Enseignement professionnel, une solution au chômage ? - CENTRE FOR DEVELOPMENT AND ENTERPRISES GREAT LAKES\nEnseignement professionnel, une solution au chômage ?\nMai 25, 2019 | Général\nNotre collègue Charmant Iradukunda insiste sur la création des universités pour les lauréats de l’enseignement des métiers. Le cas échéant, ils pourront contribuer à la création d’emplois et par ricochet à la création des richesses.\nLa jeunesse burundaise constitue la majorité de la population. Néanmoins, elle fait face à un chômage qui va decrescendo d’année en année. Il est trois fois plus élevé que les personnes âgées de 35 ans et plus. En 2016, ce taux était estimé à 60% contre 65% en 2017.\nPour faire face à cet état de chômage chez les jeunes, le gouvernement du Burundi s’est engagé à multiplier en peu partout dans le pays des centres de formation professionnelle en misant sur une éducation en adéquation avec l’emploi.\nCe n’est pas suffisant…\nSi multiplier ces centres est une bonne chose, les doter du personnel qualifié ainsi que la mise à leur disposition de tous les équipements nécessaires serait salvateur. Mais, donner la chance aux lauréats de ces centres d’enseignement des métiers de suivre la formation universitaire serait mieux.FD’autres pistes sont aussi à explorer. Selon Alexis Bizimungu, professeur à la Faculté d’Economie de l’Université du Burundi, il faut mettre en œuvre des réformes institutionnelles visant l’insertion, l’employabilité et l’accompagnement de ces jeunes à la fin de leur formation. La professionnalisation des métiers est très indispensable.\nLa mise en place des textes de lois qui protègeant la profession ferait que seul ceux qui ont une formation reconnue par l’Etat soient les seuls à exercer des métiers. L’adaptation de la qualité de la formation de ces centres aux attentes des entreprises devrait être aussi mise en avant, conclue-t-il.\nLa formation supérieure, une nécessaire\nNul n’ignore que la formation professionnelle est une solution aux besoins réels de l’économie. Mais si les lauréats des centres doivent répondre aux attentes et besoins de la société dans la vie active après leur formation, ils ne devraient pas être privés d’une formation supérieure car vu le manque d’opportunités de travail dans le secteur tant public que privé, vu aussi la compétitivité existant déjà sur le marché de travail, il est fort probable qu’après cette formation, ils se retrouvent au chômage.\nIl est donc nécessaire que le ministère de l’Education, de la Formation Technique et Professionnelle leur accorde l’accès à la passation de l’examen d’Etat afin d’avoir droit à une formation supérieure au Burundi ou ailleurs.\nCela permettrait à ces jeunes d’améliorer leurs compétences au niveau national, régional et international. Pour ce, notamment les acteurs privés œuvrant dans le secteur éducatif devront saisir cette opportunité pour commencer à créer des universités professionnelles des métiers.\nAu cas contraire les horizons de ces jeunes resteront limités.


avril 2008 - Pharmaciens Sans Frontière Rhône-alpes\nPharmaciens Sans Frontière Rhône-alpes > 2008 > avril\nPremier programme socio-sanitaire intégré dans 15 villages du departement de OULA au Burkina-Faso\nAnnée 2001 : Depot d’un dossier au ministere des affaires etrangeres francais\nAnnée 2002-03-04 : Execution du programme\nMinistere des affaires etrangeres francais\nAMMIE (appui moral materiel intellectuel a l’enfant )\nATDO ( association des tradipraticiens de OULA )\nHistorique de PSF – Deux Savoie et Isère\nCRÉATION DE PSF SAVOIE PUIS PSF DEUX SAVOIE ET ISERE\nPSF Savoie s’est constitué en Antenne Départementale en novembre 1987, fédérée à l’association PSF NATIONAL, elle-même créée en 1985.\nEn 1994, PSF Savoie devient Association Départementale, loi 1901 elle-même intégrée au sein de PSF International qui regroupe plusieurs pays européens.\nEn 2003 pour une meilleure synergie, PSF SAVOIE fusionne avec la Haute-Savoie et l’Isère et devient PSF DEUX SAVOIE ET ISERE.\nAnnée 93-94 : Mise en place et livraison aux réfugiés bosniaques, d’un bus dentaire, en coaction avec Solidarité Afrique de Décines (logistique).\nAnnée 94 : Participation, par l’achat de MEDESS, à la création de la pharmacie Daniel Cathiard de l’association ECLA à Ouahigouya (Burkina Faso).\n02/04/2008 Odette Pion0\nPartenariat PSF Rhone-Alpes et Basil Strategies\nCe site web est un blog que l’association PSF Deux Savoie et l’Isère a « gagné » dans le cadre d’un événement qui a honoré des pharmaciens de France ayant fait des choses exceptionnelles. C’est ainsi que Basil Strategies a offert aux dirigeants de l’association, un site « blog », facile à mettre à jour et, par définition, interactif.


10 choses à savoir sur le piercing au nombril - My Body Art\nResté l’un des piercings les plus appréciés depuis son apogée dans les années 2000, le piercing au nombril revient sur le devant de la scène depuis quelques temps grâce à vous, qui avez choisi ce beau piercing.\nLa tendance du moment : l’anneau au nombril 😉\nVous hésitez encore à vous lancer ? Voici 10 choses à savoir sur le piercing au nombril :\n1° D’où vient le piercing au nombril ?\n2° Pourquoi se faire percer le nombril ?\n3° Est-ce que le piercing au nombril fait mal ?\n4° Est-ce que tout le monde peut se faire percer le nombril ?\n5° Les différents piercings au nombril réalisables\n6° Quels soins faire après un piercing au nombril ?\n7° Combien de temps dure la cicatrisation du piercing au nombril ?\n8° Comment changer mon bijou ?\n9° A quelle période est-il préférable de se faire percer le nombril ?\n10° Quel est le prix d’un piercing au nombril ?\nIl existe peu de traces du piercing au nombril dans l’Histoire. Cependant, de nombreux ornements de nombril ont été retrouvés, auparavant utilisés pour des rites ou simplement par esthétisme.\nC’est à la fin des années 90 et au début des années 2000 que ce piercing c’est vraiment démocratisé.\nPremier coup de projecteur sur ce piercing avec la top model Christy Turlington, qui portait un piercing au nombril lors d’un défilé à Londres en 1993. Cette apparition sort ce piercing du milieu underground dans lequel il se trouvait encore.\nPar la suite, d’autres personnalités ont dévoilé leur piercing. Merci notamment à Madonna, Beyonce, Janet Jackson et bien sûr, Britney Spears pour avoir montré au grand jour la beauté de ce piercing ♡\nLes raisons de se faire percer le nombril ? N’ayons pas peur de nous répéter : simplement parce que c’est beau !\nVoici d’autres petites raisons : l’estime de soi, la confiance en soi, la satisfaction personnelle, et bien d’autres ! A vous de nous confier vos raisons 😉\nSans compter les atouts de ce piercing, qui peut autant être chic que sexy, et qui ne se dévoile que si vous le souhaitez !\nComme pour les autres piercings, la douleur dépend de chacun. Nous ne sommes pas tous faits pareil et n’avons pas tous la même sensibilité.\nIl y a des moments plus agréables, mais rassurez-vous, l’acte est très rapide !\nDe plus, à MBA – My Body Art, nous perçons avec la technique Freehand, c’est-à-dire sans pince, ce qui diminue considérablement la douleur !\nNotre conseil : plus vous serez détendu(e) et plus vous respirerez profondément, moins vous sentirez l’aiguille passer.\nMalheureusement non. Le nombril est une partie du corps très spécifique à chaque personne : certaines morphologies ne peuvent pas accueillir le piercing au nombril, au risque de faire un rejet. Il vaudra alors mieux opter pour un autre piercing.\nCependant, il existe des alternatives ! Vous pouvez passer en boutique afin d’en discuter avec nos équipes professionnelles qui sauront vous conseiller et trouver la meilleure solution selon votre morphologie.\nPiercing au nombril avec banane strass gamme excellence, bijou disponible dès la pose à MBA - My Body Art\nVoici quelques uns des piercings au nombril réalisables, pour s’adapter à un maximum de morphologies !\nLe piercing au nombril classique\nIl est aussi possible de mettre un anneau à votre piercing au nombril (uniquement en bijou de changement, une fois que votre piercing est complètement cicatrisé) !\nLe piercing au nombril inversé\nLe piercing au nombril en symétrie\nComme pour la douleur, la cicatrisation du piercing au nombril est variable selon chacun, mais est toujours relativement longue en raison de sa zone, souvent sous tensions. Il faut compter 6 mois minimum de cicatrisation.\nInterdiction de changer de bijou tant que votre piercing n’est pas cicatrisé ! Le faire entraînerait des complications et vous pourriez vous blesser en changeant le bijou étant donné que le canal n’est pas cicatrisé. De plus, c’est le meilleur moyen d’y faire entrer des bactéries.\nEn cas de doutes ou de problème, vous pouvez vous rendre directement en shop pour en discuter !\nNos équipes sont là pour vous confirmer, au moment venu, que votre piercing est bien cicatrisé. La vérification est gratuite, n’hésitez pas à venir nous rendre visite. Vous aurez également tous les conseils concernant la taille du bijou que vous pourrez mettre.\nAprès cicatrisation, vous pourrez soit changer seul(e) votre bijou, soit nous faire réaliser votre changement : ces derniers sont réalisés par nos pierceurs, et ils sont gratuits si vous achetez votre bijou chez nous 😉\nVoici quelques bijoux dispos en shop :\nnavels, bijoux pour piercing au nombril, disponibles à MBA - My Body Art\nLa période que vous préférerez sera la bonne mais comme pour tout piercing, il faut bien prendre en compte les consignes à respecter à la suite de votre piercing.\nA savoir : éviter les frottements ou les vêtements qui viendraient appuyer sur le piercing (pas de tailles hautes pendant quelques temps), pas d’endroit humide, ni de baignade en eau stagnante (bain, mer, lac, sauna, etc.) le mois suivant votre piercing.\nGrossesses : Si vous compter avoir un enfant dans les mois à venir, on vous conseille d’attendre pour faire un piercing, car vous devrez retirer celui-ci.\nChez MBA – My Body Art, il faut compter à partir de 55€ pour un piercing au nombril, selon le bijou de pose que vous choisirez. Vous pouvez choisir parmi nos bijoux de pose couleur classique (argenté) ou doré, avec strass ou sans strass ! Ils sont toujours en titane pour permettre une cicatrisation optimale.\nSi vous souhaitez faire un piercing au nombril vous pouvez passer sans RDV dans un de nos shops MBA – My Body Art nous perçons par ordre d’arrivée. Pensez à prendre une pièce d’identité. Vous pouvez également prendre RDV par téléphone au 04.28.29.27.77 (en réglant un acompte de 35€ en ligne).\nEnfin, pour toute autres questions ou pour un devis, c’est par ici!\nnavel nombril piercing


Accueil / Homme>Vêtements>Sous-vêtements>Boxers>Boxer HOM Sport Waves\nLe boxer HOM Sport Waves est un sous-vêtement underwear pour Homme. Une touche de peps et de couleur pour des sous-vêtements masculins adaptés au sport. Issu de la ligne Sport Waves, ce shorty homme a été pensé pour les sportifs et vous accompagnera dans vos plus belles performances avec style.\nCompositions 60% Polyester, 29% Polyamides, 11% Élasthanne\nLe boxer Homme Sport Wave de la marque de sous-vêtements français HOM est un shorty pour homme répondant aux exigances de la pratique du sport en polyamide élasthanne dans des couleurs chinées et aux détails fluo dans un esprit sportswear. Ce boxer court bénéfice d'une forme shorty, légèrement plus courte sur la jambe que le boxer classique. Apprécié pour son look moderne et dynamique, le shorty est à la fois l'indispensable des amoureux de la mode, et des sportifs qui recherchent une forme boxer mais aussi la liberté de mouvement. La matière microfibre en polyamide élasthanne prodigue à ce shorty pour homme des qualités de résistance aux frottements, un séchage très rapide, un toucher particulièrement doux. Les couleurs sont également bien fixées à la matière en polyamide et ne s'altèrent pas au lavage. La ceinture élastiquée de ce boxer court est ultra douce au toucher, agréable à porter sur la peau et ne comprime pas. En gris métalisé et logotypée HOM de manière subtile en fluo, elle reprend les codes du sportswear. Pour un meilleur maintien sur la cuisse de ce shorty pour homme, un voile a été cousu à l'intérieur du bas de jambe. Le shorty pour homme Sport Waves s'adapte à tous les exercices physiques. La ligne Sport Waves est une ligne de sous-vêtements masculins adaptés pour le sport qui apporte une touche de peps et de couleur. Chez Vente-Net, c'est simple, c'est notre coup de coeur underwear.\nLe Boxer HOM Boxerlines 2 est un sous-vêtement underwear Homme idéal à porter au quotidien. Vendu en lot de 3...


Rupert - Chinook Aventure\nÀ propos de Rupert\nIl se surnomme « Prince Rupert » pour évoquer son immigration au Québec depuis la Grande-Bretagne, et parce que c’est une ville canadienne! Grand, déterminé mais tranquille d’esprit, il spécialise dans le trail-running et le vélo de route. Si ces activités vous intéressent, il se fera un plaisir de partager ses passions avec vous.\nPour lui, le voyage et la vie en générale c’est une grosse aventure. Il cherche quelque chose spéciale partout où il va. Il essaye de faire des choses à sa façon, c’est-à-dire différemment! il saura par exemple vous surprendre lorsqu’il vous racontera ses voyages en scooter 50cc à travers le Sahara tunisien ou le continent Américain (de l’Alaska jusqu’à la Terre de Feu).\nD’être en plein vent sur un grand sommet dégagé, ça c’est vraiment sa place! Papa de 3 jeunes enfants, il a aussi fait des voyages en famille: Édimbourg (Ecosse) jusqu’à Beijing (Chine) en vélo avec sa fille et sa femme.\nQuelle sera sa prochaine aventure? Ah c’est un secret! Avec vous peut-être ?\nSa devise de vie : Any challenge, ANYWHERE!\n1.Quelle est ta spécialité culinaire qui saura faire le plein d’énergie de ta troupe après une grosse journée à explorer?\nUne grosse salade de boulgour avec des avocats, fraises/pommes, épinards frais, des noix, des crevettes de Matane et possiblement du fromage! Un gros plaisir, quoi!\nLe Kurdistan. Entre les repas de viande délicieuses, yahourts et Raki, ses innombrables thés, et aussi les hammams… tous ces symboles de l’Orient ! Mais surtout, oh oui surtout : les montagnes!\nMon mini réchaud!\n4.Quelle est ta définition de l’aventure?\nC’est une combinaison de liberté, vent, et de nouveaux horizons. Encore et encore !\n5.Es-tu plus forêt de feuillus, forêt de conifères, forêt tropicale, désert, Taïga ou Toundra?\nJe suis plus toundra je crois. Mais peu importe le lieu en fait, je suis surtout heureux sur un sommet balayé par les vents et avec une vue sans limites. En fait c’est surtout loin de la forêt, et proche du ciel!


Home » concasseurs à machoires pour faire des échantillons Congo\nCongo Congo, République démocratique Cook (Îles) Corée du Sud Nous vous proposons des concasseurs à machoires à double effet : il vous permet de rendre les matérieux les plus durs et les plus tenaces comme vous le souhaitez. Propriétés Le MC 140 Z est un concasseur à fort rendement, conçu pour traiter des blocs volumineux\nLes premiers concasseurs à mâchoires ont 200 ans. Le EPI !) cassant à longueur de journées ces blocs pour les réduire en gravillons d’une taille inférieure à 30-40 mm. Au moment de réaliser ce dossier, ayons une pensée et doivent faire l’objet d’une vérification périodique.\nLe broyeur à tout faire, l'appareil robuste et polyvalent pour le traitement d'échantillons cassants Appareil idéal pour les échantillons dans le secteur minier, la sidérurgie, les industries du verre et des céramiques, les concasseurs à mâchoires FRITSCH revêtement polymère intégral. Les mâchoires de


ESPACE Présentation des membres\nSe présenter est un plus pour tout le monde. Ici aussi, la rubrique avis/Suggestions.\nLes Fondateurs, Administrateurs et Modérateurs, Avis - Suggestions ABSENCE non prog...\nLes anniversaires, nous pourrons vous les souhaiter si vous indiquez votre date de naissance dans Profil : cliquer sur le bouton Profil dans la barre de navigation sous le nom du forum. Tous les événements qui jalonnent votre vie : vous pouvez nous en faire part. Nous serons heureux de les partager avec vous.\nVen 28 Déc - 17:41\nConseils littérature, TV, musique, Cinéma, Expositions, etc...\nParlez-nous de vos livres, émissions, documentaires, préférés sur les animaux et la nature. Livrez-nous votre opinion à leur sujet. Bien sûr, vous pouvez aussi parler d'autres émissions ... films ... etc! Idem pour les bouquins ... et les documentaires...\nA la foire de Pa...\nDim 10 Mai - 12:16


Livraison fleurs à Villemus - livraison gratuite | Vente en ligne Fleur et Fleurs\nAccueil > Livraisons > Provence-Alpes-Côte d'Azur > Alpes-de-Haute-Provence > Villemus\nLivraison de fleurs à Villemus : Livraison gratuite\nFleuriste à Villemus 04110\nComme certains événements n’attendent pas, nous avons tous à un moment, besoin d’un fleuriste près de chez soi. C’est pourquoi chez Fleur et Fleurs, à Villemus nos roses sont disponibles toute la semaine, et même le dimanche.\nFleur et fleurs vient à vous pour une offre de qualité et dans les meilleurs délais. Nos artisans vous livrent gratuitement à Villemus. Et que ce soit au cimetière ou ailleurs, nos équipes livrent vos fleurs le jour même.\nEn tant que spécialiste de la livraison de fleurs, nous nous engageons à sélectionner le talent le plus qualifié de Villemus pour vous faire bénéficier de la livraison gratuite sur le lieu de votre choix. Pour retrouver nos créations florales de qualité, il suffit de commander ou acheter en ligne sur notre site fleuretfleurs. Profitez dès aujourd’hui de nos services en un clic !\nEt pour vous offrir le meilleur savoir-faire, nos équipes de passionnées mettent autant de soin dans le choix des spécialistes de Villemus que dans notre service. C’est pourquoi nous sommes à votre écoute tous les jours de 9 heures à 18 heures, pour répondre personnellement à toutes vos questions concernant votre livraison de fleurs.


transatlantic21: Le comité\nLe projet, à but non lucratif, exige une planification considérable et donc beaucoup de travail, notamment bénévole. Le défi qu’il lance et les risques qui lui sont liés requièrent un grand idéalisme de la part de ses initiateurs. Voici les personnes engagées au premier plan dans ce challenge:\nMark Wüst, constructeur de bateaux et co-directeur de MW-Line SA\nGuidé depuis un certain temps par l’idée d’une traversée de l’Atlantique, Mark Wüst a accepté la commande du "sun21". Il en sera le capitaine pour la partie majeure du trajet, de Bâle à Miami.\n"Mon but est de mener le concept de bateau solaire de la phase expérimentale à son exploitation commerciale. transatlantic21 marquera une étape décisive dans ce développement."\nMark Wüst sur le "sun21" (portrait en qualité d'impression)\nMichel Thonney, skipper\nFort de son expérience en voile de haute mer, Michel Thonney sera le skipper responsable de la navigation (bateau et équipage) de cette route transatlantique. Il est l’auteur d’un livre qui raconte ses aventures. Il dirigera le bateau sur la dernière partie du parcours, de Miami à New York.\n"Chaque année, je passe de nombreuses semaines sur mon voilier dans la mer des Caraïbes, en espérant des vents favorables. Le "sun21" me dirigera plutôt vers les rayons du soleil et la mer calme... quel bonheur!"\nDéclaration à l'occasion du baptême du "sun21" (16.10.2006) 41 KB\nMichel Thonney sur le "sun21" (portrait en qualité d'impression)\nDr. med. Martin Vosseler, Dr. méd., promoteur de l’énergie solaire et fondateur du Forum international sur l’énergie sun21\nLe Dr. Vosseler est membre fondateur de plusieurs grands projets pour l’environnement à Bâle. Il est le président du comité et sera membre de l’équipage de Bâle à New York.\n"Le soleil et la mer — l’énergie solaire est la recette du futur..."\nMartin Vosseler sur le "sun21" (portrait en qualité d'impression)\nDr. phil. Beat von Scarpatetti, Dr. phil., professeur à l’Université de St-Gall, président du Club des sans-voiture\nLe Dr. von Scarpatetti, cofondateur de transatlantic21, est historien et le fondateur de divers projets écologiques. Il a eu très tôt l’idée d’un trajet maritime transcontinental respectueux de l’environnement en alternative à la voie aérienne, trop polluante. Il s’occupe des aspects culturels du projet et sera membre de l’équipage de Bâle à New York.\n"Traverser les océans grâce aux forces de la nature, sans porter atteinte à la survie de la planète, quel beau défi."\nBeat von Scarpatetti sur le "sun21" (portrait en qualité d'impression)\nDavid Senn, professeur de zoologie et de biologie maritime à l'Université de Bâle\nLe Professeur Senn est directeur d'un programme de recherche océanographique. Il fera une analyse du plancton maritime à travers l’Atlantique et sera membre de l’équipage de Séville à Miami.\n"Il s’agira d’étudier les formes de vie sur- et sous-marines, l’interaction entre l’hydrosphère et l’atmosphère: Je m’attends à rencontrer un plancton fort diversifié dans les couches éclairées de l’océan, des baleines, des poissons volants... Sur le "sun21", je pourrai m’adonner entièrement à ma passion, la biologie marine."\nDavid Senn sur le "sun21" (portrait en qualité d'impression)\nL'organisation, la planification et la direction du projet\nDaniela Schlettwein, PD Dr. méd., épidémiologiste\nCofondatrice de transatlantic21 et membre du comité, Mme Schlettwein gère le réseau de financement du projet ainsi que les contacts avec diverses organisations, notamment celles situées dans les villes et pays où s’arrêtera le bateau solaire.\n"Quoi de plus beau que de porter notre credo pour l’énergie solaire à travers le monde?"\nUrs Wehrli, biologiste, consultant PR diplômé\nUrs Wehrli a initié le projet en collaboration avec Mark Wüst. Diplômé fédéral en relations publiques, il assure la communication et la coordination du projet.\n"Mon objectif est de sensibiliser un public toujours plus large au thème de l’énergie solaire et des énergies renouvelables."


Papier peint M Captain America Team Marvel intisse 160X115 CM | Poster sur Bébégavroche\nThème : Captain America Team.\nSuperbe papier peint photo M numérique de haute qualité.\nPapier Peint Géant Captain America Team - Qualité numérique - Thème : Captain America Team\nLicence Marvel : Captain America Team\nDonnez à votre enfant la décoration murale dont il rêve avec ce papier peint géant Captain America Team.\nFaites plaisir à votre petit grâce au papier peitn géant Captain America Team !\nPapier peint M Captain America Team - Caractéristiques:\nPapier peint M Captain America Team - Dimensions :\nPapier peint M Captain America Team - Technique et conseil de pose :\nDe plus le papier peint M Avengers est emballé dans un tube robuste qui comprend les instructions et de la colle suffisante pour l'application ! Vous n'avez donc pas besoin d'acheter de la colle !\nFaites des économies grâce au papier peint Marvel 100% déco, il permet également de recouvrir un mur en quelques minutes. Le papier peint photo géant Avengers se pose en seulement 1 étape ! Découvrez vite ce superbe papier peint photo Captain America !\nFaites un tour sur le site pour découvrir nos autres posters Marvel Avengers !


Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes | Protocol (Translated to French)\nGénération d'un nouveau vaccin dendritiquees cellules utilisant mélanome et de cancer épidermoïde cellules souches…\nMacrophages dérivés de monocytes DC (RCSCND) peut détecter de petites quantités de molécules associées à risque et sont donc facilement apprêté. Nous fournissons un protocole détaillé pour l’isolement des RCSCND de sang et de tumeurs et de leur mise en route avec les complexes immuns tout en soulignant des précautions qui doivent être menées afin d’éviter leur activation prématurée.\nLes cellules dendritiques (DC) sont des populations de cellules hétérogènes qui diffèrent dans leur membrane cellulaire marqueurs, migratoires et leur distribution, ainsi que dans leur présentation de l’antigène et les capacités d’activation des lymphocytes T. Puisque les vaccins la plupart des modèles de tumeurs expérimentales nécessitent des millions de DC, ils sont largement isolés de la moelle osseuse ou de la rate. Cependant, ces DC diffèrent sensiblement du sang et tumeur DC dans leurs réponses à complexes immuns (IC) et probablement d’autres récepteurs couplés Syk lectine. Important, étant donné la sensibilité de la DC aux molécules associées à risque, la présence d’endotoxines ou anticorps récepteurs activation crosslink dans l’un de l’isoler les étapes pourrait entraîner l’amorçage du DC et ainsi influer sur les paramètres, ou du moins la dosage, pour les activer. Par conséquent, nous décrivons ici un protocole détaillé pour isoler le RCSCND de sang et les tumeurs tout en évitant leur activation prématurée. En outre, un protocole est fourni pour l’activation de RCSCND avec tumeur IC et leurs analyses subséquentes.\nDepuis leur découverte, les cellules dendritiques (DC) ont été au centre de recherches approfondies en raison de leur capacité unique à biaiser la différenciation des cellules de T1. Depuis les dernières décennies, un effort de recherche approfondie a cherché à définir les divers sous-ensembles de DC et de leur fonction au cours de la progression tumorale et immunité 2. Contrôleurs de domaine sont composés de populations de cellules hétérogènes qui ne diffèrent les uns des autres sur leurs récepteurs de reconnaissance de motifs, distribution tissulaire, et migrateurs et antigène présentation fonctionnalités3,4,5. Par rapport aux autres sous-ensembles de DC, DC macrophages dérivés de monocytes (RCSCND) sont beaucoup plus abondant dans les tumeurs et peut être facilement généré de circulation ou tumeur-infiltrant monocytes,6,,7. Par conséquent, plusieurs essais cliniques, qui cherchent à tirer profit de leur prévalence relative reposent sur manipulation in vivo et ex vivo de RCSCND autologue pour obtenir des cellules T immunitaires 8,9.\nDe même, vaccination DC basé sur des modèles expérimentaux de tumeur nécessite des injections séries 2-3, 5-7 jours d’intervalle, de 1-2 x 106 activé DC pulsé avec des antigènes de la tumeur. Par conséquent, pour atteindre ce grand nombre de DC, la plupart des études de souris ont principalement utilisé RCSCND pendant 7 à 9 jours (IL-4 n’est pas nécessaire dans le cadre de la souris) d’échantillons de précurseurs de la moelle osseuse (BM) dans le GM-CSF10,11. Néanmoins, compte tenu de cette knockout de GM-CSF souris ont globalement normal DC compartiment 12,13et les populations mixtes issues de cette culture,14 la pertinence physiologique de ces DC a été remise en question.\nAlternativement, DC peut être systématiquement isolé des cellules de rate. Toutefois, DC ne comprendre qu’environ 0,3 à 0,8 % des cellules de la rate total (soit environ 7 x 105 DC/rate) et de ces cellules, seulement CD103+ DC et RCSCND peuvent migrer vers les organes lymphoïdes. Puisque MoDCs représentent environ 10 à 15 % des splénique DC populations15,16, la plupart des protocoles d’isolement donnent environ 1 x 105 RCSCND par rate. Extension de RCSCND est possible en injectant des cellules transfectées B16 qui sécrètent le GM-CSF, résultant en une augmentation de 100 fois dans la rate RCSCND17. Cependant, l’utilisation de RCSCND pour le développement de vaccins DC est limitée étant donné que cette procédure ne peut se faire chez l’homme et obtenus RCSCND sont déjà fortement activés.\nEn plus d’obtenir un nombre suffisant de DC, un autre défi pour le développement de vaccins DC efficaces contre les cellules cancéreuses autologue implique l’absence de signaux de danger suffisant dans le cadre de la tumeur pour activer complètement DC. Induction de signaux de costimulation est habituellement obtenue grâce à l’activation des récepteurs de reconnaissance de motifs (PRR), ou lectine de type c signalisation voies18,19,20,21. Une autre approche pour l’activation de DC exploite leur capacité à relever les antigènes grâce à des interactions avec des récepteurs Fcγ de surface (FcγR). En effet, un certain nombre de manuscrits importants ont montré que l’injection de RCSCND de précurseurs de BM activé avec la tumeur-IgG IC peut empêcher la croissance de la tumeur dans paramètres prophylactiques et peut conduire à l’éradication des tumeurs établies22,23 .\nDans deux articles récents, Carmi et coll. a découvert que, contrairement aux BMDC et rate DC, RCSCND du sang et les tumeurs ne peut répondre à IgG IC sans stimuli additionnels. Cela s’est avéré pour être due à la présence de haut niveau intracellulaire de tyrosines phosphatases réglementer FcγR signalisation24,25. En définissant un point de contrôle critique dans DC, ce travail a fourni un aperçu important sur les exigences relatives à la vaccination de base DC réussie. L’exigence pour des stimuli additionnels permettre FcγR signalisation et signalisation sans doute d’autres récepteurs de lectine utilisant une cascade de phosphorylation similaires, donc souligne la nécessité pour éviter les désamorçages DC pendant leur isolement.\nPar conséquent, le présent protocole décrit l’isolement des RCSCND de sang et les tumeurs, qui diffèrent nettement de la BM et de la rate DC, et met en évidence les précautions à envisager au cours du processus.\nLes protocoles ci-dessous se référer à l’isolement des souris RCSCND, mais les principes généraux peuvent s’appliquer à d’autres cellules de sous-ensembles de DC, aussi bien. 12 - souris C57Bl/6j 16-semaines ont été maintenus dans une Association américaine pour l’animalerie Accreditation of Laboratory Animal Care accrédité. Tous les protocoles ont été approuvés par l’Université de Stanford et Tel-Aviv University Institutional Animal Care et Comité d’urbanisme.\n1. isolement de la tumeur associée dérivée DC\nDans une hotte à flux laminaire, enlever des tumeurs chez des souris de CO2 euthanasiés et placer des tumeurs dans RPMI milieu sans sérum fœtal (SVF).\nRemarque : Il est fortement recommandé de se raser les souris et les pulvériser avec l’éthanol à 70 % avant d’enlever les tumeurs, afin de minimiser la contamination potentielle de la fourrure. Veillez à ce que la tumeur ne dépasse pas 25-40 mm2 , étant donné que les tumeurs de plus grandes ont moins DC qui ont tendance à être fragiles et sujettes à subir la mort cellulaire. Si un plus grand nombre de DC est nécessaires, chaque souris peuvent être injectés avec des cellules de tumeurs à plusieurs endroits.\nSous une hotte laminaire stérile, hacher les tumeurs à l’aide de ciseaux de chirurgie en petits morceaux (environ 1 x 1 mm2).\nAjouter tous les fragments de la tumeur de souris dans un 30 mL fond plat tube stérile avec agitation magnétique bars, qui contient 5 mL de Hank équilibré de solution saline (HBSS), 2 mg/mL collagénase IV et 0,01 mg/mL DNase I.\nATTENTION : Les cellules myéloïdes produisent de l’énergie par le biais de glycosylation, même sous l’état d’équilibre. Par conséquent, seuls supports d’utilisation qui contient de glucose (p. ex. HBSS RPMI et DMEM), comme la famine de glucose pour aussi peu que 10-15 min entraînera la mort cellulaire et l’apoptose dans les 24 h. utilisation uniquement une collagénase endotoxines faibles IV, comme la collagénase est produit par Gram positif bactéries (Clostridium histolyticum).\nAgiter à environ 200-400 tr/min dans un incubateur à 37 oC avec un agitateur magnétique pendant 20-30 min.\nAjouter 5 mL de support complet et remettre en suspension vigoureusement.\nFiltrer les cellules à travers un tamis de cellule de 70 µm. Centrifuger à 4 oC 400 rcf pendant 5-10 min granuler les cellules.\nATTENTION : Ne pas tenter d’isoler les cellules directement après digestion enzymatique, comme certaines tumeurs sont nécrosées et contiennent des quantités relativement importantes de débris cellulaires ou de la matrice extracellulaire. Appliquer des cellules sur milieu de gradient de densité 15 % pour obtenir uniquement les cellules.\nSuspendre 9 mL de milieu de gradient de densité avec 1 mL de PBS de x 10 pour ajuster l’osmolalité et d’obtenir la solution-mère Percoll 100 %. Mélanger 1,5 mL de milieu gradient de densité solution avec 8,5 mL HBSS mère et mélanger vigoureusement avec culot dérivées de tumeurs. Doucement la couche 2 mL de DMEM haut gradient moyen de 15 % densité et centrifuger à 400 rcf pendant 20 min à température ambiante. Jeter le surnageant, car les cellules formeront un culot au fond du tube.\nLaver les cellules granulés deux fois par re-suspension eux dans 10 mL HBSS contenant 2 % FBS, 1 % pénicilline/streptomycine et 10 mM EDTA (isolement tampon) et centrifuger à 4 oC 400 rcf pendant 5-10 min pour les cellules de granule.\nCompter les cellules sur un hémocytomètre utilisant trypan bleu sous un microscope optique.\nRemettre en suspension des cellules de 1 x 108 isolément de 1 mL de tampon et les incuber à 4 oC avec 30 μL de CD11b+ conjugués des billes magnétiques pendant 15 min.\nATTENTION : Évitez d’utiliser des perles CD11c conjugué, car cela activera le DC et induire la mort cellulaire. Ne pas tenter de bloquer les FcγRII et FcγRIII avec des anticorps anti-CD16/32. Blocage des anticorps ligaturer FcγR et induit la phosphorylation forte des MAP kinases et amorcer le contrôleur de domaine.\nRetirez les perles non consolidés excédentaires en ajoutant 9 mL de tampon de l’isolement et les cellules de la centrifugeuse à 400 rcf pendant 5-10 min à 4oC.\nAspirer le surnageant et remettre en suspension les cellules dans 1 mL de tampon d’isolement. Appliquer les cellules sur une colonne prélavée magnétique. Laver la colonne deux fois avec 3 mL de tampon de l’isolement.\nSupprimer la colonne de l’aimant. Pipetter 6 mL de tampon d’isolement sur la colonne et débusquer les cellules marquées par magnétisme dans un tube de prélèvement stérile en poussant le piston. Cellules de centrifugeuse à 400 rcf pendant 5-10 min à 4 oC.\nRemettre en suspension les cellules à 100 μL par 1 x 107 cellules et teinture avec l’anticorps conjugué à un fluorophore suivants : Linage négative (TCRb, Siglec F, B220, CD19, FceRI et Ly6G), MHCII, Ly - 6C.\nTrier des cellules en bloquant les petites cellules, à l’aide de diffusion latérale (SSC) et avant la dispersion (FSC) et la culture en milieu complet additionné de 5 ng/mL GM-CSF. Incuber les cellules pendant 1 heure à 3 7 oC afin de permettre des macrophages à adhérer à la plaque. Ensuite, transférer le lâche et les cellules non adhérentes à une nouvelle boîte de Pétri.\nRemarque : La souris RCSCND sont définies comme CD11b+/CD11c+/MHCIISalut/Ly6Clo/int 7,26,27. Expression de Ly6C peut-être varier considérablement entre les modèles de la tumeur et dans certains modèles (par exemple LMP) MoDCs manque complètement d’expression Ly6C. Dans l’ensemble, une tumeur de3 B16F10 100 mm contient en général 5 x 104 de DC, entraînant environ 4-5 x 106 cellules total. De ces cellules, 10 à 15 % sont des cellules immunitaires et 8 à 10 % sont RCSCND. Augmenter le nombre de DC est possible par l’injection de souris présentant des tumeurs à plusieurs endroits. Seules de petites cellules SSC/FCS tri, comme les autres cellules myéloïdes peuvent exprimer des marqueurs tels que CD11c et Ly6C.\nFacultatif : Trier le monocyte infiltration tumorale sous forme de petites cellules SSC/FSC qui expriment Ly6CSalut et sont négatifs pour MHCII. Par la suite, la culture monocytes in vitro avec 50 ng/mL GM-CSF pour obtenir DC.\n2. isolement de MS macrophages dérivés de monocytes du sang périphérique\nRemarque : Puisque MoDCs matures sont relativement rares dans le sang de souris, le protocole ci-dessous se réfère à leur dérivation in vitro de monocytes triées.\nPour augmenter les niveaux de monocytes dans le sang, d’offrir une souris avec 4 % isoflurane et injecter par voie sous-cutanée (s.c.) avec 1 μg de GM-CSF dans 50 μl de PBS.\nAprès 1-2 h, sacrifier la souris à l’aide de CO2.\nATTENTION : Ne sacrifiez pas les souris par dislocation cervicale, car cela provoquerait une hémorragie interne.\nImmédiatement après l’euthanasie, la souris de pulvérisation avec l’éthanol à 70 % et enlever la peau qui recouvre le cœur à l’aide de ciseaux chirurgicaux, sous une hotte à flux laminaire stérile. Nettoyez les ciseaux avec de l’éthanol et coupez l’oreillette droite du cœur. Lentement, rincer le coeur dans le ventricule droit avec 20 mM EDTA HBSS à l’aide d’une seringue de 10 mL et une aiguille 25 G.\nRecueillir le sang avec une seringue stérile de la cavité pleurale dans un tube stérile contenant de l’héparane sulfate et EDTA. Continuer à vider le cœur jusqu'à ce que le foie et les poumons devenus rose ou les blancs.\nS’appliquent à sang sur une centrifugeuse de gradient moyen et de densité à 400 rcf à température ambiante pendant 15 minutes avec frein faible.\nMise en garde : Gradient moyen utilisation exempte d’endotoxine densité (habituellement moins de 0,12 EU / mL).\nPrélever des cellules mononucléaires dans un nouveau tube. Laver les cellules par re-suspension dans 10 mL HBSS contenant 2 % FBS, 1 % pénicilline/streptomycine et 10 mM EDTA (tampon isolation) et centrifugation puis à 4 oC 400 rcf pendant 5-10 min granuler les cellules.\nATTENTION : Utilisez uniquement les médias qui contient au moins 1 g/L de glucose.\nPour la sélection positive CD11b, remettre en suspension 1 x 108 éléments dans 1 mL de tampon d’isolement et les incuber pendant 15 min et 50 μL de billes magnétiques CD11b conjugué à 4 oC.\nPerles de l’excès de lavage en ajoutant 9 mL de tampon d’isolement et de centrifugation à 400 rcf pendant 5-10 min à 4 oC. aspirer le surnageant et remettre en suspension les cellules dans 1 mL de tampon d’isolement. Appliquer les cellules sur une colonne magnétique prélavée conformément aux instructions du fabricant.\nSupprimer la colonne de l’aimant, Pipetter 6 mL de tampon d’isolement sur la colonne et débusquer les cellules marquées par magnétisme dans un tube de prélèvement stérile en poussant le piston. Centrifuger les cellules à 400 rcf pendant 5-10 min à 4 oC. Wash la colonne deux fois avec 3 mL de tampon de l’isolement.\nRemettre en suspension les cellules à 1 x 107 cellules/100 μL isolement tampon et tache avec l’anticorps conjugué à un fluorophore suivants : 0,1 μg CD115, 0,25 μg MHCII et 0,1 μg Ly-6C/1 x 106 cellules.\nTrier les cellules de déclenchement sur la diffusion de petit côté (SSC) et cellules de petits nuages de points avant (FSC).\nRemarque : Les monocytes inflammatoires de souris sont généralement définis comme CD115+/MHCIIlo/neg/Ly6CSalutet patrouillant dans les monocytes sont définies comme CD115+/MHCII de /Ly6Clo/negneg 4,5. Dans les cas où aucune séparation entre les deux sous-ensembles n’est nécessaire, total SSClo/FCSlo/CD115+/lo cellules MHCII peuvent être triées. Les naïfs et les porteurs de tumeur souris contiennent environ 5-8 x 104 RCSCND par 1 mL de sang et 4-5 x 105 RCSCND qui suit l’injection de GM-CSF. D'entre eux, environ 70 % sont des monocytes inflammatoires et 30 % sont alors qu’ils patrouillaient monocytes.\nPlaque des cellules à une concentration de 1 x 106 cellules/mL dans un média complet additionné de 20 ng/mL GM-CSF. Après 1 jour, transférer les cellules non adhérentes et faiblement adhérentes à une nouvelle plaque et de la culture pour une période supplémentaire de 4-5 jours.\nATTENTION : Médias DC ne devraient pas être complétés par pyruvate.\n3. préparation des Complexes immuns tumeur-IgG\nCellules tumorales de la culture dans le flacon de culture de2 75 cm à la confluence de 70 % dans les médias DMEM complets.\nAjouter 2 mL de 0,25 % de trypsine/EDTA pour détacher des cellules de la morphologie des cellules culture fiole et moniteur sous un microscope optique pour éviter trop de trypsinisation.\nAjoutez 8 mL de milieux de culture complet (par 2 mL de trypsine) pour inhiber la digestion trypsique et centrifuger à 4 oC, 400 rcf pendant 5-10 min granuler les cellules.\nRemarque : Veillez à vérifier les cellules tumorales pour le mycoplasme à l’aide d’une trousse commerciale de PCR. Test pour la présence de bactéries Gram-négatives et endotoxines fongiques à l’aide de Limulus Amebocyte Lysate (LAL) dosage28). Sérum doit être filtré à l’aide de 0,22 μM et testé pour les 9 virus Code of Federal Regulations. En outre, tester les milieux de culture et les sérums en se laissant tomber 100-200 μL sur une gélose LB ou bouillon et la culture pendant 2 jours à 37 oC.\nLaver les cellules encore des vestiges de la trypsine et le sérum par re-leur suspension dans 10 mL de PBS et centrifuger à rcf 400 pour 5-10 min. aspirer le surnageant et répéter le lavage 2 fois plus.\nFixer les cellules à la paraformaldéhyde 1,8 % mis en mémoire tamponné pendant 10 min à température ambiante.\nLaver les cellules en les suspendant nouveau dans 10 mL de PBS et centrifuger à 4 oC 400 rcf pendant 5-10 min.\nLes surnageants obtenus par aspiration et répéter lavent deux fois plus.\nFacultatif : Pour les tests de captation de tumeur, les cellules peuvent être étiquetés par incuber pendant 5 min à 37 oC dans du PBS contenant 1 ester de succinimidyl carboxyfluorescéine μM (CFSE). CFSE est ensuite trempé avec support complet pendant 10 min dans la glace. Les cellules doivent être lavés abondamment dans du PBS contenant 2 % de sérum pour éliminer le colorant résiduel.\nRemettre en suspension les cellules dans le tampon de FACS (PBS complété avec 2 % FCS + 5 mM EDTA) et 0,5 μg/mL d’anti-CD16/32 afin de bloquer les interactions potentielles de protéines non spécifiques. Plaque en une forme de U 96 puits/plaque à une concentration de cellules de5 1 x 10 / 100 μL.\nAjouter différentes dilutions d’anticorps de tumeur-liaison allant de 5 μg - 5 ng/1 x 105 cellules. Incuber les plaques sur la glace pendant 15-20 min.\nNOTE : IgG anticorps ont été isolés dans le sérum de souris femelle âgés de 20 à 24 semaines de naïves sur des colonnes de la protéine A, décrit24.\nLaver les cellules en ajoutant 150 μL de PBS et centrifugation de la plaque à 4 oC 400 rcf pendant 5-10 min.\nJeter le surnageant et répéter le lavage deux fois. Remettre en suspension les cellules dans le tampon de FACS μL 100 contenant un anticorps secondaire conjugué à un fluorophore. Incuber les plaques sur la glace pendant 20 min.\nLaver les cellules en ajoutant 200 μL de tampon de FACS et centrifugation de la plaque à 400 rcf pendant 5-10 min. Jetez les surnageants et répéter le lavage.\nAnalyser la liaison de la tumeur par cytométrie en flux et déterminer la concentration minimale requise pour enrober les cellules.\nNOTE : Anticorps qui n’augmentent pas intensité de fluorescence moyenne (IMF) des cellules tumorales colorées par au moins cinq fois isotype contrôle ne doivent pas être utilisés dans les essais fonctionnels ultérieurs.\n4. intervention de RCSCND avec IC tumeur-IgG\nEnduire des cellules tumorales avec une concentration minimale de IgG, tel que décrit dans les sections 3.1 à 3.4.3\nUn jour avant d’activer RCSCND avec tumeur IC, remplacer des milieux de culture RCSCND, qui contient le GM-CSF. Pour ce faire, doucement aspirer les médias et laver les cellules une fois avec les milieux de culture complet pré chauffé.\nNOTE : Isolé mature associées aux tumeurs RCSCND devrait être cultivée au moins 2-3 h (ou même pendant la nuit) après un tri dans les médias sans GM-CSF et avant d’activer leur avec IC.\nPour les analyses de tumeur de captation, ajoute la tumeur marqués au CFSE IC RCSCND à un ratio de 1:5 (IC:MoDC) et incuber pendant la nuit pour les 12-16 h dans 1 mL de médias complet par 1 x 106 DC.\nPour les analyses de FACS d’expériences d’activation RCSCND, ajouter tumeur-IC au ratio de 1:1 (IC:MoDC) et incuber pendant la nuit pour les 12-16 h.\nRemarque : Il est fortement recommandé d’inclure un contrôle positif, dans lequel RCSCND sont stimulés avec 1 μg/mL de LPS ou d’autres agonistes TLR.\nAprès l’activation au jour le jour, aspirer le surnageant et lavage des cellules doucement trois fois avec un tampon d’isolation, ou 10 mM EDTA HBSS.\nPour en détacher la plaque de DC, incuber les cellules pendant 2-3 min dans 1 mL HBSS contenant 10 mM EDTA et détacher les cellules en pipettant également, vigoureux.\nCentrifuger les cellules à rcf 400 et remettre en suspension 1 x 106 DC dans 90 μL PBS additionné de 2 % FCS, 5 mM EDTA (tampon de FACS) et 0,5 μg de bloquer les anticorps. Incuber sur glace pendant 5-10 min.\nAjouter 10 μL de mélange d’anticorps aux cellules de coloration et incuber sur la glace pendant 15 min.\nAjouter 2 mL de FACS tampon aux cellules et centrifuger à 4 oC 400 rcf pendant 5-10 min.\nRemettre en suspension les cellules dans le tampon de FACS 200 μL.\nAjouter 0,5 - 1 μg/mL de DAPI 1-2 min avant l’exécution des exemples, pour exclure les cellules mortes de l’analyse. Incuber pas trop DAPI, comme RCSCND il prendra dans les 10-15 min.\nAu départ, nous avons comparé la capacité des anticorps de souris syngénique et allogéniques naïves pour lier les cellules tumorales. À cette fin, des lignées cellulaires tumorales B16F10 et LMP ont été fixées dans la paraformaldéhyde et lavées abondamment. B16F10 est une lignée de cellules de mélanome malin, qui a été isolée à l’origine de métastases pulmonaires chez les souris C57Bl/6. LMP est une cellule de tumeur du pancréas qui a été isolée chez KrasG12D / +, souris LSL-Trp53R172H / + et Pdx-1-Cre et se développe progressivement chez la souris 129F1. Pour obtenir des IC, les cellules tumorales ont été incubées pendant 20 min sur glace avec 2 μg d’IgG syngénique ou allogénique par les cellules tumorales de 1 x 105 . IgG et IgM anticorps ont été isolées de la circulation des naïfs souris âgée de 20-24 semaine sur la protéine A, puis par chromatographie d’exclusion stérique comme décrit24. Cellules étaient ensuite lavés et colorées avec les anticorps secondaire conjugué PE rat anti-souris IgG, et l’intensité de fluorescence moyenne a été analysée dans un cytomètre en flux. Comme indiqué dans la Figure 1 a, anticorps IgG de souris allogéniques C57Bl/6 lié LMP tumeur cellules ex vivo bien plus efficacement que les anticorps de souris syngénique 129S1. De même, la coloration des B16F10 fixes 129S1 IgG allogénique a plus de dix fois supérieur, comparativement à coloration avec syngénique IgG de souris C57Bl/6 naïves. Fait intéressant, souris porteuses de tumeurs B16 a échoué à produire des anticorps avec la capacité de liaison semblable à celle des souris allogéniques, même au cours de la progression de la tumeur (Figure 1 b).\nNous avons ensuite cherché à comparer la réponse de l’IC de RCSCND du sang et des tumeurs à celle des DC de la rate et de la BM. Pour isoler associées aux tumeurs RCSCND, tumeurs B16F10 sont enzymatiquement dissociés pour obtenir des suspensions de cellules du même. Les cellules immunitaires ont été enrichies à l’aide de billes magnétiques-CD45 et RCSCND étaient encore triées comme SSClo/FSClo/CD11c+/MHCII+/Ly6Clo de FACS (Figure 2 a). Il est à noter que différentes tumeurs DC peuvent avoir différents marqueurs qui définissent leur. Pour isoler RCSCND du sang, des monocytes circulants ont été enrichies de billes magnétiques conjugué CD11b et davantage triés comme SSClo/FSClo/ CD115+/MHCIIneg/lo. Cellules sont cultivées puis 1 nuit GM-CSF, et les cellules non adhérentes et faiblement adhérentes ont été transférés dans une nouvelle plaque et cultivées pour 4-5 jours supplémentaires obtenir RCSCND (Figure 2 b). Comme point de référence, que nous avons utilisé BMDC, agissant comme le « gold standard » DC pour les nombreux tests fonctionnels, ainsi que RCSCND splénique, qui reflètent un sous-ensemble de DC plus physiologique. BMDC ont été obtenus en triant les BM pro-monocytes (CD11b+/Ly6Chi/CD115hi/MHCIIneg), suivie de leur mise en culture pendant 7 jours avec le GM-CSF, décrit24. RCSCND splénique ont été isolées de la suspension de la cellule unique, obtenue en écrasant la rate à travers un tamis de cellule (pré-incubation avec la collagénase n’est pas nécessaire pour RCSCND splénique), suivie d’enrichissement avec billes magnétiques CD11b conjugué. Les cellules étaient ensuite triés comme SSClo/B220neg/NKp46neg/CD3neg/Gr1neg/F4/80neg/MHCIISalut/CD11cSalut et cultivées pendant 1 heure dans RPMI complet à 37oC à restaurer l’activité basale.\nPour étudier l’effet des IgG IC RCSCND activité, nous avons incubé les sous-ensembles DC isolés pendant la nuit avec des cellules tumorales fixe ou avec des cellules de tumeur fixe préalablement recouvertes d’IgG allogénique. Activation de BMDC ou DC splénique avec IC a entraîné une expression accrue CD86 et MHCII, contrairement à RCSCND, ou RCSCND associées à la tumeur (Figure 3 a). La capacité d’absorption teinté CFSE dérivées de tumeurs protéines, avec ou sans IgG allogénique, a été également comparée. Tel qu’observé par microscopie confocale, DC splénique a montré une capacité supérieure à internaliser les protéines dérivées de tumeurs (Figure 3 b).\nPris ensemble, ces résultats suggèrent que la tumeur DC et RCSCND répondent différemment splénique DC et BMDC à activation avec alloIgG-IC. Par conséquent, les stratégies de vaccination qui souhaite activer tumeur que DC ne peut se fonder uniquement sur les modèles d’activation de BMDC.\nFigure 1 : souris allogéniques ont naturellement des anticorps IgG tumeur-liaison dans leur circulation : A. moyenne intensité de fluorescence (MFI) des cellules tumorales LMP colorées avec les anticorps IgG isolés du sang de syngénique (129S1) et la souris de naïves allogéniques (C57Bl/6). B. moyenne intensité de fluorescence (IMF) des B16F10 des cellules tumorales incubées avec l’anticorps IgG isolés de la circulation des souris de tumeur-roulement syngéniques (C57Bl/6), ou de souris naïves allogéniques (129S1). De données étendues 2 a et 2 b de la Carmi Y et al., ce chiffre a été modifié. Nature 7550:99 521-104, 201524.\nFigure 2 : schéma de souris RCSCND du sang et les tumeurs B16 de tri. A. Isolation et système de tri des RCSCND cultivée de monocytes de souris. Microscopie confocale DIC image de monocytes inflammatoires et patrouilles après 4 jours de culture (x400). B. isolement et système de tri des RCSCND associées aux tumeurs tumeurs B16. Microscopie confocale représentant DIC image de RCSCND isolé de B16 tumeurs après une culture (x400). Ce chiffre a été modifié par supplémentaire figure 1 Carmi Y Aperçu JCI et coll. 1:18:e89020, 201625. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nFigure 3 : RCSCND de la rate et de la BM afficher différents modèles d’activation de tumeurs et RCSCND de sang après incubation avec IC. A. cytométrie d’expression MHCII et CD86 par DC incubé durant une nuit avec tumeur IgG-IC. B. Confocal immunohistochimie de l’absorption de tumeur (verte) et expression MHCII (rouge) de DC incubés durant une nuit avec IC tumeur CFSE marqués. Ce chiffre a été modifié par les figures 3 a et 3DCarmi Y et al. Akt et SHP-1 sont des points de contrôle DC intrinsèques d’immunité tumorale. Aperçu de la JCI 1:18:e89020, 201625. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.\nVu le grand nombre de DC requis pour la vaccination de souris (environ 2-4 x 106 DC par une souris), la plupart de la vaccination stratégies chez les souris reposent sur l’isolement des DC de la BM et de la rate, suivie de leur activation ex vivo . Cependant, tente d’activer tumeur DC in vivo, en utilisant les mêmes conditions pour l’activation de la rate et BM DC, ont souvent échoué à produire une immunité efficace. Dans deux publications ultérieures, Carmi et al. ont trouvé que sang et tumeur RCSCND diffèrent sensiblement des rate et BM DC, étant donné qu’ils portent haut niveau intrinsèque de la tyrosine phosphatase et exigent d’apprêt avant l’activation avec IC24,25. En outre, ces résultats autres stress la nécessité de prendre des précautions supplémentaires afin de maintenir la DC dans un état d’activation qui mieux reflète leur état physiologique. Par conséquent, le présent protocole vise à fournir une description détaillée du processus d’isolation de RCSCND de tumeurs et de la circulation et pour mettre en évidence les étapes pouvant entraîner leur activation prématurée.\nTout d’abord, afin d’obtenir un nombre suffisant de DC de sang et de tumeurs, il y a un besoin pour un plus grand nombre de souris par rapport à celle des protocoles d’isolement BMDC. Pour augmenter le rendement du contrôleur de domaine, nous utilisons les souris de 16 semaines, qui ont les plus gros volumes de sang et les numérations globale. Nous recevons régulièrement de 5-8 x 104 RCSCND par 1 mL de sang sans injection de GM-CSF et 4-5 x 105 RCSCND suit injection. Pour tumeur DC, on obtient environ 6-8 x 104 RCSCND d’une tumeur de3 mm 100, même si le nombre peut varier entre souris individuels et entre les modèles de la tumeur. Augmenter les résultats taille tumorale à un rendement inférieur de DC, comme une tumeur de3 mm 1 000 aura seulement environ 5 000 DC. Au lieu de cela, nous injectons souris avec des cellules tumorales sur plusieurs sites (en général 4-6), obtenant ainsi jusqu'à 4 x 105 RCSCND par la souris.\nEn outre, nous recommandons qu’avant leur utilisation expérimentale, les anticorps, les lignées cellulaires, tubes et réactifs de laboratoire général doivent être testés pour endotoxines par test LAL et en ensemençant les médias sur les bactéries agar AC. Lignées cellulaires tumorales sont souvent infectées par Mycoplasma et doivent par conséquent être testées par PCR avant leur incubation avec DC. Utilisation de préparations de collagénase, tels que les Types 1 et 4, est une source primaire d’endotoxines en raison de l’isolement des collagénases de Clostridium histolyticum. Des préparations standards de collagénase peuvent contenir autant que 10 EU/mg d’endotoxines, qui est d’environ 1-2 ng de l’endotoxine / mL du mélange de la digestion. Jahr et al. ont trouvé que les préparations de collagénase contenant 2,7-6,7 ng/mL d’endotoxines induira 1 415-3 967 ng/mL de l’IL-1β suit culture avec PBMC29. En effet, l’amorçage de DC de façon habituelle avec 1 ng du LPS par mL de milieu, mais aussi peu que 100 picogrammes/mL est suffisant pour amorcer les30,31,32. Une autre source potentielle d’endotoxines FBS, pouvant contenir 25 EU/mL ou plus d’endotoxines, soit moins de 10 UE/mL. En supposant que les milieux de culture contient 10 % BF, la charge de l’endotoxine pourraient atteindre 0,5 ng/mL, qui est suffisant pour amorcer la DC.\nEn outre, nombreux protocoles utilisent des anticorps anti-CD16/32 pour bloquer les récepteurs Fc comme un moyen d’augmenter la spécificité de leur panneau d’anticorps avant le tri. Néanmoins, la réticulation de FcγRIII (CD16) mène à la phosphorylation de Syk/ZAP-70 et PLC-γ, libération de Ca2 + intracellulaire 33et la phosphorylation de P38 et ERK1/2 dans les monocytes humains34 et souris35. Dans nos mains, addition d’anti-CD16/32 à RCSCND cultures induit toujours une forte phosphorylation des kinases P38 et ERK1/2 dans DC moins d’une minute d’exposition. C’est pourquoi, nous, suggèrent fortement évitant l’utilisation des anti-CD16/32 en isolant RCSCND pour in vitro tests fonctionnels.\nUn autre protocole commun utilise enrichissement de DC de billes magnétiques CD11c avant leur tri par les FACS. CD11c est un type j’ai glycoprotéine transmembranaire qui reconnaît une variété de ligands, y compris le fibrinogène, LPS, de type I le collagène et la sous-unité de C3b inactivée. Rezzonico et coll. ont montré que la ligature de CD11c avec anticorps induit l’activation de NFκB puissante et la sécrétion de chimiokines36. Dans notre expérience, les anticorps anti-CD11c immobilisée induisent activation cellulaire et l’apoptose, tandis que l’utilisation de leur forme soluble dans le tri des FACS n’induit la phosphorylation de P38 ou de ERK1/2.\nDans l’ensemble, ce protocole est conçu pour réaliser l’isolation de RCSCND avec activation aussi peu que possible, afin que leur activation ultérieure in vitro reflète les conditions requises pour leur activation in vivo.\nTous les auteurs déclarent qu’ils n’ont aucun conflit d’intérêts et qu’ils n’ont rien à divulguer.


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Le digital muscle la veille concurrentielle - Grande Distribution et consommation\nLa révolution de la data : collecter la donnée 6 / 7\nDossierBIG DATA Les solutions de veille tarifaire en ligne pour les distributeurs et les marques ne datent pas d’hier. Mais la nouvelle génération d’outils présente cinq évolutions majeures.\nDatagram, un tableau de bord typique. Search Ranking : Position moyenne de l’article étudié, dans sa catégorie de produits, sur les sites analysés. Entre 66% et 100%, il est majoritairement en première page, de 33% à 66% en deuxième page, et de 0% à 33% en troisième page ou plus. Note moyenne : Moyenne des avis des consommateurs concernant un produit sur les différents sites considérés.\n1/ Renforcer la fréquence de la veille\n2/ Surveiller les prix locaux\n3/ Prendre en compte les attributs des produits\n4/ Personnaliser les solutions\n5/ Passer à la datavisualisation pour interpréter les données\n8 à 10 fois par jour : C’est la fréquence à laquelle Amazon modifie les prix de certains produits durant le black friday\n3 ans : C’est l’échéance à laquelle la veille tarifaire dynamique sera couramment utilisée par les pure players


Qu’est-ce qu’une femme ? | C'est mon genre !\nPublié le février 4, 2012 par annlarue\nMichel Sardou, pochette de disque, 1981\nA vous lire, je me pose la question et j’ai soudain un élément de réponse. Une femme, c’est quelqu’un qui n’aime pas John Coltrane. Lumineux. On pourrait ajouter qui n’aime pas Tintin Babar Brad Pitt, mais ça complique et c’est accessoire. On ve s’en tenir à John Coltrane !\nSi je définis une femme comme quelqu’un qui n’aime pas John Coltrane, je ne dis rien de son état, car sous bénéfice d’inventaire ce n’est pas un état de ne pas aimer John Coltrane. C’est quoi, alors ? Ah oui : une espèce d’intensité deleuz’-guattarienne. Je trace ma ligne de fuite au milieu de toutes les autres, pour un peu on dirait une piste de ski. Il y en a pas un/e qui se retourne pour regarder derrière, n’est-ce pas, toutes les traces emmêlées ? C’est beau, la ligne de fuite, la ligne d’action, persévérer dans son être comme disait Spinoza – mais ce n’est pas l’être, c’est faux, ce mot d’être. Quand je dis que je déteste John Coltrane,je ne « suis » pas quelque chose ou quelqu’un, je veux seulement embêter le mec qui a mis la musique et pour qu’il l’éteigne. Je n’ai aucun état, je ne suis qu’action. Action de chieuse, en l’occurrence, mais action quand même.\nCe faisant, au moment-même ou le type dépité coupe John Coltrane en disant ben merde alors moi j’adore, je m’implique dans les invariants du patriarcat avec un enthousiasme débonnaire. Moi aussi j’ai mon espace, mon territoire, ma sphère d’agression, ma manière d’exister en testant sans arrêt des frontières avec autrui. Ou bien il l’arrête, le mec, son John Coltrane, ou bien il l’arrête pas. J’ai mon influence, ma volonté, mon esprit de décision, de persuasion, tout ça. Je suis un petit mec pas pire ni mieux que les autres, je lui claque son sale bec à John Coltrane, je tisse mon être de petites victoires comme ça, mec contre mec. C’est ce que font les mecs en matière d’action. C’est plus fort qu’eux, ce n’est pas plus fort que moi. Moi je peux, ou pas. Eux ils la prennent, la parole dans les discussions, eux ils le défendent, le projet machin ou truc, eux ils les gardent, leurs petites frontières du désert des tartares. Moi je peux le faire, ou pas. J’ai en moi l’infini pouvoir zen de supporter John Coltrane. Lutter contre cette engeance, c’est pas obligé.\nUne femme, c’est pas obligé. C’est ça qui tente quand on veut l’être. Evelyn Reed, dans Féminisme et Anthropologie, dit que c’est assez lamentable, en fait, les pauvres mâles obligés par l’instinct à combattre entre eux pour se reproduire avec la trop rare femelle. On appelle ça « la conquête de la femelle » mais c’est pas ça du tout en vrai. C’est la misère des mâles en bagarre. La vérité, c’est que la lionne est la reine des animaux et que le lion n’est qu’un pauvre type, n’en déplaise aux productions Disney. Pareil pour la famille suricate. Ya pas. Il y a une femelle dominante, comme d’hab.\nLe grand désir d’être femme, c’est d’être pas obligée. Pas obligée au mariage, à l’hétéronormativité. Pas obligée au choc des titans, pas obligée d’entrer dans la légion, pas obligée d’aller voir des films américains au cinéma.\nEt surtout : pas obligée d’écouter John Coltrane.\n4 réflexions au sujet de « Qu’est-ce qu’une femme ? »\nLe février 5, 2012 à 10:35 , coline78 a dit :\nFâââââââââââââmes, je nous aiêêêêêêêêêê-me !\nÊtre une lafâme, c’est être une lafâme, et ça ne se discute pas, sauf quand ça se discute…\nÊtre une lafâme, c’est souvent être un hamburger dans les yeux des gnomes, moins souvent dans les yeux des fâmes, et c’est souvent ne pas tellement aimer ça, sauf dans le secret de nos fantasmes inavouables peut-être, mais c’est une autre histoire.\nÊtre une lafâme, c’est prendre son pied pour la réalité, être prise par ses désirs, en somme.\nLe février 5, 2012 à 6:15 , grenadine37 a dit :\nOu « être un hamburger dans les yeux » des a-fâmes Hé !\nLe février 5, 2012 à 6:12 , grenadine37 a dit :\nPauvre de moi ! Que vais-je devenir, moi, qui aime Coltrane. Il est vrai que je n’aime pas QUE Coltrane ! Je peux mettre du Miles Davis !? Ca ira, non !?\nLe février 7, 2012 à 9:51 , Andrea Kolinsky a dit :\nC’est vrai que prendre Coltrane pour cible, c’est aussi bête de ma part que prendre Andy Warhol comme incarnation de la masculinité (ce qu’aurait fait la performeuse Valérie Solanas, en lui logeant une balle dans le coffre).\nEn fait, Valérie Solanas a\n1) soit fait une perfomance avec « shot » comme ça se faisait gentiment à l’époque – Chris Burden, dans Shot, se fait tirer une balle dans le bras, cool !\n2) soit elle était furieuse car Warhol avait perdu l’unique exemplaire d’un manuscrit qu’elle avait écrit et qu’elle lui avait confié.\nC’est injuste mais soyons euphoriquement injuste : à bas le Coltrane ! Il paiera pour tous les autres !!! (ambiance western)


Membres et lauréats étaient réunis jeudi 9 juillet au sein de la Fabrique à sirops Giffard pour l’Assemblée Générale statutaire. Administrateur engagé depuis la création de Réseau Entreprendre Maine & Loire, Alain Chartrain a été élu président de l’association à la suite de Bruno Giffard. Tous deux ont rejoint la communauté de chefs d’entreprise par affinité pour la cause qu’elle défend : « pour créer des emplois, créons des employeurs », ainsi que pour les valeurs humaines qu’elle porte. Dans l’édito de juillet, ils témoignent de la vision de l’entrepreneuriat porté par Réseau Entreprendre Maine & Loire. Transformons, ensemble, cette crise en une opportunité de rebond !\nEdito de juillet – « Crise et Rebond »\n« Pendant ces 4 derniers mois, Réseau entreprendre Maine & Loire, ses 150 chefs d’entreprise et sa Dream Team, ont su se mobiliser pour resserrer les liens, renforcer les accompagnements, pour que chaque membre et lauréat traverse cette crise du mieux possible. Même dans un contexte anxiogène, des projets d’entreprise ont été présentés en comité d’engagement et ce sont 5 lauréats qui ont rejoint le réseau depuis le début de l’année. La confiance en l’avenir des chefs d’entreprise du Réseau Entreprendre est un baromètre qui donne le sourire. Gageons que le fait de se sentir membre d’une communauté solidaire n’y est pas pour rien.\n« La confiance en l’avenir des chefs d’entreprise du Réseau Entreprendre est un baromètre qui donne le sourire. »\nLa crise sanitaire s’éloigne mais une crise économique se profile. Le nombre de demandeurs d’emploi est en train de monter en flèche. Dans ce contexte la raison d’être de Réseau Entreprendre, « pour créer des emplois, créons des employeurs » reprend toute sa force, et nous nous devons d’être encore plus mobilisés autour de ce projet à travers nos programmes d’accompagnement à la création, à la reprise et au développement à travers « Booster ».\nLa pandémie franchit les frontières allègrement et nous rappelle soudainement que nous sommes tous dépendants les uns des autres, et que la réponse, le rebond, est avant tout d’ordre collectif. Le réchauffement climatique nous impacte lui aussi de la même façon. Faisons de cette crise une opportunité de rebond en réinventant nos modèles à l’occasion des changements que nous impose la pandémie d’une part et la crise économique d’autre part. Renforçons la résilience de nos entreprises, et donc leur pérennité, enrichissons-les de sens en partageant ces questions fondamentales avec nos équipes, nos partenaires, nos clients, et tenons enfin compte de cette dimension environnementale au sens large du terme ; économique ; social ; écologique, de façon ultra concrète et sans plus tergiverser. Par exemple, baisser l’intensité des transports de nos salariés les rend plus disponibles, diminue les émissions de CO2, allège leurs charges, et demande de reconsidérer nos organisations pour ce faire. Eh bien allons-y ; organisons-nous pour gagner ce qui peut l’être assez aisément. Construisons de petites victoires, ensemble pour le bien de chacun et de tous.\n« La pandémie franchit les frontières allègrement et nous rappelle soudainement que nous sommes tous dépendants les uns des autres, et que la réponse, le rebond, est avant tout d’ordre collectif. »\nFaisons-le dans nos propres entreprises, insistons sur l’importance de cet enjeu avec nos lauréats, changeons notre regard sur nos activités et leur finalité, regardons plus loin et plus large, offrons cet effort à notre entourage et aux générations futures. »\nBruno Giffard – Alain Chartrain


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Actu archéologie - Page 14\npar VicomteDeValmont le Dim 18 Sep - 14:23\npar VinZT le Dim 18 Sep - 14:27\n@VicomteDeValmont a écrit: Découverte d'une épée viking par des chasseurs:\nExtraordinaire ! Et en plus l'existence de gens qui portent des sandales avec chaussettes est confirmée, la légende disait vrai !\npar micaschiste le Dim 18 Sep - 14:27\npar Bussy le Dim 18 Sep - 14:58\nJ'aime beaucoup ce fil. Belle découverte pour cette épée.\npar Ignatius Reilly le Dim 18 Sep - 15:01\nC'est le fil de l'épée.\npar Alyki le Mar 20 Sep - 14:45\nDes nouvelles des fouilles sur l'épave d'Anticythère, des analyses ADN vont être réalisées sur un squelette cet été.\nEDIT : une autre photographie dans cet article\nDernière édition par Alyki le Mar 20 Sep - 23:32, édité 1 fois\npar VicomteDeValmont le Mar 20 Sep - 16:22\nLa cité oubliée de Loropéni:\npar Voltigeur le Mer 21 Sep - 19:13\nParfaitement conservé, ce cylindre de cuivre de la taille d'un obus contient des photos, des articles de journaux, des exemplaires de "Mein Kampf", et même un film.\npar Alyki le Mar 27 Sep - 14:50\nUn tombeau de Déméter et Persephone à Appolonie du Pont (Bulgarie actuelle)\npar Alyki le Mar 27 Sep - 14:52\nQuand la circulation monétaire va plus loin que les programmes de sixième :\nBon je sais j'interprète car des monnaies romaines et ottomanes ce n'est pas tout à fait la même période !\nDernière édition par Alyki le Lun 3 Oct - 15:51, édité 1 fois\npar Voltigeur le Dim 2 Oct - 23:25\nBordeaux : un cimetière mérovingien découvert sous la place Sainte-Croix :\nUn reportage filmé sur le même sujet :\nDernière édition par Voltigeur le Lun 3 Oct - 0:59, édité 1 fois (Raison : + film)\npar Alyki le Mar 4 Oct - 13:40\nFouille d'une épave dans les eaux de Délos par l'EFA et l'Ephorie grecque\npar Docteur OX le Mar 4 Oct - 19:21\nDes chinois dans un cimetière romain à Londres ?\npar Serge le Mar 4 Oct - 19:33\nEntre des Chinois dans un cimetière romain en Angleterre et le fait qu'une pièce d'époque romaine a été retrouvée en Chine, décidément, on va bientôt découvrir que Romains et Chinois avaient ouvert des club Med et passaient leurs vacances ensemble. Il ne reste plus qu'à découvrir une boutique vendant des nems à Pompéi, et la boucle est bouclée\n@Alyki a écrit: Quand la circulation monétaire va plus loin que les programmes de sixième :\npar Alyki le Mar 4 Oct - 21:15\nSerge, vous savez comme moi que la circulation monétaire peut être très longue pour certaines monnaies. Dans les années 1960's un président de la Royal Numisatic Société racontait comment des conservateurs du British Muséum de Londres ont trouvé des monnaies romaines de bronze utilisées au XIXe pour payer l'omnibus !\nPlus loin de nous, il n'est pas rare de trouver dans les fouilles de Corinthe dans des couches d'époque franque des monnaies de bronze du IVe s. av.\nD'ailleurs pour ceux qui parlent anglais et que ça intéresse, l'ASCSA organise une nouvelle session de questions à des archéologues :\npar Alyki le Mar 11 Oct - 11:12\nUne inscription très intéressante trouvée sur le site de Teos (Turquie actuelle), un bail détaillé en 58 lignes. Il semble que les pénalités soient aussi prévues.\npar Presse-purée le Mer 12 Oct - 6:36\nSi elle est confirmée (je cherche une source plus "sûre") aussi par d'autres découvertes sur le même site, cette trouvaille peut quelque peu changer notre regard sur les rites cultuels grecs:\npar Alyki le Mer 12 Oct - 7:32\n@Presse-purée a écrit: Si elle est confirmée (je cherche une source plus "sûre") aussi par d'autres découvertes sur le même site, cette trouvaille peut quelque peu changer notre regard sur les rites cultuels grecs:\nIl s'agit d'un site de l'ASCSA. Je l'ai signalé le 11 août. L'archéologue ne parle pas pour le moment de cannibalisme.\npar Arverne le Jeu 13 Oct - 18:48\nEn Grèce, la police a saisi environ 2 000 objets mis au jour lors de fouilles illégales, qui se multiplient avec la crise économique dans laquelle se débat le pays.\npar Alyki le Jeu 13 Oct - 19:46\nMerci, j'avais loupé cette info.\npar Cathare le Sam 15 Oct - 13:08\nUne nouvelle cavité inexplorée découverte dans la pyramide de Chéops !\npar Arverne le Sam 15 Oct - 14:08\n@Cathare a écrit: Une nouvelle cavité inexplorée découverte dans la pyramide de Chéops !\nFascinant ! C'est le genre de découverte qui me donne des frissons. On se croirait revenu au temps d'Howard Carter. C'est fabuleux de constater que tout n'a pas encore été découvert en Egypte. Si c'est la chambre de Kéops qui est dans cette cavité, ce sera une formidable découverte.\npar al-idrisi le Sam 15 Oct - 15:25\nLa fameuse armée de terre cuite de l'empereur T'sin aurait été réalisée par des sculpteurs grecs !\npar Cathare le Sam 15 Oct - 16:58\nTout à fait ! J'ai eu la chance de visiter l'Egypte il y a presque 20 ans maintenant, et notre guide égyptologue nous avait dit qu'il restait peut-être encore 70% de monuments, tombes,etc, à découvrir...\nC'est vrai que c'est fascinant\npar géohistoire le Sam 15 Oct - 18:18\n@al-idrisi a écrit: La fameuse armée de terre cuite de l'empereur T'sin aurait été réalisée par des sculpteurs grecs !\nJ'en ai déjà entendu parler mais avec plus de prudence dans les affirmations notamment en ce qui concerne les relations entre la Chine et la Grèce. La présence d'un sculpteur grec n'est pas la preuve de rapports réguliers entre les deux civilisations.\nEt comme d'habitude on ne nous parle dans l'article que des soldats et pas des civils en terre cuite retrouvés dans une autre fosse à proximité.\npar Alyki le Lun 31 Oct - 12:59\n40 épaves byzantines et ottomanes trouvées en mer Noire


Envie d'un petit café ? - Iris Pointud - Architecture intérieure & Décoration\nLe café a le vent en poupe. Aujourd’hui, il y a beaucoup de lieux, menés par des passionnés qui se sont ouverts un peu partout. Non seulement on y boit des cafés impeccables, avec le plus souvent une torréfaction maison, mais la décoration vaut aussi le détour. Voici deux lieux incontournables !\nCoutume Café à Paris réalisé par CUT Architectures\n© via CUT Architectures\nCoava Coffee à Portland\n© Via Remodelista


pilotePC : aide au calcul de la prestation compensatoire\nPilotePC : une aide pour calculer la prestation compensatoire\nnota bene : certains navigateurs, tel Firefox, ne sont pas compatibles avec les formulaires de date utilisés par pilotePC, il est donc conseillé d’utiliser PilotePC avec Safari.\nLe droit de se marier fait partie des droits fondamentaux de toute personne majeure, ainsi que le droit de fonder une famille. Le droit au divorce en est le complément, car il faut concilier la protection de la vie familiale avec la sauvegarde des droits individuels de chacun des membres de la famille.\nOr ce divorce serait inaccessible pour le conjoint sans ressources, s’il était privé du droit à une compensation financière équitable. Il le serait aussi pour le conjoint menacé de devoir payer une somme excessive. Pour les deux époux, l’imprévisibilité du montant de la compensation qui sera offerte ou due, représente un stress qui aggrave le conflit conjugal. Une juste compensation des inégalités causées par la rupture du mariage, selon des modalités de calcul prévisibles et comprises par les époux constitue donc, dans certains cas, une condition pour que le droit au divorce soit effectif.\nLe législateur a prévu, selon l’article 270 du Code Civil, que lors du divorce l’un des époux peut être tenu de verser à l’autre une prestation destinée à compenser, autant qu’il est possible, la disparité que la rupture du mariage crée dans les conditions de vie respectives. Cette prestation a un caractère forfaitaire. Elle prend la forme d’un capital dont le montant est fixé par le juge.\nComment déterminer son montant ? L’article 271 du code civil dit que la prestation compensatoire est fixée selon les besoins de l’époux à qui elle est versée et les ressources de l’autre en tenant compte de la situation au moment du divorce et de l’évolution de celle-ci dans un avenir prévisible.\nCet article précise les critères à prendre en compte, pour déterminer le montant de cette compensation: la durée du mariage ; l’âge et l’état de santé des époux ; leur qualification et leur situation professionnelles ; les conséquences des choix professionnels faits par l’un des époux pendant la vie commune pour l’éducation des enfants et du temps qu’il faudra encore y consacrer ou pour favoriser la carrière de son conjoint au détriment de la sienne ; le patrimoine estimé ou prévisible des époux, tant en capital qu’en revenu, après la liquidation du régime matrimonial ; leurs droits existants et prévisibles ; leur situation respective en matière de pensions de retraite en ayant estimé, autant qu’il est possible, la diminution des droits à retraite qui aura pu être causée, pour l’époux créancier de la prestation compensatoire (par les choix professionnels faits pendant la vie commune pour l’éducation des enfants ou pour favoriser la carrière du conjoint).\nLe législateur dit aussi que la prestation compensatoire est fixée en tenant compte de la situation au moment du divorce et de l’évolution de celle-ci dans un avenir prévisible.\nLa loi définit donc des critères précis.\nLa cour de cassation en contrôle la bonne application.\nMais, en fin de compte, quel est le montant qui doit être fixé ? Comment le juge arrivera-t-il à un montant ? Comment les époux détermineront-ils ce montant de manière amiable dans leur convention lorsqu’ils divorceront par consentement mutuel ?\nles méthodes utilisées pour fixer le montant\nDepuis quelques années, de nombreuses méthodes d’aide au calcul ont vu le jour, tentant de prendre en compte ces différents critères, les plus couramment citées étant celles de Messieurs Stéphane DAVID, Martin SAINT-LEON ou Axel DEPONDT (AJ Famille 2010, p.350 et s).\nCertaines de ces méthodes peuvent être contraires à la jurisprudence de la Cour de Cassation, telles que celles qui prennent en compte la pension alimentaire versée au titre du devoir de secours, et l’application, à un même cas d’espèce, de tous ces modes de calcul – répertoriés dans AJ Famille 2005 p.86 – conduit à un résultat pouvant aller de 1 à 80.\nIl est, par ailleurs, souvent difficile de comprendre le calcul effectué par le magistrat pour parvenir au montant final, souvent énoncé à l’issue d’une énumération de différents paramètres, sans que l’on sache quelle part a été donnée à chacun d’eux.\nIl s’ensuit pour les justiciables et leurs conseils un sentiment d’insécurité, voir l’impression de participer à une loterie !\nPartant de ce constat, un groupe de travail composé de deux magistrats et deux avocats s’est constitué autour de Jean-Claude BARDOUT, vice-président au tribunal de grande instance de Toulouse, – déjà à l’origine de la « Table de référence pour fixer le montant de la contribution à l’entretien et à l’éducation des enfants » – pour définir une méthode d’aide au calcul utile à destination des praticiens du droit de la famille.\nCette aide au calcul doit se baser sur les critères définis par la loi et la jurisprudence. On peut raisonnablement classer ces critères en deux catégories : les critères patrimoniaux (ou économiques : revenus actuels, charges alimentaires, revenus dans un avenir prévisibles, revenus potentiels du patrimoine, perte de droits à la retraite) et les critères personnels (durée du mariage, âge des époux, temps consacré aux enfants au détriment de la vie professionnelle, état de santé).\n1. LES CRITÈRES PATRIMONIAUX\n1.1 La disparité en revenus\n1.1.a) la disparité actuelle\nLe premier travail consiste à déterminer, pour chacune des parties, le montant de ses revenus nets imposables.\nPour ce faire, sont pris en compte dans l’aide au calcul PilotePC :\nles revenus mensuels nets imposables du travail : salaires, BNC, BIC, revenus agricoles, revenus fonciers, revenus mobiliers,\nla rente invalidité sauf rente accident du travail,\nConformément à la jurisprudence de la Cour de cassation, sont exclues les allocations familiales qui sont destinées aux enfants ainsi que les sommes et avantages attribués provisoirement au titre du devoir de secours.\nLorsque le débiteur de la prestation verse une contribution aux frais d’entretien et d’éducation d’enfants ses revenus mensuels sont diminués du montant de celle-ci.\nDans un souci d’équité et parce que le conjoint créancier de la prestation compensatoire assume également la charge d’enfants, ses revenus sont également diminués de l’équivalent d’une contribution, estimée suivant la table de référence des pensions alimentaires.\nNous obtenons, à ce stade, le revenu mensuel des époux pondéré par la contribution à l’entretien et l’éducation des enfants.\nLa disparité actuelle de revenus entre les époux ainsi estimée, permet de définir une unité de base de la disparité (différence entre les revenus mensuels des époux divisée par deux) qui sera modulée et multipliée en fonction des autres critères de disparité prévus par l’article 271 du code civil.\nMais il est impossible de se contenter d’un tel calcul, si la situation du débiteur de la prestation compensatoire est amenée à évoluer dans un avenir proche et si cette évolution doit avoir des répercussions sur son revenu.\n1.1.b). L’évolution de la disparité dans un avenir prévisible\nL’aide au calcul permet aussi de prendre en compte l’évolution de la situation des époux dans un avenir prévisible. L’article 271 du code civil vise « les droits existants et prévisibles», mais toute la difficulté était d’encadrer l’avenir prévisible dans une durée.\nNous avons choisi de fixer la limite de « l’avenir prévisible» à huit ans, retenant ainsi le délai maximum que le législateur lui même a fixé pour le règlement d’une prestation compensatoire.\nL’aide au calcul PilotePC prend donc en compte une période de huit années après le divorce.\nSi dans un délai de huit ans à compter du divorce, la situation professionnelle d’un conjoint ou des deux conjoints est amenée à changer, de manière prévisible, (départ à la retraite, licenciement programmé, mutation), sans que cela ne résulte d’une volonté délibérée de diminuer ses ressources devant le juge, et que la date de ce changement est prévisible ainsi que le montant des revenus, l’article 271 demande d’en tenir compte pour apprécier la disparité.\nDans ce cas, et dans la limite des huit années après le divorce, les revenus sont estimés au prorata du nombre d’années pendant lesquels ils seront respectivement perçus, sur ces huit années.\nPilotePC calcule la moyenne des revenus sur cette période de huit années, ainsi que la différence des revenus moyens entre les conjoints après déduction de leurs contributions respectives pour les enfants.\nFormule : (Revenu mensuel moyen prévisible – montant de la contribution)*(nombre d’années entre le divorce et la date prévisible de la modification / divisé par 8)+(Revenu mensuel actuel – montant de la contribution)*(nombre d’années entre la date de la modification et la huitième année y compris / divisé par 8)\nSi aucune évolution n’est prévue dans les huit ans à venir, il n’y a pas lieu de tenir compte de cette étape.\n1.2 La disparité en capital\nLorsque l’un des époux ou les deux dispose(nt) de revenus mobiliers ou fonciers, ces revenus sont pris en compte au titre des revenus actuels ou prévisibles. Mais si l’un des époux ou les deux disposent d’un patrimoine mobilier ou immobilier dont il s’abstient de tirer des revenus, la disparité de patrimoine entre les époux doit être prise en compte et être appréhendée en estimant les revenus potentiels que pourrait en retirer l’époux concerné.\nEn effet si l’un des époux a décidé de ne pas faire fructifier son patrimoine, ces revenus potentiels doivent être déterminés et entrer dans le calcul de la prestation compensatoire.\nCompte tenu de la situation économique actuelle, nous avons retenu un taux de rendement moyen du patrimoine de 3 %. Ce taux reflète a peu près la réalité du rendement moyen sur une durée de plusieurs années et sera donc dans la majeure des cas une approximation suffisante des revenus perçus au moment du divorce et dans un avenir prévisible. Mais il est possible de modifier ce taux, si l’on dispose d’informations fiables pour justifier un taux plus élevé ou moins élevé.\nA ce stade, on obtient le revenu mensuel moyen prévisible corrigé du débiteur, toutes ressources confondues.\n2. LES CRITÈRES PERSONNELS\n2.1. La durée du mariage\nConformément au 3ème alinéa de l’article 271, la durée du mariage doit être prise en compte pour le calcul de la prestation compensatoire.\nLa date du mariage est renseignée.\nLa durée du mariage est calculée automatiquement à partir de la date du divorce\nLa Cour de Cassation a eu l’occasion, à maintes reprises, d’affiner ce critère en énonçant qu’il n’y avait pas lieu de retenir les années de concubinage antérieures au mariage et qu’il était possible de ne retenir que les années de vie commune durant le mariage.\nLa disparité objective calculée précédemment est multipliée par le nombre d’années de mariage ou de vie commune pendant le mariage.\n2.2. L’âge du conjoint créancier\nL’âge est un des critères de la disparité, selon l’article 271 du code civil. Comment appréhender ce critère ?\nPlus le conjoint créancier de la prestation est jeune, mieux il ou elle pourra améliorer sa situation professionnelle et retrouver son autonomie financière, s’il ou elle avait cessé de travailler pour éduquer les enfants.\nPlus le conjoint créancier de la prestation est âgé, plus difficile sera sa reconversion professionnelle, la disparité actuelle risque de perdurer ou sera plus difficile à combler et la méthode d’estimation PilotePC tient compte de ce critère en multipliant l’unité de base de la disparité par un coefficient progressif.\nCe coefficient augmente de l’âge légal du mariage (18 ans) à l’âge l’égal de la retraite (62 ans), puis il diminue à nouveau, car le capital compensatoire a vocation à diminuer avec l’espérance de vie\nFormule : Si l’époux créancier de la prestation est âgé de moins de 62 ans le coefficient multiplicateur est égal à 1+(âge du créancier-18)/100 (par exemple 1,3 pour un conjoint créancier de 48 ans) ; s’il est âgé de 62 ans ou plus, le coefficient est égal à 1+(124-âge du créancier-18)/100) (par exemple 0,93 pour un créancier de 75 ans).\n2.3. Les droits à la retraite diminués par le temps passé à élever et éduquer des enfants\nParmi les critères légaux de la disparité, le législateur a montré l’importance qu’il attache à la prise en compte de la « situation respective des époux en matière de pensions de retraite », en précisant que le juge doit estimer, « autant qu’il est possible, la diminution des droits à retraite qui aura pu être causée, pour l’époux créancier de la prestation compensatoire » par « les conséquences des choix professionnels faits par l’un des époux pendant la vie commune pour l’éducation des enfants … ou pour favoriser la carrière de son conjoint au détriment de la sienne ».\nTrois méthodes d’estimation de la disparité des droits en matière de retraite sont théoriquement envisageables : calcul du coût du rachat de trimestres et/ou des cotisations perdues selon les barèmes légaux ; calcul de la perte prévisible de revenus par comparaison de la pension de retraite prévisible de l’un des époux par rapport au partage par moitié du cumul des pensions de retraite des deux époux ; calcul de l’économie réalisée par la communauté et des investissements mobiliers ou immobiliers réalisés grâce au non-paiement des cotisations retraites de l’un des époux puis partage en deux de ce capital. La première méthode aboutit, sauf pour de jeunes époux, à des coûts souvent hors de proportion avec les moyens financiers des époux, elle n’est guère réaliste. La deuxième méthode n’est guère praticable car les époux ne disposent pas d’informations suffisantes sur le montant futur de leurs diverses pensions de retraite, sauf évidemment s’ils sont déjà à la retraite ou le seront à la retraite très prochainement. Nous avons donc retenu la troisième méthode, celle du coût des cotisations non versées, car elle permet l’appréciation la plus réaliste de la disparité en termes de droits à la retraite.\nLe raisonnement est le suivant : il s’agira d’évaluer l’économie réalisée par le couple (par la communauté) du fait du non-paiement des cotisations retraite pour l’un des époux. Cette économie correspond à 17 % environ du revenu de l’époux concerné avant la cessation du travail, car le taux de cotisation moyen pour la retraite est de 17 %. Cette économie a, soit été dépensée par le couple et consacrée à divers achats, soit économisée par le couple, en investissant dans l’immobilier, des assurances vies ou autre (en prévision de la retraite afin de fournir un complément de revenus). Lors du divorce, chacun des époux a droit en principe à la moitié de la valeur des biens mobiliers ou immobiliers ainsi acquis ou des économies ainsi placées. Or c’est la totalité de ces économies-retraite qui devraient revenir au conjoint qui a a perdu des droits à la retraite, pour élever les enfants ou favoriser la carrière de l’autre, tandis qu’il serait injuste que le conjoint qui bénéficie de la plénitude de ses droits à la retraite, empoche en outre la moitié des sommes économisées sur les non cotisations retraites de l’autre.\nPour calculer cette disparité, il appartient aux parties de produire un relevé de carrière, le cas échéant une évaluation comparative des droits à la retraite perdus. Le relevé de carrière détermine le nombre de mois non cotisés pendant le mariage jusqu’au jour de l’ONC ou de la reprise de l’activité professionnelle.\nLe calcul consiste à multiplier le salaire mensuel perçu avant la cessation du travail (ou le SMIC si pas d’activité) par 17 % (représentant le taux moyen de cotisation retraite), divisé par deux (car chaque conjoint récupérera déjà la moitié de cette économie par le jeu du partage, et il n’y a pas lieu d’indemniser deux fois cette perte de revenu), multiplié par le nombre de mois non travaillés (et non cotisés).\nNotons que si le couple avait des revenus inférieurs à 2.800 euros mensuels (valeur 2012) au moment de la cessation d’activité et a a perçu l’une ou l’autre des allocations ou prestations de nature familiale, la Caisse d’Allocations Familiales prend ces cotisations en charge sous forme d’Assurance Vieillesse des Parents au Foyer et verse ces cotisations à la Caisse de retraite. Dans ce cas, la prestation compensatoire n’a pas à être impactée par l’absence de cotisations.\n2.4. Autres éléments personnels à prendre en compte\nL’état de santé des époux est l’un des critères à prendre en compte. Il est difficile à quantifier, mais lorsque l’un des époux fait valoir des problèmes de santé de nature à entraver son activité professionnelle dans le futur ou qui font peser une sérieuse incertitude sur le futur professionnel et les ressources, il faut en tenir compte dans l’appréciation des situations respectives des époux. La solidarité entre époux qui aurait pu normalement jouer prendra fin avec le divorce ; la disparité de situation qui résulte de ces problèmes de santé est donc causée ou aggravée par la rupture du mariage et doit être compensée, dans la mesure du possible. Cette compensation devra être déterminée au cas par cas. PilotePC ne propose aucune pondération préétablie, mais le moyen de pondérer librement l’estimation proposée, d’une part en renseignant un texte libre pour motiver cette pondération, d’autre part en indiquant librement le montant qui sera en définitive demandé, proposé ou fixé.\n3. Capacité de payer et montants des versements périodiques\nDernières étapes proposées par PilotePC : le contrôle de la capacité de payer du conjoint condamné à payer une prestation compensatoire, le calcul du montant des versements mensuels sur huit ans comme le permet la loi, le contrôle de la capacité de payer les versements mensuels.\nL’article 271 du code civil précise que la prestation compensatoire est fixée selon les besoins de l’époux à qui elle est versée et les ressources de l’autre. La prestation que l’un des époux peut être condamné à payer doit donc tenir compte des ressources du conjoint débiteur et ne doit pas dépasser sa capacité de payer.\nCette capacité, comme l’a montré, Maitre Axel Depondt, peut être estimée à partir de la capacité maximale d’épargne, qui elle-même a pu être calculée, tenant compte de l’impôt progressif, à un taux moyen de l’ordre de 30 %.\nLes méthodes d’estimation de la capacité d’endettement, mises en œuvre par les banques et établissements de crédit, conduisent aux mêmes résultats.\nLa méthode PilotePC estime cette capacité maximale d’épargne à partir du revenu actuel du débiteur, diminué le cas échéant de la contribution aux frais d’éducation et d’entretien des enfants, pondéré selon le revenu prévisible et éventuellement les revenus potentiels du patrimoine non exploité.\nCette capacité maximale d’épargne permet de vérifier que la prestation compensatoire estimée par la méthode ne dépasse pas la capacité de payer du débiteur.\nL’article 275 du code civil prévoit que la prestation compensatoire peut être payée par versements périodiques, pendant une durée maximale de huit ans. En pratique, lorsque le débiteur de la prestation compensatoire ne dispose pas des liquidités nécessaires pour payer la prestation compensatoire en capital, il demandera à être autorisé à payer la prestation sous forme de versements mensuels pendant huit ans. PilotePC calcule le montant de ces 96 mensualités, ainsi que la capacité d’épargne mensuelle, pour vérifier la capacité de payer ces mensualités.\nLa méthode PilotePC constitue une aide à l’usage des professionnels du droit (magistrats, avocats, notaires, experts patrimoniaux). Cette méthode est fondées sur les critères définis par le code civil, et précisés par la cour de cassation.\nLes solutions choisies ont été guidée par le respect des règles de droit en vigueur et le besoin d’une méthode facile d’utilisation (pour des praticiens du droit) permettant de fixer le montant de la prestation compensatoire, le plus équitable possible.\nLes professionnels, notamment, les avocats conservent la possibilité de mettre en exergue certains éléments, tels que le nombre d’enfants élevés, l’état de santé, l’évolution de la carrière professionnelle propres à l’un des époux etc…, d’autant que les critères légaux ne sont pas limitatifs.\nPour connaître les formules de calcul\nPour utiliser PilotePC, cliquez sur le lien ci-dessous :\nPilotePC aide au calcul de la prestation compensatoire