Invasion et la colonisation des cellules hôtes de bactéries pathogènes dépendent de l'activité d'un grand nombre de protéines procaryotes, défini comme étant des facteurs de virulence, qui peut renverser et manipuler des fonctions essentielles de l'hôte. L'étude des interactions hôte / pathogène est donc extrêmement important de comprendre les infections bactériennes et développer des stratégies alternatives pour contrer les maladies infectieuses. Cependant, cette approche nécessite le développement de nouveaux tests à haut débit pour la impartiale, l'identification automatisée et la caractérisation des facteurs de virulence bactériens. Ici, nous décrivons un procédé pour la production d'une banque de mutants GFP-étiqueté par mutagenèse par transposon et le développement d'un criblage à haut contenu approches pour l'identification simultanée de plusieurs phénotypes de transposon associé. Notre modèle de travail est le bactérienne pathogène Coxiella burnetii intracellulaire, l'agent étiologique de la fièvre Q zoonose, qui est associé à soivere les épidémies de la santé avec une conséquente et le fardeau économique. La nature intracellulaire obligatoire de cet agent pathogène a, jusqu'à récemment, gravement entravé l'identification des facteurs bactériens impliqués dans les interactions hôte-pathogène, faisant de Coxiella le modèle idéal pour la mise en œuvre d'approches à haut débit / haute-contenu.\nLa bactérie Coxiella burnetii émergente endémique est responsable de grandes épidémies de fièvre Q, une zoonose débilitante pseudo-grippal avec la santé et l'impact économique grave 1. Les principaux réservoirs de Coxiella sont des animaux domestiques et d'élevage, et on estime que plus de 90% des bovins laitiers aux États-Unis portent C. burnetii 2. Les humains sont des hôtes accidentels qui sont infectés par inhalation d'aérosols contaminés. La fièvre Q humaine manifeste soit comme une maladie aiguë ou chronique, qui peut avoir des complications mortelles avec un taux de mortalité atteignant 65% 1,3. Avec une dose infectieuse de 1 - 10 organismes, Coxiella est le pathogène le plus infectieux connu et il a été étudié comme un bio arme potentielle 4. L'épidémie récente de explosive fièvre Q aux Pays-Bas (2007 - 2010), avec des cas escalade de 182 à plus de 2000 par an, est un exemple de la virulence de cet agent pathogène grave5.\nL'efficacité remarquable des infections Coxiella est probablement associée à sa résistance au stress environnemental, combiné avec son adaptation unique de cellules hôtes. En effet, Coxiella est présent dans l'environnement sous forme de variantes métaboliquement inactifs à petites cellules (SCV), qui sont remarquablement résistante à plusieurs conditions difficiles (dessiccation, température, etc.). VCS sont absorbé par des cellules phagocytaires via α V β 3 intégrines 6 tandis que l'invasion des cellules non-phagocytaires est médiée par la Coxiella adhérence / invasion OmpA 7 et un récepteur non encore identifié. Après absorption, Coxiella réside dans les vacuoles moulants, positifs pour les marqueurs endosomes précoces et Rab5 EEA1 8. Les bactéries répondent aux acidification endosomique en convertissant des variantes de cellules grandes métaboliquement actifs (VUL) et l'activation d'un type 4 système de sécrétion Dot / Icm (T4SS) 9, Fortement homologue à celle de 10 Legionella pneumophila. La sécrétion d'effecteurs Dot / ICM permet Coxiella pour générer un grand compartiment acide, LAMP1 positif contenant des enzymes lysosomales actifs où les bactéries peuvent se développer et protéger activement les cellules infectées de l'apoptose 11. Par conséquent, le cycle intracellulaire de Coxiella est contrôlée par la translocation Dot / Icm d'effecteurs à médiation par 12 bactériennes, cependant, les facteurs impliqués dans l'invasion microbienne de la cellule hôte, la replication bactérienne et la diffusion de l'infection restent en grande partie inconnus.\nCombinant mutagenèse de transposon et des essais basés sur la fluorescence, nous développons des approches impartiales pour l'identification simultanée de facteurs bactériens impliqués dans les principales étapes d'infections Coxiella: 1) l'internalisation dans les cellules hôtes, 2) la réplication intracellulaire, 3) la propagation de cellule à cellule et 4) la persistance. À ce jour, nous avons passé au crible plus de 1000 mutations dans 500 séquences codantes Coxiella, qui nous ont fourni des perspectives sans précédent dans les interactions hôte-pathogène qui régulent Coxiella pathogenèse 7. Fait à noter, cette approche peut être appliquée à l'étude d'autres pathogènes intracellulaires qui partagent des caractéristiques de biologie cellulaire avec Coxiella.\n1. La génération d'une banque de mutants de transposon Coxiella GFP étiqueté\nManipuler Coxiella burnetii RSA439 NMII dans un niveau de confinement 2 de biosécurité (BSL-2) dans une enceinte de sécurité microbienne (MSC) en conformité avec les règles locales. Si compatible avec le modèle bactérienne utilisée, répétez les étapes à partir de 1.4.1 à 1.4.4 pour augmenter la probabilité d'obtention de mutants clonales. Une banque de mutants typique est composé (au moins) d'un certain nombre de mutants qui est égale à trois fois le nombre de séquences annotées dans le génome de l'organisme utilisé codage.\nPréparation de électrocompétente Coxiella RSA439 NMII:\nPréparer 1x ACCM-2 13: 13,4 mM d'acide citrique, le citrate de sodium 16,1 mM, phosphate de potassium 3,67 mM, chlorure de magnésium 1 mM, 0,02 mM de chlorure de calcium, mM sulfate 0,01 de fer, le chlorure de sodium 125,4 mM, 1,5 mM de L-cystéine, 0,1 g / L Bacto Neopeptone, 2,5 g / l de casaminoacides, 1 g / L méthyle bêta cyclodextrine, 125 ml / L RPMI. Ajuster le pH à 4,75 et stériliser par filtration (ne pas autoclaver). Remarque: Liquide ACCM-2 est stable à 4 ° C pendant environ 1 mois.\nInoculer 100 ml d'ACCM-2 avec 2 x 10 6 génome équivalent (GE) / ml de Coxiella RSA439 NMII (à partir d'un stock bactérienne préalablement généré et quantifiés comme dans l'étape 1.5) à partir des stocks C -80 ° et distribuer la suspension bactérienne dans 75 cm 2 cellules des flacons de culture avec des bouchons ventilés (10 - 15 ml de suspension bactérienne par flacon). Croître pendant 7 jours à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2 et de 2,5% d'O 2.\nPiscine La suspension bactérienne résultant en tubes de 50 ml et centrifuger à 3900 g pendant 1 h à 4 ° C.\nJeter le surnageant et remettre le culot dans 30 ml de 10% de glycérol. Centrifuger à 3900 g pendant 1 h à 4 ° C.\nRemettre en suspension le culot dans un volume suffisant de glycerol à 10% (typiquement 2 ml) et 50 aliquote de 500 pl dans des tubes ul. Gardez b remis en suspensionacteria sur la glace pendant tout le processus. Remarque: A ce stade, les bactéries sont électrocompétente et une aliquote est suffisante pour effectuer une électroporation. Les suspensions bactériennes peuvent être conservés à -80 ° C pendant 6 mois ou être utilisées directement pour l'électroporation de l'ADN plasmidique.\nÉlectroporation de Coxiella compétente transposon- et les plasmides de transposase codant:\nRemarque: pour le protocole suivant, l'élément transposable et la transposase sont codées par deux plasmides différents (PITR-CAT-GFP et pUC19-Himar1C9, respectivement) 7. Les deux plasmides ont pas une origine de réplication spécifique à Coxiella, ce qui en fait des plasmides suicides lorsque électroporé dans Coxiella. Cela garantit insertions de transposons stables. L'élément transposable contient une cassette de résistance au chloramphénicol sous la régulation du promoteur p1169 Coxiella pour la sélection et le gène de la GFP sous la régulation du promoteur p311 Coxiella pour marquer les mutants générés avec GFP.\nPre-refroidir une cuvette d'électroporation de 0,1 cm pendant 10 min sur de la glace. Mélanger 50 pi de électrocompétente Coxiella avec 10 ug transposon plasmide et 10 ug de plasmide transposase 7. Assurez-vous que la concentration de plasmide est supérieure à 500 pg / ml afin de minimiser la dilution du glycérol.\nÉlectroporation en utilisant la configuration suivante: 18 kV, 500 Ω, 25 pF. Assurez-vous que la constante de temps résultante est comprise entre 9 et 13 msec.\nImmédiatement ajouter 950 pi de RPMI, remettre en suspension les bactéries électroporation et les transférer dans un tube à bouchon à vis et conserver à la température ambiante.\nPrendre 200 ul des bactéries électroporées et à ajouter 3 ml d'ACCM-2 supplémenté avec 1% inactivé par la chaleur de sérum bovin fœtal (FBS) dans des plaques à 6 puits. Ajouter 88 pi de DMSO pour le volume restant de bactéries électroporées (pour atteindre une concentration finale de 10% de DMSO) et conserver à -80 ° C.\nLa sélection des mutants de transposon:\nIncubate des plaques à 6 puits inoculés comme décrit ci-dessus (1.2.4) pendant une nuit à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2 et de 2,5% d'O 2. Ajouter les antibiotiques appropriés (375 ug / ml de kanamycine ou 3 ug / ml de chloramphenicol). Incuber la culture bactérienne pendant 3 jours supplémentaires dans les conditions décrites ci-dessus.\nIsolement de mutants individuels:\nPréparation de solides ACCM-2 plaques et le placage de mutants de transposons Coxiella\nRemarque: Les instructions suivantes sont pour une boîte de Pétri, plusieurs dilutions de cultures bactériennes doivent être testés pour évaluer le volume d'inoculation optimale pour l'isolement de la colonie.\nChauffer 10,5 ml de 0,5% d'agarose dans un micro-ondes et laisser refroidir dans un bain d'eau à 55 °. Chauffer 11,25 ml de 2x ACCM-2 (pH 4,75) à 37 ° C.\nPréparer agarose bas:\nMélanger 10 ml de 0,5% d'agarose fondu avec 10 ml de 2x-2 ACCM et ajouter les antibiotiques appropriés (375 ug / ml de kanamycine ou 3ug / ml de chloramphenicol).\nVerser immédiatement dans la boîte de Pétri. Gardez le plat unlidded Petri, laisser refroidir moyen pendant 30 min et sécher à l'air pendant 20 min.\nPréparer top agarose:\nMélanger 1,25 ml de 2x ACCM-2 avec 0,75 ml d'eau dans un tube 5 ml de polystyrène, ajouter les antibiotiques appropriés (375 ug / ml de kanamycine ou 3 ug / ml de chloramphenicol) et incuber à 37 ° C.\nAjouter la culture bactérienne (typiquement de 1 à 100 ul) et vortex pendant 5 s.\nAjouter 0,5 ml d'agarose fondu, mélanger et verser immédiatement sur le agarose bas.\nLaisser refroidir pendant 20 min, remettre le couvercle sur la boîte de Pétri et incuber à 4 ° C pendant 20 min pour faciliter la solidification agarose.\nSécher à l'air pendant 20 min dans un unlidded MSC. Cultiver les plaques à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2 et de 2,5% d'O 2 pendant 6 à 7 jours.\nAjouter du DMSO pour les bactéries restantesl cultures afin de parvenir à une concentration finale de 10% de DMSO et conserver à -80 ° C.\nÉvaluer la dilution optimale de la façon suivante: faire en sorte que les colonies sont de 0,5 à 1 mm de diamètre et sont convenablement isolées pour éviter la contamination croisée. Décongeler restant cultures bactériennes à partir du point 1.4.2 et la plaque à la dilution appropriée sur ACCM-2 agar comme décrit dans 1.4.1.2 et 1.4.1.3. Incuber pendant 6 à 7 jours comme décrit dans 1.4.1.3.5.\nUne fois que les colonies sont détectables, les recueillir en coupant l'extrémité d'une pointe de 1 ml, la cueillette de la fiche contenant des colonies isolées et la dispersion de la colonie par pipetage dans 1,5 ml d'ACCM-2 contenant les antibiotiques appropriés (375 pg / ml de kanamycine ou 3 pg / ml de chloramphénicol) dans une plaque de 24 puits. Amplifier colonies individuelles pendant 6 jours dans les conditions décrites au paragraphe 1.3.1. Au jour 3 de l'incubation, disperser les amas bactériens par pipetage chaque culture.\nStocker chaque suspension mutant dans 2D tubes BOUCHON code à barres dans des plaques à 96 puits dans 10% De DMSO à -80 ° C.\nL'évaluation de la concentration bactérienne:\nRemarque: le protocole suivant peut être appliqué pour obtenir les courbes des mutants à replication bactériennes dans un milieu axénique (voir 1.4.4) de croissance.\nNorme préparation de la courbe:\nPréparer un / stock ml solution à 2 pg d'ADN double brin (typiquement un plasmide aléatoire de taille connue et la concentration) en 1x Tris-EDTA (TE). Préparer 10 dilutions successives de la solution mère pour obtenir des concentrations allant de 2 pg / ml à 2 ng / ml. Distribuer 50 pi de chaque concentration de puits individuels d'une microplaque de 96 puits avec des murs noirs et le fond (voir le tableau des matériaux).\nOn dilue le réactif quantification ADNdb 1: 200 dans du tampon 1 x TE et ajouter 55 ul du réactif dilué dans chaque échantillon dans la microplaque à 96 puits. Mélangez bien à l'aide d'un agitateur de plaque et incuber pendant 2 à 5 min à température ambiante, dans l'obscurité.\nMesurer la fluorescence des échantillons en utilisant une fluorescence unence lecteur et filtres microplaque pour des longueurs d'onde standards de fluorescéine (~ excitation 480 nm, émission ~ 520 nm).\nTracer la gamme de concentration de plasmide contre les lectures d'intensité de fluorescence.\nSuspension bactérienne quantification:\nDistribuer 5 pi de 10% de Triton X-100 par puits dans une microplaque de 96 puits avec des murs noirs et le fond (voir le tableau des matériaux). Ajouter 50 pi des suspensions bactériennes dans chaque puits et incuber 10 min à température ambiante, sur un agitateur de plaque.\nMesurer la fluorescence des échantillons en utilisant un lecteur et des filtres de fluorescence pour microplaques longueurs d'onde standards de fluorescéine (~ excitation 480 nm, émission ~ 520 nm).\nPour obtenir le DN bactérienneUne concentration, tracer les lectures de fluorescence dans le tableau obtenu au point 1.5.1.4. Diviser la concentration d'ADN par la masse du génome de Coxiella (2,2 fg) pour obtenir des concentrations bactériennes. Exprimez résultats de génome / ml équivalentes.\nJeter les mutants présentant un défaut de croissance significative dans ACCM-2.\n2. Primer seule colonie PCR, séquençage et d'annotation\nRemarque: le protocole suivant est pour l'amplification d'ADN de 96 échantillons, une pipette multicanaux est recommandé pour les étapes suivantes. purification de la colonne de produits de PCR utilisant des billes magnétiques et séquençage de l'ADN avec une amorce spécifique-transposon (2.3) sont sous-traitée à une société externe.\nAssurez-vous que l'amorce d'amplification est conçue pour hybrider entre 100 et 200 paires de bases en amont de l'unité de répétition en tandem inverse (ITR), pour obtenir des produits de PCR couvrant le site d'insertion du transposon sur Coxiellun génome. Préparer 3 ml de mélange de PCR (1x tampon de haute fidélité, 200 uM de dNTP, 1 uM amorce d'amplification, 20 U / ml de haute fidélité de l'ADN polymérase) et distribuer 29 pi par puits dans une plaque à 96 puits PCR mis sur la glace. Transfer 1 ul de chaque mutant en phase stationnaire dans ACCM-2 au mélange de PCR.\nExécuter PCR avec une dénaturation initiale (98 ° C, 1 min), 20 cycles de haute stringence (98 ° C, 10 s; 50 ° C, 30 s; 72 ° C, 90 sec), 30 cycles de faible stringence (98 ° C, 10 sec; 30 ° C, 30 s; 72 ° C, 90 sec) et 30 cycles de stringence élevée (98 ° C, 10 s; 50 ° C, 30 s; 72 ° C, 90 sec) suivi d'une extension finale à 72 ° C pendant 7 min.\nPurifier produits de PCR utilisant des billes magnétiques et de l'ADN de séquence avec une amorce spécifique transposon. Concevoir l'amorce spécifique de transposon avec une température de fusion comprise entre prédite 50 ° C et 75 ° C, une teneur en GC comprise entre 40% et 60%, une longueur comprise entre 18 et 25 nucléotides et si un de recuitte en aval du site d'hybridation d'amorce et l'amplification d'au moins 100 paires de bases en amont de la première paire de l'ITR du transposon de base.\nGrâce à un logiciel d'analyse de séquence, charger le complète, génome annoté de Coxiella burnetii 493 NMI. Utilisez la fonction "aligner à la référence" pour charger et aligner (blastn) les résultats de séquençage et de déterminer le site de la transposition. Jeter mutants avec des non-appariement et / ou l'affichage à double reads.To surveiller la saturation de la bibliothèque mutant, garder une trace de la présence de multiples insertions de transposons sur le même site.\n3. Les cellules eucaryotes défi avec Coxiella Mutants et la surveillance des intracellulaire croissance\nRemarque: Une pipette multicanaux est recommandée pour les étapes suivantes. Les infections ont été effectuées en triple dans stérile microplaques de 96 puits avec des murs noirs et fond transparent plat. Coxiella burnetii poids exprimant la GFP 14 wtel que prévu par le Dr Robert Heinzen.\nCultiver des cellules Vero dans du RPMI sans rouge de phénol supplémenté avec 10% de sérum fœtal bovin (FBS) en l'absence d'antibiotiques (RPMI complet médias).\nLe jour avant l'infection, se laver les cellules Vero confluentes à partir d'un sous-confluente ou ballon de culture de cellules avec 10 ml de PBS.\nDétacher les cellules Vero en ajoutant 1 ml de solution de trypsine EDTA dans le ballon de culture de cellules et incuber pendant 3 à 5 min à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2.\nResuspendre les cellules dans 10 ml de milieu RPMI complet. Compter les cellules et à préparer une suspension cellulaire de 10 5 cellules par ml.\nDistribuer 100 ul de la suspension cellulaire dans chaque puits d'une plaque de 96 puits noir avec fond transparent plat.\nCentrifuger pendant 5 minutes à 400 x g à la température ambiante pour faciliter l'adhérence des cellules au fond des puits et incuber pendant une nuit à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2.\nDécongeler les plaques à 96 puits contenant du Comutants xiella à RT et diluer 150 pi de suspension bactérienne dans 300 pi de RPMI sans rouge de phénol et de FBS dans un puits profond plaque de 96 puits.\nRetirez le papier de la microplaque contenant des cellules Vero et distribuer 100 pl / puits de mutants Coxiella dilué (MOI de 100). Utilisez le puits A1 comme négatif (cellules non infectées) A2 de contrôle et de puits et A3 comme contrôles positifs (cellules infectées par Coxiella poids exprimant la GFP 14 à des multiplicités d'infections (MOI) de 100 et 200).\nCentrifuger la plaque pendant 10 min à 400 g à température ambiante en utilisant un support de plaque d'centrifugeuse étanche aux aérosols.\nIncuber à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2 pendant 2 heures puis remettez-les bactéries contenant le milieu avec 100 pl / puits de, milieu frais RPMI complet.\nMesurer la fluorescence de la GFP tous les jours pendant 7 jours en utilisant un lecteur et des filtres de fluorescence pour microplaques longueurs d'onde standards de fluorescéine (~ excitation 480 nm, émission ~ 520 nm). Éviterperturbations dues à la condensation et à la dispersion du signal dans le milieu de culture, en utilisant une excitation de fond et enregistrement de l'émission sur le lecteur de microplaques.\n4. Préparation des échantillons pour l'acquisition d'images automatisé\nRemarque: La procédure est pour une plaque de 96 puits, l'échelle des volumes en conséquence. Étapes de 4.2 peuvent profiter d'un laveur de plaques.\nLe 7 après l'infection d'une journée, éliminer le milieu de la plaque et les remplacer par 50 pl / puits de milieu complet frais contenant un colorant fluorescent perméable cellulaire à la dilution appropriée (habituellement de 1: 1000, doit être optimisé en fonction de la lignée cellulaire utilisée ). Incuber les cellules pendant 30 - 60 min à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2.\nRemplacer milieu avec 50 pl / puits de 4% de paraformaldehyde (PFA) dans du PBS, incuber pendant 30 min à température ambiante (TA) puis retirer le tampon contenant du PFA et laver 3 fois avec du PBS.\nRetirer du PBS et Dispense 50 pl / puits de solution de blocage (0,5% d'albumine de sérum bovin, 50 mM de NH 4 Cl dans du PBS, pH 7,4) additionné de 0,05% de saponine. Incuber à température ambiante pendant 30 min.\nRemplacer solution de blocage avec 40 pl / puits de solution de blocage frais supplémenté avec de la saponine (comme ci-dessus) et avec un anticorps anti-LAMP1 à une dilution de 1: 500. Incuber la plaque pendant 30 min à température ambiante.\nRetirer la solution de blocage et laver la plaque de 96 puits 5 fois avec 100 pl / puits de PBS.\nDistribuer 40 pl / puits de solution de blocage additionné de saponine (comme ci-dessus), l'anticorps secondaire marqué par fluorescence approprié (à une dilution de 1: 1000) pour révéler l'anticorps anti-LAMP1 appliqué à l'étape 4.4, et avec Hoechst 33258 à 5 pg / ml. Incuber la plaque pendant 30 min à température ambiante.\nRetirer la solution de blocage et laver la plaque de 96 puits 5 fois avec 100 pl / puits de PBS. Laissez le volume de PBS correspondant au dernier lavage dans la plaque de 96 puits, que les cellules fixées ne doivent pas sécher.\nL'image de la plaque immédiatement ou plaque de conserver à 4 ° C, à l'abri de la lumière, pour une analyse ultérieure.\nAcquérir des images de la GFP (488 nm, bactéries), Hoechst 33258 (350 nm, la cellule hôte de noyaux), rouge (~ 555 nm, la membrane cellulaire de marqueur) et rouge lointain (~ 615 nm, LAMP1) canaux en utilisant une épifluorescence automatisé microscope équipé avec un objectif 20X. Acquérir 21 champs indépendants par puits pour l'image d'un minimum de 5 000 cellules par échantillon. Appliquer autofocus en utilisant le canal noyaux de la cellule hôte comme une référence. Lorsque vous travaillez avec des bactéries pathogènes infectant un faible pourcentage de cellules hôtes, les utilisateurs peuvent ajuster le nombre de champs indépendants imagées par puits, afin d'obtenir un minimum de 500 cellules infectées à analyser.\n6. Traitement de l'image\nNote: les étapes suivantes sont spécifiques pour l'utilisation de la CellProfiler logiciel d'analyse d'image. Dans tous les cas, la algorit optimalehm pour la segmentation doit être définie expérimentalement et les objets touchant la frontière de l'image doit être éliminée avec la fonction appropriée.\nCharger toutes les images dans CellProfiler.\nUtilisez le module "ImageMath" pour soustraire le canal de GFP du canal Hoechst, pour éviter la détection de colonies Coxiella (également marquées par Hoechst) que les noyaux des cellules de l'hôte dans les étapes suivantes.\nUtilisez le module "IdentifyPrimaryObjects" à noyaux cellulaires secteur d'accueil de l'image résultant de l'étape 6.2. Nommez les objets segmentés «noyaux».\nUtilisez le module "IdentifySecondaryObjects" à cellules segments d'accueil de 555 nm en utilisant les images des noyaux détectées à l'étape 6.3 comme semences. Nommez les objets segmentés «Cellules».\n(Facultatif) Utilisez le module "IdentifyTertiaryObjects" pour soustraire noyaux identifiés à l'étape 6.3 de cellules identifiées à l'étape 6.4. Nommez les objets segmentés cytoplasme "221 ;.\nUtilisez le module "EnhanceOrSuppressFeatures" sur les 615 images nm pour éliminer fond et de faciliter l'identification suivante de compartiments de LAMPE1 positif.\nUtilisez le module "IdentifyPrimaryObjects" sur l'image obtenue à l'étape 6.6 pour identifier les compartiments de LAMPE1 positif. Nommez les objets segmentés "lysosomes".\nUtilisez le module "IdentifyPrimaryObjects» sur l'image à 488 nm à identifier les colonies Coxiella. Nommez les objets segmentés "colonies".\nUtilisez le module "IdentifySecondaryObjects" sur les 615 images nm pour identifier les vacuoles contenant Coxiella-en utilisant les colonies Coxiella détectés à l'étape 6.8 comme semences. Nommez les objets segmentés "de CCVS".\nUtilisez le module "MaskObjects" pour sélectionner CCVs détectés sur des cellules (comme les cellules touchant la frontière de l'image ont été éliminés, certains CCV peuvent être détectés cellules "extérieurs"). Nommez les resObjets Ulting "CCVs filtrées".\nUtilisez le module "MaskObjects" pour sélectionner colonies détectées sur des cellules (comme les cellules touchant la frontière de l'image ont été éliminés, certaines colonies peuvent être détectés cellules "extérieurs"). Nommez les objets qui en résultent "des Colonies filtrées".\nUtilisez le module "MaskObjects" d'associer lysosomes de cellules. Nommez les objets qui en résultent "filtrée Lysosomes".\nUtilisez le module "MaskObjects" pour sélectionner des cellules contenant des colonies Coxiella. Nommez les objets résultant de "cellules infectées".\nUtilisez le module "Relier les objets" pour définir les objets "de CCVS filtrées" que les enfants des objets parents "Cellules". Cela permettra à compter le nombre de VCC / Cell.\nUtilisez le module "Relier les objets" pour définir les objets "des Colonies filtrées" que les enfants des objets parents "Cellules". Cette volontépermettre le comptage du nombre de colonies / Cell.\nUtilisez le module "Relier les objets" pour définir les objets "filtrée Lysosomes" comme les enfants des objets parents «Cellules». Cela permettra à compter le nombre de lysosomes / Cell.\nUtilisez le module "MeasureObjectSizeShape" pour obtenir une analyse morphologique des noyaux, les cellules, CCVS filtré, Colonies filtrée et filtrée lysosomes\nUtilisez le module "MeasureObjectIntensity" pour quantifier la fluorescence de la GFP associé à Filtrée CCV et d'estimer l'efficacité de la réplication au sein de Coxiella CCV.\nEn utilisant les modules "OverlayOutlines" et "SaveImages" superposer les résultats de segmentation et l'image d'origine pour le contrôle de la qualité.\nUtilisez le module "ExportToSpreadsheet" d'exporter la totalité ou une sélection de résultats d'analyse d'image.\n(Facultatif) Utilisez le module "ExportToDatabase" pour analyser les résultatsl'aide de l'analyste de CellProfiler logiciel.\nPour chaque paramètre obtenu, identifier et éliminer les valeurs aberrantes (en raison d'erreurs dans la segmentation d'image), puis calculer les valeurs moyennes par mutant.\nUtilisez Z-scores pour identifier les phénotypes importantes. Considérez phénotypes avec un Z-score> -2 comme non significative, les phénotypes avec un Z-score entre -2 et -4 aussi doux et phénotypes avec un Z-score ≤ -4 aussi forte.\ncombinaisons de terrain de paramètres en fonction des besoins expérimentaux.\nAprès isolement de mutants de transposons, colonie unique d'amorces de PCR est une méthode à haut débit robuste pour identifier le site d'insertion du transposon pour chaque mutant. Cette approche découle d'un protocole typique PCR nichée, mais ici une seule amorce hybridant spécifiquement et / ou de manière non spécifique à l'ADN de matrice en fonction de la stringence de la température de recuit (figure 1A). Les produits de PCR typiques sont constitués de multiples fragments d'ADN, dont la plupart sont spécifiques (figure 1B). L'utilisation d'une amorce de séquençage différent qui apparie droit en amont de l'ITR du transposon, et en aval de la séquence reconnue par l'amorce d'amplification fournit une spécificité pour l'étape de mise en séquence (figure 1C). Logiciel automatisé pour l'analyse de séquence permet d'aligner les séquences obtenues dans le génome de Coxiella fournir l'emplacement exact des insertions de transposons (figure 1c). Toutes les insertions de transposons peuvent être ensuite annotated sur le génome de Coxiella (Figure 1D).\nChaque mutant Coxiella est isolé et amplifié dans des conditions axéniques-2 ACCM milieu soit avant le stockage ou le criblage. La figure 2 illustre un exemple de mutants de transposons 38 à 16 points / ICM Coxiella gènes (figure 2A). Pour évaluer la viabilité des mutants Coxiella, courbes de croissance axéniques sont obtenues par échantillonnage cultures bactériennes pendant 7 jours après l'inoculation et l'application de l'analyse de la concentration bactérienne décrit dans 1.5 (Figurie 2B). Mutants amplifiés sont ensuite incubées avec les cellules épithéliales, en triplicata plaques de 96 puits pendant 7 jours. Tous les mutants générés étant Coxiella GFP-étiqueté, les courbes de croissance intracellulaires sont obtenus en mesurant l'intensité de fluorescence de la GFP de chaque puits, chaque 24 h, et le tracé des valeurs mesurées en fonction du temps (figure 2C).\nIntrles courbes de croissance acellulaires fournissent une analyse quantitative des phénotypes associés à chaque insertion de transposon dans le génome de Coxiella. Pour ajouter des informations qualitatives sur les mêmes mutants de transposons, nous avons opté pour l'acquisition d'image automatisé et d'analyse. Sept jours après l'infection, les plaques sont fixées, traitées pour immunofluorescence comme décrit à 4 et analysés en utilisant un système automatisé, tel que décrit microscope à épifluorescence en 5. logiciel d'analyse d'image automatisée comme CellProfiler (Broad Institute, www.cellprofiler.com ) traite les canaux acquis et indépendamment des segments identifiés des objets d'analyse comparative (figure 3). Ceci permet l'identification et la caractérisation morphologique des noyaux de cellules hôtes, des contours de cellules, des lysosomes et Coxiella colonies (figure 3 panneaux supérieurs). Corréler colonies Coxiella avec les cellules et permet aux lysosomes identificatiet une analyse morphologique spécifique de vacuoles contenant Coxiella (qui sont LAMP1 positif, Figure 3 du panneau en bas à gauche). Corréler colonies Coxiella avec des contours de la cellule hôte permet l'identification et l'analyse morphologique spécifique des cellules infectées (Figure 3 en bas du panneau de centre). Enfin, les 4 canaux sont fusionnés pour l'illustration et à des fins de contrôle de qualité (Figure 3 du panneau en bas à droite).\nLes données obtenues par analyse d'image automatisée peuvent être tracées uns contre les autres pour obtenir des «nuages de points multi-phénotypiques". A titre d'exemple, sur la figure 4A la superficie moyenne (en um 2) de colonies Coxiella est tracée en fonction du nombre de colonies par cellule (figure 4a), afin d'identifier des mutations qui affectent la réplication intracellulaire de Coxiella (phénotype de replication) et / ou la capacité des bactéries d'envahir les cellules hôtes (internalisation phénotype). L'analyse statistique a été utilisé pour définir les régions dans le nuage de points résultant correspondant aux douces (-4 <Z-score ≤ -2) et sévère (Z-score ≤ -4) phénotypes. Mutants ont été observés dans 3 pôles principaux: des mutations qui ont abouti à une croissance intracellulaire défectueux de Coxiella ont été regroupés dans la partie la plus à gauche de la parcelle (figure 4A, rose et points rouges); mutations qui ont affecté Coxiella internalisation dans les cellules ont été regroupés dans la partie inférieure de la parcelle (figure 4A, bleu clair et bleu foncé points) et enfin, des points verts dans la région la plus à droite de la parcelle correspondent aux mutations résultant de phénotypes non significatifs ( Z-score> -2). Fait important, les mutants qui ne parviennent pas à se répliquer mais sont encore capables d'envahir les cellules hôtes, sont détectés après 7 jours d'infection que des bactéries ou des simples, de petites colonies, adjacentes à accueillir les noyaux des cellules (figure 4C, panneau secondes). Par conséquent, la taille de Coxiella "coloentre- "sera affectée de façon significative, mais le nombre de cellules infectées ne varie pas par rapport à des cellules infectées par le WT Coxiella. Au contraire, des mutations qui affectent la capacité de Coxiella à envahir les cellules hôtes se traduisent par une diminution du nombre de colonies / cellule. Lorsque ce nombre est nettement inférieur à 1, cela signifie que, en moyenne, on constate une diminution du nombre total de cellules infectées. En variante, la superficie moyenne (en um 2) de colonies Coxiella peut être tracée en fonction du nombre de cellules hôtes qui survivent infection (figure 4B), pour identifier les mutations qui confèrent une cytotoxicité à Coxiella (phénotype cytotoxique). Comme ci-dessus, l'analyse statistique a été utilisé pour définir les régions dans le nuage de points résultant correspondant aux douces (-4 <Z-score ≤ -2) et sévère (Z-score ≤ -4) phénotypes. La plupart des mutations dépistage n'a pas affecté de façon significative la survie des cellules, indépendamment de la réplication bactérienne dans hôtecellules (figure 3B points verts). 37 mutations survie de la cellule hôte légèrement affectée (figure 3B, les points rouges légers), et 7 mutations étaient particulièrement préjudiciable pour accueillir la survie des cellules (figure 3B, points rouges sombres). S'il vous plaît noter que les paramètres supplémentaires obtenus par l'image procédure d'analyse automatisé peuvent être utilisés pour tirer d'autres cartes, en fonction des besoins expérimentaux.\nFigure 1:. Séquençage et annotation de mutants de transposon Coxiella (A) à l'unité primaire colonie PCR est utilisée pour amplifier des fragments d'ADN contenant le site d'insertion du transposon. Une amorce d'amplification (Amp) est utilisé à la fois comme amorce spécifique et non-spécifique en fonction de la stringence de la température de recuit. (B) de résultat typique de colonie seule amorce PCR. Chaque Reactile produit un certain nombre de fragments de taille variable, dont certaines contiennent le site d'insertion du transposon; certains autres sont amplifiés de manière aléatoire en tant que sous-produits du cycle de PCR à faible stringence. (C) L'utilisation d'une amorce de séquençage (SEQ) qui hybride à la séquence du transposon permet le séquençage des fragments d'intérêt. Logiciel (D) d'analyse de séquence permet l'annotation automatique des insertions de transposons sur le génome bactérien. S'il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nFigure 2:. Axénique et la croissance intracellulaire de mutants de transposons Coxiella (A) Dans l'écran de pilote, nous avons isolé, séquencé et projeté 38 mutants de transposons dans 16 g de baseEnes du système dot / ICM sécrétion Coxiella (indiqués en rouge). (B) Afin d'évaluer la viabilité de chaque mutant de transposon, la croissance de chaque isoler dans un milieu de culture axénique est surveillé de plus de 8 jours à l'aide d'un agent de fluorescence taggés intercalant d'ADN. (C) Pour chaque mutant est ensuite utilisé pour infecter des cellules épithéliales. Comme le transposon possède une cassette de la GFP, la croissance bactérienne intracellulaire est surveillé de plus de 7 jours de l'infection en suivant les variations de fluorescence de la GFP associé à la réplication Coxiella, en utilisant un lecteur de microplaques. S'il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nFigure 3: analyse d'image automatisée des infections Coxiella Une auto.accouplée microscope à épifluorescence est utilisé pour l'image 21 positions par puits en triple de plaques à 96 puits. Les segments de logiciels d'analyse d'images objets dans chaque canaux acquis pour la quantification et l'analyse. Dans tous les cas, les objets touchant la frontière des images sont exclus. (A) Le canal Hoechst est utilisé pour identifier les noyaux des cellules de l'hôte (entouré en vert). (B) Ceux-ci sont utilisés comme semences pour identifier les contours de la cellule hôte dans le canal Cy3 (la position des noyaux est entouré en bleu, les contours de cellules sont en vert). (C) Le canal Cy5 est utilisé pour identifier les compartiments de LAMPE1-positive (dans le cercle vert); seulement les objets inclus dans les contours de cellules identifiées précédemment (en rouge) sont retenus pour l'analyse d'image. (D) Le canal de la GFP est utilisé pour identifier les colonies de Coxiella (entouré en vert). (E) corrélation colonies Coxiella avec des compartiments de LAMPE1 positif permet l'identification de Coxiella (F) en corrélation avec des contours Coxiella colonies de cellules permet l'identification de cellules infectées (de pseudocolored). (G) Les images acquises dans les 4 canaux de fluorescence (correspondant à colonies Coxiella (vert), des noyaux de la cellule hôte (bleu), la membrane de la cellule hôte plasma (gris), les compartiments de LAMPE1-positif (rouge)) sont fusionnés et utilisée pour l'illustration et de la qualité contrôle. Échelle barres 10 um. S'il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nFigure 4: l'identification à grande échelle des facteurs impliqués dans Coxiella hôte / pathogène interagissentions. (A) Le Quartier moyenne (en pm 2) des colonies Coxiella est tracée contre le nombre relatif de colonies par cellule, afin d'identifier et de réplication internalisation phénotypes d'intérêt. Les points verts représentent phénotypes qui dévient de WT Coxiella par un Z-score> -2 (non significatif). Points roses et bleu clair représentent réplication et de l'internalisation des phénotypes respectivement, avec un Z-score entre -2 et -4 (phénotypes bénins). Points bleu foncé Rouge et représentent phénotypes avec un Z-score ≤ -4 (phénotypes forts). (B) La surface moyenne (en um 2) de Coxiella colonies a été tracée en fonction du nombre total de cellules (infectées et non infectées) qui ont survécu 7 jours suivant l'infection pour estimer l'effet cytotoxique résultant de la insertions de transposons. Les points verts représentent phénotypes qui dévient de WT Coxiella par un Z-score> -2 (non significatif). Points roses représentent cytotoxique phenotypes avec un Z-score entre -2 et -4 (phénotypes bénins). Les points rouges représentent les phénotypes cytotoxiques avec un Z-score ≤ -4 (phénotypes forts). Les flèches indiquent mutants illustrés par la lettre minuscule correspondante de C (C) des images représentatives de la réplication, l'internalisation et phénotypes cytotoxiques. Dans tous les cas, les noyaux de cellules hôtes sont en rouge, les colonies sont Coxiella en vert. Échelle barres 50 um. S'il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.\nL'étude des interactions hôte / pathogène a prouvé être une méthode remarquable pour comprendre les infections bactériennes et développer des stratégies alternatives pour contrer les maladies infectieuses. Toutefois, en raison de la diversité des stratégies élaborées par différents pathogènes bactériens, l'identification et la caractérisation des facteurs de virulence bactériens et des voies de signalisation hôte qui sont ciblés au cours des infections représentent un véritable défi. Cela nécessite le développement de nouvelles approches pour l'identification à grande échelle des principaux hubs d'interaction hôte / pathogène. Le développement récent de, à haut débit innovantes et des techniques de criblage à haut contenu représente une ressource inestimable qui peut être adapté à l'étude des bactéries pathogènes intracellulaires 15. Ici, nous avons utilisé la zoonose bactérienne pathogène Coxiella burnetii comme un modèle à développer des approches de dépistage qui combinent mutagenèse de transposon et des essais basés sur la fluorescence. Importantly, cette méthode de dépistage permet la surveillance simultanée de plusieurs étapes du cycle intracellulaire Coxiella, fournissant un aperçu global des stratégies développées par cette bactérie d'envahir, de reproduire et de persister dans les cellules infectées.\nL'approche décrite ici est basée sur deux techniques bien établies, la mutagenèse de transposon et des essais basés sur la fluorescence, qui ont été appliquées avec succès à l'étude des agents pathogènes bactériens. La combinaison de ces techniques dans le contexte des écrans à haut débit / haute contenu nous permet d'évaluer les effets d'un nombre élevé de mutations bactériennes en analysant un nombre très élevé d'événements (typiquement 15 000 cellules infectées par des mutations bactériennes sont imagées et analysées). Ceci fournit une analyse statistique importante d'événements tels que l'invasion bactérienne des cellules hôtes et la réplication intracellulaire, qui sont, par nature, soumises à une forte variabilité. Il est important de noter que les lignées cellulaires autres que epithelial peuvent être utilisés pour ce type de dépistage. Toutefois, les cellules epitheliales plates et larges sont optimales pour l'analyse d'images comme des organelles de cellules hôtes sont plus faciles à détecter. Parce que la majorité des microscopes automatisés peut traiter automatiquement un grand nombre de plaques, il n'y a pratiquement pas de limites au nombre de mutants qui peut être projeté simultanément. En fonction de l'agent pathogène, l'utilisateur peut privilégier l'utilisation d'une épifluorescence ou un microscope confocal. Le moment de l'acquisition de l'image est essentiellement dépendre de la sensibilité de la caméra du microscope, sur le nombre de champs par puits et acquises sur le nombre de canaux acquises par le champ de vision. L'utilisateur peut décider comment ajuster ces facteurs pour optimiser le protocole de dépistage. A titre d'exemple, nous imager une plaque de 96 puits / h en utilisant les conditions indiquées au point 5.1. L'analyse d'images dépend largement de la machine (ou groupe de machines) utilisé. Nous utilisons un 12-core (2 x 3,06 GHz 6-Core), 48 Go de RAM poste de travail. Cette machine nécessite environ 40 min pour analyser les images acquises d'une plaque.\nUn aspect important à prendre en compte lors de l'élaboration de ces tests est la mise en place de la nouvelle (ou l'optimisation des protocoles existants) pour permettre la manipulation et le traitement d'un grand nombre d'échantillons. Un exemple typique est le développement de l'approche PCR de l'amorce de colonie unique, qui nous a permis d'amplifier rapidement et fragments séquence Coxiella ADN contenant le site d'insertion du transposon chaque, à partir de très petits échantillons. Basé sur notre expérience, la polymérase haute fidélité doit être soigneusement sélectionnés et testés afin d'obtenir des résultats reproductibles. La seule limitation de cette approche peut se cacher dans l'observation que, dans la majorité des cas, environ 30% des échantillons traités ne sont pas exploitables, soit en raison de la PCR ou les étapes de séquençage. Cependant, étant donné que l'isolement des nouveaux mutants de transposons Coxiella est pas une étape de limitation de vitesse, cela ne repré pasenvoyé un enjeu majeur. De même, le développement d'un test fiable de quantifier la concentration bactérienne des stocks mutantes a été la clé de cette approche. En raison de la tendance de Coxiella d'agréger quand en suspension, l'utilisation des lectures de densité optique est pas applicable pour le calcul de la concentration de cultures Coxiella et la seule alternative existante était PCR quantitative (qPCR). Ici, l'utilisation d'un agent intercalant d'ADN marqués par fluorescence significativement accélérer la quantification des bactéries.\nCette approche peut également profiter de l'utilisation de lignées cellulaires stables exprimant des marqueurs fluorescents pour plusieurs compartiments intracellulaires selon l'agent pathogène utilisé. Un autre aspect important est l'utilisation de milieux de culture cellulaire dépourvu de rouge de phénol. Nous avons constaté que cet indicateur de pH a une fluorescence naturelle couvrant le spectre rouge et vert qui sature le signal enregistré sur le lecteur de fluorescence automatisé.\nTa stratégie présentée ici repose sur la mutagenèse aléatoire transposon. Pour les mutants d'intérêt, nous vous recommandons de valider transpositions uniques (et clonalité) en utilisant transfert de Southern et amplifications PCR du site d'insertion du transposon.\nOutre l'équipement décrit dans la section de protocole, équipes intéressées à l'aide de l'approche de dépistage présenté ici, auront grand avantage dans la mise en place d'une base de données relationnelle pour la collecte de données, un serveur pour le stockage des données et une station de travail pour l'analyse rapide des images.\nFait important, le procédé décrit ici est approprié pour l'étude d'autres agents pathogènes bactériens intracellulaires fourni un procédé de mutagenèse aléatoire existe pour l'agent pathogène, des lignées de cellules peuvent être infectées par l'agent pathogène et celui-ci affiche un phénotype spécifique au cours de l'infection.


Review Conference: Leaders mondiaux lancent un appel à soutenir la Convention sur l’interdiction des mines antipersonnel et pour que d’autres nations les rejoignent dans leurs efforts vers monde libre de mines antipersonnel\nLeaders mondiaux lancent un appel à soutenir la Convention sur l’interdiction des mines antipersonnel et pour que d’autres nations les rejoignent dans leurs efforts vers monde libre de mines antipersonnel\nNew York, le 23 octobre 2009 – La Colombie, la Norvège, la Suisse et les représentants de la société civile ont demandé aux leaders mondiaux d’apporter leur soutien à la Convention sur l’interdiction des mines antipersonnel et de se rallier à l’objectif d’un monde sans mines antipersonnel. L’appel à l’action a été lancé pendant une réunion aux Nations Unies à New York. La réunion est un des événements qui se déroule avant Le Sommet de Carthagène pour un monde libre de mines antipersonnel, nom donné à la deuxième Conférence d’examen de la Convention.\n« Nous sommes déterminés à faire la promotion de l’application intégrale et de l’universalisation de la Convention. J’espère que d’avantage d’Etats vont se joindre à nous pour que nous puissions nous rapprocher de notre objectif: un monde libre de mines antipersonnel » a dit l’Ambassadeur Suisse Jürg Streuli, Président en exercice de la Convention.\nPendant la réunion il a été noté que l’utilisation des mines antipersonnel dans les conflits autour du monde persiste, provoque toujours de grandes souffrances humaines et freine le développement après les conflits.\nLa Suisse a demandé officiellement, à travers une résolution de l’ONU, que les Etats qui n’ont pas encore adhéré à la Convention fournissent volontairement des informations pour que l’action anti mines au niveau mondial soit plus efficace.\n« Nous devons envoyer un signal fort pendant le Sommet de Carthagène pour un monde libre de mines antipersonnel qui montre que nous sommes en marche pour éliminer ce fléau des mines »\nMême si beaucoup de progrès ont été accomplis dans le cadre de la Convention sur l’interdiction des mines antipersonnel, il reste beaucoup de défis. Il y a encore des Etats qui ne font pas partie de la Convention, tels que la Chine, l’Inde, la Corée du Nord, le Pakistan, la Russie et les Etats-Unis qui ont d’importants stocks de mines.\n« C’est le moment pour tous ceux qui ne font encore partie de la Convention de se ranger du bon côté de l’histoire et de l’humanité », a dit Steve Goose, of Human Rights Watch et Chef de délégation de la Campagne internationale pour interdire les mines (ICBL). « La société civile voit le Sommet de Carthagène comme un moment clé dans la vie de la Convention. C’est le moment durant lequel tous les Etats doivent réaffirmer leur engagement à éradiquer toutes les mines antipersonnel, celles enfouies dans le sol ou celles maintenues en stocks – de la surface de la terre ».\nGoose a fait ses déclarations au nom de l’ICBL, un réseau regroupant plus de 1.200 organisations non gouvernementales dans 70 pays et qui a co-reçu le Prix Nobel de la Paix pour son travail en faveur d’un monde sans mines.\nLa Convention sur l’interdiction des mines antipersonnel\nLa Convention sur l’interdiction des mines antipersonnel a pour objectif d’éradiquer l’emploi des mines antipersonnel et de faire cesser les souffrances causées aux victimes. Les Etats qui adhèrent à la Convention s’engagent à ne plus employer de mines et à assister les victimes de mines. 156 Etats sont parties à la Convention. Plus de 1,000 personnes, y compris des Chefs d’Etat et de Gouvernement, sont attendus au Sommet en Colombie. Les délégations vont examiner le travail accomplis par les Etats parties pour éradiquer l’emploi des mines antipersonnel et assister les victimes de mines. Le Plan d’action de Carthagène qui est présenté au sommet se concentrera sur les défis qui subsistent tels que le nettoyage de champs de mines dans le monde et l’assistance aux victimes de mines.\nPour obtenir des photos, logos, vidéos et autres matériels de presse, voir www.CartagenaSummit.org/press-room ou contactez Laila Rodriguez au 1-(201) 467 5009 ou 011-41-22-906-16-69. Les accréditations de la presse au Sommet de Carthagène doivent être faites sur le site suivant : www.CartagenaSummit.gov.co


Columbia Street Elite Sacoche à bandoulière 20l, shark sur CAMPZ.fr !\nColumbia Street Elite Sacoche à bandoulière 20l, shark\nColumbia Street Elite Sacoche à bandoulière 20l, shark (2020)\nCe sac Columbia Sling Pack est parfait pour la ville car il est aussi hydrofuge. Il est doté d'une poche arrière rembourrée, qui renforce votre propre dos et vous procurera un confort de port confortable. La bandoulière qui traverse le dos et la sangle de poitrine qui se ferme garantissent une bonne tenue et ne glisse pas. Avec la ceinture de hanche amovible et la poignée de transport, vous pouvez également les ajuster en fonction de votre poids et de vos besoins.\nPour plus de protection et pour vous garder à l'extérieur dans l'obscurité, le sac comporte des réflecteurs, des fermetures éclair réfléchissantes et un sifflet de sauvetage. Ce sac Sling Pack fonctionnel dispose non seulement de compartiments intérieurs différents et pratiques, dans lesquels vous pouvez également ranger un réservoir d'eau de 3L, mais aussi d'un compartiment intérieur rembourré pour ordinateur portable, qui peut facilement accueillir un ordinateur portable de 15 pouces. Avec compartiment secret, sangles de transport à l'extérieur et compartiment intérieur avec fermeture éclair. Logo Columbia devant et sur le côté.\nLa bandoulière transversale maintient le sac confortablement sur le dos\nFermeture éclair imperméable YKK\nCompatible avec le système d'abreuvement 3L\ndossier rembourré en mousse pour plus de confort et de sécurité\nSac à bandoulière, Sac pour ordinateur portable\nTaille (L x P x H): : 45,7 x 26,7 x 17,8\n1 compartiment rembourré pour ordinateur portable, 1 compartiment principal, 1 poche zippée\nSac à bandoulière Columbia


Crémone : charge locative ou propriétaire - Droit-Finances\nCrémone : charge locative ou propriétaire\nMarlymu - 25 juil. 2008 à 17:03\nDe passage - 22 sept. 2010 à 14:15\nJ'habite au rez de chaussée d'un immeuble géré par une société de HLM/ILM. Ma porte fenêtre donnant sur le balcon en prise directe avec la rue ne fonctionnait plus.\nJ'ai demandé à mon syndic qui a fait venir une entreprise pour identifier le problème.\nLe spécialiste a confirmé que la crémone devait être remplacée, on ne pouvait la réparer.\nIl a établit un devis et l'a envoyé au syndic qui a envoyé un bon de commande le 4 juillet à l'entreprise pour effectuer les travaux.\nEn date du 11 juillet, le syndic m'a adressé un mail en me disant que le décret de 1987 prévoyait que les réparations de crémones étaient à la charge des locataires et qu'en conséquences il ne me prendrait pas en compte la réparation. Il s'agit d'une facture de 474,00 euros ! Leur refus est notifié après avoir adressé le bon de commande d'une part, et d'autre part lorsque je lis le décret de 87 : il est noté que les menues réparations de poignées et de crémones sont à la charges du locataire ainsi que le remplacement des boutons,v is, etc.\nIl n'est pas noté que le remplacement de la crémone en fait partie et il ne s'agit pas là d'une menue réparation mais d'un remplacement. Qu'en pensez vous ? Comment dois-je me défendre ? Merci de votre aide et de vos conseils.\nCremone charge locataire\nReparer une cremone de porte - Meilleures réponses\nCrémone locataire ou proprietaire - Meilleures réponses\nCHARGES LOCATIVES? ✓ - Forum - Immobilier\nCharges locataire - Conseils pratiques - Location immobilière\n25 juil. 2008 à 17:06\nMarchait elle quand vous avez pris possession des lieux ? si oui, aie aie aie...c'est pour vous !\n21230 internautes nous ont dit merci ce mois-ci\nJe suis exactement dans la même situation avec un devis de 297 euros...Avez vous eu gain de cause?\n22 sept. 2010 à 14:15\nNormalement c'est au HLM de changer la crémone.


Adsense – Google Arrête Le Paiement Via Western Union - Doingbuzz\nAdsense – Google arrête le paiement via Western Union\nAccueil HIGH TECH Adsense –...\n23/08/2020 à 03h07 par La redaction\nC’est le message envoyé à tous les détenteurs de compte Adsense. La filiale de Mountain View vient d’annoncer à ses clients que désormais, en 2021, il arrêtera d’effectuer des paiements via Western Union, spécialisée dans les transferts d’argent internationaux pour les particuliers et les entreprises.\nLes raisons de cette rupture de contrat n’étant pas évoquées, Google Payments soutient que ses clients continueront à recevoir leurs paiements via d’autres plateformes.\n« Vous devez vous connecter à votre compte (Google AdSense, Google AdMob, Google Ad Manager), et ajouter ou sélectionner un autre mode de paiement » soutient Google qui explique les méthodes pour la configuration d’un nouveau mode de paiement dans l’une des plates-formes suivantes\nGoogle vient de couper court à une collaboration qui a duré 13 ans avec WU. Le partenariat avec les deux structures avait débuté en Avril 2007\n2021 google adsense Western Union


Afrique: Les vieux frigos européens, véritables polluants en Afrique - allAfrica.com\nAfrique: Les vieux frigos européens, véritables polluants en Afrique\nLes vieux frigidaires qui ne peuvent plus être vendus en Europe finissent parfois en Afrique. Au Cameroun, la gestion de ces vieux appareils est devenue un casse-tête pour les autorités.\nLes convois sont plus ou moins légaux. Quoi qu'il en soit, les vieux frigidaires jetés par les foyers européens finissent parfois en Afrique, où ils sont revendus sur le marché de l'occasion. Au Cameroun, la gestion de ces vieux appareils est devenue un casse-tête pour les autorités. Un casse-tête qui s'avère aussi être un véritable problème environnemental pour le pays. Des milliers de tonnes de gaz et autres produits toxiques se retrouvent à l'air libre.\nUne chute vertigineuse des appareils recyclés\nAu centre de contrôle Pan-environnemental par exemple, on récupère des appareils à des fins de recyclage, après leur seconde utilisation en Afrique. 22.000 réfrigérateurs ont été amené au centre en 2014. En 2015, le nombre d'appareils récupérés est descendu à 12.000 puis à 1.500 en 2016. Cette chute vertigineuse témoigne de l'abandon des bonnes pratiques par nombre d'utilisateurs qui laissent leurs vieux appareils sur le bord des routes, par ignorance ou par manque de volonté de payer les frais de récupération qui sont de 1.000 francs CFA par appareil.\nAinsi des milliers de tonnes de gaz, parfois nocifs, finissent dans l'air. Certains éléments des frigos doivent en plus normalement être exportés à nouveau vers l'étranger, car non gérables localement pour destruction. En trois ans, Pan-environnemental, qui n'est la seule entreprise de ce type au Cameroun, aurait exporté vers la France 50 kg d'éléments de ce type.\nL'occasion, produit phare\nLa société Pan-environnemental peut intervenir aussi à l'achat des appareils, pour y apposer des autocollants environnementaux. Mais là encore ce contrôle n'est souvent pas réalisé."La plupart des frigos qu'on voit abandonnés sont ceux qu'on achète dans les brocantes et ils ne sont pas passés chez nous avant", estime Tiku Mirabelle Ayuk. L'occasion est d'ailleurs un marché très important dans le pays. "La majorité des frigos neufs vient des pays asiatiques. Et la tôle n'est pas aussi solide que ceux qui viennent d'Europe", explique Pierre Marie Assongfack. Importateur de frigidaires de seconde main depuis 20 ans, installé à Douala - Akwa, il vend ses appareils entre 70.000 et 190.000 francs CFA.\nLe ministère de l'Environnement contrôle les appareils déclarés dans ses services avant l'importation, celle-ci étant soumise à la délivrance d'un visa technique. Mais les importateurs réussissent toujours à faire passer clandestinement des appareils dangereux au port de Douala. "Ils ont mille contacts dans leurs poches. Des fois les appareils sont dissimulés dans des conteneurs qui sont supposés ne pas en contenir, puis ils sont dissimulés dans les malles arrière des véhicules et ainsi de suite", raconte Sidi Baré, délégué régional du ministère de l'Environnement.\nLe port de Douala dessert également le Tchad et la République centrafricaine. Mais les appareils électroménagers contenant des gaz appauvrissant la couche d'ozone sont de plus en plus rares sur le marché, suite aux mesures environnementales prises dans les pays producteurs.


W3C : HTML5 pas encore bon à déployer\nLe vendredi 08 Octobre 2010 à 11:13 par Jérôme G. | 6 commentaire(s)\nLe W3C appelle à la prudence concernant HTML5. Des problèmes d'interopérabilité persistent et sa mise en production n'est pas recommandée.\nLe W3C, dont les recommandations ont vocation de standards du Web, aime à associer HTML5 avec le Web de demain. Une association visiblement toujours d'actualité pour Philippe Le Hégaret, un des responsables du consortium.\nEn 2007, le W3C a repris le travail entamé sur HTML5 trois ans plus tôt par le Web Hypertext Application Technology Working Group. À ce jour, la spécification reste encore à finaliser. Pourtant, HTML5 est presque devenu un " argument de vente ", notamment du côté des éditeurs de navigateurs. Tous les principaux navigateurs s'y sont mis dans le cadre d'un support variable en fonction de chacun, le dernier en date étant Microsoft avec la bêta d'Internet Explorer 9.\nL'emballement autour de HTML5 a principalement débuté avec l'arrivée de la balise vidéo qui permet de lire directement depuis le navigateur une vidéo, sans aucun plugin à installer. Le PDG d'Apple, Steve Jobs, a alors profité de l'occasion pour tirer à boulet rouge sur Flash d'Adobe, décrétant de manière bien précipitée son arrêt de mort.\nInterrogé par InfoWorld, Philippe Le Hégaret estime que des technologies comme Flash Player et Silverlight de Microsoft ont encore de beaux jours devant elles, et il déclare que " HTML5 n'est pas encore prêt pour une mise en production ". " C'est encore un petit peu tôt pour le déployer parce que nous rencontrons des problèmes d'interopérabilité ".\nPar ces problèmes, il fait notamment allusion au contenu vidéo avec des navigateurs et appareils qui ne gèrent actuellement pas tous HTML5, et un navigateur comme IE6 reste par exemple encore très utilisé. HTML5 est aussi confronté à des problèmes au niveau du codec vidéo à recommander pour la balise video, une question qui devrait rester sans réponse pour la prochaine spécification.\nUne spécification et des API encore susceptibles de changer, Philippe Le Hégaret n'invite pas réellement les développeurs Web à se tourner d'ores et déjà vers HTML5. Pas sûr cela dit que son message soit entendu. Il estime que HTML5 aura fait le plein de fonctionnalités d'ici mi-2011, et que l'approbation finale ne devrait intervenir que dans deux à trois ans.\nLes arguments de Philippe Le Hégaret n'ont pas convaincu tout le monde. Actuellement vice-président engineering chez Facebook et connu pour avoir longtemps œuvrer au sein de Mozilla, Mike Schroepfer a déclaré : " Ce n'est pas comme si les navigateurs existants étaient totalement stables ou interopérables. C'est une raison idiote pour ne pas utiliser les avancées de HTML5 ". Réponse de Philippe Le Hégaret : " C'est bien d'expérimenter avec HTML5 et les implémentations existantes, mais il ne faut pas espérer la stabilité ".\nLe 08/10/2010 à 14:45 #698461\nBah, c'est le problème des Webmaster si c'est pas stable, suffit de ne pas utiliser les fonctions qui plantent...\nEt puis quand on voit le site de microsoft pour IE9 je ne vois pas ou est l'instabilité hein...\n> Bah, c\_'est le problème des Webmaster si c\_'est pas stable, suffit de ne pas utiliser les fonctions qui plantent... > Et puis quand on voit le site de microsoft pour IE9 je ne vois pas ou est l\_'instabilité hein...\nLe 08/10/2010 à 18:55 #698641\nQuand il parle de stabilité ça n'a rien à voir avec le fait que ça risque de planter le navigateur.\nCe qu'il veut dire c'est que certaines parties du standard HTML 5 sont encore sous forme de brouillon et que si les constructeurs les implémentent dans les navigateurs actuels, c'est bien pour expérimenter mais qu'elles risque certainement de changer dans le futur. Alors on se retrouverai avec des implémentations du standard qui ne correspondraient pas à la définition de celui-ci. En gros un beau chantier au niveau de la compatibilité comme ce fût le cas à l'époque de la 1ère guerre des navigateurs. Mais cette fois-ci ce serait une situation paradoxale puisqu'au lieu que le problème provienne du manque de standard et des fonctionnalités propriétaires des navigateurs cela viendrait du fait que les constructeurs auraient voulu implémenter un standard (HTML5) trop prématurément (avant qu'il soit validé par le W3C).\n> Quand il parle de stabilité ça n\_'a rien à voir avec le fait que ça risque de planter le navigateur. :smile: > > Ce qu\_'il veut dire c\_'est que certaines parties du standard HTML 5 sont encore sous forme de brouillon et que si les constructeurs les implémentent dans les navigateurs actuels, c\_'est bien pour expérimenter mais qu\_'elles risque certainement de changer dans le futur. Alors on se retrouverai avec des implémentations du standard qui ne correspondraient pas à la définition de celui-ci. En gros un beau chantier au niveau de la compatibilité comme ce fût le cas à l\_'époque de la 1ère guerre des navigateurs. Mais cette fois-ci ce serait une situation paradoxale puisqu\_'au lieu que le problème provienne du manque de standard et des fonctionnalités propriétaires des navigateurs cela viendrait du fait que les constructeurs auraient voulu implémenter un standard (HTML5) trop prématurément (avant qu\_'il soit validé par le W3C).\nLe 09/10/2010 à 01:15 #698861\n"IE6 reste par exemple encore très populaire"\n> \_"IE6 reste par exemple encore très populaire\_" > > Ce qu\_'il faut pas lire comme CONNERIES.\nLe 09/10/2010 à 01:20 #698871\nCette histoire d'interopérabilité est également une belle foutaise de technicien qui lève jamais la tête de ses papiers. Le premier player multimédia venu peut utiliser les codecs dispos sur le système, question de qualité de code. Rien à pêter si les navigateurs buguent, une appli ça se patche, ça s'upgrade. Tout ça parce qu'ils sont pas foutus de trancher pour (ou pas) les formats ouverts.\n> Cette histoire d\_'interopérabilité est également une belle foutaise de technicien qui lève jamais la tête de ses papiers. Le premier player multimédia venu peut utiliser les codecs dispos sur le système, question de qualité de code. Rien à pêter si les navigateurs buguent, une appli ça se patche, ça s\_'upgrade. Tout ça parce qu\_'ils sont pas foutus de trancher pour (ou pas) les formats ouverts.\nLe 09/10/2010 à 11:58 #698931\nBenh, dans beaucoup de boites (comme la mienne par exemple et qui est loin d'être petite car faisant partie du CAC40), IE6 reste le navigateur de référence. Donc ça fait beaucoup de postes encore avec IE6 en prod... Ce n'est donc pas une connerie.\n> > @nemO > > Benh, dans beaucoup de boites (comme la mienne par exemple et qui est loin d\_'être petite car faisant partie du CAC40), IE6 reste le navigateur de référence. Donc ça fait beaucoup de postes encore avec IE6 en prod... Ce n\_'est donc pas une connerie.\nLe 10/10/2010 à 20:56 #699331\nC'est pas la définition de populaire!\n> C\_'est pas la définition de populaire!


Location gîte pour des groupes dans les Ardennes dans un endroit calme - Manhay\nLocation gîte pour des groupes dans les Ardennes dans un endroit calme\nLocation de vacances - Gîte à Manhay\nDescription : Gîte à Manhay\nLocation Maison de vacances Coin Tranquille, Manhay, Ardennes\nLe Gite "Coin Tranquille" est spécialement aménagé pour les grands groupes : cuisine industrielle, salle à manger et salon spacieux et fonctionnels. Le logement se répartit sur 3 étages avec un total de 16 chambres à coucher ,11 salles de bain, un sauna... La maison se situe dans un endroit calme à proximité des bois et prés. La terrasse couverte et le jardin vallonné sont très appréciables.\nLa Fosse se situe près de la Baraque Fraiture; au coeur d’un région généreusement boisée. Les enfants, … sportifs et les promeneurs y trouveront tous les avantages d’un environnement sain et naturel.\nFacilement accessible, la commune de Manhay se trouve à moins de 20 minutes des centres touristiques bien connus de La Roche, Durbuy, Vielsalm, Coo, … Rendez-vous sur le site de la maison : http://www.maisonvac.be Lire moins Lire la suite\nMinimum 7 nuits 1 726,67 € Vendredi\nLocation de vacances - Gîte - Manhay, Luxembourg, Région wallonne, Belgique\nGare ferroviaire : Bomal 20 km\nAutoroute (sortie) : E25 7 km\nChambre "Chambre 8" pour 4 personnes avec 2 Lits superposés.\nChambre "Chambre 9" pour 4 personnes avec 1 Lit superposé, 1 Lit double.\nChambre "Chambre 10" pour 4 personnes avec 2 Lits doubles.\nChambre "Chambre 11" pour 4 personnes avec 2 Lits doubles.\nContacter Christine Parle allemand, anglais, français, néerlandais


[Map] The Last Hope: The Lightbringer [1.12.2] - Minecraft-France\nVous êtes ici : Accueil > Maps > [Map] The Last Hope: The Lightbringer [1.12.2]\n[Map] The Last Hope: The Lightbringer [1.12.2]\nIsoclem13 mai 2018\nAuteur : SpielmitStil\nCela faisait longtemps que la communauté Minecraft n’avait pas proposé une aventure originale et longue. En effet, celles-ci prennent énormément de temps à être mises au point et même souvent abandonnée par leurs constructeurs ayant perdu leur motivation. Fort heureusement, il nous reste un dernier espoir : The Last Hope: The Lightbringer.\nPlaisanterie à part, c’est un nouveau chef-d’oeuvre que nous offre SpielmitStil ainsi qu’un concept que nous n’avions pas l’habitude de voir. Rappelez-vous, en décembre dernier, nous vous présentions The Shadowmaker une carte qui avez beaucoup plu et suite de l’aventure que nous vous proposons aujourd’hui.\nC’est donc au travers de plus de 70 niveaux que votre aventure se déroulera. En réalité, ce The Last Hope: The Lightbringer ne peut plus être considéré en tant que map, mais littéralement en tant que jeu à part entière. Que ce soit par les merveilleux décors parmi lesquels vous évoluerez ou par la bande son personnalisée ainsi que les diverses mécaniques de jeu apporter à Minecraft.\nL’élément de gameplay principal est donc votre capacité à séparer votre âme et votre corps. Vous pouvez ainsi contrôler l’une des deux parties afin de résoudre les diverses énigmes qui vous barreront la route. Ce simple petit élément permet le renouvellement du gameplay assez régulièrement, à savoir, vous pourrez interagir avec certains objets que si vous utilisez votre âme ou votre corps et vice-versa.\nVotre aventure est composée de 6 chapitres durant lesquels vous en apprendrez un peu plus sur l’histoire au travers plus de 50 textes secrets. Deux fins seront alors disponibles selon vos choix ainsi qu’un monde et plusieurs puzzles bonus qui se débloqueront au fur et à mesure.\nLa carte n’est jouable qu’en solo et peut être finie en moins de 5 heures voire 16 si vous comptez finir The Last Hope: The Lightbringer à 100%. Une fois de plus, assurez-vous de parler anglais, si vous voulez profiter pleinement de la map.\n[1.12.2] The Last Hope: The Lightbringer\n29 février 2020 15 h 46 min\nj’ai fini tout les map de cette franchise et elle est vraiment excellent ! Tout y ait : Un gameplay simple mais extrêmement intéressant. Une histoire a coupée le souffle et un texture pack de qualité ! Vraiment Génial ! A conseiller.\n20 mai 2018 11 h 23 min\nJ’adore ce type de map, super bien faite :)\n16 mai 2018 14 h 50 min\ncette map a l’aire super je la test direct :)


Drôme Ecobiz - Daily Pic, la cantine façon Anne-Sophie Pic\nDaily Pic, la cantine façon Anne-Sophie Pic\nAuthor of the publication : Virginie Perrenot - Date of the publication : 17/06/2014\nAnne-Sophie Pic, lors de l'ouverture de Dailypic le 12 juin 2014.\nLa nouvelle cantine gourmande d’Anne-Sophie Pic a ouvert ses portes le 11 juin place Championnet, en plein cœur de Valence. Le lieu surfe sur la tendance du « fast-food » dans une version haut de gamme qui n’échappe pas à la signature de la Maison PIC : ambiance cosy, verrines en bocaux, produits frais et pâtisseries maisons… « Nous voulons offrir la cuisine du quotidien avec une touche de raffinement, le tout à un prix très abordable », commente la chef valentinoise qui propose le « Pic of the day » (entrée, plat, dessert et boisson) à 14,90€. Avec 36 places assises et très prochainement une terrasse de 25 couverts, le Daily Pic propose également des plats à emporter sous forme de bocaux pasteurisés et consommables jusqu’à 3 semaines, un processus qui aura demandé plus de 3 ans de recherche à la Dame de Pic. Ouverte du lundi au samedi de 9h à 20h et le dimanche de 9h à 13h, la cantine gourmande d’Anne-Sophie Pic ne vous laissera pas sur votre faim.\nEn savoir + : www.facebook.com/dailypicvalence


Porte Nom Boite Aux Lettres | Mille idées sur la belle image de la porte\nVous venez de me dire votre nom. Créer un pseudonyme était une étape importante dans notre développement adolescent. Vous pouvez toujours créer un pseudonyme à utiliser spécifiquement pour cela, mais vous deviez habiter ce personnage à chaque fois que vous l’utilisiez pour la plupart, vous ne pouviez pas diviser votre présence sur Internet en dizaines de profils et noms d’utilisateurs différents peut maintenant parce que AOL unifié les choses autant que possible sous votre pseudonyme.\nQuand tu me dis que tu t’appelles Richard, je ne t’appelle pas Dick parce que c’est trop drôle. Sous les noms de mes autres amis était son nom James Conklin. Au lieu de cela, vous ne devez utiliser que vos initiales ou votre nom de famille. Pour sembler plus plausible, tout ce dont ils ont besoin, c’est le nom d’un de vos voisins, ce qui est assez facile à trouver en regardant la boîte aux lettres d’un voisin ou en faisant un pic à l’adresse.\nSi aucune n’est votre réponse, l’email est votre habitude. Le courrier électronique avait fonctionné pour moi et j’allais bien. Sur le plan personnel, le courrier électronique a ouvert de nouveaux canaux de communication de personne à personne qui ont permis aux idées de se répandre comme jamais auparavant. Deuxièmement, malgré les gros titres qui tentent de nous encercler, le courrier électronique ne meurt pas. L’année où e-mail a commencé à devenir le premier outil de communication en milieu de travail au monde.\nLe courrier est une partie essentielle du flux de travail quotidien de nombreuses personnes et est récemment devenu un espace dans lequel de nombreuses personnes innovent avec des applications telles que Mailbox, N1, et même la boîte de réception de Google. Habituellement, il est constitué d’images et de textes, donc les commerçants ambitieux (et bien financés) seront créatifs et ajouter une touche à leurs pièces de courrier. Il est moins coûteux de livrer le courrier aux boîtes postales (que ce soit dans les centres commerciaux ou les centres communautaires) que de livrer le courrier de porte à porte, en particulier dans de vastes zones. Vous avez pris tous vos mails avec vous depuis la boîte aux lettres.\nVous avez lu notre boîte aux lettres, dis-je, ne faisant aucun effort pour cacher mon irritation. Si votre boîte aux lettres n’est pas équipée d’un cadenas, vous pouvez en acheter un auprès de plusieurs sources en ligne. Une boîte aux lettres peinte d’un vert et blanc luride. Les boîtes aux lettres verrouillables devraient être suffisamment grandes pour que, si le propriétaire est absent pendant plusieurs jours, il puisse accueillir le trop-plein de courrier. Une boîte aux lettres résidentielle est un réceptacle sur le trottoir ou sur un mur qui est utilisé pour recevoir du matériel dans lequel des frais de port sont payés. De nombreuses boîtes aux lettres résidentielles sont disponibles avec un mécanisme de verrouillage intégré.\nVous sortez dans votre boîte aux lettres et trouvez une enveloppe scellée avec votre nom écrit à l’encre noire. Si vous avez une boîte aux lettres, cela ne vous choque probablement pas d’apprendre que 44% des Américains jettent leur courrier, non ouvert. Qui peut utiliser une boîte aux lettres? Seuls les facteurs et factrices autorisés peuvent placer le courrier ou les colis dans la boîte aux lettres. La boîte aux lettres est devenue du fer et du cuivre et de l’étain, cachée dans les montagnes de brique rouge mais ne perdant jamais tout à fait la couleur verte étrange. Les supports de boîte aux lettres simples prennent moins d’une heure, la taille maximale des boîtes aux lettres de route peut prendre jusqu’à 2 heures. Avant de pouvoir lier votre nouvelle boîte aux lettres à MeetingRoom365, vous devrez réinitialiser le mot de passe pour la nouvelle boîte aux lettres. Vous pouvez trouver une nouvelle boîte aux lettres pour votre maison de 10 $ à 100 $.\nLa porte grinça et un autre manteau blanc entra dans la pièce. Quelqu’un frappa bruyamment à la porte métallique. En réalité, si quelqu’un est à votre porte à la recherche de leur chien perdu, il devrait être l’un de vos voisins, pas quelqu’un que vous n’avez jamais rencontré. Lorsque vous entrez ou sortez du garage, arrêtez-vous et assurez-vous que la porte du garage est complètement fermée avant de partir ou de vous garer pour empêcher les visiteurs indésirables de se glisser dans le bâtiment.\nLa porte était déverrouillée, alors il entra librement dans la pièce. Imaginez arriver à la maison une nuit après le travail et il y a une note Post-it sur la porte de votre appartement avec le site internet votre nom-ici. Pourtant, personne n’est venu à la porte. Si la porte est ouverte, le paquet devrait être laissé! Immédiatement après son ouverture, nous sommes présentés à l’un des attaquants de la Bride, Vernita Green (joué par Vivica Fox). Par exemple, cibler notre voisin dans l’appartement d’à côté serait facile. Les bonnes nouvelles, vous ne devez pas peindre votre homejust tout à fait peindre votre porte d’entrée, les garnitures ou les volets (ou tous les trois!)\nLes messages de boîte aux lettres doivent être soignés et faits de matériel pouvant supporter adéquatement la boîte aux lettres. Le post de boîte aux lettres peut ne pas représenter des effigies ou des caricatures qui peuvent dénigrer ou ridiculiser n’importe qui. Le poteau de la boîte aux lettres sur le trottoir devrait être placé à une distance de 6 à 8 pouces de la bordure et d’environ 42 à 46 pouces de hauteur entre la pelouse et le haut de la boîte aux lettres installée sur le trottoir et non le dessus du poteau.\nPRENOMS et PATRONYMES DU CHEVAL ISLANDAIS Elevage du DOMAINE DE\nLes 29 meilleures images du tableau baptªme bleu lavande gar§on sur\nLe radar boite aux lettres\nGros Promotionnel Broderie De Marque Nom Logo Personnalisé Tissu from porte nom boite aux lettres\nLes 31 meilleures images du tableau Boite aux lettres en bois sur\nBoites Aux Lettres Normalises Cool Botes Aux Lettres Intrieur from porte nom boite aux lettres\n5 pcs ensemble SSTB Londres Rouge Cabine Téléphonique Bus Bo te aux\nLettre Taille Fichier Bo te Décorative Bo te De Rangement avec\nMa bo te lettres en PDF tx éditions de l Envolée from porte nom boite aux lettres\nNon elle ne ment pas Non ce n était pas sa faute Non vous ne\nManuels anciens Picard Mon premier vocabulaire CE1 CE2 Du from porte nom boite aux lettres\nCreer Une Lettre De Motivation from porte nom boite aux lettres\nEtiquette Porte Nom With Etiquette Porte Nom Latest Chevalet Porte\nCasier Coffre fort Garage Outil Mur Bureau Porte Nom Plaques En\nLes 134 meilleures images du tableau bo tes aux lettres sur from porte nom boite aux lettres\nMS816 Triangle Clé Mini Cam Serrure avec Poignée Bo te Aux Lettres\ná  á  à¼½925 Solide Argent Hébreu Police Nom D or Plaqué Collier from porte nom boite aux lettres\nPosted on July 7, 2018 by Linda Hunt Tag\nPosted On July 7, 2018 by Linda Hunt Porte


363 Idées de Sorties et de Visites autour de Chouvigny.\nChouvigny Idées De Sorties Et De Visites\nDes centaines d'idées de sorties et de visites proches de Chouvigny, sorties sportives, caves et dégustations, musées, balades, activités rien de manque.\nNiveau de vie et Categories sociales de Chouvigny\nPlages de Chouvigny, lac, rivière, mer, étang\nTous les Sports possible autour de Chouvigny\nEnseignement supérieur, Parcoursup de Chouvigny\nPlages, lac, rivières, mer, étang de Chouvigny\nAdresse des administrations de Chouvigny:\nIdées de Sorties et de visites proches de Chouvigny\nIdée de Sortie dans la ville de Chouvigny\nUn des chemins les plus pittoresque du Val de Sioule, à l'entrée des gorges de Chouvigny.\nCe parcours vous offre un condensé des Gorges de la Sioule, de belles côtes suivies de descentes techniques, par des singles très rocailleux. Le sentier des murailles ouvre une vue magnifique sur l'ensemble des barres rocheuses surplombant...\nAprès 800 m de grimpette vous arrivez sur les hauteurs à la Grande Lande pour ensuite traverser 2 magnifiques espaces naturels sauvages ; le vallon de la Cèpe puis les bois de Veauce et son célèbre château.\n1,0km de Chouvigny\nIdée de Sortie proche de Chouvigny\nDepuis la rive gauche de la Sioule, vous rejoindrez sa rive droite par le joli pont d'Ebreuil. L'arrivée vous réserve un passage sous le viaduc Eiffel\nChâteau fort du XIIIe siècle situé sur un éperon rocheux à la sortie des Gorges de la Sioule, a appartenu aux Seigneurs de Chouvigny, à la famille La Fayette et enfin au Duc de Morny. Restauré au XXème siècle, ce château se visite...\nLe Saviez Vous ? Sur nos pages Hôtels, vous pouvez trier les hôtels par type mais aussi par nom de grandes chaines hôtelières si vous recherchez par exemple un un hôtel Premiere Classe proche de Chouvigny ou, toujours dans la gamme d'hôtels économiques un Fasthotel, vous pouvez facilement trier les hôtels.\nDans un cadre bucolique, venez faire connaissance avec les animaux de la ferme : les chèvres, les moutons, les ânes, les lapins, les canards, les poules, les oies et Monsieur Cochon! C'est aussi : des animations nature, des balades, des...\nEspace qui accueille plusieurs espèces floristiques, le site abrite un mégalithe. Intégré dans le site Natura 2000, ces landes constituent un remarquable ensemble en surplomb des Gorges de la Sioule.\nLe spot des gorges de la Sioule, escarpé et rocailleux, vous offre 2 parcours : Les terrasses de Chouvigny 9, 5km D+ 480m / De la Sioule aux bois de Veauce 17, 1km D+ 450m.\n2,4km de Chouvigny\nA proximité du bourg, l'étang est ouvert à la pêche avec cartes vendues uniquement sur la commune.\n2,6km de Chouvigny\nBaptême en parapente au sommet du puy de Dôme et la chaîne des Puys avec un moniteur diplôme d'état. En biplace, vous découvrirez les volcans vus du ciel ! Pour tout âge, de 20 à 100 kg. Sur rendez-vous.\n3,7km de Chouvigny\nVisite libre. L'église date du XIIe siècle. ISMH.\nAgréable promenade dans des bois vallonnées entre Nades et La Bosse, point culminant du secteur, sous de grands douglas et de beaux hêtres...\n4,8km de Chouvigny\n5,0km de Chouvigny\nCe plan d'eau est situé à proximité du camping. Activités de sur place : randonnée, pêche. Les paddles ne sont pas autorisés sur le plan d'eau. Baignade surveillée en Juillet et en Août.\n5,5km de Chouvigny\nVenez vivre un moment hors du commun avec un cheval miniature. explorer vos émotions et votre communication. faites de cette expérience un moment inoubliable.\n5,6km de Chouvigny\nVoir la Carte des Idées de Sorties de Chouvigny.\nQuelle est Votre Appréciation de Chouvigny par rapport à la Catégorie Idées de Sorties et de Visites, 5 étoiles étant le plus positif, 1 le plus négatif :\nAméliorer la rubrique Idées de Sorties Chouvigny par votre contribution. Tous les commentaires, analyses, avis et conseils sont utiles.\nL'ensemble des données concernant 363 Idées de Sorties et de Visites autour de Chouvigny. présentées sur ville data sont librement reproductibles et réutilisables que ce soit pour une utilisation privée ou professionnelle, nous vous remercions cependant de faire un lien vers notre site ou d'être cité (source : Ville-data.com).\nLes données de la page 363 Idées de Sorties et de Visites autour de Chouvigny. proviennent de SOURCES : UNWTO, Atout France, Office du tourisme, ministère de la Culture et de la Communication / direction générale des Patrimoines / département de la Politique des publics, Dgcis, enquête SDT, EVE (DGCIS, Banque de France), EFH (INSEE, DGCIS, partenaires régionaux), Acoss, nous les avons vérifiées et mise à jour le vendredi 24 septembre 2021. Le producteur des données émet les notes suivantes :\nVous cherchez une idée de sortie ou de visite proche de Chouvigny ? Nous avons regroupé pour vous tous les lieux à voir et les activités à faire à proximité !\nVille-Data.com sorties Chouvigny\nAvis sur les Écoles primaires du public et du privé de Chouvigny\nListe et carte des écoles Primaires, élémentaires privées et publiques de Chouvigny, nombre d'élèves, adresses. Consultez les Avis sur les écoles primaires de Chouvigny et des environs\nChouvigny : Liste Avis Ecoles Primaires\nLe Guide Essentiel des Terrains de Camping de Chouvigny\nListe et carte de tous les campings de Chouvigny, nombre d'étoiles, les équipements, les animations, leurs sites internets, les prix ainsi que les avis et les coordonnées pour votre réservation en camping à Chouvigny.\nChouvigny : Guide des Campings du Coin\nToutes les Salles de Billards et Bowlings de Chouvigny et des envrions\nBowling à proximité de Chouvigny, trouver le bowling le plus proche, liste des salles de billards.\nChouvigny : Bowling à Proximité\nLes Meilleurs Restaurants de Chouvigny et de Vrais Avis, Élisez le meilleur restaurant.\nTous les restaurants de Chouvigny ou dîner. Triez les restaurants selon la cuisine proposée, postez vos avis et votez pour le meilleur resto de Chouvigny\nChouvigny : Tous les Restaurants Avis\nLocalisation et Horaires des Supermarchés de Chouvigny\nLocalisez les Supermarchés de Chouvigny, consultez les horaires d'ouverture et les avis.\nChouvigny : Tous les Supermarchés\n20 Meilleurs collèges de Chouvigny, Classement 2021\nClassement des collèges de Chouvigny, résultats du brevet, options, nombre de mentions et nombre d'élèves.\nChouvigny : Classement des Collèges\n20 Jardins et Parcs à Découvrir Absolument Proches de Chouvigny\nLes Jardins et les Parcs de Chouvigny à visiter. Jardin exotique, jardin japonais ou à la française. Carte des parcs et des jardins à voir à Chouvigny et dans les environs.\nChouvigny : Jardin et Parc à Visiter\nAbsolument Tous Les Gîtes de Chouvigny, votez pour votre gîte préféré.\nAvis, photos et descriptions des gîtes de Chouvigny. Carte de localisation et coordonnées complètes des particuliers pour réserver votre gite.\nChouvigny : Location de Gite\nAbsolument Tous les Hôtels de Chouvigny et de Vrais Avis\nHôtels de Luxe en centre ville ou hôtels économiques à Chouvigny. Liste et carte des Hôtels par chaine Ibis, formule1, Etap hôtel et par nombre d'étoiles. Téléphone avec email pour réserver et avis.\nChouvigny : Tous les Hotels à Proximité


Pascal et Sonia Burri, 2805 Soyhières\nBURRI+TSCHUMI+BENOIT, 2805 Soyhières; collaborateur(s): Pascal Burri\nL'ancienne boucherie du village tombée en désuétude n'était plus habitée depuis cinq ans, elle était à vendre. Par son affectation et sa typologie fort bouleversée aux cours des années, cette ancienne ferme construite vers 1830 ne trouvait acquéreur, jusqu'au jour où, un architecte trop à l'étroit dans son atelier décida de la visiter et fut séduit par une charpente quasi intacte.\nLe volume existant est suffisant pour accueillir un bureau de 6 à 8 personnes sous les combles et un appartement spacieux pour la famille, en duplex. L'organisation intérieure est simple et sans couloirs. Les planchers ont été conservés et le système porteur intérieur datant des années 50 modifié et adapté à une typologie plus contemporaine.\nA l'extérieur, la façade en bois démarque l'annexe construite vers 1930 du bâtiment original en lui redonnant ses proportions d'antan. Côté nord, la devanture de la boucherie a fait place à de petites fenêtres correspondant à l'échelle et l'affectation du bâtiment. A l'est, dans le pignon, un claire voie apporte une lumière douce et tamisée à l'atelier d'architecture.


WB - VF Mods Warband [Liste en tête de sujet] | Page 2 | TaleWorlds Forums\nDommage, parce qu'il est difficile de trouver la titulature exacte des seigneurs écossais en gaélique écossais (même en scots d'ailleurs).\nBon beh je vais essayer des deux premières traductions, merci d'avance\nps: je t'ai posté aussi sur jv.com\nUn petit retour de blood and steel\n-lorsque l'on choisit son personnage on a le choix entre retour et retour, au lieu de continuer et retour\n-si le maitre de guilde nous propose comme mission de libérer une fille rançonné il nous dit à la place de se rendre au lieu ou l'on s'infiltre (un truc comme ça) et rien d'autre\nsinon ce mod génial quoi, il manque juste une carte différente, je n'aime pas celle de calradia, elle est vide et mal organisé, celle de brytenwalda est énorme par contre, faudrait mettre le gameplay et l'esthetique de blood and steel avec la map de brytenwalda\npour une carte différente de Calradia, essayes Sword Song.\nPour Blood and Steel, lorsque l'on veut attaquer également les 'bandes d'écumeurs", il faut choisir la 1ère phrase 'nous nous rendons..." pour les attaquer.\nLorsque l'on prend une raclée, sur la page des dégâts il y a en haut une phrase non traduite : "you disengage to find a better position to engage the enemy. Your soldiers grumble. Some ever mutter about your apparent ...."\nJe joue sur la version 1.127 car avec la 1.131 il y a quand même quelques plantages de temps en temps.\nD'abord merci d'avoir pris le temps de tester ces mods avec ces VF de test.\nMon but était de faire tester des mods de Warband au maximum de joueurs pour s'en faire une idée. Et comme vous donnez votre avis, c'est super, cela pourra aider certains à faire un choix. Pour ces VF de test, bien-sûr elles ne sont pas parfaites, je l'avais bien précisé au départ, mais je note toutes vos remarques sur les traductions afin de les améliorer, et peut-être pour aller jusqu'à une VF intégrale pour les mods dont vous jugerez qu'ils valent le coup.\nPour le fantastique Brytenwalda (je sais, que d'éloges...), je pense que le mod va un peu se stabiliser dans ses versions avec sa sortie en version officielle 1.1 !\nLe début de l'histoire se déroule effectivement en 636, et les factions à l'époque dans les iles britaniques étaient nombreuses, juste quelques grandes factions et les autres étant plutôt des clans, de nombreux clans. Les auteurs de ce mod ont voulu coller le plus possible à l'histoire de l'époque, et là c'est déjà une réussite. Et donc des titres et des noms à rallonge...\nMa première difficulté a été de trouver en français des équivalents dans les titres, et j'ai dû passer de longues heures sur google à faire des recherches sur cette partie d'histoire, j'ai appris plein de choses !\nMaintenant pour la VF de test de ce Brytenwalda, j'essaie de vous la mettre à dispo lundi, en l'état, je dis bien en l'état, dès que j'ai fini l'adaptation en v1.1 du travail déjà effectué sur les versions précédentes.\nDans un premier temps, je pense qu'elle sera suffisante pour que le maximum d'entre vous puissent tester le mod dans de pas trop mauvaises conditions.\nEt j'ai bien l'intention d'aller jusqu'au bout de cette VF pour ce mod qui m'apporte vraiment beaucoup de plaisir, que je n'avais plus eu depuis la Native Expansion ou Europe 1200 de M&B premier du nom.\nj'ai voulu prendre de l'avance en installant la version 1.1 de Brytenwalda en attendant ta traduction (eh ! tu vas trop vite ! on n'arrive plus à te suivre), mais il ne veut pas se lancer, ni avec la 1.127, ni avec la 1.131; donc, j'ai retéléchargé Brytenwalda 1.1, puis réinstallé et j'ai toujours le même problème :\n- avec la 1.127, durant le chargement des texture, j'ai un message d'erreur "RGL ERROR get_object failed for mesh : prt_mesh_yrellow_leaf_a",\n- avec la 1.131, le chargement se bloque sur la page où il faut attendre trois minutes... la souris bouge et aucun message d'erreur et un "Echap" permet de fermer le jeu et de revenir au bureau.\nQuant à Blood and Steel, je le prends comme un mod de détente car les compétences sont très hautes, l'XP monte assez vite, mais c'est aussi un mod de découverte avec ces armes à feu. Pour l'instant je joues en solo avec seulement des attaques de bandits (des troupes de 40 voire 50 individus) rien que pour le plaisir d'essayer de tous les tuer avec mon arme à feu et c'est difficile à maîtriser au début. Une tactique pour se faire beaucoup d'argent au début : attaquer de faibles troupes de bandits (une vingtaine) avec un bâton afin de revendre le plus possible de prisonniers.\nAh moi je suis paysan révolutionnaire en mode intense, tu passes ton temps à éviter des cartons et si tu fais une bataille tu galopes pendant une demiheure autour de tes ennemis, sinon l'ia est bonne et le gameplay façon "je touches t'es mort" (dégats vite énormes) est très nerveux et donc immersif,\nsinon pour sword song même si la carte change il manque un petit plus on sent trop le native bis avec une jolie carte, rien de transcendant, c'est pour ça que je verrais bien blood and steel avec une meilleure carte....\nSinon est ce que vous connaissez un mod se rapprochant de kill the infidel sur warband (carte du proche orient avec une concentration de villes jamais vu et des groupes de min. 150, énorme baston sur fond de croisades)\nVF test (Beta) Brytenwalda v1.1 du 13/09/2010 à dispo sur mon site.\nDernière modif d'un fichier de Brytenwalda v1.1 ce lundi 13/09/2010 à 23h59 !\nDonc, comme promis à la demande de certains, je vous la livre en l'état, c'est pourquoi je l'appelle Beta.\nJ'aurais bien aimé la travailler un peu plus avant de la sortir mais je pense qu'elle est déjà suffisante pour bien commencer à jouer et à approcher les nombreuses possibilités de cet excellent mod. Vous aurez donc droit à des mises à jour régulières et rapprochées pour qu'elle soit une VF de test à part entière et même plus si affinités.\nDans le même temps, il faut que je mette déjà à jour celle de Blood and Steel, ils en sont à la v1.162, mais jusqu'où vont-ils aller ?\nJe viens de retélécharger brytenwalda1.1 et toujours le même problème signalé plus haut (le RGL error) et donc plus moyen de jouer ce mod;\nen fait, lorsque j'avais testé brytenwalda095, j'avais les pilotes ATI 10.6 et lors de la sortie de la version 1.1, l'auteur préconisait d'utiiser les pilotes 10.5 et c'est ce que j'ai fait : et maintenant le seul mod qui ne veut pas tourner, c'est brytenwalda1.1 (j'ai supprimé la version 0.95) ni avec warband 1.127, ni avec warband 1.131. J'ai essayé dirext7, diminué la résolution écran etc mais rien n'y fait.\nj'ai installé brytenwalda sur ma partition 64 bits (réservée bureautique/internet) avec des pilotes ati v9.7 et le mod fonctionne.\nSur ma partition 32 bits (réservée jeux), je n'arrive pas à nettoyer les résidus de drivers ati, malgré l'utilisation d'un utilitaire drivercleaner : en effet, brytenwalda ne fonctionne plus depuis que j'ai installé les pilotes 10.8 que j'ai ensuite désinstallé pour revenir en 10.5 (je suis sûr qu'il reste des résidus de la 10.8, seule explication au dysfonctionnement de ce mod seulement).\nDispo de la VF de test pour Blood and Stell v1.162, pour mise à jour de la v1.151 en v1.162.\nMise à dispo avec la VF du fichier menus.txt modifié pour détourner le refus de prendre en compte la traduction d'un petit nombre de sous-commandes multiples (mais de quoi il parle, celui-là ? Et encore je ne vous dis pas tout !), en gros cela règle par exemple les deux "retour" au début dans le menu du choix des options du mod, le premier "Retour" se trouvant être un "Continuer". Na !\nAh oui, si vous le changez, avant n'oubliez pas de sauvegarder le menus.txt original dans un coin, on ne sait jamais.\nLes sauvegardes de la 1.151 semblent compatibles, au moins pendant le temps où j'ai testé la nouvelle version avec mon ancienne sauvegarde, mais avec une belle surprise de désordre dans les inventaires des persos, agréable surprise dans mon cas.\nTon histoire est une histoire de fous, si j'ai bien compris maintenant Brytenwalda fonctionne sur ta partition 64 bits, je n'y comprends pas grand chose dans ce domaine, mais au moins ton expérience peut servir à d'autres, moi d'un coup de colère j'aurais changé la carte graphique !\nj'ai 2 partitions W7, une 32bits pour les jeux et dont je mets les pilotes ATI à jour et l'autre en 64bits pour la bureautique/internet seulement et dont je ne mets pas les pilotes à jour. Et donc, sur ma partition 64bits, j'ai toujours les pilotes d'installation du système, càd la version 9.7 d'ATI et Brytenwalda1.1 fonctionne.\nLe problème sur la partition 32bits vient du fait que j'avais fait une mise à jour ATI en version 10.8 et là, que des problèmes avec tous les mods; j'ai donc fait marche arrière pour revenir en version 10.5 et là, tous les mods fonctionnaient à nouveau (soit avec warband 1.127 ou 1.131) SAUF BRYTENWALDA. A mon avis, il reste une "merde" de la 10.8 et il va falloir que je prenne mon courage à deux mains afin d'effectuer une désinstallation "experte" de tout ce qui est ATI.\nIls viennent de me sortir Blood and Steel en v1.165 !!!\n32 ou 64bits, je compte sur toi pour tester Brytenwalda !\nDispo de la VF Test Blood and Steel v1.165\nOuf, fastoche, ils ne m'ont rien changé pour la trad. Cette modif de version concerne d'autres choses, donc pas besoin de télécharger celle-ci si vous aviez déjà la VF Test pour la v1.162 !\nFinalement je joues Brytenwalda sur ma partition 64 bits. Pour l'instant j'avance doucement dans le mod en faisant des quêtes à droite à gauche, mais plus j'avance, plus je découvre des nouveautés :\npar exemple, l'accès à l'arbre des promotions pour chaque ethnie est super pratique et ça m'aide vraiment pour ma quête me demandant de former des soldats Aillt en Uchelwir.\nJe verrais plus tard pour l'utilité de construire un chariot (il faut 2 poneys et des outils pour le chariot)\nLe tableau montrant les relations entre tous les royaumes n'a pas dû être facile à faire, vu le nombre de royaumes en jeu, mais il est bien réalisé\nPar contre, tu as encore pas mal de boulot au niveau de la traduction (barde royale, evêque, prostituée, les nouveaux compagnons ...) et encore, pour l'instant je me cantonne au royaume Alt Cult.\nJe vais mettre en standby Diplomacy, car effectivement, ce mod devrait être très bien.\nBien le bonsoir Targus\nOui c'est sûr, ce Brytenwalda est du très très bon !\nJe sais, j'ai encore du boulot mais j'avance, ce mod est un monstre de nouveautés et d'aides en jeu. Il n'y a qu'à voir le poids qu'il fait en Mo rien qu'au téléchargement. Ces tableaux facilitent bien des choses, et celui de l'arbre est le bienvenu, vu le nombre de troupes aux noms sympathiques de l'époque et impossible à traduire tous, d'ailleurs cela serait dommage.\nMa priorité sur la trad reste donc sur tout cela (dans les tableaux tout est quasiment déjà en français), ainsi que sur les nombreux menus et actions du jeu. Les dialogues n'ayant qu'une importance secondaire seront faits en dernier, ainsi que les items non traduits, visuellement on les comprend très bien.\nCe soir j'y travaille à nouveau et je pense sortir une mise à jour demain, s'ils ne m'ont pas changé de version entre temps !\nMise à jour du 17/09/2010 pour la VF test Brytenwalda v1.1 !!!\nDisponible sur mon site.\nCe mod est génial !\nJ'ai été agréablement surpris par ce mod, car presque tout l'environnement a été modifié jusqu'à l'assaut des villes fortifiées (car effectivement à l'époque il n'y avait pas de châteaux-forts). Le fait que Diplomacy y soit implanté est un plus. Mais tu as encore un travail énorme à faire : ce qui me gêne le plus pour l'instant c'est les dialogues non traduits des nouveaux compagnons, car pour les dialogues de Diplomacy, j'ai encore en mémoire la traduction lorsque j'ai joué à ce mod.\nJ'essaies de trouver des "jeunes guerriers" car j'ai vu dans l'arbre des promotions qu'ils pouvaient atteindre le "niveau 300" (un esclavagiste) alors que le max pour les promotions des autres soldats est de 160, mais je pense qu'ils doivent être rares.\nIl y a un bug graphique sur le village de LLanaerch (pas sûr l'orthographe) où tout le décor est en l'air; il y a peut-être d'autres villages, mais je n'ai pas visité toute la map.\nJ'ai également fait une quête pour un prêtre et j'ai récupéré une bible dans mon inventaire (Vulgata Biblia) qui me donne "+1 à la compétence "total de mon argent en scillings" si dans l'inventaire", mais je n'ai aucune compétence augmentée de +1 (en discutant avec le marchand de livres, il apparaît "+1 à la compétence chirurgie si dans l'inventaire" pour Vulgata Biblia. Mais c'est peut-être des bugs de conception du mod ?\nBientôt je me détacherai un peu de Warband, car mon jeu préféré va bientôt sortir : Gothic 4.\nJe ne savais pas qu'il y avait Diplomacy dans ce mod. Si tu veux Bertolkien, tu n'as qu'à reprendre la traduction que j'ai faite de ce mod, ça sera déjà du boulot en moins\nAprès si le mod n'utilise pas Diplomacy 3.1, ce n'est pas un souci, j'ai archivé dans le sujet relatif à la traduction toutes les traductions faites sur les différentes versions, tu n'auras qu'à prendre ce qui est nécessaire.\nPour t'aider davantage : mis à part dans le fichier quick_strings (le seul je crois) où les textes de diplomacy se fondent dans la masse, le reste du temps tu verras dans la commande toujours "dplmc" apparaître.\nDans le pire des cas, je connais les textes de Diplomacy dans quick_strings, je peux te les faire très rapidement.