacrée. La sensation absence infinie vibre l’enveloppe d’une infinité de Ma.\nLes images utérales dissolvent le faisceau des pérégrinations. J’ai obturé les sorties il faut tuer le dragon. Monter dans l’autobus au bout de la nuit et connaître la verticalité qui est transmutation d’un plan (dualisme A non-A) à une dimension ouvrant l’infini (synthèse de la dualité en l’unique).\nDans la salle du cabaret de Baal j’ai connu le vertige. Ce matin dans l’immeuble aux reflets de Pan huit boules y voir mort lente quatrième arrêt du dragon dans la marche circulaire à l’aube saine.\nDouble mercure philosophique d’un régime de Saturne où le loup hurle à la lune noire l’Isis de ses blancheurs nocturnes. Enclosion des cyanures resplendissant d’une vie tombale sous les néons tout barratés. Les vierges matinales ascensionnent cristallines la transparente architecture de silence opale.\nPharmacopée des élixirs, vétuste vibrato. Il n’y a plus de mode d’emploi les dés ensorcellent le hasard. Déchues lectures ordures brûlées, le temps n’est qu’un mauvais passe-temps.\nLa glaciation des germes de gémissement cillent les ombres auréolées des cirques mentaux.\nAubes de pluie feuilles de pierre\ndans l’azur des crânes\nsourire du baume.\nUne femme surgie de la mer, un fil est tendu, la bobine se déroule, la musique traverse l’œil. Stupas flêchant les nirvanas dans l’aquarelle mes moires secondes. Élan courbure sous l’impulsion des elfes noirs hydre de foutre ivre de foudre. Le livre d’Elle délivre d’elle. Entre les pages additionnelles choc des octaves messir Odja. Cendre fugace sous le souffle où il veut. Fumigations des encens de miroir au seuil des cercueils immergés. Mannequin empêché, arlequin empêtré dans les images de la connaissance rocailleuse. Mais le désert et les barrages nous suspendent un instant au-dessus du vide fracassant pour retenir ce qui se disperse en l’absence de l’éclair.\nDe retour à la surface l’interrogation se multiplie, débouche sans cesse sur la question qui est JE. Mais personne ne réclame plus la surface que celui qui est immergé, en voie de mort. La mort rend-elle possible le cheminement infini à partir d’un point ? N’y a-t-il plus cette fixité écho d’une peur de l’infini ?\nMouvant sans masse sur la surface existante pour MOI, inexistante quand on la regarde, la chèvre de Monsieur Seguin grimpe tandis que je tombe comme dans un rêve, me demandant si... Le corps indique qu’il prépare la fête et rien d’autre. L’homme est le cercueil de l’homme devant sa bière. Tes lèvres rougies de liqueur sur la paroi ouvrent le ciel. Le bateleur vide la coupe, le diamant est au fond du coup noir. Je n’ai plus le temps de parler de moi bien que je ne dise que cela.\nMagie rouge du thé versé au lotus, le narguilé du lapin blanc s’enroule dans le fœtus zodiacal. J’ai allumé l’encens de puits le miroir est un autel qui chaque jour se salue. Le froissement des voiles m’éveille je me lève derviche.\nGrognement de la rue\nCette année je m’éveille le jour de ma naissance. Dans mon lit coule la Seine et l’éclair de genèse astrale — déchirement — est accélération du temps vers le lointain profond, arrêt du temps vers l’éther instantané.\nles nus ages se disent solve\nles corps beaux sans vol\nle délice est une dalle lisse\nalice est un calice.\nL’Un visible un invisible.\nL’amante est une menthe où les sens distillent une essence. Dans la ville démiurgique martelant le sol des pendaisons accomplies, la mandragore est électrique soleil couchant sur les fresques de la fable le jouir se lève. Entre chaque apparition le silence au centre de l’ouragan agglutine les configurations prénatales. Les déjections matinales sont les déchets du four qu’est la lune devant le regard des fées les vies s’écoulent dans la ruée. Sourire énigmatique des projections nocturnes où l’assaut des champignons verticaux glisse sur le lichen de la mémoire.\nComme je modifiais les regards les Buddhas se démasquèrent... back in the night. Les méridiens signent l’étendue désarroi prémortel. Acupuncture des états d’être. Révélation androgynique. Flot des consciences. Déluge atlantéen. Les orbites de Saturne sont des yeux dont un voyage au centre de la terre. Le phénix joue dans la grotte de corail pourpré, tous les cailloux sont diamantaires. La porte de jade à l’entrée du Saint des Saints saveur hiéroglyphique des holocaustes inscrivant JE SUIS TOI\nPréserver les vies en filigrane du poids des sillons pour le voyage de non-retour. Écrire est un voyage astral dans le paysage des fontanelles, instant où les yeux et la vue accouplent l’être au firmament.\nHallali des hordes mentales la lie de l’être est lila. Le déjà vu est le silence de l’œil livrant le déchiffrer des constellations que sont les nœuds à défricher. L’instant, l’étoile filante, l’éternel retour du rien non néantisé. Qui n’est pas même. Néant éternel né-en où le croisé des sauts crucifie le choix de l’hésitation. Ce qui revient c’est ce dont je ne suis pas revenu pour n’y avoir pas été.\nLa limite est le passage\nl’abandon est le lieu du lien\nSous les échafauds à relire l’élection la croix s’y fie. Dans l’amazone des moisissures navigation tous feux enfouis. Le mystère ne répond plus à aucun signalement. Dans l’orgasmique rêve céleste la bio-logique est le mutus liber à décrypter. Et le voyage ascentionnel se déploya parmi les astres. La réponse n’a pas tué le sphynx, je séjournais dans la tour foudroyée, aveugle à la tombe à venir treizième revenante en lion.\nLe gardien double avait visage de femme. Le voyageur qui revient l’a trouvée. L’empire naît du labyrinthe, femme initiée aux renaissances, poudre d’or dont les étoiles artisannent les grilles pour les déchiffrer ombre d’une contrée où le regard impossible du soleil levant mystérise l’énigme. Ce qui reste d’humain en l’homme délimite l’architecture des miroirs où l’archer, insolite visionnaire, célèbre l’inversion des chandeliers. Sous les dérobades affluantes, congruence des dithyrambes diurnes. Tandis que dans l’ombre du songe, l’antre domiciliée courbe le livre dont le vent tourne les pages. Les ANS du JE myrrhent l’or dans les miroirs de rayons de visée.\nOntologie de la dix-neuvième archangélique dans l’amphibie des docks divinatoires. En tuant le dragon tu dénoues la dragonne. Sécrétion des retours dans le dodécaèdre des dolmens tourbés où le joker est l’inventeur du temps gratuit. Le rêve du prêtre est sens inter-dit. La vie en djinns impressionnés. Les sarcophages de la mémoire s’entrouvrent sur des marches secondes qui sont les mers de phares à éons, les larmes d’un œil dont la rétine est en feu.\nDans la chasse absurde des lames aux inconnues le cygne repêche les voyageurs. Et puis un jour nous sommes dans l’œil il s’est brûlé, assimilant. Et dans le vide de l’après voir traverser la rétine arête interne où après deux sourires ordonner la vision en la désordonnant.\nUn matin trouver le soleil second, celui de la nuit dans ses parades lunaires, comme se retrouver devant une feuille blanche après en avoir tourné une que l’on aura préalablement noircie. À l’aurore de l’horreur l’aura est eau de Rôh Râh. L’un descend dans les décans d’absence de l’incandescence.\nPenché à la fenêtre de la ville où les gouttes appellent les marées du corps en un soliloque dérisoire, tandis que le jour nous rêve, la poussière recouvre le décor, parcelles stellaires accompagnées le temps d’un livre.\nLe dé rit de Sion le cerveau se déride dans le Paris de Salomon, tout sermon est maintenant une intonation, l’occasion de déceler l’étincelle dans la fournaise. Le cryptogramme interroge l’évacuation du bas astral. L’enfer est sous l’asphalte, comme la visibilité des croissants, décans de songes parallèles, affuble les instants de sous-titres étranges. Le cœur frappe bas, le temps est dans les tempes. Cryptes où croupissent les croque-morts de la cruauté cruciale. La détresse des détections est idiopathie moirée.\nLe frémissement des diagonales blanchit les antichambres du désir.\nLe nombril de mon dé nombre l’île du monde il ombre les démons néons sombrés. Le nom brille les ondes le non brûle les sondes. Dans l’ivresse des vampires neurotropes poursuivant l’achèvement de l’innervation, le mouvement de la célébration des cybèles endogènes est sous le signe de la dérobade des visages pronominaux dans le prolongement de l’affre prophétique. Les roses sucent l’art des toisons au poison inconnu.\nDiluer les éphémérides du renoncement dans le violet d’un voile, où, les ouvertures opèrent la glaciation de l’être dans les devantures. Les fées gestent auprès des phares nés nus. Je regarde le silence il m’écoute. La seconde horloge est molle, la troisième est immobile.