Les protéines chaperonnes: Heat Shock Proteins et small Heat Shock Proteins\nVous êtes ici: Accueil › Ressources scientifiques › Les protéines chaperonnes\nLes protéines chaperonnes\nLes mécanismes cellulaires font intervenir des protéines et des enzymes qui interagissent entre elles et/ou avec des substrats pour assurer le fonctionnement de la machinerie cellulaire. Afin de pouvoir assurer leurs rôles biologiques, les protéines doivent présenter une structure tridimensionnelle définie. Les phénomènes impliqués dans le repliement des chaines polypeptidiques sont donc essentiels pour que les protéines puissent exercer leurs activités.\nAu sein des cellules les conditions menant au repliement correct des protéines sont en général complexes. En conditions in vitro, un polypeptide purifié rencontre souvent des difficultés à atteindre seul sa conformation protéique active (Anfinsen & others, 1973). In vivo, les protéines en cours de repliement sont assez peu stables (Liberek et al., 2008). Le facteur déterminant est la séquence primaire en acides aminés qui va déterminer la capacité de la protéine à se structurer. Enfin lorsque les conditions environnementales s’éloignent des optimums requis par les protéines, phénomène appelé stress, leur structure peut être altérée.\nLorsqu’ils sont soumis à des conditions défavorables lors de leur développement, les organismes vivants mettent en place des systèmes d’adaptation. Différents mécanismes cellulaires de réponse au stress vont alors être induits et permettre l’adaptation des bactéries aux nouvelles conditions et assurer leur survie. Si l’on prend l’exemple des bactéries, parmi les mécanismes principaux mis en œuvre, on trouve : la régulation de la fluidité membranaire, la régulation du pH interne et la protection contre l’agrégation des protéines cellulaires.\nLes chaperons moléculaires constituent une catégorie très large et hétérogène de protéines qui sont retrouvées dans tous les règnes du vivant. En absence de stress environnementaux dans les cellules vivantes, l’activité de ces protéines chaperonnes est principalement destinée au repliement initial des protéines nouvellement synthétisées permettant ainsi de leur donner une conformation active (Hartl & Hayer-Hartl, 2002). Contrairement aux mécanismes cellulaires principaux pour lesquels les interactions ont lieu entre protéines repliées et actives, les chaperons moléculaires ont quant à eux la capacité d’interagir avec les formes non repliées et/ou altérées d’autres protéines.\nEn plus de ce rôle dans le repliement des protéines nouvellement synthétisées, ces protéines chaperonnes exercent également de nombreux rôles dans le système de maintenance du protéome. En effet, durant leur évolution, les protéines sont devenues très sensibles aux changements dans leur environnement acquérant ainsi une faible marge de stabilité (Tartaglia et al., 2007). En conséquence, des modifications des conditions intracellulaires peuvent entrainer une altération des protéines. Les facteurs environnementaux ou encore l’encombrement moléculaire intracellulaire peuvent conduire à une perte de conformation initiale des protéines et aboutir à leur détérioration. Ces altérations ont pour effet de modifier la structure tertiaire des protéines et d’exposer en surface les régions hydrophobes normalement repliées à l’intérieur de la structure protéique. L’exposition de ces régions hydrophobes entraine une augmentation de l’affinité aspécifique des protéines altérées entre elles. Celles-ci peuvent alors se rapprocher et rentrer en contact, conduisant au phénomène d’agrégation des protéines.\nLes chaperons moléculaires contribuent ainsi à la protection des protéines contre l’agrégation, à la ressolubilisation des agrégats protéiques (Schlieker et al., 2002; Mogk et al., 2003b) et à la restitution des conformations natives des protéines endommagées. Enfin les protéines chaperonnes peuvent également participer à la dégradation des protéines qui ont subi des modifications trop importantes et qui ne seront pas capables de retrouver leur état initial (Sauer et al., 2004).\nL’activité des chaperons moléculaires est généralement effectuée par liaison de la protéine chaperonne à son substrat de manière non covalente, cette liaison est donc réversible et permet ainsi la libération des protéines correctement repliées avec la consommation d’une molécule d’ATP. Le repliement correct des protéines est primordial pour leur activité et un défaut de repliement, au sein d’une cellule, conduit très souvent à de graves conséquences. De nombreuses maladies telles que les amyloses, la maladie d’Alzheimer, de Parkinson, ou encore le diabète de type 2, sont liées à un défaut dans le repliement des protéines cellulaire ou encore à leur agrégation (Stefani & Dobson, 2003; Stefani, 2004).\nIl existe deux grandes classes de protéines chaperon, celles utilisant l’ATP, souvent pour la liaison et/ou le relargage du substrat (Tyagi et al., 2009) et celles ayant une activité indépendante vis-à-vis de l’ATP. Les protéines chaperonnes peuvent être présentes dans la cellule de manière constitutive, c’est le cas de celles impliquées dans le repliement des protéines nouvellement synthétisées. Mais de nombreuses protéines chaperonnes sont également produites en grande quantité lors d’un stress environnemental, comme les protéines ayant une activité tournée plus spécifiquement vers la protection contre l’agrégation. La plupart des chaperons moléculaires ont d’ailleurs été initialement mis en évidence suite au stress thermique, ce sont les protéines de choc thermique ou « Heat shock proteins ». Plus récemment, de nouvelles Hsp ont été mises en évidence et possèdent des caractéristiques étonnantes, en effet, elles n’interviennent ni dans le repliement des protéines ni dans leur prise en charge lors de leur dénaturation (Sauer et al., 2004). Ces Hsp peuvent reconnaitre des substrats correctement repliés et sont appelées protéines de triage car elles participent au contrôle qualité des protéines cellulaires.\n2. Les chaperons universels\nLes chaperons universels sont des chaperons ATP dépendants. Leurs structures tertiaires et quaternaires ont été caractérisées afin de mieux comprendre leur mode de fonctionnement (Bukau & Horwich, 1998; Young et al., 2004). On parle de systèmes de chaperons universels car ils n’agissent pas seuls, le repliement des protéines est obtenu grâce à une coopération entre chaperons, cochaperons, chaperons présentant le substrat et chaperons permettant la réparation des protéines. Aujourd’hui deux grands systèmes de chaperons cellulaires sont bien connus : le système DnaK/DnaJ/GrpE et le système GroEL/ES.\na. Le système DnaK/DnaJ/GrpE\nDnaK, aussi connu sous le nom de Hsp70 chez les bactéries, possède deux feuillets β à son extrémité C terminale qui forment le site de liaison au substrat. Ce site est directement relié à deux boucles qui forment un canal dans lequel le substrat est transloqué et replié (Pellecchia et al., 2000). Ce domaine est capable d’interagir avec une autre chaine plus large et équipée d’un couvercle. Le mouvement de ce couvercle est contrôlé par un nucléotide relié au domaine de fixation de l’ATP qui permet ainsi soit de bloquer le substrat dans le domaine de liaison au substrat soit de le libérer pour en capter un nouveau (Mayer & Bukau, 2005; Vogel et al., 2006). Le rôle du cochaperon DnaJ est de stimuler l’hydrolyse de l’ATP pour accélérer les réactions. Le chaperon GrpE permet quant à lui d’accélérer les échanges entre ATP et ADP sur le site ATPase pour permettre de libérer le substrat correctement replié.\nCertaines études tendent à montrer que des activités secondaires peuvent être assurées par les Hsp et leurs cochaperons. Par exemple GrpE serait aussi impliquée en tant que senseur de température. A haute température, cette dernière changerait la conformation de DnaK, le transformant ainsi en protéine chaperonne stabilisante (Grimshaw et al., 2001; Groemping & Reinstein, 2001). D’autres auteurs (Park et al., 2007) décrivent même une troisième activité, cette fois-ci de coopération entre DnaK et les protéases. Enfin, le système peut également avoir une activité coordonnée avec la Hsp ClpB pour aider à la ressolubilisation de protéines agrégées (Mogk et al., 2003a; Weibezahn et al., 2004).\nLa majeure partie du repliement des protéines suite à leur synthèse de novo est effectué par le système GroEL/ES. Seulement 10% à 20% des protéines synthétisées de novo sont repliées par DnaK qui est plutôt actif pour la réactivation de protéines dénaturées.\nb. Le système GroEL/ES\nLe chaperon GroEL correspond à un oligomère de deux fois sept sous unités, organisées en un duo d’anneaux superposés qui forment ainsi une double cavité reliée par le plan médian. Un sillon hydrophobe entre deux hélices α sur le domaine supérieur a la particularité de posséder une grande flexibilité qui lui permet de se lier facilement aux substrats via leurs régions hydrophobes exposées en cas de stress.\nLa fixation de sept molécules d’ATP sur le domaine central entraine un changement de conformation de l’oligomère et permet ainsi le dépliement de la protéine substrat (Wang & Weissman, 1999). Le substrat linéarisé est alors transloqué dans la cavité centrale. Le cochaperon de GroEL est GroES, il constitue une sorte de couvercle qui permet ensuite de sceller l’enceinte de GroEL. La protéine substrat se retrouve alors en conditions hydrophiles permettant son repliement correct (Hartl & Hayer-Hartl, 2002, 2009; Young et al., 2004). La fixation de GroES déclenche également l’hydrolyse de l’ATP qui fournit l’énergie nécessaire pour un nouveau changement conformationnel qui permet le relargage du substrat replié (Weissman et al., 1995). Il est intéressant de noter que la compréhension de ce mode d’action, mis en relation avec la taille de la cavité, a permis de déterminer que GroEL/ES ne pouvait replier que les protéines d’une taille inférieure à 57 kDa (Houry et al., 1999; Sakikawa et al., 1999).\nTout comme le système DnaK/DnaJ/GrpE, le système GroEL/ES a d’autres potentialités au sein des cellules , certains auteurs ont en effet démontré la capacité de GroEL/ES à stabiliser les membranes, ce que l’on peut définir comme une activité de lipochaperon (Jkovacs et al., 1994; Török et al., 2001).\nc. La protéine de désagrégation ClpB\nLa protéine chaperon ClpB, aussi connue sous le nom de Hsp104 chez les levures et Hsp101 chez les plantes, fait partie des chaperons universels originaux n’ayant ni d’activité dans le repliement des protéines nouvellement synthétisées ni d’activité dans la prise en charge de protéines endommagée.\nLa caractéristique de la protéine ClpB est de posséder deux domaines de liaison de l’ATP qui sont indispensables pour la formation d’oligomères et l’activité de la protéine (Zolkiewski, 2006). Ces domaines nommés AAA sont caractéristiques des protéines de la famille AAA+ qui possèdent également des sites de liaison homologues.\nClpB est active sous forme oligomérique et forme alors un double anneau constitué de 8 sous unités, à la manière de GroEL. Les cavités de l’anneau supérieur et de l’anneau inférieur constituent les deux sites ATPases qui encadrent ainsi le pore central. Le mode d’action de la protéine ClpB est moins connu que celui de DnaK/DnaJ/GrpE et celui de GroEL/ES mais des études ont permis de mieux appréhender son fonctionnement. La région N-terminale serait impliquée, dans un premier temps, dans la liaison au substrat (Lee et al., 2003; Diemand & Lupas, 2006). Une fois le substrat transloqué, l’activité de ClpB serait, quant à elle, localisée au niveau du pore central (Weibezahn et al., 2004). En effet une modification par mutagénèse de cette cavité centrale conduit à une inactivation de l’activité de ClpB (Schlieker et al., 2004).\nL’activité de ClpB est indispensable pour une survie des organismes à haute température et également lors d’exposition à d’autres stress environnementaux (Sanchez et al., 1992; Squires & Squires, 1992). Sanchez et Lindquist (1990) ont également montré une résistance aux chocs thermiques 1000 à 10000 fois supérieure en présence de ClpB par rapport à des mutants n’exprimant pas ClpB chez la levure. ClpB intervient plus tardivement que les systèmes DnaK et GroEL/EL lors d’un stress, dans le processus de désagrégation des protéines déjà précipitées en corps d’inclusion. Il y a toujours une coopération avec DnaJ/DnaK/GrpE car comme évoqué ClpB n’a pas d’activité dans le repliement à proprement parler mais est impliquée dans le dépliement (Glover & Lindquist, 1998; Goloubinoff et al., 1999; Zolkiewski, 1999; Mogk et al., 2003a; Cashikar et al., 2005).\nCette action synergique des Hsp permettant la désagrégation et la récupération d’activité a été étudiée chez la mitochondrie de Saccharomyces cerevisiae. En effet, ces dernières sont de bons modèles car la quasi-totalité des protéines mitochondriales sont codées dans le noyau, il suffit alors de bloquer la synthèse protéique pour observer le comportement et l’activité des mitochondries. De telles études ont montré une capacité des mitochondries, après une inactivation thermique sévère des protéines cellulaires, à récupérer l’activité de réplication de leur ADN mitochondrial (Germaniuk et al., 2002), leur traduction propre (Schmitt et al., 1995) et leur morphologie (Lewandowska et al., 2007). En absence de synthèse protéique la restauration d’activité est alors uniquement due à l’action des protéines chaperonnes présentes.\nL’action conjointe de ClpB et DnaK est encore peu connue mais plusieurs auteurs ont proposé différents modèles. Le premier suggère que ClpB est capable d’induire un changement de conformation des agrégats permettant ensuite l’action de DnaK/DnaJ/GrpE (Ben-Zvi & Goloubinoff, 2001). Le second modèle radicalement différent propose que ClpB permet de rompre les corps d’inclusion en plus petits fragments accessibles pour DnaK/DnaJ/GrpE (Lee et al., 2003). Finalement d’autres études évoquent, au contraire une action préliminaire de DnaK directement sur les agrégats, DnaK transfèrerait des chaines polypeptidiques agrégées depuis l’agrégat jusqu’au pore central de ClpB dans lequel aurait lieu la désagrégation. Le polypeptide désagrégé pourrait alors être pris en charge par d’autres protéines de repliement (Weibezahn et al., 2004; Ziętkiewicz et al., 2006) tel que de nouveau DnaK/DnaJ/GrpE ou GroEL/ES.\nCette hypothèse récente est confortée par le fait que l’incubation d’agrégats avec DnaK permet de modifier les propriétés des agrégats alors que ce n’est pas le cas avec ClpB seul (Ziȩtkiewicz et al., 2004). Les mêmes auteurs ont par la suite démontré la capacité de DnaK à séparer des agrégats polypeptidiques déjà formés (Ziętkiewicz et al., 2006). Mais ces polypeptides restent agrégés sur eux-mêmes et n’ont pas la capacité de récupérer une forme native sans l’intervention de ClpB et son action dans la désagrégation de la chaine. Les interactions entre DnaK et ClpB sont primordiales et semblent très spécifiques, ce qui est confirmé par le fait que si ces deux chaperonnes ne sont pas issues du même organisme il n’y a pas de désagrégation possible ni in vitro, ni in vivo (Glover & Lindquist, 1998; Krzewska et al., 2001).\nLes activités des systèmes DnaK/DnaJ/GrpE, GroEL/ES et ClpB sont complémentaires et fonctionnent de concert. Ces systèmes sont considérés comme étant les plus importants en conditions normales mais aussi lorsque la cellule est soumise à un stress qui entraine une augmentation de l’agrégation protéique.\n3. Les « small heat shock protein »\nLes chaperons universels ne sont pas le seul type de protéines dont la synthèse augmente lors de stress thermiques afin de lutter contre l’agrégation protéique. Leur activité est accompagnée et soutenue par des cochaperons comme nous l’avons vu précédemment mais également par un autre type de protéines chaperonnes, les « small Heat shock proteins » ou sHsp.\nLes sHsp ont été mises en évidence in vivo lors de l’étude d’organismes soumis à des stress thermiques. La synthèse de sHsp est induite lors de stress et est liée à l’acquisition de la thermotolérence. Plus généralement, les stress susceptibles d’entrainer l’agrégation des protéines comme les stress acides ou les stress induisant une modification de la fluidité membranaire comme la présence d’éthanol sont susceptibles d’induire la synthèse de sHsp pour lutter contre ces modifications.\nLes sHsp sont présentes chez une très grande variété d’organismes procaryotes et également eucaryotes, ce qui souligne leur importance sur le plan de la physiologie de la cellule (Narberhaus, 2002). Des sHsp ont ainsi été retrouvées chez des archaebactéries hyperthermophiles alors que ce n’est pas la cas pour des chaperonnes moléculaires comme GroEL/ES ou ClpB (Laksanalamai & Robb, 2004). Les sHsp ont été, principalement, étudiées chez les mammifères (Aquilina et al., 2003) et les plantes (Sun et al., 2002), un peu moins chez les micro-organismes. De plus, quel que soit le type d’organisme, les sHsp possèdent des localisations cellulaires diverses suggérant des fonctions variées. Les sHsp d’origine eucaryote et procaryote les plus étudiées sont indiquées dans le Tableau 1.\nTableau 1. Les différentes sHsp présentées dans l’introduction bibliographique et les organismes desquels elles sont issues.\nIbpA / IbpB\n15773,7 / 16325,8\nHsp26 / Hsp42\n23879,6 / 42817,0\nαA et αB cristallin\n19909,3 / 20158,9\nLa diversité des sHsp est grande mais leur unité commune est la présence d’un domaine caractéristique des protéines de l’ α-cristallin de l’œil des vertébrés (De Jong et al., 1998) et ainsi nommé domaine α-cristallin. Ce domaine jouant un rôle prépondérant dans l’activité des sHsp, les sHsp sont parfois appelées « α-Hsp » en référence à ce domaine α-cristallin. Le domaine α-cristallin est très conservé entre les espèces. On y retrouve en particulier un motif appelé GVLTL/GVLTVTV proche de l’extrémité C-terminale (Jobin et al., 1997; Narberhaus, 2002; Sun & MacRae, 2005). Ce domaine est connu pour être notamment impliqué dans l’interaction des sous unités de Hsp42 de Saccharomyces cerevisiae (Wotton et al., 1996).\nLes organismes eucaryotes possèdent souvent un grand nombre de sHsp, avec par exemple, 31 gènes codant pour des sHsp répertoriés chez l’Homme et 65 gènes chez la vigne. Les végétaux semblent globalement posséder plus de gènes codant pour des sHsp que les animaux. On peut alors formuler l’hypothèse que les végétaux les utilisent pour résister aux multiples stress environnementaux auxquels ils sont soumis de par leur immobilité.\nGénéralement, la plupart des bactéries possèdent une ou deux sHsp mais certaines peuvent en posséder un plus grand nombre (Munchbach et al., 1999). De multiples sHsp ont ainsi été détectées chez les bactéries formant des nodules avec les plantes (Munchbach et al., 1999) comme par exemple chez les Rhizobiaceaea. Ce nombre ne semble pas être lié à la taille du génome des microorganismes, mais plus à la niche écologique des bactéries. Narberhaus (2002) suggère que les conditions de vie d’une espèce bactérienne ont un lien avec le nombre de sHsp présentes dans la bactérie. Cette hypothèse est appuyée par le fait qu’un grand nombre bactéries parasites intracellulaires, comme par exemple Chlamydia pneumoniae, ne possèdent pas de sHsp (Narberhaus 2002). En effet, au cours de leur croissance, ces bactéries ne subissent pas directement les effets délétères liés aux stress environnementaux. Cependant, il faut tempérer cette théorie car certaines bactéries comme Lactococcus lactis pourtant soumise à de nombreux stress dans le milieu lait ne possède pas de sHsp (Sugimoto et al., 2008).\nFinalement les sHsp sont également ubiquitaires en terme de localisation cellulaire. Elles sont retrouvées dans le cytoplasme, le noyau, les chloroplastes, les mitochondries, le réticulum endoplasmique ou encore dans la membrane (Boston et al., 1996; Coucheney, 2005; Vitale & Boston, 2008).\nb. Structure et oligomérisation des sHsp\ni. Propriétés structurales\nUne des caractéristiques communes des sHsp est qu’elles présentent une masse moléculaire comprise entre 12 et 42 kDa, la plupart des sHsp ayant une taille comprise entre 14 kDa et 27 kDa. Le domaine α-cristallin contient environ de 80 acides aminés relativement conservés entre les espèces.\nLes sHsp ont également pour principale caractéristique de ne pas ou de ne peu contenir de ponts disulfure dans leur structure, ce qui leur confère une grande flexibilité (Zhang et al., 2005b).\nLes régions N-terminales et C-terminales des sHsp sont quant à elles très variables. Le rôle de ces régions a été étudié chez différents organismes en créant des protéines tronquées. Certaines études décrivent une implication de la région C-terminale dans l’activité des sHsp de murines et humaines (Takemoto et al., 1993; Lindner et al., 2000) mais la plupart évoquent la région N-terminale comme primordiale pour l’activité de chaperon moléculaire (Fu et al., 2005). En effet l’étude de la protéine Hsp18.1 du pois, grâce à des sondes hydrophobes, a démontré une hydrophobicité importante de la région N-terminale et une exposition de celle-ci lors des chocs thermiques (Lee et al., 1997) ce qui en ferait un bon site de liaison au substrat. Plus récemment, des auteurs ont montré qu’il existait une interaction entre la région N-terminale de Hsp18,1 et ses substrats (Jaya et al., 2009). Pour se faire ils ont utilisé une version de la protéine Hsp18,1 contenant dans différentes régions des acides aminés « photocrosslinkers » capables de créer des liaisons covalentes avec les substrats rentrant en contact avec Hsp18,1. L’analyse des complexes covalents sHsp/substrats formés a permis de mettre en évidence que la région N-terminale de Hsp18.1 avait eu de nombreux contacts avec la malate déshydrogénase et la luciférase suite à des dénaturations thermiques.\nCes régions N- et C-terminales sont également connues pour être impliquées dans la formation de structures multimériques. Plusieurs études ont mis en évidence ce rôle (Feil et al., 2001). Ainsi, il a été démontré qu’après avoir tronqué les régions N- et C-terminales de l’αB-cristallin humain, le domaine α-cristallin résultant n’est pas capable de former d’assemblage plus important que des dimères (Feil et al., 2001). L’analyse de Hsp16.9 du blé (van Montfort et al., 2001) a montré que sa région N-terminale constituait un site d’interface nécessaire aux assemblages oligomériques. Si l’on tronque la partie N terminale de la protéine Hsp26 de Saccharomyces cerevisiae seuls des dimères sont observés (Stromer et al., 2004). Des résultats similaires ont été obtenus pour diverses sHsp procaryotes (Leroux et al., 1997b; Studer et al., 2002; Fu et al., 2005) et eucaryotes (Merck et al., 1992). Enfin pour la sHsp de E. coli IbpB, l’absence des régions N- et C-terminale de la protéine conduit dans les deux cas à l’apparition de dimères de sHsp au lieu de larges complexes oligomériques polydisperses de 2 à 3 MDa (Kim et al., 1998a; Strozecka et al., 2011), ce qui indique une importance conjointe de ces deux régions.\nUne autre caractéristique commune des sHsp est leur assemblage sous forme de structures multimériques. La taille des multimètres est variable et peut être comprise entre 150 et 600 kDa chez les bactéries (Chang et al., 1996; Leroux et al., 1997b; Shearstone, 1999; Lentze & Narberhaus, 2004). L’unité d’association de base des sHsp apparaissant, la plupart du temps, comme étant un dimère (Haslbeck et al., 2005a). Certains auteurs rapportent la présence de trimères comme unités de base (Chang et al., 1996) chez Mycobacterium tuberculosis, mais de récentes études viennent contredire cette hypothèse (Kennaway et al., 2005), réaffirmant que le dimère est l’unité de base.\nA l’heure actuelle, seules quelques structures oligomériques de sHsp ont été élucidées et présentent des formes d’anneau comprenant une cavité centrale (Haley et al., 2000; van Montfort et al., 2001). Dans tous ces cas, les sHsp possèdent une activité de chaperon moléculaire qui a été démontrée in vitro et in vivo dès lors que la sHsp peut s’organiser en forme oligomérique (Kuczynska-Wisnik et al., 2002; Weidmann et al., 2010).\nLes complexes oligomériques de sHsp ont pour particularités d’évoluer en fonction des conditions du milieu. En effet de nombreux facteurs semblent influencer la taille des oligomères, comme le pH, la température et la concentration en sHsp dans le milieu (Bova et al., 1997, 2000). Cependant dans une condition donnée, les structures oligomériques des sHsp de bactéries sont généralement de taille bien définie comme par exemple pour Hsp16.5 de Methanococcus jannaschii (Kim et al., 1998b), Hsp16.3 de Mycobacterium tuberculosis (Chang et al., 1996), Lo18 (Hsp18) d’Oenococcus oeni (Coucheney, 2005) ou Hsp16.9 du blé (van Montfort et al., 2001). Seules quelques sHsp comme IbpB de Escherichia coli peuvent présenter plusieurs formes oligomériques simultanément (Van den Oetelaar et al., 1990; Shearstone & Baneyx, 1999).\nSi l’on s’intéresse à la dynamique des oligomères, il semble même que dans certaines conditions de milieu la stabilité globale du degré d’oligomérisation ne soit qu’apparente et due à des échanges dynamiques constants et rapides (Van den Oetelaar et al., 1990; Bova et al., 1997). L’oligomère de sHsp serait en fait un lieu intensif d’échanges entre les sous unités de sHsp (Bova et al., 2000; Stengel et al., 2010) et ces échanges seraient d’autant plus important que la température augmente (Bova et al., 2002). Ces mécanismes ont notamment été étudiés avec la protéine Hsp18,1 chez le pois.\nL’oligomérisation semble jouer un rôle important dans l’activité chaperon des sHsp (Lentze & Narberhaus, 2004). En effet, les oligomères et les sous unités de types dimères sont capables de se fixer aux substrats (Franzmann et al., 2005), mais seul le dimère d’αB-cristallin humain a jusqu’ici montré une activité chaperon seul (Feil et al., 2001). Dans la grande majorité des cas, aucune activité chaperon n’a été détectée lorsque l’on altère le processus d’oligomérisation des sHsp. Des études de mutagénèse menées sur la protéine Hsp17 de Synechocystis sp. (PC 6803) ont montré qu’une mutation induisant une perte de l’oligomérisation provoquait également une diminution de l’activité chaperon. A contrario, des mutations, n’entrainant pas de modification de l’oligomérisation, n’affectent que peu l’activité de chaperon moléculaire de Hsp17 (Giese et al., 2005).\nUne étude suggère que l’αA et l’αB cristallin d’œil de vertébrés possèdent une forme oligomérique inactive et une forme oligomérique active. L’oligomère inactif serait un assemblage de dimères et la dissociation des dimères contribuerait à la formation d’un oligomère de monomère. Selon les auteurs cela pourrait conduire à la formation de patchs hydrophobes en surface de l’oligomère augmentant son hydrophobicité, et ainsi son affinité pour les substrats, activant ainsi l’activité de chaperon moléculaire (Benesch et al., 2008).\nLe report des régions N-terminales de Hsp18,1 se liant à la malate déshydrogénase et la luciférase (Jaya et al., 2009) sur les structures quaternaires de la sHsp a montré que ces régions de fortes interactions ne sont pas exposées sur la structure oligomérique mais le sont bien plus sur les structures dimériques. Cela suggère à nouveau qu’une réorganisation de l’oligomère est nécessaire pour son activation.\nLes sHsp Hsp12.2 et Hsp12.3 du nématode Caenorhabditis elegans sont un autre exemple qui met en évidence l’importance du lien entre l’oligomérisation et l’activité des chaperons moléculaires. En effet, ces dernières ne sont pas capables de former de larges oligomères. Elles adoptent seulement la forme de monomères ou trimères et ces formes n’ont pas d’activité chaperon (Leroux et al., 1997a; Kokke et al., 1998). Ce résultat suggère également que certaines sHsp peuvent être utiles sous d’autres formes que des oligomères. Dans ce cas on ne peut pas exclure une autre activité que l’activité chaperon.\nc. Activité et substrats des sHsp\nLes protéines de type sHsp peuvent présenter plusieurs activités sur différents types de substrats. L’activité la plus décrite est l’activité de chaperon moléculaire qui consiste en la stabilisation de substrats protéiques. Plus récemment une autre activité appelée activité de lipochaperon a été mise en évidence. Cette activité qui n’a pas été mise en évidence chez toutes les sHsp consiste en la stabilisation de substrats lipidiques.\ni. Activité de chaperon moléculaire\nLes sHsp possèdent une activité de chaperon moléculaire, c’est-à-dire qu’elles ont la capacité de lutter contre la dénaturation et l’agrégation des protéines lors de stress, protégeant ainsi les protéines cellulaires.\nComme évoqué précédemment les sHsp ont pour particularité ne de pas posséder de réelle spécificité de substrat mais de reconnaitre tous types de protéines en cours d’agrégation. La grande variabilité des sHsp dans les différents règnes peut être à l’origine de cette absence de spécificité de substrat avec une reconnaissance pour toutes les protéines cellulaires endommagées. De nombreuses études ont en effet démontré l’activité in vitro de chaperon moléculaire des sHsp sur de nombreux substrats comme la citrate synthase (Jakob et al., 1993; Haslbeck et al., 1999; Delmas et al., 2001; Lentze et al., 2003; Okochi et al., 2004; Coucheney, 2005), la luciférase (Lee et al., 1997; Kowalski et al., 1998), l’alcool déshydrogénase (Shearstone & Baneyx, 1999), la lactate déshydrogénase (Bigotti & Clarke, 2005) ou encore la malate déshydrogénase (Veinger et al., 1998; Large et al., 2009). In vivo, des études ont montré la capacité des sHsp à protéger les protéines cellulaires totales de E. coli lors d’un choc thermique (Yeh et al., 1997; Weidmann et al., 2010).\nLes interactions entre les sHsp et leurs substrats restent méconnues du fait de cette absence de spécificité, cependant tout comme les autres protéines chaperonnes, les sHsp ont la caractéristique de reconnaitre les protéines en cours de dénaturation (Jakob et al., 1993).\nL’agrégation des protéines est due à une exposition de leurs régions internes lors d’un stress, ce qui suggère que l’hydrophobicité de surface des protéines joue un rôle dans leur capacité à être prises en charge par les sHsp. Les hypothèses sur l’activité des sHsp font état d’une activation des oligomères de sHsp par la chaleur, ce qui contribuerait à la dissociation de l’oligomère en dimères exposant alors les parties hydrophobes de l’oligomère qui pourrait fixer ses substrats également hydrophobes. En effet, la protéine Hsp26 de Saccharomyces cerevisiae est connue pour être activée à haute température (43°C) et former d’importants complexes avec ses substrats en cours d’agrégation (Haslbeck et al., 1999).\nCette activation de Hsp26 coïncide également avec un phénomène de dissociation des oligomères en dimères. Nous avons vu que de nombreuses études révèlent que les formes dimériques ne sont pas les formes actives. Afin de valider cette hypothèse, une étude (Franzmann et al., 2005) a été réalisée sur une protéine Hsp26 recombinante capable de former des ponts disulfures entre toutes les sous unités. Cet oligomère stable n’a alors pas présenté de dissociation des dimères à haute température mais l’activité mise en évidence était du même ordre que la forme sauvage de la protéine. Les auteurs en ont donc conclu que la dissociation de l’oligomère en dimère n’active pas l’activité chaperon des oligomères.\nLorsque des réactions d’agrégations apparaissent au sein d’une cellule, les sHsp sont capables de s’associer aux protéines en cours d’agrégation pour les stabiliser formant ainsi des complexes solubles sHsp/substrats (Chang et al., 1996; Lee et al., 1997; Leroux et al., 1997a; Haslbeck et al., 1999). Ces complexes ont été décrits comme stables pendant la durée des chocs thermiques (Rao et al., 1993; Roy et al., 1999). Une étude a même montré qu’un oligomère de sHsp lié à son substrat était plus stable que l’oligomère seul (Stromer et al., 2004).\nContrairement aux autres chaperons décrits, les sHsp ont une activité chaperon ATP-indépendante. En effet, l’ajout d’ATP dans le milieu n’a ni d’effet positif ni d’effet négatif, sur l’activité des sHsp (Horwitz, 1992; Muchowski & Clark, 1998; Smỳkal et al., 2000). Les sHsp IbpA et IbpB de E. coli sont bien décrites (Allen et al., 1992). Elles ont une activité de chaperon ATP-indépendante et peuvent fonctionner en absence de chaperons universels comme GroEL/ES (Baneyx & Mujacic, 2004). Dans ce cas, elles protègent leur substrat contre l’agrégation mais ne permettent pas de retrouver une structure active. Pour cette raison ces sHsp sont considérées comme étant des protéines de présentation de substrat à d’autres chaperons moléculaires ATP dépendants capables d’effectuer le repliement dans une conformation active. Par exemple, IbpB est capable de stabiliser la malate déshydrogénase et la lactate déshydrogénase, et dès lors qu’un chaperon ATP dépendant est présent la récupération des activités enzymatique est possible (Veinger et al., 1998).\nAucune sHsp connue n’a démontré d’activité protéase contrairement à certains autres types de chaperons. La présence de sHsp comme IbpA ou IbpB au sein des corps d’inclusion chez E. coli permet même une diminution de l’activité des protéases cellulaires contre les corps d’inclusion (LeThanh et al., 2005). En effet, les sHsp joueraient plutôt un rôle dans la dissolution des corps d’inclusion in vitro et in vivo pour déboucher sur une récupération de ces protéines agrégées sous forme soluble. Il est intéressant de constater que plusieurs auteurs rapportent la présence de sHsp en grande quantité dans les fractions cellulaires insolubles depuis de nombreuses années (Arrigo & Ahmad-Zadeh, 1981; Nover et al., 1983; Collier & Schlesinger, 1986; Allen et al., 1992; Basha et al., 2004). En effet, il est paradoxal de retrouver une protéine sensée permettre de protéger de l’agrégation incluse dans un agrégat. Certains auteurs suggèrent que l’augmentation de la taille des complexes sHsp/substrats conduirait à la formation de ces coagrégats (Mogk et al., 2003b). Les complexes insolubles apparaitraient donc lors de la surcharge des sHsp par leur substrats (Jiao et al., 2005) ou encore lors de la prise en charge de protéines très endommagées en grand nombre lors de stress sévères. Les sHsp coagrégées avec leurs substrats semblent jouer un rôle dans la ressolubilisation des corps d’inclusion par d’autres chaperons ATP dépendants. En effet, lorsque IbpA et IbpB d’E. coli sont présentes dans un corps d’inclusion, la protéine ClpB permet la ressolubilisation des protéines agrégées et le système DnaK/DnaJ/GrpE le repliement de ces dernières (Mogk et al., 2003a, 2003b; Matuszewska et al., 2005). D’autres auteurs ont démontré un effet similaire chez S. cerevisiae (Cashikar et al., 2005; Haslbeck et al., 2005b). Le repliement des protéines agrégées est possible sans sHsp mais il est plus rapide et plus efficace lorsque les sHsp sont présentes dans les agrégats. Les mécanismes permettant d’améliorer la ressolubilisation de protéines agrégées restent inconnus mais certains auteurs proposent l’hypothèse que l’intervention des sHsp permet de diminuer les interactions hydrophobes inter-protéines et/ou le nombre de liaisons hydrogène intermoléculaires avec d’autres peptides agrégés. Ces interactions permettraient ainsi d’avoir des agrégats moins denses et moins solides (Mogk et al., 2003b) et de faciliter l’action de ClpB et DnaK (Liberek et al., 2008).\nii. Activité lipochaperon\nLe rôle le plus connu des protéines de type sHsps est principalement lié aux protéines. Cependant les sHsps sont également capables d’interagir avec d’autres substrats comme les lipides. De récentes études ont permis de mettre en évidence la présence de sHsp associées aux membranes cytoplasmiques, comme par exemple IbpA et IbpB chez E. coli (Nishihara et al., 1998; Kitagawa et al., 2000; Laskowska et al., 2004), ou encore la protéine Hsp17 chez Synechocystis sp. dans les membranes des thylakoïdes (Horváth et al., 1998) et la protéine Lo18 dans la membrane d’Oenococcus oeni (Jobin et al., 1997; Delmas et al., 2001; Coucheney et al., 2005; Weidmann et al., 2010).\nHsp17 que l’on retrouve chez les cyanobactéries aurait un rôle prépondérant dans le maintien de l’intégrité membranaire et la protection du système de transport d’électrons PSII qui est l’élément le plus labile dans la membrane des thylakoïdes (Nitta et al., 2005). Des essais d’inactivation du gène hsp17 codant pour la protéine Hsp17 entraine une diminution significative de l’activité photosynthétique de Synechocystis sp. (Lee et al., 2000). Chez O. oeni, la synthèse de la sHsp Lo18 est induite par les stress thermiques mais également lors de la fluidification de la membrane par un agent chimique comme l’alcool benzylique : une fraction de la sHsp Lo18 est alors associée à la membrane (Delmas et al., 2001). Cependant, il est intéressant de constater qu’aucune sHsp associée à la membrane ne possède de domaine apparenté à un domaine transmembranaire ou à un peptide signal permettant leur inclusion dans les membranes (Nakamoto & Vigh, 2007). Il est donc improbable que les sHsp associées à la membrane le soit par une voie sécrétoire connue.\nL’association des sHsp avec les membranes traduit une activité potentielle. En effet, des expériences réalisées chez Synechocystis sp. montrent que la protéine Hsp17 est capable de s’associer avec la membrane et de réguler sa fluidité. Cependant les mécanismes d’interaction restent à élucider. L’interaction semble se faire au niveau des lipides en phase fluide et plus spécifiquement de ceux chargés négativement (Török et al., 2001). Cette spécificité d’interaction d’une sHsp avec un type de lipide se retrouve également pour l’αB-cristallin (Tsvetkova et al., 2002) qui suggère des domaines membranaires ayant plus d’affinité pour les sHsp. Toujours en étudiant les membranes des thylakoïdes, et grâce à des mutants de la protéine Hsp17, des auteurs (Balogi et al., 2005, 2008) ont réussi à mettre en évidence l’existence de lipides produits en réponse à un stress thermique (ou lumineux) : les « Heat shock lipids ». Ces lipides appelés monoglucosyldiacylglycerol (MGlcDG) présentent la particularité de former des domaines membranaires ayant une grande affinité pour Hsp17. Ils auraient ainsi un rôle dans la reconnaissance des membranes par les sHsp.\nContrairement à l’activité de chaperon moléculaire, l’activité de lipochaperon semble s’exercer après dissociation de l’oligomère de la protéine Hsp17. Ce serait alors la forme dimérique de cette sHsp qui interagirait avec les lipides membranaires grâce à la partie N-terminale de Hsp17 (Balogi et al., 2008). Cette étude est confortée par des résultats similaires de dissociation des oligomères de Hsp16.3 avant fixation sur la membrane sur la membrane plasmique de M. tuberculosis (Zhang et al., 2005a).\n4. sHsp et bactéries lactiques : cas de la protéine Lo18\na. Les sHsp chez les bactéries lactiques\nLes bactéries lactiques peuvent vivre à l’état libre ou chez un hôte tel que l’Homme, mais que ce soit dans la nature ou dans le tractus intestinal elles sont soumises à de nombreux stress. Par exemple dans le tractus intestinal des mammifères, elles peuvent être soumises à des variations de pH, des stress oxydatifs ou encore des stress osmotiques et biliaires (Storz & Hengge-Aronis, 2000). Les bactéries lactiques sont aussi utilisées en industrie agroalimentaire et sont souvent distribuées sous forme de ferments. Pour réaliser ces starters, elles sont soumises à des stress thermiques et osmotiques lors de la congélation ou lyophilisation. Une adaptation rapide à ces stress est indispensable pour assurer la survie des bactéries lactiques. Et comme chez E. coli l’un des principaux mécanismes de réponse au stress des bactéries lactiques est la production de chaperons moléculaires.\nLes bactéries lactiques sont très étudiées car elles ont un intérêt industriel. Ainsi de nombreuses bactéries lactiques sont séquencées ce qui permet d’identifier les séquences codant pour des Hsp. Le Tableau 2 présente une partie des bactéries lactiques possédant une ou plusieurs sHsp.\nTableau 2. Les bactéries lactiques et leurs sHsps (El Demerdash et al., 2003; Ventura et al., 2007; Capozzi et al., 2011a).\nTaille du génome (Mb)\nNombre de sHsp\nBifidobacterium longum ATCC15687\nLactobacillus brevis ATCC 367/JCM 1170\nLactobacillus gasseri ATCC 33323/DSM 20243\nLactobacillus reuteri ATCC 23272/DSM 20016/F275\nOenococcus oeni PSU-I\nStreptococcus thermophilus LMG18331\nComme évoqué précédemment L. lactis ne compte aucune sHsp (Sugimoto et al., 2008) mais rares sont les bactéries lactiques n’en possédant pas. Cela souligne que d’autres mécanismes cellulaires peuvent compenser cette absence mais montre tout de même l’importance relative des sHsp. Les sHsp de S. thermophilus sont codées non pas sur le chromosome mais un plasmide qui est persistant chez la bactérie ce qui constitue un autre indice du rôle primordial des sHsp chez les bactéries lactiques (El Demerdash et al., 2003).\nCette importance par exemple a été mise en évidence chez L. plantarum. Des auteurs (Capozzi et al., 2011c) ont en effet montré qu’une souche mutante de L. plantarum n’exprimant pas Hsp18.5 présence une phase de latence importante après un choc thermique à 50°C. De plus la structure de la membrane apparait altérée en microscopie électronique. Au contraire, la surexpression de Hsp18.5 ou Hsp19.3 chez L. plantarum, conduit à une meilleure stabilité de la membrane lors de stress fluidifiants (Capozzi et al., 2011b).\nChez les sHsp des bactéries lactiques, on retrouve logiquement une grande conservation du domaine α-cristallin mais également de la courte région C-terminale. La région N-terminale présente elle aussi des régions conservées entre les différentes bactéries lactiques mais en ayant toutefois une grande disparité au niveau de leur longueur.\nb. Cas de la protéine Lo18 de O. oeni\nLa bactérie lactique Oenococcus oeni fait partie de la flore d’intérêt du vin. Elle est responsable de la fermentation malolactique, qui intervient après la fermentation alcoolique dans les processus de vinification (Nielsen et al., 1996). Les conditions de développement d’O. oeni dans le vin sont peu favorables : forte teneur en éthanol (12% vol/vol), pH acide (compris entre 3,5 et 4,0), basse température (15 – 18 °C), carence en nutriments, présence de composés soufrés toxiques, etc. La bactérie est pourtant capable de s’adapter à ces conditions défavorables et constitue un bon modèle d’étude de la réponse à de multiples stress chez les bactéries lactiques (Guzzo et al., 2000). L’un des mécanismes de résistance fait intervenir une sHsp nommée Lo18 et qui fait l’objet d’une étude approfondie.\nCette protéine de 18 kDa est fortement exprimée en réponse à de multiples stress comme un choc thermique (42°C), un faible pH (3,5), la présence d’éthanol (12% v/v) (Guzzo et al., 1997), ou encore d’alcool benzylique (Delmas et al., 2001). De plus les auteurs ont montré que la protéine est également induite en phase stationnaire de croissance et y est toujours détectée après 30h.\nDes études biochimiques par « cross-linking » in vivo et in vitro suggèrent que Lo18 puisse exister sous forme de dimère, trimères, tétramères et une forme oligomérique de très haute masse moléculaire (Delmas et al., 2001). La protéine Lo18 possède une activité de chaperon ATP-indépendante. L’association avec une protéine en cours de dénaturation permet de protéger la protéine et de ralentir son agrégation (Delmas et al. 2001). L’activité de chaperon peut s’exercer sur la citrate synthase jusqu’à 60°C. Il a été suggéré que Lo18 comme les autres sHsp exerce son activité chaperon moléculaire lorsqu’elle est sous forme multimérique.\nLa localisation cellulaire de Lo18 a été étudiée par fractionnement cellulaire et immunocytochimie in situ. En présence stress thermique ou fluidifiant, les essais ont montré qu’une fraction de la protéine est associée de manière périphérique à la membrane par des liaisons faibles (Jobin et al., 1997; Coucheney et al., 2005). Récemment, il a été démontré que cette sHsp avait également une activité de lipochaperon, caractérisée par un effet rigidifiant sur la membrane en présence de la protéine à haute température (Coucheney et al., 2005).\n5. Bilan des interactions entre chaperons moléculaires lors d’un stress\nLorsque les protéines sont soumises à un stress léger, elles peuvent être prises en charge directement par les chaperons moléculaire ATP-dépendant de repliement comme GroEL/ES ou DnaK/DnaJ/GrpE et être repliées directement. Lors d’un stress plus intense, les sHsp peuvent compenser le nombre plus important de protéines nécessitant un repliement en stabilisant les protéines endommages sous forme soluble. GroEL/ES ne semble pas intervenir directement avec la sHsp IbpB mais c’est plutôt DnaK qui prend en charge les protéines protégées par IbpB et le transfert se fait ensuite au complexe GroEL/ES qui achève le processus de repliement sous forme active (Nakamoto & Vigh, 2007). D’autres exemples existent : en présence du complexe DnaK/DnaJ/GrpE, la citrate synthase prise en charge par un oligomère de Hsp25 de souris soluble peut retrouver son activité enzymatique (Ehrnsperger et al., 1997). Une récupération de l’activité de l’enzyme luciférase prise en charge par Hsp18,1 du pois a également été démontrée (Lee et al., 1997). Cette capacité à empêcher l’agrégation irréversible des protéines cellulaires pendant un stress permettrait de faire face à la surcharge de protéines à réparer constituant ainsi un tampon contre l’agrégation.\nLorsque le stress devient trop important et que tous les chaperons disponibles sont saturés les complexes sHsp/substrats précipitent, ces derniers deviennent alors un réservoir insoluble de protéines facilement extractibles et renaturables grâce à l’intervention de ClpB. Les corps d’inclusions sont toxiques pour les cellules (Horwich & others, 2002) et la coagrégation avec les sHsp constituerait alors la dernière stratégie des cellules pour assurer leur survie post stress.\nLe complexe GroEL/ES étant principalement impliqué dans le repliement des protéines endommagées et exprimé fortement lors de stress thermiques, DnaK/DnaJ/GrpE prenant quant à lui part au repliement mais également à la désagrégation des corps d’inclusion avec ClpB, et enfin les sHsp exerçant leur activité de stabilisation des protéines en cours d’agrégation et coagrégeant avec ses substrats lors de stress sévères.\nCopyright: Florian Ronez


APPEL A PROJET "MUSIQUE ET ARTS VISUELS"\nAccueil » Appel à projet / résidence de territoire (Lot 46)\nLes différents partenaires du projet souhaitent cette année travailler la collaboration entre les musiques actuelles et les domaines de l’image (fixe ou en mouvement), permettant de proposer un projet artistique original à la croisée des deux disciplines. Il s’agit de voir comment, dans leurs spécificités respectives, l’image et la musique peuvent générer ensemble l’écriture d’une narration singulière, au sens large du terme, permettant de mettre en résonance les habitants et leur territoire de vie.\nLe projet artistique qui sera retenu s’adresse principalement aux habitants du Haut Ségala. Le Haut Ségala est composé de 11 communes anciennement regroupées dans une petite communauté de\ncommunes. Rattachées à la communauté de communes du Grand Figeac depuis 2018, elles\nconservent néanmoins leurs particularités liées à leur histoire et à leurs situations\nCe bout du Lot ne bénéficiant pas d’un maillage solide constitué de structures relais, le travail\nde l’association est d’aller à la rencontre de chaque habitant et de convaincre du bien-fondé\nde l’art et du beau dans le quotidien. La création contemporaine étant ici presque une\nLe projet retenu sera donc tourné presque exclusivement vers les habitants et à très forte\nUne présentation publique aura lieu en fin de projet afin de partager le fruit de ces\nPour la saison 2019-2020, le projet de résidence fait l’objet d’un partenariat local avec l’Art\nen Sort, association du Haut Ségala qui assure des missions de diffusions.\n* Le Haut Segala est composé de 11 communes anciennement regroupées dans la petite communauté\nde communes du Haut Segala, regroupant 2 535 habitants répartis sur une superficie de 189,1 km² soit\nune densité de 13,4 habitants par km².\nL’artiste sera présent au minimum 4 mois sur le territoire du Haut-Ségala en fonction de son\nagenda mais sur un temps suffisamment long pour que sa présence soit réellement notable\n− Un dossier de présentation de l’artiste / la compagnie / le collectif (structuration, présentation,…).\n− Un budget détaillé de l’action.\nDossier à envoyer UNIQUEMENT PAR EMAIL (liens, documents pdf, etc.) à l’adresse suivante :\nDépôt de l’appel à projet 14/11/2019. Date limite du dépôt de candidature 15/12/2019 à minuit. Réponse courant janvier 2020. Dossier à envoyer UNIQUEMENT PAR EMAIL\nL'Orange fluo, Ecole, Le Bourg, 46210 Gorses\nCet appel à projet s’inscrit dans le cadre du dispositif de la DRAC Occitanie.\nCette résidence fait l’objet d’un partenariat entre la DRAC Occitanie, la communauté de communes du Grand Figeac, le Département du Lot, l’Art en Sort et l’Orange fluo. Les partenaires culturels l’année passée étaient l’association Segala Limargue, le Musée Champollion et l’Astrolabe.\nAppel à projet / résidence de territoire (Lot 46)2019-11-182019-11-29https://www.lorangefluo.fr/wp-content/uploads/2017/12/logo-of-orangeweb-2.jpgL'Orange fluohttps://www.lorangefluo.fr/wp-content/uploads/2019/11/visuel-ap-19.jpg200px200px\nRésidence « musique et arts visuels » dans Haut SégalaProjet artistique de territoire


Flash infos : les sinistrés de Labarde retrouvent leur maison - Gold FM Flash infos : les sinistrés de Labarde retrouvent leur maison - Gold FM\nAccueil > Archives > Informations > Flash infos : les sinistrés de Labarde retrouvent leur maison\nFlash infos : les sinistrés de Labarde retrouvent leur maison\nCombien va coûter la tempête Xynthia ? Pour le moment ce ne sont que des estimations, la Fédération Française des Sociétés d’Assurance par le d’1 milliards 200 millions d’euros, ce chiffre est en dessous de 2009.\nEn Gironde, 5 jours après la tempête, 130 sinistrés ont pu regagner leur maison hier, à Labarde dans le Médoc. Leur lotissement avait été touché par la montée des eaux.\nLe chômage repasse la barre des 10 % en France, ce sont les chiffres de l’Insee pour le 4 ème trimestre 2009, ça faisait 10 ans que l’on avait pas atteint un tel chiffre. Ce taux est de 9,6 % pour la métropole.\nC’est un message envoyé aux contrebandiers et aux consommateurs :14 tonnes de cigarettes sont parties en fumée hier à Bègles à l’incinérateur d’Astria. Ces cigarettes, contrefaites, proviennent de Chine et devaient être vendues en Espagne.\nOn passe au football avec un match au sommet ce week-end pour les Girondins de Bordeaux : ils reçoivent Montpellier qui a le même nombre de point. Les Girondins de Bordeaux s’estiment par ailleurs pénalisés dans le casse-tête pour recaser les matchs en retards. La ligue a fixé mercredi prochain pour Bordeaux / Auxerre. Les Girondins ont fait appel.


Duke Nukem Forever : la démo disponible, des licences à gagner - Next INpact\nAccueil > PC INpact > Humour > Duke Nukem Forever : la démo disponible, des licences à gagner\nT'as acheté le jeu ? Tu peux jouer à sa démo... cool, non ?\nComme prévu, c'est ce 3 juin que la démo de Duke Nukem Forever a été rendue disponible aux membres du First Access Club. Pour rappel, pour en faire partie, il fallait avoir acheté Borderlands dans son édition GOTY ou avoir précommandé DNF via l'un des revendeurs de cette liste.\nOn notera d'ailleurs que Steam n'en fait pas partie, ce que regretteront sans doute ceux qui passent par cette plateforme de téléchargement. Quoi qu'il en soit, une fois votre code d'accès obtenu, il vous suffit de vous rendre à cette adresse pour avoir accès au précieux sésame.\nOn se demande tout de même pourquoi l'éditeur, avec le retard qu'à connu ce titre, n'a pas opté pour une diffusion plus large de la démo, censée permettre à ceux qui hésitent à l'acheter de prendre leur décision en toute connaissance de cause... Enfin, sachez qu'une nouvelle bande-annonce vient d'être mise en ligne... et que des licences pour le jeu commandées par l'équipe, il y a déjà quelques semaines, seront à gagner lors de notre grand concours anniversaire, qui débarquera dès la semaine prochaine.\nUne manière pour nous de vous remercier en vous indiquant que si DNF a fini par sortir, avec votre soutien... il en sera de même pour la nouvelle version de PCi ;) David Legrand, Publiée le 03/06/2011 à 14:41\nLe vendredi 3 juin 2011 à 14:52:53\nC'est pas plutôt fait pour les gens qui n'ont pas acheté le jeu une démo ? Ça a l'air d'une bouze en tout cas...\nLe vendredi 3 juin 2011 à 14:55:01\nAaaaah... Après les démos payantes... les démos privées...\nLe vendredi 3 juin 2011 à 14:55:37\nJe suis sous Linux ... Va falloir (si je gagne) que je me repaye un PC flambant (mais ignifugé) neuf !\nLe vendredi 3 juin 2011 à 14:57:34\nheu question la demo vous pouvez pas partager l'install des fois ?\nLe vendredi 3 juin 2011 à 14:58:05\nxoup a écrit : C'est pas plutôt fait pour les gens qui n'ont pas acheté le jeu une démo ? Meuuuh non voyons Je n'ose imaginer le succès qu'aurait eût D3D s'il avait fallu précommander le jeu pour avoir accès à sa (mythique) démo... Et le pire c'est que ce genre de choses se généralise... RIP Shareware Edité par tot0che le vendredi 18 janvier 2013 à 19:32


Accueil » fruits de saison » Avocat : ses recettes, sa saison et ses bienfaits\nDix mille ans d’histoire et toujours vert… Sa chair onctueuse nous fait fondre et son « bon gras » nous fait du bien. Zoom sur l’avocat\nAvocat : autour du monde\nDans toute l’Amérique centrale, cette caractéristique lui a valu le surnom de « beurre du pauvre ». En Europe, après son arrivée au xviie siècle, il est au contraire réservé aux tables des riches. Dans certains pays, comme le Brésil ou les Philippines, on le consomme sucré en dessert, mais il est le plus souvent mangé salé, que ce soit en salade, entier avec une vinaigrette, en guacamole, ou étalé sur du pain en sandwich.\nAvocat : un bienfait millénaire\nLes Aztèques, déjà, consommaient de l’avocat. Son goût beurré et sa texture fondante ne sont pas les seules raisons de son succès millénaire. Ce fruit se caractérise par sa richesse en bonnes graisses. Il constitue un apport considérable en énergie sans être source de mauvais cholestérol.\nEn France, deux variétés sont majoritaires. Le hass se caractérise par ses picots et sa couleur changeant du vert au brun, qui permet d’identifier l’avancée de sa maturité. Le fuerte, au contraire lisse et vert, est mûr lorsque la chair est souple près du pédoncule. Vous pouvez l’acheter bien dur, il continue à mûrir une fois cueilli.\nUn noyau bien pratique\nNe vous débarrassez pas trop vite de son noyau bien gros, il peut être très utile. L’avocat a la fâcheuse tendance à s’oxyder trop vite. Si vous n’en mangez qu’une moitié, gardez le noyau dans la partie que vous conservez pour le protéger car celui-ci a des propriétés antioxydantes.\nLire aussi : Melon de cavaillon : bien le choisir\nNotre recette à base d’avocat : guacamole\nPréparation : 10 mn. Pour 4 personnes :\n3 avocats mûrs à point (soit environ 400 g de chair d’avocat)\nLe jus d’1 beau citron vert n4 c. à soupe d’huile d’olive\nPelez et dégermez les gousses d’ail. Blanchissez-les 3 mn dans une casserole d’eau bouillante puis égouttez-les.\nPelez, dénoyautez et coupez les avocats en petits morceaux.\nÉcrasez-les à la fourchette avant de les mixer avec les gousses d’ail blanchies, le jus de citron et l’huile d’olive. Vous pouvez utiliser pour cette opération un mixeur plongeant.\nLorsque vous obtenez une consistance homogène, ajoutez le sel et le piment.\nVersez le guacamole dans un bol, nappez-le d’huile d’olive pour ne pas qu’il s’oxyde et réservez-le au frais, couvert\nServez le guacamole avec des chips de maïs ou des tranches fines de pain grillé.\nConseil. Vous pouvez, au moment de le servir, ajoutez un petit oignon violet finement haché et un peu de coriandre fraîche ciselée. Accompagnez d’un sancerre blanc.\nPartagez l'article "Avocat : ses recettes, sa saison et ses bienfaits"\nPartager la publication "Avocat : ses recettes, sa saison et ses bienfaits"


Bien choisir ses mots-clés : la recette de la visibilité sur internet - Le blog du Salon SME\nLe blog du Salon SME / Bien choisir ses mots-clés : la recette de la visibilité sur internet\n1. Le SEO en quelques mots…\nVous ne connaissez pas le SEO ? Vous êtes sans doute passé à côté d’un concept qui va révolutionner votre journée.\nLe Search Engine Optimization ou référencement naturel, en français, est une technique d’optimisation des pages web d’un site ou d’un blog en vue d’augmenter sa visibilité et son trafic. Il s’agit de placer les éléments techniques et textuels qui permettront aux moteurs de recherche d’identifier plus facilement vos pages et de les faire remonter lors des requêtes des internautes.\nConcrètement, si votre entreprise vend des produits pour bébé, il s’agit d’optimiser les différentes pages du site pour les placer le plus haut possible dans les résultats de recherche des internautes. Exemple : lorsqu’un internaute tape “crème hydratante pour bébé”, vous souhaitez remonter parmi les résultats proposés par Google sur cette requête.\n2. Comment choisir ses mots-clés ?\nChoisir vos mots-clés est donc la première étape du référencement naturel de votre site web. Si le terme mot-clé est couramment utilisé, il s’agit, en réalité, plus d’expressions-clés que de mots puisqu’on s’attache aux termes employés par les internautes dans les moteurs de recherche.\nChoisir ses mots-clés dépend de trois critères importants : la pertinence, le volume de recherche et la concurrence.\nLa pertinence d’un mot-clé\nS’assurer que vos mots-clés sont pertinents par rapport à ce que vous proposez et ce que les internautes recherchent est essentiel.\nEn effet, si vous positionnez votre page sur un mot-clé uniquement pour générer du trafic sur votre site mais qu’il est totalement déconnecté des autres thématiques abordées sur votre site, les moteurs de recherches ne réussiront pas à faire le lien entre les différentes pages et considèreront votre page comme non pertinente pour l’internaute.\nLe volume du mot-clé\nDeuxième aspect important pour votre choix de mot-clé : le volume de recherche. Il s’agit du nombre de recherches effectuées chaque mois sur le mot-clé choisi.\nUn volume de recherche trop important (+ de 1000 recherches par mois) est souvent très généraliste. Pour remonter sur les moteurs de recherche plus facilement, choisir des mots clés à plus faible volume mais plus précis peut s’avérer plus efficace.\nPrivilégiez les expressions locales comme “plombier lyon 2” plutôt que “plombier” ou les requêtes précises comme “crème hydratante bébé” plutôt que “crème bébé” qui pourrait présenter des crèmes solaires par exemple.\nC’est la troisième étape dans votre sélection de mots-clés. Vous devez analyser les résultats en première position des moteurs de recherche afin de déterminer si les premiers rangs sont atteignables pour votre entreprise.\nÉvidemment, vous ne pourrez pas concurrencer les sites de grandes enseignes présentes sur le web depuis des années et ayant un poids énorme dans leur domaine. La meilleure stratégie sera alors d’utiliser la technique de la longue traîne…\n3. La longue traîne ou les petits cailloux qui mènent à votre site\nBien souvent, les entrepreneurs qui se lancent dans une stratégie de référencement naturel font le choix des mots-clés avec un grand volume de recherche. Or, si vous souhaitez attirer du trafic sur votre site web, c’est pour attirer les visiteurs les plus qualifiés et les transformer en prospects puis en clients.\nPour cela, votre stratégie de sélection de mots-clés doit être pensée en détail. En amont de la rédaction de votre site ou de votre blog, il vous faut identifier les mots-clés spécifiques à votre secteur d’activité et aux produits/services que vous vendez.\nLa stratégie de longue traîne consiste à choisir des mots-clés très précis avec un faible volume de recherche (10 à 50 par mois). Ici, vous n’allez pas chercher la quantité mais la qualité des visiteurs.\nIl arrive que ces mots-clés prennent la forme de question du type “comment faire…” ou “quel est le meilleur…”. Par exemple : “changer joint chasse d’eau wc suspendu geberit”. Avec 30 recherches mensuelles en moyenne, ce mot-clé est très précis et offre de belles opportunités pour remonter sur les moteurs de recherche.\nVous avez désormais toutes les clés pour bien choisir vos mots-clés. Mais n’oubliez pas, la réussite dépend de la qualité du contenu que vous proposez et du temps que vous passerez à le diffuser. Une règle d’or en SEO : un mot-clé = une page.


Menuiserie Eschau (67) - tel: 03.67.10.22.27 | Artisan menuisier et ébéniste\nMenuiserie Eschau (67)\nMenuiserie à Eschau : réalise vos menuiseries intérieure et extérieure\nDe la conception de vos meubles sur-mesure à l’installation de vos placards ou à l’agencement de votre cuisine, vous pourriez avoir besoin des compétences d’un menuisier professionnel comme Menuiserie à Eschau . Tout ce qui touche aux menuiseries, intérieures ou extérieures, dans le cadre d’un chantier de construction ou de rénovation peut être confié à ce spécialiste de la menuiserie. Nous créons pour vous vos fenêtres, placards ou portes sur-mesure. Nos équipes interviennent également à votre domicile pour poser ou rénover votre parquet. Nous pouvons nous déplacer à Eschau ainsi que dans d’autres villes du Bas-Rhin. Pour toute demande d’informations ou de devis, appelez-nous au 03.67.10.22.27.\nMenuiserie à Eschau : conception, pose et rénovation de fenêtres\nLes fenêtres remplissent deux fonctions. Elles embellissent et mettent en valeur votre maison. Une fenêtre bien isolée vous permet également de faire des économies d’énergie grâce à un double ou triple vitrage. Elle vous apporte en outre un confort accru à l’intérieur. Les fenêtres de votre appartement ou de votre maison ont fait leur temps ? Elles ne sont plus aux normes en matière d’isolation ? Elles ont besoin d’un coup de neuf ou d’un remplacement. Contactez Menuiserie à Eschau pour réaliser, poser et rénover vos fenêtres sur-mesure à Eschau . Nous vous garantissons des fenêtres identiques aux précédentes. Pour vos nouvelles fenêtres, nous vous proposons un large choix de fenêtres par rapport auur forme, auur matériau et auur type d’ouverture. Quel que soit votre choix, soyez sûr d’avoir des fenêtres dont la fabrication et la pose respectent les normes en vigueur.\nMenuiserie à Eschau : pose et installation de portes\nMenuiserie à Eschau : pose et rénovation de parquet\nMenuiserie à Eschau : fabrication et pose de placards sur-mesure\nMenuiserie à Eschau : installation de volets\nMenuiserie à Eschau : agencement de la cuisine


Le merveilleux monde de Joséphine: Une page et une annonce!!!\nUne page et une annonce!!!\nDemain sera une journée fort occupée côté scrap puisque je pars pour un merveilleux weekend Crop avec ma super gang de Scrapzone!!\nJe vais enfin connaître le bonheur de scrapper avec mes talentueuses collègues et amies, je sens que nous aurons beaucoup de plaisir!!!!\nÉgalement demain il y aura une grande primeur....car Scrapzone vous dévoilera son tout nouveau blog la "Zone Sketch". Nous espérons que vous serez avec nous pour ce grand moment! C'est donc un rendez-vous demain, je pourrai vous donner l'adresse de notre beau blog, dont nous sommes très fières!!!! En attendant, voici le logo du blog:\nEt pour terminer je vous montre une autre page créée pour le crop en ligne de Scrapzone:\nIsa 20 octobre 2011 à 15:58\nJ'adore ta page !!!! Bon week end crop chanceuse !!!\nLizzyc 21 octobre 2011 à 05:53\nHello.. this is very beautiful..!


Kitchen Trotter, la box évasion\nKitchen Trotter est bien un kit, et non une box, puisque le concept vous propose de recevoir chez vous un menu pour 4/6 personnes à préparer chez soi et à déguster. Le kit est accompagné de 4 recettes typiques et de 6/7 ingrédients exotiques (quelque soit le pays à l'honneur) ainsi qu'une playlist en ligne pour accompagner votre repas. Le principe est simple : on s'abonne sur internet, on reçoit son kit, on cuisine et... on déguste ! Là encore, le thème n'est pas dévoilé à l'avance, la surprise est totale lorsque vous recevez votre kit. Et nous forcément, on aime les surprises.\nParlons un peu tarifs. Le kit est au prix de 25 € par mois (résiliable à tout moment). Si vous souhaitez faire durer l'exotisme, un engagement pour 6 mois sera possible pour 144 € (soit 6 € offerts) et pour 12 mois pour 276 € (soit 24 € offerts). Attention, les tarifs sont hors frais de livraison ! Un budget dans le mois quand même. Mais que cela cache-t-il ?\nPour justifier ces tarifs, la raison est assez simple : vous trouvez dans la box des produits rares et parfois uniques puisque certains sont de la marque Kitchen Trotter. En plus des ingrédients, des petites surprises sont là pour vous faire vivre la passion Kitchen Trotter.\nPour réaliser un menu complet, il suffit de lire les recettes et de compléter le kit avec les produits de votre supermarché.\nN'ayant pas eu le temps de me préparer un repas avec ces mets (bien que la sauce soja soit déjà entamée), la présentation des produits sera assez succincte.\nPréparation pour sauce Gado Gado - Asli : ce produit est un mélange à base d'arachide, cette préparation permet de pouvoir préparer facilement de la sauce Gado Gado. Il semblerait que cela soit très bon avec des légumes crus.\nKecap Manis - Bango : une belle bouteille de sauce soja sucrée. Une galère à trouver dans les magasins, ce produit me ravi. Pour en profiter avant de préparer le repas proposé par Kitchen Trotter, je me suis servi de cette sauce avec des carottes cuites au wok. Un délice !\nFeuilles de Combava - Terre Exotique & Kitchen Trotter : agrume proche du citron, au goût acidulé. Ce sont des feuilles séchées à utiliser pour assaisonner un plat.\nCitronelle en poudre - Terre Exotique & Kitchen Trotter : permet d'ajouter un bon goût de citronnelle au plat, très utilisé par les indonésiens dans leur cuisine.\nTerasi - Ams Koe Poe : pâte de crevettes fermentées à manger cuite. Souvent utilisée pour faire des plats sautés en sauce.\nNoix de Kemiri - Epices et Delices & Kitchen Trotter : apparemment cela ressemble à la noisette mais est très différente en goût. A manger cuites, crues il semblerait que ce soit indigeste...\nArôme de Pandan - Ams XO : arôme de plante qui permet de parfumer des préparations et de les rendre vertes !\nSablier - Kitchen Trotter : le petit goodies qui fait plaisir et qui va m'être utile puisque je n'en avais pas. Notez également que côté goodies il y avait aussi un aimant à frigo, qui a rejoint celui de la JDGBox !\nOn retrouve dans le kit un livret avec des recettes à préparer et des anecdotes autour du pays à l'honneur. Ici, c'est Anita, qui tient le bistrot traditionnel Indonésien à Paris nommé Indonesia, qui a aidé Kitchen Trotter à réaliser ce kit et les recettes du livret. Le livret contient de véritable fiches recettes cartonnées et de très jolies photos. De tous les livrets de kit ou box que j'ai pu voir, il dépasse largement la qualité de tous. Les photos et la qualité du papier en font un véritable bijou.\nLes produits semblent de qualité à l'intérieur du kit mais pour le moment, je n'ai pas vraiment eu l'occasion de goûter... Mon seul regret de ce kit est bien là : à moins de faire les recettes proposées, je ne sais pas comment utiliser les ingrédients. Et c'est dommage, puisqu'étant surbooké depuis quelques temps, je ne prends pas le temps de me faire de la grande cuisine. A préconiser pour ceux aimant se faire à manger ! Si vous êtes convaincu et séduit par le concept, il est temps de vous abonner à Kitchen Trotter ! La bonne nouvelle c'est que le site vous propose également une épicerie pour acheter en ligne les produits que vous avez pu découvrir dans votre kit.\nMa surprise fut grande quand j'ai découvert que ce kit était également en vente chez Alice Délice ! Une bonne alternative si vous ne souhaitez pas l'effet de surprise puisque l'achat en magasin vous permet de connaitre le thème et le contenu, à condition d'être prêt à mettre un peu plus cher : le kit est à vente à 34,99 € en magasin (ou sur le site Alice Délice).\nMerci Kitchen Trotter !\nKitchen Trotter Partenariat


Bilan de compétences CPF Reims | AKOYAS\nvotre BILAN DE COMPÉTENCES à REIMS\nLe BILAN DE COMPÉTENCES vous permet de définir votre PROJET PROFESSIONNEL & PERSONNEL ÉPANOUISSANT en vous plaçant comme l’ACTEUR PRINCIPAL de votre vie grâce à notre méthodologie exclusive basée sur l’ORIENTATION POSITIVE. Vous serez accompagné(e) pendant 24 h par Mickaël consultant spécialisé en bilan de compétences épanouissant.\nMICKAEL, votre consultant expert DÉDIÉ\nMickaël, consultant en richesses humaines, spécialisé en bilan de compétences, est à votre écoute et sera votre allié dans cette quête de sens et d’épanouissement personnel et professionnel.\nUne démarche en présentiel qui au fil des étapes dévoilera tout votre potentiel, faisant de vos défis présents, vos succès de demain.\nUn lieu sur mesure pour faciliter votre réflexion. Nous vous recevons en toute confidentialité dans notre agence de Reims située au 19 Rue Henri IV. Un lieu facile d’accès, avec des stationnements à proximité.\nMickaël vous reçoit pour un RDV d’accueil et d’information GRATUIT & CONFIDENTIEL


Jean-Michel Delacomptée raconte Saint-Simon - L'Express\nJean-Michel Delacomptée raconte Saint-Simon\nPar Christine Ferniot, publié le 04/01/2012 à 16:30\nAprès Bossuet, Delacomptée plonge dans les Mémoires de l'observateur de la cour de Louis XIV.\nEn 2010, Jean-Michel Delacomptée signait un brillant portrait de Bossuet dans la collection L'Un et l'autre, dirigée par J.-B. Pontalis. Respectant les principes de ces courts ouvrages fondés sur les fraternités électives, Langue morte : Bossuet était un récit subjectif consacré à l'Aigle de Meaux, ce grand amoureux du passé, de la langue exacte, redoutant "l'avènement du monde à venir dont il abhorrait l'athéisme, les désordres latents et l'attrait pour la chair". Racine, Ambroise Paré, La Boétie ont également intéressé le spécialiste des lettres du Grand Siècle, porté par une insatiable curiosité littéraire. Et le voici aujourd'hui à l'écoute de Saint-Simon, reprenant en exergue cette citation tirée des Mémoires : "Au temps où j'ai écrit, surtout vers la fin, tout tournait en décadence, à la confusion, au chaos, qui depuis n'a fait que croître."\nDès les premières pages de son livre, Jean-Michel Delacomptée pose la question fondamentale de l'écriture et de ses objectifs : "A partir de quel moment un écrivain, chargé d'un projet longuement fermenté mais qui lui résiste, finit par se lancer et, d'une traite, le réalise ?" En effet, Saint-Simon n'entame l'immense projet de ses Mémoires qu'en 1739 ou 1740. Fatigué, éloigné du monde, il a passé les soixante ans. Et Delacomptée de répondre presque aussitôt : "L'appel de la vérité, je crois. Et la grandeur." Tout en y songeant très jeune, Saint-Simon ne réalise son projet magistral qu'à son crépuscule.\nC'est grâce à son mariage que le duc obtient une charge lui permettant de loger au château de Versailles, d'être à la cour et donc au centre du monde. Sans cette position, il n'aurait rien vu et surtout rien entendu. Mais, uni à Marie-Gabrielle, la fille aînée du maréchal de Lorges, voilà Saint-Simon dans la place, en courtisan idéal et surtout en homme d'honneur et de fidélité. En grand sage également, comme le décrit le narrateur : "Saint-Simon était pieux, pondéré, corps et âme épris de son épouse, avec des appétits réglés et un penchant prononcé pour les moeurs régulières. Il prenait soin de son hygiène, mangeait modérément bien qu'il fût gourmand... Il buvait peu, répugnait aux débordements du jeu..." Et pourtant cet homme presque parfait va rester un ami fidèle du Régent, Philippe d'Orléans, dont les faiblesses de caractère et de tempérament étaient extrêmes et les tentations multiples. Ces débordements mettent en rage son conseiller, même si convaincre, manipuler, est dans sa nature.\nSaint-Simon a l'éloquence dans le sang et Jean-Michel Delacomptée revient avec admiration sur sa puissance verbale, auprès du duc d'Orléans comme du roi Louis XIV. Homme de plume et homme de voix, grand fumeur fasciné par la mort, Saint-Simon se montre d'une dureté implacable à l'égard du roi Louis XIV, "dictateur assourdi par le bourdonnement des essaims de flatteurs qui lui tourbillonnaient autour". Pour Saint-Simon, Louis XIII fut la grandeur même, modèle de charité et de perfection quand l'homme qui lui succède possède une âme trop petite. Et plus tard, lorsque Louis XV à son tour lui impose l'exil, Saint-Simon n'a plus qu'à changer de monde, trouver une autre voix. Dans ses Mémoires, il va dire "je", se mettre à découvert et n'exister que par l'écriture, achevant cette oeuvre en demandant une "bénigne indulgence" à ses lecteurs. Comme avec Bossuet, Jean-Michel Delacomptée se montre fasciné par le souffle de Saint-Simon : "Une langue écrite par le vieil homme, mais qui était si neuve, si vibrante de passion, si chargée de la grandeur même du règne dont il blâmait les tares, qu'aucun style d'une fécondité pareille n'avait jusqu'alors retenti."\nC'est donc ce "sens de la grandeur" que Delacomptée veut remettre en lumière et célébrer au cours de ce texte magnifiquement tourné. Ecriture vive, culture sans vanité, élégance de grand seigneur, voilà ce qui caractérise cet essai-portrait, savant mais accessible. Il y plane la nostalgie d'un passé flamboyant, quand la langue française créait le rêve, se plaçait à hauteur de l'ambition politique et sociale pour devenir un patrimoine de l'humanité. Les Mémoires de Saint-Simon et le livre de Jean-Michel Delacomptée devraient être adressés à tous les hommes politiques appelés demain à s'exprimer devant leurs électeurs. Ce n'est pas un conseil, c'est un médicament, que dis-je, une thérapie !\nCe livre fait déjà partie de ma liste d'achats et j'y cours demain, car j'attendais aussi la parution du livre de Michel Onfray sur Camus.
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Safran de Bize | Web 2.0 Directory\nFerme bio d'environ 2 hectares cultivés en safran, plantes aromatiques et arbres fruitiers. English spoken.\nMobile: 06 58 25 79 62\nSafran de Bize séché au feu de bois (différentes essences) vendu avec conseils et recettes. Sirops de Bize (thym bio sauvage, romarin bio sauvage, laurier bio sauvage et safran bio) avec recettes et conseils.\nSafran : 0,1 gr à 1 gr (plus pour les professionnels).\nSirops de thym, romarin, laurier et safran en bouteilles de 10 cl ou 25 cl.\nDans l'Aude et l'Hérault. Expédition postale en France.\nVente directe toute l'année à la ferme sur RDV uniquement.\nVisites au moment de la récolte du safran (période octobre - novembre) sur RDV.\nInitiation à la cuisine au safran et aux sirops de plantes tout au long de l'année sur RDV uniquement.


Le cœur de Iop\nLes disciples de Iop sont réputés pour être des chevaliers courageux sachant faire parler les armes. Le millier d'années qui s'est écoulé entre l'ère de DOFUS et celle de WAKFU n'a pas bouleversé le tempérament fougueux de ces derniers. Fidèles à eux-mêmes, les Iops sont toujours des combattants et des protecteurs redoutables.\nVideo officielle de la classe Iop\nLes sorts du Iop\nLes Iop sont des damages dealers avec des capacités de tanking qui les prédestines à être en première ligne.\n[titre]Les sorts du Iop[/titre]\nLes sorts élémentaires du Iop se répartissent dans les 3 éléments suivants : Feu, Air et Terre.\nLes sorts Feu sont des attaques puissantes capables de toucher plusieurs cibles et de brûler.\nLes sorts Air sont des attaques rapides et peu coûteuses.\nLes sorts Terre infligent des dommages importants tout en infligeant l'état sonné ou entravé.\n3 PA 1 Inflige des dégâts et applique l'état Échaudé. Normal : -44 Pdv et Échaudé\nCritique : -66Pdv et Échaudé\n4 PA & 1 PM 1 Une attaque zone (ligne 3 cases) qui peut appliquer l'état Cécité. Normal : -70 Pdv et 20% Cécité\nCritique : -105 Pdv et 30% Cécité\n5 PA 2 à 3 Le Iop se rapproche de deux cases et inflige des dégâts à sa cible. Peut appliquer l'état Explosion aux cibles autour de l'impact. Normal : -75 Pdv et 30% Explosion\nCritique : -113 Pdv et 45% Explosion\n3 PA 0 Frappe toutes les cibles au càc du Iop (croix de 1 case) et applique l'état Enflammé au lanceur. Normal : -36 Pdv et Enflammé (Iop)\nCritique : -53 Pdv et Enflammé (Iop)\n6 PA & 1 PW 0 Le sort de zone (cercle de 2 cases autour du Iop) le plus puissant du Iop Feu, il peut également appliquer l'état Explosion. Normal : -90 Pdv et 66% Explosion\nCritique : -135 Pdv et 100% Explosion\n2 PA 1 Attaque monocible peu coûteuse. Normal : -32 Pdv\nCritique : -48 Pdv\n1 PA 1 Attaque monocible peu coûteuse qui applique l'état Aérien au Iop. Normal : -14 Pdv et Aérien Niv.1\nCritique : -21 Pdv et Aérien Niv.2\n3 PA 1 Une attaque qui pousse la cible de deux cases. Normal : -37 Pdv\nCritique : -55 Pdv\n1 PM 1 Attaque monocible peu coûteuse (uniquement des PM). Normal : -20 Pdv\nCritique : -30 Pdv\n1 PW 1 Attaque monocible peu coûteuse (uniquement 1 PW). Condition : 1 utilisation par cible. Normal : -31 Pdv\nCritique : -46 Pdv\n4 PA 1 Inflige de gros dégâts au corps à corps. Normal : -69 Pdv\nCritique : -103 Pdv\n5 PA 2 à 3 Attaque à distance et sans ligne de vue, qui peut appliquer l'état Sonné. Normal : -65 Pdv et 10% Sonné\nCritique : -98 Pdv et 15% Sonné\n2 PA 2 à 3 Attaque à distance en zone (croix de 1 case), capable de retirer 1 PM aux cibles. Normal : -26 Pdv et 10% -1 PM\nCritique : -39 Pdv et 15% -1 PM\n4 PA & 1 PM 1 à 3 Le Iop se rapproche de deux cases et inflige des dégâts à sa cible. Peut appliquer l'état Sonné. Condition : 1 utilisation par cible. Normal : -53 Pdv et 10% Sonné\nCritique : -78 Pdv et 15% Sonné\n5 PA & 1 PM 0 Puissant sort de zone (carré de 3 cases autour du Iop) qui peut retirer 1 PM aux cibles. Normal : -75 Pdv et 30% -1 PM\nCritique : -112 Pdv et 45% -1 PM\n[soustitre]Les spécialités Iop[/soustitre]\nNiv 0 : 4 PA & 1 PW\n1 à 2 Le Iop bondit sur la case libre de son choix (2 cases max), et gagne l'état Puissance. Condition : N'est pas porté. +20% aux dégâts.\nNiv 0 : 3 PA\nNiv 9 : 2 PA\n0 Permet d'augmenter sa parade. Termine le tour du Iop après utilisation. +50 en parade.\nNiv 0 : 4 PA & 2 PM\nNiv 9 : 4 PA & 1 PM\nNiv 0 : 1\nNiv 9 : 1 à 5\nLe Iop saute sur sa cible, il peut lui appliquer l'état Sonné. Attention, le Iop peut aussi être Sonné. Cible : 10% Sonné. Lanceur : 7% Sonné.\nNiv 0 : 4\nNiv 9 : 3\n0 Le Iop déploie un étendard autour de lui (cercle 2 cases) qui le stabilise, il gagne l'état Préparation et l'état Étendard de Bravoure motive ses alliés présents dans la zone en augmentant leur dégâts. Termine le tour du Iop après utilisation. Stabilise le Iop, +50% aux dégâts (prochaine attaque) iop uniquement et +50% aux dégâts alliés.\n1 PW 0 Augmente ses dégâts. Libère l'état Puissance et augmente de 1% les chances d'appliquer Sonné par 2 niveaux de Puissance. +25% dégâts et +1% Sonné par 2 niveaux de Puissance.\nPassif : Bonus de Pdv en % permettant au Iop d'être plus résistant. +20% aux Pdv max.\n+20% aux Pdv max (Pvp).\nPassif : Augmente les dégâts du Iop. +40% aux dégâts.\nPassof : Donne une chance de tourner la cible vers Iop et de gagner des niveaux de Puissance. Petit plus RP : % de chance de se faire applaudir par ses alliés. +20% aux dégâts et 10% de se faire applaudir.\nPassif : Le Iop gagne de la Préparation pour sa prochaine attaque, si un allié effectue un coup critique ou tue une cible. Si CC allié : 20% aux dégâts.\nSi un allié tue : 40% dégâts.\nPassif : Augmente le Tacle du Iop, si un ennemi commence son tour en face du Iop, il sera bloqué grâce à Entrave Iop qui le stabilise. +40 Tacle, stabilise la cible.\nLe Iop peut appliquer plusieurs états à ses cibles, ses alliés ou lui-même. Plusieurs de ces états sont des bonus aux dégâts.\nEnflammé : Appliqué sur le Iop par le sort Épée Céleste, permet de déclencher les dégâts de l'état Échaudé.\nÉchaudé : Appliqué à la cible par le sort Fulgur, elle subira des dégâts Feu si elle commence son tour à coté d'une cible Enflammée. Le but est de lancer Fulgur et Épée Céleste dans un même tour, ou de faire en sorte que la cible commence son tour à coté d'un autre allié Enflammé (ex : Sacrieur).\nCécité : Appliqué par le sort Jugement, réduit la Portée de 20\nExplosion : Appliqué à la cible par les sorts Super Punch Iop et Colère de Iop. La cible subit des dégâts feu supplémentaires.\nSonné : Appliqué à la cible par les sorts Roknocerok, Charge et Aplatir, fait passer le prochain tour de la cible.\nAttention, le Iop peut également être Sonné par le sort Aplatir.\nAérien : Appliqué au Iop par le sort Rafale, augmente les dégâts du prochain sort Air lancé.\nPréparation : Appliqué au Iop par les sorts Étendard de Bravoure et le passif Démonstration, augmente les dégâts de la prochaine attaque.\nÉtendard de Bravoure : Appliqué par le sort du même nom, augmente les dégâts des alliés présents dans la zone du sort.\nPuissance : Appliqué au Iop par les sorts Bond, Amplification, augmente les dégâts du Iop. 1 niveau de Puissance = +1% dégâts. Maximum +100% dégâts.\nLa Puissance peut être libérée par l'actif Amplification, afin d'augmenter les chances d'appliquer l'état Sonné (pour 2 niveaux de Puissance : +1% Sonné.\nEntrave Iop : Une fois la spécialité montée au max, le iop est sûr de stabiliser son ennemi si celui-ci commence son tour en face du iop.\nLe Iop se base principalement sur des gros dégâts. Que ça soit en branche terre et feu le iop disposera de sorts redoutables, et de zone, pour dps au Corps à Corps.\nLe Iop se servira généralement des sorts air en raison de leur faible cout en PA afin de bénéficier des effets %degats d'Autorité.\n[titre]Le Iop Feu[/titre]\nLe iop feu est le iop "PvE" par excellence. Ne disposant pas des effets d'entrave comme son compère le iop Terre il aura cependant une force de frappe nettement supérieure grâce à sa colère.\nJugement sera le sort principal du Build feu, Fulgur sera utilisée principalement en combo avec Epée Céleste et le Iop profitera de la mobilité que lui procure Super Iop Punch pour se rapprocher de sa cible.\nColère de Iop étant le sort possédant le meilleur DPT de la spé il vous faudra vous placer correctement sous peine de tuer vos alliés plus rapidement que vos ennemis.\nVoici quelques panoplies qui devraient vous accompagner au long de votre aventure. Cela dépendant surtout du choix que vous avez fait de nécessiter un PA supplémentaire ou non.\n- Panoplie Chafer\n- Panoplie Chafer Royal\n- Panoplie Scara Doré\n- Panoplie Riktus de Brakmar\n- Panoplie Riktus Élite\n- Panoplie Lunaire\n- Panoplie Moine\n- Panoplie Meulou\n- Panoplie Vampyro\n- Panoplie Apprenti\n- Panoplie Boufrog\n- Panoplie Magmog\n- Panoplie Initié\n- Panoplie Wabbit\n- Panoplie Sage\n- Panoplie Emiw\n- AP (150 points)\n- MP (100 points)\n- Le restant, soit investir tout en Intelligence ou 10 Coups Critiques puis intelligence.\n[titre]Le Iop Air[/titre]\n[titre]Le Iop Terre[/titre]\n[titre]Le Iop Multi-éléments[/titre]\n[titre]Le Iop Terre/Feu[/titre]\nUne build très facile à jouer, son rôle en pvm se résume uniquement à taper taper et taper (Le Iop ne sert qu'a ça de toute façon).\nPour être viable en pvm, ce build requiert au "minimum" le niveau 100 (unlock 10 AP via cartes makabra/Zéorus/ ou autre armes +AP). Ceci dit il peut toujours être abordable bien avant via l'investissement en point en barda ou anneau chuchoté\nOui, ce Build se joue parfaitement bien en mono-compte.\nCe build permet d'être polyvalent en pvm. A partir de l'île Sberg, le Bi-élément en pvm devient vite "impératif" avec la montée en résistance dans 1 élément précis de chacun des membres d'une famille de monstre.\npour un total de 495 points (soit niveau 100)\nEnsuite, vienne s'ajouter:\nExpert tacleur (un must en pvp)\nPosture de défense (pour finir son tour si 2 AP restant)\ntotal de 690 point (soit niveau niveau 138)\nCe build se base avant tout sur 4 sort (une variante avec 5 est aussi possible)\nPourquoi ces sorts? Parce que ce sont ceux ayant le meilleur ratio dégâts/AP(MP/PW).\nNB: Les deux sorts feu ont tendance à être plus joués que les terre du fait que ceux ci sont tout les deux des sorts de zone.\n(une variante avec 5 sorts est aussi possible avec Roknocerok)\nComme dit plus haut, ce build est "véritablement" viable à partir du moment où le personnage débloque ses 10 pa via les armes.\nLes familier à privilégier sont le tourtobot et le tofu. Privilégiez aussi le mode 6 MP plutôt que 5 pour plus de mobilité.\nPour la Tranche 100-110 rien de mieux qu'une panoplie Meulou couplée à des item Vampyro et/ou apprenti pour plus de sagesse.\nA partir du niveau 115 vous débloquez la panoplie magmog qui à l'heure actuelle reste la panoplie "end game" des builds Terre-Feu.\nUne fois le niveau 115, le panoplie magmog, le familier de votre choix, et l'arme pa en votre possession, tournez vous vers des item +%degats all (tel que les initié ou sage ou alors les item %dgts Feu-Terre disponible sur l'île Wabbit tel que le pelage wabbit ou encore les item de la panoplie emiw\nAvec les iop rien de plus simple. AP+MP (250 point/niveau 51) sont la base. Après, investir le restant de points à égalité entre Intelligence et Force.\nIl n'est pas utile d'investir en Coups Critiques avec les stuffs cités ci dessus. Vous tournerez généralement entre 20et25.\nNe pas investir dans un deuxième AP pour atteindre le 10 AP plus rapidement, c'est un gouffre à caractéristique. De même pour le Barda, à éviter.\nLa nation de Brakmar fournit (quand il pense à activer ces bonus) 15à 30% dégâts Feu et Terre.\nDiscussion sur cet article : 243 messages (Dernier message : 20/02/2016 - 19:42:43)\nPublié le 08 mars 2012 à 23:09\nDernière mise à jour le 8 mars 2012 à 23h09


Portraits de correspondants : Françoise et Dominique Denain à Bellencombre, les reportages en duo | Le Réveil de Neufchâtel\nDominique et Françoise Denain sont correspondants locaux de presse pour le Réveil de Neufchâtel depuis une dizaine d'années. Rencontre les yeux et les oreilles du journal.\nPar Stéphanie Petit Publié le 13 Jan 20 à 9:16\nDominique et Françoise sont arrivés en octobre 2010. (©Le Réveil de Neufchâtel)\nBellencombre, Saint-Hellier, Pommeréval (Seine-Maritime) entre autres. Vous avez certainement déjà croisé Françoise ou Dominique, toujours à l’écoute et passionnés par l’actualité locale et ses acteurs. Une histoire qui les lie depuis près de dix ans au Réveil.\nComment avez-vous rejoint l’équipe du Réveil ?\nFrançoise : C’est moi qui ai trouvé l’annonce. Mes parents étaient abonnés au Réveil. Dominique allait partir à la retraite et c’était compliqué pour lui. Cela lui permettait de continuer à écrire et à s’occuper. Je lui ai fait la proposition. La motivation n’était pas pécuniaire. Il semblait intéressant de travailler pour un journal dans une région où on ne connaissait pas grand monde.\nQuand avez-vous commencé à travailler pour le Réveil ?\nDominique : En octobre 2010. Je suis né, j’ai vécu et travaillé à Paris. Quand j’ai pris ma retraite, j’ai tout bazardé pour rejoindre Françoise, dans la région depuis 2007 pour raisons personnelles. Je n’avais plus d’environnement amical. Le 30 juin 2010, j’ai fait une croix sur Paris. Être correspondant m’a permis de rencontrer des gens, c’est un vrai tissu social.\nFrançoise : J’ai travaillé dans la région mais je n’avais pas d’attache. Pour moi aussi être correspondante m’a permis de faire un cercle de connaissances. Certains sont même devenus des amis. J’ai aussi pu découvrir des activités au travers des reportages.\nDominique : Cela a été aussi mon cas. J’ai découvert le Val Ygot, dont je suis trésorier depuis 2012.\nQu’est ce qui est plaisant dans la fonction de correspondant ?\nDominique : Pour moi, c’est le contact humain.\nFrançoise : C’est varié. Nous sommes amenés à bouger. Ce qui nous donne un rythme de travail.\nQuelle rencontre ou reportage vous a marqué au cours de dix dernières années ?\nFrançoise : J’ai fait un reportage sur le château de la petite Heuse aux Grandes-Ventes. J’y ai rencontré deux amies, l’une d’entre elles habite à 400 mètres de chez moi. Et nous ne nous connaissions pas.\nDominique : J’ai beaucoup aimé suivre le chantier des éoliennes à Ardouval, des fondations jusqu’à l’inauguration. Ce jour-là, j’avais pu monter en haut de l’éolienne et faire des photos.\nCopié ! https://actu.fr/normandie/bellencombre_76070/portraits-correspondants-francoise-dominique-denain-bellencombre-reportages-duo_30636202.html


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