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Au bord des lacs de pêche de la région de Bangkok puis dans la nature sauvage et paisible, vous vivrez un voyage 100% pêche d'une grande variété.\nDes duels avec des poissons d'eau douce de plus de 100kg, des techniques variées, un pays convivial, une nature splendide et un guide passionné qui vous ouvrira les portes du Paradis des pêcheurs.\nUn programme de 10 jours et 9 nuits.\nLes meilleurs spots de pêche en lac et rivière autour de la capitale et quatre nuits dans la nature au plus près d'une fabuleuse zone de pêche.\n- trois jours de pêches de rêve dans la province de Bangkok\n- quatre jours de pêche dans la jungle paisible\n- séjour en pleine nature thaïlandaise sur une maison flottante\n- séjour à Bangkok\n- perche de la jungle\nLes deux techniques utilisées sont la pêche au leurre ou à la mouche (à votre choix).\nVos prises seront très nombreuses, nous vous garantissons au minimum entre 15 à 20 prises dans la journée, sans compter les fois où le poisson s'échappe lors du combat grâce à ses sauts aériens où il réussit à se déshameçonner, sa spécialité.\nVos plus belles prises pourront aller de 5 à 10kg, mais alors au terme d'un beau combat qui pourra durer une demi-heure!\nAccompagnement d'un guide de pêche professionnel.\nPêche du silure géant du Mékong en lac.\nA moins d'une heure de route de Bangkok, ce lac est renommé bien au-delà des frontières de la Thailande pour abriter deux espèces dont les spécimens peuvent dépasser allègrement les 150 kg : le poisson-chat géant du Mékong (Pangasianodon gigas), et la carpe géante siamoise (catlocarpio siamensis).\nVous avez la garantie d'attraper de 20 à 30 silures. Un poisson dont la puissance hors du commun, defense et stamina le placent haut la main à la première place des poissons d'eau douce les plus combattifs au monde. La carpe siamoise, un poisson intelligent et méfiant, est par contre beaucoup plus difficile à tromper mais le jeu en vaut la chandelle!\nNous vous garantissons une journée de pêche extrêmement physique et inoubliable.\n- Quatrième au huitième jour :\nDépart à cinq heure du matin pour la province de Kanchanaburi ("Le pont de la rivière Kwaï"), et après trois à quatre heures de route, arrivée au lac de barrage de Si Nakharin, plein de méandres et long d'environ 70km.\nVous logerez sur le lac, à bord d'une maison flottante traditionnelle de la région.\nVous vivrez 4 jours de pêche dans un calme absolu, uniquement rompu par les chants des oiseaux ou le bourdonnement d'un insecte, au milieu de paysages de jungle sauvages et époustouflants.\nQuestion pêche, les poissons phares seront les Snakeheads, poissons hyper-agressifs, très excitants à pêcher au leurre, de surface ou en plongeant, ainsi que la perche de la jungle, poisson carnassier de la jungle, puissant et très intéressant à pêcher.\nCe lac abrite d'autres espèces agréables à taquiner (carpes, etc...).\nVous serez accompagné d'un guide de pêche professionnel et passionné, et cerise sur le gâteau votre guide sera francophone; vous pêcherez la journée depuis une pirogue, avant de rejoindre le soir la maison flottante.\nVoici le carnet de voyage de pêche d'un groupe d'amis, décrivant et illustrant entre autre ces journées de pêche au lac de Si Nakharin.\nCamp de base en maison flottante.\nTransfert à Kampaeng Sen le huitième jour en début d'après-midi, et nuit sur place en resort.\nPêche au leurre et à la mouche. Accompagnement d'un guide de pêche passionné.\nRetour à Bangkok en fin de journée. Nuit à Bangkok.\nUn pêcheur sans accompagnant Deux pêcheurs,\nune chambre double Trois pêcheurs,\ntrois chambres individuelles Quatre pêcheurs,\ndeux chambres doubles Groupes\n3030€ 2175€ 2165€ 1885€ Nous consulter\nCes prix incluent les droits d'entrées aux lacs de pêche, la location du matériel de pêche, les guides, les activités, les trajets, l'hébergement (maison flottante collective à Si Nakharin, et chambre climatisée simple ou double selon option choisie en ville), ainsi que la location d'une barque et les repas lors du séjour à Si Nakharin.\nN'hésitez pas à nous contacter si vous souhaitez un devis avec une autre répartition pour les chambres.\nRepas à la maison flottante après la journée de pêche au Snakehead.\nVoici également une EXPEDITION DE PECHE proposée une fois par an en début d'année. Un voyage exceptionnel pour les passionnés de nature et de pêche sauvage, dans les montagnes du Triangle d'Or en Thaïlande.


Rédigé par E. Moris le Vendredi 15 Octobre 2021\nKailesh Jagutpal a annoncé que de nouveaux règlements seront gazettés prochainement. Ils concernent le port du masque qui ne sera plus obligatoire dans un certains nombre d’endroits et pour certaines activités.\nPar exemple, les activités sportives entre quatre murs ou à l’extérieur. Dans les salles de gym, a-t-il ajouté, le masque ne sera pas de rigueur mais l’endroit doit être suffisamment aéré et il faut suffisamment de place pour garder la distanciation physique.\nLe port du masque ne sera plus obligatoire pour les activités physiques en plein air, comme en montagne, sur les parcours de sante et même pour faire de la natation. Il en sera de même pour les activités agricoles où la personne est seule ou encore à table dans un restaurant.


Top 10 Cadeau Mariage Original – Portefeuilles homme – Denteline\nSergio Tacchini - Excellente qualité : portefeuille fabriqué en cuir véritable et ceinture extérieure en polyuréthane, doublure en cuir véritable, souple et résistant. Dimensions du portefeuille : 10 x 12, 5 x 2 cm.\nCadeaux intelligents : cadeau original pour lui, garçon, mari, excellente idée cadeau pour toutes les occasions telles que l'obtention d'un diplôme, la Saint Valentin, un anniversaire, Noël, la fête des pères, des idées cadeau pour votre frère.\nCaractéristiques de la ceinture : hauteur 3, peut être raccourcie et 125, 5 cm, longueur disponible 115 cm, peut être raccourcie, sans nickel. Caractéristiques portefeuille : 6 emplacements pour cartes, 1 porte-monnaie, 4 poches supplémentaires, 1 fenêtre pour documents, 2 compartiments pour billets.\nSethexy - C'est un masque polyvalent, adapté pour bal, plage, jupes, défilé de mode, boîte de nuit, costumes, fête, festival, bijoux et colliers. 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par Jéjémoto Ven 1 Nov 2019 - 8:05\nJe vais être 48 heures vers Lyon, mardi et mercredi et je fantasme sur un plat emblématique de la cuisine des bouchons Lyonnais: j'ai nommé, "le tablier de sapeur"! Ce sera un dépucelage, que je veux réussi!!!\nJ'en appelle à toi, homme de moto et de chairs, pour m'indiquer une adresse qui sert ce plat de façon goûteuse et généreuse. Compagnie acceptée voir recherchée pour partager ce moment. Ce sera mercredi midi!\nAmi, merci d'avance!\nRe: fantasme Lyonnais.....\npar iron man Ven 1 Nov 2019 - 9:23\nDommages que je ne sois pas par là bas je me serais bien éclaté la panse dans un bouchon oui ....\nBon ben régale toi bien et attention au côtes du Rhône...\npar dd2rc38520 Ven 1 Nov 2019 - 10:00\niron man a écrit: Dommages que je ne sois pas par là bas je me serais bien éclaté la panse dans un bouchon oui ....\nLes Cotes du Rhone c'est mieux en moto\npar iron man Ven 1 Nov 2019 - 10:09\nC'est clair t'as raison !!!\npar Leonandco Ven 1 Nov 2019 - 11:36\nUn petit Saint Joseph\npar Invité Ven 1 Nov 2019 - 14:23\nCherche "Le bouchon des filles", c'est dans le vieux Lyon, entre Saône et Rhône, j'en garde quelques bon souvenirs de mon séjour à Lyon pendant 4 ans... mais il y en a des dizaines du même tonneau... Comme Leonandco, un bon petit Saint-Joseph au verre pour ne pas abuser et pouvoir reprendre la moto... quelques heures après.\n"La Meunière" n'est pas mal aussi...\nAttention... 30 secondes de plaisir à chaque bouchée... 3 heures dans l'estomac... et 30 ans sur les hanches...\npar Jéjémoto Ven 1 Nov 2019 - 19:29\nCa ira très bien!!!!\npar iron man Ven 1 Nov 2019 - 20:25\nBon c'est que le "30 ans sur les hanches" qui est dur à digérer...\nA chaque plaisir, son lot de difficulté\nVous connaissez des roses sans épines ? Alors\nRégale toi bien même si tes hanches te font la gueule dans le miroir\nAprès tu te mets un bon soprano dans les oreilles t'écoutes le coach et tu pompes, tu gaines et tu cries ....\npar Leonandco Sam 2 Nov 2019 - 10:23\nDans le Vieux Lyon il y a un snack qui sert des Falafels à tomber\nL'établissement a été primé pour sa qualité\nMe souvient plus de son nom mais au besoin je peu retrouvé.\npar Invité Sam 2 Nov 2019 - 11:25\nLes Falafels c'est super bon, mais c'est pas franchement Lyonnais\nC'est de la bonne cuisine orientale, Levantine même pour être plus précis...\nJ'adore, mais pas besoin d'aller à Lyon pour manger des boulettes de pois chiches...\nTu dois même en trouver au plat pays non ?\npar Leonandco Sam 2 Nov 2019 - 13:35\nOui mais il y a très très longtemps au moins une bonne Quarantaine d'années, une Libanaise en préparais de manière artisanale dans le centre ville de Bruxelles. A l'époque c'était une des premières........\npar Jéjémoto Sam 2 Nov 2019 - 18:16\nLà, l'idée, clairement, c'est de me régaler d'un tablier de sapeur, frites, béarnaise, pif rouquin ( sans dépasser la limite)\npar christian69 Dim 3 Nov 2019 - 19:56\nDans le vieux Lyon , c'est parfois le piège a touristes , tu payes souvent plus le folklore que ce qu'il y a dans l'assiette .\nSi tu veux du Lyonnais de qualité je te conseil " Au rendez vous des amis " dans le 6éme\néric dit "biquet" est le chef cuistot depuis 30 ans , c'est un pote , un motard , un vrai sans bagnole\ndonc si tu vois un 1250 Bandit garé sur le trottoir ,c 'est qu'il est là\npar christian69 Dim 3 Nov 2019 - 20:33\nIl a gardé la tradition du "Machon" a essayer aussi\npar Jéjémoto Lun 4 Nov 2019 - 7:33\nchristian69 a écrit: Dans le vieux Lyon , c'est parfois le piège a touristes , tu payes souvent plus le folklore que ce qu'il y a dans l'assiette .\npar Jéjémoto Lun 4 Nov 2019 - 7:36\nchristian69 a écrit: Il a gardé la tradition du "Machon" a essayer aussi\nJe viens de regarder la vidéo et c'est sûr que nous pourrions devenir amis, le patron et moi!.....\nOn m' a parlé des halle. Des avis?\npar Charnay78 Lun 4 Nov 2019 - 9:58\nAussi mais tellement de bons resto à Lyon, de très bonnes adresses à la croix rousse aussi quartier très typique une ville dans la ville.\npar Jéjémoto Lun 4 Nov 2019 - 10:16\nBon je ne pourrai pas tous les faire.... Je vais en choisir un d'où je vois ma moto, à table.\npar Rootard Lun 4 Nov 2019 - 16:10\nSinon, pas très loin du restaurant "Au rendez-vous des amis" qui a un cadre très années 70, il y a un bouchon pas très connu, avec un cadre typique de bistro Lyonnais... Le Morgon (2 rue de Baraban 69006 Lyon - A l'angle avec la rue Germain). Machons, tabliers de sapeur, tripes et autres cochonailles, bons vins de producteurs locaux, tarte aux pralines... Le pied quoi. Regardez les photos sur google maps (voir les photos).\npar Jéjémoto Lun 4 Nov 2019 - 18:04\nJe note aussi !!!\npar Invité Lun 4 Nov 2019 - 18:53\nAh la vache, il va falloir durcir les suspensions...\nTu les fais tous et tu nous fais un résumé pour nos prochains passage à Lyon\npar Jéjémoto Lun 4 Nov 2019 - 19:09\nMaakherou a écrit: Ah la vache, il va falloir durcir les suspensions...\npar Virage Mer 6 Nov 2019 - 7:46\nComment reconnaître un forum Français.\nTiens ça me rappelle un restau en Auvergne pendant une traversée en bécane par les petites routes. J'aurais presque acheté la baraque d'à côté pour revenir y manger tous les jours....\npar Jéjémoto Jeu 7 Nov 2019 - 10:26\nFinalement, après être arrivé sur Lyon, près de Halles,\nAprès avoir fait un graissage en règle,\nAvoir mis mes gants à réchauffer sur le radiateur intégré à la meule,\nje suis allé m'installer à la table d'un bouchon près des halles,\nD'ou je pouvais surveiller mon 09,\net déguster un tablier de sapeur\nsuivi d'une tête de veau.\nJe me suis fini aux profiteroles, mais pas de photo.\nArrosage au Cahors...\nDernière édition par Jéjémoto le Jeu 7 Nov 2019 - 10:31, édité 2 fois\npar Michel06 Jeu 7 Nov 2019 - 10:29\ny a quoi dans un tablier de sapeur ?\npar Jéjémoto Jeu 7 Nov 2019 - 10:30\nUn bout de tripe pané.... Je ferai un commentaire un peu plus tard.\npar Michel06 Jeu 7 Nov 2019 - 10:32\naprès sa digestion ?\nmerci pour l'adresse christian69\nrestau créé en 69 une bonne année et pas au hasard ...\npar Jéjémoto Jeu 7 Nov 2019 - 10:45\nJe suis un gars "sérieux"!!!! Aucun problème de digestion!!! J'ai juste pris un reste de pot au feu en rentrant, car après 4 h de route, fallait manger léger, mais chaud.\npar domdom42 Jeu 7 Nov 2019 - 11:05\ndu coup t'es pas venu jusqu'à st etienne ?


Comment fonctionnent les coffres-forts pour armes à feu - Armesloisirs\nAccueil » Uncategorized » Comment fonctionnent les coffres-forts pour armes à feu\nLes propriétaires d'armes à feu responsables verrouillent leurs armes à feu lorsque l'arme n'est pas utilisée activement.\nVerrouiller une serrure sur un étui de pistolet est le moyen le plus simple de le faire, mais cela ne fera pas grand-chose pour protéger réellement votre arme.\nEt si vous avez une grande collection d’armes à feu, vous serez obligé d’obtenir un nombre impressionnant d’étuis pour armes à feu!\nJe crois que tous ceux qui possèdent une arme à feu devraient avoir un coffre-fort pour les ranger.\nLes coffres-forts pour armes à feu fonctionnent en étant verrouillables et dissimulables pour limiter l'accès des armes à feu uniquement aux propriétaires afin que les armes ne tombent pas entre les mains d'enfants ou d'utilisateurs indésirables. Ils protègent les armes contre le vol en étant lourds et fixés au sol ou au mur (ce qui les rend difficiles à déplacer), et avec leurs panneaux d'accès inviolables. Les coffres-forts pour armes à feu sont souvent construits avec des matériaux résistants tels que l'acier et le gypse pour être ignifuges.\nLe but d’un coffre-fort\nLe but d'un coffre-fort pour arme à feu est d'empêcher les personnes indésirables d'accéder à l'arme à feu.\nCela peut signifier des cambrioleurs, des criminels qui envahissent votre maison et vous volent. Une arme à feu est un outil puissant et les garder hors des mains des criminels est une noble cause.\nCependant, «personnes indésirables» signifie également les enfants non surveillés.\nLes enfants ne comprennent pas parfaitement les armes à feu. Pour eux, les armes à feu sont des appareils effrayants ou astucieux, mais toujours pleins de mystère et d'attrait. Leur instinct peut être de jouer avec toutes les armes qu'ils trouvent, ce qui peut facilement se terminer en tragédie.\nLes invités de votre maison ne savent peut-être pas non plus comment manipuler une arme à feu en toute sécurité. Et toute personne dans votre maison qui peut être bouleversée émotionnellement ou aux prises avec une maladie mentale peut constituer un danger pour elle-même ou pour les autres avec une arme à feu. C’est donc une bonne idée de garder les armes sous clé pour que vous ayez un contrôle total sur leur accès.\nMais comment les coffres-forts pour armes à feu fonctionnent-ils pour protéger vos armes, de toute façon?\nLes coffres-forts sécurisent vos armes à feu par de multiples moyens.\nDe toute évidence, un coffre-fort est un conteneur qui renferme complètement le pistolet et a une serrure. Ainsi, seuls vous et toute personne en qui vous avez confiance avec la clé ou le code pouvez accéder aux armes à feu à l'intérieur.\nMais c’est plus qu’une simple serrure qui fait d’une arme à feu un coffre-fort pour arme à feu.\nAprès tout, un étui pour arme à feu peut également être verrouillé, mais ce ne sont pas des coffres-forts!\nLes coffres-forts pour armes ont des verrous\nTout coffre-fort pour arme à feu a une méthode pour verrouiller le coffre-fort afin que seuls les utilisateurs autorisés puissent le déverrouiller et l'ouvrir.\nIl s'agit de la principale ligne de défense qui empêche les enfants, les adolescents et les invités de se rendre à vos armes.\nUn verrou de coffre-fort pour arme à feu peut être physique, comme un cadran à combinaison ou un trou de serrure. Il peut également être électronique, comme un clavier, un scanner biométrique ou même un appareil RFID.\nCe qui est important, cependant, c'est que vous pouvez déverrouiller le coffre-fort et que les autres ne le peuvent pas.\nTout verrou peut éventuellement être vaincu. Les trous de serrure peuvent être choisis, les cadrans peuvent être fissurés, etc. Mais une serrure est vitale de toute façon et est assez bonne pour garder tous les voleurs sauf les plus déterminés.\nLes coffres-forts pour armes à feu peuvent être cachés\nUn coffre-fort à l'air libre est une invitation au vol.\nLes coffres d'armes à feu sont censés être cachés, hors de vue et hors de l'esprit; ne vous vantez pas de votre nouveau coffre-fort, sauf auprès de vos amis les plus fidèles!\nL'endroit standard pour cacher un coffre-fort est dans le placard. Ils peuvent également aller au sous-sol ou même être cachés derrière un miroir pleine longueur ou une bibliothèque.\nIl existe même des coffres-forts cachés pour votre voiture ou votre camion.\nLes coffres-forts pour armes à feu sont lourds\nSi un voleur connaît votre collection d’armes mais n’a ni le temps ni les outils pour crever une serrure, il sera tenté de sortir le coffre-fort de là.\nLes coffres-forts appropriés pour armes à feu sont suffisamment lourds pour que vous ayez du mal à le déplacer dans votre maison avec un groupe d'amis et un chariot, sans parler d'un cambrioleur solitaire avec un levier et une lampe de poche.\nCela ne veut pas dire que les armoires à armes plus petites et plus légères n’ont pas leur place. Ils font.\nMais certaines personnes ne les considèrent pas comme des «coffres-forts» tant qu’ils ne sont pas suffisamment lourds pour que personne ne puisse les prendre.\nPour faciliter cela, presque tous les coffres-forts pour armes à feu ont des trous de montage afin que vous puissiez les boulonner sur une surface solide. Même les boîtes de sécurité à arme de poing unique incluent généralement cette fonction.\nVous ne voulez pas utiliser de vis à bois pour cela. Les gros boulons et tire-fonds sont les meilleurs choix. Le plus fort, le mieux.\nAssurez-vous que le coffre-fort est monté sur des structures capables de gérer ce travail difficile. Les poteaux muraux et les solives de plancher fonctionnent. Les cloisons sèches et les tapis, cependant, ne maintiendront PAS un coffre-fort en place.\nUn socle en béton constitue une excellente base sur laquelle vous pouvez ancrer un coffre-fort pour carabine de haute qualité.\nVous pouvez aider votre sécurité à rester en place en supprimant tout espace entre elle et les murs et le sol. Un petit espace permet à quelqu'un d'y installer un levier, ce qui peut lui permettre d'obtenir l'effet de levier dont un voleur a besoin pour soulever le coffre-fort de ses ancres.\nLes coffres-forts pour armes résistent aux tentatives physiques de les ouvrir\nLes coffres-forts utilisent également des détails de conception moins visibles pour se protéger contre les entrées forcées.\nLa porte peut être très épaisse pour qu’un levier ne puisse pas y passer. Et si quelqu'un essaie de faire levier par le côté, eh bien, les goupilles de verrouillage et les barres de verrouillage positionnées tout autour de la porte provoqueront cette action pour serrer la porte au cadre.\nLes coffres-forts sont fabriqués en acier de haute qualité et des plaques trempées sont souvent ajoutées pour éviter de percer dans le coffre-fort.\nCertains coffres-forts ont des dispositifs cachés qui se mettent en place si quelqu'un essaie de percer la serrure. Cela verrouille le coffre-fort encore plus en toute sécurité. C’est pénible d’entrer dans un coffre-fort une fois l’un de ces appareils activé, mais cela empêche vos armes d’être volées!\nCertains coffres-forts électroniques se connectent à Internet et peuvent vous alerter de toute tentative d'accès. Cela vous permet de répondre à la tentative avant que le voleur ne s'échappe.\nLes bons coffres-forts pour armes à feu sont ignifuges\nTous les coffres-forts pour armes à feu sont techniquement ignifuges car l’acier ne brûle pas. De bons coffres-forts pour armes à feu, cependant, absorberont la chaleur et l'empêcheront de brûler les objets à l'intérieur.\nToute isolation, même le tapis qui recouvre la plupart des coffres-forts pour armes à feu, offre une petite protection aux armes à feu à l'intérieur.\nLes coffres-forts résistants au feu comprendront une ou plusieurs couches de planche de feu. Il s'agit d'un terme standard de l'industrie pour un matériau tel que le gypse qui absorbe la chaleur à un taux plus élevé que l'acier ou le tapis seul.\nLe Fireboard ne s'enflamme pas non plus si la température est suffisamment élevée. Cependant, il peut s'effriter après avoir absorbé suffisamment d'énergie thermique.\nC'est pourquoi les coffres-forts pour armes à feu domestiques sont conçus pour résister à une certaine température pendant une durée donnée. De meilleurs coffres-forts vous indiqueront également le nombre de BTU qu'ils peuvent absorber avant que la chaleur à l'intérieur ne devienne suffisamment élevée pour endommager le papier.\nUne fois que le papier s'enflamme, vous aurez un feu à l'intérieur du coffre-fort et l'ignifugation sortira par la fenêtre.\nC’est pourquoi il peut être intéressant de payer les frais d’un coffre-fort pour armes à feu domestique dont la température est supérieure à 1 700 degrés pendant une heure ou plus.\nTous les facteurs ci-dessus se combinent pour assurer la sécurité de votre collection d'armes à feu.\nBien sûr, un étui peut être verrouillé et vous pouvez également couvrir vos armes dans une couverture anti-feu.\nMais un coffre-fort pour arme à feu combine de nombreuses protections différentes d'une manière sûre qui ne peut pas être accomplie en superposant les protections les unes sur les autres séparément.\nEt imaginez à quel point il serait difficile d'accéder à votre fusil préféré s'il était dans un étui verrouillé, enterré dans des couvertures anti-feu et enterré sous 500 livres de béton!


Quand faire appel à un couvreur Gardanne ?\nVous venez d’aménager vos combles. Mais impossible de vivre dans une pièce dépourvue totalement de lumière naturelle. Il vous faut de fenêtres de toit ! Pour cela, la solution la plus optimale est de faire appel à notre entreprise de couvreur sur Gardanne.\nEntretien de sa toiture soi-même ou par un couvreur Gardanne ?\nGrâce à son expérience et son expertise, notre couvreur sur Gardanne pourra analyser les dégâts et localiser précisément l’infiltration d’eau. En effet, une tache d’humidité à l’intérieur de la maison peut être causée par une fuite située plus en hauteur sur le toit et causer de nombreux dégâts qu’il faut rapidement réparer.\nFaire appliquer un hydrofuge par couvreur Gardanne\nLa couverture est la couche supérieure de la toiture. C'est elle qui est au contact direct des éléments extérieurs. Elle est donc le premier rempart protégeant la maison des agressions telles que les intempéries. Il convient donc d’en prendre soin et de l’entretenir régulièrement. Pour cela, contactez notre équipe de couvreurs sur Gardanne.


Offres d'emploi Chef de Projet - Energie et Environnement - Jobenergies.com\nElectricité, Réseaux distrib.\nTousCDI (1)CDD (3)\nToutesFrance (4)Bretagne (1)Basse-Normandie (1)PACA (1)Rhône-Alpes (1)\nToutesDébutant / Jeune dip' (1)2 à 4 ans (1)5 à 10 ans (2)\nTousEnvironnement (1)Maîtrise de l’énergie (1)Electricité, Réseaux distrib. (4)\nTousInformatique, SI (2)R&D, Etudes, Sciences (2)\n4 Offres d'emploi Electricite et reseaux de distribution\nL’emploi dans l’électricité et les réseaux de distribution électrique continue son développement. Le monteur électricien en réseaux de distribution, professionnel du raccordement électrique, veille à assurer la fourniture d’électricité à tous les usagers, logements et entreprises.\nIl vérifie régulièrement de l’état des équipements du réseau de distribution et les raccordements au réseau électrique.il installe également l’éclairage public ou les feux de signalisation.\nL’Installateur d’éclairage, est l’électricien chargé de l’installation et de la gestion de l’éclairage dans les logements, bureaux, commerces, bâtiments tertiaires et industriels.\nL’électricien de maintenance est en charge de la surveillance, l’entretien et le dépannage courant des installations électriques de bâtiments ou de sites industriels.\nL’électricien de process effectue tous les travaux d’installations, de raccordement, de mise en service, des bâtiments industriels et de logistique. Il est spécialiste du réseau électrique, de l’éclairage et des réseaux de communication, des systèmes de gestion de la consommation énergétique.\nArchitecte Chef de Projet - Réseaux / Datacenter (H/F)\nChef de projet Système d'Information d'Entreprise (H/F)


Contexte / Tout le corps / Mon corps et moi* / Lire et interpréter la Bible / Théovie / Se Former - Eglise Réformée de France\nMon corps et moi*\nL'hébreu, c'est du concret !\nL'hébreu, la langue dans laquelle est écrite l'Ancien Testament, est un langage qui ne connaît pas l'abstraction. Les notions abstraites se disent à travers des expressions concrètes. Ainsi, pour dire que Dieu est en colère, on dira que " ses narines fument ". Très attaché à une traduction littérale, Jacques Saurin cite dans son livre Sermons sur divers textes de l'Ecriture Sainte de 1748 le Psaume 74 ainsi : " Oh Dieu, pourquoi nous as-tu rejetez à jamais ? Et pourquoi fume ta narine contre le troupeau de ta pâture ? "\nLa peur se dit en hébreu avec le mot halhalla. Ce substantif est construit sur la racine du verbe " trembler, se tordre ". Au lieu de dire " cette personne a peur ", on dira en hébreu " cette personne est saisie de tremblement ".\nPour dire " le destin ", on utilise le mot dérèk qui veut dire littéralement " chemin, là où l'on marche ". Un des mots qui désigne " l'espérance " se dit en hébreu tikva dont la première signification est " une corde dont les fils sont solidement assemblés "...\nQu'en est-il de l'incarnation ?\nSi les textes de l'Ancien Testament utilisent parfois des anthropomorphismes pour parler de Dieu, le Nouveau Testament ira beaucoup plus loin. Il affirme en effet que non seulement l'action et le ressenti de Dieu peuvent se dire en utilisant des anthropomorphismes, mais que Dieu lui-même choisit de prendre un corps humain dans la personne de Jésus de Nazareth. Les théologiens parleront d'" incarnation ", une notion qui provoquera beaucoup de discussions dans l'histoire de la théologie, notamment sur la nature exacte de Jésus-Christ.\nL'incarnation, notion centrale pour le christianisme, a aussi des conséquences très concrètes pour les croyants : si Dieu ne refuse pas de vivre dans un corps humain et a pu pleinement assumer et vivre la condition humaine (le fait d'être un homme, de chair et de sang, soumis à des nécessités, à des besoins et dont la mort est une réalité), alors le corps n'est pas une chose secondaire à mépriser et dont il faudrait absolument se débarrasser. Contrairement à l'idée de " réincarnation " où le but est justement de fuir son enveloppe charnelle pour accéder à une vie spirituelle parfaite, et contrairement à l'idée que le corps est objet de culte et de valorisation de soi, l'incarnation de Dieu se positionne comme une prise au sérieux de la condition humaine et comme l'affirmation que Dieu n'est pas absent de cette même condition.


Mélenchon sort par la porte et revient par la fenêtre | L'Opinion\nAccueilPolitiqueMélenchon sort par la porte et revient par la fenêtre Gauche\nMélenchon sort par la porte et revient par la fenêtre\nBéatrice Houchard\t24 Août 2014 à 15h42\nNon, il ne prend pas sa retraite. Non, il n'est pas déprimé. Jean-Luc Mélenchon quitte la coprésidence du Parti de Gauche, mais c'est pour mieux préparer sa VIe République. Et la présidentielle de 2017\nJean-Luc Mélenchon\t© Sipa\t«Qu'est-ce que vous voulez que j'ajoute à ça, moi?» Dimanche midi, devant les militants du Remue-méninges du Parti de gauche réunis à St-Martin-d'Hères, près de Grenoble, Jean-Luc Mélenchon ne pouvait qu'en faire le constat: s'ils lui ont volé la vedette, Cécile Duflot, Arnaud Montebourg et Benoît Hamon tiennent un discours qui est de moins en moins éloigné du sien.Le désormais ex-coprésident du Parti de Gauche (PG) soupire: «Je vais dire de François Hollande ce qu'en disent ses amis». Il fait mine de n'en pas croire ses yeux: «Deux ministres, et non des moindres, se réunissent pour tailler en pièces la politique du gouvernement auquel ils appartiennent!» Et d'ajouter, après avoir cité Arnaud Montebourg: «Si c'était moi qui parlais, on dirait que c'est excessif. Là, c'est modéré». Rires dans la salle...Mais l'écho que rencontrent ses thèses jusqu'au sein du gouvernement, et notamment sa condamnation de la politique européenne, privent aussi Jean-Luc Mélenchon d'une partie de sa singularité. Ca tombe bien, il a décidé de «se redéployer» sur un nouveau chantier: la VIe République qu'il appelle de ses voeux, puisque selon lui la Ve maintes fois modifiée est devenue «un bricolage inepte qui ne fonctionne plus».Il faut donc «changer la règle du jeu». Comment? En «fédérant le peuple», la tâche que s'assigne désormais Mélenchon malgré ses revers électoraux.Pour qu'on soit bien convaincu qu'il ne s'éloigne pas du combat politique, l'eurodéputé s'y est pris à trois fois, trois jours durant, pour le dire. Non, il ne prend pas sa retraite. Non, il n'est pas déprimé. Simplement, il abandonne la co-présidence du PG (qui n'était qu'une étiquette), comme sa co-présidente Martine Billard, pour laisser la place à une direction collective animée par Eric Coquerel. Pour l'opinion publique, ça ne changera pas grand chose.A Grenoble, on n'a d'ailleurs vu que Jean-Luc Mélenchon: au côté du maire écolo, Eric Piolle, pour le 70e anniversaire de la libération de la ville; allant saluer les responsables d'un club de football; dans les ateliers du Remue-Méninges, tasse de café (siglée Parti de gauche) à la main, écoutant sagement, en bon militant de base, les Espagnols du mouvement Podemos ("Nous pouvons») venus expliquer, samedi après-midi, comment ils avaient bousculé le jeu polique de leur pays avec une démarche «potentiellement révolutionnaire» sans laquelle les peuples seraient condamnés à «une souffrance interminable». Et il ajoute que «les gens souffrent pour rien» puisque, affirme-t-il, «la dette en Europe ne sera jamais remboursée, car elle est inremboursable».Révolutionnaire: Mélenchon, plus que jamais, reprend le mot à son compte. Ce sera «une glorieuse révolution citoyenne», destinée à empêcher le «désastre» des Européennes (6,33% pour Mélenchon et ses amis), un échec dont il ne s'exonère pas. «En 2017, prévoit-il, ce ne sera pas une élection, ce sera une insurrection» pour répondre à «la grève civique» de l'abstention et au «désastre» du Front national en tête du scrutin.A côté de tous ces enjeux, Mélenchon ne s'attarde pas sur l'avenir du Front de gauche, que la stratégie d'alliance avec le PS, de la part des communistes, a mis à mal aux municipales: «Ce n'est pas nous qui allons défaire le Front de gauche, c'est nous qui l'avons créé! Il faut accepter qu'il y ait des discussions». Discussion il y aura, le 6 septembre, mais ce sera l'affaire d'Eric Coquerel. Jean-Luc Mélenchon préfère décrire le monde tel qu'il craint de le voir évoluer, le «risque de guerre généralisée» qu'il voit poindre derrière la politique américaine, ou les conséquences du réchauffement climatique qui lui font préconiser «la règle verte».Et 2017 dans tout ça? Jean-Luc Mélenchon y pense et s'en tire par une pirouette: «Nous aurons un candidat. Ce sera la VIe République». Avant d'ajouter: «Si François Hollande ne s'en va pas avant...» Tout en se défendant de réclamer son départ, il rappelle que le président de la République, en 2006, avait théorisé dans un livre le principe de «vérification démocratique» à mi-mandat. Dans la VIe République de Jean-Luc Mélenchon, ça s'appellera un «référendum révocateur».\tDECOUVREZ TOUS NOS CONTENUS !\nL'auteur vous recommande\tPar Béatrice Houchard\tPétition\tDéjà plus de 32000 signatures pour la VIe République de Jean-Luc Mélenchon\tPar l'Opinion\tÇa fait le buzz\tLes éternels travers des Verts\tPar Béatrice Houchard\tFront de gauche\tOlivier Dartigolles : «Le gouvernement est soumis à la finance»\tDernières vidéos\tVoir toutes les vidéos


Les Francs maçons veulent imposer leur idées? - Thousand and One News\nLes Francs maçons veulent imposer leur idées?\nFrance Dantan 26 Octobre 2015\nLe mélange détonant du socialisme et de la République\nLe Grand Maître du Grand Orient appelle au « Front républicain » en demandant aux « républicains » et aux socialistes de faire barrage au second tour des élections régionales au Front National en sacrifiant leurs « idées » sur l’autel de l’intérêt général. Cet appel au refus a peu de chances d’être entendu. Jamais sans doute les raisons qu’il le soit n’ont été aussi faibles. L’argument principal repose sur l’intérêt général. Pour qu’il porte, il faudrait qu’une majorité de Français considère que leurs intérêts et celui du pays soient menacés par la victoire du FN dans quelques Régions de la Métropole, et que les deux partis qui alternent au pouvoir les incarnent. Or, le pouvoir détenu dans les collectivités locales ne menace ni les institutions, ni les libertés. Il n’écrit pas la loi, et ne peut donc pas s’opposer à la République, sauf à en subir les conséquences légales. En revanche, l’idée d’interdire à tout prix l’accès aux exécutifs à un parti qui représente un quart des Français affaiblit la démocratie. Sa sous-représentation est déjà révoltante pour ses électeurs, qui se sentent discriminés. La gestion d’une collectivité territoriale est d’ailleurs un banc d’essai pour tester la capacité d’un parti à assumer la responsabilité du pouvoir.\nEst-il établi que les « intérêts » des Régions, puis celui de la Nation, coïncident avec la gestion et les projets des socialistes et des « républicains » et seront crucifiés par le Front National ? On peut en douter pour trois raisons. D’abord, les majorités au pouvoir par alternance n’ont pas servi l’intérêt général d’une manière évidente. Globalement, la situation du pays s’est dégradée dans le domaine économique comme dans celui de la sécurité. De l’aventure libyenne à l’aveuglement syrien, assortis d’un soutien marqué à des pays sunnites peu enclins à la paix et à la démocratie, la place de la France dans le monde a reculé. L’idée que nos respectables démocrates socialistes et républicains mentent, trompent le peuple et obéissent à des calculs, liés à des intérêts qui n’ont rien de général, fait son chemin dans les esprits les moins soupçonneux. La France n’a pas inversé la courbe de son déclin plus que celle de son chômage. Elle subit une montée de la violence qui a pour corollaire le sentiment d’une impuissance publique grandissante, ce qui est insupportable pour les Français attachés à la forme régalienne de l’Etat. Nombre d’entre eux ressentent une dilution de l’identité nationale en raison de l’arrivée de nombreux immigrants non-européens dont le comportement et les exigences sont communautaristes, et de l’étrange séduction que suscite chez beaucoup d’élus cette diversité de plus en plus envahissante. C’est là une menace pour la République et pour la Nation qui ont partie liée : les valeurs de la première sont remises en cause par des comportements, religieux notamment. L’unité et la fierté de la seconde sont ébranlées par la pénalisation de la légitime préférence nationale et par une culture pathologique de la repentance.\nEn second lieu, pour justifier une alliance de circonstance entre le PS et l’ex-UMP, il faudrait que quelque chose les rassemblât qui les opposerait du même coup au FN. Or, aussi bien sur les questions économiques que sociétales en passant par la sécurité, la majorité et son opposition parlementaire ne partagent rien et se combattent avec âpreté. Quelques carriéristes qui se trouvent « à droite » par héritage affichent parfois des idées « avancées » sur la famille et les problèmes de société. Mais les gros bataillons des électeurs ne les suivent pas. Il y a, de plus, au sein des « républicains » un courant conservateur. Le souverainisme y est d’autant plus motivé que la construction européenne va d’échec en échec. Sur l’autorité de l’Etat et la sécurité intérieure et extérieure, les deux partis sont en en totale confrontation. Si on élude l’évolution sociale et économique récente du Front National, il demeure plus facile d’envisager une alliance des nationaux et des « républicains »qu’entre ces derniers et les socialistes. L’interdit chiraquien puis sarkoziste a un fondement verbal, l’âme (?) et les valeurs (?), et un autre plus réel, la sauvegarde des places par une entente avec cet adversaire-partenaire qu’est le PS. Certains élus de part et d’autre se retrouvent dans les mêmes coteries.\nEnfin, passant des « valeurs » à la tactique, qui est le vrai sujet, le Grand Maître se plaint qu’un tapis rouge soit déroulé sous les pieds de Marine Le Pen. On peut naïvement croire que les médias soient plus ouverts devant la fille, et son entourage, qu’il ne le furent devant le père, en raison d’un discours plus politiquement correct, plus conforme à l’idéologie dominante dans le microcosme sur les questions de société. On peut aussi imaginer la stratégie qui consisterait à favoriser le Front National pour qu’il soit présent au second tour des Présidentielles face à un candidat de gauche. L’impuissance du pouvoir tiendrait alors du calcul. Le développement d’une violence et d’une délinquance communautaires, sa capacité à régner dans certains quartiers le temps d’une émeute ou en permanence, sans que les réactions policières et judiciaires soient proportionnées, soulèvent l’inquiétude. Le surcroît d’attention donnée aux migrants et à leurs croyances, l’empressement à les accueillir, l’incapacité à les expulser, malgré les décisions de justice scandalisent. Certaines situations comme celles de Calais, d’où l’on éloigne quelques migrants en avion, pour un coût prohibitif, révoltent. Autant de chiffons rouges pour nombre d’électeurs. Mais les sondages actuels semblent démentir cette hypothèse puisqu’ils prévoient une élimination de la gauche et un retour du balancier. L’appel au « Front républicain » tout drapé qu’il est de hauteur morale n’est donc qu’une supercherie de plus dans le jeu qui remplace la politique. On s’attache à qui va gouverner plus qu’à ce qu’il fera, tout en sachant que l’élu ne tiendra pas les promesses du candidat. Il est pourtant plus important pour la France de savoir ce dont elle a impérativement besoin que de savoir qui va la gouverner. Le Front Républicain, comme le « ni-ni » écartent à l’évidence cette question. C’est le plus sûr moyen de pérenniser le déclin avec ceux qui en sont les instruments.


novembre 10, 2020 adminInternet0 Comments\nLargo Winch – 15 Albums:. Mais le jour de la signature, il se retrouve accusé de crimes contre l’humanité par un mystérieux témoin. Quelconque éligibles Propulsé à la tête du groupe W après le décès de son père adoptif, Largo Winch décide, à la surprise générale, de le mettre en vente afin de créer une ambitieuse fondation humanitaire. Wild Bunch Distribution Bande annonce: Au mépris du danger Officiellement Nerio n’avait pas de famille.\nPour prouver son innocence, Largo devra retourner sur les traces de sa vie passée, au c? PRÊT Dernière mise à jour: Mode Zoom sur les chaussures éthiques Fermer. Un des hommes les plus riches du monde. Suivez nous sur facebook!\nAccusé de trafic de drogue, il clame alrgo innocence. Celui-ci, confronté à la fois à la mort de son père et à la puissante confrérie occulte ayant orchestré celle-ci, va devoir se frayer un chemin entre ennemis mortels et adversaires financiers en succédant winxh son père à la tête du groupe. Nous 1fichieg officiellement recevoir LE fauteuil L’héritier Pilote 1ère partie 2.\nAu mépris du danger Pour prouver son innocence, Largo devra retourner sur les traces de sa lafgo passée, au c?\nLargo winch 2 téléchargement de film en hindi\nLe 4 June Aventure, Action, Thriller Date de sortie: Nerio Winch veut trouver, dans sa wincy famille, un héritier pour son empire. Phil Bedard, David J.\nUne mort forcément suspecte quand on sait qu’il s’agit du fondateur et principal actionnaire du puissant et tentaculaire Groupe W. Pour prouver son innocence, Largo devra retourner sur les traces de sa vie passée, au c? Le souffle du passé Et il adopte Largo. Le manuscrit fût avec un magnifique phrase d’amitié, l’incrédulité, le dieu et la guerre.\nAventureAction Durée: Mais il cachait un secret: Version entièrement en français. Qui va hériter de cet empire économique? Grand écran, Gaming et Littérature.\nSuivez nous sur instagram! Ma Recherche en cours; Française, Canadienne et Belge Titre original: Largo Winch Saison s: Seul problème, ce jeune héritier vient d’être jeté dans une prison du fin fond de l’Amazonie.\nPRÊT Dernière mise à jour: Série arrêtée en Réalisateur: A ne pas manquer En quoi les causes officielles de Meghan Markle sont winc son image Il y a 33 ans mourrait Daniel Balavoine… Poulet pané à la sauce soja Electrostimulateurs. Largo Winch décide à la Largo Winch hérite de son père une immense fortune, et se retrouve à la tête du Groupe W. L’amour à tout prix Et si ces deux affaires faisaient partie d’un seul et même complot visant à prendre le 1fichief de l’empire Winch? Commentaires Commenter 1ficier article.\nIl se réveilla 1ficgier une gueule de bois carabinée, ce qui n’était pas si inhabituel quand il sortait avec Simon.\nUn des hommes les plus riches du monde. Soyez la première de vos amies à aimer cet article.\nLe parfum de la vengeance 6.


Ehpad Les Cotonnières à Loos, une maison de retraite exploitée par Orpea.\nLes Cotonnières à Loos / Un EHPAD géré par Orpea\nLes Cotonnières- Orpea\nL'établissement médicalisé Les Cotonnières est un Ehpad d'occasion exploité par Orpea dans la ville de Loos (59120).\nCet Ehpad bénéficie de 84 chambres médicalisées. .\nLa maison de retraite Les Cotonnières est un Ehpad dont le loyer (bail commercial) est garanti par Orpea.\nPour un achat dans l'Ehpad Les Cotonnières avec Orpea à Loos (59120) ou connaître d'autres offres immobilières en LMNP Ehpad, contactez-nous au Tel : 09 51 70 15 49 (appel non surtaxé) ou en remplissant le formulaire.\nBonjour, Je désire être contacté par un professionnel concernant le programme en Ehpad Les Cotonnières à Loos exploité par Orpea. Merci.\nInvestissement Ehpad Les Cotonnières avec Orpea\nDescription de l'offre d'investissement dans l'Ehpad Les Cotonnières avec Orpea.\nPour un investissement dans l' Ehpad Les Cotonnières à Loos avec Orpea ou connaître d'autres offres immobilières en LMNP Ehpad, contactez-nous au 09 51 70 15 49 (appel non surtaxé) ou en remplissant le formulaire.\nEhpad Les Cotonnières Loos par Orpea\nDescription de l'offre Orpea en LMNP avec une rentabilité de 0,00 % HT/HT\nDétail de l'investissement Les Cotonnières en Ehpad, Loos (59120) avec Orpea.\nRappelons que cette maison de retraite Orpea pour personnes âgées dépendantes est située à Loos\nLe Programme Ehpad « Les Cotonnières » dans la ville de Loos (59120) est un établissement déjà en exploitation.\nIl s'agit d'un EHPAD de 84 chambres médicalisées dont 28 en Unité Alzheimer dans des chambres entièrement équipées et adaptées à la prise en charge de personnes âgées dépendantes, avec sanitaires individuels.\nRappelons que ce programme médicalisé est situé à 12 minutes de la Gare de LOOS et à 12 km l'Aéroport de Lille-Lesquin.\nEnfin, l'Hauts-de-France est composée de près de 6 006 870 habitants.\n5 Rue de Londres, 59120 Loos.\nFinancement de l'Ehpad Les Cotonnières (Loos) avec Orpea :\nPour plus de détails techniques sur l'Ehpad Les Cotonnières Orpea , ou pour un investissement LMNP dans cet Ehpad, contactez-nous au 09 51 70 15 49 (appel non surtaxé) ou en remplissant le formulaire.


Interview : JW Anderson, un génie de la mode pour Nikon - Puretrend\nJ.W Anderson, l'invité de NIKON pour un collection capstule.\nLes étuis Nikon x JW Anderson vendus en édition limité sur le site de Nikon.\nÉtui Nikon x JW Anderson vendu en édition limité sur le site de Nikon. Prix : 99€\nJonathan William Anderson, plus couramment appelé J.W Anderson, est un touche à tout. Après la mode, le voilà qui s'attaque à l'univers de la photographie en associant son génie à la marque Nikon. Le résultat ? Des étuis racés, modernes, techniques et bien sûr griffés J.W vendus en édition limitée sur le site Nikon Store. Si le monde de la mode se réjouit, l'humain lambda qui dit catalogue et non lookbook a besoin de quelques leçons de rattrapage pour tenter de comprendre notre enthousiasme.\nMais qui est J.W Anderson ? J.W Anderson, c'est cet irlandais lauréat du Prix du Créateur Émergent des British Fashion Awards en 2012. Kesako ? Cérémonie attendue par la crème fashion qui a déjà récompensé Stella McCartney, Alexa Chung ou encore le super top du moment Cara Delevingne. Un joli tremplin donc pour J.W qui se fait véritablement connaître auprès du grand public grâce à plusieurs collaborations avec Topshop et plus récemment Versus Versace. Friand de partenariats, cet ambitieux a donc choisi Nikon pour exprimer toute sa créativité. Une nouvelle pas si étonnante nous explique le concerné en interview : "Tout comme la mode, la photographie est une forme d'art, notre partenariat me semble totalement logique. Prendre des photos, cela fait entièrement partie de mon métier". S'il n'a jamais eu l'envie de devenir un photographe célèbre, J.W Anderson a en effet une relation bien particulière avec la photographie dont il se sert dans son processus de création. "C'est un outil indispensable pour moi, pour créer des concepts, des design... mon appareil photo me suit à chaque instant, m'inspire inévitablement".\nUn créateur 2.0\nÀ 29 ans, J.W ne fait pas partie de ces créateurs à la verve si artistique qu'il faut un interprète (ou 10) sous le coude pour saisir leur motivation. Anderson vit avec son temps et les outils qui l'accompagnent comme Internet : "Vous n'avez pas le choix, pour exister aujourd'hui vous devez travailler avec le web. La mode est une histoire de communication et Internet ouvre des portes". Voilà qui est dit et d'une façon telle qu'on ne décèle pas une once de fébrilité dans ses propos. Entre photographie et Internet, J.W Anderson est un vrai créateur 2.0.\nEt pourquoi tant de collaborations ?\n"Ça m'excite, c'est un dopant. Quoiqu'il arrive, ça développe ma créativité". Et quand on lui demande qu'elle est la prochaine étape, il répond avec une verve étonnante "grandir et tenter de devenir une référence, un leader". Vous l'aurez compris, Anderson n'est pas un timide ni un sédentaire, plutôt du genre à placer la barre très haute, au moins à la hauteur de celui qu'il admire : Nicolas Ghesquière, ex directeur artistique de Balenciaga. À défaut d'être français comme son "modèle", J.W Anderson connaît déjà quelques mots dans notre langue "comme ci comme ça". Un petit mais bon début.\nDirection le site de Nikon pour découvrir les nouveaux étuis J.W Anderson x Nikon.\nLe 26 Juin 2013 - 11h30\nInterview mode : Emilie Simon


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Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation | Protocol (Translated to French)\nProtocole optimisé pour une transfection efficace des cellules dendritiques, sans maturation cellulaire\nNous présentons notre protocole optimisé nucléofection à haut débit comme un moyen efficace de transfection humaines primaires dérivées de monocytes des cellules dendritiques avec soit l'ADN plasmidique ou siRNA sans causer la maturation des cellules. En outre, nous fournir des preuves pour faire taire les siARN réussie de gène ciblé RIG-I à la fois au niveau ARNm et des protéines.\nCellules dendritiques (CD) peuvent être considérés comme des sentinelles du système immunitaire qui jouent un rôle critique dans son initiation et une réponse à l'infection. Détection de l'antigène pathogènes par les CD naïve est à travers des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) qui sont capables de reconnaître des structures spécifiques conservé appelé pathogène motifs moléculaires associés (PAMPS). Détection des PAMPs par les CD déclenche une cascade de signalisation intracellulaire entraîne leur activation et de transformation pour les PED matures. Ce processus est généralement caractérisé par une production d'interféron de type 1 avec d'autres cytokines pro-inflammatoires, la régulation positive des marqueurs de surface cellulaire, comme CMHII et CD86 et la migration des DC matures dans les ganglions lymphatiques drainant, où l'interaction avec les cellules T initie la réponse immunitaire adaptative 2, 3. Ainsi, les PED relier les systèmes immunitaire innée et adaptative.\nLa capacité à disséquer les réseaux moléculaires qui sous-tendent la réponse à divers pathogènes DC est cruciale pour une meilleure compréhension de la régulation de ces voies de signalisation et de leurs gènes induits. Il devrait également aider à faciliter le développement de vaccins à base de DC contre les maladies infectieuses et les tumeurs. Cependant, cette ligne de recherche a été gravement entravée par la difficulté de transfecter des primaires PED 4.\nMéthodes de transduction virus, tels que le système lentiviral, sont généralement utilisés, mais portent de nombreuses limitations telles que la complexité et de la bio-dangereux risque (avec les coûts associés) 5,6,7,8. En outre, la livraison de produits de gènes viraux augmente l'immunogénicité de ces transduites PED 9,10,11,12. L'électroporation a été utilisée avec des résultats mitigés 13,14,15, mais nous sommes les premiers à signaler l'utilisation d'un protocole de transfection à haut débit et de manière concluante démontrer son utilité.\nDans ce rapport, nous résumons un protocole optimisé commerciale pour la transfection à haut débit des humains PED primaire, avec une toxicité cellulaire limitée et une absence de maturation des DC 16. Efficacité de la transfection (de plasmide GFP) et la viabilité des cellules ont été plus de 50% et 70% respectivement. FACS analyse a établi l'absence d'augmentation de l'expression des marqueurs de la maturation du CD86 et CMH II dans des cellules transfectées, tandis qRT-PCR n'a démontré aucune régulation à la hausse des IFNβ. En utilisant ce protocole d'électroporation, nous fournir des preuves pour la transfection réussie des PED avec le siRNA et efficace abattre des gènes ciblés RIG-I, un récepteur de reconnaissance clés virale 16,17, à la fois l'ARNm et de protéine.\n1. Programme du 96 Amaxa ainsi Nucleofector navettes\nOuvrez un nouveau fichier de paramètres.\nSélectionnez le nombre de puits que vous allez utiliser pour la transfection standards en faisant glisser le curseur sur le diagramme de plaque de 96 puits. Utiliser un minimum de trois puits à la piscine pour chaque échantillon expérimental.\nEntrez le code du programme: en part1 sélectionnez 'FF' et choisissez part2 '168 'à partir des menus déroulants\nDe la boîte de solutions, sélectionnez 'monocytes, humaine »\nSelon l'option de configuration, sélectionnez «standard».\nPour inclure un contrôle sans transfection, sélectionnez puits supplémentaires à partir du schéma tel que requis, puis choisissez «No Control Program 'de l'option de configuration et cliquez sur Appliquer.\nSélectionnez l'un des puits inutilisés sur le diagramme et cliquez sur la plaque undefine.\n2. Préparer les PED pour la transfection\nTout travail doit être effectué dans des conditions stériles sous une hotte de culture cellulaire lorsque cela est possible. Préparer la solution en ajoutant nucléofection de 96 puits complément de monocytes humains de 96 puits Solution Nucleofector dans le rapport de 450 à 2025. Mélanger et laisser réchauffer à température ambiante. Vous aurez besoin de 20 pi de solution nucléofection par puits. Faire un excès de 10% pour permettre de pipetage erreur.\nPlacez le nombre de modules nucleocuvette vous avez besoin dans la plaque nucleocuvette dans la bonne orientation à savoir insérer le premier pour les lignes 1 et 2.\nDéterminer le nombre de PED nécessaire pour le calcul de votre expérience sur les 500 000 cellules par puits et de culot par centrifugation à 400g pendant 10min. Retirer délicatement le surnageant.\nResuspendre les cellules dans la solution par un léger pipetage nucléofection haut et en bas à quelques reprises.\nDivisez le volume correct de cellules en suspension dans eppendorfs étiquetés pour le particulier par exemple le traitement GLO et RIG-I.\nAjouter siARN 0.25μg par 500.000 cellules et mélanger par pipetage. Non-utilisation de siRNA ciblant dans votre échantillon de contrôle sans-transfection.\nPipeter 20 pi du mélange ci-dessus dans les modules nucleocuvette, en fonction de votre configuration expérimentale, assurant que le liquide est livré au fond du puits.\nRecouvrir la plaque nucleocuvette avec le couvercle et appuyez sur le plateau sur une surface dure une couple de fois pour aider à assurer l'élimination des bulles d'air.\n3. Transfecter les PED\nInsérer la plaque dans le bac de navette de 96 puits Nucleofector, cliquez sur Télécharger et puis démarrer.\nSuivez les progrès des processus de transfection sur l'écran du lap top, une croix noire sur un fond vert signifie une transfection réussie dans ce puits, tandis qu'une barre noire sur un fond rouge signifie qu'il a échoué.\nA l'issue du processus de transfection, enlever la plaque et ajouter 80μl de milieu de croissance DC à chaque puits en utilisant une pipette multicanaux.\nIncuber la plaque pendant 10 min à 37 ° C et 5% de CO 2.\nTransférer le volume 100 ul de la nucleocuvettes dans des tubes contenant 100 pi de la matrice pré-chauffé milieu de croissance DC, le maintien de l'orientation correcte.\nRetirez et jetez les tubes où la transfection n'a pas eu lieu.\nIncuber à 37 ° C et 5% de CO 2 pour l'intervalle de temps ou d'autres 24h désiré.\n4. Infecter les cellules avec NDV\nRetirer les tubes de matrice de l'incubateur de la hotte de culture cellulaire et piscine tubes pour chaque échantillon expérimental dans eppendorfs\nPellet les cellules doucement par rotation dans une centrifugeuse de bureau pendant 5 min et retirez surnageant.\nResuspendre les cellules dans un milieu de croissance sans sérum contenant NDV à une MOI de 1 et incuber à 37 ° C et 5% de CO 2 pendant 45 min, avec eppendorfs vaguement recouverte d'une manière stérile.\nAjouter 900μl de milieu de croissance DC, et re-incuber pendant 8-10 h.\n5. Récolte des cellules\nCellules Pellet en faisant tourner eppendorfs dans une centrifugeuse de bureau et retirer le surnageant.\nCellules de récolte pour l'ARN ou de l'extraction des protéines en fonction de votre protocole.\nEn utilisant notre protocole optimisé, nous transfectées avec les PED RIGI ciblage siRNA pour 24 h et ensuite infecté les cellules avec NDV (un paramyxovirus détecté par RIG-I) pour stimuler la voie de réponse interféron. Par QRT-PCR, nous avons démontré renverser du gène de 75% au niveau de la transcription. Nous avons également observé une réduction similaire de l'expression de IFNβ, qui est un effecteur en aval de RIG-I dans la cascade de signalisation IFN. Par ailleurs, nous avons observé que l'expression de IFNβ chez les non-infectés, le contrôle de cellules transfectées n'était pas détectable alors que celle de MxA, un gène de réponse IFNβ aval, a été minime (figure 1A).\nUne seconde transfection des PED avec RIGI ciblage siRNA a été réalisée en utilisant suffisamment de cellules pour y inclure une analyse Western blot. Lorsque leRT-PCR résultats étaient semblables à ce que nous avons vu précédemment (62% et 66% d'abattre RIG-I et d'expression IFNβ respectivement) (figure 1B), le Western blot sondé pour la RIG-I a révélé que l'expression de ce gène avait été complètement bloqué (figure 1C).\nFigure 1. (A) ont été transfectées avec MoDCs soit siRNA ciblant RIG-I ou siRNA GLO non spécifique et l'effet sur l'expression de la RIG-I, IFNβ et MxA déterminée par qRT-PCR. Le protocole de transfection utilisé un tampon de monocytes spécifiques et FF168 programme nucleoporation (Lonza Walkersville Inc) Après incubation pendant 24 h, les cellules transfectées ont été soit infectés par le NDV (+) ou vers la gauche non infectées (-). Après une incubation de 10 h, les cellules ont été récoltées et les niveaux d'ARN extrait Transcription représentent les résultats de deux expériences répétées. Tiré de Bowles et al 16 (B). MoDCs obtenu à partir d'un pelage différent de Buffy que celles utilisées pour la figure 1A ont de nouveau été transfectées avec RIG-I-ciblage siRNA ou siARN GLO non spécifiques en utilisant le protocole de transfection même que ci-dessus. Un contrôle supplémentaire à l'aide MoDCs non transfectées a été incorporé dans l'expérience. Après une incubation de 24 h toutes les cellules ont été infectées par le NDV et incubé pendant encore 10 h avant d'être récolté à la fois pour l'ARN et l'extraction des protéines. Niveaux Transcription de RIG-I, IFNβ et MxA tel que déterminé par qRT PCR représentent les résultats de deux expériences répétées. Tiré de Bowles et al 16. (C) des lysats de cellules décrit dans la figure 1B ci-dessus ont été analysés par Western blot. Les pistes 1 et 2, des lysats de cellules non transfectées; pistes 3 et 4, des lysats de cellules transfectées siARN GLO; voies 5 et 6, des lysats de cellules transfectées avec RIG-I-ciblage siRNA. Les échantillons ont été sondées pour RIG-I et aussi GAPDH (comme un contrôle du chargement) et ont été analysés en double. Tiré de Bowles et al 16.\nTransfection efficace des cellules dendritiques naïves primaire est importante pour l'analyse à haut débit et l'ingénierie inverse des voies cellulaires inflammatoires dans cette cellule clé de la médiation de la transition innée-immune adaptative. Cependant, la plupart des chercheurs estiment que ces cellules sont difficiles à transfecter fois efficace et sans la maturation de transfection de cellules induisant la procédure lors de l'utilisation des techniques de transfection standard. Nous avons recherché si ces limitations peuvent être surmontées par une optimisation de débit en utilisant un protocole de haut simultanée, système indépendant de 96 puits de transfection commerciales nucléaire (Lonza).\nUtiliser le tri de cellules fluorescentes (FACS), nous avons mesuré une GFP-plasmide exprimant comme un marqueur de l'efficacité de transfection et l'immunoréactivité CD86 et CMH II comme une lecture de la maturation des cellules. Une série d'expériences évaluant les tampons et les programmes de l'électroporation finalement identifié les conditions de transfection montrant> 50% et une absence d'augmentation des marqueurs de maturation.\nPour approfondir l'activation possible des PED par le processus nucléofection nous avons analysé les niveaux d'expression de IFNβ et ses MxA aval du gène de réponse au niveau des ARNm. MxA d'expression est extrêmement sensible à la production et de IFNβ peut être utilisé comme un test biologique pour détecter de très faibles niveaux de l'cytokine18. Grâce qRT-PCR, nous avons vu aucune expression détectable IFNβ mais ne voir régulation positive des MxA indiquant ainsi l'induction IFNβ ci-base. Cependant, cette régulation à la hausse minime de MxA chez les non-infectés, le contrôle de cellules transfectées a été négligeable par rapport à celui résultant de virus de la médiation de stimulation de la cascade de signalisation IFNβ (figure 1A) et a confirmé que nous pouvions utiliser avec succès notre protocole nucleoporation à transfecter PED sans activer à un niveau significatif.\nL'utilité de notre protocole optimisé a été confirmée par Western blot. La transfection de siRNA ciblant les PED avec RIG-I a causé une perte complète de RIG-I détectable de protéines (figure 1C). Notons que pour la perturbation de succès d'autres gènes, la quantité de siARN utilisées et la durée de la transfection peut être optimisé.\nÀ notre connaissance, ce travail permet pour la première fois la conception du haut débit une perte de fonction des études dans l'enseignement primaire CD humaines, résolvant ainsi un obstacle difficile à la recherche dans ce domaine. Cela devrait offrir de nouvelles possibilités pour l'étude de CC de signalisation et peuvent contribuer à l'avancement dans le développement de DC à base d'immunothérapies.\nLe projet a été soutenu par le NIH NIAID Marché n HHSN2662000500021C. Nous remercions Ming Chen pour son assistance technique.