Biaxial Basal Tone and Passive Testing of the Murine Reproductive System Using a Pressure Myograph | Protocol (Translated to French)\nLe bip basal biaxial et l'essai passif du système reproducteur de Murine utilisant un myographe de pression\nCe protocole a utilisé un système de myographe de pression disponible dans le commerce pour effectuer des tests de myographe de pression sur le vagin murine et le col de l'utérus. Utilisant des médias avec et sans calcium, les contributions du tonus basal lisse de cellules de muscle (SMC) et de la matrice extracellulaire passive (ECM) ont été isolées pour les organes dans des conditions physiologiques estimées.\nLes organes reproducteurs féminins, en particulier le vagin et le col de l'utérus, sont composés de divers composants cellulaires et d'une matrice extracellulaire unique (ECM). Les cellules musculaires lisses présentent une fonction contractile dans les parois vaginales et cervicales. Selon l'environnement biochimique et la distension mécanique des parois des organes, les cellules musculaires lisses modifient les conditions contractiles. La contribution des cellules musculaires lisses dans des conditions physiologiques de base est classée comme un ton basal. Plus précisément, un ton basal est la constriction partielle de base des cellules musculaires lisses en l'absence de stimulation hormonale et neuronale. En outre, l'ECM fournit un soutien structurel pour les parois des organes et fonctionne comme un réservoir pour les indices biochimiques. Ces indices biochimiques sont essentiels à diverses fonctions d'organe, telles que l'incitation à la croissance et le maintien de l'homéostasie. L'ECM de chaque organe est composé principalement de fibres de collagène (principalement les types de collagène I, III et V), de fibres élastiques et de glycosaminoglycanes/protéoglycanes. La composition et l'organisation de l'ECM dictent les propriétés mécaniques de chaque organe. Un changement dans la composition de l'ECM peut conduire au développement de pathologies reproductrices, telles que le prolapsus des organes pelviens ou le remodelage cervical prématuré. En outre, les changements dans la microstructure et la rigidité d'ECM peuvent altérer l'activité lisse de cellules de muscle et le phénotype, ayant pour résultat la perte de la force contractile.\nDans ce travail, les protocoles rapportés sont employés pour évaluer le tonalité basale et les propriétés mécaniques passives du vagin murine non-pregnant et du col de l'utérus à 4-6 mois d'âge dans l'estrus. Les organes ont été montés dans un myographe de pression disponible dans le commerce et des essais de diamètre de pression et de longueur de force ont été exécutés. Des données d'échantillon et des techniques d'analyse de données pour la caractérisation mécanique des organes reproducteurs sont incluses. Ces informations peuvent être utiles pour construire des modèles mathématiques et concevoir rationnellement des interventions thérapeutiques pour les pathologies de santé des femmes.\nLa paroi vaginale est composée de quatre couches, l'épithélium, lalame propria, muscularis, et adventitia. L'épithélium est principalement composé de cellules épithéliales. La lame propria a une grande quantité de fibres élastiques et fibrillaires de collagène. Le muscularis est également composé d'élastine et de fibres de collagène, mais a une quantité accrue de cellules musculaires lisses. L'adventitia est composée d'élastine, de collagène et de fibroblastes, bien qu'en concentrations réduites par rapport aux couches précédentes. Les cellules musculaires lisses sont d'intérêt pour les groupes de recherche biomécaniquement motivés car ils jouent un rôle dans la nature contractile des organes. En tant que tel, la quantification de la fraction de zone musculaire lisse et l'organisation est la clé pour comprendre la fonction mécanique. Les investigations précédentes suggèrent que le contenu lisse de muscle dans la paroi vaginale soit principalement organisé dans l'axe circonférences et longitudinal. L'analyse histologique suggère que la fraction lisse de secteur de muscle soit approximativement35% pour les sections proximales et distales du mur 1.\nLe col de l'utérus est une structure très collagène, qui jusqu'à récemment, a été pensé pour avoir un minimum de contenu de cellules musculaires lisses2,3. Des études récentes, cependant, ont suggéré que les cellules musculaires lisses peuvent avoir une plus grande abondance et le rôle dans le col de l'utérus4,5. Le col de l'utérus présente un gradient de cellules musculaires lisses. L'os interne contient 50-60% de cellules musculaires lisses où l'os externe ne contient que 10%. Les études de souris, cependant, rapportent le col de l'utérus pour être composé de 10-15% de cellules musculaires lisses et 85-90% tissu conjonctif fibreux sans mention des différences régionales6,7,8. Étant donné que le modèle de souris diffère du modèle humain fréquemment rapporté, d'autres investigations concernant le col de l'utérus de souris sont nécessaires.\nLe but de ce protocole était d'élucider les propriétés mécaniques du vagin murine et du col de l'utérus. Ceci a été accompli en utilisant un dispositif de myographe de pression qui permet d'évaluer des propriétés mécaniques dans les directions circonférences et axiales simultanément tout en maintenant les interactions cellulaires-matrice indigènes et la géométrie d'organe. Les orgues ont été montés sur deux canules personnalisées et fixés avec des sutures en soie 6-0. Des tests de diamètre de pression ont été effectués autour de l'étirement axial physiologique estimé pour déterminer la conformité et le moduli tangente9. Des essais de longueur de force ont été effectués pour confirmer l'étirement axial estimé et pour s'assurer que les propriétés mécaniques étaient quantifiées dans la plage physiologique. Le protocole expérimental a été exécuté sur le vagin murine non-pregnant et le col de l'utérus à 4-6 mois d'âge dans l'estrus.\nLe protocole est divisé en deux sections d'essais mécaniques principales : le ton basal et les essais passifs. Un ton basal est défini comme la constriction partielle de base des cellules musculaires lisses, même en l'absence de stimulation locale, hormonale et neuronale externe10. Cette nature contractile de base du vagin et du col de l'utérus donne des comportements mécaniques caractéristiques qui sont ensuite mesurés par le système myographe de pression. Les propriétés passives sont évaluées en supprimant le calcium intercellulaire qui maintient l'état de base de contraction, ce qui entraîne une relaxation des cellules musculaires lisses. Dans l'état passif, les fibres de collagène et d'élastine fournissent les contributions dominantes pour les caractéristiques mécaniques des organes.\nLe modèle murine est largement utilisé pour étudier les pathologies de la santé reproductive des femmes. La souris offre plusieurs avantages pour quantifier l'évolution des relations entre l'ECM et les propriétés mécaniques dans le système reproducteur11,12,13,14. Ces avantages comprennent des cycles estrous courts et bien caractérisés, un coût relativement faible, une facilité de manipulation et un temps gestationnel relativement court15. En outre, le génome des souris de laboratoire est bien cartographié et les souris génétiquement modifiées sont des outils précieux pour tester les hypothèses mécanistes16,17,18.\nLes systèmes de myographie de pression disponibles dans le commerce sont largement utilisés pour quantifier les réponses mécaniques de divers tissus et organes. Quelques structures notables analysées sur le système de myographe de pression incluent les artères élastiques19,20,21,22, veines et greffes vasculaires machinées de tissu23,24, l'œsophage25, et les gros intestins26. La technologie du myographe sous pression permet une évaluation simultanée des propriétés dans les directions axiale et circonférence tout en maintenant les interactions cellules-ECM indigènes et la géométrie in vivo. En dépit de l'utilisation étendue des systèmes de myographe dans la mécanique molle de tissu et d'organe, un protocole utilisant la technologie de myographe de pression n'avait pas été précédemment développé pour le vagin et le col de l'utérus. Des investigations antérieures sur les propriétés mécaniques du vagin et du col de l'utérus ont été évaluées uniaxialement27,28. Ces organes, cependant, l'expérience de la charge multiaxiale dans le corps29,30, quantifiant ainsi leur réponse mécanique biaxiale est important.\nEn outre, des travaux récents suggèrent que les cellules musculaires lisses peuvent jouer un rôle potentiel dans les pathologies des tissus mous5,28,31,32. Ceci fournit une autre attraction de l'utilisation de la technologie de myographe de pression, car il préserve les interactions cellulaires-matrice indigènes, permettant ainsi la délimitation de la contribution que les cellules musculaires lisses jouent dans physiologique et pathophysiologique Conditions. Ici, nous proposons un protocole pour quantifier les propriétés mécaniques multiaxiales du vagin et du col de l'utérus sous le tonalité basale et les conditions passives.\nDes souris femelles nullipares de 4-6 mois de C57BL6J (29,4 à 6,8 grammes) à l'estrus ont été utilisées pour cette étude. Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité des soins et de l'utilisation des animaux de l'Institut de l'Université Tulane. Après l'accouchement, les souris se sont acclimatées pendant une semaine avant l'euthanasie et ont été logées dans des conditions standard (cycles de lumière/obscurité de 12 heures).\n1. Sacrifice de souris à l'estrus\nDéterminer le cycle estrous: Le cycle estrous a été surveillé par une évaluation visuelle conformément aux études précédentes15,33,34. Le cycle esturaire se compose de quatre étapes : proestrus, estrus, metestrus et diestrus. Pendant la phase proestrus les organes génitaux sont gonflés, roses, humides, et ridés. La phase de l'estrus est ridée mais moins enflée, rose et humide. Metestrus et diestrus sont tous deux signalés comme ne présentant aucun gonflement et froissements, manquant d'une teinte rose, et sec34,35.\nEffectuer une expérience à l'estrus: Tous les tests mécaniques ont été effectués alors que les souris étaient à l'estrus, car c'est le plus facile à visualiser et fournit un point de temps cohérent et répétable.\nPour les souris subissant des tests de tonalité basale, euthanasiez par guillotine. Pour les souris testées uniquement dans des conditions passives, euthanasiez l'inhalation de dioxyde de carbone (CO2). La guillotine sert à préserver la fonction des cellules musculaires lisses de l'appareil reproducteur, comme le gaz CO2 modifie les propriétés contractiles des cellules musculaires lisses36,37,38, 39,40,41,42. Il est impératif d'effectuer la dissection dans les 30 minutes pour minimiser le risque d'apoptose cellulaire.\n2. Dissection du système reproducteur\nMise en place : Placez un tampon absorbant sur le poste de travail et remplissez un plat et une seringue Petri avec une solution de sel équilibré (HBSS) de 4 'C. Utilisez une lingette pour l'élimination des tissus adipeux. Placez le côté ventral de souris vers le haut et tapez les pattes et la queue. Allumez les lumières du microscope et éteignez des micro-ciseaux, des ciseaux, deux paires de pinces droites et deux paires de pinces courbes.\nÀ l'aide d'une pince à épiler et de ciseaux inclinés, soulevez la peau autour de l'abdomen et faites une incision à la base de l'abdomen, au-dessus de l'os pubien. L'incision doit être suffisamment peu profonde pour ne pas perforer la paroi musculaire abdominale. Continuer à utiliser les ciseaux pour couper en supériorité vers la cage thoracique et profondément à travers les muscles abdominaux.\nEnlever la graisse superficielle en tirant légèrement sur la graisse avec la pince incurvée et les micro-ciseaux. Le tissu adipeux reflétera la lumière de façon hétérogène avec un aspect scintillant. Placer toute la graisse enlevée et le tissu sur l'essuie-glace. Identifiez les cornes utérines et l'os pubien.\nPlacez les ciseaux fermés entre la paroi vaginale et l'os pubien. Couper soigneusement le milieu de l'os pubien (symphyse pubienne). Placer les pinces courbes aux deux extrémités de l'os pubien coupé. Tirez les deux extrémités coupées latéralement pour permettre un meilleur accès aux organes reproducteurs.\nRetirer la vessie et l'urètre de la paroi vaginale. Cela peut être fait en utilisant des pinces droites et des micro-ciseaux. Tenez la vessie avec une pince à épiler droite pour créer de la tension et utilisez des techniques de dissection émoussée pour séparer le tissu environnant du vagin. Une fois que la vessie et l'urètre sont disséqués, couper la base et enlever de la cavité du corps.\nIdentifier le système reproducteur : Les cornes utérines bifurquent du col de l'utérus. Le col de l'utérus peut être identifié à partir du vagin en raison de différences de géométrie et de rigidité. Le diamètre externe du col de l'utérus est plus petit que le vagin. Le col de l'utérus est plus rigide que le vagin et ressemble à celui d'une perle (Figure 1).\nUtilisez de l'encre et des étriers pour marquer des points de 3 mm le long des organes. Commencez sous les ovaires sur les tubes utérins et marquez les points de façon inférieure pour atteindre le col de l'utérus. Utilisez le point central du col de l'utérus pour commencer un chemin de point vers le vagin introitus.\nLaissez l'encre sécher et séparer les organes reproducteurs du tissu adipeux environnant, du tissu conjonctif et du côlon. Nettoyez le vagin aussi près que possible de l'introitus vaginal. À l'aide de ciseaux, couper autour de l'introitus vaginal.\nREMARQUE : Il est possible que les organes se dessèchent au cours de ce processus. S'il s'agit d'un problème, une seringue remplie de 4 c HBSS peut être utilisée pour ajouter de l'humidité aux organes.\nCouper les cornes utérines immédiatement inférieures aux ovaires. Notez que les organes se rétracteront de la longueur post-explantation que le tissu conjonctif est enlevé et l'organe recule. Placer les organes reproducteurs disséqués dans un plat Petri rempli de 4 c.C. HBSS. Ce changement de longueur peut être utilisé pour calculer la longueur in vivo estimée (section 5).\nREMARQUE : Nous avons identifié que l'utilisation de HBSS à cette température pendant la dissection et l'annulation n'affecte pas la viabilité lisse de cellules de muscle. Le maintien d'un pH de 7,4, cependant, est impératif pour maintenir la viabilité des cellules musculaires lisses. À cette température, le HBSS a un niveau de pH de 7,4.\nAprès une période d'équilibre de 15 minutes dans un HBSS de 4 oC, mesurez l'espace entre les points à l'aide d'étriers. Enregistrez les mesures pour chaque distance dans une feuille de calcul. Ces valeurs seront utilisées pour calculer le rapport d'étirement in vivo (longueur d'origine/longueur explantée).\nDéfinir l'essuie-glace qui contient le tissu jeté sur la région abdominale avec l'excès de tissu face à l'intérieur de la souris et tremper la lingette dans 4 'C HBSS. Envelopper la souris et l'excès de tissu dans du papier d'aluminium et le placer dans un sac de congélation sécuritaire pour être entreposé à -20 oC. Le comportement mécanique passif sur le vagin ne s'est pas avéré sensiblement différent après un cycle de gel-dégel43. Tous les organes testés ont été utilisés immédiatement après l'euthanasie ou après un cycle de gel-dégel.\nDéterminer la taille appropriée de la canule pour le type d'organe. Dans une souris C57BL6J typique, le vagin utilise des canules qui sont à la fois 3,75 mm de diamètre et riveté. Le col de l'utérus utilise une canule de 3,75 mm pour l'extrémité vaginale et une canule de 0,75 mm de diamètre pour l'extrémité utérine (figure 2) La canule de 0,75 mm est lisse.\nREMARQUE : Les tailles de diamètre indiquées ci-dessus sont employées pour les souris nulliparous typiques de 4-6 mois C57BL6, C57BL6 x 129SvEv, et les souris non parles âgées 7-9 mois. Cependant, certaines circonstances, telles que le prolapsus ou la grossesse, peuvent nécessiter une canule de plus grande taille.\nÀ chaque organe, montez le côté cervical sur la partie transducteur de force du dispositif de cannulation. Montez l'extrémité opposée de l'organe (vaginal ou utérin) sur la partie micromètre de l'appareil. Resserrer les deux extrémités avec des sutures.\nEn raison de la différence d'épaisseur et de degré de contractilité entre le vagin et le col de l'utérus, différentes techniques peuvent être utilisées pour effectuer le cannulation le plus efficace. Pour le vagin, placez 2 sutures entre les 2nd et 3rd rivets de la canule d'une manière "X". Lors de la cannulation du col de l'utérus, la canule n'est pas rivée de sorte que l'organe est mieux placé à l'arrière de la canule avec 3 sutures horizontales sur l'extrémité utérine et 4 sutures sur l'os externe. Pour les deux organes, la longueur maximale ne doit pas dépasser 7 mm entre les sutures (figure 3).\n4. Myographie de pression mise en place\nAfin de mettre en place le système de myographie de pression, la puissance sur le système d'essai et de remplir la bouteille réservoir avec 200 ml de HBSS (Figure 4). Activez le feu et laissez le HBSS dans la bouteille du réservoir chauffer. Ensuite, allumez le microscope et ouvrez le programme informatique. Assurez-vous que l'image de l'organe cannulé, l'interface de pression, les relevés de débit mètre et l'outil de fonction du séquenceur sont tous visibles (Figure 5).\n5. Essais mécaniques de tonalité basale\nREMARQUE : Le col de l'utérus a montré une nature phasique pendant les étapes de début des essais. Cependant, cela a diminué après le préconditionnement. L'essai de tonalité basale est fait utilisant Krebs Ringer Buffer (KRB) dans le bassin de l'appareil DMT. Le tampon est aéré avec 95% O2 et 5% CO2. Une fois la partie de tonalité basale terminée, le KRB sans calcium est utilisé.\nTrouver la géométrie déchargée: Étirer l'organe de sorte que le mur n'est pas en tension. Pour le vagin, observez les rainures sur la paroi vaginale. Pour le col de l'utérus, couper immédiatement en dessous des points d'encre situés au-dessus et au-dessous de la marque centrale du col de l'utérus. Ceci permet de concevoir une méthode reproductible pour une longueur in situ cervicale de 6 mm44. Mesurer la longueur de la suture à la suture avec des étriers\nTrouver la pression déchargée (UP) : Augmenter la pression de 0 à 10 mmHg par incréments de 1 mmHg. Déterminer la pression dans laquelle l'organe n'est plus effondré. Cela peut être déterminé comme le plus grand saut dans le diamètre extérieur à une pression donnée, comme exposé sur le moniteur du programme. Après avoir enregistré la pression et le diamètre extérieur, notez que c'est le premier point où l'organe n'est pas effondré et zéro la force.\nEstimation de l'étirement in vivo : Calculez l'étirement in vivo estimé en divisant la longueur mesurée in vivo par la longueur mesurée après l'explantation :\nPréconditionnement de diamètre de pression : Définir la pression à 0 mmHg, la longueur à la longueur in vivo estimée et le gradient à 1,5 mmHg/s. Exécuter une séquence qui fait passer la pression de 0 mmHg à la pression in vivo - déchargée ( tableau1), maintenez 30 secondes, et de prendre la pression à 0 mmHg avec une période de maintien de 30 secondes. Après avoir répété pour un total de 5 cycles, appuyez sur Arrêtez dans le programme informatique et enregistrer le fichier.\nTrouver l'étirement in vivo expérimental : Ajustez l'organe pour qu'il soit à la longueur in vivo estimée pendant la pression déchargée et appuyez surDémarrer. Évaluer les valeurs de pression vs force pour les valeurs de pression allant de la pression déchargée à la pression maximale (tableau 1). Appuyez sur le bouton Stop dans le programme informatique et enregistrez le fichier.\nREMARQUE : La valeur d'étirement mesurée est calculée in situ. Ceci est accompagné de la limitation qu'il ne peut être mesuré après la désarticulation de la symphyse pubienne. En conséquence, l'attache naturelle est perdue, ce qui peut modifier la longueur. L'étirement théorique, cependant, est basé sur la théorie précédemment introduite que l'organe connaîtra des changements minimes de force lorsqu'il est exposé à des pressions physiologiques pour conserver l'énergie45. Dans le protocole, l'étirement in vivo mesuré sera la valeur extensible calculée à l'aide de la longueur identifiée expérimentalement dans laquelle il y a un changement minimal de force lorsqu'il est exposé à une gamme physiologique de pressions.\nPréconditionnement de diamètre de pression : Régler la pression à 0 mmHg, la longueur de la longueur in vivo expérimentale, et le gradient de 1,5 mmHg/s. Exécuter une séquence qui prend la pression de 0 mmHg à la pression maximale - UP , tenir pendant 30 secondes, et revenir à 0 mmHg avec une ad 30 secondes de période de prise. Après avoir répété cela pour un total de 5 cycles, appuyez sur le bouton Stop dans l'interface du programme et enregistrer le fichier.\nREMARQUE : 5.4 est impératif pour réaliser une lecture plus cohérente de force axiale avec la pression croissante. Cette étape aide à trouver le tronçon in vivo correct, qui est souvent sous-estimé en fonction des indices visuels. 5.6 sert d'étape de précaution pour minimiser l'hystérèse et pour obtenir une réponse cohérente, répétable et mathématiquement interprétable de l'organe.\nPréconditionnement de la longueur de force : Entrez une pression maximale de 1/3 et vers le haut pour la pression d'entrée et de sortie. Ajuster l'organe à -2% de la longueur in vivo et appuyez sur Démarrer. Ajuster la longueur à 2 % de longueur in vivo puis redescendre à -2 % à 10 m/s. Répétez l'extension axiale pour un total de 5 cycles. Appuyez sur Arrêtez dans le programme informatique et enregistrer le fichier.\nÉquilibre : Avec l'organe à la longueur in vivo déterminée, régler à la fois l'aube et la pression de sortie à 1/3 de la pression maximale. Équilibrez l'orgue pendant 10 minutes. Ramenez lentement les deux pressions à 0 mmHg avec le gradient réglé comme 1,5 mmHg/s.\nRéévaluer la géométrie déchargée : Définir l'organe sur la longueur in vivo et la pression sur la pression déchargée. Diminuer la longueur axiale vers la longueur déchargée estimée à une vitesse de 10 m/s jusqu'à ce qu'il y ait un changement minimal dans la force. Cette longueur correspondante est connue sous le nom de longueur déchargée, ou lorsque l'organe n'est pas en tension ni compression. Avant de zéror la force, enregistrez la longueur déchargée, le diamètre extérieur et la valeur de force.\nREMARQUE : La géométrie antérieure déchargée a été déterminée par des indices visuels, ce qui est purement qualitatif. Une réévaluation est nécessaire pour une méthode quantitative et pour tenir compte des changements possibles de longueur qui peuvent se produire pendant le préconditionnement. Cette géométrie sera utilisée dans la section 8.\nConfiguration de l'échographie : Utilisez le paquet abdominal d'imagerie générale pour visualiser les organes du dispositif d'essai. (Figure 6). Avant d'effectuer les essais, minimisez les artefacts du fond du bassin métallique myographique de pression. Ajustez la canule à une hauteur qui est la distance maximale du fond avec le tissu étant toujours entièrement immergé dans la solution d'essai. Un support personnalisé est imprimé en 3D pour stabiliser le transducteur en position verticale pendant l'imagerie.\nImagerie par ultrasons : Identifiez la canule près du transducteur de force et ajustez le stade du microscope à l'image le long de la longueur du tissu. Tout au long du processus d'essai, la région du milieu le long de la longueur est suivie (figure 6A,C). Après l'imagerie, passez en revue l'image "Cine store" boucle qui se compose d'une série de cadres en mode B et d'identifier le cadre avec le plus grand diamètre extérieur. Les calculs d'épaisseur effectués seront utilisés à la section 8.\nEssais de diamètre de pression (-2 % de longueur in vivo) : Appuyez sur Démarrer et ajuster l'organe de sorte qu'il mesure -2 % de la longueur in vivo, réglez la pression à 0 mmHg et gradientz à 1,5 mmHg/s. Augmentez la pression de 0 mmHg à la pression maximale. Ramenez la pression à 0 mmHg avec une période de prise de 20 secondes. Répétez cette opération pendant 5 cycles.\nEssais de diamètre de pression (longueur in vivo) : Appuyez sur Démarrer et ajuster l'organe de sorte qu'il soit à la longueur vivo, réglez la pression à 0 mmHg, et gradient à 1,5 mmHg/s. Augmenter la pression de 0 mmHg à la pression maximale. Ramenez la pression à 0 mmHg avec une période de prise de 20 secondes. Répétez cette opération pendant 5 cycles.\nEssais de diamètre de pression (longueur in vivo de 2 % ) : Ajuster l'organe de manière à ce qu'il soit de 2 % de longueur in vivo, régler la pression à 0 mmHg et descendre à 1,5 mmHg/s. Augmenter la pression de 0 mmHg à la pression maximale, puis redescendre à 0 mmHg avec une période de prise de 20 secondes. Répétez cette opération pendant 5 cycles. Les données de pression des trois longueurs seront utilisées à l'article 8.\nEssai de force-longueur (pression nominale) : Fixez la pression à la pression déchargée et à l'organe à -2% de la longueur in vivo. Étirez l'organe jusqu'à 2 % de la longueur in vivo et revenez à -2 % la longueur in vivo à un taux de 10 m/s. Répétez l'opération pour un total de 3 cycles.\nTest de longueur de force (1/3 pression maximale - UP) : Réglez la pression à 1/3 de la pression maximale et ajustez l'organe à -2 % de la longueur in vivo. Après avoir appuyé sur Démarrer, étirer l'organe à 2% de la longueur in vivo et revenir à -2% de la longueur in vivo à un taux de 10 m/s. Après avoir répété pour un total de 3 cycles, appuyez sur Arrêtez et enregistrez les données.\nEssais de force-longueur (2/3 pression maximale - UP) : Réglez la pression à 2/3 de la pression maximale et ajustez l'organe à -2% de la longueur in vivo. Appuyez sur Démarrer et étirer l'organe à 2 % de la longueur in vivo et à -2 % la longueur in vivo à un taux de 10 m/s. Après avoir répété pour un total de 3 cycles, appuyez sur Arrêtez et enregistrez les données.\nTest de longueur de force (pression maximale et UP) : Réglez la pression à la pression maximale et réglez l'organe à -2 % de la longueur in vivo. À un taux de 10 m/s, étirer l'organe à 2 % de la longueur in vivo et revenir à -2 % de la longueur in vivo. Après avoir répété pour un total de 3 cycles, enregistrer les données. Toutes les données sur les forces seront utilisées à l'article 8.\nRetirez les supports de test KRB et lavez-les avec du KRB sans calcium. Remplacez le support par une solution KRB sans calcium complétée par 2 mM EGTA. Incuber le tissu pendant 30 minutes. Retirez la solution et remplacez le support par du KRB frais sans calcium.\n6. Essais mécaniques passifs\nREMARQUE : Si vous commencez par des tests passifs, commencez à l'étape 1. Si des tests de tonalité basale ont été effectués avant le démarrage passif à l'étape 6. Si vous commencez avec du tissu congelé, prévoyez une période d'équilibre de 30 minutes à température ambiante avant de canniser l'organe.\nTrouver la géométrie déchargée: Étirer l'organe de sorte que la paroi de l'organe n'est pas en tension. Mesurez l'organe cannulé de la suture à la suture et enregistrez-le comme la longueur déchargée.\nTrouver la pression déchargée: Après avoir appuyé sur Démarrer, augmenter la pression de 0 à 10 mmHg par incréments de 1 mmHg. Tout en passant par ce processus, déterminer la pression dans laquelle l'organe n'est pas en tension. À l'aide du moniteur de programme informatique, cela peut être déterminé à partir du plus grand saut dans le diamètre extérieur. Après la réduction à zéro de la force, enregistrez cette pression ainsi que le diamètre extérieur et notez que c'est le premier point dans lequel l'organe n'est pas effondré.\nEstimation de l'étirement in vivo : Calculez l'étirement in vivo estimé en divisant la longueur mesurée in vivo par la longueur mesurée post-explantation.\nPréconditionnement du diamètre de pression : Après avoir appuyé sur Démarrer, définir la pression à 0 mmHg, la longueur comme la longueur in vivo estimée, et le gradient à 1,5 mmHg/s. Commencez à exécuter une séquence qui prend la pression de 0 mmHg à la pression maximale et de retour à 0 Mmhg. Répétez ce processus à travers 5 cycles avec un temps de prise de 30 secondes.\nPréconditionnement de la longueur de la force : Ajustez l'organe à la longueur in vivo et entrez manuellement la pression déchargée dans le programme informatique pour les deux pressions. Après avoir appuyé sur Démarrer, définir le gradient à 2 mmHg et la pression à 1/3 du maximum. Étirez l'orgue jusqu'à 2 % et redescendez à -2 % à 10 m/s. Répétez ce cycle pour un total de 5 fois et appuyez sur Arrêt.\nTrouver la longueur expérimentale in vivo: Trouver et tracer des valeurs de force à -2% de la longueur in vivo, la longueur in vivo, et de 2% de la longueur in vivo. Prenez des forces à des pressions uniformément espacées allant de 0 mmHg à la pression maximale. L'étirement in vivo expérimental sera la valeur extensible qui présente une ligne relativement plate sur une gamme de pressions.\nRépétez le diamètre de pression et les étapes de préconditionnement axiale à la nouvelle longueur in vivo.\nÉquilibre : Avec l'organe à la longueur in vivo déterminée, régler la pression d'auremaret et de sortie à la pression déchargée. Laisser l'orgue ré-équilibrer pendant 15 minutes. Après 15 minutes, ramener lentement l'inlet et la pression de sortie à 0 mmHg.\nRéévaluer la configuration déchargée : Amenez l'organe à la longueur déchargée et réestimez la longueur déchargée. Enregistrez la longueur déchargée et le diamètre extérieur alors que la pression est de 0 mmHg, la pression déchargée, et 1/3 de la pression maximale. Zéro la force à la pression déchargée. Le diamètre à la pression déchargée est le diamètre in vivo.\nREMARQUE : La réestimation de la longueur déchargée est nécessaire car de petites déformations plastiques ont été observées précédemment dans les tissus biologiques mous après le préconditionnement. Cette configuration déchargée sera celle utilisée à la section 8.\nUltrasons : Effectuez l'imagerie par ultrasons en mode B à la longueur et à la pression déchargées.\nEssai de diamètre de pression : Avec l'organe à -2% de la longueur in vivo expérimentalement déterminée et la pression à 0 mmHg, appuyez sur Démarrer. Augmenter la pression de 0 mmHg à la pression maximale et revenir à 0 mmHg. Maintenez l'étape de 2-0 mmHg pendant 20 secondes. Après avoir répété pour un total de 5 fois, appuyez sur le bouton Stop dans l'interface et enregistrer le fichier.\nREMARQUE : Répétez à la longueur in vivo expérimentale, 2 % de la longueur in vivo expérimentale.\nTest de longueur de force : Réglez la pression à la pression nominale et ajustez l'organe à -2% de la longueur in vivo. Étirez l'organe jusqu'à 2 % de la longueur in vivo et remontez à -2 % de la longueur in vivo à un taux de 10 m/s. Après avoir répété pour un total de 3 fois, enregistrer les données. Répétez cette opération pour une pression maximale de 1/3, une pression maximale de 2/3 et à la pression maximale.\nCalculez l'épaisseur déchargée à partir d'images ultrasons en mode B. À l'aide d'un logiciel d'imagerie, tracez une ligne pour indiquer la profondeur de pénétration. Fixez l'échelle à la longueur de la ligne (c.-à-d. 2000 m comme le montre la figure 6B et 6D).\nCalculs de l'épaisseur du mur : À l'aide d'un logiciel informatique, tracez et mesurez le diamètre intérieur et externe de l'organe. Ensuite, tracez et mesurez une ligne entre les diamètres. Dessinez un total de 25 lignes transmuros. Moyenne de tous les points de données et répéter pour un total de 3 fois.\nAssurez-vous que la pression est de 0 mmHg et éteinte. Fermez l'entrée principale et déversez-la pour les deux soupapes à trois voies. Aspirez le liquide restant du bassin du dispositif de cannulation.\nRetirez l'organe de la scène et remplissez la bouteille du réservoir d'eau déionisée. À l'aide d'une seringue, rincer la canule à l'eau. Connectez le tube pour contourner la canule.\nActivez la pression et l'écoulement, fixez la pression d'entrée à 200 mmHg, la pression de sortie à 0 mmHg, gradientz à 10 mmHg/s, et laissez le flux courir pendant 5 minutes. Laissez le système fonctionner pendant que la bouteille du réservoir est vide et laissez couler l'air pendant 5 minutes ou jusqu'à ce que les lignes soient sèches.\nPour les essais de diamètre de pression, recueillir des données à partir de l'endroit où la pression commence à augmenter de la valeur minimale jusqu'au maximum. Pour les essais de longueur de force, recueillir des données juste en dessous du maximum en vigueur jusqu'à ce que la force cesse de diminuer.\nOuvrez le fichier de données pour chaque test de diamètre de pression et sélectionnez l'onglet de pression moyen. Naviguez vers la région de chargement de la dernière courbe, 0 mmHg à la pression maximale, et déposez les données dans une feuille de calcul. Sélectionnez la même région sur le diamètre extérieur, la pression d'entrée, la pression de sortie, la force, la température, le pH et l'onglet de débit plaçant chaque élément dans le même document.\nOuvrez les données pour chaque test de longueur de force. Naviguez jusqu'à la région de chargement de la courbe, -2 % à 2 %, et faites glisser et déposer les données dans une feuille de calcul. Sélectionnez la même région pour les autres variables mesurées et placez chaque élément dans la même feuille de calcul.\nPour le diamètre de pression et l'essai de longueur de force soustraire l'UP de toutes les valeurs de pression.\nMoyenne des données de diamètre de pression tous les 1 mmHg (c.-à-d., 0 '/- 0.5, 1 '/-0.5, 2 '/- 0.5).\nTrouver le volume déchargé de l'orgue (V). L'équation 1 peut être utilisée pour trouver V, étant donné que R02 est le rayon externe déchargé mesuré par le microscope, L est la longueur déchargée, et H est l'épaisseur déchargée telle que détectée par l'échographie. L'hypothèse de l'incompressibilité est mise à profit, ce qui signifie que l'organe conserve le volume lorsqu'il est soumis à des déformations.\nREMARQUE : La longueur déchargée est mesurée avec des étriers de la suture à la suture. Le diamètre déchargé est mesuré au microscope, à la caméra et au logiciel, suivi du calcul du rayon (Figure 5) L'épaisseur déchargée est calculée à partir des images à ultrasons (Figure 6).\nEn utilisant l'hypothèse de l'incompressibilité, utilisez le volume déchargé, le rayon extérieur déformé ( ), et la longueur ( ) pour déterminer le rayon intérieur déformé.\nUtilisez les équations 3, 4 et 5 pour calculer chaque stress, respectivement. Dans les équations 3-5, P est défini comme la pression intraluminale et Ft est la force mesurée par le transducteur.\nTracer la relation pression-diamètre, la relation force-pression, la relation circonférence stress-étirement circonférence, et le stress axial et les valeurs d'étirement circonférence (figure7, figure 8). Les valeurs d'étirement peuvent être calculées à l'aide du rayon de la paroi médiane. Les calculs des contraintes circonférences et axiales peuvent être trouvés dans les équations 6 et 7, respectivement.\nCalculer la conformité près de la plage de pression physiologique et à l'étirement in vivo. La limite de pression inférieure (LPB) est 1 écart type en dessous de la pression mesurée moyenne. La limite de pression supérieure (UPB) est 1 déviation standard au-dessus de la pression mesurée moyenne9.\nCalculez le moduli tangenpour quantifier la rigidité du matériau. Identifiez l'effort circonférence calculé qui correspond à la pression inférieure liée et à la pression supérieure de la limite. Adaptez une ligne linéaire à la courbe d'étirement circonférence de stress-cirifère dans la plage de contrainte identifiée à la longueur in vivo. Calculer la pente de la ligne9.\nL'analyse réussie des propriétés mécaniques des organes reproducteurs féminins est subordonnée à la dissection appropriée d'organe, à l'annulation, et à l'essai. Il est impératif d'explanter les cornes utérines au vagin sans aucun défaut (Figure 1). Selon le type d'organe, la taille de la canule variera (Figure 2). Cannulation doit être fait de sorte que l'organe ne peut pas se déplacer pendant l'expérience, mais aussi ne pas endommager la paroi de l'organe au cours de la procédure (Figure 3). L'échec de l'une ou l'autre des étapes entraînera l'incapacité du navire à maintenir la pression. La normalisation des procédures d'essai est essentielle au succès du protocole afin d'obtenir des résultats cohérents et reproductibles.\nUne fois que l'organe est disséqué et cannulated correctement, la puissance sur le système de myographe de pression. La configuration des systèmes de myographie de pression implique une unité de contrôleur, un débitmètre et une étape (figure 4). Le système de myographie sous pression est utilisé pour surveiller divers aspects de l'organe qui subit des essais mécaniques (figure 5). Un système d'échographie, ou équivalent, est utilisé pour mesurer l'épaisseur des organes à l'état déchargé avec et sans tonalité basale (Figure 6). Après des essais mécaniques, le moduli tangentiel peut être calculé pour les directions circonférences et axiales (tableau 2).\nLes tests de tonalité basale et les tests passifs produisent des propriétés mécaniques clés de l'appareil reproducteur, avec et sans la contribution contractile des cellules musculaires lisses (Figure 7, Figure 8). La mise à l'échelle entre les organes nécessite quelques ajustements aux protocoles (tableau 1), car le col de l'utérus et le vagin éprouvent différentes charges in vivo46-48. Ces variations peuvent être surveillées par des techniques telles que la cathérisation sous pression. La cathérisation sous pression est une méthode utilisée précédemment pour surveiller les conditions in vivo dans le vagin et l'utérus49-53. Les modèles des études précédentes vont de souris, de lapins et d'humains. Les mêmes principes s'appliqueraient de la même façon à la pression cervicale et vaginale spécifique pour le modèle murine. Bien que, quel que soit l'organe testé, les mêmes matériaux sont nécessaires pour les protocoles (tableau 3).\nFigure 1 : Diagramme de dissection de Murine. La dissection de souris pour les organes reproducteurs : cornes utérines, col de l'utérus et vagin. Dans la figure, la vessie et l'urètre sont retirés de l'antérieur du vagin. Les intestins et les muscles abdominaux ont été reflétés de façon supérieure. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 2 : Comparaison de taille des deux canules. Comparaison de taille des deux canules utilisées pour cannulation des organes reproducteurs. La plus grande canule (D - 3,75 mm) est utilisée pour le tissu vaginal (A). La plus petite canule (D à 0,75 mm) est utilisée pour canniser le tissu cervical (B). La canule cervicale est lisse tandis que la canule vaginale a deux rainures. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 3 : Méthode de Cannulation pour le vagin et le col de l'utérus. En raison de la géométrie et de l'épaisseur variables des organes reproducteurs, ils sont plus efficacement cannulés de manières distinctes. Pour le vagin, placez deux sutures de façon « X ». Lorsque vous cannulating le col de l'utérus, placez 3 sutures horizontales sur l'extrémité utérine et 4 sutures sur l'os externe. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 4 : Configuration de l'appareil myographique sous pression. La configuration de l'appareil DMT utilisé pour les tests basaux et passifs. Le DMT est composé de trois moyeux principaux : la scène (A), l'unité de contrôleur (B), et le débitmètre (C). Dans l'unité de contrôle, il y a une bouteille réservoir et une bouteille de déchets. La bouteille réservoir est d'abord remplie de liquide qui se vide au fur et à mesure que l'expérience est effectuée. La bouteille de déchets, qui est initialement vide, recueille le fluide qui traverse l'expérience. L'unité de contrôleur s'interface avec le logiciel DMT sur l'ordinateur et contrôle la pression, la température et le débit. L'unité de contrôleur lit les sorties des transducteurs de force et de pression à l'intérieur de la scène à l'intermédiaire d'un câble d'interface VGA. La composante étape du système contient un flux d'entrée et de sortie du système. L'entrée et le débit de sortie ont des pressions d'entrée et de sortie correspondantes mesurées par le système. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 5 : Configuration du fichier sur le programme de myographie sous pression. Affichage de la configuration des logiciels informatiques. Une boîte est dessinée autour de la région d'intérêt et le diamètre extérieur du tissu est suivi optiquement en temps réel (A). Les données obtenues lors des essais mécaniques sont enregistrées et affichées en temps réel dans le diamètre extérieur, la pression d'entrée, la pression de sortie, la pression moyenne, la force, la température, le pH et l'onglet de débit (B). Dans l'interface de pression, la pression (mmHg), le gradient (mmHg/s) et le débit sont contrôlés. En outre, la force axiale (mN) mesurée par le transducteur de force en ligne est affichée. Le débit (L/min) est indiqué dans l'onglet débit mètre (C). Le séquençage de pression est affiché et contrôlé dans l'onglet séquenceur (D). Les données enregistrées lors des essais mécaniques sont enregistrées et affichées en temps réel dans le diamètre extérieur, la pression d'entrée, la pression de sortie, la pression moyenne, la force, la température, le pH et l'onglet de débit (E). Un test représentatif de diamètre de pression du vagin est affiché montrant le diamètre externe en fonction du temps sur l'onglet de diamètre externe. S'il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nFigure 6 : Imagerie par ultrasons. Imagerie par ultrasons des organes reproducteurs murines. Toutes les images ont été prises à l'aide du système d'échographie sur le mode à axe court-B. Une image représentative du vagin à la longueur et à la pression déchargées (A). L'épaisseur de la paroi vaginale a été calculée dans ImageJ. Une ligne verticale a été tracée le long de l'échelle de profondeur (mm) pour calibrer le nombre de pixels par m. L'outil de polygone a été employé pour tracer le diamètre intérieur et externe. Ensuite, des lignes trans-muros ont été dessinées pour calculer l'épaisseur et la moyenne (B). Cela a été effectué 3 fois. Une image représentative du col de l'utérus à la longueur et à la pression déchargées (C). L'épaisseur du mur a ensuite été calculée à l'aide de l'image J et de l'outil polygone d'une manière similaire à celle du vagin (D). Dans le complexe reproducteur, le diamètre extérieur est suivi à deux endroits différents (E). Tout au long du processus d'imagerie, le transducteur est stabilisé par un support imprimé en 3D (F). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 7 : Résultats représentatifs pour les tests vaginaux. Les résultats d'essai mécanique représentatifs des protocoles basal et passifs vaginaux. Avec les données obtenues par le système DMT, plusieurs relations mécaniques peuvent être dérivées. A) Basal Pressure-Diameter, B) Passive Pressure-Diameter, C) Basal Force-Pressure, D) Passive Force-Pressure, E) Basal circumferential stress-circumferential stretch, F) Passive étirement circonfère stress-circonférence, G) Étirement axial basique stress-circonférence, H) Étirement axial passif stress-circonférence. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 8 : Résultats représentatifs pour les tests du col de l'utérus. Les résultats mécaniques représentatifs d'essai des protocoles basal et passifs cervicaux. Avec les données obtenues par le système DMT, plusieurs relations mécaniques peuvent être dérivées. A) Basal Pressure-Diameter, B) Passive Pressure-Diameter, C) Basal Force-Pressure, D) Passive Force-Pressure, E) Basal circumferential stress-circumferential stretch, F) Passive étirement circonfère stress-circonférence, G) Étirement axial basique stress-circonférence, H) Étirement axial passif stress-circonférence. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nPression In Vivo Pression maximale 1/3 Pression maximale 2/3 Pression maximale Étirement axial Taille de Cannula Numéro recommandé\nVagin 7 mmHg 15 mmHg 5 mmHg 10 mmHg -2%, in vivo, 2% 3,75 mm 2-- dans un "X" mode\ncol 10 mmHg 200 mmHg 66 mmHg 133 mmHg -2%, in vivo, 2% 0,75 mm pour l'extrémité utérine\n3,75 mm pour l'extrémité vaginale 3 sutures horizontales sur\n4 sutures sur le\nos externe vaginal\nTableau 1 : Sommaire de l'information pour la mise à l'échelle des méthodes d'essai mécanique pour chaque organe. Les valeurs de pression déchargées ont été mesurées à l'aide de techniques de cathérisation sous anesthésie (4 % d'isoflurane en oxygène à 100 %). Un cathéter de ballon a été utilisé pour les mesures vaginales et un cathéter 2F pour le col de l'utérus.\nCirconférence (kPa) 127.94 188\nCirconférence (kPa) 246.03 61.26\nTableau 2 : Résultats représentatifs du moduli tangent du vagin et du col de l'utérus. Les moduli tangentes ont été calculés pour les conditions basales et passives aussi bien que pour les directions circonférences et axiales. Toutes les mesures fournies sont en unités de kPa.\nLe protocole fourni dans cet article présente une méthode pour déterminer les propriétés mécaniques du vagin murine et du col de l'utérus. Les propriétés mécaniques analysées dans ce protocole comprennent à la fois les conditions de tonalité passive et basale des organes. Les conditions de tonalité passive et basale sont induites par la modification de l'environnement biochimique dans lequel l'organe est submergé. Pour ce protocole, les médias impliqués dans les tests basaux contiennent du calcium. L'essai de l'état basal de tonalité permet l'isolement de la contribution mécanique lisse de cellules de muscle dans les organes reproducteurs femelles54,55. Lors d'essais mécaniques passifs, le support ne contient pas de calcium. Le manque de calcium inhibe les cellules musculaires lisses de la contraction. Cela permet d'élucider d'autres composants ECM, tels que le collagène et les fibres élastiques, qui dictent en grande partie les propriétés mécaniques passives. Combinés à l'analyse biochimique et histologique, ces résultats permettent d'élucider les relations entre la composition microstructurale ECM et la fonction mécanique. Cela permet ensuite de délimiter les mécanismes structurels et mécaniques des pathologies pertinentes à la santé reproductive des femmes.\nAuparavant, le vagin et le col de l'utérus ont été testés uniaxialement27,28. Le vagin et le col de l'utérus, cependant, démontrent des propriétés anisotropiques et l'expérience de la charge multiaxiale in vivo29,30 . Par conséquent, les systèmes de myographe de pression utilisés ici fournissent des informations quantitatives sur la charge multiaxiale qui peuvent aider à comprendre les étiologies des pathologies reproductrices, ainsi que la conception ultérieure de traitements potentiels. En outre, la myographie sous pression permet d'évaluer les propriétés multiaxiales tout en préservant la géométrie de l'organe in vivo et l'interaction cellule-matrice indigène56 . In vivo, les cellules remodèlent activement l'ECM environnant en réponse aux changements dans les indices biomécaniques et biochimiques57,58,59. Le protocole utilisé ici est avantageux car il permet de surveiller les changements ultérieurs des propriétés des organes en vrac dans des conditions physiologiquement pertinentes. Cela permet de fournir une plate-forme pour générer des ensembles de données systématiques de propriétés mécaniques actives et passives multiaxiales. En outre, les données recueillies dans le cadre de ces expériences peuvent être exploitées pour formuler et valider des modèles constitutifs non linéaires à motivation microstructurale afin de décrire et de prédire la réponse mécanique des organes reproducteurs féminins dans des états pathologiques16,60.\nUn composant supplémentaire de système qui était avantageux au protocole était l'utilisation de l'imagerie par ultrasons pour mesurer l'épaisseur des murs d'organe. L'épaisseur est une information cruciale pour calculer le stress subi lors des tests.\nAvec n'importe quelle installation expérimentale, il y a quelques limitations à cette procédure. Ce protocole ne tient actuellement compte que de la réponse élastique du vagin et du col de l'utérus et non de la réponse viscoélastique. Une méthode potentielle pour atténuer cette limitation à l'avenir est de modifier le protocole existant pour inclure le fluage et les tests de relaxation de stress61. Une deuxième limitation suppose que les organes sont incompressibles. Dans le cadre de cette étude, l'épaisseur a été mesurée uniquement à la configuration déchargée, comme motivé par des études antérieures qui démontrent que le tissu murine non-pregnant présente des changements minimes de volume pendant la charge osmotique62. En outre, d'autres études ont fonctionné dans le cadre de la même hypothèse d'incompressibilité44,60,63. Idéalement, une échographie serait effectuée pour l'ensemble de l'expérience afin d'éliminer la nécessité de l'hypothèse d'incompressibilité et de mieux informer les modèles d'éléments finis. Une limitation finale est l'absence de pression cervicale in vivo quantifiée pour informer les protocoles de chargement. La littérature suggère que la pression cervicale dans les femmes humaines soit 37 mmHg53. Les souris, cependant, peuvent présenter une pression cervicale différente de celle des humains. Une différence dans la pression vaginale a été démontrée entre les modèles de rongeurs et les échantillons humains64,65. D'autres études sont nécessaires pour quantifier la pression dans le col de l'utérus murine non-enceinte. Vers cette fin, la pression intra-utérine a été récemment rapportée tout au long de la grossesse49.\nLe système de myographie de pression disponible dans le commerce utilisé dans cette procédure mesure les propriétés de force des organes élastiques et creux. Ce protocole est facilement adaptable à d'autres organes et tissus différents en modifiant les additifs chimiques dans le bain, la taille de la canule et l'épaisseur de la suture.\nLes travaux ont été financés par la subvention de la NSF CAREER #1751050.\n'; } //write timeslider info for player used for checkWindowFocus in jove.js $('#for_player_0').data('ts', '/files/timesliders_v2/60125_Miller_Biaxial_VFU_081519_F_Web_OVERWRITE.mp4_timesliders'); });


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Sujet: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 9:24\ndésolé d'avance de montrer un 29 de plus, à croire que c'est le modèle à la mode donc un petit montage from the box histoire de ne pas perdre le mojo sur le montage de ma chevy57, une sorte de récréation quoi...\nComme vous le savez dans la boite il y deux chassis différents avec le plancher et les cotés de la baignoire en fonction des versions chanelled ou High Boy,je me suis orienté sur cette dernière avec comme inspi pour les lignes générale le roadster 32 de Tom Branch.\nla caisse en apprêt:\ntrois couches de x12 gold tamiya:\net enfin un essai sur une cuiller test avec une couche de jaune translucide tamiya x24 pour relever l'éclat:\npeinture châssis, plancher, baignoire, cloison pare-feu faite\nbon allé, pour finir, un stand peinture après déchromage, puis la recette habituelle, noir brillant émail et ensuite aclad chrome et alu poli, et zp ford engine red sur le moteur\net le reste des pièces en attente de peinture...\nla prochaine ce sera les câblages....\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 9:52\nSympa comme montage et tes explications sont top pour un profane comme moi , ce type de voiture n'est pas mon truc mais j'apprecie beaucoup ta présentation , vite la suite\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 10:23\nmerci Phil, mais de quelles explications parles-tu? en tout cas la suite devrait arriver relativement vite\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 10:25\nDe ce que tu as dis en début de post , le petit historique quoi\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 10:49\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 11:16\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 11:35\nil devrait être plié courant de la semaine prochaine\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 12:52\nj'attends le suite avec impatiente!!\nsi j'en crois les photos, il va falloir choper le pare brise, mais de combien ? la réponse doit être dans l'article.\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 13:41\nMiam miam, j adore beau projet et chouette roadster !!\nLe mien arrive bientôt....\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 13:44\nVersion jantes ou avec les disques ??\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 16:10\nnon juste sorti de boite avec les jantes + enjos du kit et pas de droppage du parebrise non plus... enfin ça c'est pas encore décidé\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 17:51\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Ven 10 Fév - 23:34\nsuper choix d'inspi, et très beau début de montage!\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Sam 11 Fév - 15:47\nc'est beau ! super boulot\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Sam 11 Fév - 17:57\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Sam 11 Fév - 18:08\n+2 nickel !!!\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Sam 11 Fév - 20:14\nJamais j'aurai pensé à faire une caisse avec les pots Tamiya...\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Dim 12 Fév - 10:26\nils sont fait pour ca ,et en plus se passent super facilement a l'aéro .\navant de découvrir Testors ,j'ai peint pas mal de mes réas à la tamiya ( ou gunzé ) le rendu est superbe .\nseul leur vernis ne vaut rien ,mais alors rien du tout .\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Lun 13 Fév - 10:32\nmerci à tous pour les coms! et effectivement comme le dis Spring, les vernis ne valent pas grands chose si ce n'est pour faire de petites surfaces ou des intérieurs, mais pas les carrosserie, exception faite du TS65 (vernis pearl) que je trouve très bien. Pour ma part j'utilise du vernis acheté en grande surface auto (Norauto pour ne pas les citer )\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Lun 13 Fév - 11:03\nLa peinture de la machine a l'air terrible\nSujet: El rosso y dorado Mar 14 Fév - 10:06\nSans droppage (chassis et pare-brise) tu vas être (très) loin de la ligne du 32 de Branch, si j'en crois les photos que j'ai pu voir, de cette maquette montée sans (grosses) modifs\nTu vas le monter sur les rails de 32 ?\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Mar 14 Fév - 10:57\nSuperbe ce petit roadster!!!\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Mar 14 Fév - 11:44\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Mer 15 Fév - 2:17\njuste une tite question l'injection hilborn c'est dans le boîte??ou tu l'a faite maison?? tu pourrais me faire une ou deux photos si ça ne te dérange pas merci d'avance!!\nla couleurs et tip top !!!\nSujet: Re: Fred's Ford 29 roadster Mer 15 Fév - 9:23\nsalut GTO, oui le système d'injection est issu de la boite! représenté de façon assez simpliste mais bon...\nune vraie ressemble à ça:


RÉSUMÉ : Défaite des Gee-Gees aux mains du Rouge et Or à Québec - uOttawa Gee-Gees | Gris et Grenat\nRÉSUMÉ : Défaite des Gee-Gees aux mains du Rouge et Or à Québec\nOttawa (0) 15 16 22 0\nLaval (3) 25 25 25 3\nB: Alana Leung - 5\nB: Jenny Barbeau - 5\nD: Beatrice Lamarche - 11\nVictorieuse face aux Patriotes de l'UQTR, l'équipe de volleyball féminin des Gee-Gees n'a pu poursuivre sur sa lancée face à Laval samedi dernier à Québec.\nLe Rouge et Or l'a emporté en trois manches consécutives (25-15, 25-16, 25-22).\nComme à leur habitude depuis le début de la saison, les Ottaviennes ont amorcé le match en force. Elles ont toutefois perdu du rythme au milieu de la première manche, pilonnées par les redoutables serveuses lavalloises.\nLe Rouge et Or a maintenu sa domination à la deuxième manche, ne concédant à ses rivales que 6 attaques marquantes.\nLes Gee-Gees ont ensuite fait preuve de détermination pour livrer une belle bataille à la troisième manche. Tirant de l'arrière 20-13, l'équipe s'est ressaisie pour mettre du piquant en fin d'engagement, mais Laval a finalement repris le dessus pour clore le match.\nTristan Peterson a continué son excellent travail cette saison, menant les Gee-Gees avec 8 attaques marquantes en 28 tentatives (taux d'efficacité de ,285).\nAlana Leung a noirci la feuille de pointage de 4 attaques marquantes, 2 services gagnants et 5 blocs.\nNote encourageante pour les Gee-Gees : elles n'ont commis aucune faute au service dans le match.\n« Nous avons affronté une première fois les différentes équipes du RSEQ. Et nous savons maintenant comment aborder nos prochains matchs face à chacune d'elles, afin d'accumuler le plus de points possible dans la seconde portion du calendrier. Ce match est derrière nous, et nous allons faire en sorte de trouver le moyen de vaincre l'UQAM vendredi prochain pour terminer le trimestre d'automne du bon pied! » – L'entraîneur-chef Lionel Woods\nLes volleyeuses d'Ottawa auront un dernier défi à relever avant de clore la mi-saison, le vendredi 3 décembre face à l'UQAM (7-2), qui a remporté ses cinq derniers affrontements. Le match est prévu à 20 h au pavillon Montpetit, et les billets sont en vente à billets.geegees.ca.


Sauvez votre retraite - MonFinancier.com\nManuel Valls vient de confirmer que l'impôt sur les sociétés (IS) sera abaissé dès 2017, mais seulement pour les PME. Le taux de l'impôt sur les sociétés des PME va ainsi passer de 33,3% actuellement, à 28%, «sur une partie de leurs bénéfices», une mesure qui pourrait s'appliquer à « toutes les entreprises à horizon 2020». Dans le cadre de son pacte de compétitivité, le gouvernement réfléchit par ailleurs à une baisse de l'impôt sur le revenu des ménages ou à une hausse de la prime d'activité\nLes marchés sont passés en mode risk-on. Hausse des indices boursiers, hausse des valeurs cycliques, baisse du yen… tous les signaux sont au vert. Pourtant, les incertitudes ne manquent pas, mais les investisseurs ont décidé de voir le verre à moitié plein. Un optimisme qui repose notamment sur les derniers bons indicateurs économiques de la zone euro, qui montrent que l'économie européenne a bien résisté à la surprise post-Brexit.\nLes discussions redémarrent aujourd'hui entre direction et syndicats de stewards et hôtesses, prélude à une rentrée qui s'annonce délicate. Depuis le printemps, les deux camps négocient âprement sur le contenu du futur accord régissant les conditions de travail et de carrière des quelque 13.600 personnels navigants commerciaux (PNC) d'Air France, le texte actuellement en vigueur expirant le 31 octobre. Les syndicats accusent l'entreprise de vouloir imposer de nouveaux efforts aux salariés au moment où les comptes de la compagnie s'améliorent. Air France se justifie par le besoin de «garder une certaine souplesse» dans un secteur ultra concurrentiel «soumis à des aléas, notamment économiques».


Nouveaux Salle de jeu Un tantinet https://ma-chance-casino.com/ Auditionnés Avec Dave > +sept Du Juin 2022 – cleanyourmachineinc\nNouveaux Salle de jeu Un tantinet https://ma-chance-casino.com/ Auditionnés Avec Dave > +sept Du Juin 2022\nUne des raison pour laquelle Leurs Modification De la Règlement Anglo-saxons Í propos des Jeux Pour Incertitude Avec quelques années Doivent\nLessor Les Casinos Cabalistiques ?\nLes Formes Accomplis Laquelle Continue Balancé Votre Salle de jeu Neuf\nCrypto Casinos No Kyc\nVia notre page de ce portail, nous gagnons incontestable une liste les dont salle de jeu 2022 que nous avons insérés pour votre section en compagnie de commentaires. Quelques des actuels cas pour défi un brin proposent les pourboire à l’exclusion de archive et des free spins, et plusieurs autres disposent d’impressionnants emballage avec bienvenue. Assurez-nous de compulser notre page les meilleurs emploi sur dont notre équipe vous propose pareil quelques-uns nos plus grands salle de jeu un tantinet qui accomplissent on voit de nombreux mois ce jour. Le dispositif assidu est un périphérie fondamental une certaine maîtrise partielle de jeu de casino un tantinet.\nMien ludique trouve déjí des renseignements au sujets des commander dans singuli s modèles catégories.\nRécent esthétique tr réussie, pages inhabituelles de websites de jeux en compagnie de éventualité, aéronautique perfectionnée ou cuisine simple.\nPlutôt, authentiquez longtemps laquelle partenaires collaborateurs travaillent sur nos jeux sauf que observez leur réputation.\nChoisissez ce casino, créez votre classe , ! nous sommes adulte à repartir.\nEn compagnie de différents milliers de jeu pour casino, machines a sous et autres extremum-jeu, leurs jeux vidéo vivent gros avec s’jouer.\nThéoriquement, les informations progressives , ! leurs colliers adéquates sont souvent trouvés en direct sur un blog Bio d’un casino un peu.\nCependant, au moment de retirer votre monnaie, vous devrez contribuer selon le salle de jeu cet montre d’identité sain. Correctement, quelques casinos anglais vous permettent pour jouer gratuite, sans produire en compagnie de archive ensuite ce écrit. Couramment, votre devez toi-même inscrire selon le casino, si des situation offrent la possibilité í tous les investisseurs virtuels de tabler a certains jeu genre démo, sans a s’inscrire. Un coup qui vous êtes inscris , ! apostrophez un bonus de bienvenue, toi-même vous avérez être amour d’apprendre lequel un portail suppose une belle genre. Ce qui aide í rendre Slots Augmente génial, je crois que c’est titre de place dont permet.\nUne des raison pour laquelle Leurs Modification De la Règlement Anglo-saxons Í propos des Jeux Pour Incertitude Avec quelques années Doivent: https://ma-chance-casino.com/\nMa régularité sauf que célérité pour , https://ma-chance-casino.com/ lequel un nouveau salle de jeu paie leurs champions lauréats est très important. Quand vous envisagez engager de un’monnaie effectif quelque peu, il va suffire évidemment faire le conserve. Sur le passé, l’objet le détail avec mettre avec l’appoint semble maintenant )’chopper franchement bien à la banque en compagnie de produire le classe.\nMien casino propose mon gratification avec mien simple archive avec 100% ou 200 périodes sans frais, mon gratification en compagnie de matin avec 50% , ! 50 espaces sans frais, chaque mois il va prochain d’acheter 50 espaces gratis au conserve plus de 35€. On voit un facteur où les futurs casinos un peu varient petit peu de leurs contradicteurs avec élancée ancienneté. Des professionnels boursicotent sur des gratification passionnants de encaisser des clients. Indéniablement, leurs bonus sur classe et les prime sans avoir í archive vivent mille fois appliqués. Nos parieurs peuvent à proprement parler en général donner en plusieurs offres en compagnie de pourboire.\nL’autre les options fondamentaux pour intituler ce casino quelque peu en compagnie de vrai et pas que continue l’efficacité , ! ma régularité avec dont il rémunère des retraits de fond , ! nos comptabilités. Chaque mois, je me révisons sauf que affermissons à moment leurs 10 essentiels salle de jeu pour vous posséder accusé nos meilleurs. Il va falloir consulter un blog Cashier et la page de conserve / porte-monnaie et privilégiez votre méthode de remboursement toute neuve, comme Participer, sans nul écoulement, , ! Instadebit.


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Home > Infos > Infos internationales > Les pro-Morsi manifestent contre le procès\nLes pro-Morsi manifestent contre le procès Les plus consultés\nEn Egypte la colère de la rue ne s’est pas fait attendre. Des centaines de manifestants pro-Morsi s‘étaient rassemblés devant l‘école de police. Le président déchu a refusé la présence d’un avocat, mais celui là s’est porté volontaire : “La différence entre le procès de Mohamed Morsi, et de l’ancien président Moubarak, c’est que Moubarak a abandonné le pouvoir alors que Morsi a respecté la légitimité constitutionnelle, explique l’un des avocats. Il est le président de l’Egypte, légalement.”\nLes pro-Morsi auraient pu être plus encore à défiler aujourd’hui, mais la forte présence policière les en empêche. Ils ont en mémoire la sanglante répression du mois d’août.\n“Ce n’est pas un vrai procès, dit un jeune homme. On ne peut pas juger un président élu. Ce sont les bulletins de vote qui ont porté ce président au pouvoir.” “Pourquoi les gens honorables sont-ils jugés, et les criminels innocentés, comme Hosni Moubarak, crie une femme. Je veux savoir ce qui se passe. Où sont nos droits? “ Les slogans fusent : “Demain nous les islamistes allons écraser le chef des forces armées Abdel Fattah al-Sisi !“crie la foule …\nUne chose est sûre, ce procès ne va pas réunifier les Egyptiens.


Travaux d'égouttage Jette - Remplacement, installation\nTravaux d'égouttage Jette\nJe fait le remplacement d'égouts et le placement de nouvel canalisation d'évacuation à Jette\nLors d'un problème avec un égout cassé, je remplace vos égouts ! Parfois lors d'un débouchage de vos canalisations, je peux constatez un problème d'égouts Jette cassé, remplie de calcaire ou en contrepente. C'est à ce moment que vos égouts doivent être remplacer, réparer ou netoyer avec un curage d'égouts et des canalisation de votre maison. Je fait un devis pour le remplacement de l'égout Jette qui est concerner et attaque les travaux d'égouts rapidement pour ne pas vous laissez dans l'embarat.\nTravaux d'égouttage fait par mes soins pour un remplacement de la canalisation d'égout Jette\nRemplacement d'un égout à Jette\nInstallation d'une chambre de visite pendant des travaux d'égouts Jette et remplacement des canalisations d'égouttage Jette\nDevis travaux d'égouts Jette : Je vous fait le devis travaux d'égouttage rapidement, prend en compte l'urgence de l'intervention à faire et fait directement avec vous le rendez-vous.


Le professeur Michael Porter travaille sur la stratégie d’entreprise et a créé un outil nommé les 5 forces de Porter permettant d’analyser les moyens utilisées par les concurrents d’une entreprise pouvant menacer sa rentabilité. Outre ce fait, la technique arrive à déterminer également la meilleure façon d’y parer et de se démarquer pour développer correctement l’entreprise.\nDéfinition des 5 forces de Porter\nLa meilleure façon d’utiliser les 5 forces de Porter et pourquoi\nQuelles sont les différentes stratégies à adopter grâce aux 5 forces de Porter ?\nQuelles sont les limites des 5 forces de Porter ?\nPour évaluer la concurrence existant sur un marché ciblé, une entreprise peut bénéficier des 5 forces de Porteur qui sont :\nLe pouvoir de négociation des clients a une influence directe sur les tarifs et les conditions de vente même si la demande est inférieure à l’offre. Comme ils sont nombreux, les entreprises doivent toujours faire face à la concurrence surtout lorsqu’il existe des produits de substitution moins chers.\nLe pouvoir de négociation des fournisseurs a aussi un impact direct sur la rentabilité d’une entreprise. Comme les fournisseurs sont les personnes influentes pour imposer leurs conditions même si le coût de transfert est élevé. Les entreprises doivent s’adapter pour ne pas les perdre.\nLa menace des nouveaux entrants est encore à prendre en compte, car ces nouvelles structures peuvent facilement se positionner sur le marché de l’industrie et entraîner ainsi une multiplication de nombreux concurrents.\nLa menace des produits de substitution est lune des cinq forces de Porter permettant de déterminer le niveau des produits de substitution existant déjà sur un marché. Ainsi, si un nouveau produit ou un nouveau service est une bonne alternative, une entreprise peur réagir en baissant le prix de son produit ou rajouter des fonctionnalités, mais également se retirer à temps de ce marché si elle le juge bon.\nL’intensité concurrentielle représente le nombre de concurrents et l’ensemble des opportunités et concurrents se présentant aux entreprises, aux fournisseurs et aux consommateurs. Si le marché est en pleine croissance et que la concurrence est vive, les parts de marché doivent être réparties de façon équitable et les consommateurs peuvent basculer d’un produit à l’autre. Dans le cas contraire, si la concurrence est trop forte, alors la guerre des prix devient dangereuse pour la rentabilité.\nSi vous souhaite faire entrer votre entreprise sur un nouveau marché, les 5 forces de Porter peuvent vous être très utiles afin de mettre en place une stratégie venant aider à renforcer votre positionnement et accélérer le développement. Vous allez ainsi pouvoir déterminer les diverses opportunités et menaces faisant face à votre entreprise comme l’entrée de nouveaux concurrents sur le marché, un nouveau produit de substitution, etc. Votre responsable marketing va utiliser les 5 forces de Porter en étudiant le brevet, les entrées sur le marché et leurs barrières, le coût du changement de fournisseur, les différentes offres, les substituts, la facilité qu’ont les clients pour changer de produits, etc. Sachez que plus il analysera l’ensemble de ces données et plus votre prise de décision sera stratégique et surtout bien orientée.\nUne fois que vous avez utilisé les 5 forces de Porter et que vous êtes en possession des informations primordiales pour optimiser votre rendement, vous pouvez agir sur les coûts et tarifs en procédant à une baisse de vos prix pour attirer en nombre de nouveaux clients. Votre rendement sera optimisé et vos charges diminueront. Vous pourrez vous démarquer de la concurrence en proposant à vos prospects et clients un produit se démarquant nettement de ceux proposés par la concurrence. Vous allez trouver des marchés de niche, là où la concurrence reste encore faible.\nMême si les 5 forces de Porter soient un excellent modèle pour faire face à la concurrence, certains experts pensent qu’elles sont incomplètes, car elles ne prennent pas en considération les collaborations entre entreprises. Cet outil exclut également les ressources et compétences des analyses au profit de la concurrence et non de l’industrie. Ces deux éléments sont pourtant des acteurs primordiaux ne pouvant être écartés des études aidant les chefs d’entreprises à prendre des décisions stratégiques primordiales pour arriver au succès escompté.\nLes 5 forces de Porter sont à utiliser par les chefs d’entreprises, mais attention aux législations et mesures prises par des organisations internationales, des collectivités locales ou des gouvernements, car ces institutions sont très influentes. Elles peuvent ainsi agir sur les niveaux de concurrences des marchés et dans certains secteurs d’activité vous devez avoir un agrément ou une licence. Dans ce cas, l’entrée des nouveaux acteurs peut être fortement limitée.\nArticle précédentSalon Studyrama des Formations du Numérique : un rendez-vous incontournable\nArticle suivantVers quels métiers se tourner en 2020 quand on aime dessiner ?


Offre d'emploi Assistant logistique Fontcouverte (17) - Poitou-Charentes - Commerce, Distribution - Intérim - AA5774XE - Agefiph\nDomaines d'expertise : Logistics , Excel , Ppt , Ms word , Achats Voir plus , Fournisseurs , Planning Voir moins\nTraitement d'informations orales ou écrites , Travail en équipe , Management\nNotre client est une centrale d'achats, spécialisée dans le commerce de gros.\nCette entreprise dynamique de taille humaine propose des services de regroupement des commandes mais également des services de promotion, d'études des produits, de recherche de fournisseurs, de négociation des achats. Propose aussi les activités de répartition, d'organisation et de documentation. C'est dans ce cadre que nous recrutons un assistant logistique achat (F/H).\nRattaché(e) au responsable des achats, vous êtes chargé(e) de la construction et de la mise à jour de l'ensemble des gammes permanentes suivant le planning annuel. Vous êtes le garant de la mise en place et du suivi des dynamiques commerciales régionales.\nVotre mission est composée de:\n-la mise à jour des gammes de produits. (Analyse des indicateurs de performance pour recommandation, création/suppression de produits, mise à jour des tarifs, réalisation de supports de présentation auprès des magasins...)\n-la réalisation des dynamiques commerciales régionales (Analyse des indicateurs, de statistiques de gamme pour prise de décision stratégiques)\n-Mise en place des actions commerciales ponctuelles.\nPoste proposé à 80%, soit 28h/semaine. 13ème mois. Mutuelle.\nCe poste requiert de l'autonomie et de la prise d'initiative.\nPoste à pourvoir pour une mission d'intérim évolutif sur un Contrat à Durée Indéterminée..\nVous devez être titulaire d'un Bac+2 ou BAC+3. Deux années d'expérience en logistique achat souhaitées.\nVous possédez le sens de l'organisation, de la rigueur, de la logique et un esprit d'équipe.\nVous avez une parfaite maîtrise de l'outil bureautique EXCEL - Power point et Word.\nUne connaissance du logiciel SAP serait un plus. Résistance au stress. Déplacements ponctuels possibles (salon, magasins, centrale d'achat).\nVous maîtrisez des calculs commerciaux (taux de marge, pourcentage, chiffre d'affaire...).\nRéférence : 001-NB-1744936_01C\nALT - Chef d'Equipe Logistique Transports - F/H


Au Chili, le plurilinguisme d’Elisa Loncon brise un silence politique | Enbata\nAccueil / Articles / Comprendre / Focus / Au Chili, le plurilinguisme d’Elisa Loncon brise un silence politique\n« Nor den Abdelkader\nNouvelle-Calédonie: référendum ter (pas forcément der) »\nAu Chili, le plurilinguisme d’Elisa Loncon brise un silence politique\nPar Enbata | Publié : 05/08/2021\nElisa Loncon, présidente de l’Assemblée chilienne\nCet article de la philosophe Aïcha Liviana Messina (*), paru dans le Monde du 28 juillet, suscitera l’intérêt des lecteurs d’Enbata. La prise de parole en langue mapuche par Elisa Loncon, présidente de l’Assemblée chilienne, renvoie chez nous à celle d’Egoitz Urrutikoetxea à l’assemblée de la CAPB. La Constitution du Chili qui doit impérativement changer pour régler des problèmes de société, les conflits « liés aux terres ancestrales », la mise en avant des « traditions républicaines » pour s’opposer à E. Loncon, font écho à nos luttes en faveur de la loi Molac ou pour la préservation de nos terres agricoles par Lurzaindia. Nous ne sommes pas seuls. D’un bout à l’autre de la planète, les peuples dominés s’affrontent aux pouvoirs d’États qui leur opposent souvent les mêmes sornettes.\nLa présidente de l’Assemblée constituante utilise le mapudungun, la langue du peuple mapuche. Un acte bien plus que symbolique, estime la philosophe Aïcha Liviana Messina.\nL e 4 juillet, Elisa Loncon est élue présidente de l’Assemblée constituante chilienne. Elle salue l’Assemblée en mapudungun, la langue parlée par le peuple mapuche, qui depuis des années lutte pour son autonomie politique. A chaque fois qu’Elisa Loncon commence une conversation ou un discours public, elle prend d’abord la parole en mapudungun avant de continuer en espagnol.\nParler une langue que seule une fraction minime de la population peut comprendre a un effet politique immédiat : c’est lorsqu’on ne comprend pas une langue qu’on commence par l’entendre. Ce qu’on entend du dehors, puisqu’on ne comprend pas, frappe nécessairement du dedans, puisque ce qui résonne c’est une langue exclue et dont on est privé. Cela, dès lors, a un effet politique sur le long terme car être privé d’une langue, c’est être privé des conditions nécessaires pour être un sujet – un sujet qui peut répondre d’une histoire, de soi, et ainsi se constituer en sujet de droit.\n«Etre privé d’une langue,\nc’est être privé des conditions nécessaires\npour être un sujet\n—un sujet qui peut répondre d’une histoire, de soi,\net ainsi se constituer en sujet de droit ».\nCes mots, ces salutations, ces remerciements qu’Elisa Loncon prononce depuis des années en mapudungun à la télé et à la radio ont fini ainsi par agir. Aujourd’hui – et du jour où elle a été élue –, on ne parle plus seulement d’inclure un certain nombre de sièges pour les peuples originaires à l’Assemblée constituante, on parle aussi des multiples langues utilisées par les multiples populations qui font partie du Chili ; on parle aussi et surtout de la langue comme d’un droit fondamental. Nous ne sommes donc pas dans une optique inclusive mais dans une optique refondatrice. En parlant plusieurs langues, Elisa Loncon ne cherche pas seulement à obtenir la reconnaissance des peuples originaires, celle-ci se faisant de fait dans la langue qui, jusque-là, les a ignorés ; elle nous rappelle que c’est par la langue que nous devenons un sujet et que l’on peut acquérir et constituer des droits.\nLa proposition de changer de Constitution au Chili a été décidée en novembre 2019, un mois après le début du mouvement social qui a explosé à Santiago. L’« accord pour la paix et la nouvelle Constitution », tel qu’il a été baptisé, a été souscrit par divers partis et mouvements politiques, impuissants à offrir une réponse au mouvement social. Cette proposition a donc été une réponse à un mouvement qui s’en prenait au système politique dans son ensemble et ainsi, tacitement, à son pilier : la Constitution. Le mot d’ordre d’octobre 2019 était : « il ne s’agit pas de trente pesos mais de trente ans », suggérant que la cause de l’explosion sociale n’était pas l’augmentation du prix des transports publics mais les trente années de transition démocratique qui ont suivi la dictature de Pinochet (1973-1990).\nAu cours de ces trente années, il y a certes eu des changements fondamentaux, et même des modifications apportées à la Constitution rédigée pendant la dictature. Toutefois, une modification n’est pas une rupture. La matrice de la Loi fondamentale rédigée sous le régime de Pinochet est restée intacte. Si un certain nombre d’aides sociales ont été mises en oeuvre, s’il est vrai, par ailleurs, que certains services publics bénéficient de plus de moyens, les structures politiques et sociales restent en revanche fortement définies par les politiques néolibérales établies pendant la dictature.\nDepuis, le Chili a certes gagné en pouvoir d’achat, le régime politique a de toute évidence changé de nature, mais les structures permettant d’articuler des revendications politiques sont parcellisées, limitées à quelques syndicats d’entreprise ou concentrées dans les milieux étudiants. Par ailleurs, les conflits liés aux terres ancestrales s’exacerbent. Ce qui s’installe ainsi avec le néolibéralisme, c’est un silence politique, une impossibilité de sortir de la sphère privée de l’entreprise qui n’a, par ailleurs, pas de rempart à sa propre précarité.\nLa proposition de rédiger une nouvelle Constitution répond ainsi à la nécessité de briser un silence politique. On comprend dès lors l’importance de l’élection d’Elisa Loncon, qui, depuis des années, s’adresse aux journalistes et au public en plusieurs langues. Ce plurilinguisme brise un silence politique qui va bien au-delà du contexte chilien. Il a, par ailleurs, l’effet performatif de créer de nouveaux sujets politiques : non seulement ceux qui parlent une langue qui n’a pas encore « droit de cité », mais ceux – nous tous – qui ont à se l’approprier. Car ce dont il s’agit ne concerne pas seulement l’ensemble des langues des peuples originaires du Chili (l’aymara, le mapudungun, le quechua du Sud, le rapanui, le kawéskar, le chesungun), mais de notre possibilité générale de nous constituer en sujet politique, de faire monde en nous rapportant les uns aux autres, de briser le monolinguisme de l’entreprise ou le silence du néolibéralisme. Les langues d’Elisa Loncon sont celles qui manquent à la politique en général.\nLe jour où Elisa Loncon a été élue présidente de l’Assemblée constituante, plusieurs membres du gouvernement se sont empressés de la féliciter tout en l’invitant à la « prudence » et à la « raison ». Dans un tweet, le président Piñera l’appelle à recueillir « les traditions républicaines et les valeurs de notre peuple », comme si madame Loncon n’avait pas été élue par un peuple et comme si elle ne faisait pas elle-même partie du peuple. De toute évidence le gouvernement a peur, non toutefois d’une éventuelle irrationalité d’Elisa Locon, mais bien des possibilités de raisonner qu’offrent les langues.\n(*) Aïcha Liviana Messina est professeure de philosophie et directrice de l’Institut de philosophie à l’université Diego Portales au Chili. Elle est l’autrice de « L’Anarchie de la paix. Levinas et la philosophie politique » (CNRS, 2018) et de plusieurs articles publiés dans la revue « Esprit »\nLekarozek bizi behar du: Aroztegia gelditu!


Masternaut dévoile une certification CO2 pour les flottes\nPublié le 13 septembre 2018 par 01. Leslie Auzèmery\nAfin de pousser les entreprises à s’engager dans une démarche verte et récompenser leurs efforts, l’entreprise spécialisée dans la télématique lance en France et au Royaume-Uni la certification CO2.\nMasternaut crée la première certification CO2 pour les flottes d’entreprises. Objectifs : favoriser la prise de conscience environnementale et donner aux entreprises les moyens de diminuer leur émission carbone, année après année.\nCette solution évalue le niveau d’engagement des entreprises pour réduire leur émission de CO2 en se basant sur les données enregistrées grâce à la télématique embarquée et à l’analyse de son département spécialisé, baptisé Catalytix. « Les entreprises sont récompensées sous trois catégories : Bronze, Argent ou Or, en fonction des objectifs atteints. L’ Or couronne celles qui réduisent de plus de 5% leurs émissions de CO 2 d’une année sur l’autre, ou en comparaison avec les résultats enregistrés par l’industrie », explique Maxime Berard, directeur de Catalytix France chez Masternaut.\nChacun pourra ainsi comparer ses performances avec celles de ses pairs, et en tirer des leviers stratégiques d’amélioration pour optimiser ses performances. « Encore bien souvent, les entreprises prennent des solutions télématiques pour des objectifs de rentabilité financière, et réduction des coûts. Pourtant, peu se rendent compte de la possibilité qui leur est offerte de réduire leur impact environnemental, grâce à un\naccompagnement axé sur les résultats de la télématique », ajoute Olivier Mansard, vice président global sales de Masternaut.\nCette certification est accessible gratuitement aux clients de Masternaut. Les autres sociétés souhaitant l’obtenir pourront souscrire à une offre ou déposer leur dossier moyennant une somme forfaitaire.\nMots clefs associés à cet article : Masternaut, CO2, Télématique embarquée\n- Masternaut veut démocratiser la télématique avec Pulse et la...


Voir plus en Mass Gainers Voir plus en Nutrition Sportive Voir plus en Mutant\nPV-MMA 627933026800 https://www.hsnstore.com/acheter/media/catalog/product/m/u/mutant-mass-mutant_1.jpg\nEUR 2019-12-17T11:01:30+0000 MUTANT MASS 19.90\nApporte plus de 52g de protéine par service.\nQu'est-ce que Mutant Mass?\nMutant Mass de Mutant est un produit de prise de masse en poudre à base d'un mélange de glucides avec un mélange de 6 types de protéines provenant du lait et des graisses saines. Contient des acides aminés ramifiés, acides aminés essentiels et glutamine.\nQue nous apporte Mutant Mass?\nLes valeurs les plus remarquables de la formulation de Mutant Mass sont les suivants:\nMaïs cireux (amylopectine de poids moléculaire élevé)\nAmidon cireux d'orgue\nCe mélange de glucides vous fournit l'apport énergétique dont vous avez besoin pour vos besoins quotidiens de glucides. L'amylopectine est le composent principal et est considéré comme un glucide intelligent, un glucide complexe qui compte avec un poids moléculaire élevé, donc elle arrive presque totalement à l'intestin. Cela facilite l'assimilation et l'absorption des molécules de glucose par l'organisme. Il s'agit d'un apport d'énergie rapide et efficace.\nD'autre part, la maltodextrine est un glucide à indice glycémique élevé, donc son absorption par l'organisme se fait aussi rapidement. Cet ingrédient est spécialement adéquat dans le cas des sportifs d'endurance ou qui font face à des activités intenses pendant de longs périodes de temps.\nL'amidon cireux d'orge, la patate douce et l'avoine contribuent à compléter l'apport énergétique de la formule.\nMélange de protéines MUTANT-MASS PRO® Matrice:\nProtéine de sérum concentrée\nProtéine de sérum hydrolysée\nProtéine de caséine micelaire\nLa combinaison de différents types de protéines vous fournit un apport complet de cette substance efficacement et de façon prolongée, car vous aurez de la protéine d'assimilation rapide, et aussi celles qui possèdent plus d’efficacité pendant un long période de temps, de façon prolongée.\nL'isolat de protéine vous assure la consommation de la protéine la plus pure que vous pouvez trouver, car elle contient entre 90 et 05% de protéine de purete maximale. Cette substance a été soumise à un processus de filtrage qui élimine en grande mesure les glucides, les graisses et le lactose.\nLe concentré de protéine est une source plus énergétique, car elle contient quelques des substances qui s'éliminent dans le cas de l'isolat. Cela en fait un ingrédient complet et riche en nutriments, qui est parfait pour l'ajouter à la protéine isolée.\nMélange de lipides:\nMCTs (Triglycérides à chaîne moyenne à partir de l'huile de coco hydrolysé)\nGraine de lin (source d'acides gras essentiels Oméga-3 (20% ALA; acide alpha lipoïque))\nL'apport de graisses monoinstarurées et poly-insaturées complète la formule de l'Échantillon Mutant Mass avec les acides gras essentiels dont vous avez besoin à partir de sources naturelles et de grande qualité.\nQui peut profiter de Mutant Mass?\nSportifs et athlètes qui veuillent faire face à des demandes élevées de nutriments et cherchent à augmenter leur poids et son gain musculaire.\nMUTANT MASS 2,27Kg CHOCOLAT BEURRE DE CACAHUÈTEMUTANT MASS 2,27Kg CHOCOLAT FUDGE BROWNIEMUTANT MASS 2,27Kg COOKIES & CREAMMUTANT MASS 2,27Kg CRÈME DE NOIX DE COCOMUTANT MASS 2,27Kg FRAISE-BANANEMUTANT MASS 2,27Kg GLACE À LA VANILLEMUTANT MASS 2,27Kg TRIPLE CHOCOLATMUTANT MASS 6,8Kg CHOCOLAT FUDGE BROWNIEMUTANT MASS 6,8Kg CHOCOLAT NOISETTES MUTANT MASS 6,8Kg CHOCOLAT-BEURRE DE CACAHUÈTESMUTANT MASS 6,8Kg COOKIE MUTANT MASS 6,8Kg CRÈME DE NOIX DE COCOMUTANT MASS 6,8Kg FRAISE-BANANE MUTANT MASS 6,8Kg TRIPLE CHOCOLATMUTANT MASS 6,8Kg VANILLE\nMUTANT MASS 2,27Kg CHOCOLAT BEURRE DE CACAHUÈTE\nConseil d'utilisation: 4 doseurs (280g)\nValeur Énergétique 1060Kcal378,6Kcal\ndesquelles saturées 10g3,6g\nHydrates de Carbone 176g62,9g\ndont sucres 34g12,1g\nAmidon de maïs cireux (amidon de maïs), maltodextrine, concentré de protéines de lactosérum et matrice de protéines (concentré de protéines de lactosérum , concentré de protéines de lait , isolat de protéine de lait caséine micellaire, caséinate de calcium, isolat de protéines de lactosérum , hydrolysat de protéines de lactosérum, ingrédients modifiés de lait , albumine d'oeuf ), cacao, épaississant: fève de soja dégraissée, poudre d'huile de noix de coco MCT (huile de noix de coco, solides au sirop de maïs, caséinate de sodium, phosphate de potassium, Émulfisiant: mono et diglycérides, Anti-agglomérant: E551 dioxyde de silicium, Conservateur: dioxyde de soufre E220, dextrose (monohydrate) amidon cireux d'orge (gluten), peptides de glutamine (de protéines de blé ), Épaississants (E412 gomme de guar, E415 gomme de xanthane), huile de graine de tournesol, fructose, vanille naturelle et arômes artificiaux, Édulcorants (sucralose E955 -135mg/260g), cannelle en poudre, extrait de cannelle (Cinnulin PF®), inuline, graine de lin en poudre, colostrum, avoine en poudre, Émulfisiant (E322 lécithine de soja )\nComment prendre MUTANT MASS 2,27Kg CHOCOLAT BEURRE DE CACAHUÈTE:\nPrendre 4 doseurs (280g) de Mutant Mass avec 480 - 960ml d'eau ou lait.\nGarder dans un endroit frais et sec. Tenir hors de portée des jeunes enfants. Non recommandé pour les enfants et les femmes enceintes ou allaitantes.\nAcide L-aspartique 2,07g\nQuestion sur: MUTANT MASS\nVous êtes entrain de donner votre opinion sur: MUTANT MASS


en morceaux: EN VRAC - Arnaud Le Gouëfflec\nEN VRAC - Arnaud Le Gouëfflec\nA Brest même, la ville a été détruite, mais pas le talent. Figure de proue de ce vivier créatif, Arnaud Le Gouëfflec est en train de construire une œuvre pluridisciplinaire qui ne se contente pas de faire du bruit jusqu'à Landerneau ! Après l'écoute du projet Christian Rock Fièvre hier, rapide passage en revue de trois autres créations :\nUn peu tard pour réaliser une bafouille sur l'album Deux fois dans le même fleuve dans lequel il fait bon se plonger plusieurs fois. D'autres plus prestigieux - ici et là - en ont déjà fait l'éloge. Si tu es passé à côté et avant que ce ne soit plus possible, l'écoute de "Mieux vaut trouver la mort" est obligatoire :\nUn peu tôt pour réaliser une chronique de Face B avec Nicolas Moog au dessin : le service presse m'a oublié et mon dealer était en rupture de stock. Peu importe, une bande dessinée qui affiche en couverture The Residents, Moondog, Poison Ivy et qui prétend mettre en lumière "les figures pittoresques de la musique du 20ème siècle" mérite un bonne place sous le sapin à côté des Legos Star Wars de ton neveu.\nEnfin, venons-en aux Sessions Fantômes #1 qui provoquent aujourd'hui mon enthousiasme. Sorties sur le label L'Eglise de la petite folie, celles-ci célèbrent la rencontre du trio Arnaud le Gouëfflec, John Trap, Olivier Polard avec Eugène Chadbourne, artiste underground touche-à-tout, illustre Face B aussi fantasque qu'indispensable et victime consentante de l'admiration fétichiste que lui voue Arnaud Le Gouëfflec (comme le prouve le blog Chadbourneries).\nQue ce soit sur la reprise brute de "Mieux vaut trouver la mort" ou avec le collage dadaïste "Chad and Glue", le plaisir de jouer/improviser est communicatif. Sans jamais perdre l'auditeur, les morceaux s'étirent comme pour prolonger le bonheur d'être ensemble. Surtout, il y a l'extraordinaire "Mosha parle" où le banjo bringuebalant d'Eugène Chadbourne fait des merveilles, se permettant même quelques incursions en mode Délivrance. A l’unisson avec les autres musiciens, il donne à ce morceau la puissance d'une incantation déglinguée pour exalter Mosha et ses prophéties dérisoires. C'est d'ailleurs, aujourd'hui plus que jamais, la meilleure manière de dire le monde.\nLibellés : Arnaud Le Gouëfflec, chanson française, en vrac, Eugene Chadbourne, John Trap, L'Eglise de la petite folie, Moondog, Olivier Polard, Poison Ivy, The Residents