[Titelseite] Kapitel: 1. | 2. | 3. | 4. | 5. [6. Danksagung] [7. Literaturverzeichnis] [Erklärung an Eides Statt] [Lebenslauf] Zitierabschnitt: 12345678910111213141516171819202122232425262728293031323334353637383940414243444546474849505152535455565758596061626364656667686970717273747576777879 [Inhaltsverzeichnis] 3. Patienten, Material und Methoden 3.1. Patienten-Kollektiv der Plattenepithelkarzinome des Ösophagus ↓31\nEs wurden 68 Patienten mit Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus analysiert. Das Material wurde von der Chirurgischen Abteilung des Universitäts-Klinikums Benjamin-Franklin der Charité-Universitätsmedizin, Berlin bereitgestellt. Die Patienten wurden dort in den Jahren 1982 bis 1993 nach Resektion mit kurativer Absicht behandelt und nachuntersucht. Tab. 7 zeigt die klinisch-pathologischen Parameter des Patienten-Kollektivs.\n3.2. Allgemeine Darstellung der, zur Mutationsanalyse verwendeten Methoden\nZur Mutationsanalyse von Tumorgeweben an Hand von operativ reseziertem oder biopsiertem Material werden Schnitte mittels eines Mikrotoms angefertigt. Diese Handhabung beinhaltet u.a. zwei Nachteile, die Kontamination der Schnittfläche, beim Einsatz an unterschiedlichen, nacheinander bearbeiteten Blöcken, sowie eine mögliche mangelhafte Gewebe-Repräsentation. Letztere ist dann nicht eindeutig, wenn verschiedene Komponenten des Gewebes, wie z.B. epitheliales und interstitielles, oder unterschiedliche Arten von Läsionen, wie Tumore und um-/anliegendes normales Gewebe, im Schnitt enthalten sind. Für qualitativ wie quantitativ gute Ergebnisse der PCR wird daher eine manuelle Bearbeitung des Materials durch das Ablösen abgeschabter Stücke anstelle der konventionellen Schnitte empfohlen. Durch Gebrauch einer chirurgischen Klinge bzw. eines Skalpels können mit visueller Kontrolle, normales Gewebe und Wachs vom Zielgewebe bzw. verschiedene Arten an Tumoren getrennt werden. Der Anteil relativ reiner Tumor-DNA ist höher, falsch-positive Reaktionen der PCR werden reduziert oder verhindert. Die Menge an extrahierter DNA ist vergleichbar. Der Prozess der Fixierung der Proben und die Einbettung in Paraffin haben einen bedeutenden Effekt auf die molekulare Anordnung der Nukleinsäuren im Gewebe und können in unterschiedlichem Ausmaß in der Degradation der DNA resultieren. Wichtige Einflussfaktoren auf die Qualität reiner DNA sind das zeitliche Intervall der Gewebe-Hypoxie zwischen Operation und Fixierung, der Grad der Gewebe-Autolyse und Nekrose, die Größe der Proben und deren Permeabilität gegenüber dem Fixativ, die chemische Zusammensetzung des Fixativs, die Dauer der Fixierung und der Aufbewahrung in Paraffinblöcken. Als Hauptmechanismus der DNA-Degradation während der Fixierung wird v.a. das sogenannte cross-linking von Proteinen der DNA beschrieben. Der erste Schritt der Reaktion mit Formaldehyd führt zu schneller, reversibler Hydroxymethylierung der Amino- und Imino-Gruppen der Nukleinsäurebasen, der zweite zu einer langsamen Methylene-Brückenbildung zwischen den Basen. Eigene Erfahrungen zeigen aber, dass die DNA solcher Genteste in kurze Fragmente degeneriert ist und hierdurch die PCR Amplifikation genomischer Segmente erschwert ist.\nBeide Schritte werden durch die Reaktions-Temperatur und die Konzentrationen der Reagentien moduliert. Bei einem Anstieg von 37°C auf 65°C beginnen Wasserstoffbindungen zwischen den Basenpaaren der Doppelstrang-DNA zu brechen, bei >90°C liegen Einzelstränge vor und die DNA ist denaturiert. Durch die genannte Hydroxymethylierung von Formaldehyd mit denaturierter DNA kann die Reaktions-Temperatur gesenkt und das Re-Annealing gehemmt werden. Jedoch auch bei 37°C oder Raumtemperatur reagiert Formaldehyd direkt oder indirekt mit DNA. Eine direkte Wirkung ist die Bildung freier, exozyklischer Aminogruppen, exponiert in der Doppelstrang-DNS, und endozyklischer Amino-und Imino-Gruppen. Indirekt wird eine Bindung der Amino-Gruppen von Histonen und deren Verbindungen zur DNA ausgelöst. Beide Effekte vermehren sich quantitativ bei Verlängerung der Fixierung.\nDas cross-linking von Proteinen der DNA und die Anwesenheit von Formalin-induzierten Proteinkomplexen erklärt u.a. die Notwendigkeit einer verlängerten Digestionszeit mit Proteinase K für einige Tage, sowie die höhere Qualität der Extraktion bei kürzerer Fixationszeit. Gegenüber anderen Proteinasen bearbeitet die Proteinase K das fixierte Material schneller und führt zu einem höheren DNA-Gehalt. Sie ist relativ stabil bei einer mittleren Temperatur von 50-60°C, was kürzerer Digestionszeiten ermöglicht. Die Menge reiner DNA ist, je nach dem Grad der Degradation, aus fixiertem Gewebe in der Regel geringer als aus frischem oder gefrorenem Material. Hierdurch sind der PCR technische Grenzen gesetzt\n(62). 3.2.1. Polymerase-Ketten-Reaktion (Polymerase-Chain-Reaction (PCR))\nDie von Kary Mullis 1985 vorgestellte Polymerase-Ketten-Reaktion, erfuhr seitdem durch Entwicklung und Erweiterung zunehmend an Bedeutung. Die zuerst verfügbaren, hitzelabilen Enzyme, wie das Klenow-Fragment der E.coli-DNA-Ploymerase I, wurden durch hitzestabile Polymerasen ersetzt. Eine der heute genutzten Polymerasen ist die DNA-Polymerase des Organismus Thermus aquaticus, Taq-Polymerase, welche initial aus heißen Quellen des Yellowstone Nationalparks isoliert wurde. Die Amplifikation unbegrenzter Gensegmente und die zunehmend einfachere Bedienung von Thermocyclern ermöglichte in der Folge die klinische Anwendung einer solchen Mutationsanalyse.\nDie PCR ermöglicht hierbei eine gezielte Vervielfältigung kurzer DNA-Abschnitte. Die notwendige Starthilfe bieten Oligonukleotidprimer, kurze, einzelsträngige DNA-Moleküle, die den Enden der definierten Ziel-Sequenz der DNA-Matrize komplementär sind. Die DNA-Polymerase verlängert dann, in Gegenwart von Desoxynucleotidtriphosphaten (dNTPs), die Primer entlang der einzelsträngigen, denaturiert vorliegenden DNA-Matrize in 5´ - 3´Richtung, mit ca. 35-100 Nukleotiden pro Sekunde und synthetisiert so neue, der Matrize komplementäre, DNA-Moleküle. Zur erneuten Synthese wird die doppelsträngige DNA wiederholt durch Hitze aufgeschmolzen durch die thermostabile Polymerase repliziert, separiert in Einzelstränge und nach Abkühlung wieder von den Primern gebunden. Unter optimalen Reaktionsbedingungen steigt damit bei jedem neuen Zyklus die Konzentration der zu vervielfältigenden Ziel-Sequenz an. Bereits ab dem dritten Zyklus entstehen Produkte der gesuchten Länge. Kurze Ziel-Sequenzen, die durch die Primer eingeschlossen sind, vermehren sich ab dem vierten Zyklus exponentiell, lange Produkte, mit einem Ende ohne Primer, werden hingegen linear vervielfältigt. Bei 100prozentiger Ausbeute in jedem Zyklus hat sich nach 20 Zyklen die DNA 2 hoch 20-fach vermehrt. Alle Kopien der DNA-Moleküle liegen zum Abschluss der Reaktion in Form von Doppelsträngen vor; ihre Anzahl lässt sich anhand folgender Formel bestimmen : (2n – 2n) , wobei n die Anzahl der Vermehrungszyklen ist, 2n die Produkte des ersten und zweiten Zyklus, deren Länge nicht definiert ist (63). Besondere Möglichkeiten bietet die PCR durch hohe Spezifität und Sensitivität. Mit Einsatz geringster Mengen an Ziel-DNA aus komplexen Mischungen genomischer Sequenzen einzelner Zellen oder einzelner Kopien von Genen mit einer Größe von 50-10000bp ist es möglich, in praktisch unlimitierter Menge DNA-Fragmente zu amplifizieren. Für weitere Anwendungen konnte daher an Material(Schnitte) bzw. DNA gespart werden.\nDie Sensitivität der Methode stellt nicht nur die Kraft, sondern auch die Schwäche der PCR dar. Sowohl falsch-negative bzw. falsch-positive Resultate durch Kontamination und die Vollständigkeit der Zielsequenz, in Abhängigkeit von der Degradation, müssen ausgeschlossen werden. Ferner nimmt die Vermehrung der Amplifikationsprodukte in der Praxis nicht beliebig lange in exponentieller Weise zu, da im Verlaufe jedes Zyklus mehrere Faktoren eine 100%ige Ausbeute verhindern, ein Effekt, der sich in späteren Zyklen noch verstärkt. Auch ist die Ausbeute durch die Menge und Aktivität des Enzyms, der Polymerase, begrenzt, nicht zuletzt da Hitze das Enzym im Laufe der Reaktionen denaturiert. Die zunehmende Konzentration der gebildeten Stränge vermindert u.a. durch deren Hybridisierung untereinander, die Effektivität der PCR Amplifilation durch Konkurrenz bei der Anlagerung der Primer. Weiterhin bewirken lange Fixationszeiten des verwendeten Materials eine weniger effiziente PCR. ↓35\nFür die Wirksamkeit von Hemmstoffen und Beschleunigern der PCR gibt es bis jetzt wenig garantierte Nachweise. Viele unbekannte Hemmstoffe befinden sich in biologischen Material. Die Proteinase K z.B., welche bei der Extraktion der DNA eingesetzt wird, baut denaturierte Proteine ab. Da die Taq-Polymerase gegen solche Proteasen empfindlich ist, muss die Proteinase K durch Denaturierung bei 95°C aus dem PCR Ansatz entfernt werden.\nErfahrungsgemäß können durch die unten beschriebene Optimierung (siehe Ergebnisse), nötige Modifikationen der PCR vorgenommen werden und Störfaktoren reduziert werden (62). 3.2.2. Single-Strand-Conformation-Polymorphism (SSCP) - Methode\nDie Methode der SSCP-Elektrophorese bei bekannter DNA-Sequenz ist zum Routinescreening geeignet und stellt ein praktisches Verfahren zum Screening möglicher Mutationen dar. Die Anwendung zeigt sich besonders nützlich beim Vergleich unbekannten Patientenmaterials mit bekanntem Standard-Wildtyp als positive Kontrolle. Vorteile liegen in der Schnelligkeit, der einfachen Handhabung und der Möglichkeit, mehrere Proben zur gleichen Zeit untersuchen zu können.\nDie Methode der SSCP basiert auf der Beobachtung, dass die Mobilität des DNA-Einzelstranges in nicht-denaturierenden Polyacrylamidgelen sehr sensitiv gegenüber der primären Struktur bzw. Sequenz reagiert. Während doppelsträngige DNA im elektrischen Feld v.a. in Abhängigkeit ihrer Größe (in bp) wandert, bilden Einzelstränge aufgrund der Basensequenz unterschiedliche räumliche Anordnungen, die Konformation, welche für ein charakteristisches Bandenmuster verantwortlich ist. Mit hoher Wahrscheinlichkeit haben daher selbst leichte Änderungen der DNA-Sequenz große Auswirkung auf die Konformation der Einzelstränge. Diese Beobachtungen sind empirischer Natur, eine eindeutige Theorie für die Beweglichkeit, basierend auf der Konformation oder deren Änderung gibt es bisher nicht.\nDa die Einzelstrang-Konformation unter nicht-denaturierenden Bedingungen nur von der Zusammensetzung der Sequenz abhängig ist, ergeben sich unterschiedliche oder abweichende Konformationen bei nur einem einzigen Basenaustausch. Die meisten Konformations-Veränderungen scheinen die physikalische Konfiguration oder die Größe ausreichend zu beeinflussen, dass, trotz gleicher Ladung der varianten Sequenz, das Verhältnis der Konfiguration–zur-Ladung bzw. der Größe-zur-Ladung in genügendem Maße unterschiedlich ist, um als Mobilitäts-Differenz in der Elektrophorese durch eine verzögernde Matrix, wie der des Polyacrylamidgels, sichtbar werden zu lassen.\nMit der SSCP Analyse kann der größte Teil an Variationen von Einzelsträngen identifiziert werden. Typischerweise liegt die Länge der eingesetzten Einzelstränge zwischen 150 und 250 Nukleotiden, wodurch 70-90% an Basensubstitutionen entdeckt werden. Längere Stränge entwickeln in geringerem Ausmaß Konformationsänderungen durch einzelne Basenaustausche, während kürzere weniger komplexe Konformationen annehmen. In beiden Fälle besteht die Gefahr, dass Veränderungen nicht sichtbar werden. Heteroduplexe Banden werden als Nebenprodukte gefunden und können in die Analyse miteinbezogen werden. Eine zusätzliche Sequenzierung der DNA kann nach diesem Suchtest in der Folge durchgeführt werden, um zu bestimmen, ob abweichenden Bandenmustern Mutationen oder andere Veränderungen, wie z.B. Polymorphismen zu Grunde liegen.\nLimitationen der SSCP-Methode bestehen u.a. in der Bewertung der Laufgeschwindigkeiten der Einzelstränge. Diese geben lediglich Auskunft über den Quotienten aus Ladung und Molekulargröße der DNA-Fragmente und variieren durch deren räumliche Anordnung. Unterschiedliche DNA-Fragmente mit verschiedenen Sequenzen und Längen können u.U. in einer nativen Elektrophorese gleiche Laufgeschwindigkeiten aufweisen. Aus diesem Grund läßt sich aus der Laufgeschwindigkeit keine direkten Sequenzinformation ableiten, was eine Sequenzierung wünschenswert macht. Daher sollte zuvor mittels sequenzdefinierter Mutanten, sowie des Wildtyps geklärt werden, ob sich alle Mutationen darstellen lassen und welches Bandenmuster sie haben.\nUm Struktur, Organisation, Entwicklung und Differenzierung von tumorösem Gewebe darzustellen, kann die Verteilung von Antigenen in situ bestimmt werden. Mit immunhistochemischen Techniken lassen sich spezifische Interaktionen von Antikörpern mit Antigenen, die Verteilung von Antigenen in Zellen bzw. Geweben lokalisieren. Die hier verwendete Avidin-Biotin-Methode gehört zu den Immunperoxidase-Färbemethoden. Sie basiert auf der Fähigkeit des Eiweißglykoproteins Avidin, vier Moleküle des Vitamins Biotin physikalisch zu binden. Hierzu werden drei Reagenzien benötigt: 1) ein Primärantikörper, spezifisch für das zu bestimmende Antigen, 2) ein Sekundärantkörper, welcher mit Biotin konjugiert ist und den ersten bindet, 3) ein Peroxidase-konjugierter Avidin-Biotin-Komplex. Das Enzym Peroxidase wird mit Chromogenen sichtbar gemacht; aufgrund der hohen Affinität von Avidin zu Biotin erhält man eine hochspezifische Verstärkung der Färbung und gute Ergebnissen aus fixiertem und in Paraffin eingebettetem Material. ↓38\nDa Antigen-Antikörper-Reaktionen eine hohe Spezifität aufweisen, sind immunhistochemische Techniken präziser als gewöhnliche histochemische. Die Reaktion führt zu Immunkomplexen, die als Präzipitate dargestellt werden können. Antikörper, die bei immunhistochemischen Färbungen eingesetzt werden, sind vorwiegend vom IgG Typ, mit schweren Ketten vom Typ γ, und zwei leichten Ketten vom Typ Kappa κ oder Lambda λ.; das von Leicht- und Schwerketten gebildete Fab-Fragment trägt die Antigenerkennungsregion und ist für die spezifische Antigenbindung verantwortlich.\nAntikörper werden mit einem Fluoreszenz- oder Enzym-Marker konjugiert, deren intensives Signal bei der Auswertung der Schnitte unter dem Mikroskop eine Visualisierung ermöglicht. Ein Vorteil von Enzym-Markierungen der sekundären Antikörper, z.B. Meerettich-Peroxidase (Horseradish-HRP) ist, dass gewöhnliche Durchlicht-Mikroskope gebraucht werden können und chemische Gegenfärbungen, wie der Zellkerne mit Haematoxylin, die Darstellung der Morphologie unterstützen können. Vorteilhaft ist auch die kleine Größe der Peroxidase, so dass die Bindung vom Antikörper an benachbarte Stellen nicht behindert wird. Sie ist in hochgereinigter Form erhältlich, was die Kontaminationsgefahr und unspezifische Farbreaktionen verringert. Sie ist stabil und bleibt während Herstellung, Aufbewahrung und Anwendung weitgehend unverändert. Dazu gibt es eine Vielzahl von Chromogenen, die mit der Peroxidase Farbprodukte bilden, welche dann an der Stelle des zu lokalisierenden Antigens präzipitieren und es hierdurch visualisieren.\nBei allen immunhistochemischen Verfahren sind positive und negative Kontroll-Antikörper zum Vergleich mit dem Test-Antikörper erforderlich. Werden unbekannte Proben mit Primärantikörpern angefärbt, werden folgende Kontrollen angewendet: Positiv-Kontrolle ist eine bekannte, identisch vorbehandelte Probe, die das gesuchte Antigen enthält und v.a. im unteren positiven Bereich die Sensitivität der Methode zeigt. Negativ-Kontrolle ist eine bekannte, identisch vorbehandelte Probe, die das gesuchte Antigen nicht enthält. Eine unbekannte Probe, die nur mit Verdünnungspuffer bearbeitet wird bzw. mit nichtbindenden, Isotyp-gleichen Kontrollantikörpern bzw. nur mit dem Sekundärantikörper gefärbt wurde, dient als Leerpräparat, um positive Ergebnisse von unspezifischen Proteinbindungen, endogenen Peroxidaseaktivitäten oder anderen unerwünschten Epiphänomenen zu unterscheiden.\nIn der immunhistochemischen Auswertung werden der Vergleich unspezifischer und spezifischer Reaktionen sowie Färbeintensitäten unbekannter Proben und Kontrollen interpretiert. Färbeeigenschaften werden nach der Menge des präzipitierten Chromogens, welches zur Menge des Antigens proportional ist, sowie nach zytoplasmatischer und nukleärer Markierung charakterisiert. Da nicht alle Zellen gleiche Mengen an Antigenen enthalten, ergeben sich unterschiedliche Intensitäten innerhalb einer Probe. Fehlende Unterscheide in der Intensität können daher auf unspezifische Färbungen hinweisen. Spezifische Färbungen sind auf die Zellen beschränkt, unspezifische finden sich z.B. häufig in Collagen und Bindegewebsmatrix.\nInterpretationsfehler lassen sich in vier Kategorien einteilen. Unspezifische Farbstoff-Präzipitate können mit einer positiver Anfärbung des Antigens verwechselt werden, sind aber im Gegensatz zu diesen nicht auf Zellen beschränkt. Es handelt sich dabei um nicht reagierende Chromogenpartikel oder auch Pigmente der Gegenfärbung. Ferner gibt es Gewebsartefakte, welche beim Schneiden der Schnitte entstehen, und Zellartefakte, welche positive Anfärbungen von nekrotischen, zerquetschten, autolytischen Zellen und hämorrhagischem Gewebe darstellen. Zuletzt können (spezifische) Hintergrundfärbungen, z.B. bei blutigem, ungewaschenem Gewebe mit viel Serum im interstitiellen Gewebe, auftreten. Das gesuchte Antigen liegt dabei in hoher Konzentration im Serum vor und stellt als intensive Hintergrundfärbung eine spezifische, jedoch unerwünschte Färbung des Antigen im Serum dar. Diese kann das in Zellen gesuchte Antigen verdecken. Ursächlich für mangelnden oder fehlenden Nachweis von anzufärbenden Proteinen können Nonsense-Mutationen, Spleiß-Varianten oder Stop-Kodons sowie unterschiedliche Antikörper und nicht zuletzt auch differierende Interpretationskriterien sein (3).\nAus 30 μm in Paraffin eingebetteten Schnitten wurde DNA entsprechend standardisierter Techniken vor Extraktion durch zweimalige Deparaffinierung gesäubert: durch Zugabe von 1ml Octan und, nach Zentrifugation in einer Tischzentrifuge und Resuspension in 0.5ml 96% Ethanol, wird das Paraffin aus der Gewebeprobe herausgelöst.\nDNA wurde mit dem Invisorb Spin Tissue Mini Kit (Firma Invitek GmbH, Berlin-Buch, Deutschland) wie folgt extrahiert. Das Ausgangsmaterial wurde in 400 µl Lyse-Puffer und 40 µl Proteinase K-Lösung bei einer Inkubationstemperatur von 52°C unter kontinuierlichem Schütteln (Thermomixer 5436, Eppendorf, Hamburg) über Nacht lysiert, unlysierte Bestandteile mittels Zentrifugation (Tischzentrifuge, Centrifuge 5415C, Eppendorf, Hamburg) entfernt. Nach Zugabe von 200 µl Bindungs-Puffer (Invitek, Berlin) wurde die DNA an einer Minisäule gebunden, nach Zentrifugation und Waschen mit 500 µl Wasch-Puffer mit 100 µl, auf 52°C erwärmten, Elutions-Puffer (Invitek, Berlin) verdünnt und anschließend in 10 mM Tris HCL/0, 1 mM EDTA Puffer pH 8.0 bei –20°C zur DNA-Analyse aufbewahrt.\nDie Mutationsanalyse wurde mit dem K-ras-Genotyping System (Invitek, Berlin) für Punktmutationen im Kodon 12 und 13 des Onkogens K-ras durchgeführt. Nach der ersten PCR im Thermocycler (Gene Amp, PCR System 9700, PE Applied Biosystems) wurden die gewonnenen Produkte einer Restriktionsreaktion unterzogen, um Wildtyp ras zu zerstören und in der folgenden zweiten PCR selektiv amplifiziert. Die Amplifikate wurden einem Hybridisierungs-Test im Mikrotiter-96-Lochplatten Format zugeführt, in welchem im PCR Amplifikat durch Nachweis mittels biotinylierter, für mutiertes ras Sequenz-spezifischer Oligonukleotide gefolgt von Streptovidin-Peroxidase-Komplexen und Farbreaktion mittels standardisierter Absorbtionsmessung Mutationen aufgedeckt wurden. Die im Test ermittelten Extinktionen wurden mit der Spezialsoftware DiGeM für Codon 12 bzw. 13- Mutationen analysiert.\nDie Probenamplifikation mittels der 1. PCR erfolgte in einem standardisierten Ansatz mit den Komponenten Buffermix I, Primermix I, Solution, Taq Polymerase (10 units/µl) und ddH20. Der Thermocycler wurde wie folgt programmiert: Initialdenaturierung bei 94 °C für 5 min., 25 Zyklen bei 94 °C für 30 sec., 54 °C für 30 sec., 72 °C für 20 sec. und Extension bei 72 °C für 1 min. Der Ansatz für die Restriktionsreaktion enthielt die Komponenten Restriction Buffer, Restriction Enzyme und ddH20. Die selektive Amplifikation mittels der 2. PCR erfolgte mit den Komponenten Buffermix II, Primermix II, Solution, Taq Polymerase (10 units/µl) und ddH20. Der Thermocycler wurde wie folgt programmiert: Initialdenaturierung bei 94 °C für 5 min., 25 Zyklen bei 94 °C für 30 sec., 54 °C für 30 sec., 72 °C für 20 sec. und Extension bei 72 °C für 1 min. Es erfolgte eine Kontrolle der Amplifikation auf Agarosegel.\nFür den Hybridisierungs-Test wurden die Amplifikate aus der 2. PCR durch Zugabe von Dilution Solution verdünnt. Eine Mikrotitertestplatte wurde mit externen Standardproben sowie der Proben- und Kontroll-Amplifikate beladen. Durch Zugabe von Denaturations Puffer wurde denaturiert und anschließend mit Verdünnungslösung gewaschen. Für die Hybridisierungsreaktion wurden die auf 42°C vorgewärmten Hybridisierungsonden zugegeben. Dann wurde mit Waschpuffer gewaschen, mit Equilibrations Puffer äqulibriert und für die Nachweisreaktion die Verdünnungslösung zugegeben. Nach erneutem Waschen wurde die Farbreaktion durch Zugabe von Substrat eingeleitet und dann abgestoppt. Die Absorbtionsmessung wurde in einem Mikrotiterplatten-Photometer (SLT-Systems, Salzburg) bei einer Wellenlänge von 450 nm und einer Referenzwellenlänge von 620 nm durchgeführt.\nDie Interpretation der Messdaten erfolgte in zwei Schritten. Erstens wurden die Ergebnisse der externen und internen Kontrollproben begutachtet und zweitens die Resultate der Untersuchungsproben geprüft. Als externe Kontrolle diente eine Standardkurve mit mutiertem Ras-Amplifikat, deren Ergebnisse den Erfolg des DNA-Hybridisierungs-Assays anzeigen. Anhand der internen Kontrollprobe wurde geprüft, ob die Schritte der Probenamplifikation und der Restriktionsreaktion fehlerfrei verlaufen waren. Sie enthielt DNA aus einem Zellgemisch des homozygoten Wildtyps mit der heterozygoten Mutante im Verhältnis 2000/1. Die Negativkontrollen gaben Auskunft über Probenverschleppung während der Nukleinsäurepräparation oder der Amplifikationsreaktionen. Mögliche Fehlerquellen wurden beachtet, wie eine ungültige Eichkurve bei falschen zur Messung verwendeten Wellenlängen, eine ungültige Standardkurve bei falsch aufgetragenen Standardverdünnungen, auffallend viele Mutationen durch Probenverschleppung während der DNA-Präparation oder der PCR, auffallend wenige Mutationen bei mangelnder Mutationsanreicherung. 3.3.4. PCR–Protokoll für das p53 Gen\nExon 5 bis 8 des p53 Gens wurden mittels der Polymerase Kettenreaktion (PCR) amplifiziert. Die Exon 5 – 8 betragen (in bp) : Exon 5 = 184, Exon 6 = 113, Exon 7 = 109, Exon 8 = 137.\nDas Exon 5 von p53 wurde aufgrund seiner Gesamtlänge von 184 bp in zwei Anteile, 5a und 5b, geteilt und getrennt amplifiziert.\nDie Amplifikationsprodukte der Exons 5 – 8 umfassen (in bp) : Exon 5a = 139, Exon 5b = 191, Exon 6 = 163, Exon 7 = 190, Exon 8 = 199.\nDie Sequenzen der Oligonukleotidprimer für die PCR-Amplifikation sind wie folgt unten aufgelistet (sense und antisense):\nExon 5a : CCA GTT GCT TTA TCT GTT CA und TGT GGA ATC AAC CCA CAG ;\nExon 5b : CAA CTG GCC AAG ACC TGC und AAC CAG CCC TGT CGT CTC T ;\nExon 6 : CTC TGA TTC CTC ACT GAT TGC und GAG ACC CCA GTT GCA AAC CA ;\nExon 7 : TTG CCA CAG GTC TCC CCA A und AGG GTG GCA AGT GGC TCC ;\nExon 8 : CCT TAC TGC CTC TTG CTT C und CGC TTC TTG TCC TGC TTG C;\nDer Reaktionsansatz enthält: 2-4 µl DNA;\n0,5 µl je sense und antisense Primer (50 pmol/µl);\n12,5 mmol je dNTP, verdünnt mit Aqua dest. in einem Gesamtvolumen von 100 µl : eingesetzt wurden 0,4 µl für Exon 5a, 5b, 6 und 7; 0,8 µl für Exon 8;\n1 µl MgCl2 (50 mM) für Exon 6 und 7, 2µl MgCl2 für Exon 5a, 5b und 8;\n5 µl Reaktion-Puffer ((NH4 ) 2SO4) (16 mM);\n1,5 U der Taq-Polymerase, entspricht 0,5 µl (InViTAQ, InViTek);\nDie Komponenten wurden in einem Gesamtvolumen von 50 µl mit Aqua dest. verdünnt;\nFür die PCR Reaktion wurde ein Thermocycler (Gene Amp, PCR System 9700, PE Applied Biosystems) anhand des folgenden Protokolls programmiert:\nErhitzen auf 94 °C für 4 min, gefolgt von 35 Zyklen bei 94 °C für 1 min, Annealing-Temperatur (siehe unten) der jeweiligen Primer für 30 sec, 72 °C für 1 min; 72 °C für 7 min; Abkühlung auf 12 °C; Die Annealing-Temperaturen für Exon 5 – 8 betragen: Exon 5a = 52 °C, Exon 5b = 65 °C, Exon 6 = 58 °C, Exon 7 = 58 °C, Exon 8 = 58 °C;\nNach der PCR wurde ein Nachweis der amplifizierten DNA unter Prüfung negativer und positiver Kontrollen mittels Agarosegelen durchgeführt.\nJe 10 µl der DNA-Produkte wurde unter Zugabe von 2 µl Sigma-Ladungspuffer (6×) in 12%igen TAE-Agarosegelen (Agarose (SeaKem) 1×TAE Tri-Acetat-EDTA)-Puffer : 50×TAE verdünnt mit A. bidest : 242 g Tris-Base (Aminomethan), 57.1 ml Eisessig, 100 ml 0.5M EDTA (pH 8.0), 1000 ml A. bidest) aufgetragen und bei 120V elektrophoretisch aufgetrennt. Zur Visualisierung der DNA-Fragmente wurde 1 µl Ethidiumbromid (Roth), welches nach Interkalierung die DNA der PCR Produkte unter UV-Beleuchtung sichtbar werden lässt.\nSSCP-Analysen wurden bei dem Patienten-Kollektiv der Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für das p53 Gen durchgeführt. ↓50\n5-12 µl der PCR-Produkte wurde in 6 µl DNA Ladungspuffer verdünnt (82% Formamid, 10 mmol/l NaOH, 50 mmol/ EDTA, Bromphenol Blau, Xylen Xyanol Farbtest).\nDie Proben wurden bei 95 °C für 5 min denaturiert, dann im Eisbad für 3 min abgekühlt, um eine erneute Zusammenlagerung der Einzelstränge zu verhindern. Im Anschluss wurden die Proben auf ein 10%iges nicht-danaturierendes Polyacryamid-Gel (11 ml A. bidest, 4 ml 5×TBE (1×TBE (Tris-Borat-EDTA)-Puffer : 5×TBE verdünnt 1: 5 mit 1000 ml A. bidest : 54 g Tris-Base, 27.5 g Borsäure, 20 ml 0.5M EDTA (pH 8.0), 1000 ml A. bidest), 5 ml 40%-iges Acrylamid-Bisacrylamid (29:1)-Stammlösung, 125µl APS 10%-ig (Ammoniumpersulfat), 25 µl TEMED) aufgetragen und anschließend bei 300 V für 30 min, 900 V für 10-100 min und 50 mA bei 22 °C in einer Multiphor-Elektrophorese-Kammer (Pharmacia, Freiburg) in SSCP-Ladungspuffer (9 ml Formamid, 20 µl 5 NaOH (pH 8.0), 200 µl 0.5 M EDTA (pH 8.0), 1 ml Farbstofflösung (0.5% Bromphenolblau, 0.5% Xylen Xyanol Farbtest) elektrophoriert. DNA der Zelllinie LoVo diente als Wildtyp Kontrolle für p53 Mutationen. Je eine Wildtyp Probe wurde wie die untersuchten Proben denaturiert, eine zweite Wildtyp Probe diente der Kontrolle doppelsträngiger DNA.\nDie Exons 5 - 8 des p53 Gens wurden bei einer Lauftemperatur von 22 °C aufgetrennt.\nZur Visualisierung der DNA-Banden wurde eine Silberfärbung der Gele mit dem DNA Silberfärbe-Kit (Parmacia Biotech) durchgeführt.\nAlle Schritte der Färbung wurden ohne Unterbrechung durchgeführt und ein Austrocknen der Schnitte vermieden. Nach Entparaffinierung mit Xylol für mind. 20 min und Alkoholbad in absteigender Alkoholreihe wurden die Schnitte in Aqua bidest. und 1× TBS (Tris buffered saline: 10 Χ TBS 1:10 verdünnt mit A. bidest : 9 g Tris-Base (Aminomethan), 68,5 g Tris-HCL, 87,8 g NaCl, 1000 ml A. bidest, pH 7,4-7,6) rehydriert. Dann wurden sie in 1× Citratpuffer (pH 6), 9 ml einer Stammlösung A, 0.1 M Zitronensäure (21.01 g C6H8O7 * H2O in 1000 ml A. bidest), 41 ml einer Stammlösung B, 0.1 M Natriumcitrat (29.41 g C6H5Na3 * 2 H2O in 1000 ml A. bidest) und 450 ml A. bidest) gekocht und in Aqua bidest. und 1× TBS vor und zwischen den anschließenden Inkubations-Intervallen gewaschen. ↓52\nDie Inkubation wurde wie folgt durchgeführt: 1) die Schnitte wurden mit dem, in TBS verdünntem, primären Antikörper für 1 h bei Raumtemperatur inkubiert; zur Immunlokalisation des p53 Protein wurde der monoklonale primäre Antikörper Anti-human p53 (Klon DO-7, kappa, (Verdünnung 1:75) Dako A/S, Glostrup, Denmark) verwendet; anschließend erfolgte ein Waschschritt von 3×2 min mit TBS; 2) Inkubation mit biotinyliertem sekundärem Ziege-anti-Maus-Antikörper (Dianova) verdünnt im Verhältnis 1:250 in TBS, für 30 min. bei Raumtemperatur; anschließender Waschschritt von 3×2 min mit TBS; 3) Streptavidin-Peroxidase (Dianova, Hamburg) verdünnt im Verhältnis 1:500 in TBS, für 30 min. bei Raumtemperatur; anschließender Waschschritt von 3×2min mit TBS. Darauf folgte eine Färbung mit DAB (Pierce), für 5-10 min, und Hämatoxylin nach Meyer (1 g Hämatoxylin (Merck, Darmstadt), 0.2 g Kaliumjodat (Merck), 50 g Kalialaun (Aluminiumkaliumsulfat-Dodecahydrat, Merck), 1000 ml A. bidest, 50 g Chloralhydrat (Merck), 1 g krist. Zitronensäure (Merck) für 15 sec sowie eine aufsteigende Alkoholreihe mit Paraclear (Quartett, USA) und das Eindecken in ClariOn (Natutec, Frankfurt/Main).\nDie Interpretation der immunhistochemisch gefärbten Schnitte zum Nachweis der p53 Proteinexpression wurde blind von zwei Untersuchern ohne Kenntnis der klinisch-pathologischen Daten durchgeführt. In vier hoch aufgelösten Feldern (× 400) wurde der Prozentsatz positiv gefärbter Tumorzellen (0 % bis 100 %) und die Färbeintensität (0 bis 3-fach positiv) unter dem Mikroskop evaluiert. Für die weiter Analyse wurde der Prozentsatz positiver Tumorzellen und der sogenannte p53 Färbe-Index benutzt, welcher als das Produkt an positive gefärbten Zellen und der Färbeintensität berechnet wurde. Eine Positiv-Kontrolle (Kolonkarzinom-Tumorprobe) zeigte eine angemessene Immunreaktivität für p53. Die Negativ-Kontrolle (Kolonkarzinom-Tumorprobe) zeigte hingegen keine Immunofärbung. Für die statistische Auswertung der immunhistochemischen Färbung von p53 Protein wurde ein Grenzwert bei 10% positiver Zellen in Analogie zu früheren Untersuchungen an anderen Tumorkollektiven definiert (90). D.h. Karzinome mit >10% gefärbten Zellen wurden mit „hoher Expression“ bzw. „positiv“ bezeichnet und Karzinome mit ≤10% gefärbten Zellen mit „niedriger Expression“ bzw. „negativ“ bezeichnet. 3.3.8. Geräte, Zubehör und Reagentien\nThermocycler, Gene Amp, PCR System 9700\nMultiphor Elektrophorese Kammer, Biometra, Agagel Midi-Wide\nPharmacia, Freiburg, D\n3.3.8.2. Reagentien [Titelseite] [1.] [2.] [3.] [4.] [5.] [6. Danksagung] [7. Literaturverzeichnis] [Erklärung an Eides Statt] [Lebenslauf] [Inhaltsverzeichnis] � Die inhaltliche Zusammenstellung und Aufmachung dieser Publikation sowie die elektronische Verarbeitung sind urheberrechtlich gesch�tzt. Jede Verwertung, die nicht ausdr�cklich vom Urheberrechtsgesetz zugelassen ist, bedarf der vorherigen Zustimmung. Das gilt insbesondere f�r die Vervielf�ltigung, die Bearbeitung und Einspeicherung und Verarbeitung in elektronische Systeme.


notiTSen aus Berlin (08/2021 #83)\nWochenrückblick 19. bis 24. April 2021\n🔨 HAMMER DER WOCHE: Habemus Listenplatz! Weitere 4 Jahre MdB! 🔨\nWANN Deutschland das Pferd wechseln muss\nWIESO Union und AfD allein auf weiter Flur stehen\nWO ich über Voltaire und Jeremy Rifkin spreche\nWELCHE Schwermut mich bei Baerbock & Laschet befällt\nWIE die Schule der Zukunft konkret aussehen muss\nWeiß, wie der Hase läuft\nFolge 78 - Sommer im Stall\nHandelsblatt - Plädoyer für die digitale Freihandelszone\nDer Ex-Dax-Vorstand und heutige FDP-Politiker will die Wirtschaft nach der Coronakrise neu aufbauen – und Gründer und Investoren fördern.\nAls langjährige Führungspersönlichkeit ist Thomas Sattelberger mit den Problemen und Herausforderungen deutscher Unternehmen bestens vertraut. In der Vergangenheit setzte sich der FDP-Politiker auch immer wieder für Freelancer ein und fordert eine Vereinfachung der Statusfeststellung und eine damit verbunden höhere Rechtssicherheit für Selbstständige. Die hier herrschende Rechtslage führt seit Jahren zu erhöhter Unsicherheit. In unserem Interview gibt Herr Sattelberger spannende Einblicke in diesen relevanten Bereich.\nTHE GROW Magazin\n"AUCH UNTERNEHMEN MÜSSEN IN WÜRDE STERBEN KÖNNEN" - DAS INTERVIEW MIT THOMAS SATTELBERGER\n02/2021 - Ein neues Geschäftsmodell für Deutschland\nThomas Sattelberger entdeckt pralles Leben abseits der Konzerne – die digitalen Hidden Champions.\n12/2020 - Abstand von der Arbeit\nCorona beschleunigt nicht nur die Digitalisierung, es treibt\nauch die Entmenschlichung der Industrie voran.\n07/2020 - Begabtenverführung\nDer Fall Philipp Amthor zeigt, was die Politik von der Wirtschaft lernen kann: Compliance und Talentmanagement.\nARD Morgenmagazin - Spielraum der Lockerung\nHeute im ARD Morgenmagazin :Die behutsame Öffnung von Geschäften und Schulen scheint möglich, aber nur bei beherrschbaren Neu-Infektionen und richtigen Schutzvorkehrungen.\nWar gestern Abend Gast in der Phoenix-Runde: Hat Österreich die dümmeren Medizinprofis oder ist Deutschland besserwisserisch? Selbst die World Health Organization (WHO) ist jetzt für Mundschutz.\nThomas Sattelberger: "Die Asiaten zeigen uns, wie ein Volk ausgerüstet sein sollte für so ein Virus"\n"Die Maßnahmen sind schlimmer als das Virus"- eine zutiefst unmoralische Aussage. War Donald J. Trump Stichwortgeber ?1. Die Sicherung der Gesundheit, 2.


HEMA Köln Schwertkampf & Historisches Fechten in Köln\nHistorical European Martial Art Köln\nHistorische & Europäische Kampfkunst (HEMA) in Köln\nDu möchtest Schwertkampf und Ringen erlernen und bist auf der Suche nach einem HEMA Club oder einer Schwertkampf Gruppe in Köln, die in gemeinschaftlicher Atmosphäre die Quellen und Texte der Historischen Europäischen Kampfkunst (Historical European Martial Art oder HEMA) erforscht? Dann bist du hier genau richtig. Wir bieten dir ein vielfältiges Angebot rund um den Schwertkampf.\nIn unseren HEMA Kursen bieten wir dir neben dem Schwertkampf des Bolognese Stils, das Langschwert nach Fiore dei Liberi, die Kampfkunst des Ringens und den Umgang mit anderen Waffen wie Spadone (Montante/Zweihänder), Dolch oder Langschwert.\nTrainerlizenzen im Bereich Breitensport des Deutschen Olympischen Sportbundes (DOSB), Aus- und Weiterbildungen an der Sporthochschule Köln garantieren dir die hohe Qualität unserer Kurse. Wir sind Mitglied des Deutscher Dachverband für Historisches Fechten.\nBleib auf dem Laufenden und folge uns in den Netzwerken: News, Seminar, Tutorials uvm.\nWas bedeutet “Historische Kampfkünste Europas“ oder “Historical European Martial Art” (HEMA)?\nAls Kampfkunst oder Martial Arts bezeichnen wir die körperliche Auseinandersetzung mit einem oder mehreren Gegnern unter der Verwendung von bestimmten erlernten Fertigkeiten und Techniken. Im Gegensatz zum Kampfsport oder zur Selbstverteidigung steht in der Kampfkunst jedoch weniger die direkte Effektivität der Techniken im Vordergrund. Die Bewegungen fokussieren sich eher auf ästhetische oder traditionelle Aspekte.\nAls historische Kampfkunst werden Kampftechniken bezeichnet, die in Europa vom 13. bis zum 17. Jahrhundert verbreitet waren. Im Gegensatz zu anderen Kampfkünsten haben die historischen Kampfkünste Europas teilweise seit dem 17. Jahrhundert keine lebende Tradition mehr und sind nur noch als Texte oder Bilder überliefert.\nEs existierten im Europa des Hochmittelalters und der Renaissance verschiedene Schwertkampf Stile/Fechtstile, auch Schulen genannt. Die dort gelehrte Kampfkunst ist uns heute durch verschiedene Texte und Bilder überliefert und werden HEMA, Historiscal European Martial Arts genannt.\nSo orientieren wir uns beim Bolognese Stil vor allem an Giovanni dall’Agocchie, Achille Marozzo, und anderen Italienischen Meistern, die in ihren Texten neben dem Side Sword auch den Umgang mit dem Dolch, dem Buckler, dem Spadone (Montante/Zweihänder) und den Stangenwaffen beschrieben haben.\nDie historischen Kampfkünste HEMA befassen sich hauptsächlich mit Kampftechniken mit Blankwaffen wie Schwertern aber auch mit Stangenwaffen und dem waffenlosen Kampf dem Ringen.\nSeit nun einigen Jahren versucht eine Vielzahl von Interessierten auf der ganzen Welt diese Kampfkunst wieder zum Leben zu erwecken. Gemeinsam werden die Quellen erforscht und das Erlernte gemeinsam ausgetestet. Hierbei spielen die Schwertkampf-Tourniere und Wettkämpfe eine wichtige Rolle, um die Plausibilität der Rekonstruktionen zu prüfen.\nSchwertkampf - das bewusste Miteinander\nUnser HEMA–Training umfasst neben einfachen Routinen, Drills und Choreografien auch die Kampfkunst des freien Schwertkampfes. Bei den Routinen handelt es sich um vorgegebene Bewegungsabläufe mit einem*r Partner*in zusammen. Dies lehrt uns, das Gegenüber besser wahrzunehmen und zu spüren, ohne dabei eine kämpferische Absicht zu haben.\nDie Drills und Routinen bildet die Grundlage für das darauf aufbauende freie Kämpfen. Wurde genügend Erfahrung gesammelt, kann mit dem freien Kampf begonnen werden. Hier kommen alle gelernten Fähigkeiten zum Einsatz. Der*die Partner*in bewegt sich nicht mehr in vorgegebenen Abläufen, sondern agiert eigenständig.\nIn den Schwertkampf-Kursen vereinen wir die traditionellen Kampfkünste mit modernen Trainingsmethoden. Kenntnisse über die Physiologie und Biomechanik des Körpers sind wichtige Bestandteile unseres Trainings.\nEine persönliche Betreuung und die stetige Weiterbildung unsere qualifizierten Kampfkunst-Trainer*innen sorgen für ein hochwertiges und fachlich versiertes Training.\nKampfkunst & Schwertkampf Sparring im HEMA Köln\nBegonnen wird im Sparring mit Schaumstoffwaffen, die die Sicherheit der Teilnehmenden vor allem der Anfänger*innen garantieren.\nDarauf aufbauend beginnen wir mit dem leichten Sparring in Schutzausrüstung und synthetischen Sparringschwertern, um dann letztendlich in das schwere Sparring in voller Montur und Blankwaffen aus Metall zu gehen.\nDas Erahnen der Bewegungen, die das Gegenüber nutzen wird, ermöglicht ein Taktieren im freien Kampf ähnlich dem Schachspiel, bei dem wir dem Gegenüber immer zwei Schritte voraus sein sollten.\nAm Anfang brauchst du bei uns keinerlei Ausrüstung, diese wird gestellt, so dass du dir die Historische Kampfkunst ganz in Ruhe anschauen kannst.\nSchwertkampf des Bolognese Stils\nDie Bolognesische Schwertkunst, manchmal auch Dardi-Schule genannt, ist eine Tradition innerhalb der italienischen Schwertkunstschule, die auf überlieferten Quellen von Fechtmeistern wie Giovanni dall’Agocchie und Achille Marozzo aus dem 16. Jahrhundert basiert.\nDie Dardi-Schule oder Bolognese Stil ist nach Lippo Bartolomeo Dardi benannt, einem Professor für Mathematik und Astronomie an der Universität von Bologna, der als Fechtmeister lehrte und 1415 eine Fechtschule in Bologna gründete.\nDie Dardi-Schule war sowohl die letzte große mittelalterliche westliche Schwertkampf tradition als auch die erste große Renaissance-Tradition dieser Kampfkunst, die sowohl bewaffnete als auch unbewaffnete Kämpfe wie das Ringen umfasste.\nDardis Manuskripte sind nicht erhalten geblieben, obwohl seine Tradition die Grundlage für die Arbeit von Antonio Manciolino und Achille Marozzo wurde. Beide gelten als mögliche Schüler des berühmten Bologneser Meisters Guido Antonio de Luca. Die bolognesischen Meister, deren Abhandlungen erhalten geblieben sind, teilten eine größere Übereinstimmung von Stil, Terminologie und Pädagogik als die Fechtmeister der damaligen Zeit aus anderen Teilen Italiens, was ihre Behandlung als einzelne Schule rechtfertigt.\nDie verschiedenen Waffen im HEMA\nDas Side Sword wurde in Kombination mit verschiedenen Verteidigungswaffen wie Dolch oder Kape, oder einem kleinen Schild, dem Buckler, in der Kampfkunst des Bolognese Stils verwendet. Der Zweihänder (Spadone) und Stangenwaffen sind ebenfalls Teil dieser Schwertkampf Tradition. Aber auch andere Waffen sind Teil der Kampfkunst HEMA.\nWenn du dich also für Schwertkampf, Waffentraining mit Stöcken oder Stangenwaffen interessierst, bist du bei uns richtig. In gemeinschaftlicher Atmosphäre trainieren und entwickeln wir uns zusammen weiter.\nMittelalterlicher Schwertkampf nach Fiore dei Liberi\nLangschwert wird im Verein hauptsächlich nach den Werken von Fiore dei Liberi trainiert. Auf Grundlage der Originalquellen sowie der modernen Fechttheorie werden Techniken des Langschwertes erarbeitet und im Freikampf erprobt. Wir gehen gerne auf die Bedürfnisse von Einsteiger*innen bis hin zu erfahrenen Kampfsportler*innen ein.\nFiore war ein Fechtmeister und Söldnerführer des späten 14. und frühen 15. Jahrhunderts aus dem heutigen Norditalien. Nach eigenen Angaben habe Fiore die Kunst des ritterlichen Kämpfens, unter anderem mit dem Langschwert, dem Dolch und dem waffenlosen Ringen von mehreren deutschen und italienischen Meistern gelernt und mehrere erfolgreiche und berühmte Schüler ausgebildet. Er sei ein sehr begehrter Fechtlehrer gewesen – so sehr, dass er fünf Mal von anderen Fechtmeistern zum Duell herausgefordert worden sei, und jedes Mal unverletzt und ehrenhaft hervorgegangen sei.\nDer Langschwert Kurs in Köln\nFiores Manuskript Fior di Battaglia („Blume des Kampfes“) wurde circa 1409 verfasst und ist somit die früheste überlieferte Fechtquelle in italienischer Sprache (und eines von den frühesten überlieferten Fechtbüchern überhaupt).\nSein Kampfkunst umfasst alle Nahkampfdisziplinen, die für jemanden aus dem Ritterstand relevant gewesen wären: das unbewaffnete Kämpfen, und das bewaffnete Kämpfen mit dem Stab, mit dem Dolch, mit dem einhändig geführten Schwert und dem Langschwert, mit der Mordaxt, mit der Lanze, in Rüstung und ohne Rüstung, zu Fuß und zu Pferd.\nSchwerpunkt des Langschwert Kurses ist allerdings der Schwertkampf ohne Rüstung.\nNeben dem Waffentraining üben wir im HEMA Köln ebenfalls verschiedene Prinzipien des waffenlosen Kampfs.\nHierbei lernen wir im partnerschaftlichen Training in den Kampfkunst-Kursen sowohl Feinfühligkeit und Koordination als auch die Wahrnehmung. Fühlen, spüren, kommunizieren, antizipieren führen zu einem tiefen Verständnis von uns selbst und fördert die Persönlichkeitsentwicklung durch Stressresistenz und ein gesteigertes Selbstbewusstsein.\nBeim Ringen beginnen wir mit feste Abläufen und Choreografien. Von dort aus geht es im Freikampf um Improvisation. Sanft und kooperativ, ohne Schutzausrüstung.\nSobald die Techniken souverän ausgeführt werden können, kann der freie Kampf beginnen. Hier kommen alle gelernten Fähigkeiten zum Einsatz. Der*die Partner*in bewegt sich nicht mehr in vorgegebenen Abläufen, sondern agiert eigenständig.\nFreikampf und Grappling im HEMA\nHier können dann Schritt für Schritt verschiedene Bewegungs- und Schrittmuster wie Hebel, Würfe, Schläge und Tritte hinzugenommen werden, so dass eine komplette und allumfassende Kampfkunst entsteht.\nDas Ringen wird bei uns als Freikampf trainiert, sodass wir keinem Regelwerk unterliegen. Alle Arten von Techniken wie Hebel, Würfe aber auch Schläge und Tritte werden gelehrt.\nDas freundschaftliche Miteinander steht bei uns im HEMA Köln im Vordergrund, denn nur ein*e Partner*in – nicht ein*e Gegner*in – kann bei der Weiterentwicklung des eigenen Könnens behilflich sein.\nBambini della Spada für Kinder und Jugendliche\nDie Kinder des Schwertes (Bambini della Spada)\nKämpfen mit Schwert und Schild – welches Kind will das nicht einmal ausprobieren? In unseren Kinderkursen lernen die Kinder spielerisch die historische Fechtkunst Europas kennen. Bei uns erleben die Kinder und Jugendlichen den Spaß an Bewegung, den respektvollen Umgang miteinander und ein diszipliniertes Verhalten und das natürlich mit viel Spaß und Spiel.\nDurch den Umgang mit dem Schwert und das Erlernen von historischen Ringer-Techniken, die ähnlich dem Judo sind, wird das Selbstbewusstsein gestärkt. Die Kinder lernen ihren Körper kennen und bekommen so einen neuen Zugang zu sich selbst. Die Konzentrationsfähigkeit und Motorik werden durch die Übungen und Spiele gefördert und sorgen so für eine gute Unterstützung in der wichtigen Entwicklungsphase der Kinder.\nKinder und Jugend Training im HEMA\nNach dem Training sind die Teilnehmenden Kinder und Jugendlichen ausgeglichen und entspannt.\nDas Austoben in einer sicheren Umgebung sorgt für Stressabbau und eine innere Ausgeglichenheit der Kinder und Jugendlichen.\nVon der korrekten Schrittarbeit, über Einzelformen und Partnerübungen bis hin zum freien Kämpfen werden die Kinder und Jugendlichen mit Bedacht und Sorgfalt von unseren Trainer*innen begleitet. Um die hohe Qualität und die Sicherheit ihres Kindes zu gewährleisten werden unsere Kurse von Trainer*innen, die im Bereich des Breiten- und Leistungssports ausgebildet sind, durchgeführt.\nUnser Training ist für Kinder ab ca 8 Jahren geeignet. Vorerfahrung oder Ausrüstung ist nicht notwendig.\nKölner Fechtschul / Seminare\nDie Kölner Fechtschul ist ein Event, an dem alle interresierten HEMAist*innen teilnehmen können. Die Charakteristik einer Open Matt oder eines freien Sparringstreffen soll den verschiedensten Menschen, Stilen und Trainingsleveln einen Ort bieten an dem sich ausgetauscht und zusammen trainiert werden kann.\nRegelmäßig unregelmäßig findet der Event in Köln statt, zu dem alle eingeladen sind.\nDie verschiedenen Waffen vom historischem Ringen, Dolch, über Rapier, Seitschwert, Schwert und Buckler, Langschwert, Spadone oder die Stangenwaffen ist alles vertreten.\nAlle die sich für das Thema historische Kampfkünste interessieren sind herzlich eingeladen.\nIn freundlicher Atmosphäre kann sich über Quellen und Interpretationen ausgetauscht werden oder auch frei miteinander gefochten und gerungen werden. Auch gibt es immer mal wieder Spezials.\nOpen Matt und Seminare der Schwertkunst\nZu Gast bei uns sind auch immer wieder verschiedene HEMA Lehrer*innen. Alle Events und Seminare von uns findet ihr auf Facebook: Events HEMA-Köln und neben vielen anderen Events auch auf dem HEMA.EVENTS Kalender:\nDas Projekt HEMA Köln haben wir 2020 ins Leben gerufen, da wir uns intensiver mit dieser wunderbaren Kampfkunst auseinander setzten wollten, und uns deshalb kurzer Hand entschlossen eine eigene kleine HEMA Gruppe in Köln zu gründen. Mittlerweile hat sich unsere Gruppe vergrößert und wir haben Kontakte zu anderen HEMA Begeisterten aufgenommen. Wir planen, die Schulen in unserer Umgebung mit einzubeziehen, um ein möglichst großen Wissenspool zu generieren. Einmal im Monat treffen wir uns zu einer Open Matt oder einfach einem Training, zu dem alle HEMA Interessierten aus allen Schulen herzlich eingeladen sind.\nWir sind ein bunt zusammen gewürfelter Haufen verschiedenster Menschen, die irgendwann die Begeisterung für den Schwertkampf gepackt hat. Aus den unterschiedlichsten Kampfkünsten bringen wir geballte Erfahrung mit und nehmen uns dabei nicht zu ernst.\nMit viel Motivation und Spaß an der Sache ist es uns ein Anliegen, die Kampfkunst im Allgemeinen und die Historischen & Europäischen Kampfkünste im Besonderen aufleben zu lassen, da wir alle eines gemeinsam haben: Das Wissen um die Wohltuende und unterstützende Wirkung der Kampfkünste in unserem Alltag.\nGetreu dem etwas kitschigen aber zum Schwertkampf passenden Motto: Eine*r für alle und alle für eine*n.\nBambini della Spada\n(Technik & Sparring)\nOpen Matt &\n(Freies Training & Sparring)\nInfos zum Sonntagstreffen:\nDu hast Fragen oder möchtest dich für ein Probetraining anmelden? Nimm Kontakt mit uns auf – per Mail, telefonisch oder persönlich.\nDer schnellste Weg zu uns\nDas Dojo im Wuway Zentrum\nBei gutem Wetter Training im Freien\nWelche Informationskanäle gibt es im Netz?\nEinen der informativsten Youtube Kanäle mit dem Focus auf das Bolognesische Fechten bietet die Schildwache Potsdamm. Hier habt ihr nicht nur komplette Onlinekurse für den Einstieg in den Playlists sondern auch sehr gute Reviews und weitere Inhalte rund um das historische Fechten:\nDer größte und beste deutsche HEMA Podcast wo gibt… Hier findet ihr alles rund um das Thema HEMA und darüber hinaus. Quellenforschung, Trainingsaufbau, Didaktik, Turnierspezifisches und vieles mehr. Stehts aktuell und voll von Wissen. Ihr findet den Podcast auch auf allen Gängigen Podcast Plattformen:\nDie Quelle schlechthin für historische Quellen ist die online Bücherei Wiktenauer. Dort findet ihr sehr viele, um nicht zu sagen fast alle Quellen, mit denen wir uns im historischen Fechten beschäftigen. Einfach mal Marozzo in das Suchfeld eingeben und mit dem Schmökern anfangen:\nIhr seid auf der Suche nach einem HEMA Event in eurer Nähe? Dann ist der HEMA-Eventkalender genau das richtige für euch:\nRingen bei über 30° ist einfach nur ansträngend, selbst wenn es gaaanz easy und freundschaftlich ist. Neu ist das Freie Training und Open Matt immer Freitags. Dort Ringen wir dann auch ausgiebig. Also kommt vorbei wenn ihr in der Nähe seid. Mehr Infos auf unserer Homepage: 🔗 www.Hema-koeln.de 📧 info@hema-koeln.de ☎ 0157-73553958\t... See MoreSee Less\nLangschwert Training in Köln. Es kommt was neues 🤫 seid gespannt. Donnerstags 18:30 und Freitags die offene Halle/Freies Training. Kommt gerne zu einem Probetraining vorbei 🔗 www.Hema-koeln.de 📧 info@hema-koeln.de ☎ 0157-73553958 #fiore #dallagocchie #marozzo #sidesword #rapier #longsword #dagger #ringen #wrestling #Hema #historicalfencing #historischesfechten #fencing #fechten #swordfighting #schwertkampf #sword #martialarts #historicalmartialarts #medieval #medievalcombat #larp #historicaleuropeanmartialarts #escrime #escrima #scherma #fencingclub #fencinglife #happyhemapeople #hemaköln\t... See MoreSee Less\nEine sehr empfehlenswerte Podcast Folge aus dem Archiv des Schwertgeflüster - Der HEMA Podcast. Wie kann die Vereinskultur aussehen, damit Männer und Frauen gemeinsam Spaß am Sparring haben? open.spotify.com/episode/6lDm5LwHvFWfVr4HPlxmzB?si=QrqGHz_BSPKumIRk_dpTwQ&utm_source=copy-linkListen to this episode from Schwertgeflüster - Der HEMA Podcast. Kampfkunst trifft Geschichte. on Spotify. Wir diskutieren mit Amelie Eilken von Hammaborg wie Männer und Frauen erfolgreich zusammen trainieren können und woran das gemeinsame Training scheitern kann. Amelie hat bei Hammaborg eine M... ... See MoreSee Less\nSchwert Kindertraining in Köln. Gegen Schilde ist es clever auf die Beine zu zielen. An der sauberen Technik arbeiten wir noch 😉💪 🔗 www.Hema-koeln.de 📧 info@hema-koeln.de ☎ 0157-73553958\t... See MoreSee Less\nIhr wollt endlich realistische Schwertkampf-Choreographien in Filmen und auf den Bühnen sehen? Dann habe ich was für euch! @Olaf Küppers stellt sich und seine Projekte auf seiner neuen Facebook Seite vor: SwordPlayer Also unterstützt Ihn und sein Vorhaben mit vielen Likes und Shares 😉\t... See MoreSee Less\nProbelauf der Montante Turnierregeln von @Jan Gosewinkel . Szenario: Entkommen aus einer engen Gasse. 🔗 www.Hema-koeln.de 📧 info@hema-koeln.de ☎ 0157-73553958\t... See MoreSee Less


veröffentlicht am 17.10.2016 um 14:58 Uhr\nDie Strompreise könnten nach einem leichten Rückgang im Vorjahr wieder ein Rekordniveau erreichen. (© Foto: Ralf Hirschberger)\nHamburg - Die Stromverbraucher in Deutschland müssen im kommenden Jahr durchweg mit höheren Preisen rechnen. Die Erhöhungen werden jedoch regional sehr unterschiedlich ausfallen.\nFrankfurt/Main - Der Dax hat wieder sein Rekordhoch ins Visier genommen. Trotz des weiter starken Euro und der...\nLebensmittel sollen nicht zu teuer sein. Doch was bedeutet das für den Umgang der Bauern mit Tieren und Böden...\nWashington - Die US-Börsenaufsicht SEC hat erneut Zweifel an Kryptowährungen wie Bitcoin angemeldet und Hoffnungen...


Wanddeko – was tun mit einer leeren Wand?! - Whitelilystyle\nDu möchtest einen Raum neugestalten, hast tolle Möbel gekauft und ein paar Dekoartikel. Aber eine Wand ist zu langweilig und noch teilweise leer? Wie wäre es mit schönen Bildern! Mit toller Wanddeko wird ein Raum zu einem Zuhause. Immer beliebter wird der Trend, Kunstdrucke oder Urlaubsposter zu verwenden. Die Poster mit Rahmen können zur Gestaltung einer Bilderwand genutzt werden oder du probierst die Wandgestaltung ohne Bohren aus, dazu gebe ich dir gleich ein paar Tipps. Heute zeige ich euch, wie ich meine Räume mit Postern und Bilderrahmen von Poster Store verschönert habe.\nFür meine Wanddeko brauche ich keinen Hammer und Bohrer, denn es gibt einige alternative Möglichkeiten. Gerade bei Mietwohnungen oder auch Neubauten möchte man in der Regel nicht zu viele Löcher in die Wände machen. Also mein Tipp, holt euch Rahmen, die groß genug sind und stellt es auf eine Kommode, Sideboard oder einen Beistelltisch. Die leere Wand wird gefüllt und du hast im Nachhinein weniger zu tun. Wenn du stilvolle und erschwingliche Poster und Rahmen suchst, dann schau bei Poster Store vorbei, dort gibt es auch jede Menge Inspiration zur Wohnraumgestaltung.\nPoster Trends 2021\nZwei große Poster Trends sieht man im Interior Bereich immer häufiger – Urlaubsszenen und Fine Line Art. Mit Fine Line Art kann man einen Raum kunstvoll in Szene setzen, der minimalistische Trend ist im Interior Bereich sehr groß. Urlaubsgefühle sollen Poster mit schönen Strand oder Städtemotiven hervorrufen. Da wir viel Zeit Zuhause verbringen und die meisten keinen Urlaub gemacht haben, kann man immerhin so vom letzten oder nächsten Urlaub träumen.\nAlle Poster und Rahmen, die ich als Wanddeko genutzt habe sind von Poster Store, hier gibt es eine große Auswahl an Bildern verschiedener Themen und Kategorien für jeden Geschmack. Jeden Dienstag gibt es eine Neukollektion an hochwertigen Drucken und einzigartigen Motiven, wobei alle Poster auf hochwertigem und nachhaltig produziertem Papier gedruckt werden.\nIn liebevoller Zusammenarbeit mit Poster Store!\nInnenausbau mit Holz – Was du wissen solltest und …\nPoster Store, Poster Trends 2021, Wanddeko, Wanddeko ohne Bohren, was tun mit einer leeren Wand?!, Was tun mit leeren Wand\nVorheriger Beitrag Kostenlose Online Sportkurse – mehr Sportmotivation für’s Training Zuhause\nNext Post Manteltrend 2021 – Diese Modelle von H&M sehen teurer aus als sie sind!


Exchange 2019 Neuinstallation - Page 5 - MS Exchange Forum - MCSEboard.de\nBy pipen, November 9, 2019 in MS Exchange Forum\nIch kenne Kaspersky nicht, aber ohne Empfängerprüfung wirds nicht gehen. Und die Empfängerprüfung, die Exchange seit 2013 anbietet funktioniert nicht bzw. nicht sinnvoll. Also wenn Kaspersky da nix bietet, wirst du wohl auf ein Alternativprodukt umsteigen müssen (solltest du jedenfalls).\nPS: "wir haben einen neuen Server bekommen. Dieses Wochenende ist die Umstellung." Ist heute schon Wochenende? :p\nEdited November 14, 2019 by NorbertFe\nAlso selbst wenn das richtig wäre (was ich ganz stark bezweifle), dann wär das für mich ein Grund das Produkt in die Tonne zu werfen. Sowas will man ja wohl kaum von Hand pflegen müssen.\nwäre ein Spam Proxy vor dem Exchange nicht eine bessere Lösung?\nDer könnte den Spam direkt vor dem Exchange blockieren.\nvor 5 Minuten schrieb pipen:\nIch habe grade mal die Knowledgebase überflogen und nur die "Whitelist" gefunden: https://help.kaspersky.com/KS4Exchange/9.2/en-EN/60932.htm\nRecipients' addresses specified in the form of Active Directory objects are excluded from the anti-spam scan according to the following rules:\nDas ist aber irgendwie do*f. ;)\nAnsonsten findet sich da zu "Empfängerfilterung / recipient filter" nichts was in die Richtung geht / gehen könnte.\nHabs gefunden, in der Exchange Toolbox können die Warteschlangen bearbeitet werden.\nJetzt habe ich noch eine Frage, wenn Abends ca. 23Uhr keine Mail gesendet wird, soll die Ausgabe Get-Queue | ft dann nichts ausgeben, oder steht der SmtpDeliveryToMailbox dann auch drin?\nvor 1 Stunde schrieb pipen:\nJa und? Per Powershell auch, aber was hilft dir das für die Zukunft?


Die 10 besten Apartments in Speyer, Deutschland | Booking.com\nDie besten Apartments in Speyer\nSuchen Sie nach etwas Fabelhaftem? Gäste, die kürzlich da waren, lieben Speyer!\nApartments in Speyer\nVon Apartments bis Hotels - mehr Unterkünfte in Speyer\nHotels Ferienwohnungen Ferienunterkünfte Bed & Breakfasts\nDie 10 besten Apartments in Speyer, Deutschland\nWir empfehlen diese tollen Ferienwohnungen in Speyer\n9,2 Hervorragend 223 Bewertungen\nDas Boardinghouse Speyer erwartet Sie in Speyer, 3,9 km vom Dom von Speyer entfernt. An der Unterkunft stehen Ihnen kostenfreie Privatparkplätze zur Verfügung.\nEinige Unterkünfte bieten einen Sitzbereich und/oder einen Balkon. Jede Unterkunft umfasst zudem eine Küche mit Mikrowelle, Backofen und Toaster. Das Boardinghouse Speyer bietet kostenfreies WLAN in der gesamten Unterkunft.\nDiese Ferienwohnung buchen\n9,6 Außergewöhnlich 155 Bewertungen\nAlle Apartments der Unterkunft Spira House sind mit einem gemütlichen Wohnbereich ausgestattet. Hier finden Sie ein großes Sofa und einen Flachbild-Sat-TV vor. Für weiteren Komfort sorgen eigene Badezimmer mit einer Dusche, Pflegeprodukten und einem Haartrockner.\nJedes Apartment umfasst zudem eine gut ausgestattete Einbauküche, damit Sie sich selbst Mahlzeiten zubereiten können. Einige Apartments verfügen auch über einen Geschirrspüler. Umfassende Wäschemöglichkeiten sind ebenfalls vorhanden.\n9,4 Hervorragend 72 Bewertungen\nDas Hagebutte liegt 6 km von der Kathedrale Speyer in Speyer entfernt und bietet Unterkünfte mit einem Flachbild-TV. WLAN nutzen Sie kostenfrei.\nDie Stadthalle Speyer liegt 5 km vom Apartment entfernt. Vom Flughafen City-Airport Mannheim trennen Sie 32 km.\nDieses Apartment liegt in einer ruhigen Straße ohne Durchgangsverkehr in Speyer, nur 500 m von der Kathedrale und 5 Gehminuten von vielen Restaurants, Bars und Cafés entfernt. Das Domizil Domblick Speyer kostenfreies WLAN und kostenfreie Parkplätze.\nDie Unterkunft verfügt über einen Sitzbereich, einen Essbereich, eine Küche und ein eigenes Bad. Handtücher und Bettwäsche werden in diesem Apartment gestellt. Die komfortablen Betten bieten hochwertige Kaltschaummatratzen auf höhenverstellbaren Lattenrosten.\n9,5 Außergewöhnlich 74 Bewertungen\nDie Ferienwohnung Klatschmohn in Speyer bietet Unterkünfte mit kostenfreiem WLAN, 1,8 km von der Kathedrale von Speyer und 1 km von der Stadthalle Speyer entfernt. In diesem Apartment haben Sie Zugang zu einer voll ausgestatteten Küche.\nDas Apartment verfügt über einen Flachbild-Sat-TV und ein Wohnzimmer.\n9,7 Außergewöhnlich 47 Bewertungen\nDas Rheintor-Apartment liegt in Speyer, 1,8 km von der Kathedrale von Speyer und 2,8 km von der Stadthalle Speyer entfernt. Es bietet Unterkünfte mit Annehmlichkeiten wie kostenfreiem WLAN und einem Flachbild-TV. In diesem Apartment haben Sie Zugang zu einer voll ausgestatteten Küchenzeile.\nDas Apartment verfügt über 1 Schlafzimmer und 1 Bad mit einem Haartrockner.\nDas Feworeinhard ist ein Apartment in Speyer, 3,8 km von der Kathedrale von Speyer entfernt. Hier profitieren Sie von kostenfreiem WLAN und Privatparkplätzen an der Unterkunft.\nDie Unterkunft verfügt über einen Essbereich und eine Küche mit einer Mikrowelle und einem Toaster. Handtücher und Bettwäsche werden in dieser Unterkunft zur Selbstverpflegung gestellt. Das eigene Bad ist mit einer Badewanne oder einer Dusche ausgestattet.\nDieses Apartment befindet sich in Speyer in 500 m Entfernung von der Kathedrale und bietet Ihnen einen Balkon. Die Unterkunft befindet sich 1,2 km von der Stadthalle Speyer entfernt und bietet kostenfreie Privatparkplätze. WLAN nutzen Sie in allen Bereichen der Unterkunft kostenfrei.\nDer nächstgelegene Flughafen ist der 18 km von der Ferienwohnung am Eselsdamm entfernte City-Airport Mannheim.\n9,4 Hervorragend 62 Bewertungen\nDieses stilvolle Apartment genießt eine zentrale Lage in Speyer, 600 m vom Speyerer Dom und 100 m vom Stadttor Altpörtel entfernt. Es bietet Ihnen kostenfreies WLAN und einen schönen Blick auf die Stadt.\nDen nächsten Supermarkt erreichen Sie vom Apartment aus nach 25 m. Verschiedene Restaurants, Cafés und Bars laden in der Hauptfußgängerzone von Speyer, die Sie von der Ferienwohnung Speyer aus nach 5 Gehminuten erreichen, zu einem Besuch ein.\nDie nur 7 Gehminuten vom Speyerer Dom entfernte Weinstube Schwarzamsel bietet kostenfreies WLAN sowie Unterkünfte mit einer Küche, einem Sitzbereich und einem Flachbild-TV.\nIn der Umgebung können Sie Radfahren und Angeln. Das Apartment bietet Wassersportmöglichkeiten.\nAlle Ferienwohnungen in Speyer anzeigen\nAuf der Suche nach einer Ferienwohnung?\nFerienwohnungen in Speyer suchen\nFerienwohnungen in Speyer, die diesen Monat am häufigsten gebucht wurden\n67346 Speyer, Deutschland,\nDiese Ferienwohnung in Speyer wurde schon 47-mal gebucht.\n8,0 Sehr gut 62 Bewertungen der Ferienwohnung\nDiese Ferienwohnung in Speyer wurde schon 32-mal gebucht.\n9,2 Hervorragend 223 Bewertungen der Ferienwohnung\nDiese Ferienwohnung in Speyer wurde schon 19-mal gebucht.\n9,4 Hervorragend 72 Bewertungen der Ferienwohnung\nDiese Ferienwohnung in Speyer wurde schon 14-mal gebucht.\n8,9 Fabelhaft 112 Bewertungen der Ferienwohnung\nSpira House 4 Sterne\nDiese Ferienwohnung in Speyer wurde schon 13-mal gebucht.\n9,6 Außergewöhnlich 155 Bewertungen der Ferienwohnung\nDiese Ferienwohnung in Speyer wurde schon 12-mal gebucht.\n9,5 Außergewöhnlich 74 Bewertungen der Ferienwohnung\nGenießen Sie das Frühstück in einer Ferienwohnung in Speyer!\nDas Boardinghouse Speyer erwartet Sie in Speyer, 3,9 km vom Dom von Speyer entfernt. 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Die Wohnung als solches und die Gastgeber\nSparen Sie bei Ferienwohnungen in Speyer – günstige Optionen verfügbar!\nDas Hagebutte liegt 6 km von der Kathedrale Speyer in Speyer entfernt und bietet Unterkünfte mit einem Flachbild-TV. WLAN nutzen Sie kostenfrei. Eine Super Wohnung, sehr komfortabel, sehr sauber. Bestens zu empfehlen. Es fehlt an nichts.\nDie Ferienwohnung Klatschmohn in Speyer bietet Unterkünfte mit kostenfreiem WLAN, 1,8 km von der Kathedrale von Speyer und 1 km von der Stadthalle Speyer entfernt. Sehr schöne und gut ausgestattete Ferienwohnung mit nettem Kontakt. Absolut zu empfehlen!\nDie Apartments Maximilian liegen 1,6 km vom Speyerer Dom und weniger als 1 km von der Stadthalle entfernt in Speyer. Sie wohnen in Unterkünften mit einer Küchenzeile. 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Kraftwerk Wilhelmshaven: Bauverzögerungen und Kostensteigerungen\n14.02.2012, 09:36 Uhr\nBauverzögerungen und Kostensteigerungen\nDirekt neben dem bestehenden Steinkohlekraftwerk des Energieriesen E.on am Rüstersieler Groden in Wilhelmshaven lässt derzeit ein Investorenkonsortium um die Deutschland-Tochter der französischen GDF Suez und die BKW AG aus der Schweiz ein modernes Steinkohlekraftwerk errichten. Doch die BKW AG vermeldet Schwierigkeiten.\nAuch wenn es kaum jemand weiß: Die BKW AG mit Sitz im schweizerischen Bern ist im Nordwesten ein alter Bekannter. Bereits beim letztlich aufgegebenen Steinkohle-Kraftwerksprojekt im emsländischen Dörpen war die BKW AG (24,9 Prozent der Anteile) als Minderheitsanteilseigner beteiligt (business-on.de berichtete). Mehrheitsgesellschafter war nach einem Gesellschafterwechsel bei der eigens für das Projekt gegründeten STKW Dörpen GmbH zuletzt der auch an der Oldenburger EWE AG beteiligte Energieriese EnBW (75,1Prozent).\nAuch beim Kraftwerksprojekt in Wilhelmshaven tritt BKW (33 Prozent der Anteile) als Minderheitsgesellschafter auf. Das finanzielle Investitionsvolumen der Schweizer am Kraftwerksprojekt in Wilhelmshaven beläuft sich bislang auf rund 430 Millionen Euro.\nBeim Einbau von Stahlelementen ist es auf der Kraftwerksbaustelle am Rüstersieler Groden allerdings zu Schwierigkeiten gekommen. Der Hersteller bemühe sich darum, Lösungen auszuarbeiten, wird ein Sprecher des Unternehmens in den Medien zitiert. Der Umfang der zu erwartenden Mehrkosten ist demnach unklar.\nAnstelle des erwarteten Gewinns in Höhe von umgerechnet 82,7 Mio. Euro wird die BKW AG allerdings nach eigenen Angaben im Geschäftsjahr 2011 einen Verlust ausweisen müssen. Grund hierfür seien Wertberichtigungen und Rückstellungen im Umfang von umgerechnet rund 250 Mio Euro . Nach Berücksichtigung der Steuereffekte verringere sich der bisher erwartete Reingewinn von 82,7 Mio um rund 206,7 Mio. Euro auf einen erwarteten Reinverlust von umgerechnet rund 124 Mio Euro. Laut unbestätigten Medienberichten soll ein Großteil der Wertberichtigungen und Rückstellungen der BKW AG auf das Kraftwerksprojekt in Wilhelmshaven entfallen. Neben dem Kraftwerksprojekt am Rüstersieler Groden ist BKW auch an zwei italienischen Gaskombikraftwerken in Livorno Ferraris und Tamarete als Minderheitsgesellschafter beteiligt.\nDie Deutschland-Tochter von GDF Suez als Mehrheitsgesellschafterin am Wilhelmshavener Kraftwerksprojekt bezifferte die Mehrkosten bislang noch nicht. Auch der Fertigstellungstermin steht noch nicht fest. Eigentlich sollte das moderne Steinkohlekraftwerk im Jahr 2012 in Betrieb gehen (business-on.de berichtete).\nFinden Sie weitere Artikel zum Thema "Kraftwerksprojekt" - jetzt Suche starten:


(getauft am 03.02.2021)\nEin neues Hochdruckgebiet bildete sich im Laufe des 03. Februars über der Grönlandsee. Auf der Rückseite eines abziehenden Tiefdruckgebiets über dem Nordmeer war es zu einem Druckanstieg gekommen. Verschiedene Wettermodelle prognostizierten für die kommenden Tage die Etablierung einer ausgedehnten Antizyklone über dem Nordostatlantik und Nordeuropa. Das sollte nicht ohne Folgen für das Wetter in Mitteleuropa bleiben, da bei dieser Konstellation sehr kalte Luftmassen aus Norden und Osten herangeführt werden. Und so wurde das bis dato namenloses Hoch an jenem Tag in der Prognose für den darauffolgenden Tag von den Meteorologen der Berliner Wetterkarte auf den Namen GISELA getauft.\nAm Morgen des 04. Februars konnte die Hochdruckzelle erstmals in der Berliner Wetterkarte mit Lage über dem Europäischen Nordmeer, etwa zwischen Grönland und Skandinavien analysiert werden. Es besaß gleich zwei Zentren. Das Hauptzentrum befand sich nördlich der Nordmeerinsel Jan Mayen, hier herrschte ein Luftdruck von knapp über 1030 hPa. Das schwächere Randzentrum hingegen ragte keilförmig bis nach Südskandinavien, wo der Luftdruck bei etwas über 1025 hPa lag. Der Einfluss der Antizyklone umfasste an jenem Tage hauptsächlich das Europäische Nordmeer, schloss aber Island, Spitzbergen, die Shetlandinseln sowie Teile Skandinaviens mit ein. Angereichert mit höhenkalter Luft, die Temperaturen lagen über dem Atlantik in einer Höhe von 1500 hPa bei grob -10°C, bildeten sich über dem Meer die für Kaltluft typischen flachen Quellwolken und Stratocumuluswolken. Dagegen zeigte sich der Himmel über Skandinavien verbreitet wolkenarm. In Island wurden Temperaturen knapp über 0 Grad gemessen (Reykjavík +2°C), in Norwegen und Schweden bei Vorhandensein einer Dutzenden Zentimeter mächtigen Schneedecke meist -5 bis -10°C (z.B. Oslo -10°C) und damit genauso viel wie auf Spitzbergen (Longyearbyen -5°C). Im Kontrast zum Hochdruckeinfluss über dem äußersten Norden Europas standen eine ganze Reihe von Tiefdruckgebieten über dem restlichen Atlantisch-Europäischen Raum, wie etwa Tief REINHARD über den Britischen Inseln, Tief SIEGBERT über Mitteleuropa, Tief QUIRIN über dem Baltikum/Nordwestrussland sowie weitere Tiefs bei Grönland und Neufundland. Dementsprechend wechselhaft zeigte sich das Wetter hier. Beispielsweise meldete London an jenem 04. Februar nach nächtlichem Nebel wiederholt Regen und Regenschauer bei Höchstwerten von milden +12°C.\nAm darauffolgenden 05. Februar konnte sich der Hochdruckeinfluss von Skandinavien weiter ostwärts nach Finnland und ins Baltikum ausdehnen, während das Hoch GISELA mit seinen Zentren weiter über dem Nordmeer und Südskandinavien verblieb. Dementsprechend ähnlich zeigte sich das Wetter gegenüber dem Vortag etwa über Skandinavien, wo gebietsweise länger die Sonne schien, teils aber auch Schneeschauer vorüberzogen. Diese bildeten sich als die aus Norden einströmende, arktische Kaltluft, mit Temperaturen von unter -10 bis -15°C in 1500 m Höhe, über das verhältnismäßig warme Wasser der Norwegischen See (Oberflächentemperaturen +5 bis +8°C) bzw. der noch eisfreien Barentssee (+3 bis +5°C) streifte und so Feuchtigkeit aufnehmen konnte. Beispielsweise meldete die Station Uppsala in Mittelschweden seit dem Vortag wiederholt leichte Schneeschauer und Schneefälle. Dabei wurden Mengen von 2 l/m² innerhalb von 12 Stunden registriert. Abgesehen davon blieb es über der Skandinavischen Halbinsel eisig kalt, mit Höchstwerten von -6°C in Riga und Stockholm, -11°C in Trondheim und Tallinn und -13°C in Helsinki. In der Nacht sackten die Temperaturen je nach Bewölkungssituation in den strengen Frostbereich, etwa in Helsinki auf -16°C, in Trondheim auf -18°C oder in St. Petersburg auf -20°C. Unterdessen kräftigte sich die Antizyklone weiter, wobei der Luftdruck im Zentrum von 1035 hPa am frühen Morgen des 05.02. auf knapp über 1045 hPa bis zum Tagesende stieg. Allerdings konnte sich Hoch GISELA kaum weiter südwärts nach Nordwest- oder Mitteleuropa durchsetzen. Ursache war das quasi stationäre, hochreichende Tief REINHARD über den Britischen Inseln (als Gegenspieler). Dieses Druckmuster war bis in höhere Luftschichten ausgeprägt, in der Meteorologie spricht man hierbei von einem "High-over-low". Solche Strukturen stellen eine Anomalie im Strömungsfeld dar und gehen oftmals mit anhaltenden Wetterphänomenen einher, wie sommerliche Hitzewellen oder aber kräftige Kaltlufteinbrüche im Winter.\nAuch am 06. Februar hielt an der Ostflanke des Hochs der Zustrom arktischer Luftmassen aus polaren Breiten über dem hohen Norden Europas an, wobei sich die Strömung weiter intensivierte und nach Osteuropa ausgriff. Das Maximum dieses Kaltlufttransports, mit Temperaturen von unter -25°C in 1500 m Höhe, wurde in einem Streifen von der Barentssee über Nordwestrussland bis nach Westrussland erreicht. Hier kam es ebenfalls gehäuft zu Schneeschauern, bei Temperaturen von etwa -13°C in Minsk, -15°C in Moskau oder -19°C in Wologda. Die Kaltluftzufuhr wäre sicher weniger kräftig ausgefallen, hätte Hoch GISELA nicht Unterstützung von Tief SIEGBERT bekommen, welches zu jenem Zeitpunkt mit Kern nahe des nördlichen Ural lag. Denn Luftmassen drehen sich immer im Uhrzeigersinn um das Hochdruckzentrum und gegen den Uhrzeigersinn um den Tiefdruckkern. Auch über Deutschland sickerte aus Skandinavien nun ganz allmählich höhenkalte Luft ein. Dies zeigte sich zuerst in höheren Luftschichten und zunächst über Schleswig-Holstein und Mecklenburg-Vorpommern. Radiosondenaufstiege am Observatorium in Greifswald zeigten zwischen 01 Uhr und 07 Uhr MEZ eine Temperaturabnahme von -9,5°C auf -13,7°C auf der 850 hPa-Druckfläche (was einer Höhe von circa 1500 m entspricht). Dagegen waren über dem Süden und der Mitte Deutschlands sehr milde Luftmassen anzutreffen, die am Rande von Britannientief REINHARD an den Vortagen aus Südeuropa eingeflossen waren. Am Observatorium auf dem Hohenpeißenberg in Bayern, auf 977 m Höhe gelegen, wurden Temperaturen von bis zu +9,3°C gemessen. Und so baute sich langsam eine Grenzwetterlage über Mitteleuropa, respektive Deutschland auf. Während zum Beispiel in Greifswald, unter Einfluss von Hoch GISELA II bei 6 Sonnenstunden Temperaturen von maximal -0°C gemessen wurden, zeigte sich das Wetter über Teilen Norddeutschlands, in Nähe zur Luftmassengrenze verbreitet wolkig-grau, wenngleich trocken. Die Wetterstation am Flughafen Bremen registrierte starke bis dichte Bewölkung aus tiefhängenden Stratocumuluswolken (auf 300-900 m Höhe), bei Temperaturen zwischen -1°C am Morgen und +0°C am Nachmittag. Noch weiter südlich schloss sich ein breiter Niederschlagsstreifen zwischen Benelux, den Deutschen Mittelgebirgen, Böhmischen Becken und Karpaten an. Auf der kalten Seite fiel Schnee, auf der warmen Regen und gefrierender Regen und im Übergangsbereich auch Schneeregen. Dass Niederschläge fielen, war Hoch GISELA allerdings nur indirekt geschuldet, denn die feuchtwarme Luft, die sich über die kalte Subpolarluft schob und die Niederschläge auslöste wurde ja durch Tief REINHARD erst herangelenkt.\nTrotzdem die Hochdruckzelle solange sie existierte mit Zentrum quasistationär über dem Nordmeer blieb (Luftdruck am Morgen des 07.02. um 1040 hPa), was auch auf GISELA II mit Teilzentrum über Südskandinavien zutraf (Luftdruck knapp über 1035 hPa), reichten Ausläufer des Hochs immer mal wieder keilförmig südostwärts über Skandinavien und das Baltikum bis nach Osteuropa. So auch am 07. Februar, als sich vorübergehend ein drittes Zentrum über dem südlichen Baltikum bildete (Luftdruck bei etwas über 1025 hPa). Auf das allgemeine Wetter über Nordeuropa hatte dies nur geringen Einfluss. Vielfach freundliches, aber frostiges Winterwetter sollte es am 07. und 08. Februar weiter über Skandinavien geben und hier vor allem über Mittel- und Südschweden sowie entlang der Westküste Norwegens. Dort wo die höhenkälteste Luft einströmte war es insgesamt wolkiger, aber nicht minder frostiger und einzelne Schneeschauer zogen vorüber, wie etwa in Finnland und dem Baltikum. Diese Zweiteilung zeigte sich auch anhand der Wettermeldungen etwa des 07. Februar. Im südschwedischen Arvika etwa schien bei nahezu wolkenlosem Himmel längere Zeit die Sonne und bei einer flachen Schneedecke von 5 cm stiegen die Temperaturen nach einem nächtlichen Minimum von -18°C auf knapp -5°C am Tage. Dagegen zeigte sich der Himmel über Helsinki meist stark bewölkt, mit leichtem Schneefall am Vormittag und Maxima von ebenfalls -5°C. An der Messstation Kaisaniemi, dem Botanischer Garten der Stadt, lag der Schnee beispielsweise 30 cm hoch. Nachts wurde es auch hier sehr frostig mit -16°C.\nUnterdessen intensivierte sich die Grenzwetterlage über Deutschland und den Benelux-Staaten, da zum einen Hoch GISELA mit Lage und Intensität stabil blieb und zum anderen von der Iberischen Halbinsel und Frankreich ein neues Tief (TRISTAN) aufzog, was einen weiteren Schwall feucht-warmer und labil geschichtete Luft mit sich führte. Die Ereignisse rund um den 06./07./08.02 dürften dem einen oder anderen noch in Erinnerung geblieben sein. Ergiebige Schneefälle, gleichzeitig stürmischer Wind führten zu Glätte, Schneeverwehungen und Verkehrschaos über der Mitte Deutschlands aber auch in den Niederlanden und Teilen Belgiens. Der Wind übrigens entstand infolge der starken Druckunterschiede zwischen Tief TRISTAN, welches am Mittag des 07.02. mit Zentrum über Luxemburg anzutreffen war (Luftdruck kleiner 995 hPa) und Hoch GISELA II, welches weiter über Südskandinavien lag (Luftdruck über 1035 hPa). Dabei betrug der Luftdruckunterschied zwischen beiden Systemen rund 40 hPa auf eine Entfernung von 1300 km, was einem Luftdruckgradienten von rund 3 hPa je 100 km entspricht. So blies am Rande von Hoch GISELA ein stürmischer Ostwind, der zu dieser Zeit verbreitet für starke bis stürmische Böen im Norddeutschen Tiefland bis nach Polen und Dänemark sorgte. An Nord- und Ostseeküste wurden auch Sturmböen sowie einzelne orkanartige Böen registriert, wie zum Beispiel am Kieler Leuchtturm am Nachmittag des 07.02. (15 Uhr) mit 117 km/h.\nAls Kontrast dazu zeigte sich das Wetter auf Island nahe dem Hochdruckzentrum zwischen dem 06. und 08. Februar beinahe schon harmlos. Zwar zogen mit einer bodennahen östlichen Strömung einzelne Schneeschauer über die Vulkan- und Geysir-Insel, trotzdem überwog ein freundlicher Wettercharakter mit längerem Sonnenschein und allgemein nur schwachen Windverhältnissen. Die Temperaturen lagen tagsüber meist zwischen +0 bis +3°C, nachts sanken sie auf -0°C bis -5°C (in Küstennähe hielten sich leichte Plusgrade). Auch der Wind wehte über Island allgemein nur schwach bis mäßig aus Ost, in Küstennähe und an exponierten Stellen auch frisch im Mittel, was für isländische Verhältnisse als sehr ruhig bezeichnet werden dürfte. Beispielsweise meldete die Station am Flughafen Reykjavík nach einer frostfreien Nacht (Minima +0,5°C) am 07. Februar Temperaturen von bis zu +3,3°C. Dazu wehte ein nur schwacher Wind, der tagsüber bis zu 18,5 km/h, also Stärke 3 erreichte.\nAm 08. Februar konnten dann auch die Britischen Inseln vom schwachen Hochdruckeinfluss durch Hoch GISELA profitieren, wohin sich die Antizyklone keilförmig ausdehnte, nachdem Tief TRISTAN ostwärts abgezogen war. Nach einem sehr wechselhaften, regnerischen und windigen Abschnitt kam es hier zu einer Wetterberuhigung, gleichzeitig aber auch zu einem wahren Temperatursturz. Hatten die Temperaturen etwa in London zwei Tage zuvor noch bei +8/+9°C gelegen, stellte sich nun verbreitet Dauerfrost über dem Vereinigten Königreich ein (London max. -3°C). Zudem zogen zeit- und gebietsweise Schneeschauer vorüber. Im Osten Englands lag verbreitet Schnee, in Andrewsfield nordwestlich von London wurden am Morgen des 09.02. Schneehöhen bis 28 cm gemessen. Nichtsdestotrotz gab es auch viele Regionen, wo längere Zeit die Sonne schien, vor allem im Norden der Britischen Inseln (Edinburgh 5 Stunden, Belfast 6 Stunden).\nUnterdessen kam es zu einer Änderung in der Druckverteilung über dem nördlichen europäischen Atlantikgebiet. Über Grönland hatte sich über die zurückliegenden Tage ein neues Hoch gekräftigt, welches in den Frühstunden des 09.02. als abgeschlossene Antizyklone einen Luftdruck von über 1045 hPa erreichte. Hoch GISELA verschmolz mit diesem Druckgebilde zu einer breitgefächerten Hochdruckzone, die sich im Folgenden über das Nordmeer und Skandinavien bis Osteuropa erstreckte. Das Grönlandhoch fungierte als neues Hauptzentrum, Hoch GISELA, darin eingebettet, befand sich mit seinen Zentren östlich von Island sowie über den Skandinavischen Alpen (Luftdruck jeweils knapp über 1030 hPa). Damit ging das Hochdruckwetter an jenem 09. Februar über Nordeuropa in eine Verlängerung. Mehr noch, dadurch dass Schneesturm TRISTAN mittlerweile ins östliche Mitteleuropa, respektive Rumänien, abgezogen war, konnte sich das freundliche, aber kühle Winterwetter weiter über die Britischen Inseln bis nach Benelux, Deutschland, Polen bis hin zu den Alpen ausbreiten. Über Groß Britannien setzte sich das leicht wechselhafte, untypisch frostige Winterwetter mit lokal längerem Sonnenschein fort. In Liverpool zeigte das Thermometer trotz knappen 5 Sonnenstunden nicht mehr als -1°C. Aber auch über den Niederlanden, Belgien sowie Nordrhein-Westfalen, Niedersachsen bis nach Thüringen und Sachsen zeigte sich nach Abzug letzter Schneefälle vermehrt die Sonne, wobei es quasi überall eisig-frostig blieb (Amsterdam -2°C, Hannover -6°C). Vielerorts lag eine mehrere Zentimeter dicke Schneedecke, was einen zusätzlichen Kühl-Effekt auf die Temperaturen hatte. Mit 30-40 cm in einem Streifen zwischen Münsterland, Weserbergland, Harz und Thüringer Wald wurden nicht nur die höchsten Schneedecken seit geraumer Zeit gemessen, sondern auch rekordverdächtig niedrige Höchsttemperaturen unter -10°C (Maxima in Weimar -12°C). Selbst im Ruhrgebiet lagen verbreitet 5-10 cm und höher als -5°C stieg das Thermometer selten (Essen -5°C).\nDa es in der sich anschließenden Nacht zum 10. Februar infolge des Hochdruckeinfluss verbreitet sternenklar war, sanken die Temperaturen bis in den strengen Frostbereich. Im Rheinland sackte das Thermometer etwa in Düsseldorf auf -13°C, über der Mitte Deutschlands mit ihren Mittelgebirgen lagen die Tiefstwerte noch niedriger, Jena meldete -19°C, Eisenach -21°C und Göttingen gar -23°C. Es sollte die kälteste Nacht des Winters werden. In den folgenden Stunden und Tagen zergliederte sich die Hochdruckzone über dem Nordostatlantik weiter. So wurde Hoch GISELA am Morgen des 10. Februar letztmalig in der Berliner Wetterkarte analysiert. Es befand sich zu diesem Zeitpunkt mit seinen Zentren über den Färöer-Inseln (Luftdruck bei 1027 hPa) und den südlichen Skanden (Fagernes, Südnorwegen 1026 hPa). Während die Antizyklone im Tagesverlauf mehr und mehr aus dem Druckfeld verschwand, gewann ein über Mittel-Skandinavien sich neu aufbauendes Hoch (HELIDA) die Oberhand. Es sollte in den Folgetagen südwärts nach Mitteleuropa ziehen und für eine längere Episode freundlich-frostigen, aber ruhigen Winterwetters sorgen.