Origen de replicación independiente plásmido ocurre en el virus vaccinia citoplásmica fábricas y requiere de los cinco factores de replicación conocido poxvirus\nVirology Journal, 2005; 2: 23-23 (más artículos en esta revista)\nFrank De Silva S (fdesilva@niaid.nih.gov) , Bernard Moss (bmoss@nih.gov) \n Laboratory of Viral Diseases, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland 20892-0445, USA\nCopyright © 2005 De Silva y Moss; licenciatario BioMed Central Ltd\nDe la replicación del genoma del virus de vaccinia se produce en la fábrica frente al citoplasma de las zonas y depende de los virus de la DNA polimerasa codificada y por lo menos otros cuatro proteínas virales. Síntesis de ADN parece comenzar cerca de los extremos del genoma, pero secuencias específicas de origen no se han definido. Sorprendentemente, transfectadas circular de ADN que carecen de secuencias específicas viral también es replicado en poxvirus de las células infectadas. Origen de la replicación del plásmido independiente depende de la DNA polimerasa viral, pero ni el número de nuevas proteínas virales ni el sitio de la replicación ha sido determinado.\nUso de una novela en tiempo real de ensayo de reacción en cadena de la polimerasa, que detectó un> 400 veces más reciente reproducido en el plásmido en las células infectadas con el virus vaccinia. Estudios con mutantes condicionales letales del virus vaccinia indicó que cada una de las cinco proteínas que se sabe que son necesarios para la replicación del genoma viral es también necesaria para la replicación del plásmido. El sitio de replicación intracelular se determinó a través de un plásmido conteniendo 256 repeticiones de la Escherichia coli lac operador y tinción con una E. Coli represor lac-maltosa vinculante proteína de fusión seguido de un anticuerpo a la proteína de unión de maltosa. El operador lac plásmido fue localizado en citoplásmica viral fábricas trazada por tinción de ADN y encuadernación de anticuerpos a la uracil ADN viral glycosylase, una proteína esencial replicación. Además, la replicación del operador lac plásmido se visualiza continuamente en las células vivas infectadas con el virus vaccinia recombinante que expresa el represor lac fundido a mejorar la proteína verde fluorescente. Discreta fluorescencia citoplásmica se detectó en citoplásmica juxtanuclear sitios a las 6 horas después de la infección y de la zona y el aumento de la intensidad de fluorescencia durante las próximas horas.\nLa replicación de un plásmido circular que carecen de las secuencias de ADN específicas poxvirus imita genoma viral por que se forman en la replicación viral frente al citoplasma de las fábricas y que requieren conocer las cinco proteínas de la replicación viral. Por lo tanto, los pequeños plásmidos pueden ser utilizados como sucedáneos de las grandes poxvirus genoma para estudiar los factores que actúan transeuropeas y el mecanismo de replicación del ADN viral.\nVirus de la vacuna (VAC), el prototipo de la familia Poxviridae, es un gran doble varados virus ADN que codifica las enzimas y los numerosos factores necesarios para la síntesis de ADN y ARN, que le permiten replicar en el citoplasma de las células infectadas . Más de 20 proteínas virales incluido un multi-subunidad de ARN polimerasa y fase específicas son factores de transcripción que participan en la síntesis de RNA viral . Estudios genéticos y bioquímicos identificado cinco proteínas virales esenciales para la replicación del ADN viral, es decir, la DNA polimerasa viral [3 - 8], la polimerasa procesividad factor [9, 10], independiente de ADN de nucleósidos triphosphatase [11 - 13], serina / threonine proteína quinasa [14 - 17], y uracil DNA glycosylase [18 - 21]. Además, el virus codificado Holliday cruce de endonucleasa es necesaria para la resolución de ADN concatemers en la unidad de longitud de los genomas . Otras proteínas que pueden contribuir a la replicación del ADN viral, incluyen ADN topoisomerasa tipo I, la única proteína de unión de ADN varados, ligase de la DNA, la timidina quinasa, thymidylate quinasa, y dUTPase ribonucleótido reductasa (revisado en referencia ].\nEl VAC genoma consiste en un dúplex de 192 kbp lineales de ADN con covalentemente cerrado horquilla termini [23, 24]. Un modelo de poxvirus la replicación del ADN comienza con la introducción de un nick, cerca de uno o ambos extremos de la horquilla termini, seguida de polimerización de los nucleótidos en el libre 3'-OH fin, el desplazamiento y el capítulo concatemer resolución [25, 26]. Nicking cuenta con el apoyo de los cambios en la sedimentación de los padres del ADN después de la infección, y el etiquetado estudios sugiere que la replicación se inicia cerca de los extremos del genoma [27, 28]. Los esfuerzos para localizar un origen de replicación en el genoma VAC condujo a la sorprendente conclusión de que cualquier ADN circular reproducirse como de cabeza a la cola junto arrays en las células infectadas con el VAC [29, 30]. Origen independiente de la replicación del plásmido fue también demostrado que se producen en el citoplasma de las células infectadas con otros poxviruses incluidos Shope fibroma virus y virus mixoma, así como con el virus de la peste porcina africana [30, 31]. En cambio, los estudios con minichromosomes lineal que contiene horquilla termini presentó pruebas para cis-VAC actuando elementos en la replicación del ADN . Se consideró que el plásmido de replicación podría iniciar no concretamente, tal vez al azar mellas en el ADN.\nAunque transfectadas plásmidos se utilizan para estudiar la resolución de poxvirus concatemer cruces [33 - 37], el sistema no ha sido explotada para el estudio de la síntesis de ADN viral. El objetivo del presente estudio fue determinar cómo estrechamente plásmido de replicación imita la replicación del genoma viral. Por ejemplo, si algunas proteínas virales son necesarios para iniciar la síntesis de ADN en determinados orígenes cerca de los extremos del genoma viral, que podría no ser necesaria para la replicación del plásmido. Además, se nos curioso en cuanto a si la síntesis de ADN plásmido se produce difusa en el citoplasma, ya que el ADN entra en las células transfectadas con independencia de virus y no contiene secuencias virales de orientación. Contrariamente a estas especulaciones, encontramos que cada uno de los cinco proteínas virales que se sabe que son necesarios para la replicación del genoma viral que se necesitaba para el origen independiente de la replicación de los plásmidos. Además, tanto el plásmido y se produjo en la replicación del genoma viral discreto citoplásmica fábrica. Así, los pequeños circular plásmidos son sustitutos útiles para la gran genoma viral en el estudio de poxvirus el mecanismo de replicación del ADN y las transnacionales que actúan factores requeridos.\nDeterminación de la replicación del plásmido por PCR en tiempo real\nLa replicación de los plásmidos y minichromosomes lineales, que fueron transfectadas en células infectadas por el VAC, fue previamente demostrada por autorradiografía después de la hibridación de 32 P-etiquetados para el Sur de sondas blots [29, 30, 32]. Metiladas entrada ADN preparado en E. Coli se distingue de unmethylated DNA reproducirse en células de mamífero infectado por la digestión con DpnI DpnI y MboI MboI, que cleave G m ATC y secuencias GATC, respectivamente. DeLange y McFadden  ha informado de un 8 veces aumento neto de un plásmido circular que carecen de secuencias virales en las células infectadas con el conejo mixoma virus, mientras que Du Traktman y  había visto a 2 veces el aumento neto de un lineal minichromosome contengan VAC Termini en el genoma de ratón L células infectadas con el VAC, pero un aumento mucho menor de un plásmido circular que carecen de secuencias virales. Se comparó la reproducción de tres tipos de ADN (super espiral circular, lineal, lineal y minichromosome) en el mono verde africano BS-C-1 células, que se ha convertido en un estándar de la línea de células para la investigación VAC. Southern blot análisis de la DpnI DpnI productos de la digestión del ADN aislado de las células infectadas con el VAC y transfectadas con super enrollado pUC13 reveló un alto peso molecular que emigran por encima de la banda de 23,1-kbp marcador, que representan presumiblemente de cabeza a la cola concatemers (Fig. 1A]. Un prominente DpnI resistentes a la banda, que migran entre el 4,4 y el 6,6 kbp marcadores, se obtuvo mediante la digestión de ADN de infectados BS-C-1 células transfectadas con el minichromosome covalentemente cerrado. Sin embargo, sólo los pequeños productos de la digestión se obtuvieron a DpnI DpnI tratos de ADN de las células transductor lineal pUC13. Además, DpnI DpnI resistentes a las bandas no se detectaron por la digestión del ADN de modelo de las células infectadas con un transductor lineal minichromosome o 10 veces más súper enrollado plásmido (Figura 1A]. Este experimento confirmó la necesidad de VAC y de la infección ya sea un plásmido circular o lineal minichromosome plantilla para la replicación del ADN. Por otra parte, no hemos visto una mayor reproducción de la lineal minichromosome que el plásmido circular como se había informado (32).\nPara mejorar la cuantificación de la replicación del plásmido, y establecer un método no radiactivo de un rápido análisis de las múltiples muestras, realizamos un tiempo real utilizando el ensayo de PCR primers 152 bp que aparte flanqueado dos DpnI DpnI / MboI MboI una circular en sitios que carecen de plásmido de ADN VAC Secuencias. En los experimentos iniciales, hemos seguido el protocolo de estudios previos por el plásmido transfecting después de la infección [29, 30]. Sin embargo, MboI MboI resistentes entrada de ADN, así como DpnI DpnI resistentes a repetirse ADN aumentado con el tiempo, lo que sugiere que la entrada de ADN en la célula producido continuamente a pesar de que el medio se cambió a las 4 h (datos no presentados). Para evitar este problema en experimentos posteriores, el ADN se transfectadas 24 h antes de la infección. Total ADN fue aislado en diversas ocasiones, digeridos con DpnI DpnI, MboI MboI, o la izquierda no ha sido cortada y sometido a PCR en tiempo real. En estas condiciones, MboI MboI resistentes ADN no aumentó, mientras que DpnI DpnI resistentes ADN aumento de ~ 18 veces entre los 3 y 6 h y ~ 400 veces por 24 h (Fig. 1B]. Por otra parte, el total de ADN ~ aumentado 10 veces. Mayor DpnI DpnI resistentes ADN no fue detectado en el modelo de las células infectadas (datos no presentados).\nSouthern Blot estudios anteriores habían indicado que el plásmido de replicación replicación del genoma paralelo . Se comparó la cinética de replicación del plásmido obtenido por PCR en tiempo real con Southern Blot. Para este último análisis, el total de ADN fue digerido con EcoRI EcoRI para resolver de cabeza a la cola concatemers en unidades lineales seguida de la digestión con MboI MboI o DpnI DpnI. Después de la electroforesis, el ADN se transfirió a una membrana de nylon, hibridizada a un 32 P-etiquetados sonda plásmido, y la cantidad de ADN cuantificarán mediante un PhosphorImager. El DpnI DpnI resistentes y ADN total aumentó con el tiempo, mientras que el MboI MboI resistentes ADN no (Fig. 1C]. El Southern blot análisis sugiere que la cantidad de plásmido plateaued repetirse después de 12 h, mientras que sigue aumentando ligeramente según lo determinado por PCR (Figura 1B], lo que sugiere que este último método tiene el mayor rango dinámico, además de ser más cómodo.\nDeterminación de la trans-actuando factores necesarios para la replicación del plásmido\nLa dependencia de la replicación del genoma VAC relativa a la expresión de los cinco principios de las proteínas virales fue previamente determinado por el análisis de mutantes condicionales letales. Debido a la ausencia de cis-secuencias de ADN que actúan VAC, hemos considerado que el plásmido de replicación de ADN que sólo imitan los pasos de elongación, y por tanto requieren sólo un subconjunto de proteínas víricas. Para probar esta hipótesis, el plásmido se transfectadas en BS-C-40 células (un derivado de la BS-C-1 que las células han sido pasajes a 40 ° C), que posteriormente fueron infectados con un VAC ts mutante bajo permisiva y no Permisivo condiciones. Plásmido de replicación se cuantificó por PCR en tiempo real. VAC cepa de tipo salvaje y WR Cts16 Cts16 Cts16, que tiene una mutación en el gen que codifica una I7 proteasa necesarios para la morfogénesis VAC, pero no la síntesis de ADN , sirvieron como controles positivos. Síntesis de ADN plásmido fue mayor a 39,5 ° C de 31 ° C para ambos WR y Cts16 Cts16 Cts16 (Figura 2A]. En cambio, lo contrario es cierto para cada mutación se sabe que perjudican la replicación del ADN en la temperatura no permisiva. De hecho, apenas el plásmido de replicación se detectó en 39,5 ° C en las células infectadas con el Cts24 Cts24 Cts24, Cts42 Cts42 Cts42, y ts185 ts185, que tienen defectos en el D5 de nucleósidos triphosphatase, E9 la ADN polimerasa, y el factor de procesividad A20 (Fig. 2A ). La reducción de la replicación del plásmido se completa en menos 39,5 ° C en las células infectadas con el Cts25 Cts25 Cts25, que tiene un defecto en la B1 serina / threonine proteína quinasa, que es compatible con observaciones anteriores mostraron que la acumulación de genoma viral se redujo en sólo moderadamente BS - C-40 en células no permisivas temperaturas . El relativamente bajo de replicación del plásmido a 31 ° C en las células infectadas con el Cts42 Cts42 Cts42 y ts185 ts185 (Figura 2A] sugiere que la mutación de la ADN polimerasa y procesividad factor todavía un tanto defectuoso, incluso con "permisivo".\nEstudios anteriores habían demostrado que la expresión de VAC uracil DNA glycosylase se requiere para la replicación del genoma . Para determinar si esta proteína es necesaria para la replicación del plásmido, que utiliza virus mutante vD4 ZG-, en la que el uracil DNA glycosylase gen se ha eliminado , y que carecen de líneas de células de conejo (RK-13) o que expresan establemente (RKD4R) VAC uracil DNA glycosylase . Se encontró que la replicación del ADN plásmido sólo se detectó en la línea celular estable que expresa la uracil ADN viral glycosylase (Fig. 2B], lo que indica una necesidad de esta proteína, así como cada uno de los otros cuatro factores.\nTransfectadas plásmido de ADN viral se acumula en las fábricas\nVAC acumula en el ADN genómico especializados citoplásmica fábrica cerca de las zonas núcleo. Sin embargo, la ubicación intra-citoplasmática de plásmido de replicación no se había determinado. Necesitábamos una etiqueta específica para distinguir viral y plásmido de ADN con el fin de localizar a estos últimos en las células infectadas. Varios estudios han utilizado multimerized E. Coli lac operador (lacO lacO) sitios de unión y represor lac (lacI lacI) interacciones proteína de fusión para examinar la organización de la cromatina y la dinámica de los cromosomas en las células vivas [40 - 43]. Para aplicar esta estrategia, las células transfectadas con un 10,5 kbp plásmido pSV2-dhfr-8,32  que contiene 256 lacO lacO repite las células infectadas y 24 h más tarde. Los primeros experimentos confirmaron que se produjeron después de la replicación del plásmido VAC infección como se ha descrito anteriormente para los más pequeños plásmidos (datos no presentados). Luego de esto, las células transfectadas con pSV2-dhfr-8,32 y después infectados con vV5D4, un recombinante que expresa VAC-V5 epítopo etiquetados uracil DNA glycosylase. A las 12 h después de la infección, el ADN en el núcleo y citoplasma fábricas fue visualizado por tinción Hoechst (Fig. 3]. El plásmido que parecía ser excluidos del núcleo y presente exclusivamente en las fábricas citoplásmica viral según lo determinado por la tinción de las células con una proteína de unión maltosa (MBP) - lacI lacI proteína de fusión y un anticuerpo a MBP (Fig. 3]. Además, el plásmido sitios de la figura VAC DNA glycosylase, como lo demuestra la tinción con anticuerpos a la V5 etiqueta de la última proteína (Fig. 3]. No se detectó tinción MBP cuando un plásmido que carecen de control lacO lacO secuencias se transfectadas (datos no presentados).\nVisualización de reproducir plásmido de ADN en células vivas\nEn el experimento anterior, las células fueron fijadas y teñidas con el fin de visualizar el ADN plásmido. Consideramos que estas medidas se podrían evitar por expresar una GFP-lacI lacI proteína de fusión con una señal de localización nuclear (NLS). El GFP permite la visualización de la etiqueta lacI lacI por microscopía de fluorescencia mientras que el NLS servido para trasladar las buenas prácticas agrarias-lacI lacI, que no estaba específicamente vinculado a lacO lacO en secuencias de ADN, desde el citoplasma al núcleo. Con el fin de expresar la proteína de fusión antes y durante la replicación del ADN, que construyó la recombinante vGFP-lacI con el marco de lectura abierta la codificación de GFP-NLS-lacI lacI proteína de fusión regulado por un viral temprana o tardía promotor. Células HeLa fueron transfectadas con pSV2-dhfr-8,32 y 24 h después infectados con vGFP-lacI. Fluorescencia verde brillante se detectó más de la factoría viral zonas y núcleos, que se correlacionaban con la tinción de Hoechst (Fig. 4]. En las células con múltiples fábricas viral, sin embargo, no todos los exhibió una fluorescencia verde. La fábrica viral regiones también fueron visualizados por tinción con un anticuerpo a la RNA polimerasa viral, que rodeado incluido el ADN y los sitios a las 12 h después de la infección (Fig. 4]. Cuando un plásmido control (p716) que carecen de lacO lacO sitios se transfectadas, la fluorescencia verde era estrictamente localizados en el núcleo (Fig. 4].\nDespués de haber establecido la especificidad de la GFP-lacI lacI vinculante por la co-localización, se examinaron fluorescencia de células vivas por el tiempo transcurrido después de transfección con microscopía pSV2-dhfr-8,32 y de la infección con el vGFP-lacI lacI. GFP fluorescencia débil se detectó en aproximadamente el 5,5 h después de la infección (no se muestra), y es en gran parte sobre el núcleo, lo que refleja la orientación debido a la NLS. Una región de juxtanuclear fluorescencia correspondiente a una fábrica viral se observó claramente en el 7,5 h, y durante las próximas horas aumentado en intensidad (Fig. 5]. El tiempo sugirió que la fábrica de la región fue el sitio de replicación, así como la acumulación de ADN plásmido.\nLa replicación de ADN circular que carecen de secuencias virales como de cabeza a la cola concatemers en el citoplasma de las células infectadas con un poxvirus se informó, hace casi 20 años [29, 30]. Fortuito poxviral orígenes fueron descartadas por la reproducción de la circular 5 diferentes autoridades nacionales designadas y no se obtuvo evidencia para su integración en el genoma viral no por recombinación homóloga. Estos datos sugiere encarecidamente plásmido de replicación autónoma por un círculo de rodadura o theta mecanismo. La importancia de la no secuencia específica de la replicación del ADN fue puesto en tela de juicio por Du y Traktman , en la que informó sólo de bajo nivel de replicación de un plásmido super enrollado, frente a la lineal minichromosome telómero que contienen secuencias específicas . Sin embargo, nuestra determinación de multiplicado por 10 en el ADN plásmido netos en comparación con la del 2 veces aumento logrado con la máxima eficiencia minichromosome construir . Además, nuestro hallazgo fue similar a la de 8 veces más en el ADN plásmido netos reportados por DeLange y McFadden . Hay varias diferencias de procedimiento que podrían explicar la disparidad de resultados. Una de las diferencias es el tipo de virus y las células utilizados: Du y Traktman L ratón utiliza células infectadas con VAC, DeLange y McFadden utilizados principalmente para conejo células infectadas con el virus mixoma fibroma o Shope virus y hemos utilizado mono o células HeLa infectadas con el VAC. Una segunda diferencia es el método de aislamiento de ADN. Considerando que nosotros y DeLange y McFadden proteinasa digerido lisados de células enteras, y Du Traktman células lisadas con frío hipotónica buffer que contiene un detergente no iónico y retirado por los núcleos de sedimentación antes de la extracción de ADN. VAC ocurre en la replicación del ADN juxtanuclear fábricas y la pérdida de proteínas de alto peso molecular de ADN complejos, especialmente los que contienen largo de cabeza a cola de ADN plásmido concatemers a la centrifugación es una preocupación. De hecho, y Du Traktman  informó de que la presencia de la secuencia de resolución telómero se requiere para la reproducción de alta eficiencia minichromosomes lineales y monomérico productos que sólo se recuperaron. Se necesitan estudios adicionales para determinar si las secuencias cis-actuando en el lineal minichromosomes se actúa como origen de replicación o como concatemer de resolución o de ambos sitios.\nLa coincidencia temporal del plásmido viral y la replicación del ADN viral sugirió que las proteínas se necesitan para cada una. De hecho, encontramos que cada una de las cinco transnacionales que actúan las proteínas virales que se sabe que son importantes para la replicación del genoma viral es igualmente necesaria para la replicación del plásmido. O bien ninguna de estas proteínas tienen una secuencia específica de papel o algunos tienen doble función y son también necesarias para el origen de replicación independiente. Las proteínas también pueden tener funciones estructurales en el complejo montaje de la reproducción, la existencia de la que ha sido propuesto por la interacción de la A20 con la D4 y D5 proteínas  y de la co-purificación de la A20, E9 y D4 proteínas con una forma processive De la DNA polimerasa [46, 47].\nVAC núcleos que contienen ADN genómico y una pronta sistema de transcripción de viaje entrada de la celda sitio a lo largo de los microtúbulos a juxtanuclear ámbito en el que la síntesis de las proteínas virales y principios de la replicación del ADN resultado en la formación de las fábricas discreta . Se cree que cada una de las fábricas se debe a una única partícula infecciosa . Es interesante para determinar si se produjo la replicación del plásmido en las fábricas o dispersos en la célula. Para investigar esto, las células transfectadas con un plásmido que contiene múltiples repeticiones de la E. LacO lacO coli, que se une fuertemente lacI lacI. En un método, la lacO lacO ADN se encuentra en las regiones discretas juxtanuclear por tinción de las células permeabilized fija y con un MBP-lacI lacI proteína de fusión seguido de un anticuerpo a la PAM. Las regiones se identificaron como fábricas viral por Hoechst tinción de ADN y la localización de la uracil ADN viral glycosylase, una proteína necesaria para la replicación de los plásmidos y ADN viral. LacO LacO no se detectó ADN en el núcleo o en zonas difusas de la citoplasma. Un segundo enfoque implicaba la construcción de un VAC recombinante, que expresa GFP-lacI lacI proteína de fusión con un NLS para eliminar sin encuadernar proteínas de las citoplasma. Una vez más, la lacO lacO ADN viral se encontró en las fábricas identificadas con la tinción de Hoechst y la RNA polimerasa viral de anticuerpos. Los datos sugieren que para que se produzca el plásmido de replicación, el ADN tiene que estar en el lugar correcto, es decir un sitio que contengan proteínas de la replicación viral. Presumiblemente el plásmido difunde en la fábrica de la región y es captado por las proteínas ADN vinculante. Al tomar lapso de tiempo imágenes de células vivas, el plásmido de ADN se detectó en juxtanuclear sitios a los 6 a 7 h después de la infección y el aumento en la intensidad como la ampliación de las fábricas durante las próximas horas. Fábrica de la ampliación parece que se produzca desde el interior y no por la fusión de varias pequeñas fábricas. Sospechamos que este último podría ocurrir si el virus de mayor multiplicidades se utilizaron.\nEn contraste con la citoplásmica de la replicación del genoma y el ADN plásmido en las células infectadas-VAC, Sourvinos et al.  visualizado nuclear de replicación del virus del herpes simple amplicones que contienen tetraciclina operador secuencia y Fraefel et al.  incorporado lacO lacO sitios en el genoma de adenovirus y virus asociados discreta replicación visualizar sitios en el núcleo que fusionados para formar estructuras más grandes. El último estudio nos animó a tratar de incorporar a largo tándem arrays de lacO lacO VAC repite en el genoma, pero son inestables.\nSe presenta una delicada y cuantitativa en tiempo real PCR método de medición de la replicación del plásmido en las células infectadas con el VAC y demostrado que el origen de replicación independiente requiere que todos conocida la replicación viral proteínas. Además, se visualiza el plásmido en las células de vida y de fijo mediante la incorporación de secuencias tándem lacO lacO y determinó que la replicación viral se produjo en citoplásmica fábricas. Este sistema debería ser útil para estudiar el mecanismo y los requisitos mínimos de poxvirus la replicación del ADN.\nCélulas, plásmidos y virus\nRK-13, BS-C-1, C-BS-40, HuTK - 143B, y células HeLa se mantuvieron en el mínimo esencial Eagle medio (EMEM; Calidad de Biológicos, Inc Gaithersburg, MD) o Dulbecco modificada del medio Eagle (MEDM; Calidad de Biológicos, Inc), que contiene un 10% de suero fetal bovino (SFB). Una línea celular de riñón de conejo (RKD4R) estable expresando la VAC uracil ADN recombinante y glycosylase VAC vD4 ZG-que carecen de un gen funcional D4R  fueron los regalos de FG Falkner. Plásmido pSV9 contiene dos copias de un 2,6 kbp insertar derivados de la VAC concatemer cruce y dos copias de pUC13 ADN . Lineal minichromosomes contiene 1,3 kbp de VAC telómero secuencias fueron preparados por la ligadura de broche de enfriado, EcoRI digerido EcoRI pSV9 esencialmente descrita por Du y Traktman . Ligadura dio lugar a tres productos, de 8 kbp, 2,6 kbp y 5,3 kbp. El 5,3 kbp minichromosome fragmento fue aislado por electroforesis en gel y de la extracción de gel Qiaex II Kit (Qiagen). Plásmido p716  fue proporcionado amablemente por A. McBride; plásmidos pSV2-dhfr-8,32 y p3'SS dímero-Cl-EGFP  fueron los regalos de A. Belmont. La temperatura sensible (ts) replicación mutantes Cts16 Cts16 Cts16, Cts24 Cts24 Cts24, Cts42 Cts42 Cts42, Cts25 Cts25 Cts25 con mutaciones en el I7, D5, E9 y marcos de lectura abierta B1, respectivamente, se obtuvieron a partir de R. Condit [53, 54] ; Mut185 ts tiene una mutación en la A20 ORF .\nCy5-conjugado affinipure F (ab ') 2 fragmento de burro IgG anti-ratón y Texas tinte rojo conjugado affinipure F (ab') 2 de burro anti-conejo IgG se obtuvieron de Jackson ImmunoResearch laboratorios. Alexa Fluor 594 cabra anti-IgG de conejo fue de sondas moleculares. New England Biolabs y Invitrogen suministrado el conejo de anticuerpos a la PAM y el ratón anti-V5 anticuerpo monoclonal, respectivamente.\nTransfección, la infección y el aislamiento de ADN\nPara los experimentos analizados por PCR en tiempo real, 0,1 μ g de ADN p716 y 3,9 μ g de salmón esperma portador de ADN se mezcla con 10 μ g de lipofectamine 2000 (Invitrogen) y las células no infectadas fueron transfectadas de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Después de 24 h, las células fueron infectadas con la cepa VAC WR, vD4 ZG-ts o un mutante en una multiplicidad de 3 PFU por célula. Las células fueron lavadas dos veces con Opti-MEM (Invitrogen) y superpuestos a las EMEM con el 2,5% de SFB. En distintos momentos, se cosecharon las células y el ADN aislado utilizando el ADN de sangre Qiamp Kit (Qiagen), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. ADN fue digerido con las enzimas de restricción DpnI DpnI o MboI MboI (New England Biolabs).\nSecante del Sur\nADN (2 μ g) fue digerido con EcoRI EcoRI y DpnI DpnI o MboI MboI, resuelto en un gel de agarosa 0,8%, y trasladado a Immobilon-Ny + (Millipore) de transferencia de la membrana. Secante del Sur se llevó a cabo según lo descrito por Maniatis . Plásmido de ADN se detectó con una sonda de ADN que fue de 32 P-etiquetados utilizando un kit de azar-priming (Invitrogen). Pre-hibridaciones y hibridaciones se llevaron a cabo utilizando Quik-hibridación (Stratagene), de acuerdo con la recomendación del fabricante. La mancha fue expuesta a una pantalla de fósforo y de los datos adquiridos en un Tormenta 860 PhosphoImager (Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA) y cuantificarse con ImageQuant software (Molecular Dynamics).\nOligonucleótidos P1 (5'CAACTAAATGTGCAAGCAATGTAATTC3 ') y P2 (5'CATCCTGCCCCTTGCTGT3') fueron diseñadas con el software Primer Express suministrados por Applied Biosystems. Las reacciones se llevaron a cabo utilizando SYBR Green maestro de la mezcla de PCR (Applied Biosystems), 10 μ M de cada cebador, y 1 ng de DNA en un volumen total de 50 μ l en un Applied Biosystems Prism 7900HT secuencia con sistema de detección de software v2.1.1. Para la amplificación 40 ciclos a 95 ° C durante 15 s y 60 ° C durante 60 s se utilizaron.\nConstrucción de virus recombinantes\nVGFP-lacI lacI: el marco de lectura abierta que codifica GFP-lacI lacI fue clonado por PCR usando primers 5'CAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGA3 'y 5'AAAAGTACTAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGC3' con p3'SS dímero-Cl-EGFP  como una plantilla. El producto de PCR fue digerido con XhoI XhoI y ScaI ScaI y luego ligated a XhoI XhoI y StuI StuI digerido pSC59  para formar el plásmido pSC59gfplacI pSC59gfplacI pSC59gfplacI. BS-C-1 células fueron infectadas con la cepa VAC WR PFU en el 0,05 por celda de 1 h y luego transfectadas con 2 μ g pSC59gfplacI pSC59gfplacI pSC59gfplacI utilizando 10 μ g de Lipofectamine 2000. Después de 5 h, el medio fue reemplazado con EMEM, más el 2,5% de SFB y la continuación de incubación de 2 días. Las células fueron cosechadas y lisadas, y el lisado diluido se utiliza para infectar HuTK - 143B monocapas de células. Las células se superpone con soporte de bajo punto de fusión de agarosa y 25 μ g de 5-bromodeoxyuridine por ml. Después de tres rondas de la placa de depuración, el ADN viral se hacen pruebas de la presencia del ADN insertado por PCR. La recombinación del virus se propagó y se titula como se describe anteriormente . VV5D4: primers 5'ACTAGATACGTATAAAAAGGTATCTAATTTGATATAATGGGTAAGCCTATCCCTAACCCTCTCCTCGGTCTCGATTCTACGAATTCAGTGACTGT3 'y 5'CTCCTGGACGTAGCCTTCGGG3' y ADN de plásmido pER-GFP  se utilizaron para añadir una etiqueta a la V5 VAC D4R gen. Después de la doble digestión de los productos PCR y plásmido con SnaBI SnaBI y SmaI SmaI, los productos se ligated para formar el nuevo plásmido pERV5-GFP. Aproximadamente 10 6 RKD4R células fueron infectadas con el vD4 ZG-en una multiplicidad de 0,05 PFU por celda de 1 h a 37 ° C. La infección de las células se lavaron dos veces con Opti-MEM y transfectadas con 2 μ g de pERV5-GFP utilizando 10 μ g de Lipofectamine 2000. Después de 5 h, la transfección mezcla fue sustituida por EMEM que contiene 2,5% de SFB, y las células fueron recolectadas a las 48 h en 0,5 ml de la EMEM-2,5% de SFB. Lisados fueron preparados por la congelación y descongelación de las células tres veces y sonicating ellos dos veces durante 30 s. Recombinación del virus que se expresó GFP placa purificada cinco veces en RKD4R células. La pureza genética de los virus recombinantes fue confirmada por PCR y secuenciación. La recombinación del virus se propagó y se titula como se describe anteriormente .\nLa construcción y la expresión de MBP-lacI\nEl gen represor lac PCR fue amplificado utilizando los siguientes primers 5'CGGAATTCTCATCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGC3 'y 5'CGCGGATCCTAGTGAAACCAGTAACGTTATACG3' y la plantilla de ADN de p3'SS dímero-Cl-EGFP. El fragmento amplificado fue clonado en el BamHI EcoRI BamHI y sitios EcoRI del vector de expresión pMal-c2x (New England Biolabs), con lo que el plásmido pMalc2x-lacI lacI. Luria-Bertani medio (500 ml) suplementado con ampicilina (100 μ g / ml) y la glucosa (0,2% w / v) se inoculó con 5 ml de una cultura de la noche a la mañana el E. ER2507 coli (New England Biolabs) recombinante que contiene el plásmido pMalc2x-lacI. La cultura se ha aumentado a 37 ° C, a una densidad celular de 0,5 nm en el A600 y la expresión de la proteína fue inducida por 2 horas a 37 ° C, añadiendo isopropílico-β-D-thiogalactopyranoside a una concentración final de 0,3 mM. La cultura se centrifuga a 4000 × g por 20 min a 4 ° C. Un extracto de células se prepara usando B-PER reactivo (Pierce), de acuerdo con la recomendación del fabricante y el uso de la proteína purificada pMAL y purificación de proteína de fusión kit (New England Biolabs).\nLa microscopía confocal y en vivo de imágenes celulares\nLas celdas eran de plata de la cubierta de vidrio y se desliza en 12 placas y transfectadas con 1 μ g de pSV2-dhfr-8,32 utilizando 5 μ g de Lipofectamine 2000. Después de 24 h, las células fueron infectadas con el VAC recombinante a los 3 PFU por célula. A las 12 h después de la infección, las células fueron fijadas con 4% paraformaldehido fría en buffer fosfato salino (PBS) a temperatura ambiente durante 20 min. Fijo células fueron permeabilized por 5 min con PBS que contiene 0,2% Tritón X-100 a temperatura ambiente. Permeabilized células fueron incubadas con anticuerpos primarios a una dilución 1:100 FBS 10% durante 30 min, lavadas con PBS tres veces, y luego incubadas con el anticuerpo secundario en una dilución de 1:100 en el 10% de SFB durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de lavar tres veces con PBS, se incubaron cubrir desliza con colorante Hoechst durante 10 min a temperatura ambiente para visualizar el ADN de manchas. Manchadas células fueron lavadas con PBS y ampliamente cubierta desliza montado en el 20% de glicerol. Celular fluorescencia fue examinado bajo una Leica TCS NT invertido microscopio confocal y las imágenes se superpone usando Adobe Photoshop versión 5.0.2.\nPara vivir de imágenes celulares, células HeLa fueron chapada en ~ 80% confluencia en TC3 platos (Bioptechs, Inc), y con 3 PFU infectados de virus por célula al día siguiente. Las células se visualiza, ya sea por vídeo o microscopía confocal. Por microscopía de vídeo, una cámara y Hammumatsu C5985 controlador se asigna a una Leica DMIRBE invertido microscopio de fluorescencia. Las imágenes fueron digitalizadas mediante un IC-PCI de la tarjeta de captura de video (Coreco Imaging, Inc) controlado por software Image Pro Plus. Las células se mantuvieron en un acalorado TC3 etapa (Bioptechs, Inc) con la temperatura a 37 ° C.\nFDS participado en el diseño y la coordinación del estudio, la adquisición y el análisis de datos, y la preparación del manuscrito. BM diseñó y coordinó el estudio, con la ayuda en el análisis de datos y contribuyó a la preparación del manuscrito.\nDamos las gracias a Norman Cooper con la ayuda inestimable de cultivo celular, para ayudar a Owen Schwartz en microscopía confocal y en directo de imágenes celulares, y Mike Baxter por su asistencia en la PCR en tiempo real. A. y A. McBride Belmont siempre plásmidos y Condit R. y F. Falkner donado mutante virus y una línea celular.


Un arcoíris vegetal en el solar del barrio - - Red Sostenible y Creativa\nNov 29 Publicado por Red Sostenible y Creativa\ten agroecología\nLos residentes aseguran que han pasado de tener en estos campos matorrales, basura y roedores a lograr un tapiz multicolor con lechugas, habas, alcachofas, tomates «y las fresas, que a los chiquillos les vuelven locos», detalla Inma Donat, jefa de estudios del colegio Padre Catalá, centro que cuenta con un huerto urbano. «Los alumnos mira si están ilusionados, que en el comedor hay veces que repiten de ensalada. Y la empresa del comedor sólo trae productos ecológicos y de proximidad».\nEn Benimaclet cuenta en la actualidad con 60 parcelas donde trabajan 300 personas. «Ahora hay más de 35 personas en lista de espera, entre ellos alumnos de otro colegio, el Carles Salvador», añade Antio Pérez. «Los niños quieren participar y consumir los productos sembrados por ellos», indica M.ª Carmen Ribes, profesora del Carles Salvador.\n«Cuando empezamos a reivindicar con pancartas la cesión de las tierras hasta que construyeran las fincas, la gente nos decía que si estábamos locos y lo hemos conseguido. Yo tengo una parcela familiar y mi marido y mis hijas cuando salen de trabajar vienen a mimar lo que hemos plantado. Se puede decir que bajamos de casa a diario a recolectar nuestra ensalada. Son todo semillas ecológicas», indica Joana Gago. Otra usuaria, Amparo Cifre, comenta que «esta tierra está demostrando que es muy generosa con nosotros».\nEtiquetas: agroecología, huertos urbanos


Convocan voluntarios para un programa de acondicionamiento de escuelas en San Martín | Que Pasa Web - Diario digital de Zona Norte\nInicio San Martín Convocan voluntarios para un programa de acondicionamiento de escuelas en San Martín\nConvocan voluntarios para un programa de acondicionamiento de escuelas en San Martín\nEn “Buen Comienzo” se realizan trabajos de limpieza, arreglos y mantenimiento en los establecimientos educativos del distrito, para que los alumnos comiencen las clases en mejores condiciones.\nEn San Martín, comienza la novena edición del Programa Buen Comienzo, la iniciativa solidaria que todos los años convoca a voluntarios y la comunidad educativa para acondicionar las escuelas y jardines públicos de la ciudad.\nEn ese sentido, el 14 y 15 de febrero, de 9 a 17 horas, se realizarán tareas generales de mantenimiento, corte de césped, pintura y limpieza, en patios, aulas, entre otras acciones. Para ser parte, los interesados deberán completar un formulario online. (INGRESAR ACÁ)\nEsta iniciativa se complementa con el programa “Haciendo Escuela”, a través del cual el Municipio realiza obras de mayor envergadura e inversión, como albañilería, electricidad, rampas de accesos para personas con discapacidad, refacciones en aulas, patios, entre otros trabajos.


Necesario ser estricto con normas viales: Mancera | Publimetro México\nNecesario ser estricto con normas viales: Mancera\nEl mandatario capitalino sustuvo que son indispensables para evitar accidentes como el del BMW en Paseo de la Reforma\nEl jefe de Gobierno de la Ciudad de México, Miguel Ángel Mancera, apuntó que es necesario ser estricto con las normas viales para evitar accidentes como el del BMW en Paseo de la Reforma.\n“Los hechos hablan por sí mismos; el evento que acabamos de pasar el fin de semana nos demuestra que no se puede ni combinar el alcohol con el manejo, ni por su puesto, tomar la ciudad como pista de carreras”, indicó el mandatario capitalino en el Antiguo Palacio del Ayuntamiento.\nPor su parte, el presidente nacional de la Cruz Roja, Fernando Suinaga, destacó que el nuevo Reglamento de Tránsito, las fotomultas y el alcoholímetro han sido grandes aciertos que la administración de Mancera ha implementado y que han permitido salvar vidas.\n“De gran relevancia son aquellas medidas preventivas que su administración ha implementado en beneficio de la salud de los habitantes de la Ciudad de México, como por ejemplo: fotomultas, el acoholímetro, las modificaciones al Reglamento de Tránsito. Eso ha permitido que se salven vidas”, resaltó.


Preguntas Frecuentes | Contacto | Acceso Clientes Sex Shop » Categor�as » Limpieza y mantenimiento\nLimpieza y conservaci�n de los juguetes sexuales\nCon la gran variedad de juguetes sexuales disponibles y el gran aumento de nuevos modelos y materiales, saber cual es la mejor forma de cuidar y mantener tus juguetes puede ser un poco confuso. Por eso te damos algunos consejos que te ayudar�n a extender la vida de tus juguetes el mayor tiempo posible cuid�ndolos como se merecen.\nMantenimiento | C�mo limpiarlos | Correcto almacenamiento | Preguntas frecuentes Mantenimiento de los Juguetes Sexuales\nEl mantenimiento implica muchas cosas, pero teniendo en cuenta estos breves pasos y f�ciles de de realizar te garantizamos el mejor rendimiento de tus juguetes, y la experiencia m�s placentera para ti.\nTan pronto como recibas tu nuevo amigo, sigue esta lista al detalle:\n* Inspecciona que el juguete sexual est� libre de imperfecciones en su superficie, pasa la mano sobre el y comprueba que no tenga ninguna arista que pueda resultar molesta.\n* Comprueba que no haya grietas en acr�lico, vidrio, pl�stico o piezas del juguete.\n* Inserta pilas nuevas para asegurarte de que el vibrador funciona correctamente, consulta las instrucciones de los productos para una correcta colocaci�n de las bater�as en caso de que la inserci�n no sea clara, o ponte en contacto con nuestro servicio de asistencia en clientes@clic-sexshop.com.\nSi tienes alguna pregunta acerca del producto, ponte en contacto con clientes@clic-sexshop.com. Si aparece alg�n problema y quieres devolver el producto, puedes hacerlo. Siempre a la mayor brevedad tras detectar la anomal�a. Haz clic aqu� para m�s informaci�n sobre nuestra pol�tica de devoluci�n. Nosotros siempre queremos que est�s satisfecho con tu compra� �En todos los sentidos! Usar el lubricante correcto\nEscoger el correcto lubricante es clave para el mantenimiento de la mejor forma posible de tu juguete, y que hace que cada experiencia sea de lo m�s agradable. Para obtener m�s informaci�n sobre el uso de lubricantes, consulta la secci�n Lubricantes\n�C�mo se usa con juguetes sexuales? Basta recordar estos sencillos consejos:\n* Lubricantes con base acuosa pueden ser utilizados con cualquier juguete sexual.\n* Mientras que los lubricantes de silicona son perfectos para su pareja, un lubricante de silicona no se debe utilizar nunca con juguetes sexuales de silicona, ni debe ser utilizado con cualquier material realistico (Cyberskin, Futurotic, NeoSkin, Fauxskin, Soft Touch, UltraSkin).\n* Nunca utilices un lubricante a base de aceite o vaselina sobre juguetes que entrar�n en contacto con la vagina (puede aumentar el riesgo de infecciones vaginales), o con algo de goma o l�tex, incluidos los condones de l�tex (se desintegrar� el L�tex). Consejos para compartir Juguetes Sexuales\nSi compartes juguetes sexuales con tu pareja o quieres cambiar entre el uso anal y vaginal, incluso contigo mismo, debes limpiar a fondo el juguete para evitar infecciones, y evitar la introducci�n de bacterias en la vagina. La mejor manera de evitar la transmisi�n de bacterias es usar un cond�n para cubrir el juguete durante la penetraci�n, y cambiarlo cada vez que el juguete es utilizado en diferentes orificios. Este m�todo es higi�nico, r�pido, y extiende la vida de tus juguetes protegiendo sus materiales. Correcto almacenamiento de los Juguetes Sexuales\nPor lo menos, aseg�rate de guardar tus juguetes en un lugar fresco y seco y alejado de las mascotas (y ni�os) y protegidos de la suciedad y el polvo. Siempre debes quitar las pilas antes de guardarlos. Cuando sustituir el juguete\nNing�n juguete sexual dura para siempre, y algunos, en funci�n de la frecuencia del uso, pueden durar muy poco tiempo, de modo que �c�mo saber cu�ndo es hora de decir adi�s?\n* Mec�nicamente se vuelve lento o deja de funcionar, incluso despu�s de reemplazar las bater�as. * Grietas visibles en el juguete.\n* Aparici�n de moho, o el material se est� deteriorando.\n* Corrosi�n de las bater�as en el interior del juguete.\nTal como ocurre con el calzado, cuanto m�s utilices un juguete sexual, m�s r�pidamente se gastar�, por lo que es posible que te dure un mes o incluso a�os. �S�lo aseg�rate de reemplazar a tu sensual amigo cuando sea oportuno y no trates de arreglarlo tu mismo.\nLimpieza de tus Juguetes Sexuales\nLa limpieza regular es la clave para mantener la integridad de los materiales de cualquier juguete sexual. Aseg�rate de lavarlo antes de la primera utilizaci�n e inmediatamente despu�s de cada uso antes de guardarlo. Siempre ten cuidado de mantener el agua y el limpiador de los consoladores apartado de la bater�a y las piezas el�ctricas. La forma m�s segura de limpiar la mayor�a de tus juguetes sexuales es utilizar un limpiador anti bacteriano, como el CLEAN 'N' SAFE que encontrar�s en la secci�n de limpieza y conservaci�n. Su formula contiene Nonoxinol-9, que mata todas las bacterias y es compatible con todos los materiales de los juguetes. Basta con pulverizarlo y enjuagarlo a fondo, despu�s secarlo con una toalla seca con toallas de papel o un pa�o suave, (pa�o que no deshilache). Sin embargo, cada juguete posee materiales diferentes y es mejor limpiarlos atendiendo a su composici�n en particular.\nC�mo limpiar los Juguetes Sexuales seg�n su material:\n* La silicona: Material hipoalerg�nico y el m�s f�cil de mantener, los vibradores de silicona pueden ser hervidos durante dos o tres minutos, o lavarlos con agua y jab�n. Nunca hervir los juguetes de silicona si poseen componentes el�ctricos. Finalmente dejar secar por completo al aire o repasar con un trapo libre de pelusa antes de guardarlo.\n* Pl�sticos, acr�lico o vidrio: Todos se pueden lavar con agua tibia y jab�n anti bacteriano y esterilizarlos con un algod�n empapado en alcohol (enjuagar minuciosamente despu�s). Los juguetes de acr�lico o vidrio pueden ser hervidos o sumergidos en agua caliente si no poseen componentes el�ctricos.\n* Caucho, l�tex o Gelatina: Estos productos son extremadamente porosos, por lo que debes asegurarte de lavar a fondo con agua caliente y jab�n anti bacteriano, y enjuagar bien para que no quede ning�n resto de jab�n, ya que puede degradar el material y causarte irritaci�n. Siempre es una buena idea usar un cond�n con cualquier juguete que sea para insertar, pero m�s a�n si se trata de alguno de estos materiales.\n* Real�sticos: Incluidos CyberskinTM, FuturoticTM, NeoSkin �, Soft TouchTM, UltraSkin, y FauxskinTM. Si no est�s seguro del tipo de material, verifica la p�gina del producto o el envoltorio, o ponte en contacto con nuestro Servicio de Atenci�n al Cliente en clientes@clic-sexshop.com. Lavar bien con agua c�lida (no caliente) y un jab�n l�quido anti bacterias, y luego dejar secar al aire por completo. Una vez seco, espolvorear con el talco que normalmente viene incluido con su juguete o con almid�n de ma�z. Nunca uses polvos de talco o polvo de beb�, ya que estos pueden causar irritaci�n (talco puro bien, pero es muy dif�cil de encontrar).\nDado que los juguetes sexuales no s�lo tocan tu piel, sino que adem�s tocan mucosas y partes muy sensibles de tu cuerpo es muy importante saber si tienes alguna alergia o sensibilidad a ciertos materiales antes de utilizarlos. Subir\nCorrecto almacenamiento de los Juguetes sexuales\nC�mo guardas los juguetes sexuales es tan importante como su limpieza, a continuaci�n te presentamos unos breves consejos para que prolongues la vida de tus juguetes:\n* Siempre quita las pilas cuando hayas terminado de usar cualquier juguete por si se queda encendido regulado al m�nimo y no te des cuenta, tambi�n para evitar que las pilas se deterioren en su interior.\n* Aseg�rate de que tus juguetes est�n completamente secos antes de su almacenamiento para prevenir el moho.\n* Mant�n cada tema por separado envolvi�ndolo en un pa�o suave (camisetas o calcetines van bien), debido a que algunos materiales no son compatibles entre s� y pueden causar decoloraci�n o pegarse entre ellos. Si las balas de vibraci�n son removibles almac�nalas por separado de sus respectivos juguetes tambi�n.\n* La luz solar directa y el exceso de calor puede producir graves da�os en los juguetes, decolorarlos, o resecarlos, por lo que almacenarlos en un lugar fresco y oscuro ser� una buena idea. El fr�o extremo tambi�n puede hacerles da�o no si son de acr�lico, vidrio, o de silicona, y no s�lo si son operados por pilas, de modo que nunca refrigerar o congelar materiales blandos o preservativos.\n* Siempre limpia tus juguetes sexuales antes de ponerlos de nuevo en su lugar de almacenamiento y siempre antes de volver a usarlos. Subir\nPreguntas frecuentes sobre el cuidado y la limpieza de los Juguetes Sexuales\n* "Yo no s� de que material est� hecho mi juguete. �C�mo lo limpio?"\nSi ya no tienes el embalaje del juguete, no se puede estar seguro de qu� material est� hecho, por lo que habr�s de usar agua tibia y un jab�n suave. Dejar secar al aire.\n* "Si mi vibrador es resistente al agua, �se puede lavar en el lavaplatos?"\nS�lo los vibradores de silicona que no funcionen con bater�as se pueden lavar en el lavaplatos o hervirlos. No sumerjas ning�n juguete que tenga pilas o sea el�ctrico.\n* "Tengo la piel muy sensible, as� que no puedo usar jabones anti bacterianos o limpiadores, �qu� debo hacer para limpiar mis juguetes?"\nLo mejor para ti seria que uses solamente juguetes de silicona, que son hipoalerg�nicos. En caso de que no utilicen bater�as, pueden ser hervidos en agua para limpiarlos y esterilizarlos, por lo que no es necesario uso de jab�n.\n* "Yo s�lo tengo una pareja, mi marido. �Por qu� la necesidad de utilizar preservativos con nuestros juguetes sexuales?"\nCaucho, l�tex, gelatina, y la mayor�a de los materiales realistas son porosos y dif�ciles de limpiar a fondo, de manera que usando un cond�n, alargar�s la vida �til del producto. Adem�s, el cond�n te mantendr� a salvo de las bacterias si el juguete es intercambiado entre el ano y la vagina. Una ventaja a�adida es el uso de un cond�n lubricado, por lo que no ser� necesario lubricante adicional. Subir\nOtros temas sobre sexualidad: Anillos para el pene, Bolas chinas, Fantas�as sexuales, Lubricantes.


PressReader - Clarín - Clasificados: 2016-08-16 - “Edificio Live” en Av. Independencia 1330 cerca de todo, gran calidad constructiva a su alcance\n“Edificio Live” en Av. Independencia 1330 cerca de todo, gran calidad constructiva a su alcance\nClarín - Clasificados - 2016-08-16 - TAPA -\nDAVO Propiedades presenta un nuevo edificio ubicado en pleno centro porteño, sobre Av. Independencia 1330, entre San José y Santiago del Estero. Próximo a la Av. 9 de Julio, Metrobús, subtes y autopista 25 de Mayo, su ubicación constituye un punto de inmejorable accesibilidad. A metros de Universidades y de San Telmo, barrio en permanente expansión turística y cultural.\nEl desarrollo de la obra, en avanzada etapa de construcción, está a cargo de los arquitectos Vicente Aguirre y Jaime Emilio Andrés, profesionales con amplia experiencia en edificios en altura. La posesión está prevista para Octubre de este año.\nEl edificio cuenta con 14 pisos con todos los servicios en un mismo lugar: Piscina con Deck Solárium, Gimnasio con aparatos aeróbicos, S.U.M. con vista panorámica, y Laundry.\nSe prevé el control de ingreso desde cabina de seguridad y monitoreo por circuito cerrado de TV en espacios comunes. Dispone de cocheras fijas opcionales.\nLas unidades fueron diseñadas a partir de un concepto que logra captar la mayor cantidad de luz y vista abierta. Es una propuesta de vivienda moderna que además posibilita el uso profesional.\nLas plantas del 2° al 10° piso incluyen departamentos Apto Profesional de 1, 2 y 3 ambientes de 39 a 80 m2. En los pisos superiores, del 10° al 14°, se desarrollan unidades de hasta 216 m2, con una planta flexible ideal para uso profesional u oficinas.\nSe destacan las excelentes terminaciones: Fachada alternando balcones en aluminio natural con vidrio laminado de seguridad “Cool Lite”, dos ascensores automáticos de alta velocidad; agua caliente central por caldera; muros y cielorrasos revestidos en yeso; carpintería exterior en PVC con doble vidrio de seguridad y cámara de aire, cocina con mesada de granito, muebles altos y bajos; anafe; gri- fería de primera marca línea “Fly”; pisos de porcelanato; conexión de cable, telefonía y datos en todos los sectores.\nTodas las unidades equipadas con aire acondicionado “VRF Heat Recovery” de última generación y bajo consumo energético.\nEdificio Live, es un proyecto pensado para las exigencias del mundo actual, en el centro de la ciudad y con todos los accesos a su alcance.\nVisite nuestras unidades decoradas en obra.


Cinco detenidos y un guardia civil herido en las protestas mineras y del transporte en Asturias - 20minutos.es\nTodos los servicios El fiscal pide el archivo de la demanda contra Teddy Bautista por un...\nDaniel Montero: "Son las clases medias quienes aportan el 70% del...\nCinco detenidos y un guardia civil herido en las protestas mineras y del transporte en Asturias\nUno de los compa�eros de los ocho mineros que iniciaron un encierro el pasado d�a 21 en el pozo de carb�n de Santa Cruz del Sil (Le�n). (EFE/Ana F. Barredo)\nOctava jornada de huelga general en toda Espa�a en el sector de la miner�a del carb�n por los recortes del Gobierno; varios mineros mantienen encierros.\nEn Asturias se ha sumado el transporte por carretera y de viajeros.\nLos mineros aragoneses han bloqueado el suministro de carb�n de importaci�n a la Central t�rmica de Andorra.\nAGENCIAS. 04.06.2012 - 14:20h\nCinco personas sido detenidas por des�rdenes p�blicos y un guardia civil ha resultado herido de consideraci�n como consecuencia de las protestas que desde primera hora se registran en Asturias, donde coinciden las huelgas generales de la miner�a del carb�n y del transporte por carretera. Los trabajadores de la miner�a del carb�n han retomado este lunes sus movilizaciones contra los recortes del Gobierno en el sector sumando su octava jornada de huelga indefinida.� Adem�s, en Asturias se ha sumado a este paro la reivindicaci�n del transporte por carretera, que ha decidido tambi�n paralizar su actividad por las discrepancias entre patronal y sindicatos por el convenio colectivo. El seguimiento del paro indefinido en el transporte asturiano ha sido desde primera hora "masivo", seg�n los sindicatos convocantes, UGT y CCOO, mientras que la Asociaci�n de Empresarios del Transporte de Asturias (Asetra) sostiene que la actividad se desarrolla con "total normalidad" y "sin incidentes".\nCasi 8.000 trabajadores del transporte de mercanc�as y viajeros, as� como de garajes y aparcamientos est�n afectados por el paro tras la falta de acuerdo sobre el convenio colectivo entre ambos sindicatos y las cinco organizaciones que conforman la patronal en la regi�n, Car, Astra y Asvipymet, pertenecientes al sector de viajeros, y Asetra y Cesintra, de mercanc�as. La primera jornada de la convocatoria mantiene paralizado el 90% del sector del transporte por carretera en la regi�n, ha dicho el secretario de Carretera de UGT en el Principado, Jos� Francisco Bra�a. En cuanto al transporte de viajeros, Manolo Garc�a, secretario de Carretera de CC OO, ha equiparado la situaci�n del transporte urbano en las tres principales ciudades asturianas, Oviedo, Gij�n y Avil�s, en las que ha se�alado que existen "servicios m�nimos", al igual que en el transporte que comunica estas localidades con el aeropuerto de Asturias.\nParo total en la miner�a\nEn cuanto a las protestas mineras, el Principado ha amanecido con cortes de tr�fico en autov�as, entre ellas la A-66, a la altura de Campomanes, que mantiene interrumpido la circulaci�n en ambos sentidos entre Asturias y Le�n. Ha sido precisamente all� donde han sido detenidas dos personas; las otras tres, han sido arrestadas en esta misma v�a a la altura de Soto de Ribera, en Vegalencia, informa la Guardia Civil. Tambi�n ha sido interrumpido el paso vial en otras carreteras alternativas como la N-630, en la que un �rbol atravesaba la calzada en el kil�metro 79, en las proximidades de Campomanes. Otro de los puntos en los que los piquetes mineros han interrumpido la circulaci�n se encuentra en el tramo de autov�a entre Oviedo y Mieres, en las proximidades de Olloniego, en las conocidas como "curvas de Borrel". Adem�s, la comunicaci�n con el occidente de la regi�n ha quedado suspendido en la A-63, a la altura de Vega de Anzo, en el municipio de Grado. Bloqueo en Andorra\nEn la miner�a del carb�n el paro es total en la regi�n, seg�n han confirmado fuentes sindicales en relaci�n al seguimiento que cifran en el 100%, tanto en los pozos mineros de la empresa p�blica Hunosa como en los de las tres empresas privadas del sudoccidente de la regi�n (Carbonar, Uminsa y Coto Minero Cant�brico). Adem�s, prosigue en los pozos Cand�n y Santiago el encierro que desde hace una semana mantienen diez mineros, cinco en cada uno de ellos. Otros ocho mineros permanecen desde hace dos semanas en el pozo de Santa Cruz del Sil, en Le�n.Por su parte, los mineros aragoneses han bloqueado el suministro de carb�n de importaci�n a la Central t�rmica de Andorra, despu�s de mantener cortada la v�a del tren cerca de las instalaciones de la el�ctrica Endesa. M�s de un centenar de mineros han cortado por la ma�ana la v�a con bloques de hormig�n, impidiendo la llegada del tren procedente de Tarragona. Con este corte, que se ha producido sin incidentes, arranca una nueva semana de movilizaciones por los recortes del Gobierno central al sector.\nD�as y d�as de protestas contra los recortes en la miner�a (08/07/12)La protesta de los mineros bloquea carreteras y l�neas de ferrocarril en Le�n y Asturias (07/06/12)Los mineros recrudecen sus protestas con m�s de 60 cortes de carreteras (06/06/12)Medio millar de mineros cortan el acceso al puerto de Gij�n durante la novena jornada de huelga (05/06/12)Cientos de personas apoyan a los mineros encerrados en los pozos asturianos (09/06/12)\nASTURIAS roja, 04.06.2012 - 12.00h\nnuestra lucha es JUSTA y necesaria\nCon FUERZA hasta la victoria\nDavid.CaleroMota, 04.06.2012 - 12.12h\nno teneis nada que contestar " criticones", con este silencio me demostrais la credibilidad de vuestros argumentos absurdos sin argumentos.\nDavid.CaleroMota, 04.06.2012 - 12.15h\nsolo votarme en negativo ¿esos son vuestros argumentos, venga hablamos de robos de subvenciones injustas, y en definitiva de perder dinero o no cobrarlo cuando se debe, que hacemos con los chinos por que todos los chinos en este pais no pagan impuestos en su puta vida abren un negocio durante 5 años y luego lo cierra y abren el mismo con otro nombre u otro titular, venga que hacemos con esos que estan durante 5 años ganando y no pagan ni un solo euro de impuesto..., haber que hay que hacer no quereis hablar de injusticias hablemos de ellas...\nDavid.CaleroMota, 04.06.2012 - 12.19h\nme lo suponia que me quedaria solo... eso demustra los argumentos que teneis, solo una cosa antes de criticar a gente honrrada y trabajadora acordaos de este momento que os abeis quedao callados como putas, y nadie a tenido cojones a responderme ni a discutir conmigo al reves, lo unico votar mi comentario en negativo..\nEn fin... que solo os gusta criticar por criticar y punto.\nDavid.CaleroMota, 04.06.2012 - 12.22h\nclaro cierto y supongo que tambien sabras lo siguiente ya que te veo tan listo, empezamos supongo que sabras que en españa solo en españa a cualquier empresa española sea mineria o lo que sea solo se permite utilizar el 20 % de sus recursos el resto lo tiene que comprar de fuera,¿por que? solo el 20 % y el resto no se puede usar, no te quejes y quizas esto de de una respuesta a tus "absurdas subvenciones", y otra cosa no me has respondido que hacemos con los chinos o que pasa cuando te interesa te haces el tonto.\nDavid.CaleroMota, 04.06.2012 - 12.25h\nvenga "doctor soluciones" ya que eres muy listo como la mayoria de los españoles, que hay que hacer con esta calaña de los chinos...\ny te digo no sea que te lo creas listo no es lo mismo que ser inteligente, es todo lo contrario pero bueno si eres capaz de entender esto ultimo me sorprenderia bastante..\nPapi Gruero, 04.06.2012 - 12.27h\nA ver, por favor, deja de darle patadas al diccionario que tienes mas faltas que palabras, que nos hemos gastado un montón de dinero en darte una educación.\nSADHU, 04.06.2012 - 12.28h\nSALUD Y REPUBLICA....y SUBVENCIÖN\nEstrellaRoja, 04.06.2012 - 12.30h\nEntonces consideras a Estados Unidos tercermundista?? Porque alli siguen quemando carbon y tienen muchas centrales térmicas.....\nDavid.CaleroMota, 04.06.2012 - 12.32h\ny otra vez mas, esquivas mi pregunta de los IMPUESTOS DE LOS XINOS y si se que se escriben chinos pero yo lo escribo xinos, vamos que eres mas ignorante que yo, y estoy seguro que tu tb te aces llamar "indignado" jajaja.\nSabes que por eso me alegro de la situacion de este pais, me alegra que roben a España, que Europa nos asfisie, que alemania nos exiga que haya cada vez mas paro, que la gente pase hambre, me encantan este tipo de noticas por que es lo unico que pide la gente a gritos, en lugar de defender lo suyo a muerte, no defiende a los de fuera que luego a esos españa les importa una mierda.\nPues por todo eso me alegra como esta este pais y espero que vaya a peor y que la gente pase hambre y con mucha suerte si alguno se suicida perfecto un tonto de el culo menos que hay en españa.


VIDEO | Calificación de los jugadores colombianos en Boca Juniors VS River Plate por la final de copa Libertadores 2018 (Wilmar Barrios, Sebastián Villa, Edwin Cardona, Juan Fernando Quintero, Rafael Santos Borré)\nVideo: Resumen de los colombianos en Boca Juniors VS River Plate por la final de Copa Libertadores 2018\nDe los 5 'embajadores tricolores' que pudieron estar en cancha, 3 fueron titulares, otro entró al final y el restante ni siquiera fue al banco.\nDomingo 11 de noviembre de 2018, a las 19:08\nMás allá del apasionante e intenso empate 2 por 2 de los clubes históricos de Argentina en esta serie definitiva. Evaluamos lo que pasó con los jugadores colombianos en Boca Juniors VS River Plate por la final de ida de Copa Libertadores 2018 que se jugó en La Bombonera.\nAunque el partido mostró y reflejó que los técnicos eligieron bien a los titulares, un poco de fútbol pudieron haber aportado los volantes creativos colombianos que están en cada plantilla. Sobre todo Edwin Cardona que ni siquiera tuvo opción de ir al banquillo con los suplentes 'xenezies', mientras que faltó un poco más de tiempo para Juan Fernando Quintero en el 'millonario'.\n¡Es la 'Filial Teófilo Gutiérrez de River Plate'! Así vivieron en la barra de River Plate de Barranquilla la final con Boca Juniors\nMuchos los critican, pero son del 'millonario'\nVideo > https://t.co/Cyv1gymTII pic.twitter.com/VXweo73NIa\nAsí le fue a los colombianos en Boca Juniors VS River Plate por la final de Copa Libertadores 2018:\n* Wilmar Barrios (Boca Juniors)\nVolvió a ser titular y cumplió con el del trabajo silencioso en el medio campo para recuperar y controlar a los rivales, pero en cierto momentos volvió a estar solo en la labor de enfrentar a los volantes rivales y no siempre pudo corregir lo que sus compañeros no hacían.\nEn diferentes choques y confrontaciones con los rivales tuvo que mostrar su personalidad y no se escondió en los 90 minutos.\nQuedate con quien te mire como Barrios mira a Casco #CopaLibertadores2018 #CopaLibertadores #Boca #River pic.twitter.com/uBRFPfnOdm\n— Brayan Stiven Oviedo (@UnIdiottaMas) November 11, 2018\n* Sebastián Villa (Boca Juniors)\nTambién fue titular en la intención de buscar los ataques y transiciones rápidas por los costados, ya que en el otro costado siempre contó con la compañía de Christian Pavón. El colombiano tuvo imprecisiones entregando el balón, pero en el momento de encarar y jugar con velocidad cumplió.\nFue el autor del tiro libre que terminó siendo asistencia para el segundo gol de su equipo, obra de Darío Benedetto, sobre el final del primer tiempo. Sin embargo la lesión de Pavón llevó a que lo volcaran por la izquierda y perdió completo protagonismo a tal punto que en el complemento lo sustituyeron porque no pesó más su velocidad.\n* Edwin Cardona (Boca Juniors)\nNi siquiera fue el banco, estuvo en duda hasta el último momento su opción de estar como opción para el técnico Guillermo Barros Schelotto, pero finalmente salió del grupo de convocados y a Boca le hizo falta un poco de fútbol en el complemento y él pudo habérselo aportado. Por eso lo destacamos en este balance de colombianos en Boca Juniors VS River Plate por la final de ida.\n* Rafael Santos Borré (River Plate)\nFue titular y luchó siempre con los defensas rivales, hizo el trabajo de presión y desgaste que siempre le ha pedido Marcelo Gallardo y a pesar de estar lejos del área, siempre tuvo oportunidades. Pwro falló en 3 momentos importantes y todos terminaron con consecuencias.\nCuando el partido iba 1 por 1 definió con borde externo un mano a mano con el portero 'xeneize' y el balón se fue por el lado. Además tuvo responsabilidad en el segundo gol de Boca porque perdió la marca de Benedetto y él fue el que cabeceó para el 2 or 1 parcial.\n¡PARA QUÉ TE TRAJE BORRÉ!#LibertadoresxFOX | El delantero colombiano quedó mano a mano con Rossi y definió de mala manera. pic.twitter.com/MMNe2eHUSc\nPero lo más grave fue lo que hizo con una infracción que terminó con amarilla y acumuló la tercera en la competencia que le acarrea suspensión para el juego definitivo en El Monumental. Pero en esa misma acción por protestar casi deja a su equipo con 10 hombres porque el juez lo advirtió y no le quiso mostrar la segunda.\n* Juan Fernando Quintero (River Plate)\nFue suplente, ingresó en el minuto 77 por Gonzalo Martínez y tuvo un par de participaciones en las que buscó a los delanteros, pero no tuvo el tiempo suficiente en el campo para ser influyente o realmente pesar en el partido. Poco se puede decir ya que en el final del encuentro el dominio del balón fue alterno y no pudo manejar el tiempo como hubiera querido o se espera de él.\n¡LO TUVO PRATTO!#LibertadoresxFOX | El delantero de #RiverxFOX intentó con un taco tras el centro de Casco pero la pelota se fue lejos. pic.twitter.com/zDTEpVzAXS\nEs claro que para bien y para mal, el protagonismo y la participación de los colombianos en Boca Juniors VS River Plate por la final de Copa Libertadores 2018, dejó a Barrios en el punto más alto, a Villa en uno intermedio, a Santos Borré en lo negativo y Quintero simplemente no tuvo tiempo para evaluarlo de forma adecuada.\n¡Increíble jugada perdió Santos Borré y buena asistencia de Villa!¿Pesará la ausencia del colombiano para la vuelta?


Cambio talento por gasolina – Yorokobu\n8 de octubre 2014 / CREATIVIDAD por Jaled Abdelrahim\nCuando a Jonay Sosa, un copy creativo canario que llevaba trabajando siete años en una agencia publicitaria en Madrid, le rescindieron sendos contratos la novia y el jefe, entendió que «el Monopoly de la vida» le había mandado «a la casilla de salida». Otra vez a empezar.\nLos elementos con los que contaba para reestructurar su nuevo yo eran una «moto, sus muebles, su ropa y una vieja furgoneta Volkswagen California». «Pensemos», pensó, que es lo suyo. Si vendía la moto y los muebles le daría para dejar a punto su vieja California, que costaba un pico. La ropa de los armarios iría en donación porque hacía falta soltar lastre para su nuevo proyecto. Ideas For Fuel es su propia oficina-furgoneta itinerante con la que trabaja para agencias de toda Europa ofreciendo sus servicios como creativo. Precio: 10 litros la hora.\n«Empecé hace cuatro meses, y por el momento ya llevo 8.000 kilómetros, ochos países y diez agencias recorridas», cuantifica los números de su empresa rodante.\n«Siempre quise trabajar en el extranjero, pero siendo español es más difícil porque en general no tenemos el inglés perfecto, así que nunca lo hice. Y ahora, de esta forma, estoy trabajando por todo el continente, en las agencias que más me gustan, y como hago estancias cortas, no tengo tiempo de cansarme de ningún proyecto; hago la parte creativa más bonita de la publicidad y me olvido de los problemas de siempre en la oficina, de discutir con los clientes…».\nCuenta que de este modo esas inaccesibles agencias extranjeras «no tienen problema en trabajar contigo porque saben que no tienen que hacer un contrato a largo plazo, sino que te quedarás por muy poco tiempo, y que traes ideas frescas y distintas a las que tienen sus equipos».\nAtaviado con un buen abrigo, porque hoy le ha tocado trabajar en Estocolmo, y con las escaleras en las que está sentado de fondo, explica por skype cómo funciona su nuevo trabajo non-stop. El método es ponerse en contacto con sus agencias preferidas dos o tres semanas antes de ir en su busca. Asegura que para lo suyo, que va de tener imaginación, su nuevo régimen de obra y servicio a domicilio y extrafronterizo es lo primero que llama la atención a más de una de las empresas. «Y siempre están abiertas a prestarte ellas mismas un aparcamiento».\nGracias a la iniciativa ha trabajado para algunas conocidas como KesselsKramer en Ámsterdam, Jung von Matt en Estocolmo y para una decena más de ellas en urbes como París, Madrid, Lovaina, Ámsterdam, Hamburgo, Copenhague u Oslo. «Y todos los sitios que quedan por el medio más los amigos que he ido a visitar», suma a los haberes personales.\nAdemás, entre ruta y ruta, se ha sacado un proyecto personal en Instagram llamado Esquinas del mundo en las que te esperaría en el que retrata poemas propios en el marco de entornos que le entraron de flechazo por la retina. «Me gusta el arte urbano, pero lo mío es pensar frases, escribir, nunca se me dieron bien los sprays, así que pensé que dejar ahí esos poemas sería mi forma de hacer arte callejero. Y para que perviviesen, los juntaría en un libro de poesías en Instagram».\nPoco a poco se va desentendiendo del concepto viaje. «No sé cuando volveré», esgrime. Dice que quizás en navidades pasee la oficina por España para ver a los suyos y luego nueva ruta camino al trabajo, que podría ser en cualquier lado.\n«No se cobra mucho; en cada lugar pido por la hora de trabajo el precio de 10 litros de gasolina, a veces un poco más si el país está demasiado caro. Pero ahora que no tengo ni hipoteca ni ningún otro gasto más que la gasolina y la comida, me da de sobra. Aún no he necesitado echar mano nunca de los ahorros». «Como consejo a los compañeros de gremio que estén hartos y se estén pensando alguna aventura así, es que sí: se puede vivir de ser publicista nómada».


Caso 1 – EREA Consulting\nWe are a team of TOP professionals helping Retailers design and implement their business strategies across the Americas.\nErea en números\nLa Fórmula EREA\nOptimización de La Gestión Retail\nEREA´s digital transformation\nLa Plataforma EREA Retail\nInternal use module\nEREA Consulting → Caso 1\nCliente se vuelve el supermercado más exitoso de Centro-América, en competencia directa con Wal-Mart\nSegundo jugador del país en el sector de Supermercado, con una participación del 20% del canal. El líder del país es Wal-mart con una participación de mercado que supera el 50%\nHasta 2013, la cadena registró fuertes crecimientos debidos principalmente a una gestión no óptima en la competencia, que cometió muchos errores, primero tras la compra de Carhco por parte de Wal-Mart y posteriormente tras la compra por parte de Walmex. Sin embargo, a partir de 2013 la estrategia EDLP y la agresividad en la apertura de tiendas impulsan un fuerte crecimiento de Walmex en Centroamérica. El crecimiento de la empresa se ralentiza, el EBITDA se estanca y el CEO de nuestro cliente ve el inicio de una etapa mucho más difícil, por lo que contrata los servicios de EREA\nReformular la estrategia de la compañía para adaptarla a los cambios en el mercado. Poner en marcha un plan que permita mantener y superar los niveles de crecimiento en ventas de los años anteriores (C.A.G.R. entorno al 15%). Mejorar progresivamente el EBITDA hasta llevarlo a niveles de doble dígito en el 2020\nEl proyecto se inició con una renegociación de las condiciones comerciales con los proveedores y la elaboración de un plan estratégico que incluía distintos proyectos para los próximos años (planes para mejorar el crecimiento orgánico, planes de expansión y desarrollo de nuevos formatos, restructuración organizativa, cadena de suministro, etc..). Se trabajó la estructura organizativa y se crearon nuevos departamentos. Se cambió el mensaje mercadológico y el posicionamiento estratégico. Se mejoró el marketing mix completo y se potenció el merchandising en las tiendas. Se elaboraron presupuestos detallados y se empataron con una batería de objetivos con remuneración variable para los ejecutivos de primera y segunda línea. Se hizo una reingeniería de los principales procesos y se trabajó fuertemente sobre el capital humano en todas sus líneas\nSomos un equipo de profesionales expertos en la Gestión Estratégica de Retail a nivel Latinoamericano. Asesoramos a nuestros clientes en el diseño e implementación de estrategias innovadoras de negocio. Desde nuestro HUB de analytics avanzados para la industria de Retail, aceleramos los procesos de toma de decisión.\nNuestros clientes son Retailers\nSisense: Erea Quadruples Data Revenue for Retailers with Sisense\nForbes US: Why Brick and Mortar Retailers Need E-Commerce-Style Data Tracking Methods\n+1 (954) 464-6438


EE.UU. asegura que tiene "derecho" a ubicar sus embajadas - La verdad oculta\nInicio » sociedad » EE.UU. asegura que tiene "derecho" a ubicar sus embajadas\nEE.UU. asegura que tiene "derecho" a ubicar sus embajadas\n"EE.UU. no va a mantenerse al margen cuando Israel sea injustamente atacado en las Naciones Unidas" dijo Haley. | Foto: @nikkihaley\nNikki Haley hizo esta declaración tras el anuncio de Donald Trump de trasladar la embajada de Tel Aviv a Jerusalén.\nLa representante de Estados Unidos ante la Organización de Naciones Unidas, Nikki Haley, dijo este domingo que el Gobierno de ese país tiene "derecho a hacer lo que queramos en términos de la ubicación de nuestras embajadas".\nLa declaración la realizó tras el anuncio de Donald Trump de trasladar la embajada de Tel Aviv a Jerusalén. Durante la reunión del Consejo de Seguridad, Haley aseguró que es necesaria que toda la comunidad internacional comprenda que "cuando se 'intimida' a Israel, no se está ayudando al proceso de paz".\n— Nikki Haley (@nikkihaley) 8 de diciembre de 2017\nLa embajadora había emitido un discurso en la sesión de emergencia del Consejo de Seguridad de la ONU, que condenó unánimemente la decisión de Trump.\nLa diplomática sostuvo que "EE.UU. no va a mantenerse al margen cuando Israel sea 'injustamente' atacado en las Naciones Unidas" y pidió a los "países que carecen de cualquier credibilidad a la hora de tratar tanto los israelíes como los palestinos" abstenerse de darle lecciones a Washington.


Plata quiere que el Bellas Artes acoja muestras del Prado - La Opinión de Málaga\nPlata quiere que el Bellas Artes acoja muestras del Prado\nEl PP defendió en la campaña que el Bellas Artes se convirtiera en una subsede del museo madrileño\nEl consejero de Cultura, Paulino Plata, anunció ayer en Sevilla la intención de su departamento de que el futuro Museo de Bellas Artes, una vez reabierto, sea una de las sedes para itinerar alguna de las exposiciones que realiza el Museo del Prado dentro de su programa El Prado Itinerante que viaja por otros museo del país.\nPlata adelantó que el que el Bellas Artes entre en ese programa «va a permitir ofrecer una serie de exposiciones temporales para dar vitalidad a este museo, así como a otras instituciones culturales».\nSe trataría, según adelantó el consejero, de exposiciones de «gran valor y altísimo nivel» tales como El bodegón español en el Prado, Del Greco a Sorolla o El paisaje nórdico en el Prado.\nEl consejero hizo este adelanto en Sevilla, donde anunció que ya existe un acuerdo cerrado para que el Museo de Bellas Artes de esta ciudad reciba algunas de estas exposiciones y añadió que esta iniciativa entra dentro de la línea de colaboración que mantiene el Prado con otras instituciones, que siempre es plausible, pero que ahora es muy necesaria.\nLa iniciativa para incluir a Málaga en el proyecto de El Prado Itinerante es distinta a la que presentaron los responsables del PP en Málaga durante la campaña electoral a las elecciones autonómicas.\nEn concreto, la iniciativa que defendían desde el PP era la de convertir al Bellas Artes en una especia de franquicia del Prado y lograr que aumenten los fondos que el museo madrileño tiene cedidos al de Málaga. Esta idea tendría que ser discutida y aprobada por la Fundación que rige los destinos del Prado.\nPor contra, el proyecto de la Junta de Andalucía es que el museo de Bellas Artes de Málaga pueda acoger una o varias de las exposiciones que el Prado va llevando de manera itinerante por otras pinacotecas españolas, lo que también debe ser acordado con la dirección del Prado.\nTanto una como otra alternativa están en todo caso a la espera de que el edificio de la Aduana termine sus las obras de rehabilitación para acoger el museo de Bellas Artes y el Arqueológico. Los trabajos deberán terminar para junio y después debe completarse con el proyecto museístico.


Junín: dio positivo de Covid-19 y el hospital le negó atención por falta de camas\nPartido Obrero Junín\nUna joven de 19 años, contagiada de coronavirus, fue rechazada en la tarde de este miércoles por el Hospital Interzonal General de Agudos “Dr. Abraham Piñeyro” (Higa) de Junín (Provincia de Buenos Aires) por falta de camas.\nLa mujer es la hermana de uno de los cuatro casos positivos que hasta hoy contabiliza la ciudad. Hay en total 62 personas en aislamiento preventivo, pero internados en el hospital solo cuatro casos sospechosos y un paciente confirmado.\nAnte el escándalo que generó la noticia en la ciudad, el intendente Pablo Petrecca (Juntos por el Cambio) debió derivarla a una clínica privada.\nLa salud pública en bancarrota\nA fines de marzo, las autoridades del Higa habían anunciado el armado, por parte del Ejército Nacional, de una carpa sanitaria con capacidad para recibir hasta 100 pacientes infectados, inaugurada con bombos y platillos por funcionarios provinciales del Frente de Todos.\nSin embargo, ante este nuevo caso positivo, la directora y el director ejecutivo del centro de salud, Cristina Tejo y Sebastián Meneses, enviaron un fax a la Secretaría de Salud explicando que no contaban con camas de aislamiento y solicitando que sea trasladada a otra institución. El comunicado que dio a conocer el hospital es igual de lamentable: “el martes por la noche, una joven con síntomas del coronavirus arribó al Hospital en un momento donde no estaban las condiciones dadas para garantizar un aislamiento eficiente. Esa falta de garantía estuvo relacionada a la capacidad operativa del Hospital y a una situación dinámica que se modifica por la rotación de camas que se liberan ante resultados negativos de Covid-19 y ante el alta médica de pacientes con otras patologías”\nLuego de 80 días de cuarentena y “picos” que no terminan de llegar, el hospital se satura con unos pocos casos, dejando al desnudo el vaciamiento al que los distintos gobiernos han condenado al sistema de salud público, desfinanciándolo año a año. No solo por la falta de camas e insumos sino, como lo deja entrever el propio comunicado del instituto y lo denuncian semana a semana los propios profesionales de la salud en las marchas y caravanas que se realizan en Junín, por ausencia de profesionales y de condiciones dignas de trabajo (polifunción, gran retraso en las paritarias, no pago del bono de 5 mil pesos que el gobierno anunciara en abril, elementos de protección insuficientes)\nQue Petrecca y Kicillof se hagan cargo\nAnte la aparición esta semana de los mencionados cuatro casos positivos, Petrecca intentó mostrarse activo y preocupado por la salud de la población. Pero lo cierto es que las partidas extraordinarias para el área de Salud no aparecen; de hecho, el lunes dijo en una entrevista que si el municipio no se endeuda, no puede pagar los salarios estatales de junio. Tampoco conocemos a ciencia exacta el número de camas con respiradores o de kits sanitarios, ni la totalidad de profesionales disponibles de terapia intensiva. Al ser un hospital provincial, el intendente delega la responsabilidad en el gobernador Axel Kicillof -más preocupado, en pleno contagio masivo y con récord de casos en la provincia, en arreglar con los organismos internacionales el pago de la deuda externa.\nNecesitamos que el municipio abra los libros. Que se destinen partidas extraordinarias al área de Salud, sobre la base de impuestos progresivos al gran capital y al agro, que en Junín están a todo vapor. Los médicos y enfermeros deben contar con todos los elementos de protección adecuados. Por la reapertura de paritarias sin techo, que permitan un salario igual al costo de la canasta básica. Es urgente la centralización del sistema de salud bajo control de los trabajadores.\n9 y 10 de junio: las jornadas nacionales de lucha por la salud pública en Córdoba


Comprar Sumarroca Brut Rosé 2016 | Precio y Opiniones en Uvinum\n47,50€ + 4,95€ Envío (3 - 5 dias)\nSumarroca ha elaborado este Sumarroca Brut Rosé 2016 (9,50€), un vino espumoso de Cava a base de pinot noir de 2016. Según los usuarios de Uvinum, es un espumoso que merece una valoración de 5 puntos sobre 5.\nFicha técnica · Sumarroca Brut Rosé\nSi te gustó Sumarroca Brut Rosé 2016, también te gustarán...\nSumarroca Brut Rosé 2016 (Pinot Noir)\nVista: rosa pálido y capa media.\nNariz: intenso, elegante, aromas frutales de fruta roja, fresas y aromas florales.\nBoca: sabor afrutado, untuoso y delicado.\nVIÑEDO: Nombre: Finca Sumarroca. Suelos pobres, calcáreos y con presencia de gravas. La influencia del mar queda disminuida por el efecto del macizo del Garraf, que seca la brisa marina, mientras que la cordillera Prelitoral reduce el exceso de viento seco procedente del interior del país.\nENVEJECIMIENTO: crianza en rima alrededor de 14 meses.\nELABORACIÓN: maceración en prensa a baja temperatura para extraer el máximo color y personalidad de la uva. Fermentación en tanques de acero inoxidable a 16º C.\nVer todas las añadas de cava Sumarroca Brut Rosé\nOpinión destacada sobre Sumarroca Brut Rosé 2016\nPublicado el 03/01/20 a las 08.57\nMás opiniones sobre Sumarroca Brut Rosé 2016\nSumarroca Brut Rosé 2016 estuvo de maravilla\nOpiniones sobre Sumarroca Brut Rosé 2012\nFui al Sumarroca con unos compañeros de trabajo y lo descubrimos allí.\nPresenta un color muy bonito. Emanan aromas dulces de levadura y panadería. El Sumarroca tenía un gusto tostado de madera.\nTambién puedes comprar Sumarroca Brut Rosé 2016 en...\nSumarroca Brut Rosé 2016 (FR)\nBusquedas relacionadas con Sumarroca Brut Rosé 2016\nSi quieres comprar Sumarroca Brut Rosé 2016, en Uvinum encontrarás los mejores precios de Cavas Espumosos.\tHazte con él al mejor precio en Uvinum de forma 100% segura y desde cualquier dispositivo. Además, tenemos más de 59.000 productos en venta, lo que nos convierte en líderes en venta de vinos, estilados y cerveza de Europa, ¡únete a nuestros más de 38.000 y disfruta de Uvinum!


La despensa de Maria: Galletitas de hojaldre con manzana\nEstas galletas de hojaldre son de aprovechamiento, me sobró hojaldre de otra receta y decidí hacer algo dulce para agasajar a unos amigos.\nSon tan fácil de hacer que en solo 15 minutos las tienes y os puedo asegurar que menos de 15 minutos tardaron en perderse del plato. Son adictivas jajajaja.....\nIngredientes: 1 lamina de hojaldre con mantequilla, 1 manzana, azúcar moreno, canela y almendra crocanti.\nPreparación: Precalentar el horno a 180º con calor arriba y abajo.\nEstiramos con el rodillo la masa de hojaldre para quitarle un poco de grosor.\nCortamos el hojaldre con un molde de galletas.\nPelamos la manzana, quitamos el corazón y cortamos en daditos pequeños.\nPonemos un montoncito de manzana en cada galleta y echamos azúcar moreno, canela y almendra crocanti por encima de cada galleta y al horno.\nHornear hasta que estén doradas, en mi horno 15 minutos.\nMuy ricas y muy rápidas de hacer.\nPublicado por Maria Sanchez el junio 03, 2019\nQué ricas Maria , quien pudiera pillar una ahora mismo !!!\nEl hojaldre es un básico que no falta en mi nevera, porque nos da tanto juego que me resulta imprescindible.\n3 de junio de 2019, 14:11\nque rico.... galletas o pastelitos son un bocado exquisito.\n25 de junio de 2019, 17:31\n6 de marzo de 2020, 7:18\n26 de marzo de 2020, 4:46\n3 de abril de 2020, 9:34\nBuenos Soles dijo...\nMe encanta el hojaldre!!\n15 de abril de 2020, 5:35\n26 de julio de 2020, 20:03\nFood Blog dijo...\nQue belleza de blog y recetas Sin lugar a dudas regresare para volverte a leer\n3 de julio de 2021, 4:36\n17 de octubre de 2021, 16:22\n28 de octubre de 2021, 1:07\n30 de octubre de 2021, 18:09\n3 de noviembre de 2021, 7:21\n10 de noviembre de 2021, 21:45\n22 de noviembre de 2021, 4:26\nFLAN DE QUESO DE OVEJA Y CABRA CON ARANDANOS AL OPORT. kETO


El tabú de la incontinencia fecal - La Opinión de A Coruña\nEl tabú de la incontinencia fecal\nUn 8% de la población tiene problemas para controlar la expulsión de gases o heces, pero la mayoría no consulta por vergüenza || Médicos resaltan que tiene solución\n30·06·19 | 23:09\nNadie habla de ella, pero se calcula que un 8% de la población la padece o la ha sufrido en algún momento de su vida. La incontinencia fecal es todavía un tema tabú del que incluso cuesta reconocer en la consulta del médico. "Es más frecuente de lo que se cree, pero la gente no lo comenta por vergüenza, muchas veces tenemos que insistirle al paciente", reconoce Isabel Bermúdez, médico adjunto del servicio de Cirugía General del Complexo Hospitalario Universitario de A Coruña (Chuac), quien insta a "consultar al primer síntoma" este problema con el médico, enfermera o matrona del centro de salud "porque suele tener solución".\nEl ser humano aprende de niño a controlar sus esfínteres. "Desde pequeños reeducamos la musculatura del ano para orinar, hacer de vientre o expulsar los gases cuando el momento social lo permite", recuerda Bermúdez, quien explica que se habla de incontinencia fecal cuando "somos incapaces de controlar esta musculatura pelviana y se producen escapes". Esto puede ocurrir bien porque no funciona esta musculatura o bien por problemas en los nervios que se encargar de activar esta parte del cuerpo para que se contraiga adecuadamente.\nLos médicos recuerdan que hay tres grados de incontinencia fecal. "La más leve es cuando se escapan los gases que es lo más difícil de controlar, el siguiente grado es cuando se escapan líquidos como puede ser con una diarrea y la más grave cuando se es incapaz de controlar la expulsión de heces sólida", indica esta doctora. Normalmente, no es hasta que el paciente ve limitada su vida diaria cuando acude al médico.\n"Se calcula que un 8% de la población la padece, aumenta el riesgo con la edad y alcanza hasta la mitad de los ancianos que viven en residencias, por ejemplo. No se consulta por vergüenza y porque el paciente muchas veces readapta su vida a ese problema. Nosotros tenemos casos de gente que nos dice que hasta que no hacen de vientre no salen de casa y así van más tranquilos, otros que si van a algún evento social siempre intentan tener un baño cerca...", indica Bermúdez, quien recuerda que muchas veces va ligado a la incontinencia urinaria y que en ciertos colectivos, como mujeres menopáusicas, "parece que como que tienen asumido que esto puede pasar y lo aceptan cuando no es así, tiene solución y tratamiento".\nLas mujeres debido al embarazo, el parto y a la propia configuración de su aparato reproductor tienen más riesgo de sufrir esta patología. "Puede aparecer justo tras el parto y si se detecta se realiza una sutura de la musculatura debilitada y con tratamiento de rehabilitación no presentarán síntomas o años después debido al debilitamiento progresivo de la musculatura", indica esta doctora. La obesidad, la diabetes, determinados medicamentos o ciertas cirugías como la del tumor de ano favorecen la aparición de la incontinencia fecal así como algunas enfermedades neurológicas, según indican los expertos.\nSer incapaz de controlar la expulsión de gases, tener ganas repentinas de defecar que obligan a salir corriendo en busca de un inodoro o descubrir que la ropa interior está manchada son los primeros síntomas de una incontinencia fecal. "Cuesta que lo consulten, normalmente lo hacen cuando comienza a limitar su vida. Los casos más graves son muy limitantes, muchos tienen que dejar de trabajar, usar pañal... y además esto tiene una repercusión económica importante por el coste de los productos, no trabajar...", indica Bermúdez.\n"Una vez detectado el problema, muchas veces se soluciona con cambios dietéticos para evitar que tengan diarreas y fortaleciendo el suelo pélvico bien con ejercicios o con medicamentos", indica y añade: "En los casos más graves, cuando hay lesión en la musculatura se valora su reparación. Lo más avanzado es usar la neuroestimulación de las raíces sacras". Desde hace un año, el Hospital Universitario de A Coruña tiene una consulta específica para la incontinencia. "Ahora mismo tenemos unos 70 pacientes con este tratamiento de neuroestimulación", indica.


La Institución Universitaria Colegio Mayor de Cauca, para el desarrollo de la investigación en su política de construir una cultura investigativa e incentivar el pensamiento crítico, ha adoptado en el Plan de Desarrollo varias estrategias para contribuir al fortalecimiento de los Grupos de Investigación, para lo cual adjudica recursos y da apoyo para las actividades propias e inherentes a la investigación.\nLos programas de apoyo buscan de manera general apoyar la realización de proyectos pertinentes para la región, visibilizar los resultados, establecer nexos con la comunidad científica, articular la docencia y la investigación con el fin de formar nuevos investigadores y apoyar la formación básica y avanzada tanto de estudiantes como de docentes.\nLa coordinación de investigaciones brinda asesoría y acompañamiento permanente para la formulación de proyectos: elaboración de presupuestos, gestión de certificaciones y documentación, revisión de términos de referencia, elaboración de cronogramas de actividades, acompañamiento en revisión y conocimiento de plataformas tecnológicas para la presentación de proyectos. Este acompañamiento lo debe solicitar directamente el investigador principal a la Coordinación.\nAPOYO ECONÓMICO PARA LA EJECUCIÓN DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN\nFINANCIACIÓN: Esta modalidad tiene como objetivo brindar a los Grupos de Investigación de la Institución, la oportunidad de consolidarse a través de desarrollo de sus agendas de investigación y actividades conexas. Su aplicación obedece a la asignación de recursos financieros, asignación de horas de investigación en labor docente y uso de recursos institucionales. Se asignan mediante convocatorias internas.\nConvocatorias Internas: En el Plan de Desarrollo de la Institución “Camino a la Excelencias” (2008-2012) dentro del área de Desarrollo de la Investigación, quedó establecido como objetivo específico la realización de convocatorias internas cada dos años, para que los grupos de investigación puedan acceder a recursos contenidos en bolsa concursable.\nCOFINANCIACION: Mediante la asignación de recursos en efectivo y en especie la Institución apoya el desarrollo de proyectos conjuntos con otras instituciones o entidades. Estos Proyectos se desarrollan en el marco de convocatorias externas, para lo cual la Coordinación de Investigaciones presta todo el soporte para la formulación de proyectos ajustados a Términos de referencia.\nESTÍMULOS PARA GRUPOS DE INVESTIGACIÓN\nEl Proyecto Educativo Institucional establece como política “construir una cultura investigativa e incentivar el pensamiento crítico mediante el desarrollo de proyectos de investigación e investigación en el aula” y dentro de los programas establecidos en el citado documento se encuentra el “fomento para la constitución y funcionamiento de los grupos…de investigación”, a su vez El Plan de Desarrollo del Colegio Mayor del Cauca “Camino a la Excelencia” (2008-2012) dentro del área Desarrollo de la Investigación, tiene establecido como meta que la Institución aplicará un plan de inversión para sus grupos de investigación, el cual será financiado y ejecutado por vigencia fiscal.\nPor lo anterior el Comité de Investigaciones en sesión del 14 de Mayo de 2008, consideró pertinente que anualmente, a partir del 2008, se aplique la entrega de un aporte económico a los distintos grupos de investigación inscritos ante la Coordinación de Investigaciones con el fin de fortalecer sus dinámicas investigativas ligadas a la formulación y desarrollo de proyectos de investigación, siendo dicha consideración aceptada por el Consejo Directivo de la Institución. (Ver Acuerdo 008 de 2008).\nOtro de los programas establecidos en el Plan de Desarrollo “Camino a la excelencia” es la adopción e implementación de un sistema para la elaboración, seguimiento y divulgación de proyectos de investigación y con el objetivo de visibilizar los avances y resultados de investigación, desde la Coordinación de Investigaciones se da apoyo y acompañamiento para la publicación y socialización de resultados:\nPUBLICACIÓN DE LIBROS, CARTILLAS, MANUALES, MEMORIAS, RESUMENES, etc.:\nSiempre y cuando la publicación obedezca a resultados de investigación o de actividades directas del Grupo, se puede solicitar apoyo financiero y de gestión para la edición y publicación digital o impresa. Las publicaciones que tengan carácter científico y de nuevo conocimiento serán sometidas a revisión por pares. La solicitud de apoyo debe hacerse con 4 meses de anterioridad al cierre de la vigencia fiscal, a la cual debe anexarse el documento completo de manera digital, el resumen de hoja de vida de los autores y el presupuesto con que se cuenta.\nPRESENTACIÓN DE PONENCIAS: Con el objetivo de visibilizar, socializar, difundir y poner en discusión los resultados de investigación ante la comunidad académica regional, nacional e internacional, la institución brinda apoyo para el desplazamiento, gastos de viaje e inscripciones.\nARTICULOS: La Coordinación de investigaciones brinda apoyo y acompañamiento a los Grupos de Investigación para la presentación de artículos a revistas indexadas, informando de manera permanente sobre convocatorias para la publicación y en la revisión preliminar de los artículos.\nREALIZACIÓN DE EVENTOS ACADÉMICOS Y DE INVESTIGACIÓN\nLa Institución brinda apoyo económico y de gestión, para la realización de eventos que surgen de la actividad investigativa de los grupos como congresos, foros y cursos, con el objetivo que estos fortalezca el desarrollo de la investigación institucional y se articulen al proceso enseñanza aprendizaje. Estos eventos deben contribuir a la formación de nuevos investigadores. El evento debe por lo menos involucrar un grupo de investigación. El apoyo que se brinda incluye la preparación del evento, la divulgación, la asignación y consecución de recursos y apoyo en la realización. El apoyo debe solicitarse con un plazo mínimo de tres meses antes de la fecha propuesta para la realización del evento. Se financian gastos de viaje, honorarios de docentes, apoyo logístico y publicación de resultados. En todo el material informativo y divulgativo del evento debe incluirse el Grupo de Investigación y mencionar la Coordinación de Investigaciones.\nFORMACIÓN AVANZADA: El objetivo de este apoyo es incrementar el número de docentes investigadores formados a nivel de Posgrado (Phd y Msc) en las distintas áreas de la ciencia y la tecnología bajo la modalidad de cofinanciación de los estudios hasta con el 50% del valor de la matrícula en efectivo y con la asignación de horas en la labor docente en especie.\nACTUALIZACIÓN: De manera permanente los docentes investigadores pueden solicitar apoyo económico para la asistencia y participación a eventos académicos. El apoyo incluye viáticos e inscripciones. De igual manera se brinda capacitación puntual en los temas considerados por la comunidad académica vitales para el desarrollo de la investigación mediante la programación de diferentes cursos, talleres o diplomados.\nCon la finalidad de fortalecer los Grupos de Investigación la institución apoya a los docentes investigadores para la realización de estudios cortos, pasantías y/o estancias de investigación, en Instituciones Educativas, Centros de Investigación y Capacitación o Entidades del Sector Productivo nacional o del extranjero y a docentes extranjeros que vengan a la institución a realizar aportes significativos para el fortalecimiento de los programas académicos.\nEl programa de apoyo busca facilitar a los profesores de la institución el estudio, análisis y contrastación de los programas, proyectos de investigación y extensión que se realizan en sus cátedras con los que se desarrollan en cátedras o grupos de investigación homólogas de reconocido prestigio de Universidades Nacionales o Internacionales; así mismo el programa se enfoca a la realización de actividades de postgrado con el objetivo de complementar la formación que se encuentren realizando, en el marco de sus actividades de postgrado o de investigación.\nEl programa de jóvenes investigadores está orientado en dos sentidos, contar con Jóvenes Investigadores al interior de los grupos de acuerdo a Programa de Colciencias, y a la formación de investigadores con la vinculación directa de estudiantes a los grupos de investigación para la realización de proyectos de investigación en calidad de asistentes de investigación o realización de trabajos de grado o para la ejecución de proyectos al interior de un Semillero de Investigación.\nPara fortalecer las capacidades internas de investigación de la comunidad Universiaria mediante la ejecución de proyectos de investigación, desarrollo e innovación, I+D+i, la Institución Universitaria Colegio Mayor del Cauca, UNIMAYOR, realiza las siguientes Convocatorias Internas:\nConvocatoria Interna para Proyectos de Semilleros de Investigación. (Cierre Aplazado)\nUNIMAYOR Informa que debido a las medidas de prevención y contención frente al COVID-19, la fecha de cierre queda pendiente según el avance de la emergencia sanitaria mundial, y será divulgada en su momento a través de este sitio del portal y otros medios institucionales.\nConvocatoria Interna de Proyectos de Investigación 2019. (Cierre 25 de Octubre 2019)\nConvocatoria Interna Joven Investigador UNIMAYOR 2019. (Cierre 31 de Mayo 2019)\nConvocatoria Diplomado en Formulación de Proyectos UEES. (Cierre 26 de Julio 2019)\nConvocatoria Interna Para Semilleros de Investigación UNIMAYOR. (Cierre 14 de Marzo 2019)