«Este artículo es una mezcla de la experiencia personal del autor viajando por Costa Rica y el artículo: 15 Things to Know About Costa Rica Before You Go del blog Mytanfeet.»\nSi estas organizando tu viaje a Costa Rica, hay varias cosas que deberías saber, el turismo en este país de Centroamérica ha cambiado bastante los últimos años, cada vez se vuelve más popular no solo para latinoamericanos sino también para europeos y norteamericanos.\nEste aumento en turismo ha generado muchos mitos que vale la pena desmentir para que no te lleves una sorpresa desagradable una vez estando ahí.\nPor supuesto que nunca es posible ir 100% listos a un viaje y sabiendo todo con anterioridad pero sin duda alguna estos consejos para antes de viajar a Costa Rica seguro te ayudará bastante.\nConsejos para saber antes de viajar a Costa Rica\nConsejo 1 para viajar a Costa Rica – No es barato\nContrario a lo que muchos tienen en la cabeza de que por ser Costa Rica un país Centroamericano será barato, resulta que Costa Rica no es tan barato como piensas.\nMuchas personas viajan a Costa Rica con la idea de que unos cuantos dólares los harán ricos en este paraíso pero la realidad es otra.\nNo estoy diciendo que sea caro o imposible de viajar, es tan sólo que lo tomes en cuenta al momento de realizar tu presupuesto de viaje y evitar llevarte sorpresas.\nConsejo 2 para viajar a Costa Rica – Las distancias son largas\nConsejo 3 para viajar a Costa Rica – Hace frío\nConsejo 4 para viajar a Costa Rica – Hay muchos mosquitos pero no es para asustarse\nExisten muchas opciones de repelente de mosquito tan sólo asegúrate que el tuyo tenga mínimo un 30% DEET como compuesto activo para que sea efectivo.\nEl que compro para todos mis viajes y recomiendo es este.\nAnti-comezón por picadura\nRascarse un piquete puede empeorar mucho la situación así que lo mejor es ponerse algo para evitar el comezón.\nEsta barra es pequeña y cabe en cualquier lugar, es ideal para viajar a lugares dónde hay posibilidad de ser picado.\n>>Da clic aquí para ver precios actuales y ordenar<<\nConsejo 5 para viajar a Costa Rica – No hay ejército y han sido en tres ocasiones el país más feliz del mundo\nEl país centroamericano ha sido catalogado en varias ocasiones como “El País más feliz del mundo” según el Índice del Planeta Feliz de la New Economics Foundation, lo encabezó en el 2009, 2012 y 2016.\nAdemás son conocidos por su gusto por hablar con los extranjeros, que no te sorprenda si un Tico se te acerca sólo para platicar y preguntar de dónde eres, les encanta conocer personas y son bastante amables y relajados.\nOJO SI ERES MUJER VIAJANDO SOLA: es común que se te acerquen y sin pena te pregunten si eres soltera o con quién estas en Costa Rica, sé inteligente y sigue tu instinto y te vayas con un ¡Pura Vida, hasta luego!.\nConsejo 6 que deberías saber – Es seguro tomar agua de la llave\nSé que en México no estamos acostumbrado a esto y que si bebes agua de la llave será probable que los siguientes días la pases bastante mal, pero en Costa Rica es seguro hacerlo, aunque cabe mencionar que siempre es bueno preguntar en el Hotel/Hostal donde te hospedes para estar completamente seguro, aun así te recomiendo que ¡siempre! cargues con tu botella de agua reusable.\nConsejo 7 para viajar a Costa Rica – El internet es malo y no hay Wifi en todos lados\nConsejo 8 que deberías saber – Su español es diferente al que tú conoces\nEllos no se refieren a una persona como “muchacho” o “chica” sino como “el mae” o “la mae”, en Costa Rica no hay cosas buenas ni bonitas hay cosas “tuanis o chivas”, si preguntas ¿qué tan lejos esta un lugar? Te dirán que no esta lejos, ¡esta largo!.\nNo toman café, toman “yodo” ( sí, si es café), tener hambre es tener filo, la comida es “moncha”, no te van a pedir que esperes un momento te dicen “suave un toque” (tranquilo no te están ofreciendo marihuana), si quieres que el taxista prenda el taxímetro entonces solicítale que prenda “la María”.\nLos ticos no dicen HOLA, ni ADIÓS, ni QUÉ TAL o ESTOY BIEN, todo se resume a ¡PURA VIDA!.\nConsejo 9 que deberías saber – La policía te puede parar en cualquier momento y pedir tus papeles\nEs normal ver a la policía en la carretera parando a las personas, por eso siempre carga con tu pasaporte o con una copia del mismo y una foto en tu celular de la estampa de tu entrada. La policía en Costa Rica tiene permitido parar a cualquiera con el fin de reducir el trafico de drogas, pero esto es más común en las zonas fronterizas.\nSi haz optado por rentar un auto está de más decirte que siempre debes cargar además con tu licencia de manejo.\nConsejo 10 que deberías saber – El transporte público opera desde San José/Alajuela\nConsejo 11 que deberías saber – La mayoría del tiempo usarás dólares en lugar de colones\nLa tasa de cambio aproximada es $1 dólar = $560 colones, pero no te recomiendo que cambies todo tu dinero a la moneda local, ya que prácticamente todas las compañías de tour te pedirán el pago en Dólares.\nEn supermercados y tiendas también te van aceptar tus dólares, aunque siempre carga contigo alguna suma de colones más que nada en las regiones menos turísticas, si ellos te necesitan dar cambio al pagar con dólares lo harán en colones.\nTambién cabe mencionar que no en todas las ciudades o pequeños pueblos vas a encontrar cajeros automáticos, así que ve prevenido.\nConsejo 12 que deberías saber – San José no es tan malo como lo pintan\nEs cierto que en comparación con el resto del país, San José es sucio, esta lleno de gente y no muy bonito a primera vista, sin embargo vale la pena darle la oportunidad y recorrerlo, tiene joyas por toda la ciudad, como mercados y bazares donde puedes encontrar auténticos recuerdos de tu viaje. Además tiene los mejores restaurantes de todo Costa Rica, cuenta con el Teatro Nacional, museos y muchísima historia.\nConsejo 13 que deberías saber – Manejan mal y muy rápido\nContrario a la actitud relajada y buena onda de los ticos, si a la hora de manejar se trata debo decir que ¡manejan como locos!, puesto que son bastante impuntuales (nada a lo que en México no estemos acostumbrados) siempre manejan con muchísima prisa, digamos que no respetan del todo las reglas de manejo como todo el mundo las conoce, por eso debes tener bastante cuidado si vas a rentar un auto, mantente siempre en tu carril y cede el paso.\nEspero que estos consejos te ayuden durante tu viaje a Costa Rica y que lo disfrutes tanto como yo.\n¿Tienes otros consejos para viajar a Costa Rica?


I-CLIP Original Silver Pure Black, Cartera, Billetera,…\nSe pueden llevar monedas?\nNo, monedas no, es imposible. No tiene desaprovechado ni 1mm de espacio . Yo llevo 11 tarjetas y billetes. Las monedas las llevo en un monedero a parte.\n· 9 de noviembre de 2017\nQue garantia tienen?Porque veo en muchos comentarios que se parte por la esquina??Gracias.\nsupongo que tiene una garantía de 2 años como todos los artículos en europa, a mí se me ha roto pasado el periodo de garantía.\nla pieza de plástico estaba convencido que era metálicas pero una derrota ha quedado claro que no era así\n¿que diferencia hay entre el clasic y el de fibra de carbono?\nSimplemente al tacto y a la vista me quedo con el carbono. Y en mi opinión se pliega un poquito mejor al cerrarlo el de carbono, pero vamos, manías pijoteras mías ;). En el fondo es lo mismo, si te sobra adquiere el de aspecto carbono y si te apetece ahorrar ve a por el clasic. Yo tengo el de carbono ;)\nVa con un clip fe botón justo en el borde, queda bien cerrada.\nMinimalista?? Aun convivimos con monedas. Y llevar otro monedero no es práctico. Alguna solución?\nEn este caso, de I clip, tendrás que llevar las monedas en un monedero, no hay solución\nY qué hacemos con las monedas?\n¿La estructura que contiene las tarjetas (incluido el clip) es metálica o plástica?\nNo se arañan las bandas magneticas de las tarjetas al deslizarlas entre ellas para sacarlas ?\nNo. Lo único es que no sabes el orden de tus tarjetas porque no se ven... solo la primera y última ..\nQue medidas tiene por favor?\nExactamente las de las tarjetas de crédito, dni, etc. y grosor alrededor de 1 cm, depende de las tarjetas y billetes que metas.\nque es y donde encaja la nota para soporte\nEs un tarjetero y billetero a la vez. Tiene como un clip en el interior para sujetar el dinero y compartimento para tarjetas bancarias permiso de conducir, etc.\nHay varios videos en la red\n· 6 de marzo de 2018


Conoce 3 de los casos de scam más conocidos del criptomundo\nMarialaura Vallejo 18 septiembre, 2018 0\nLa era de las criptomonedas es una nueva y llamativa para las personas que quieren ganar. Esto también la hace llamativa para las personas que quieren ganar dinero de forma ilegal. De esta forma, se han vivido múltiples casos de estafas con criptomonedas que han hecho temblar este mundo. Algunas han sido inmemorables, otras muy recientes, pero sin duda han hecho que todos estén más precavidos con sus inversiones. De esta forma, quisimos recapitular y hablar sobre 3 de los casos más conocidos de scam más conocidos del criptomundo. Esperamos sea de ayuda.\nPinCoin y iFan\nAun cuando sean dos criptomonedas de las que estamos hablando, casualmente son de una misma empresa fraudulenta. Este fraude, descubierto en abril de este año, estafó por USD$660 millones de dólares en criptos a apróximadamente 32.000 inversionistas. Estas estafas fueron llevadas por una empresa, Modern Tech, la cual tenía sede en Vietnam. Luego de que se supo lo ocurrido, los integrantes de la misma desalojaron sus oficinas e intentaron huir.\nDenominada la estafa más grande realizada con ICOs, ambas fueron denominadas estafas de marketing multinivel. iFan fue promotor de una plataforma para que celebridades promocionaran su contenido, y Pincoin era un esquema de inversión con un 40% de devolución mensual de las inversiones realizadas. Modern Tech presumía la construcción de una red publicitaria a través de una plataforma en línea, donde los inversionistas podrían realizar subastas.\nOtro de los scams más grandes del criptomundo, Bitconnect fue obligado a suspender sus operaciones en enero de este año por una orden de cese y desista de entes norteamericanos. Dentro de esta plataforma, los usuarios realizaban intercambios de Bitcoin por BCC para aumentar sus inversiones, siendo prometidos con ganancias mayores a las mismas. Fue acusada durante mucho tiempo como un esquema Ponzi, hasta que fue suspendida por considerarse como tal.\nEsta empresa administraba un programa de préstamos de BCC (que habían obtenido con Bitcoins), donde los usuarios entregaban sus monedas a otros usuarios para generar intereses en función de la cantidad que prestaban. Además de esto, seguía un sistema de referencias y ganancia de las inversiones por cada referido.\nActualmente, la empresa ha sido demandada por múltiples usuarios por un monto de ISD$700.000 por fondos perdidos.\nEsta es la primera ICO donde una Comisión intervino y ordenó la detención de sus operadores. Después de recaudar más de USD$15 millones de inversionistas, la Unidad de Delitos Cibernéticos de la Comisión de Bolsa y Valores de los Estados Unidos ordenó la detención de las operaciones de Plexcorp, la empresa detrás de la ICO. De igual forma, congeló las cuentas de la compañía.\nDe esta forma, se pudieron devolver el dinero a los inversionistas. Esta compañía prometía a sus inversionistas una devolución de más del 1.300% mensual de la inversión realizada. Fue esto lo que encendió las alarmas de la Comisión, y fue de igual forma la razón por la que iniciaron las investigaciones contra esta empresa.\nSu fundador, Dominic Lacroix, fue enjuiciado y encarcelado en Canadá.\n¿Te gustó este artículo sobre 3 estafas de criptomonedas? ¡Comparte en tus redes sociales!\nbitconnect criptomonedas estafas ICO ifan Pincoin plexcoin scams


Horario IV Tattoo Circus\n« Sorteo 1h tatuaje GRATIS\nCarteo a presxs »\n12thMay. × ’16\nLos próximos días 20,21 y 22 de mayo tendrá lugar en la 13-14 la IV edición del Tattoo Circus Madrid. Durante los 3 días habrá habilitado un espacio donde realizarse tatuajes, piercings y peluquería, acude lo antes posible a pedir cita, y llévate si puedes el diseño/idea de tu tatuaje en un usb. Habrá una barra con cafes, refrescos y bizcochos ininterrumpidamente, toda la comida del evento es vegana, los comedores y cenadores además son libres de glutén.\nAdemás de los beneficios económicos solidarios, nos parece importante fomentar el carteo a presxs, un pequeño gesto puede romper el aislamiento carcelario, para ello habilitaremos un puesto de escritura de cartas y reseñaremos algunos casos represivos con direcciones dónde escribir.\nPara la correcta realización de las actividades, os pedimos no comer ni beber en los espacios de tatuaje, piercing y peluquería. En el espacio no se vende alcohol, si lo traes evita traerlo en vidrios. Por motivos higiénicos, evita por favor también traer perros al evento. Tampoco realices fotos durante el evento dentro del espacio, no se lo pongas fácil a la represión.\nEsperamos disfrutemos del evento, y sirva para apoyar a nuestrxs comapñerxs presxs y denunciar la actual sociedad represiva y carcelaria.\n17:00 – Gran apertura de puertas\n18:00 – Música de ambiente de djs residentes\n20:00 – Jam Solo y los invisibles (cantautor rock & roll ex regocijo en el fango )\n21:00 – Cenador vegano\n21:30 – Concierto Diëresis (https://dieresisbeatcore.bandcamp.com) + Orchis Simia (https://orchissimia.bandcamp.com)\n11:30 – Charla “Repensando los amores desde el feminismo y la anarquía relacional”\nEl amor se entiende en nuestro contexto cultural como una experiencia universal, que todo el mundo vive igual, algo casi fisiológico que de repente viene y te atraviesa, pero que en realidad es un conjunto de experiencias a las que se le da un significado desde la cultura en la que vivimos. ¿Hay una ideología del amor en nuestra cultura amorosa?, ¿como se relacionan amor y género?, ¿es el amor heterosexual? Y si apostamos por construir relaciones no monógamas, ¿hay una sola forma de ser no monógama?, ¿que tipos de relaciones se pueden construir cuando se elige tener relaciones no exclusivas?, ¿tener relaciones no monógamas implica únicamente los vínculos románticos y sexuales?, ¿o puede suponer un cambio de paradigma en la forma que tenemos de estructurar nuestros proyectos de vida?, ¿que es la anarquía relacional?\n14:00 – Comedor vegano\n16:00 – Charla “El hierro y la carne. Epistemología penal del cuerpo”\n¿Qué significa chinarse dentro de los muros carcelarios? ¿Cuál es el verdadero sentido de los tatuajes dentro de la institución? En un dispositivo donde la vida, en su totalidad es medida, tasada, controlada…emerge el cuerpo como un campo de batalla. Recurso total y definitivo para hacer frente al encierro y sus consecuencias. Problematizar el cuerpo y sus cicatrices desde una perspectiva política, ayuda a concebir al preso como el sujeto político que es.\n18:30 – Debate sobre represión y antiterrorismo\nDesde siempre el estado ha utilizado las leyes antiterroristas como uno de los métodos preferidos para la persecución política, medios de comunicación, policías, jueces y políticos forman parte de esta maquinaria que se traga al año millones de euros bajo la excusa de la seguridad. Desde Tattoo Circus os invitamos a este debate donde se darán algunas visiones sobre diferentes casos sucedidos a lo largo de los años.\n21:30 – Cenador vegano\n22:00 – Espectáculo “Alambre de espino en las venas ( reflexión sonorizada sobre la cárcel )” y «Freakshow a cargo de i don’t give a fuck».\n23:30 – Cierre\n11:30 – Taller “Radiografiando el miedo”\nTaller mixto en el que abordaremos y trabajaremos de forma colectiva el miedo dentro de nuestras vidas y espacios de lucha.\n18:00 – Charla “Amor de madre”\nExperiencias penitenciarias de Xosé Tarrio y Gabriel Pombo da Silva a través de sus madres y situación actual del colectivo Nais Contra A Impunidade\n21:00 – Conciertos hasta el cierre\nTremenda Jauría ( https://tremendajauria.bandcamp.com ) + A las bravas ( https://alasbravas.bandcamp.com )\nTodas las actividades tendrán lugar en la 13-14 okupada, en la calle Párroco Don Emilio Franco nº 59. Metro Nueva de Numancia, en el barrio de Vallecas.


Consulta Decodificador como cliente - LonasDigital\nEstás en el tema Consulta Decodificador como cliente dentro del subforo Receptores General (Dudas) en LonasDigital. Hola y buenas tardes a todos, Tengo la idea de montar un GigaBlue SE 800 Plus de server en el salon de casa con su tarjeta blanca y quisiera algún decodificador para poner de cliente dentro de la misma vivienda en 2 habitaciones más. ¿Qué deco económico me recomendáis (algo más que el GigaBlue)? Un saludo y gracias....\nEste tema tuvo 866 Visitas y 8 Respuestas\nTengo la idea de montar un GigaBlue SE 800 Plus de server en el salon de casa con su tarjeta blanca y quisiera algún decodificador para poner de cliente dentro de la misma vivienda en 2 habitaciones más.\n¿Qué deco económico me recomendáis (algo más que el GigaBlue)?\npor cierto ¿se puede poner un deco cliente en la casa de la playa con un modem wifi o con el mismo móvil actuando de router?\nEsto me interesaría bastante.\nCasa de playa = ilegal\nMóvil como router = si se puede\nNo sabía que era ilegal poder visionar algo que pagas en un domicilio si te mudas en verano a otro y unas personas de la misma familia se quedan en la residencia habitual y otros se van a "la casa de la playa".\nSi es así pido disculpas pues no era mi intención hacer nada de este tipo.\nSí, es ilegal......\n¿De todas formas, me recomiendas algún deco para poner dentro de la misma vivienda en otra habitación?\npues cualquiera que admita cccam como ferguson ariva , iris , mvision , engel o fonestar te iria bastante bien y rondan los 120€ nuevos , pero ojo como tu gigablue no son\nMuchas gracias, mirare en la página del patro.\nEl patro no tiene existencias, creo


¿Por qué el 2019 no fue el año de Trump?\nMUNDO | 12/26/2019 8:08:00 AM\n2019 no fue el año de Trump Foto: AP\nEn su agenda nacional, en la que reducir la inmigración es una prioridad, Trump se ha convertido en el único líder que se enfrenta al statu quo. Antes de viajar a la cumbre de la Otan no solo se refirió a los desafíos en seguridad que suponen Rusia, Siria o Afganistán, sino que arremetió contra los aliados "morosos" que no están contribuyendo suficiente con el organismo. "No ha sido una situación justa porque nosotros pagamos demasiado", dijo.\nBrian Katulis, miembro del Center for American Progress, con una óptica izquierdista, calificó la política exterior como el "tema durmiente" de las futuras elecciones, pero dijo no extrañarle que Trump encuentre una manera de ponerlo en el tapete. "Esta es una presidencia de programa de telerrealidad. Aunque no haya conseguido grandes logros, él afirmará que sí" lo hizo, dijo. "Utilizará a otros países y sus líderes para apuntalar su campaña de reelección".\nNile Gardiner, un exconsejero de la primera ministra británica Margaret Thatcher y hoy experto del centro de estudios conservador Heritage Foundation en Washington, afirmó que Trump ha logrado éxitos "significativos". "Hemos visto que se le arrebató un 99% de territorio al grupo EI en Irak y en Siria. Todavía queda trabajo por hacer, pero este es un enorme logro", dijo. "La política exterior de Trump es prospectiva y no aislacionista", sostuvo Gardiner, y agregó que los líderes europeos "se están preparando para la muy fuerte posibilidad de la reelección de Trump".\nGardiner argumentó que Trump también había "debilitado significativamente" a Irán, donde han estallado protestas antigubernamentales a raíz de las sanciones estadounidenses. Los críticos advierten, no obstante, que la línea dura ha sido contraproducente al reducir el cumplimiento del acuerdo nuclear de 2015 y alentar al régimen clerical de ese país a contraatacar en la región.\nEl T-MEC logró un raro consenso entre el presidente y los demócratas, que generalmente se oponen a los acuerdos de libre comercio, con medidas, por ejemplo, que elevan los estándares laborales en México. En temas álgidos como Irán y Corea del Norte, Trump podrá al menos alegar haber adoptado un enfoque diferente al de sus predecesores, consideró Katulis. "Es difícil señalar cuáles son de hecho los éxitos de Trump en política exterior", pues "el mundo es un auténtico caos", agregó.\nIndependientemente de los hechos, Trump afirmará "que Estados Unidos tiene una carga menor en el mundo" pues logró "que otros hicieran más". Katulis dijo que el presidente ha machacado que "los extranjeros se han estado aprovechando de Estados Unidos" y que estará ansioso por hacer de la seguridad nacional un tema clave de política interna. "Con Trump, se puede esperar lo inesperado", sentenció.


Artículo: Los principales democristianos de Valencia se van con Suárez - Informaciones - 22/11/1977 - Archivo Linz de la Transición española • Fundación Juan March\nLos principales democristianos de Valencia se van con Suárez\nInformaciones. 22/11/1977. Páginas: 1. Párrafos: 4. MADRID, 22 (INFORMACIONES).\nEL consejo político de la Unión de Centro Democrático (U.C.D.) se reunirá a finales de la presente semana o a principios de la próxima, según ha manifestado un portavoz del partido. La reunión se celebrará después de que finalicen las que mantendrá en los próximos días —a partir de hoy— el grupo parlamentario de la U. C, D. El consejo político está compuesto por representantes del Gobierno, del partido y del grupo parlamentario.\nEl consejo político procederá probablemente al nombramiento del nuevo secretario de Relaciones Internacionales, cargo con el que se amplia el comité ejecutivo y para el que se propone el nombre de don Javier Rupérez, actual jefe del Gabinete Técnico del ministro de Asuntos Exteriores. Entre otros temas, el consejo político será informado, igualmente, del documento ideológico, que ya ha sido enviado a las secretarias provinciales del partido y que, resumido, publicó ayer INFORMACIONES.\nTras el consejo político se reunirá el grupo de trabajo que coordina las acciones del Gobierno, del partido y del grupo parlamentario. Esta comisión está compuesta por ocho parlamentarios (cuatro del Senado y cuatro del Congreso) ; los siete secretarios del comité ejecutivo (ocho cuando sea oficial de Relaciones Internacionales) y seis ministros del Gobierno. Este gran órgano de decisión y coordinación de la U.C.D. estará presidido por don Adolfo Suárez, presidente del Gobierno, y se reunirá una vez cada quince días.\nSegún fuentes del partido, los nombres concretos de estos 23 miembros de la comisión coordinadora, además del señor Suárez, son los siguientes:\n• Ministros: Don Fernando Abril, don Francisco Fernández Ordóñez, don Joaquín Garrigues, don Iñigo Cavero, don Pío Cabanillas y don Landelino Lavilla.\n• Ejecutiva de U.C.D.: Señores Casado, Sánchez Terán, Moya, Fraile, Criyilles, Medina, Alonso Castrillo y doña Carmela García.\n• Grupo parlamentario del Congreso, que se elegirá esta tarde en la reunión del mismo, y que podrían ser, según las citadas fuentes: Don José Pedro Pérez Llorca, don Blas Camacho. don Jesús María Viana Santacruz y don Modesto Fraile.\n• Grupo parlamentario del Senado: Don Rafael Calvo Ortega, don David Pérez Puga y otros dos todavía no especificados.\n• Y, finalmente, el secretario permanente del Ministerio para las Relaciones con las Cortes, don Rafael Arias Salgado.


Interpelación sobre la elaboración de un mapa de externalizaciones | Donostiako Eusko Alkartasuna\nbatzordea 2010-01-08 2010-04-19 No hay comentarios en Interpelación sobre la elaboración de un mapa de externalizaciones\nRicardo Burutaran Ferré, Portavoz de Eusko Alkartasuna, al amparo del vigente artículo 137 del Reglamento Orgánico del Pleno, presenta para su tratamiento en la Comisión de Servicios Generales la siguiente INTERPELACIÓN a la Delegada de Recursos Humanos, Dña. Alicia González Álvarez relativa a la elaboración de un mapa de externalizaciones.\nEn todo momento, pero fundamentalmente en época de crisis, resulta más necesario que nunca hacer un análisis interno y externo de la forma de realizar las diversas funciones por parte del propio Ayuntamiento, sus organismos autónomos y sus empresas participadas; evitando, por tanto, duplicidades y promoviendo una optimización de los recursos humanos que dispone el Ayuntamiento.\nDel mismo modo la realización de este análisis es especialmente importante para velar por que las condiciones de contratación de los trabajadores y trabajadoras de los servicios externacionalizados no supongan una merma en sus derechos laborales, tanto en aspectos retributivos como en lo referente al cumplimiento de la normativa de prevención de riesgos laborales.\nUna de las vías existentes para obtener esta información es la realización de un mapa de externalizaciones, con indicación del personal adscrito a las mismas. Esta herramienta podría especificar la identidad de las personas contratistas, el objeto y duración de la contratación, las modalidades de contratación, el convenio colectivo de aplicación y el lugar donde se desarrolla la actividad.\n1.- ¿Porqué el Ayuntamiento no ha desarrollado hasta la fecha un mapa de externalizaciones que permita conocer los servicios que el Ayuntamiento presta indirectamente así como el objeto, duración y condiciones, tanto económicas como laborales, de los trabajadores que prestan las mismas?\n2.- ¿Tiene previsto el Ayuntamiento encargar en breve el citado mapa de externalizaciones al objeto de proporcionar la citada información, así como tratar de evitar duplicidades que suponen un incremento del gasto?; en caso afirmativo ¿En qué caso?


La Junta lamenta la "incoherencia" del PP al criticar los presupuestos andaluces\nLópez Gil lamenta que los populares hagan una valoración negativa de los presupuestos "sin afán constructivo"\nEuropa Press /Cádiz 01 Noviembre, 2016 - 19:06h\nEl delegado del Gobierno de la Junta de Andalucía en Cádiz, Fernando López Gil, ha lamentado este martes la "incoherencia" de los parlamentarios del Partido Popular en Cádiz al criticar los presupuestos andaluces "sin afán constructivo, sin ofrecer alternativas viables, y dejando en agua de borrajas la llamada al diálogo, al consenso y a la responsabilidad que apenas hace 24 horas exigía su líder provincial a los representantes públicos".\nSegún ha informado la Junta en una nota, López Gil ha reprochado al PP que "no se aplique la misma fórmula que exige a otros" y que "mientras Antonio Sanz (PP) reclama responsabilidad y hace un llamamiento al diálogo para lograr estabilidad, sus compañeros faltan a ese compromiso y dinamitan todos los puentes criticando unos presupuestos que son la herramienta fundamental para que Cádiz potencie su desarrollo económico, y lo haga en igualdad de condiciones".\nAdemás, el delegado ha indicado que "obvian" que la Junta de Andalucía es la administración que "más inversión destina cada año a la provincia", con unas cifras que deberían hacer "sonrojar" al Gobierno de España por su "falta de apuesta por Cádiz".\nEl delegado del Gobierno ha invitado a los representantes del PP a que "dediquen sus esfuerzos y energías a lograr que el Gobierno de España compense a Andalucía", una comunidad que de forma sistemática recibe cada año "menos fondos que otras" por el actual sistema de financiación de las regiones.\nSin embargo, ha apuntado que pesar de eso, la Junta "mantiene su capacidad inversora, aumentando las partidas destinadas al gasto social", para aprobar unos presupuestos que tienen como "prioridades" el impulso de la actividad económica y el empleo, dotar de mayor capacidad económica a la clase media y trabajadora, así como "crecer más, mejor y en igualdad". MÁS DE 1.000 MILLONES DE EUROS\nComo ha explicado, la provincia de Cádiz va a recibir sólo en inversiones destacadas más de 1.000 millones de euros para políticas sociales, inversiones, promoción económica y la Inversión Territorial Integrada (ITI).\nEn este caso en concreto, López Gil ha recordado que el compromiso de la Junta con esta iniciativa no solo la ha llevado a aprobar ya más de 34 proyectos con el "máximo consenso" de los agentes económicos y sociales y los sectores productivos, sino que para el año 2017 la inversión "se incrementa en un 17 por ciento para dar continuidad a los proyectos que ya están en marcha y para incorporar otros nuevos hasta alcanzar el medio centenar de actuaciones en marcha".\n"Frente a esa apuesta por la reactivación económica y por el empleo, con la puesta en marcha de planes de empleo que se suman a los que ya han permitido invertir unos 160 millones de euros en Cádiz, el PP sigue negando a Andalucía el tan demandado Plan Especial de Empleo que sí ha concedido a otras comunidades", ha apostillado el delegado del Gobierno.\nLópez Gil ha añadido que "Andalucía es la primera comunidad en presentar sus cuentas, y lo hacemos después de haber logrado el consenso con aquellas fuerzas políticas que como nosotros trabajan por el avance de nuestro territorio", quien ha apuntado que "lo que el PP no puede obviar es que el gasto no financiero subirá un 2,8 por ciento y la inversión pública en un 10,3 por ciento, a pesar de que cada año la comunidad pierde 1.000 millones de euros por el actual sistema de financiación".\nPor último, el delegado del Gobierno ha recordado a los parlamentarios del PP que "aún están a tiempo de hacer aportaciones constructivas" a estos presupuestos en base a sus obligaciones como diputados, al igual que espera que trabajen para que los futuros Presupuestos Generales del Estado (PGE) hagan suyas las demandas de partidos, sindicatos y empresarios e incluyan actuaciones como la inversión en el eje ferroviario Algeciras-Bobadilla.\n"Confiamos en que en vez de seguir instalados en la crítica constante apuesten por el debate sereno y por hacer propuestas que de verdad sirvan para mejorar la vida de todos los andaluces y los gaditanos", ha concluido.


Citas disponibles para la vacuna contra COVID-19, dice el condado de Los Ángeles – Telemundo 52\nEl domingo, el condado informó de 8,243 nuevos casos de COVID-19 y 98 muertes adicionales, lo que eleva los totales del condado a 1,073,111 casos y 15,260 muertes.\nPor CNS\t• Publicado el 24 de enero del 2021 • Actualizado a las 8:44 pm del 24 de enero del 2021\nLos funcionarios del condado de Los Ángeles dijeron el domingo que citas están disponibles esta semana en los cinco grandes centros de vacunación contra el coronavirus del condado en Magic Mountain, Pomona Fairplex, Cal State Northridge, Forum en Inglewood y la Oficina de Educación del Condado en Downey.\nLas citas se pueden reservar en www.publichealth.lacounty.gov/media/Coronavirus/vaccine/index.htm.\nA los residentes que reciban su primera dosis de la vacuna en un sitio de vacunación de gran capacidad administrado por el condado se les proporcionará la fecha y el lugar para recibir su segunda dosis y se registrarán automáticamente para su cita de segunda dosis. También recibirán recordatorios por correo electrónico.\nHabía 6,697 personas con COVID-19 hospitalizadas en el condado hasta el domingo, frente a las 6,881 del día anterior. Ese número había alcanzado un pico de más de 8,000 a principios de este año.\nPero aunque ese número ha bajado, los trabajadores de la salud y la capacidad de la UCI siguen abrumados, y la región del sur de California sigue teniendo 0% de espacio disponible en la UCI y permanece bajo la orden regional de quedarse en casa.\nLos funcionarios del Departamento de Salud Pública del Condado de Los Ángeles han estado pidiendo paciencia entre los residentes ansiosos por vacunarse contra el COVID-19, ya que los suministros siguen siendo lamentablemente cortos y el sistema de reserva en línea sobrecargado deja a muchas personas frustradas mientras intentan programar citas.\n"También estamos viendo una disminución en las hospitalizaciones y varios otros indicadores que rastreamos, incluyendo la tasa de positividad de las pruebas, el porcentaje de visitas al departamento de emergencias asociadas con COVID-19 y el porcentaje de muestras respiratorias positivas para COVID-19 en los sitios de vigilancia del laboratorio centinela", dijo el Dr. Paul Simon, director científico del Departamento.\nlong beach 25 Ene\nCiudad de Long Beach comenzará a vacunar a maestros y personal escolar\n"Sin embargo, a pesar de estas tendencias prometedoras, quiero enfatizar que el número de casos, hospitalizaciones y muertes sigue siendo demasiado alto", él dijo. "Por lo tanto, si bien hay motivos para tener esperanza, todos debemos permanecer atentos y seguir así disciplinados, con máscaras, distanciamiento físico cuando estamos fuera de casa, evitando reuniones y lavándonos las manos frecuentemente”.\nSimon dijo que los cinco sitios, cada uno con capacidad para administrar 4,000 inyecciones por día, operarán a una capacidad mucho menor esta semana, probablemente en el rango de 2,000 a 2,500.\nEl condado espera recibir alrededor de 143,900 dosis más de vacunas esta semana. Sin embargo, dado que las personas necesitan recibir dos dosis del medicamento, con un intervalo de tres a cuatro semanas, la mayor parte de la vacuna que se lanzará esta semana se utilizará para administrar segundas dosis a las personas que ya han recibido la primera. Barbara Ferrer, directora de Salud Pública, estimó anteriormente que solo 37,900 de las nuevas dosis estarán disponibles para que las personas reciban su primera dosis.\nSimon dijo el viernes que las cifras más recientes mostraron que ya se han administrado 441,140 dosis de vacuna en el condado, aunque dijo que es probable que el número sea mucho mayor debido a retrasos en el recuento de los totales de vacunación. Hasta esta semana, el condado había recibido alrededor de 853,000 dosis totales.\nSimon dijo que la gente no debería mirar esos números y asumir que hay 400,000 dosis sin usar en el condado, y señaló nuevamente el retraso en los informes de vacunación y la administración diaria de dosis. Si la asignación semanal del condado no mejora drásticamente más allá del promedio actual de alrededor de 150,000, "el esfuerzo de vacunación probablemente se extenderá hasta el 2022", dijo Simon.\nMientras tanto, instó a tener paciencia y dijo: "Comprendemos lo importante que es sacar la vacuna lo más rápido posible".\nEn sus esfuerzos por continuar sirviendo a la comunidad como un ministerio de la fe católica que reconoce el entierro de los muertos como una de las Obras de Misericordia Corporales, los Cementerios y Mortuorios Católicos de la Arquidiócesis de Los Ángeles están ofreciendo nuevas opciones sin contacto en respuesta a una mayor demanda de sus servicios como resultado de un aumento debido al aumento de muertes asociadas con COVID-19 y las restricciones pandémicas estatales y locales.\nDijo que el estado está mejorando su sitio web de citas de vacunas, al que está vinculado el sistema del condado, por lo que debería funcionar sin problemas esta semana.\nEl sábado, el departamento de salud confirmó 269 nuevas muertes y 10,537 nuevos casos de coronavirus.\nActualmente hay 6881 personas con COVID-19 hospitalizadas y el 24% se encuentra en la UCI. Esta es la primera vez desde el 29 de diciembre que las hospitalizaciones diarias disminuyeron a menos de 7,000 pacientes. Pero aunque ese número ha bajado, los trabajadores de la salud y la capacidad de la UCI siguen abrumados, y la región del sur de California sigue teniendo 0% de espacio disponible en la UCI y permanece bajo la Orden regional de estadía en el hogar.\nTambién se informaron ocho nuevos casos de síndrome inflamatorio multisistémico en niños (MIS-C). Esto eleva el total de casos de MIS-C en el condado de Los Ángeles a 62 niños, uno de los cuales murió. Los 62 fueron hospitalizados y el 45% fueron tratados en la UCI. De los niños con MIS-C, el 31% eran menores de 5 años; el 37% tenía entre 5 y 11 años; y el 32% tenían entre 12 y 20. Los niños latinos representan casi el 74% de los casos reportados.\nMIS-C es una condición inflamatoria asociada con COVID-19. Los síntomas incluyen fiebre que no desaparece y partes del cuerpo inflamadas, como corazón, pulmones, riñones, cerebro, piel, ojos u órganos gastrointestinales. Si cree que su hijo muestra síntomas de MIS-C, comuníquese con su proveedor de atención primaria o de atención de urgencia. Busque atención de emergencia para afecciones críticas o potencialmente mortales. Si no tiene un proveedor de atención primaria, marque 211 y el condado de Los Ángeles lo ayudará a conectarse con uno.\nTambién el domingo, los funcionarios anunciaron la apertura prevista de un sitio emergente de prueba COVID-19 en el Veteran's Memorial Park, 6364 Zindell Ave. en Commerce. El sitio abrirá el martes.\nLas pruebas son gratuitas y no se requiere prueba de seguro médico. Todas las pruebas in situ se realizarán de 10 a.m. a 4 p.m. del 26 al 30 de enero.\nCondado de Los ÁngelesCoronavirusVACUNA CONTRA EL CORONAVIRUSvacuna contra el COVID-19


¡Basta a la violencia antisindical contra la mujer! – Union Sindical Obrera\nRosalba Gómez, directiva de la CUT nacional, hace un llamado ante las “muchas circunstancias en la familia, en la política, el trabajo, el sindicato y en la sociedad frente a la violencia contra la mujer. Hay que superar estas situaciones de violencia para alcanzar una verdadera igualdad”.\nEste es un tema que no da espera. Todos los días hay noticias sobre el maltrato a las mujeres y el conflicto armado en Colombia tiene una gran incidencia sobre las mujeres. Se estima que más de 4.000.000 han sido impactadas, adicionalmente, está el desplazamiento de las madres que tienen que salir con sus hijos de sus territorios.\nGómez da cuenta también de la violencia antisindical, que arroja a un total de 3.101 mujeres asesinadas en el mundo sindical en los últimos 10 años. La directiva de la CUT dice “basta”. “Primero, hay que educar a la gente para que defienda sus derechos. Dos, para que denuncien, a nivel de la CUT tenemos Centros de Atención Laboral en Bogotá, Medellín, Bucaramanga y Cartagena para atender a las mujeres que tienen problemas de violencia laboral, acoso sexual, despidos sin justa causa, apoyo a desplazadas o con casos de violencia intrafamiliar”. En Bogotá, el CAL se encuentra en la carrera 21 No. 41 – 61, barrio La Soledad.\nAhora bien, la invitación desde la CUT es a participar en la Plaza de Bolívar de Bogotá desde las 2:00 de la tarde el 25 de noviembre, en una actividad organizada por la fundación de la reconocida actriz Alejandra Borrero. A las 5 de la tarde, sale una movilización por toda la carrera 7ª desde el Museo Nacional hasta la calle 60 en el parque de Los Hippies.\nEl sábado 28, habrá un gran foro sobre esta temática en la ADE norte de 8 de la mañana a 12 de la tarde. “Invitamos a las compañeras y también a los compañeros, para que no haya violencia hacia las mujeres y las niñas”, finalizó Rosalba Gómez.


La mar salada: Todo a punto para la Sail Racing PalmaVela más internacional de la historia\n"Casi 140 barcos, más de 1.500 deportistas, 26 países representados y más de 150 personas trabajando para garantizar el éxito del evento"\nFOTOS PALMAVELA 2018\nEl RCNP ha acogido hoy la presentación oficial de la 15ª Sail Racing PalmaVela, la prueba que estrena la temporada de grandes regatas del Mediterráneo. 136 barcos de 26 países competirán hasta el próximo domingo en la bahía de Palma, componiendo la flota más internacional en la historia del evento. La acción comienza mañana para siete de las 14 clases participantes.\nBuena parte de los equipos han aprovechado la jornada de hoy para entrenar como anticipo del espectáculo que desplegarán en la bahía de Palma hasta el próximo domingo.\nLa acción comienza mañana\nEl programa de competición arranca mañana, jueves, con las primeras pruebas de la semana para siete de las clases participantes. A partir de las 12:00h competirán los Wally (6 barcos), TP52 (10), IRC (7), ClubSwan 50 (7), Swan 45 (5), ClubSwan 42 (5) y Melges 40 (5), sumando 45 barcos en dos áreas de regatas.\nDe acuerdo con el Oficial Principal de Regata, Gaspar Morey, la primera jornada presentará condiciones favorables para estrenar los casilleros con un programa compuesto por pruebas costeras para los Wally y ORC, y recorridos entre bastones para las demás clases. “Por la mañana se espera un suroeste que irá rolando a oeste-noroeste y subiendo, de 5-8 a 12-14 nudos”, explica, avisando que “el resto de la semana se presenta más complicada”. Morey gestionará un equipo formado por cerca de 60 personas, un enorme esfuerzo logístico para garantizar el éxito en el agua: “Contaremos con 14 balizadores, cuatro Comités, dos neumáticas de Jurys, dos de medidores y tres de Salvamento”, explica.\nLa primera jornada de la 15ª Sail Racing PalmaVela verá el debut de la flota Melges 40 en aguas de Palma, con cinco barcos de cuatro nacionalidades. De acuerdo con Federico Michetti, responsable de la clase en Europa: "Estamos muy contentos con el número de inscritos, considerando que hace menos de un año que estrenamos la clase en Porto Cervo".\nMañana también se producirá el esperado estreno en competición de siete nuevos diseños TP52. “Es impresionante ver lo importante que resulta para los armadores estrenar barco; para ellos es como tener un nuevo hijo”, explica Rob Weiland, director de la clase TP52. “A estas alturas de evolución de la clase, en su 15ª ó 16ª generación, no se pueden esperar cambios radicales, es cuestión de pequeños matices. Los diseñadores involucrados son de semejante nivel que seguro que ya han valorado todas las opciones. Para la mitad de las tripulaciones será la primera vez que navegan con sus nuevos diseños, y supone la ocasión perfecta para medirse con las referencias de la clase, que son Azzurra y Quantum Racing”.\nEl viernes, 4 de mayo, se incorporarán a la competición una tercera área de regatas y otros 80 barcos de clases ORC (47), Época y Clásicos (9), J80 (7), Dragón (11) y Flying Fifteen (6). Ya el sábado, día 5, completarán la flota los participantes de Vela Adaptada (9), que ocuparán la cuarta área de regatas. La entrega de premios final se realizará en la terraza del RCNP el domingo a partir de las 18:00h.\nEtiquetas: Deporte Adaptado, IRC, J80, Maxis, Monotipos, ORC, Palma de Mallorca, PalmaVela, RCNP, TP52, Vela Clásica, Wally


En esta línea, la muestra acoge el II Concurso Morfológico del Perro Ratonero Bodeguero Andaluz, un certamen organizado por la Asociación de Criadores de la raza R. B. A. que tendrá lugar el domingo 30 de septiembre a las 10.00 horas.\nAl igual que el pasado año, el objeto no es otro que poner en valor esta raza de perros autóctona andaluza muy vinculada cultural e históricamente a la tierra.\nPara ello y de manos de un jurado experto en la materia se valorará la morfología de cada perro participante teniendo en cuenta los estándares de la raza.\nEn este sentido se contemplan las categorías adulta (macho y hembra)y cachorro, otorgándose premiosa los tres primeros clasificados de cada modalidad. Además todos los participantes recibirán un diploma a modo de recuerdo.\nCompletando lo anterior, ese mismo día a partir de las 13.00 horas se realizará una completa Exhibición de Agility y Rastreo desarrollada por ejemplares de Perro Ratonero Bodeguero Andaluz.\nLa actividad engloba diversas pruebas como búsqueda, trabajo y carreras con libre mecánica entre otras, actividades en las que se pondrá de manifiesto las habilidades de esta raza.


El otro trasfondo del “castigo” a Honduras – eju.tv\nEl otro trasfondo del “castigo” a Honduras\n09/05/2010 - 11:27 Opinión\nQue los populistas sigan rumiando su frustración por la pérdida de Honduras para su alianza, no es sorprendente. Son los mismos que, en el pasado, no lograron torcer el curso de los acontecimientos hondureños: la destitución del presidente Manuel Zelaya por violaciones a la constitución y las elecciones presidenciales celebradas en el tiempo previsto, con el triunfo del candidato opositor Porfirio Lobo. El empecinamiento de los gobiernos de los países de la ALBA, además de Argentina y Brasil, se hace evidente cuando es notorio que se afianza el gobierno democrático del presidente Lobo, cuyos esfuerzos para pacificar su país son notables. Arrecia esta campaña precisamente cuando predominan opiniones favorables para el retorno de Honduras a la OEA y el restablecimiento de las relaciones diplomáticas de quienes las rompieron luego de la destitución de Zelaya. Por su parte, los países de la Unión Europea, normalizaron sus relaciones puesto que las causas que motivaron la crisis fueron superadas.\nPero los obstinados volvieron a la carga. Pareciera que la oportunidad escogida fue la convocatoria a la Cumbre de la Unión Europea (UE) con América Latina y el Caribe (17 y 18 de mayo próximos). El asesor de política internacional del presidente del Brasil, Marco Aurelio García, anunció –no se sabe con qué mandato– que Inicio “Lula” da Silva y otros diez mandatarios no irían a la citada cumbre si asiste el presidente hondureño Porfirio Lobo. “Si Honduras asiste, al menos diez presidentes latinoamericanos no irán a Madrid y comenzando por el presidente de Brasil, Luis Inicio Lula da Silva”, declaró a EFE García, en referencia a la reunión que tendrá lugar en la capital de España… “No obstante, dijo que está en condiciones de ‘asegurar que Honduras no va a ir’, sin precisar en qué basaba su afirmación”. Y fue más allá en su prepotencia: “García consideró que la invitación cursada por España a Honduras ‘fue un resbalón de algún funcionario que no estuvo atento’ ”. El comedido portavoz brasileño, se refocila con este anuncio, lo que no es extraño porque él “está comprometido, hasta la médula, en una polémica justificativa de los voluntarismos de Hugo Chávez…” (Flavio Tavares e Iván Masilia. O Estado de São Paulo).\nLa concertación para bloquear la participación hondureña en la citada reunión cumbre, ahora tiene como principal inspirador al gobierno de “Lula” da Silva. Esto, por supuesto, hace recordar la penosa decisión de la diplomacia brasileña –¿o será la de este García?– de acoger al depuesto Zelaya en su embajada en Tegucigalpa fuera de las normas del asilo. El Barón do Rio Branco debe estar revolcándose en su tumba.\nPero ya va apareciendo el otro trasfondo de este entuerto. Se sabe que los países europeos, ya cerrados los acuerdos de comercio con Perú y Colombia (Evo Morales se desmarcó anteriormente y queda fuera), y estando pronta la próxima firma de otro con Centroamérica, se prevé que habrá muchas dificultades para avanzar en un acuerdo con los demás países latinoamericanos, especialmente con los miembros del MERCOSUR, Argentina, Brasil, Uruguay y Paraguay. Hay voces, como la del ministro de agricultura de Francia, que afirma que la Comisión Europea "no puede llevar a cabo unas negociaciones que corren el riesgo de poner en cuestión la agricultura francesa y europea". Es más: se acaba de filtrar en Bruselas un informe, según el cual un acuerdo con Mercosur podría ocasionar "grandes pérdidas" a la agricultura y ganadería europeas.\nLos populistas que pretenden castigar a Honduras, usan el deshonroso camino de la hipocresía para disimular este fracaso.


Enterohemorrágica e. coli (EHEC) O157: H7, que es un patógeno de transmisión alimentaria que causesdiarrhea, colitis hemorrágica (HS), y síndrome urémico hemolítico (SUH), colonizar en el tracto intestinal de los seres humanos. Para estudiar el mecanismo detallado de la colonización de EHEC en vivo, es imprescindible disponer de modelos animales para controlar y cuantificar la colonización de EHEC. Se demuestra aquí un modelo de colonización de ratón-EHEC transformando el plásmido expresando bioluminiscente a EHEC para monitorear y cuantificar la colonización de EHEC en anfitriones de vida. Animales inoculados con ECEH etiquetado bioluminiscencia muestran intensas señales bioluminiscentes en ratones por la detección con un no-invasivo en vivo sistema de imagen. Después de 1 y 2 días post infección, señales bioluminiscentes todavía se podían detectar en los animales infectados, lo cual sugiere que EHEC colonizan en anfitriones de al menos 2 días. También demostramos que estos EHEC bioluminiscente localizar al intestino de ratón, específicamente en el ciego y el colon, de imágenes de ex vivo . Este modelo de colonización de ratón-EHEC puede servir como una herramienta para avanzar en el conocimiento actual del mecanismo de colonización de EHEC.\nECEH O157: H7 es un patógeno que causa diarrea1, HS2, HUS3y falta renal aguda incluso4 a través de agua o alimentos contaminados. EHEC es un patógeno Enterobacter y coloniza en el tracto gastrointestinal de los seres humanos1. Cuando EHEC primero se adhieren al epitelio intestinal del anfitrión, inyectan los factores de colonización en las células del huésped a través del sistema de la secreción del III tipo (T3SS) que funciona como una jeringa molecular induciendo una fijación y borrar (A/E) lesión posteriormente para hacer cumplir adherencia (colonización)5. Estos genes involucrados en la formación de la lesión A/E son codificados por el locus de la isla de patogenicidad del enterocyte effacement (LEE)5.\nBioluminescence es una reacción química produzca luz, en la cual luciferase cataliza su luciferin del substrato para generar luz visible6. Este proceso enzimático requiere con frecuencia la presencia de oxígeno o trifosfato de adenosina (ATP)6. Bioluminiscencia (BLI) la proyección de imagen permite a los investigadores la visualización y cuantificación de las interacciones huésped-patógeno en animales vivos7. BLI puede caracterizar el ciclo de infección bacteriana en animales vivos siguiendo las bacterias bioluminiscentes que migran e invaden diferentes tejidos7; Esto revela una evolución dinámica de la infección. Por otra parte, la carga bacteriana en los animales se relaciona con la señal bioluminiscente8; por lo tanto, es un indicador conveniente para estimar las condiciones patológicas de los animales experimentales en una forma simple y directa.\nEl plásmido utilizado aquí contenida el operón de la luciferasa, luxCDABE, que es de la bacteria Photorhabdus luminescens que codifica su propia luciferase sustrato7,9. Al transformar este plásmido de expresión de luciferasa en las bacterias, los procesos de colonización y la infección pueden controlarse mediante la observación de estas bacterias bioluminiscentes en animales vivos. En general, BLI y bacterias etiquetado bioluminiscencia permiten a los investigadores a monitorear los números bacterianos y ubicación, viabilidad bacteriana con tratamiento de antibióticos y la expresión génica bacteriana en infección/colonización6, 7. se han reportado numerosas bacterias patógenas que expresar el operón luxCDABE para examinar su expresión de ciclo o gen de infección en infección. Estas bacterias, incluyendo uropatógenos Escherichia coli10, EHEC8,11,12,13, enteropatógeno e. coli (EPEC)8, Citrobacter Rodentium14,15, Salmonella typhimurium16, Listeria monocytogenes17, Yersinia enterocolitica18,19, y Vibrio cholerae20, han sido documentados.\nVarios modelos experimentales se han desarrollado para facilitar el estudio de ECEH colonización in vitro e in vivo21,22,23. Sin embargo, hay una falta de modelos animales adecuados para el estudio de la colonización la EHEC en vivoy, por tanto, la escasez resultante de los datos. Para facilitar el estudio de la EHEC colonización mecanismo en vivo, es valioso para construir modelos animales para observar y cuantificar la colonización de ECEH en los animales vivos en un método no invasivo.\nEste manuscrito describe un modelo de colonización de EHEC de mouse que utiliza un sistema de expresión bioluminiscente para controlar la colonización de la ECEH en el tiempo de vida acoge. Ratones se inoculan intragástrica con EHEC etiquetado bioluminiscencia y se detecta la señal bioluminiscente en ratones con un no-invasivo en vivo imágenes del sistema13. Ratones infectan con ECEH etiquetado bioluminiscencia mostró significativas señales bioluminiscentes en su intestino después de 2 días post infección, lo que sugiere que las bacterias colonizan en el intestino del anfitrión después de 2 días post infección. Ex vivo imagen datos demostraron que esta colonización es específicamente en el ciego y el colon de los ratones. Mediante este modelo de ratón-EHEC, la colonización bioluminiscente de EHEC puede detectarse en la vida de acogida un en vivo sistema, para estudiar los mecanismos detallados de la colonización de bacterias entéricas, que puede promover la comprensión más en la proyección de imagen Inducida por la EHEC cambios fisiológicos y patológicos.\nPRECAUCIÓN: ECEH O157: H7 es un nivel de bioseguridad 2 (BSL-2) patógeno según los centros para el Control de enfermedades y prevención de enfermedades (CDC) Instrucciones de seguridad de la biotecnología (https://www.cdc.gov/). Por lo tanto, deben realizarse todos los procedimientos experimentales que EHEC en una facilidad BSL-2. Use guantes y batas de laboratorio al realizar el experimento. Trabajo en una gabinete de la bioseguridad certificada (BSC). Desinfectar el Banco experimental antes y después del procedimiento experimental con etanol al 70%. Todos los instrumentos o equipos que EHEC contacto (o potencialmente contacto) debe ser desinfectado con etanol al 70% o blanqueador. Desechos contaminados (o potencialmente contaminados) deben ser cuidadosamente sellado y esterilizado. Use una máscara, protección ocular, guantes doble o un mono, si es necesario. Los ratones hembra de 6 semanas de edad C57BL/6 fueron comprados y mantenidos en el laboratorio Animal centro de National Cheng Kung University (NCKU). Los experimentos con animales fueron aprobados por el cuidado de Animal institucional y Comité de uso de NCKU (número 104-039).\n1. generación de las bacterias EHEC Bioluciferase-etiquetado\nMezcle 50 ng del ácido desoxirribonucléico (ADN), 1 μL de 10 μM adelante y atrás cartillas, Deoxynucleótidos 2 por μL de 2,5 mM (dNTPs), 2 μL de 10 x tampón, 0,2 μL ADN polimerasa y agua doble destilada estéril (ddH2O) hasta un volumen final de 20 μL para amplificar la casete de la kanamicina nptII gen24. La plantilla de DNA es de pBSL18024, que se adquiere desde el proyecto nacional de BioResource (NBRP). Las condiciones PCR se enumeran en la tabla 1 y la secuencia de la cartilla está disponible en la tabla 2.\nLigan los productos PCR a un vector de clonación comercial siguiendo el kit protocolo (véase Tabla de materiales).\nSuprimir el fragmento de gen nptII del vector de clonación NsiI y SmaI y clonar en pBBR1MCS4, que es digerida por el NsiI y ScaI de pAKlux29 para crear el plásmido resistentes a kanamicina, pWF27813.\nSuprimir el operón luxCDABE , de la luciferase expresando plásmido9, pAKlux2, por SpeI-HF y ScaI y clon SpeI-HF y SmaI digerido pWF278 para generar kanamicina resistente y luciferasa expresando su plásmido, pWF27913.\nNota: Para la extracción de plásmidos y las purificaciones fragmento suprimido, utilice la extracción comercial del plásmido y el kit de extracción de gel, respectivamente. Para la digestión de la enzima, mezcle 100 ng de ADN, 1 μL 10 x tampón, 1 μL de cada enzima de restricción seleccionada y ddH estéril2O hasta un volumen total de 10 μL e incubar a 37 ° C por 2.5-3 h.\nTransformar el plásmido pWF279 en células competentes de e. coli EDL933 O157: H7 por electroporación con 2.500 V durante ms de 4.\nIncube las células de las bacterias transformadas en medio Luria-Bertani (LB) de 1 mL a 37 ° C durante 1 hora.\nLas bacterias en una placa de agar LB suplementado con 50 μg/mL de kanamicina a 37 ° C durante 16-18 h. de la placa.\nComprobar la señal bioluminiscente de la placa por un en vivo la proyección de imagen la máquina el día siguiente. Escoger una sola Colonia de la placa y de la cultura en 3 mL LB con kanamicina 50 de μg/mL a 37 ° C durante 16-18 h..\nPreparar el medio de acción bacteriano diluyendo 100% glicerol estéril ddH2O para la solución de glicerol 30%.\nCongelar la kanamicina resistente bacteria de e. coli EDL933 O157: H7 que el plásmido de la luciferasa como una acción bacteriana en un cryovial de tapón de rosca como una proporción de 1:1 de solución de bacterias cultura y 30% de glicerol a-80 ° C. La concentración final de glicerol es 15%.\n2. preparación de bacterias EHEC bioluminiscente para inoculación Oral\nNota: El diagrama de flujo de línea de tiempo de los procedimientos experimentales para la preparación de EHEC y sonda oral ratón se presenta en la figura 1 para ayudar en la preparación experimental.\nBacteria de raya e. coli EDL933 O157: H7 que plásmidos de luciferasa en un agar-LB con kanamicina 50 de μg/mL del stock de-80 ° C. Crecer las bacterias durante 16-18 horas a 37 ° C.\nEscoge una sola Colonia de la placa durante la noche y la cultura en medio de 3 mL LB con kanamicina 50 de μg/mL durante 16-18 h. en una incubadora de 37 ° C a 220 rpm.\nSubcultura las bacterias (dilución 1: 100) en kanamicina (50 μg/mL) que contiene caldo LB por 2.5-3 h en una incubadora de 37 ° C a 200 rpm. (Por ejemplo, agregar 2 mL cultivados durante la noche las bacterias 200 mL LB suplementado con kanamicina (50 μg/mL)).\nIncubar las bacterias por 2.5-3 h y medir el valor de densidad óptica a 600 nm (OD600) hasta el valor es entre 0.9 a 1. El número de la célula bacteriana es a una densidad de cerca de 108 unidades formadoras de colonias (UFC) / mL.\nCentrifugue las bacterias cultivadas a 8.000 x g por 30 min, 4 ° C.\nDescartar el sobrenadante sin agitar el sedimento de bacterias y lave el precipitado con 100 mL 0,9% solución salina estéril normal por agitación suave.\nRepita los pasos del 2.5 y 2.6 una vez.\nDespués del lavado, centrifugar el cultivo bacteriano a 8.000 x g por 30 min, 4 ° C y descarte el sobrenadante con cuidado.\nCondensado el pellet en 100-fold con 0,9% solución salina estéril normal. Por ejemplo, si las bacterias 200 mL se centrifugaron, Agregar solución salina normal 2 mL para suspender el sedimento.\nLas bacterias concentradas a través de una dilución seriada 10 veces25de la galjanoplastia para confirmar las bacterias UFC (debe ser aproximadamente 109 UFC/100 μL después de la condensación en solución salina normal).\n3. ratón Oral por sonda nasogástrica de EHEC\nTratamiento de 6 semanas de edad hembra C57BL/6 ratones con agua de estreptomicina (5 g/L) durante 24 h.\nDespués de 24 h, interruptor para regular el agua potable por otro 24 h antes por sonda nasogástrica. Después de tratar con agua corriente durante 24 horas, los ratones están listos para oral por sonda nasogástrica de EHEC.\nLlene la jeringa con las bacterias EHEC de 100 μL tirando hacia atrás del émbolo. No sean burbujas de aire en la jeringa. Quite las burbujas por ajustar la jeringa con los dedos.\nLevantar al animal suavemente y colóquelo en la parte superior de la jaula con cuidado.\nTome el ratón por la cola con cuidado, y el animal se agarre la parte superior de la jaula y tratar de alejar.\nFrenar suavemente el ratón agarrando la piel floja del cuello y la parte posterior del animal con dedos pulgar e índice para evitar que se mueva la cabeza del ratón.\nMantenga el ratón en una posición vertical para insertar la aguja de la sonda nasogástrica y asegurar que la cabeza del ratón es inmovilizado y vertical.\nInserte la aguja de la sonda en la boca del ratón tras el techo de la boca y mover hacia abajo en el esófago y hacia el estómago.\nCuando la aguja insertada es la mitad o dos tercios longitud en el ratón, inyectar la bacteria EHEC 100 μL, que contiene aproximadamente 109 UFC las células.\nDespués la sonda oral, detectar las señales bioluminiscentes en los días 1 y 2.\nAntes de examinar las señales bioluminiscentes de los animales, anestesiar, poniendo en una cámara de 2,5% isoflurano con oxígeno de 1.5 L/min.\nEspere 2-5 minutos hasta que todos los ratones se convierten en inconsciente y tope móvil. Los animales están listos para en vivo detección de bioluminiscencia.\nDetectar y señales bioluminiscentes de los animales de la imagen de un en vivo sistema de imagen. Consulte Sección 5 "Adquisición de datos" para la operación del software. Durante el proceso de proyección de imagen, todos los animales están bajo un continuo suministro de 2,5% isoflurano con oxígeno de 1.5 L/min.\nHaga clic en archivo > vivo y manualmente se centran en el ratón.\nSeleccione la intensidad de la exposición tiempo y láser.\nHaga clic en adquirir > capturar.\nImagen ex vivo , eutanasia a los ratones por dislocación cervical y retire el intestino entero de ratones infectados. Coloque los intestinos en un plato de Petri de 9 cm e imagen del en vivo sistema de imagen. El ajuste es el mismo que el en vivo la proyección de imagen excepto el campo de visión se define como A/B. Para detalles, véase sección 5 "Adquisición de datos".\nNota: Método de la dislocación cervical: frenar los ratones en la parte superior de la jaula agarrando la cola con una mano para que los animales agarrar la jaula. Coloque un rotulador o el pulgar y primer dedo de la otra mano contra la parte posterior del cuello en la base del cráneo. Empuje hacia adelante con la mano o algún objeto mientras la cabeza y tirar hacia atrás con la mano que sujeta la cola rápidamente.\nCheque a confirmar detención respiratoria y no hay latidos del corazón.\n5. adquisición de datos\nNota: El software utilizado para la adquisición de datos se muestra en la Tabla de materiales.\nPara la adquisición de la imagen, abra el Panel de Control de la adquisición del software (figura 2).\nSeleccione "Luminiscente", "fotografía" y "Superposición".\nTiempo de exposición determinado como "Auto." Establecer Binning como "Medio."\nEstablecer ƒ/parada 1 luminiscente y 8 para la fotografía. Ƒ/stop controles la cantidad de luz recibida por el detector del CCD.\nEstablecer el campo de visión basado en el campo de las imágenes que son de interés para adquirir. Opción "D" puede caber cinco ratones de 6 semanas de edad e imagen un momento. "C" puede imagen tres ratones de 6 semanas de edad en un campo.\nUna vez que las muestras de ratones están preparadas para la proyección de imagen, haga clic en "Adquirir" para la adquisición de la imagen.\nAbrir los datos de imagen que fue adquiridos.\nAbra el panel de la paleta de herramientas (figura 3).\nSeleccione Herramientas ROI. Recomendamos el círculo (uno izquierdo) para variar la zona bioluminiscente en imágenes (figura 4).\nHaga clic en "Medida de ROIs" (icono de lápiz) para medir la intensidad bioluminiscente superficial (figura 3). El panel de medición de retorno de la inversión y los valores de cuantificación aparecen (figura 5).\nUse la medida de configurar en la esquina izquierda del panel de mediciones de ROI para seleccionar la valores e información necesaria (figura 6), de lo contrario, haga clic en "Exportar" para exportar esta tabla de datos y guardar como archivo .csv (figura 5).\nUtilice los valores de la columna "Total flujo (p/s)" como la cuantificación de la intensidad bioluminiscente en el archivo CSV.\nAdministramos la bioluminiscencia etiquetado EHEC (~ 109 células bacterianas) a 6 - semanas de edad hembra C57BL/6 ratones por sonda oral. Después de la inoculación oral de EHEC para ratones dentro de 1 h, los animales fueron examinados para bioluminiscente de la señal por el sistema generador de imágenes en vivo como se muestra en la figura 7. Los resultados mostraron una fuerte señal bioluminiscente en ratones por sonda nasogástrica con EHEC etiquetado bioluminiscencia. Examinamos las señales en 2 días post infección. Como se muestra en la figura 8A, los ratones inoculan con etiquetado bioluminiscencia tipo EHEC EDL933 mostró señales bioluminiscentes intenso incluso después de 2 días post infección, que sugirió que EHEC colonizados en los anfitriones por 2 días. Nosotros también intragástricamente infectados etiquetado bioluminiscencia EDL933ΔrfaD (ΔrfaD) a los ratones (figura 8A). Este mutante, desertó en lipopolisacárido (LPS), se ha demostrado para reducir la colonización en el host en nuestro estudio anterior. Como se muestra en la figura 8A, no hay ninguna señal bioluminiscente en ΔrfaD-ratones infectados, lo que sugiere que hay bacterias no o menos células colonizaron en los ratones. Cuantificación de la señal fluorescente se muestra en la figura 8B. A continuación, se determinó la ubicación de estas bacterias etiquetado bioluminiscencia. Los ratones infectados fueron sacrificados humanitariamente y quitado su intestino entero. Los intestinos de ratones 2 días post infección se colocaron en platos de Petri de 9 cm y reflejada ex vivo (Figura 9A). Los tejidos intestinales de ratones infectados EDL933 etiquetado bioluminiscencia revelaron un aumento significativo de señales bioluminiscentes en el ciego y el colon, que sugieren que estos EHEC bioluminiscente colonizados en el ciego y el colon de ratones infectados por 2 días en menos. En contraste, ratones infectados con etiquetado bioluminiscencia ΔrfaD (Figura 9A), reveló disminución de señal bioluminiscente en su tejido intestinal, lo cual es consistente con la imagen en vivo (figura 8A ). Cuantificación de la señal fluorescente se muestra en la figura 9B.\nFigura 1 : Línea de tiempo del diagrama de flujo preparación experimental.\nResumen de la sincronización necesaria para preparar bacterias bioluminiscentes de EHEC y trate de ratones con estreptomicina. (A) ECEH preparación. (B) preparación de ratones. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 2 : En vivo panel de control sistema adquisición de imágenes.\nAntes las muestras de la proyección de imagen, abra el Panel de Control de adquisición de IVIS. Seleccione "Luminiscente", "fotografía" y "Superposición". Tiempo de exposición determinado como "Auto." Establecer Binning como "Medio." Establecer ƒ/parada 1 luminiscente y 8 para la fotografía. Ƒ/stop controles la cantidad de luz recibida por el detector del CCD. Una vez que las muestras están listas para la proyección de imagen, haga clic en "Adquirir" para adquirir imágenes. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 3 : Panel de paleta de herramientas.\nDespués de la adquisición de la imagen, utilice el panel de la paleta de herramientas para cuantificar la intensidad bioluminiscente. Abra el panel de la paleta de herramientas y los datos de la imagen. ¡Elegir una de las herramientas de ROI para las señales bioluminiscentes en imágenes de la gama. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 4 : Señal bioluminiscente de muestra para la cuantificación.\nZona bioluminiscente señal en las imágenes rodeado por herramientas de ROI. Todas las señales bioluminiscentes que se muestra aquí son en el círculo rojo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 5 : Las mediciones de ROI.\nDespués de circundar las señales bioluminiscentes y haciendo clic en "ROIs de medida" en el panel de la paleta de herramientas, se presentan los valores como se muestra. Los valores de la columna de flujo Total (p/s) se utilizan para la cuantificación de la intensidad bioluminiscente. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 6 : Añadir información de cuantificación diferentes.\nHaciendo clic en la medida de configurar en la esquina izquierda del panel de mediciones de ROI, puede seleccionar otros valores de cuantificación deseada e información. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 7 : Imagen representativa de los ratones después de inoculados con ECEH bioluminiscente.\nImagen representativa de los ratones inoculados con ECEH bioluminiscente por sonda oral dentro de 1 h. La escala de color representa la radiancia (/sr p/s/cm2). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 8 : Imágenes de ratones inocularon con ECEH etiquetado bioluminiscencia después de 2 días.\n(A) representan imagen de ratones inoculados con salvaje-tipo bioluminiscente EDL933 EHEC y EDL933:ΔrfaD por sonda oral después de 2 días post infección. (B) cuantificación de la intensidad de la bioluminiscencia de ratones infectados con ECEH. Barras de error indican la desviación estándar. Se muestran imágenes representativas. Todos los experimentos se llevaron a cabo independientemente tres veces con 2-3 animales cada vez, y barras de error indican la desviación estándar. Los valores de P indican los resultados del análisis estadístico por t-test. La escala de color representa la radiancia (/sr p/s/cm2). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nFigura 9 : Imágenes de los tejidos intestinales de ratones infectados con ECEH etiquetado bioluminiscencia.\n(A) 2 días después de la inoculación con bioluminiscencia-etiquetado EHEC, los ratones fueron sacrificados y tejidos todo intestinales fueron quitados y reflejada ex vivo. Se muestran imágenes representativas. (B) cuantificación de la intensidad de la bioluminiscencia de los tejidos intestinales de ratones infectados con ECEH. Todos los experimentos se llevaron a cabo independientemente tres veces con 2-3 animales cada vez, y barras de error indican la desviación estándar. Los valores de P indican los resultados del análisis estadístico por t-test. La escala de color representa la radiancia (/sr p/s/cm2). Barra de escala representa 1 cm. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.\nPasos Temperatura Tiempo Número de ciclos de\nDesnaturalización inicial 95 ° C 10 min 1\nDesnaturalización 95 ° C 30 seg. 35\nDe recocido 58,4 ° C 30 seg.\nExtensión 72 ° C 1,5 min\nExtensión final 72 ° C 10 min 1\nMantenga 4 ° C ∞ 1\nTabla 1: Condiciones de reacción en cadena (PCR) de polimerasa\nNombre de cartillas Secuencia de\nTabla 2: secuencias de la cartilla utilizadas para amplificar nptII\nSe ha divulgado que EHEC transformada con el plásmido de la luciferasa se ha utilizado para examinar su localización en hosts o expresión de gen en vivo8,11,12. El modelo murino demostrado aquí también se ha divulgado para detectar el momento de EHEC colonizado y localización en anfitrión murino8. Sin embargo, nos ofrecen el protocolo de detalle de cómo administrar la inoculación a ratones EHEC intragástrica y cómo preparar cuidadosamente las bacterias bioluminiscentes para oral por sonda nasogástrica. En particular, para el ratón oral por sonda nasogástrica de EHEC (paso 3.7), la posición de la cabeza de ratón es crítica cuando se inserta la aguja de la sonda nasogástrica. Si la posición no es vertical, va a ser difícil pasar la aguja y posiblemente podría lesionar el ratón. En el paso 3.8, cuando la aguja de la sonda nasogástrica esté dentro de la boca del ratón, la lengua se pone fuera de la boca ligeramente. Si se encuentra resistencia al pasar la aguja de la sonda nasogástrica hacia el esófago, se detiene la aguja hacia adelante y retirarse inmediatamente. Alterar la posición de la aguja para asegurarse de que la aguja entra en el esófago. La aguja podría estar entrando en la tráquea cuando se produce resistencia, que daría lugar a la inyección de bacterias en los pulmones en vez del estómago.\nAplicación de la proteína verde fluorescente (GFP) como un biosensor es común en experimentos biológicos. Sin embargo, usando GFP como reportero para observar que la infección/colonización del patógeno en los animales vivos por proyección de imagen en vivo no es recomendable, ya que la absorción por la hemoglobina, las proteínas y el agua son altos entre 200-650 nm26, que coincide con GFP (excitación 480 nm, emisión a 510 nm)27. Por lo tanto, usando GFP señal como reportero en vivo la proyección de imagen puede ser interrumpida por hemoglobina, proteínas y agua en animales26. La fluorescencia de infrarrojo cercano (NIR) es ideal para en vivo la proyección de imagen porque su ventana de absorbancia es alrededor de 650-900 nm28, que se encuentra en la región de más bajo coeficiente de absorción de la hemoglobina (< 650 nm) y agua (> 900 nm)26 ,28 . Por otra parte, cuando el tejido absorbe la luz, es una oportunidad para inducir la autofluorescencia. Cuando la gama de las longitudes de onda de excitación y emisión en la ventana GFP, induce más autofluorescence de NIR29. Uso de NIR puede mejorar la relación señal a fondo en comparación con la de GFP eliminando el autofluorescence fondo29. Bioluminiscencia no requieren excitación de energía para generar luz visible. Depende de la reacción para catalizar luciferin del substrato por su luciferase enzima y generar luz. Puesto que la bioluminiscencia no requiere luz directa en una muestra, la señal de fondo de una muestra es muy baja. Por lo tanto, el uso de la bioluminiscencia como reportero es más general y fácil para la proyección de imagen en vivo . En contraste, la fluorescencia requiere excitación luz para inducir la luz de la señal. Cuando los tejidos absorben la luz, existe la posibilidad de que la luz fluorescente se emite e inducir autofluorescencia para que su señal de ruido más alto es comparada con la de bioluminiscencia.\nTeniendo en cuenta EHEC es naturalmente menos colonizado en ratones de la infección oral2,22, un patógeno natural de mucosa de los ratones, llamado Citrobacter rodentium, se ha utilizado para estudiar el mecanismo de colonización a anfitrión murino como un sustituta de bacteria22,30. Ambos de EHEC y C. rodentium colonizan la mucosa intestinal e inducen la formación de lesiones A/E en host22,30. Contienen también la isla de patogenicidad LEE, que codifica un T3SS y varias proteínas efectoras que indujo A/E lesión22,30. Por lo tanto, el uso de luciferase expresando plásmido como reportero en C. rodentium para detectar la patología de la colonización y estudiar el mecanismo de colonización a través de un sistema de proyección de imagen en vivo también ha sido reportado14, 15. sin embargo, mientras que C. rodentium infección de ratones es un modelo útil para investigar la función de T3SS y el mecanismo de lesión A/E, C. rodentium carece de Shiga toxina (Stx)30, que es dominante factor de virulencia que provoca insuficiencia renal en EHEC, especialmente el serotipo O157: H73. Aunque se ha construido una cepa Stx-expresión C. rodentium recientemente31, que es más realista a la infección por EHEC, no incluye otros posibles factores de virulencia de ECEH que son cruciales para la colonización o infección. Además, C. rodentium comparte el 67% de sus genes con EHEC32, que sugiere que EHEC puede usar una virulencia distinta de C. rodentium durante la colonización o infección.\nFue modificada la luciferasa expresando plásmido utilizado aquí, pWF27913, pAKlux29 cuya columna vertebral es pBBR1MCS433. Aunque pBBR1MCS4 han sido probados y replicados en diferentes bacterias33, es crucial asegurar el origen de replicación (ORI) de este plásmido es conveniente para el anfitrión bacteriano antes de usar este sistema luciferasa basado en el plásmido por el experimento y lo que confirma que este luciferase expresando plásmido puede replicar en el anfitrión bacteriano. Utilizamos antibióticos estrés para mantener la estabilidad del plásmido en la bacteria. Cuando las bacterias entran animales en ausencia de antibióticos, se ha detectado la señal bioluminiscente de tipo salvaje EHEC por al menos 2 días. Sin embargo, no después de la infección por más de 2 días porque ya habíamos visto una diferencia significativa en la intensidad luminiscente entre peso de EHEC y EHEC Asociación (que codifica un gen para sintetizar LPS intactos de EHEC) mutante en 2 días. Para mantener el plásmido estable en las bacterias bajo la ausencia de antibióticos, un plásmido pCM1710,34 puede utilizarse para este propósito. pCM17 codifica un sistema de particionamiento de dos plásmidos y un mecanismo de matanza post-segregational para garantizar el mantenimiento del plásmido en la bacteria en ausencia de antibióticos10,34. El plásmido pCM17 que contiene el operón luxCDABE impulsado por el promotor OmpC puede detectarse señales bioluminiscentes para por lo menos 7 días8. Un método alternativo para obtener una bacteria continua expresión bioluminiscente en ausencia de antibióticos es insertar luxABCDE gen en el cromosoma bacteriano35. Transposon de Francis et al utiliza inserta el casete de operon y antibióticos luxABCDE que inserta al azar en el cromosoma de Streptococcus pneumoniae a obtener la bioluminiscencia cepa estable35.\nEn nuestro anterior estudio13, utilizamos este sistema modelo para estudiar la colonización de EHEC en un host y comparar la diferencia de capacidad de colonización entre el EHEC tipo salvaje (WT) y mutante13. Cuando los ratones fueron administrados el mutante bioluminiscente de Asociación EHEC, las señales bioluminiscentes disminuidas dramáticamente en comparación con el que de EHEC de peso después de 2 días post infección. Proporciona evidencia que este modelo murino puede analizar el efecto de la mutación de la colonización de la ECEH en el host. Además, tratamientos terapéuticos para reducir la colonización de EHEC es una solución considerada, potencial a la infección por EHEC ya que el uso de antibióticos está contraindicado5,36. Por lo tanto, merece la pena probar si este sistema modelo puede ser utilizado para examinar la eficacia de la colonización medicamentos/tratamientos contra la colonización de enterobacterias en el host. Creemos que mediante este sistema de modelo, es posible examinar el momento y el lugar de EHEC no sólo, sino también otras enterobacterias colonización en vivo. Mediante el uso de este modelo animal, el proceso de colonización de EHEC en ratones puede ser monitoreado y la carga de la colonización en el host puede cuantificarse para determinar la colonización espacial y temporal de ECEH en los animales vivos. La visualización y cuantificación de la colonización de enterobacterias mediante este modelo es una gran herramienta para investigar y analizar los mecanismos finos de colonización enterobacterianas y así compensar la deficiencia de la investigación de la colonización y mejorar el conocimiento actual.\nReconocemos a Chi-Chung Chen del Departamento de investigación médica, centro médico de Chi Mei (Tainan, Taiwan) la ayuda del ratón para la infección y el apoyo del centro de animales de laboratorio de la Universidad Nacional Cheng Kung. Este trabajo es apoyado por el Ministro de ciencia y tecnología (MOST) subvenciones (más 104-2321-B-006-019, 105-2321-B-006-011,-005 de and106-2321-B-006) a CC.


6 MESES DE PRÓRROGA AUTOMÁTICA EN LAS AUTORIZACIONES DE RESIDENCIA Y TRABAJO PARA LOS RESIDENTES EXTRANJEROS EN ESPAÑA\nEduardo Soruco, 21 de mayo de 2020\nLa prórroga automática se iniciará al día siguiente de la caducidad de la autorización.\nEl Ministerio de Inclusión, Seguridad Social y Migraciones a publicado una orden Ministerial a través de la Secretaría de Estado de Migraciones en el Boletin Oficial del estado (BOE) por la cual “quedan prorrogadas automáticamente y con una vigencia de seis meses desde el levantamiento del Estado de Alarma, todas aquellas autorizaciones de residencia y/o trabajo que venzan durante este período, sin necesidad de emitir una resolución individual para cada una de ellas en la Oficina de Extranjería.”\nAsimismo la Dirección General de Migraciones ha impulsado que las prórrogas de dichas autorizaciones quedan extendidas a través de esta norma, con la finalidad de evitar que los ciudadanos extranjeros puedan encontrarse, de manera involuntaria y como consecuencia de la suspensión de plazos administrativos, en una situación de irregularidad sobrevenida.\nDurante la crisis sanitaria, los inmigrantes radicados en el país tenían muchas dificultades para renovar o sacar los documentos iniciales que avalaban su residencia legal en el país. En la delegación de Gobierno de Madrid la situación ya era critica antes de la pandemia, era una de las que más demoras y atrasos recogía, previamente al estado de alarma habían reducido a la mitad el ofrecimiento de citas previas pese a la gran demanda existente.\nEs por esta razones magnificada por el COVID-19 que en los hechos imposibilita presentar solicitudes de renovación de estas autorizaciones de forma presencial, añadida a la dificultad de llevar a cabo estos trámites de forma electrónica ha generado a los extranjeros residentes en España y a los empleadores y resto de agentes sociales y económicos una gran inseguridad jurídica.\nPara solventar dicha situación la orden ministerial busca cubrir múltiples casuísticas con el desarrollo de siete artículos en los que se establece la prórroga de las autorizaciones temporales de residencia y/o trabajo, así como de las autorizaciones de estancia por estudios, movilidad de alumnos, prácticas no laborales o servicios de voluntariado previstas en la normativa de extranjería.\nAdemás, se extiende la validez de las tarjetas de familiar de ciudadano de la Unión durante el Estado de Alarma y hasta un período de seis meses a contar desde el levantamiento del mismo .Esta norma regula igualmente la prórroga automática de las tarjetas de identidad de extranjero concedidas en base a una residencia de larga duración, así como las estancias menores de 90 días.\nLos visados de larga duración, expedidos al amparo de un Acuerdo de Movilidad de Jóvenes y los visados de estancia por estudios de hasta 180 días de duración que fueran a expirar durante el Estado de Alarma se verán prorrogados por un período de tres meses, siempre que el titular del mismo se halle en España y no le haya sido posible, por las circunstancias excepcionales ocasionadas por la crisis de la Covid-19, regresar a su país de origen.\nAdemás, los titulares de autorizaciones temporales de residencia y/o trabajo y de las autorizaciones de estancia, así como a los poseedores de una tarjeta de familiar de ciudadano de la Unión o de larga duración prorrogada que se hallen durante el Estado de alarma en el extranjero podrán entrar en España presentando su documento de viaje válido y en vigor, acompañado de la Tarjeta de Identidad de Extranjero caducada.\nPor último, las ausencias del territorio español como consecuencia de la imposibilidad de regresar a España por la crisis sanitaria no serán computables a los efectos de continuidad de residencia.\nCarabanchel se acerca al cierre perimetral: 325,96 casos por cada 100.000 habitantes\nCarabanchel despierta hoy, 6 de enero, con un regalo envenado. Los nuevos datos sobre la situación epidemiológica en Carabanchel ofrecidos por la Comunidad de Madrid son realmente preocupantes....\nCierre del Servicio de Convivencia en Carabanchel\nPor el comienzo inmediato de las obras de ampliación de la...\nEDITORIAL: Feliz año nuevo


Vigente: ¿Cuáles son las desventajas del anillo anticonceptivo?\n¿Cuáles son las desventajas del anillo vaginal?\nRecordar ponerse un anillo anticonceptivo nuevo a tiempo puede ser difícil. También, algunas personas tienen efectos secundarios que les molestan (pero que suelen desaparecer en pocos meses).\n¿Quieres usar el anillo vaginal?\nDebes asegurarte de ponerte tu anillo vaginal a tiempo.\nEs muy importante que te pongas tu anillo vaginal siempre a tiempo. Si no lo haces, puede que no tengas la protección necesaria contra el embarazo. Usar nuestra aplicación para monitorear el periodo y los anticonceptivos con recordatorios, poner una alarma, o marcar los días en tu calendario, puede ayudarte a recordar cambiarlo.\nSi tienes una vida muy ocupada y crees que puedes olvidarte de cambiar el anillo, considera otros métodos anticonceptivos como el dispositivo intrauterino (DIU) o el implante anticonceptivo, que son muy fáciles de usar y con los cuales es casi imposible cometer errores. Contesta nuestro cuestionario (solo disponible en inglés) para conocer el método de planificación que mejor se adapta a ti.\nPuede haber efectos secundarios negativos.\nComo todos los medicamentos, el anillo anticonceptivo puede producir efectos secundarios. De todas formas, la mayoría suele desaparecer después de dos o tres meses. Muchas personas usan el anillo sin ningún problema. Puedes hacerle seguimiento cualquier efecto secundario que puedas tener con nuestra aplicación.\nLos efectos secundarios más comunes son: tener sangrado o manchado entre periodos, sensibilidad en los senos (pechos), náuseas o dolores de cabeza. Sin embargo, no todas las personas que usan el anillo los tienen, y cuando suceden, normalmente desaparecen después de 2 o 3 meses. También puede que tu vagina esté un poco más húmeda de lo normal mientras usas el anillo.\nLos anticonceptivos no deben producirte malestar o incomodidad. Por suerte, existen muchos tipos de anticonceptivos, entonces tienes otras opciones. Si los efectos secundarios te siguen molestando después de usar el anillo vaginal durante 3 meses, habla con tu enfermerx o doctorx para probar un método de planificación diferente. En lo posible, no dejes de usar el anillo antes de comenzar a usar otro método, de lo contrario, corres el riesgo de quedar en embarazo.\nRaras veces pueden existir algunos riesgos graves.\nEs poco probable que el anillo anticonceptivo ocasione problemas graves. Las personas que usan métodos anticonceptivos que tienen estrógeno, como el anillo vaginal, tienen una probabilidad levemente más elevada de tener algunos problemas de salud peligrosos -pero inusuales-, que las personas que no usan métodos anticonceptivos con hormonas. Lee más acerca de la seguridad del anillo vaginal.\nPara más información sobre los efectos secundarios y los riesgos, habla con tu enfermerx o doctorx, o lee el folleto que viene en la caja de tu anillo anticonceptivo.\nAnterior ¿Cuáles son los beneficios del anillo vaginal?


El Jefe de la Guardia Civil de Tráfico en Extremadura “hace la vista gorda” - Periodista Digital\nAUGC Badajoz se dirigió el pasado 01 de Junio mediante escrito al Comandante Jefe del Sector de Tráfico de Extremadura\nEl Jefe de la Guardia Civil de Tráfico en Extremadura “hace la vista gorda”\n16 Oct 2015 - 12:33 CET\nLa Asociación Unificada de Guardias Civiles (AUGC) a través del Secretario General en Extremadura, Jesús Jiménez Cívico, denuncia la doble vara de medir del Jefe de la Guardia Civil de Tráfico en Extremadura, concretamente, haciendo la vista gorda omitiendo la persecución de un delito cometido presuntamente por el EX-JEFE de la especialidad en Don Benito y expedientando a un agente por solicitar la activación de acoso laboral.\nAUGC Badajoz se dirigió el pasado 01 de Junio mediante escrito al Comandante Jefe del Sector de Tráfico de Extremadura, para informarle que el ex-jefe del Destacamento de Tráfico de Don Benito, al pasar a la situación de reserva, retiro de su pabellón un aparato de aire acondicionado oficial, del cual se había apropiado al ser retirado el mismo de las oficinas del citado Destacamento.\nSe le informó también de que este miembro de la Guardia Civil, supuestamente pretendió vender el aparato al Sargento que ocupó el pabellón después de él y no accediendo dicho suboficial a comprarlo, optó por venderlo a la empresa TELOVENDO-Segunda mano Extremadura, situada en el Polígono Industrial SAN ISIDRO de Don Benito.\nDe lo anterior, como viene siendo habitual, AUGC no ha tenido respuesta alguna y el responsable del Sector de Tráfico en Extremadura, con su inacción y actitud de mirar hacia otro lado, denota ocultar un presunto delito de apropiación indebida, mientras que los guardias civiles asistían atónitos a ver cómo se condecoraba al ex jefe en cuestión, con la medalla al mérito de la seguridad vial.\nPor otro lado, el mencionado Jefe del Sector de Tráfico de la Guardia Civil de Extremadura, tiene incoados dos procedimientos penales-militares por denuncias de dos subordinados, las cuales le imputaban presuntas conductas de prevaricación y contra la integridad moral, siendo admitidas a trámite, sin tener constancia de que haya habido resolución judicial al respecto.\nQueda de manifiesto que no todos los agentes son iguales ante dicho Jefe, ya que recientemente, se ha castigado duramente a un agente por solicitar la apertura de un protocolo de acoso. Según Jiménez, este es un acto despreciable, ruin y cobarde, ya que en vez de ayudar al compañero que está sufriendo una dura situación de acoso laboral, se le hostiga más todavía por protestar y denunciar, caso opuesto de lo que ocurre en la llamada Benemérita con los presuntos delincuentes y corruptos que por desgracia existen en la Guardia Civil.\nAUGC iniciará acciones legales en defensa del agente, al que se le ha incoado un expediente de pérdida de la especialidad. Este agente, de 53 años y con una trayectoria ejemplar, tuvo la desgracia de caer enfermo y como consecuencia del trabajo, desarrolló un importante trastorno del sueño conocido como el síndrome del trabajador a turnos.\nUn Tribunal Médico dispuso que, en atención a su estado de salud, no le podían nombrar determinados servicios como nocturnos, turnos rotatorios, servicios de 24 horas o la conducción prolongada de vehículos. Desde el año 2012, este agente, venía poniendo de manifiesto por sucesivos escritos a sus superiores, que no se cumplían tales limitaciones ordenadas por el Tribunal, nombrándole servicios que ponían en riesgo su salud y la del resto de usuarios de la vía.\nLa represalia de su superior, ha sido como viene siendo habitual, el iniciar el mencionado expediente para que pierda la especialidad de tráfico y que podría suponer, caso de llevarse a efecto, que pierda su destino teniendo que abandonar la localidad donde reside junto con su familia desde hace muchos años, aparte de los perjuicios económicos que dicho expediente le originen a él y a su familia.\nJiménez denuncia una vez más la nefasta Prevención de Riesgos Laborales en la Guardia Civil, así como la inexistencia de la catalogación de puestos de trabajo, encontrándose con claros ejemplos de guardias civiles de tráfico que realizan servicios burocráticos y que podrían estar prestando servicios en la carretera, mientras que por el contrario, agentes con limitaciones están en la calle poniendo en riesgo su salud y la de los ciudadanos.\nAUGC denuncia que la Ley de Régimen de Personal se queda en papel mojado, ya que la misma establece que se les garantizará el principio de igualdad de trato en los destinos a los que pueda acceder, hecho que no se aplica en la actualidad, siendo otro de los motivos que por los que unos 400 agentes de Extremadura, se movilizaran para asistir a la #MareadeTricornios, manifestación convocada por el sindicato para el próximo 14 de Noviembre en Madrid.


CONSEJO NACIONAL DE CONSCIENCIA UNIVERSAL • Fuerza de Paz Venezuela\nLas causas de las contradicciones que se han materializado últimamente en el País, bajo la expresión de guarimbas, de violencia, de protestas callejeras, de corrupción, de nepotismo, de enajenación, de prepotencia, de soberbia, de sectarismo, de falsos golpes de estados, presos políticos y en general, de desaciertos del Gobierno y de la Oposición venezolana, sin dejar de tener una raíz político-partidista, son mucho más profundas, tienen que ver con nuestra colonización mental, nuestra identidad integral, la realidad de nuestro medio circundante, nuestro imitador modelo económico, además de las causas y confusiones ideológicas sembradas interesada y exógenamente en nosotros.\nEl conflicto históricamente presente en el País se ha recrudecido en el último año, por la permanente contradicción existente entre las responsabilidades y posibilidades de satisfacer el interés nacional y las ingentes necesidades esenciales de los venezolanos, para mejorar las condiciones de vida de la población, sobre todo los más pobres, y la incapacidad del proyecto\ngubernamental político- partidocrático, del proyecto económico monoproductor importador de convivencia y reparto gobierno-GRUPOS DE INTERÉS, y, de las tutoradas e incapacitadas organizaciones populares existentes, para construir y desarrollar el Poder Popular.\nProducto de esto es que se ha decidido presentar una nueva visión al PUEBLO VENEZOLANO, que comulguen con la idea de ir hacia el gestar de una nueva SOCIEDAD dispuesta a romper con el paradigma de la partidocracia existente hasta hoy. De ahí el Movimiento Consejo Nacional de Consciencia Universal.\nCon los mismos propósitos que el Padre de nuestra Patria, el líder supremo y eterno de nuestro Proceso, El Libertador SIMON BOLIVAR, desarrollo la lucha de independencia contra el Imperio Español, hoy, los venezolanos, retomamos esa contienda existencial para combatir contra la dominación que la hegemoníca Élite Global, ha impuesto sobre nuestros pueblos por más de quinientos años.\nHoy nosotros, al igual que ayer lo hicieron nuestros progenitores: Rodríguez, Bolívar, entre otros, debemos luchar para procurar el establecimiento de nuestra NUEVA VISIÓN.\nSiendo así, entonces los venezolanos tenemos en este momento un reto existencial, que va mas allá de una simple contienda electoral para confrontar opciones políticas internas propias; nos estamos debatiendo entre las posibilidades de existir como una patria libre, auto determinada y soberana o continuar siendo un seudo estado satélite del Establecimiento\n(Stablishment) hegemónico de la Ëlite Global.\nNos estamos jugando nuestra existencia como Nación y debemos decidir entre continuar con un estéril y divisionario enfrentamiento interno, abrazando banderas de lucha importadas desde otras realidades sociales, políticas, geográficas y culturales diferentes a las nuestras, banderas de lucha impuestas por nuestro complejo mental de dependencia europeas, impuestas por el complejo de dependencia del norte y por la falta de confianza en nosotros mismos, por la falta de conocimiento de nuestra identidad y de nuestro medio circundante; y decidir en contrario, la retoma y asunción definitiva de banderas de lucha propias, decidir la búsqueda de nuestra verdadera identidad, decidir la asunción definitiva de la consolidación de un modelo de gobernanza(SOCIOCRACIA) que gestione y active los gobiernos de consciencias locales.\nGestar una nueva sociedad en consciencia que bajo el principio del humanismo se consolide la verdadera libertad que conllevaría a la consolidación de La Gran Columbae como nación independiente y que regirá los destinos del planeta.\n•\tPropiciar la creación de los Consejos Sociales de Consciencia CSC, que organizados y documentados en los diferentes sectores comunitarios del país, debatirían las ideas para la conformación de los autogobiernos de Consciencia y la creación de los consejos de participación constituyente.\n•\tEstablecer las bases programáticas que dirigirán los pasos a seguir para la convocatoria a una Constituyente Original .Primero en Venezuela y después en los países que conforman la Gran Columbae.\n•\tElaborar el marco legal constitucional que derogaría las leyes que de una u otra forma que están contribuyendo en la entrega parcial y total de nuestra territorialidad y soberanía del país. Crear una nueva estructura gubernamental que estaría basada en una administración totalmente horizontal. Y así construir el verdadero Gobierno de Consciencia con la participación del pueblo en general.\nLuis Fajardo: Vocero del Movimiento.\nPagina WEB: CONSEJO NACIONAL DE CONSCIENCIA UNIVERSAL. http://144-000.mex.tl/frameset.php?url=/intro.html\nCONSCIENCIA UNIVERSAL ha creado el grupo CONSEJO NACIONAL DE CONSCIENCIA UNIVERSAL hace 4 años, 3 meses


Inicio > AVANCE EN LOS SISTEMAS DE REFERENCIA Y CONTRARREFERENCIA EN ESSALUD > Comentarios de lectores/as > Auxiliar De Muebles De Cocina De Navarra Sl\nNada mejor web page que llegar a casa de un largo día de trabajo y sentarte a mirar la TV, ese aparatillo tan entretenido y útil que te saca del aburrimiento y te mantiene informado de todo lo que pasa día tras día. En Atrapamuebles ponemos a la venta la mayor selección de muebles de salón al mejor precio. Los muebles TELEVISION Fly forma parte de la línea de muebles TELEVISION madera de Dicoro. Vivienda amueblada con muebles de cartón para home staging. Conoce de la mano de nuestros expertos en decoración los muebles, estilos y tendencias que se llevan esta temporada.\nEn Westwing Residence and Residing encontrarás todo lo que necesitas para hacer de tu casa un espacio acogedor web page y con estilo, homepage además de una completa guía de decoración con miles de consejos prácticos para una casa de diez. Silla para salón GÓSOL, disponible en varios acabados de colour.\nPrecios inigualables en tú tienda de muebles en Valencia Andar por Casa. Sillas que llenan de vida nuestros hogares. Tenemos una gran diversidad de muebles auxiliar de salón dentro de nuestra colección muebles de salón. El buffet Niza es un mueble supreme por su claro diseño nórdico con una presencia pure en cualquier tipo de salón.\nSi nuestro salón es grande, bien podemos comprar mesas television televisión que también sean grandes. En nuestra sección todos los muebles, web site le mostramos nuestra tienda de muebles baratos al completo, para que pueda, en un solo vistazo, consultar nuestro catálogo de productos.\nEn nuestra internet puedes comprar muebles on-line. Consulta nuestra amplia variedad de muebles de comedor y disfruta al máximo de esta estancia con nuestros sillones y sofás baratos. Incluye un espejo de a hundred x 30 cm. Estilo moderno, de diseño y económico. En nuestra tienda de muebles online, no sólo te mostramos las novedades en muebles y nuestras recomendaciones de acuerdo con tus búsquedas, sino que te damos las claves para combinarlos con la decoración de tu hogar.\nIf you loved this article so you would like to receive more info about web page generously visit our own internet site.