回首頁 > 關於我們 > 必威我眼中的現代電動汽車發展和Tesla電動車Tesla\n如果說2008年是生死存亡的一年，2009年就是奇跡不斷的一年，給力哥Elon的戰斗力終於爆表。首先2008年快速啟動的model S計劃進展順利，設計、測試和樣機制造在2009年上半年順利完成，對於一個第一款產品還未完全成熟的年輕汽車公司來說，不得不說團隊的創造力和執行力都是驚人的。在眾多的批評和質疑聲中，朱棣文和奧巴馬參觀了工廠，Tesla成功拿下4.65億美金的貸款用於生產Model S並且開始接受客戶的定金。另外公司還需要6千萬的流動資金用於生產、工程等費用。\nTesla的兩位聯合創始人，Marc Tarpenning(左)和Martin Eberhart(右)\n第三件事情是技朮的開發。Tesla Roadster的drivetrain技朮是和AC propulsion合作+許可出來的，那麼Tesla本身到底做了什麼樣給力的技朮創新？\n1、Integrated motor drive and recharge system(集成電動機和充電係統) 專利號：5099186\n首先要解決的問題，Tesla的創始人到底是誰？准確的說法，2003年底兩位成功企業傢兼同事，Martin Eberhard和Marc Tarpenning從上一個公司成功退出，看著自己還年輕，也不愁吃穿，就著手計劃下一個牛偪的計劃。兩位都是世界級的工程師，Martin曾經是Wyse Technology的旂艦產品設計師。80年代初Wyse是大名鼎鼎，他們是世界上第一批做虛儗機和雲計算的人，對比最近一年在硅穀看到的某些“雲計算”“虛儗機”投資人我只能報以瘔笑，他們恐怕連Wyse都沒聽說過。Marc則是在軟件、固件和軟硬件融合多個產品多個應用上有著非常輝煌的履歷。\n喬幫主2007年在All Things Digital接受埰訪的時候說過一句大實話：成功的企業靠的是1%的創新和99%的執行,bet9。從坐在他身邊的比尒蓋茨點頭力度和頻率來看，這句話確實很有分量。而Tesla此時的CEO Martin做了很多。重要的創新點僟乎全部抓住，而從2006年之前的執行來看，他做的是很優秀的。電池係統性能卓著運行穩定，車身設計明快大氣，電動控制係統算法堅實。可以說，前40%的執行都做得不錯。\n我第一次見到Marc的時候就急不可耐地問：大哥，您那些串並聯的數字，69並聯99串聯11並聯是怎麼得來的啊,bet8？Marc大叔摸了摸自己在海灘上游泳時被太陽曬得通紅的光頭，淡淡的道：DOE(design of experiment，實驗設計)。我一口尟血差點就噴了出來。搞工程的人對這個概唸應該都很熟悉，就是窮舉所有的可能數字排列組合，然後選取其中一部分組合進行仿真和實測，比較輸出的結果。\n奠定了現代電動汽車的架搆：電動汽車核心部件分為電動機組、電池、車充三大部分。車充接受電池的電力然後以正確的額定功率敺動電動機。電動機組的關鍵是控制器，電池的關鍵是電壓電流和熱量控制，車充的關鍵是電壓和功率轉換。整個係統需要通過CANbus來控制信號，同時通過high power cable來傳遞電能。\n經歷了07的關鍵之年，08的生死之年，09的奇跡之年的Tesla就如浴火重生的鳳凰一般一飛沖天。之後的事情很多人都知道了：2010年中上市納斯達克，成為自1954年以來第一傢美國上市汽車公司，上市噹天漲到18美金。2012年中第一輛Model S下線。2012年第一季度Model X發佈。2013年第一季度實現盈利，股票漲到90美金左右。\n現代電動汽車的火種起源於加州。1990年左右加州空氣質量侷(CARB)通過了Zero-emission vehicle (ZEV) mandate(汽車零排放標准)來控制噹時極其糟糕的控制質量，PM2.5那個時候達到了令人發指的25以上(今天下降到10左右了)。加州政府估計是世界上最不講道理的地方政府，基本意思說，我不筦你們有沒有困難，下面7個廠商：通用、豐田、本田、福特、日產，和克萊斯勒必須生產一定數量的電動汽車，否則就給我滾出加州。\n3. 造車架搆簡化。Tesla剛開始的時候早期團隊的人對此並沒有明確的方向，他們並不知道自己能夠改變整個造車的理唸和使用了上百年的架搆。不過基於對電動汽車架搆和關鍵部件的分析，JB得出一個很重要的結論：電動車的關鍵部件電池組和動力傳動係統以及所有的電纜都可以集成到傳統汽車底盤大小的部分，跟傳統車相比大大節省了空間，而且以此為平台，“everything above is your imagination space”(底盤上面的一切都是想象空間)。在Roadster裏面這一點體現還不明顯，到了Model S和X就可以發現前蓋打開都可以放很多行李，車內容積比同樣體積的汽油車大很多。等到看完Model X的發佈會之後，耐著性子聽著給力哥磕磕巴巴的用他那比喬幫主爛10倍的口才發佈比喬幫主任何產品都要給力50倍的Model X，我不禁感歎，看來Tesla真的要把所有對手都遠遠的甩在後面了5年了。\n充滿科技感的Tesla Model S內部(圖為測試人員，所以戴了頭盔)\n1. DriveTrain控制改進。最早Alan的EV1裏面是模儗信號控制的，這跟通用汽車的DNA有關係，傳統汽車廠商對電子產品更新換代的速度沒有任何概唸，他們根本就不知道什麼是摩尒定律，而且有意思的是，最後導緻Tesla成功的關鍵就是摩尒定律,bet9，這一點後面再講。Tesla團隊的人把電動機控制係統全部改成數字控制，電容電感都扔掉通通用IGBT來控制輸入電流電壓。這樣的控制更精確更快速，並且整個係統可靠性非常高。Tesla作為最早進入電動車高功率電機控制係統的研發廠商，他們在電路設計，控制算法和固件開發上領先所有對手至少5年。如果你同時開過Nissan Leaf和Tesla Roadster就會知道，前者在加速，冷天氣等環境下的能耗是非常驚人的，導緻整體用戶體驗大幅下降。而且Nissan Leaf還算是全世界最好的電動車之一。\n關注Tesla Motor這個公司和給力哥Elon Musk已經都超過7年了，5年前向大傢宣傳此人和這個公司得不到任何回應。記得08年的時候我和朋友說喬幫主跟給力哥Elon在技朮創新上比起來戰斗力就是個渣(噹然我對喬幫主也是很欣賞的)，那個時候總被人嘲笑，現在嘲笑的人少了一些。並且最近因為Tesla股票價格的正向變化受到了越來越多的人的關注，不筦怎樣總是很高興的。關注了這麼久，公司的早期元老也有很多是我的朋友，看看網上的文章又多是媒體和銀行分析員的報道，總覺得應該寫一篇文章儘量還原一下公司的歷程，嘗試從另一個角度告訴大傢，這個公司，這一群人為什麼給力，在什麼方面給力，給力到什麼程度。\n注：@創事記 懽迎更多投稿， 詳見《創事記》征文啟事。\n2、Combined motor drive and battery recharge system(組合電動機和電池充電係統) 專利號：5341095\n文中信息來源：1、電影《who killed the electric cars》《Revenge of electric cars》；2、平面媒體：EV world, Greentechmedia, Greencar report以及很多大眾媒體；3、口述：三位聯合創始人，強人JB以及數位前20 Tesla老員工，江湖老前輩Alan(後面會提到)；4、組織：全美電動車協會，加州電動車協會。\n後來跟Alan大叔通過一次電話，精力充沛的一個傳統美國瘋狂科壆傢的感覺。說話很快，腦子比嘴巴還快，他就是那種周六晚上不泡妞泡辦公室，能把龍舌蘭和95號汽油搞混的類型。噹然，他不是給力哥Elon，他的洞察力是有限的。老一代美國工程師優點是基礎扎實，缺點是知識更新換代慢。Alan 1992年創立了第一個有影響的現代電動汽車公司AC propulsion，和通用合作做了EV impact，也就是我們常說的EV1，後來跟豐田合作做了Scion Ebox，還有寶馬的MiniE，都是經典車型。噹然最出彩的自然是給Tesla旂艦跑車Roadster提供技朮，這也是為什麼要如此詳細介紹AC的原因。最終你會發現，現在全世界所有大廠的電動車的核心技朮僟乎全部跟AC propulsion有一代或者二代的繼承關係。\n3、Electrical component assembly with heat sink(電氣元件與散熱片組合)專利號：5060112


您好，欢迎来到江苏易润信息技术有限公司！ bob手机版登陆网络公司、 bob手机版登陆网站建设、 bob手机版登陆网站优化SEO、 丹阳网络推广服务中心\n近两年来，搜索引擎优化——SEO(Search Engine Optimization)愈演愈烈，同时也“中毒太深”，而且这种攻击正变得越来越危险。然而，很多最终用户和一些网络管理员甚至都还不知道这种威胁的存在。那么，如何在不影响用户使用互联网搜索功能的前提下，保护企业免受SEO中毒攻击呢?这是本文需要解决的问题。\n江苏易润信息技术有限公司客户服务部 版权所有 © 2013-2014. All rights reserved. 江苏易润信息 设计制作\n备案号:苏ICP备12035415号 bob手机版登陆网站建设 | bob手机版登陆网络公司 | 丹阳网络推广 | bob手机版登陆网站优化SEO


肺癌患者应该如何合理运动 | 癌症康复-广东爱硒健康管理有限公司官网\n2021-01-22 分类：肺癌 阅读(30) 评论(0)\n临床医学上，肺癌病人在历经医治后，一般 人体各层面都较为孱弱，适当的运动对精力恢复乃至肺脏作用的恢复都是有许多 好处，但运动不可以太猛烈，过多的运动反倒会得不偿失。那麼什么运动方法能对肺癌身患有实际性的协助呢？\n针对肺癌病人而言，练太极也是能够明显改进吸气作用，肺功能、较大 吸氧浓度、总呼吸時间均会明显提升，太极针对病人心脏功能恢复的科学研究由此可见于许多 医学论文。\n. 刘迎春. 太极对肺癌病人吸气作用的危害[J].我国残废医药学, 2014, 000(006):211-211.\n. 盘瑞兰, 李晓云梅,姚晓华. 瑜伽呼吸法对肺癌患者围术期心理状态的危害[J]. 全科护理, 2017, 15(021):2610-2611.\n. 佚名. 肿瘤病人与运动[J]. 中国健康月刊, 2007(1):4-4.\n本文来自互联网，若有版权问题，请联系编辑及时删除。癌症康复-广东爱硒健康管理有限公司官网 » 肺癌患者应该如何合理运动


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NI发布专用于LEGO MINDSTORMS NXT机器人系统的NI LabVIEW工具包-测试与测量-EDN China\nEDN China > 产品新闻 > 测试与测量 > 正文\nNI发布专用于LEGO MINDSTORMS NXT机器人系统的NI LabVIEW工具包\nEDN China?? 2006年10月20日 ?? 收藏0\n美国国家仪器公司正式发布专用于LEGO? MINDSTORMS? NXT机器人系统的NI LabVIEW工具包。通过这个新的工具包，LabVIEW使用者可以创建和下载VI来操作和控制MINDSTORMS NXT机器人技术平台。第三方软件及硬件研发人员也能够使用此工具包来创建用于MINDSTORMS NXT软件的功能模块。作为广受欢迎的LEGO机器人技术发明系统的新一代产品——MINDSTORMS NXT已在今年8月初隆重上市，该系统包括一个全新的、由NI研发的编程环境，并采用LabVIEW语言作为编程平台。\nLEGO集团和NI公司一起合作研发的全新MINDSTORMS NXT软件包括一个简单易用的拖放式、图像化的界面，它是针对10至14岁儿童这一MINDSTORMS NXT目标客户进行优化设计的。通过这个新的LabVIEW工具包，越来越多的MINDSTORMS NXT高级用户（包括成年人、中学或大学学生，以及高校的教育人员）现在都可以用LabVIEW提供的高级图像编程工具对NXT进行编程。2006年见证了LabVIEW 20年来的创新，而这个工具包的发\n使用第三方传感器和其他MINDSTORMS NXT附加硬件的研发人员，可以使用LabVIEW来创建本地功能模块，这样在MINDSTORMS NXT软件中可以用它们来进行编程和控制硬件设备。比如，HiTechnic Products公司为MINDSTORMS NXT开发了数码环绕传感器（Digital Compass Sensor），并且正用新的LabVIEW工具包来为这个及其他传感器创建功能模块。\nNI? LEGO? 机器人系统? LabVIEW工具包?\n下一篇： Juniper Networks选择Agilent N2X多业...


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Helpdesk 工程师 日常工作规范\n一、用户数据与资料 .............................................................................................................................. 1\n二、硬件的新增与更换 .......................................................................................................................... 1\n三、客户公司的账号、权限、密码 ..................................................................................................... 2\n四、现场服务单填写规范 ...................................................................................................................... 2\n五、针对客户的要求与建议 .................................................................................................................. 2\n六、工作周报与相关 IT 表单 ................................................................................................................ 3\n七、电脑操作系统与应用软件的安装规范 ......................................................................................... 3\n八、如何带领新员工或员工间的工作交接 ......................................................................................... 3\n九、在客户公司服务时注意事项 ......................................................................................................... 4\n十、工程师请假注意事项 ...................................................................................................................... 4\n十一、邮件收发使用问题与注意事项 ................................................................................................. 4\n十二、其他注意事项 .............................................................................................................................. 5\n1．工程师在单独操作用户电脑或需带出维修前，请先询问用户是否方便可行，有无敏感类数据文件，如： 财务类数据、技术类文件、个人信息资料等。 2．用户日常数据备份参考规范： a. 个人文件（Excel、Word、PDF 等）建议用户不要存放在系统盘（通常为 C 盘） ，可以存放在其 他盘符，并定期备份至服务器或第三方存储设备，如 U 盘、光盘。 b. 用户如客户端用 Outlook，建议在本地新建 PST 文件做备份（禁止建在系统盘） ，PST 文件不易 过大，建议控制在 2GB 以内，否则容易出错，如果超过则要再新建 PST 文件备份。如客户端用 Notes，建议将 Notes 程序安装在系统盘其以外的分区，方便系统重装后 Notes 可直接使用。 c. 服务器数据备份，首先根据客户公司 IT 备份策略来实施。如没有，则应告之梅杰公司，由梅杰公 司来决定如何制定备份计划并如何实施。 d. 工程师可通过多种方式或途径来告知用户如何进行日常文件的备份，如：口诉、邮件、培训等。 3．重装系统前注意事项： a. 询问用户有哪些相关数据需要备份，如桌面、我的文档、收藏夹、邮件等。 b. 用户 Email 的备份：如客户端为 Outlook 则导出相关 PST 文件，记录下原先 Email 设置，包括联 系人、日程、签名等；如客户端为 Notes 则应该备份 Notes 目录下的 user.id 和 notes.ini 两个文 件，或将整个 Notes 目录备份。 c. 用户不在现场或用户不知哪些数据需要备份时，建议工程师使用 GHOST 程序把整个系统盘做成 映像文件来备份。 e. 如操作系统已经无法进入，建议工程师使用方法 c 来备份或使用第三方软件，如 WindowsPE，进 入光盘 PE 系统后进行备份，也可将硬盘卸下挂至其他电脑上进行备份。 f. 重装系统前应该确保相关硬件驱动程序齐全，否则应在重装前先下载，或直接用相关软件从原系 统中备份出来，如驱动精灵等。 g. 为避免重装系统装错分驱，应在重装系统前确认原操作系统所在分驱的盘符。 h. 任何操作过程中禁止工程师对用户数据进行删除操作，只可使用复制功能，禁止使用剪切功能。 i. 上述一切备份和重装都需经过用户签字确认，以确保备份数据的完整与有效，切记不可求快而盲 目操作，导致数据丢失。\n1. 安装新设备或搬动已有设备时，先确认该设备电源是否为 220V，国外进口设备的电压有时是 110V， 插入 220V 插座时会直接导致设备损坏甚至报废。 2. IT 相关设备移动或更换时，采用先正常保存退出关机后，然后切断外部供电，最后进行相关操作，禁 止直接带电拔插。如显示器、打印机、电脑主机、复印一体机等。 3. 硬件损坏需更换或维修时，请告知用户或部门主管，得到客户相关负责人员签字确认后才可进行。 4. 硬件的新增与更换后应该及时更新该客户公司的 IT 设备清单表。 5. 如遇到不熟悉的硬件设备时，应采用：①查看说明书或上网查询，②咨询供应商或服务商，③800 售\n1. 必须严格按照客户公司制定的 IT 策略进行管理，不可私自制定规范。 2. 禁止私自把个人管理员权限借给他人或告知他人。 3. 禁止为他人开设规定以外的权限，如：本地管理员，其他部门目录访问权限，上网权限，电话权限等。 4. 更改任何类型用户权限时需得到上级部门主管签字确认才可执行。 5. 如客户电脑无特殊应用需求，则一律给用户 user 权限。 6. 客户人员离职时，应及时询问 IT 负责人是否可删除离职人员的相关账号与信息。 7. 定期提醒用户更改自己所知的密码，如邮箱账号，Windows 账号，ERP 账号等。 8. 妥善保管自己所知的密码。\n1. 非驻厂 Helpdesk 工程师每次上门服务时都需认真填写现场服务单，现场服务单由梅杰公司提供。 2. 所有上交现场服务单应有客户员工签字确认，如 IT 负责人或相关联系人。 3. 现场服务单上一定要写明“单位名称” ， “单位通讯地址” ， “联系人” ， “服务描述” ， “上门时间” ， “现 场服务日期及时间” ， “完成维修日期及时间” ， “工程师签字” ， “电话”等主要内容。 （参考附件１） 4. 如出现需要帮客户带出设备进行在外维修或送修时，应在现场服务单中写明原因、设备名称、型号、 数量等，当在外维修结束交与客户手中后，应在现场服务单上写明维修过程及结果；如客户公司另有 设备外出单，也应按客户公司规定认证填写。 5. 为避免由于工程师在服务时未带服务单或服务单数量不够而导致在服务后未能及时签单，建议工程师 可在客户公司内存放一定数量的服务单，以作备用。 6. 现场服务单实行每周上交汇总一次，梅杰公司统一登记归档。禁止不交，迟交，少交。\n1. 针对客户的要求不可盲目答应，应先考虑客户该要求的原因，如不能自行决定时，请与梅杰公司商量。 2. 在给客户建议时，应考虑建议的可行性、合理性、选择性。 3. 非驻厂工程师遇到客户额外叫修时（非服务日内） ，首先应判断该事件能否在电话中解决；如否则应该 考虑该事件能否延迟处理（下一工作日上门处理） ；如再否或客户一定要短时间内上门服务，则工程师 可建议客户首先联系业务人员，让业务进行后续处理。自己也应及时与业务人员进行沟通说明情况， 方便业务人员展开后续工作。 4. 当客户要求工程师代买物品时，为避免日后不必要的麻烦，禁止为客户代买超过 300 元的物品。当购 买小物品时，也应在现场服务单上注明代购物品名称，数量，金额，帮谁购买，并由客户签字确认。 购买物品时应该根据客户要求开具指定正规发票。 5. 当客户要求工程师在合同规定服务时间外继续为其服务时，或长期服务与合同规定内容无关的工作内 容时，工程师应先告知梅杰公司，由梅杰公司来决定后续处理方案，不可自行直接回绝或答应客户。\n6. 在答复客户要求，给出客户建议，或咨询客户问题时，请尽量使用邮件方式进行沟通，并按需要可同 时抄送给客户方领导和梅杰公司。\n六、工作周报与相关 IT 表单\n1. 所有工程师每周需认真填写工作周报，内容不可有空缺，如有空缺时应在备注栏中写明原因。 2. 实行每周工作周报在第二周周一中午 12 点前发至 report@maj-info.com 邮箱。 3. 为避免周一由于工作繁忙而导致无法准时上交上周工作周报的情况出现，建议工程师能每天实时记录 自己当天的工作内容，尽量在周五下班前填写完本周工作内容，并以邮件发送至梅杰公司指定邮箱。 4. 如遇请假休息或客户公司放假导致一周内无工作内容，则应及时发邮件告之梅杰公司情况与原因，否 则按未交或迟交处理。 5. 工作周报邮件主题请统一写成“工程师姓名－客户公司名－工作周报” 。 6. 非驻厂工程师应在每月 10 号前自觉以邮件方式上交各自负责客户公司的机房机柜图，网络拓扑图，IT 设备清单表，信息点位图等更新后的相关资料，并应在邮件中注明具体更新内容。 7. 非驻厂工程师应根据客户合同要求帮助指定客户进行每月的 IT 设备环境巡检，具体表格形式由梅杰公 司统一制定。 8. 其他工作周报填写规范请参考《Helpdesk 工作周报》中各项说明。\n1. 根据客户公司规定，使用指定系统光盘安装操作系统，禁止工程师使用修改版、精简版、GHOST 版 等系统光盘来帮客户安装电脑操作系统。 2. 根据客户公司规定，安装指定的常用软件，禁止私自安装无版权或未授权软件。 3. 计算机命名规则采用客户公司原先命名规则，如没有请与梅杰公司联系，由梅杰公司来制定命名规则。 4. 操作系统安装完成后应及时使用 GHOST 程序来制作操作系统的 GHO 文件，并将该文件与驱动文件 拷贝至该电脑硬盘的最后一个分驱以作备份。 5. 全部安装设置完成后应告之用户一些常用操作说明，如 GHO 文件不可删除，如何登录相关系统，如 何打印文件、如何使用邮件系统等。 6. 如该客户公司有相关 IT 设备表单则应及时做相应的更新。 7. 可根据实际工作需要来安装某些试用版软件或免费版软件。 试用版软件一定要在使用完成后及时删除， 可用免费版软件清单由梅杰公司提供（参考附件 2）\n1. 2. 3. 4. 首先介绍自己所负责客户的具体情况，如该客户有多少部门，多少台客户端 PC，多少台服务器，采 用什么邮件系统，机房网络环境等。 其次介绍自己所负责客户的工作内容与范围， 如日常事务处理， 如何填写相关表单， 服务具体流程等。 让新员工跟随自己为客户连续服务一周，这一周内由老员工进行服务并讲解，新员工在旁学习。 如第一周新员工考核合格，可考虑第二周由老员工与新员工一同进行服务，服务时老员工必须在新员\n工身边，不可让新员工进行独自工作，并可不断指正错误。 5. 6. 7. 8. 如第二周新员工考核合格，可考虑第三周让新员工试着进行独立处理问题，服务时老员工也必须在新 员工身边，此时老员工只起一个指导作用，无需自己亲自动手，但一有错误时一定要及时指正。 如在连续两周的新员工独立工作期中未出现任何工作失误问题，则为期一个月的带领或交接工作成功 完成，否则周期加长。 如在此一个月内老员工发现新员工有严重工作问题时，应该及时向梅杰公司反应，由梅杰公司决定是 否换人。 新员工的试用期工作考核由老员工与梅杰公司共同完成。\n1. 禁止使用客户公司电脑进行聊天、游戏、炒股、BT 下载等一系列与工作无关的操作。 2. 禁止使用客户公司电话进行长时间私人聊天，并在办公区内大声喧哗。 3. 禁止使用客户公司打印机或复印机进行大量私人文件的打印与复印。 4. 禁止使用客户公司生产设备为自己私人谋取利益。 5. 禁止使用客户公司邮箱发送或转发与工作内容无关的邮件，如笑话，视屏，图片等。 6. 在客户公司服务时应主动与客户打招呼，使用标准普通话，注意礼貌用语，进入单独办室前请先敲门。 7. 得知客户公司内部有工作变动时应及时通知梅杰公司，如：客户放假，客户招聘内部 IT，客户负责人 员变更，厂区搬迁，IT 设备升级等。\n1. 如工程师需要申请休假，如病假，事假，婚假，年假等，首先向部门主管提出申请，禁止事后补请。 2. 无论任何类型的休假都需要认真填写请假单（参考附件 3） ，写明休假原因与时间，并在休假前交给梅 杰公司，由梅杰公司审核批准后方可开始休假。 3. 请假最少单位为 0.5 天，根据所申请假期天数的多少，申请时间也应提前，具体为：提前申请天数＝ 休假天数 X 2。 4. 合理休假将不作为工程师月度绩效考核内容（出勤率） ，如：婚假，丧假，病假（有医院证明） ，陪护 假，年假等。 5. 请假人员应在休假前告之备份工程师有哪些事项未完成，尽可能在休假前完成工作交接，备份工程师 会由梅杰公司指定安排。 6. 禁止工程师在梅杰公司不知情的情况下直接向客户方请假，或自我放假，一经发现作旷工处理。 7. 如万一出现特殊情况，如：丧假，病假等，未能及时上交请假单的，请在休假后 3 天内将请假单补交 给梅杰公司。否则一律以旷工处理。 8. 请假单模版与具体填写规范（参考附件 3） 。\n文姓，不要以字母或数字出现。 2. 邮件主题，任何发起的邮件请在邮件主题中加入简单说明，禁止出现空白主题的邮件。 3. 邮件中附件，为方便双方发送与接收的速度，请使用 WinRAR 软件来压缩后发送。 4. 邮件签名，请将与客户沟通用的邮箱签名统一成梅杰公司签名格式（参考附件 4） 。 5. 定期查收邮箱，至少每天 1 次，如遇到需要参于回复的邮件内容也应及时给以回复。 6. 更换联系邮箱时，应该主动通知梅杰公司，否则由于工作沟通联系问题而导致的后果请自行承担责任。\n1. 梅杰公司实行每月 2 次工程师会议，会议时间 1 次为每月的发薪日晚上，另 1 次由梅杰公司按照实际 工作需要来安排，并以邮件方式通知工程师。如有特殊原因不能参加者，请提前向梅杰公司请假。 2. 为方便梅杰公司与工程师的实时沟通，请工程师提供长期有效的个人邮箱与手机号码。驻厂工程师则 应多提供一份所在客户公司的内部邮箱与分机号码。 3. 当上述注意事项与客户公司 IT 相关策略发生矛盾时，请先以客户公司 IT 策略为主，并及时与公司进 行沟通。\n附件 1 《现场服务单》 附件 2 《免费版软件清单》 附件 3 《请假单》 附件 4 《邮件签名》\n编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 软件名称 360 安全卫士 360 顽固木马专杀大全 Adobe Reader WPS2009 谷歌金山词霸合作版 驱动精灵 GHOST Ghost Explorer Windows 优化大师标准版 Free DWG Viewer TeamViewer 7-ZIP Firefox PartitionMagic Microsoft .NET Framework 2007Office System 兼容包 UAA 补丁（kb888111） SCANPST 与 SCANOST PDFCreator 软件用途 防木马、恶意插件、修复 HOST、更新操作系统补丁等功能 查杀 360 安全卫士无法彻底删除的木马 阅读 PDF 文件，有需要的话可安装繁体字库或日本字库 可打开 office 类文件，可用来修复无法打开或过大的.xls 文件 翻译类软件，可代替金山词霸收费版 重装操作系统前备份驱动，或装完后在线更新驱动用 安装完操作系统后制作系统备份用，或恢复操作系统用 用来打开 GHOST 所制作的 GHO 文件 系统优化，清单垃圾文件 查看 AutoCAD 成后的 DWG 文件，不可编辑 远程连接工具，可穿透任何网络模式，只需两台电脑都能上 Internet 免费压缩软件，可打开 rar 与 zip 格式 非 IE 内核免费浏览器程序 硬盘分驱管理软件 安装基于 NET. Framework 开发的程序前所需要的运行库文件 让 office2003 程序可打开 office2007 生成的文件 安装某些声卡与 Modem 驱动程序前所必需安装的系统补丁 Office 自带修复 PST 与 OST 文件的程序 支持 windows 打印功能的任何程序都可以使用它创建 PDF 文档\n学习xxx同志先进事迹心得体会 - 学习 xxx 同志先进事迹心得体会 Xxx 同志以自己的实际行动践行了“特别讲大局的政治 品质,特别讲付出的奉献精神,特别讲实干的优良...\n关于选举产生xxx出席中国共产党xxx第x次代表大会代表的情况报告 - 关于选举产生 XXX 出席中国共产党 XX 第 XX 次 代表大会代表的情况报告 中共 XXX 委: XXX ...\n关于XXX同志的鉴定材料 - 关于 XXX 同志的鉴定材料 XXX,男,生于 X\n关于XXX入党的班主任推荐意见 - 关于 XXX 入党的班主任推荐意见 XXX 同志为 XXX 学院英语 XXX 班学生,在班级中担任 XXX 一职。该同志在学 习上认真刻苦,孜孜以...\nXXX同学政治表现证明 - XXX 同学政治表现证明 XXX,女,X族,生于 X\n关于引进高级教师XXX同志的请示 - 关于引进高级教师 XXX 同志的请示 关于引进主任(副主任) 关于引进主任(副主任)医师 XXX 同志的请示 (事业单位) 事业单位) 正文...\n关于XX有限公司XXX项目融资的法律意见书 - 北京市 XX 律师事务所 有限公司“ 关于 XX 有限公司“XXX”项目融资的法律意见书 ”致:XXXXXXXXXXXX 有限公司 根据《...\nXXX同志换届考察材料 - XXX 同志换届考察材料 XXX 同志自 XXXX\nXXX现实表现材料_党团建设_党团工作_实用文档。XXX 现实表现材料 XXX,男,汉族,生于 XXXX 年 XX 月,XX 省 XX 市人,中共党员, 大学本科学历,XXX 职称,XXXX ...\n工作任务单 项目名称: xxxxxxx 任务来源 日期:2016-09-22 任\n关于将XXX同志列为重点培养对象的请示 - 关于将 XXX 同志列为重点培养对象的请示 (模板)(2 号黑体) (内容 3 号宋体) 机关党委: 我单位 XXX 同志,性别:X,...\nxxx工商业联合会和xxx银行协议 - xxx 工商业联合会 xxx 银行股份有限公司天水市分行 战略合作协议 为积极贯彻落实 xxx 委、区政府开展银行支持非公企业发展 的要求...\nXXX集团有限公司应急救援演练活动主持稿 - XXX 集团有限公司消防应急救援演\n危房搬迁通知书XXX - 危房搬迁通知书 ( 存根 ) XXXX 住户: 您目前所居住的房屋系原 XXXXXX 办公用房,为上世纪七十 年代建造的砖木结构房,因建年久远,导致...\nXXX工程竣工财务决算审计报告模板 - XXX 工程 竣工财务决算审核(计)报告 XXX(公司或局) : 我们接受委托,于 201X 年 X 月 XX 日-XX 日,对 XXX(公 司或...\nXXX生平简介 - xxx 同志生平简介 同志们: 今天,我们怀着极其沉痛的心情,深切悼念 XXX 同志。 XXX 同志因病医治无效,不幸于 201X 年 X 月 X 日晚 X 点 ...\nXXX系统程序源代码模板 - 基于 XXX 的 XXX 系统 V1.0 第 1 页 编号: 版本:v1.0 基于 XXX 的 XXX 系统 源程序 编写:XXX 校对:XXX 2...\nXXX停车场管理方案(初稿) - 万佳裕园 停车场实施方案 (二次更改 -初 稿\nXXX道路交通改造工程 - XXX 道路交通改造工程 施工组织设计 投标人:XXX (盖单位章) XX 年 XX 月 XX 日 2、总体概述(施工程序总体设想及施工段划分) 2.1 ...\nxxx小学校运会方案 - 小学第 x 届运动会比赛方案 为了增强学生的身体素质,


2019-12-23 15:51 671条评论 2674人喜欢 3637次阅读 425人点赞\n是什么意思 , A. 变得不足B. 变得过多C. 正好符合中央银行的要求D. 没有变化\n选哪个？？？？？？？？？？ , 应该选哪个啊?谢谢了!! ...\n我国存款准备金率是否符合国际标准: 1、因为流动性过剩造成的通货膨胀，上调准备金率可以有效降低流动性 。2、因为现在美国的信贷危机，上调准备金率可以保证金融系统的支付能力，增加银行的抗风险能力，防止金融风险的产生。\n如果商业银行没有保留超额存款准备金，在中央银行提高法定存款准备金率的时候，商业银行的储备: A. 变得不足。因为银行没有保留超额存款准备金，所以银行的货币储备就小于或等于原来的存款准备金额。当央行提高存款准备金率时，银行的存款准备金额就要增加，这时需要的准备金就会大于原来的准备金。\n在出现经济过热和通货膨胀时,央行应:A降低再贴现率B提高存款准备金率C提高再贴现率D降低存款准备金率: 我相信这个是多项选择题应该选B、C。 绝对标准答案\n时间 调整为 调整原因\n1985年 统一为10% 为克服法定存款准备率过高带来的不利影响\n1987年 从10%上调为12% 紧缩银根，抑制通货膨胀\n1988年 进一步上调为13% 紧缩银根，抑制通货膨胀\n1998年3月21日 从13%下调到8% 对存款准备金制度进行了改革\n热门标签: 2016年存款准备金率原来是多少 2016年存款准备金率原来是多少\n全新 豪爵铃木 锐爽 EN125-2E 摩托车多少钱？: 济南地区报价7680左右 楼下的补贴不知道不要乱说 根据我国的现行政策 5000元以上统一补贴650 但是兄弟你得挂牌根据我的经验你挂牌至少花802.5 我的锐爽125-2F就花了这些 购置税 上牌的费用 保险乱七八...\n2020-11-29 09:47 939条评论 4958人喜欢 2612次阅读 698人点赞\n本田小战鹰125电瓶没有电了,如何发动啊: 你好！小车子搭一下电就可以启动了，希望我的回答能够对你有所帮助【汽车有问题，问汽车大师。4S店专业技师，10分钟解决。】 ...\n2020-10-20 15:45 992条评论 1911人喜欢 5931次阅读 963人点赞\n豪爵125太子摩托车在打过瞬间电池电压应为多少伏: 豪爵125太子摩托车电瓶正常电压在12.8伏左右，在电起动瞬间电瓶电压会降到大约11伏左右，具体降多少与电瓶本身状况及发动机情况等多少都有一点关系，但只要电瓶电量能带动电起动，就没什么事。 ...\n2019-11-24 22:13 382条评论 4476人喜欢 1136次阅读 652人点赞\n林肯125-12摩托车多少钱: 广东省韶关市翁源县买 ...\n2020-06-27 05:43 414条评论 5017人喜欢 6647次阅读 253人点赞\n2020-08-07 23:31 435条评论 1167人喜欢 5042次阅读 927人点赞\n我的是雅马哈125，由于改装疝气灯电不够用，然后在淘宝网上买了个改装用的整流器，用了几天那干电瓶有: 整流器电流太大，电瓶充电时发热较大。密封损坏，流液，根源在氙气灯功率大，需要大容量电瓶配套，然后才能用大电流整流器。 ...\n2019-09-17 10:41 506条评论 4683人喜欢 6077次阅读 399人点赞


Annexin A2原核表达载体的构建及表达纯化 预览\n作者 王德利 杨华 +1 位作者 汤海峰 王宇石 《中国实验诊断学》 2019年第6期1067-1070,共4页\n在真核生物中,存在一类由钙离子介导的的膜磷脂结合蛋白——膜联蛋白Annexin家族,酵母和原核生物中未发现存在。Annexin最早是在劳什肉瘤病毒转化的鸡胚细胞中发现的。已发现的Annexin家族成员归为五类:A类为脊椎动物膜联蛋白;无脊椎动... 在真核生物中,存在一类由钙离子介导的的膜磷脂结合蛋白——膜联蛋白Annexin家族,酵母和原核生物中未发现存在。Annexin最早是在劳什肉瘤病毒转化的鸡胚细胞中发现的。已发现的Annexin家族成员归为五类:A类为脊椎动物膜联蛋白;无脊椎动物膜联蛋白属于B类;真菌和部分单细胞真核生物被归为C类;D类为植物膜联蛋白;原核生物的膜联蛋白家族属于E类;另外还有40余种膜联蛋白仍待归类。 展开更多\n关键词 原核表达载体 目的基因 家族成员 ANNEXIN A2 质粒载体 大肠杆菌菌株 双酶切 膜联蛋白 重组子 GST 重组质粒\n作者 顾欣雨 陈俊宇 +2 位作者 鱼敏逸 张爱青 甘卫华 《海南医学》 CAS 2019年第8期953-956,共4页\n目的构建抗凋亡转录因子(AATF)真核表达质粒,检测其在系膜细胞中的表达,为进一步研究奠定实验基础。方法采用PCR技术,从大鼠的肾小球系膜细胞总RNA中扩增AATF基因编码序列片段,并克隆到pRP[Exp]质粒载体中,之后对重组质粒进行酶切和测序... 目的构建抗凋亡转录因子(AATF)真核表达质粒,检测其在系膜细胞中的表达,为进一步研究奠定实验基础。方法采用PCR技术,从大鼠的肾小球系膜细胞总RNA中扩增AATF基因编码序列片段,并克隆到pRP[Exp]质粒载体中,之后对重组质粒进行酶切和测序,通过脂质转染法将细胞转染到大鼠系膜细胞中,以未转染的系膜细胞为空白对照组,转染后的为实验组,Westernblot检测AATF所编码蛋白的表达水平。结果PCR扩增产物AATF片段约1600bp,与理论相符;构建所得pRP[Exp]-AATF重组质粒,经双酶切琼脂糖凝胶电泳后得到约1600bp的条带,与预期结果相符;测序结果与GenBank中的大鼠AATF基因序列比对,同源性相符。经RT-qPCR证明,以未转染的系膜细胞中AATF表达水平为标准(1.00±0.00),转染后的实验组中AATF的相对表达量达(12.03±1.87),显著提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建pRP[Exp]-AATF重组质粒,并能在肾小球系膜细胞中正常表达,为后续研究AATF基因的生物学功能、疾病治疗和临床应用奠定了实验基础。 展开更多\n关键词 大鼠 肾小球系膜细胞 抗凋亡转录因子 死亡相关蛋白样激酶 分子克隆技术 质粒载体 重组质粒\n作者 蔡春梅 范思均 +2 位作者 梁歌 姜严明 冯婧 《解剖科学进展》 2018年第6期614-617,共4页\n目的连接针对人血管内皮生长因子(VEGF)设计的短发夹RNA与质粒载体,并转染视网膜色素上皮(RPE)细胞,观察其转染效率及对细胞的毒性。方法设计针对人VEGF的短发夹RNA(shRNAs,V1,V2),V3为阴性对照即不含特异性shRNA,其表达载体为pGCSilenc... 目的连接针对人血管内皮生长因子(VEGF)设计的短发夹RNA与质粒载体,并转染视网膜色素上皮(RPE)细胞,观察其转染效率及对细胞的毒性。方法设计针对人VEGF的短发夹RNA(shRNAs,V1,V2),V3为阴性对照即不含特异性shRNA,其表达载体为pGCSilencer^TM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi。用Lipofectamine^TM 2000转染RPE细胞,用倒置荧光显微镜及流式细胞仪观察其转染效率;用MTT法观察其对细胞的毒性。结果质粒载体介导的GFP在细胞中的表达呈黄绿色,弥漫于整个胞浆和胞核,转染后24h GFP开始表达,转染后48h表达明显增强。流式细胞仪检测质粒pGCSilencer^TM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi对体外培养的RPE细胞转染效率为43.9%,质粒转染后MTT法测定细胞活性的OD值与对照组相比明显降低(P=0.004)。结论质粒pGCSilencerTM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi可以有效地转染体外培养的RPE细胞,但质粒转染对细胞有明显的毒性。 展开更多\n关键词 质粒载体 视网膜色素上皮细胞(RPE) 细胞毒性\n衣原体主要实验技术研究进展 预览 被引量：1\n作者 李育萌 吴移谋 《微生物学免疫学进展》 2017年第3期71-74,共4页\n衣原体（chlamydia）是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病。因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注。依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变（fluorescence-reported allelic exchange mu... 衣原体（chlamydia）是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病。因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注。依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变（fluorescence-reported allelic exchange mutagenesis,FRAEM）技术、分离纯化衣原体的空斑技术、质粒载体的构建及转化技术、蛋白质谱技术在衣原体研究中的应用进展。 展开更多\n关键词 衣原体 荧光下等位基因交换突变 空斑试验 质粒载体 蛋白质谱\n2016年生物高考已落下帷幕,全国及各省、市一共命制了10套生物试卷,虽然各地高考试卷结构有所差异,题型也不尽相同,但是也有一些共性特征.比如,符合课改精神,合乎新课程理念,紧扣《2016年高考考试大纲及考试说明》,具有较高的信度、效度... 2016年生物高考已落下帷幕,全国及各省、市一共命制了10套生物试卷,虽然各地高考试卷结构有所差异,题型也不尽相同,但是也有一些共性特征.比如,符合课改精神,合乎新课程理念,紧扣《2016年高考考试大纲及考试说明》,具有较高的信度、效度,有较高的区分度及适当的难度,守正出新、稳步求进.具体表现在：第一,创设必要的背景信息,重视获取新知识和处理信息能力的考查;第二,渗透科学探究的方法,重视思维能力的考查; 展开更多\n关键词 教学建议 效度 考试大纲 课改精神 利马豆 命题者 求进 考试说明 判断推理 质粒载体\n作者 李永明 陈立强 +3 位作者 张东东 赵勇 李晓涛 李艳君 《解剖学研究》 CAS 2015年第1期22-25,共4页\n目的将目的基因NCAM1与质粒载体p HBAd-MCMV-GFP进行连接,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFPNCAM1。方法对目的基因和质粒载体分别用内切酶Not I和Nsil进行双酶切,产物回收后进行连接、转化,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFP-NCAM1。转化后的菌... 目的将目的基因NCAM1与质粒载体p HBAd-MCMV-GFP进行连接,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFPNCAM1。方法对目的基因和质粒载体分别用内切酶Not I和Nsil进行双酶切,产物回收后进行连接、转化,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFP-NCAM1。转化后的菌液进行PCR阳性克隆鉴定,并对阳性样本进行测序。结果首先对NCAM1进行扩增,从实验结果看符合预期效果,在双酶切、连接和转化实验后,对构建完成的重组质粒进行鉴定,PCR阳性克隆鉴定结果显示重组质粒构建成功,NCAM1已连接进入重组质粒中,测序的结果进一步印证阳性鉴定结果。结论带有目的基因NCAM1的重组质粒构建成功。 展开更多\n关键词 神经细胞黏附分子1 质粒载体 重组质粒\n作者 刘佳 李晶 +4 位作者 严磊 赵婷婷 王慧娟 赖国旗 龙明 《中国药房》 CAS 北大核心 2015年第16期2184-2187,共4页\n目的：构建大鼠I型大麻素受体（cm）真核基因表达载体，并检测其在细胞中的表达情况。方法：从大鼠海马组织中提取总RNA，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增出CB1基因片段，产物连接到pMD18-T载体上。阳性实验筛选出阳性克隆，经EcoRI... 目的：构建大鼠I型大麻素受体（cm）真核基因表达载体，并检测其在细胞中的表达情况。方法：从大鼠海马组织中提取总RNA，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增出CB1基因片段，产物连接到pMD18-T载体上。阳性实验筛选出阳性克隆，经EcoRI、BamH I双酶切及测序鉴定后，将其连接到载体pcDNA3．1（＋）中，构建质粒载体pcDNA3．1（＋）-CB1，脂质体转染原代人胚肾293细胞（HEK293细胞）。用Westernblot实验鉴定细胞中CBl蛋白的表达，用免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法检测其在细胞中表达的部位。结果：采用RT-PCR成功获得大鼠CB1基因，PCR扩增得到l500bp左右的CB1基因片段．双酶切鉴定及DNA测序证实质粒载体pcDNA3．1（＋）-CB1构建成功。Westernblot实验、免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法证实载体pcDNA3．1（＋）-CB1能在HEK293细胞中表达，且表达产物主要分布在细胞膜表面和细胞质中。结论：构建的pcDNA3．1（＋）-CB1表达载体能成功转入真核HEK293细胞，并在细胞膜表面和细胞质中表达CB1蛋白。 展开更多\n关键词 I型大麻素受体 逆转录.聚合酶链反应 质粒载体\n枯草芽孢杆菌转基因研究进展 预览 被引量：1\n作者 武彩霞 王静 刘开扬 《河北北方学院学报：自然科学版》 2015年第5期105-111,共7页\n随着基因工程和分子生物学的飞速发展,在转基因微生物领域里,枯草芽孢杆菌表达系统已经成为一种继大肠杆菌表达系统和酵母表达系统之后的新型表达系统,为外源基因提供了良好的宿主环境,使外源基因可以进行表达,目前已经取得了较显著的... 随着基因工程和分子生物学的飞速发展,在转基因微生物领域里,枯草芽孢杆菌表达系统已经成为一种继大肠杆菌表达系统和酵母表达系统之后的新型表达系统,为外源基因提供了良好的宿主环境,使外源基因可以进行表达,目前已经取得了较显著的成绩。该文阐述了枯草芽孢杆菌转基因研究中质粒载体的构建、转化方法、菌株全基因序列及外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达等方面的进展。 展开更多\n关键词 枯草芽孢杆菌 质粒载体 外源基因 表达\n作者 米文 《科学大观园》 2015年第2期44-45,共2页\n<正>据国外媒体报道,所谓基因疗法,就是利用正常基因填补或替代基因疾病中某些病变或缺失的基因的治疗方法。近年来,英国牛津和美国费城的一些研究人员宣布,他们对因患有罕见基因疾病而影响视力的病人们进行了治疗,成功使他们的... <正>据国外媒体报道,所谓基因疗法,就是利用正常基因填补或替代基因疾病中某些病变或缺失的基因的治疗方法。近年来,英国牛津和美国费城的一些研究人员宣布,他们对因患有罕见基因疾病而影响视力的病人们进行了治疗,成功使他们的视力获得改善。意大利的科学家们也宣布,他们使患有另外两种基因疾病的病人病情得到了减轻。这些研究结果以及web of Science网站上记录的引文统计,都着眼于基因疗法中的一个类别——而它从诞生伊始,就可谓是备受阻挠。 展开更多\n关键词 基因疗法 基因疾病 美国费城 先天性黑蒙 里奇 基因替换 脑白质病变 科学大观园 麦奎尔 质粒载体\nRNA干扰端粒酶反转录酶基因慢病毒表达载体的构建及鉴定 预览 被引量：7\n作者 宋扬 徐韬 +3 位作者 杨明坤 王国旗 张恩丰 盛伟斌 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第11期1724-1729,共6页\n背景：端粒酶反转录酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）对端粒酶活化起重要作用，但利用构建针对其基因的慢病毒抑制其在脊髓星形胶质细胞中的表达却少有报道。目的：构建用于RNA干扰的靶向大鼠脊髓源星形胶质细胞端粒酶反... 背景：端粒酶反转录酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）对端粒酶活化起重要作用，但利用构建针对其基因的慢病毒抑制其在脊髓星形胶质细胞中的表达却少有报道。目的：构建用于RNA干扰的靶向大鼠脊髓源星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的慢病毒载体，并观察其对端粒酶反转录酶表达的抑制作用。方法：通过设计合成出shRNA-TERT序列，经聚合酶链反应扩增后定向连接到pLentilox3.7U6载体上构建重组质粒，经转染DH5α细胞筛选阳性菌落后行测序鉴定。将pLentilox3.7U6-TERT重组质粒转染293T细胞，包装产生重组慢病毒Le-TERT并测定其滴度，再用Le-TERT感染大鼠脊髓星形胶质细胞，实时定量-聚合酶链反应检测各细胞株TERT基因表达水平，并利用Western blot和免疫荧光分别检测TERT蛋白的表达。结果与结论：基因测序鉴定证明，pLentilox3.7U6-TERT 重组质粒构建成功，并成功包装慢病毒。实时定量PCR、Western blot和免疫荧光检测结果表明，Le-TERT转染星形胶质细胞4 d后，对TERT mRNA的干扰效率可达（63.98±177;2.6）%，Le-TERT在转然后的星形胶质细胞中呈低表达。结果证实，实验构建的重组表达载体pLentilox3.7U6-TERT能够产生有效滴度的慢病毒，感染大鼠脊髓星形胶质细胞后，该载体可以有效抑制TERT的表达。 展开更多\n关键词 组织构建 组织工程 组织构建基础实验 RNA干扰 端粒酶 端粒酶反转录酶 质粒载体 慢病毒 星形胶质细胞 短发夹RNA 脊髓损伤 胶质瘢痕 国家自然科学基金\n靶向端粒酶反转录酶基因短发夹RNA载体的构建 预览 被引量：2\n作者 宋扬 徐韬 +1 位作者 杨明坤 盛伟斌 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第7期1057-1062,共6页\n背景：端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。 目的：利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。 方法：选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干... 背景：端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。 目的：利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。 方法：选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干扰分子的正义链和反义链模板序列，经退火成互补双链，与线性化pLentilox3.7.U6载体连接、转化大肠杆菌和序列测定，应用蛋白质印迹和免疫荧光技术，在体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞模型上验证构建的干扰载体抑制端粒酶反转录酶基因表达的效果。 结果与结论：蛋白质印迹和免疫荧光检测结果表明，重组质粒干扰组中星形胶质细胞端粒酶反转录酶均呈低表达。结果证实，实验成功构建了针对大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA质粒表达载体，此载体能有效抑制体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶的表达。 展开更多\n关键词 组织构建 组织工程 RNA干扰 端粒酶 端粒酶反转录酶 质粒载体 星形胶质细胞 短发夹RNA 脊髓损伤 胶质瘢痕 国家自然科学基金\n作者 袁东波 尹念春 《中国畜禽种业》 2014年第10期115-116,共2页\n猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）俗称＂猪蓝耳病＂,是由猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）引起的一种以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要特征的高度接触性传染病。临床主要表现为怀孕母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎等严重的繁殖障碍... 猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）俗称＂猪蓝耳病＂,是由猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）引起的一种以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要特征的高度接触性传染病。临床主要表现为怀孕母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎等严重的繁殖障碍以及仔猪的呼吸系统症状和断奶前死亡率增高,育成猪呼吸困难,发育迟缓等。 展开更多\n关键词 感染性克隆 繁殖障碍 成年母猪 接触性传染病 育成猪 蓝耳病 病毒基因组 呼吸道疾病 质粒载体 分子特征\n作者 哈小琴 张尚弟 +6 位作者 邓芝云 董菊子 赵勇 彭俊华 张媛媛 林静 王鲲 《中国医药》 2014年第2期230-235,共6页\n目的 构建同时携带白细胞介素2（IL-2）和NK4基因的真核表达载体（pIRES-IL-2-IRES-NK4）,观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGG... 目的 构建同时携带白细胞介素2（IL-2）和NK4基因的真核表达载体（pIRES-IL-2-IRES-NK4）,观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGGS/hNK4质粒为模板,分别扩增IL-2及NK4基因,并将IL-2及NK4基因分别克隆在真核表达载体pIRES-SEQ的XhoI、MLuI位点和SalI、NotⅠ位点.获得同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4.该重组质粒转染肝癌细胞HepG2后,检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带IL-2和NK4双基因的真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4构建成功.用pIRES-IL-2-IRES-NK4转染HepG2细胞后24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48 h时荧光更强;逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES-IL-2-IRES-NK4质粒细胞的IL-2及NK4基因表达明显增强.酶联免疫吸附测定检测结果表明,转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及NK4蛋白表达水平明显增强.转染组48 h后的IL-2、NK4蛋白表达水平为2.139、1.956 mg/L,明显高于未转染组的0.492、0.620 mg/L.四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4的细胞表达上清,有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,且有剂量效应关系.结论 本研究成功构建了同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4,该质粒可有效转染肝癌细胞,且转染细胞表达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景. 展开更多\n关键词 白细胞介素2 NK4基因 质粒载体 构建 活性 INTERLEUKIN-2\n作者 Lai Zhiyong Qin Qin +6 位作者 Yu Baofeng Xie Jun Gao Ranpeng Zhang Tiantian Li Chunfeng Niu Kai Xu Jun 《中华医学杂志：英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第12期2337-2341,共5页\n关键词 肝癌细胞 细胞毒性 质粒载体 HepG2细胞 WESTERN印迹法 单纯疱疹病毒 自杀基因 DNA复制\nshRNA表达载体对HSV-2ICP4基因的干扰效应 预览 被引量：3\n作者 袁俊杰 吕延成 《遵义医学院学报》 2013年第1期21-24,共4页\n目的构建针对Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）ICP4基因的短发夹RNA（shRNA）重组表达载体，探究该载体表达的shRNA对HSV-2的抑制作用。方法重组表达载体通过脂质体转染法转染HEK293细胞，并接种HSV-2，48h后，实时荧光定量RT-PCR检测mRNA转... 目的构建针对Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）ICP4基因的短发夹RNA（shRNA）重组表达载体，探究该载体表达的shRNA对HSV-2的抑制作用。方法重组表达载体通过脂质体转染法转染HEK293细胞，并接种HSV-2，48h后，实时荧光定量RT-PCR检测mRNA转录情况，Westernblot检测ICP4蛋白的表达情况，终点滴定法测定病毒的滴度。结果与对照组相比，干扰组对mRNA抑制率为71％，使蛋白表达减少71．81％，并且病毒滴度也明显降低（P〈0．05）。结论构建的pGPU6／Neo-shRNA ICP4重组质粒表达载体能在体外细胞水平上干扰HSV．2ICP4的基因表达，抑制HSV-2在细胞中复制。 展开更多\n关键词 RNA干扰 短发夹RNA 质粒载体 Ⅱ型单纯疱疹病毒 ICP4基因\n雨生红球藻基因组文库的构建及鉴定 预览 被引量：1\n作者 王潮岗 张雪芹 胡章立 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期190-195,共6页\n本研究以雨生红球藻34—1n为材料，提取其基因组DNA，利用限制性内切酶Sau3AI对基因组DNA进行酶解，回收6～8kb的基因组DNA片段，并浓缩至200ng／i,zL。该片段与经BamHI酶切和去磷酸化处理后的pUC18载体连接，然后电击转化到受体菌Esche... 本研究以雨生红球藻34—1n为材料，提取其基因组DNA，利用限制性内切酶Sau3AI对基因组DNA进行酶解，回收6～8kb的基因组DNA片段，并浓缩至200ng／i,zL。该片段与经BamHI酶切和去磷酸化处理后的pUC18载体连接，然后电击转化到受体菌Escherichia.coliDH5仅中，获得雨生红球藻34-1n的基因组文库。该文库的平均插入片段长度约为6．5kb，获得6x10s个克隆数。通过PCR筛选，由雨生红球藻基因组文库中获得含bktl序列的单克隆菌，与β-胡萝卜素氧化酶序列（GenBank：DQ086233．1）进行比对，结果表明bktl基因组序列含有6个外显子。本研究为进一步鉴定雨生红球藻相关基因提供了一个文库平台。 展开更多\n关键词 雨生红球藻 基因组文库 质粒载体 β-胡萝卜素酮化酶基因\n饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展 预览 被引量：1\n作者 杨明明 陈玉林 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第12期1-7,共7页\n枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于畜牧业生产的革兰氏阳性菌。随着现代生物技术的发展，利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生茵成为热点研究领域。枯草芽孢杆菌表达系统是重组枯草芽孢杆菌的核心，论文对枯... 枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于畜牧业生产的革兰氏阳性菌。随着现代生物技术的发展，利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生茵成为热点研究领域。枯草芽孢杆菌表达系统是重组枯草芽孢杆菌的核心，论文对枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展与存在问题进行了简要综述。 展开更多\n关键词 枯草芽孢杆菌 表达系统 质粒载体 启动子\n作者 孙晋津 陈博 陈剑秋 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 644-647,共4页\n目的构建肝细胞生长因子（HGF）真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,探讨HGF对大鼠血管内皮细胞（VECs）的作用。方法通过亚克隆技术,构建含有人HGF cDNA全长的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1并测序;向大鼠原代骨骼肌细胞转染质粒pEGFP-HGF-C1... 目的构建肝细胞生长因子（HGF）真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,探讨HGF对大鼠血管内皮细胞（VECs）的作用。方法通过亚克隆技术,构建含有人HGF cDNA全长的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1并测序;向大鼠原代骨骼肌细胞转染质粒pEGFP-HGF-C1,测定转染效率;ELISA法测定细胞上清液中HGF蛋白表达浓度;MTT法测定HGF表达产物对大鼠VECs促增殖作用。结果成功构建正向表达HGF的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,该质粒可有效转染原代培养的骨骼肌细胞并表达HGF,且其表达产物HGF对大鼠VECs的促增殖作用具有量效和时效关系（P〈0.05或P〈0.01）。结论成功构建的真核表达质粒pEGFP-HGF-C1能有效转染大鼠骨骼肌细胞,分泌的HGF对大鼠VECs有促增殖作用。 展开更多\n关键词 肝细胞生长因子 质粒载体 血管内皮细胞\n肝纤维化相关细胞因子双重RNA干扰质粒的构建及转染肝星状细胞研究 预览 被引量：1\n作者 蒋玉凤 周德江 +2 位作者 张建军 黄飞 史小玲 《实用肝脏病杂志》 2012年第6期516-519,共4页\n目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率.方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA 干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo... 目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率.方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA 干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo,构建含目的靶基因片段的重组质粒载体psiRNA-GFP-CT-GF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com（含有CTGF和TIMP-1）,进行酶切和测序鉴定.将构建成功的重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染大鼠肝星状细胞,在荧光显微镜下观察质粒转染情况,用流式细胞仪检测转染效率.结果酶切与测序结果提示重组质粒 psiRNA-GFP-CTGF、psiR-NA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com成功构建;成功将重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染肝星状细胞,在24小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF ＋TIMP-1组转染效率分别为15±2%、13±1%、15±1%和14±2%,均低于质粒psiRNA-GFP-Com转染组（Com组,20±2%,P〈0.05）;在48小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF＋TIMP-1组转染效率分别为10±2%、9±1%、8±2%和10±1%,均低于Com组的15±2%（P〈0.05）.结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位的双重RNA干扰表达质粒,能转染至肝星状细胞,并且psiRNA-GFP-Com转染效率最高. 展开更多\n关键词 肝纤维化 RNA干扰 质粒载体 结缔组织生长因子 金属蛋白酶组织抑制因子-1 肝星状细胞\n题名Annexin A2原核表达载体的构建及表达纯化 预览\n作者 王德利 杨华 汤海峰 王宇石\n机构 吉林大学生命科学学院 吉林大学口腔医学院\n出处 《中国实验诊断学》 2019年第6期1067-1070,共4页\n作者 顾欣雨 陈俊宇 鱼敏逸 张爱青 甘卫华\n出处 《海南医学》 CAS 2019年第8期953-956,共4页\n基金 国家自然科学基金(编号:81670650) 江苏省自然科学基金(编号:BK20161071) 江苏省大学生创新创业训练计划项目(编号:201710312039Y).\nKeywords Rat Glomerular mesangial cells Apoptosis antagonizing transcription factor Death-associated proteinlike kinase Molecular cloning technology Plasmid vector Recombinant plasmid\n作者 蔡春梅 范思均 梁歌 姜严明 冯婧\n出处 《解剖科学进展》 2018年第6期614-617,共4页\n文摘 目的连接针对人血管内皮生长因子(VEGF)设计的短发夹RNA与质粒载体,并转染视网膜色素上皮(RPE)细胞,观察其转染效率及对细胞的毒性。方法设计针对人VEGF的短发夹RNA(shRNAs,V1,V2),V3为阴性对照即不含特异性shRNA,其表达载体为pGCSilencer^TM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi。用Lipofectamine^TM 2000转染RPE细胞,用倒置荧光显微镜及流式细胞仪观察其转染效率;用MTT法观察其对细胞的毒性。结果质粒载体介导的GFP在细胞中的表达呈黄绿色,弥漫于整个胞浆和胞核,转染后24h GFP开始表达,转染后48h表达明显增强。流式细胞仪检测质粒pGCSilencer^TM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi对体外培养的RPE细胞转染效率为43.9%,质粒转染后MTT法测定细胞活性的OD值与对照组相比明显降低(P=0.004)。结论质粒pGCSilencerTM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi可以有效地转染体外培养的RPE细胞,但质粒转染对细胞有明显的毒性。\nKeywords plasma vector retinal pigmented epithelial cytotoxicity\n题名衣原体主要实验技术研究进展 预览 被引量：1\n作者 李育萌 吴移谋\n出处 《微生物学免疫学进展》 2017年第3期71-74,共4页\n文摘 衣原体（chlamydia）是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病。因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注。依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变（fluorescence-reported allelic exchange mutagenesis,FRAEM）技术、分离纯化衣原体的空斑技术、质粒载体的构建及转化技术、蛋白质谱技术在衣原体研究中的应用进展。\nKeywords Chlamydia FRAEM （fluorescence-reported allelic exchange mutagenesis） Plaque assay Plasmid vector Protein mass spectrometry\n出处 《新课程教学（电子版）》 2016年第8期11-14,共4页\n作者 李永明 陈立强 张东东 赵勇 李晓涛 李艳君\n机构 佳木斯大学基础医学院 佳木斯大学第一附属医院\n出处 《解剖学研究》 CAS 2015年第1期22-25,共4页\n文摘 目的将目的基因NCAM1与质粒载体p HBAd-MCMV-GFP进行连接,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFPNCAM1。方法对目的基因和质粒载体分别用内切酶Not I和Nsil进行双酶切,产物回收后进行连接、转化,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFP-NCAM1。转化后的菌液进行PCR阳性克隆鉴定,并对阳性样本进行测序。结果首先对NCAM1进行扩增,从实验结果看符合预期效果,在双酶切、连接和转化实验后,对构建完成的重组质粒进行鉴定,PCR阳性克隆鉴定结果显示重组质粒构建成功,NCAM1已连接进入重组质粒中,测序的结果进一步印证阳性鉴定结果。结论带有目的基因NCAM1的重组质粒构建成功。\nKeywords Neural cell adhesion molecule 1 Plasmid vector Recombinant plasmid\n作者 刘佳 李晶 严磊 赵婷婷 王慧娟 赖国旗 龙明\n机构 重庆三峡中心医院药学部 重庆三峡医药高等专科学校第一附属医院神经外科 重庆医科大学实验动物中心\n出处 《中国药房》 CAS 北大核心 2015年第16期2184-2187,共4页\n基金 基金项目：重庆市基础与前沿研究计划项目（No.cstc2014jcy-jA10049） 重庆市卫生局医学科研项目（No.2012.1-096） 重庆市高等学校青年骨干教师资助计划\n文摘 目的：构建大鼠I型大麻素受体（cm）真核基因表达载体，并检测其在细胞中的表达情况。方法：从大鼠海马组织中提取总RNA，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增出CB1基因片段，产物连接到pMD18-T载体上。阳性实验筛选出阳性克隆，经EcoRI、BamH I双酶切及测序鉴定后，将其连接到载体pcDNA3．1（＋）中，构建质粒载体pcDNA3．1（＋）-CB1，脂质体转染原代人胚肾293细胞（HEK293细胞）。用Westernblot实验鉴定细胞中CBl蛋白的表达，用免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法检测其在细胞中表达的部位。结果：采用RT-PCR成功获得大鼠CB1基因，PCR扩增得到l500bp左右的CB1基因片段．双酶切鉴定及DNA测序证实质粒载体pcDNA3．1（＋）-CB1构建成功。Westernblot实验、免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法证实载体pcDNA3．1（＋）-CB1能在HEK293细胞中表达，且表达产物主要分布在细胞膜表面和细胞质中。结论：构建的pcDNA3．1（＋）-CB1表达载体能成功转入真核HEK293细胞，并在细胞膜表面和细胞质中表达CB1蛋白。\nKeywords Cannabinoid receptor 1 Reverse transchiption polymerase chain reaction Plasmid carrier\n题名枯草芽孢杆菌转基因研究进展 预览 被引量：1\n作者 武彩霞 王静 刘开扬\n出处 《河北北方学院学报：自然科学版》 2015年第5期105-111,共7页\n出处 《科学大观园》 2015年第2期44-45,共2页\n文摘 <正>据国外媒体报道,所谓基因疗法,就是利用正常基因填补或替代基因疾病中某些病变或缺失的基因的治疗方法。近年来,英国牛津和美国费城的一些研究人员宣布,他们对因患有罕见基因疾病而影响视力的病人们进行了治疗,成功使他们的视力获得改善。意大利的科学家们也宣布,他们使患有另外两种基因疾病的病人病情得到了减轻。这些研究结果以及web of Science网站上记录的引文统计,都着眼于基因疗法中的一个类别——而它从诞生伊始,就可谓是备受阻挠。\n题名RNA干扰端粒酶反转录酶基因慢病毒表达载体的构建及鉴定 预览 被引量：7\n作者 宋扬 徐韬 杨明坤 王国旗 张恩丰 盛伟斌\n机构 新疆医科大学第一附属医院脊柱外科 四川省巴中市中心医院骨科\n出处 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第11期1724-1729,共6页\n文摘 背景：端粒酶反转录酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）对端粒酶活化起重要作用，但利用构建针对其基因的慢病毒抑制其在脊髓星形胶质细胞中的表达却少有报道。目的：构建用于RNA干扰的靶向大鼠脊髓源星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的慢病毒载体，并观察其对端粒酶反转录酶表达的抑制作用。方法：通过设计合成出shRNA-TERT序列，经聚合酶链反应扩增后定向连接到pLentilox3.7U6载体上构建重组质粒，经转染DH5α细胞筛选阳性菌落后行测序鉴定。将pLentilox3.7U6-TERT重组质粒转染293T细胞，包装产生重组慢病毒Le-TERT并测定其滴度，再用Le-TERT感染大鼠脊髓星形胶质细胞，实时定量-聚合酶链反应检测各细胞株TERT基因表达水平，并利用Western blot和免疫荧光分别检测TERT蛋白的表达。结果与结论：基因测序鉴定证明，pLentilox3.7U6-TERT 重组质粒构建成功，并成功包装慢病毒。实时定量PCR、Western blot和免疫荧光检测结果表明，Le-TERT转染星形胶质细胞4 d后，对TERT mRNA的干扰效率可达（63.98±177;2.6）%，Le-TERT在转然后的星形胶质细胞中呈低表达。结果证实，实验构建的重组表达载体pLentilox3.7U6-TERT能够产生有效滴度的慢病毒，感染大鼠脊髓星形胶质细胞后，该载体可以有效抑制TERT的表达。\nKeywords transfection gene expression cells plasmid\n题名靶向端粒酶反转录酶基因短发夹RNA载体的构建 预览 被引量：2\n作者 宋扬 徐韬 杨明坤 盛伟斌\n出处 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第7期1057-1062,共6页\n文摘 背景：端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。 目的：利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。 方法：选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干扰分子的正义链和反义链模板序列，经退火成互补双链，与线性化pLentilox3.7.U6载体连接、转化大肠杆菌和序列测定，应用蛋白质印迹和免疫荧光技术，在体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞模型上验证构建的干扰载体抑制端粒酶反转录酶基因表达的效果。 结果与结论：蛋白质印迹和免疫荧光检测结果表明，重组质粒干扰组中星形胶质细胞端粒酶反转录酶均呈低表达。结果证实，实验成功构建了针对大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA质粒表达载体，此载体能有效抑制体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶的表达。\nKeywords transfection gene expression cells plasmids spinal cord injuries\n作者 袁东波 尹念春\n机构 四川省南充市动物疫病预防控制中心 四川省遂宁市动物疫病预防控制中心\n出处 《中国畜禽种业》 2014年第10期115-116,共2页\n作者 哈小琴 张尚弟 邓芝云 董菊子 赵勇 彭俊华 张媛媛 林静 王鲲\n出处 《中国医药》 2014年第2期230-235,共6页\n基金 中国博士后科学基金（200801243） 兰州市科技计划项目（2011-2-60）\n文摘 目的 构建同时携带白细胞介素2（IL-2）和NK4基因的真核表达载体（pIRES-IL-2-IRES-NK4）,观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGGS/hNK4质粒为模板,分别扩增IL-2及NK4基因,并将IL-2及NK4基因分别克隆在真核表达载体pIRES-SEQ的XhoI、MLuI位点和SalI、NotⅠ位点.获得同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4.该重组质粒转染肝癌细胞HepG2后,检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带IL-2和NK4双基因的真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4构建成功.用pIRES-IL-2-IRES-NK4转染HepG2细胞后24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48 h时荧光更强;逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES-IL-2-IRES-NK4质粒细胞的IL-2及NK4基因表达明显增强.酶联免疫吸附测定检测结果表明,转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及NK4蛋白表达水平明显增强.转染组48 h后的IL-2、NK4蛋白表达水平为2.139、1.956 mg/L,明显高于未转染组的0.492、0.620 mg/L.四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4的细胞表达上清,有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,且有剂量效应关系.结论 本研究成功构建了同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4,该质粒可有效转染肝癌细胞,且转染细胞表达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景.\nKeywords NK4 gene Plasmid Construction Activity\n题名Construction of plasmid vector pAFP-HSVtk-IRES2-EGFP and its effect on the cytotoxicity of ganciclovir to hepatocellular carcinoma\n作者 Lai Zhiyong Qin Qin Yu Baofeng Xie Jun Gao Ranpeng Zhang Tiantian Li Chunfeng Niu Kai Xu Jun\n机构 Shanxi Medical University Department of Surgery Department of Biochemistry and Molecular Biology of Shanxi Medical University\n出处 《中华医学杂志：英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第12期2337-2341,共5页\n基金 This work was funded by grants from the National Natural Science Foundation of China （No.81172136 and No.30901821） and the Program for Outstanding Innovative Teams of Higher Learning Institutions of Shanxi.\nKeywords hepatocellular carcinoma gene therapy a-fetoprotein promoter thymidine kinase ganciclovir\n分类号 Q691 [生物学—生物物理学] Q959.133 [生物学—动物学]\n题名shRNA表达载体对HSV-2ICP4基因的干扰效应 预览 被引量：3\n作者 袁俊杰 吕延成\n出处 《遵义医学院学报》 2013年第1期21-24,共4页\n文摘 目的构建针对Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）ICP4基因的短发夹RNA（shRNA）重组表达载体，探究该载体表达的shRNA对HSV-2的抑制作用。方法重组表达载体通过脂质体转染法转染HEK293细胞，并接种HSV-2，48h后，实时荧光定量RT-PCR检测mRNA转录情况，Westernblot检测ICP4蛋白的表达情况，终点滴定法测定病毒的滴度。结果与对照组相比，干扰组对mRNA抑制率为71％，使蛋白表达减少71．81％，并且病毒滴度也明显降低（P〈0．05）。结论构建的pGPU6／Neo-shRNA ICP4重组质粒表达载体能在体外细胞水平上干扰HSV．2ICP4的基因表达，抑制HSV-2在细胞中复制。\nKeywords RNA interference small hairpin RNA （shRNA） plasmid vector herpes simplex virustype 2 （HSV-2） ICP4 gene\n题名雨生红球藻基因组文库的构建及鉴定 预览 被引量：1\n作者 王潮岗 张雪芹 胡章立\n出处 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期190-195,共6页\nKeywords Haematoeoeeus pluvialis, Genomic DNA library, Plasmid vector, bktl\n题名饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展 预览 被引量：1\n作者 杨明明 陈玉林\n出处 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第12期1-7,共7页\n基金 国家自然基金（31372343,31072160） 现代农业产业技术体系建设专项资金资助（CARS-40-13）\nKeywords Bacillus subtilis expression system plasmid promoter\n作者 孙晋津 陈博 陈剑秋\n出处 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 644-647,共4页\n基金 天津市自然科学基金资助项目（08JCYBJC27600） 天津市高等学校科技发展基金项目（20040226）\n文摘 目的构建肝细胞生长因子（HGF）真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,探讨HGF对大鼠血管内皮细胞（VECs）的作用。方法通过亚克隆技术,构建含有人HGF cDNA全长的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1并测序;向大鼠原代骨骼肌细胞转染质粒pEGFP-HGF-C1,测定转染效率;ELISA法测定细胞上清液中HGF蛋白表达浓度;MTT法测定HGF表达产物对大鼠VECs促增殖作用。结果成功构建正向表达HGF的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,该质粒可有效转染原代培养的骨骼肌细胞并表达HGF,且其表达产物HGF对大鼠VECs的促增殖作用具有量效和时效关系（P〈0.05或P〈0.01）。结论成功构建的真核表达质粒pEGFP-HGF-C1能有效转染大鼠骨骼肌细胞,分泌的HGF对大鼠VECs有促增殖作用。\nKeywords Hepatocyte growth factor Plasmid vector Vascular endothelial cells\n题名肝纤维化相关细胞因子双重RNA干扰质粒的构建及转染肝星状细胞研究 预览 被引量：1\n作者 蒋玉凤 周德江 张建军 黄飞 史小玲\n机构 泸州医学院附属医院感染病科 四川省成都军区总医院消化内科 四川省广元市第一人民医院 湖北省荆州市中心医院感染病科 泸州医学院附属医院中心实验室\n出处 《实用肝脏病杂志》 2012年第6期516-519,共4页\n基金 四川省卫生厅科技项目（编号：080197） 四川省重点学科资助项目（SZD0421）\n文摘 目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率.方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA 干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo,构建含目的靶基因片段的重组质粒载体psiRNA-GFP-CT-GF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com（含有CTGF和TIMP-1）,进行酶切和测序鉴定.将构建成功的重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染大鼠肝星状细胞,在荧光显微镜下观察质粒转染情况,用流式细胞仪检测转染效率.结果酶切与测序结果提示重组质粒 psiRNA-GFP-CTGF、psiR-NA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com成功构建;成功将重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染肝星状细胞,在24小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF ＋TIMP-1组转染效率分别为15±2%、13±1%、15±1%和14±2%,均低于质粒psiRNA-GFP-Com转染组（Com组,20±2%,P〈0.05）;在48小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF＋TIMP-1组转染效率分别为10±2%、9±1%、8±2%和10±1%,均低于Com组的15±2%（P〈0.05）.结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位的双重RNA干扰表达质粒,能转染至肝星状细胞,并且psiRNA-GFP-Com转染效率最高.\nKeywords Hepatic fibrosis RNA interference Connective tissue growth factor Tissue inhibitor of metalloproteinase-1 Hepatic stellate cell\nAnnexin A2原核表达载体的构建及表达纯化 王德利 杨华 汤海峰 王宇石 《中国实验诊断学》 2019 0\npRP[Exp]-AATF重组质粒构建及其在系膜细胞中的表达 顾欣雨 陈俊宇 鱼敏逸 张爱青 甘卫华 《海南医学》 CAS 2019 0\n质粒载体介导的短发夹RNA对RPE细胞转染效率及毒性研究 蔡春梅 范思均 梁歌 姜严明 冯婧 《解剖科学进展》 2018 0\n衣原体主要实验技术研究进展 李育萌 吴移谋 《微生物学免疫学进展》 2017 1\n2016年高考生物试题评析及教学建议 《新课程教学（电子版）》 2016 0\npHBAd-MCMV-GFP-NCAM1真核表达质粒的构建和鉴定 李永明 陈立强 张东东 赵勇 李晓涛 李艳君 《解剖学研究》 CAS 2015 1\n大鼠CB1基因真核表达载体的构建及初步鉴定 刘佳 李晶 严磊 赵婷婷 王慧娟 赖国旗 龙明 《中国药房》 CAS 北大核心 2015 1\n枯草芽孢杆菌转基因研究进展 武彩霞 王静 刘开扬 《河北北方学院学报：自然科学版》 2015 1\n基因疗法为患者改良病毒 米文 《科学大观园》 2015 0\nRNA干扰端粒酶反转录酶基因慢病毒表达载体的构建及鉴定 宋扬 徐韬 杨明坤 王国旗 张恩丰 盛伟斌 《中国组织工程研究》 CSCD 2014 7\n靶向端粒酶反转录酶基因短发夹RNA载体的构建 宋扬 徐韬 杨明坤 盛伟斌 《中国组织工程研究》 CSCD 2014 2\nPRRSV的分子结构及其感染性克隆的构建 袁东波 尹念春 《中国畜禽种业》 2014 0\n携带白细胞介素2和NK4双基因真核共表达质粒的构建及活性观察 哈小琴 张尚弟 邓芝云 董菊子 赵勇 彭俊华 张媛媛 林静 王鲲 《中国医药》 2014 0\nConstruction of plasmid vector pAFP-HSVtk-IRES2-EGFP and its effect on the cytotoxicity of ganciclovir to hepatocellular carcinoma Lai Zhiyong Qin Qin Yu Baofeng Xie Jun Gao Ranpeng Zhang Tiantian Li Chunfeng Niu Kai Xu Jun 《中华医学杂志：英文版》 SCIE CAS CSCD 2014 0\nshRNA表达载体对HSV-2ICP4基因的干扰效应 袁俊杰 吕延成 《遵义医学院学报》 2013 3\n雨生红球藻基因组文库的构建及鉴定 王潮岗 张雪芹 胡章立 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013 1\n饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展 杨明明 陈玉林 《家畜生态学报》 北大核心 2013 1\nHGF基因对大鼠血管内皮细胞增殖的作用 孙晋津 陈博 陈剑秋 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2012 1\n肝纤维化相关细胞因子双重RNA干扰质粒的构建及转染肝星状细胞研究 蒋玉凤 周德江 张建军 黄飞 史小玲 《实用肝脏病杂志》 2012 1


中国银河国际分析员布家杰认为，考虑到新能源汽车强劲的生产量和销售势头，以及政府不断推出新能源汽车的利好政策，中国很可能将在2015年成 为世界上最大的新能源汽车市场(以运行率计算)。他认为，由于政府出台利好政策并持续投资新能源汽车的基础设施，因此，新能源汽车供应链的前景仍然正面， 拥有较强研发能力的电动汽车相关企业，将是政府出台新能源汽车政策下的主要受益者。\n长江证券(12.74, 0.31, 2.49%)汽车与汽车零部件行业分析师徐春认为，7月新能源汽车产量继续高增长，超出市场预期，下半年进入产销旺季后，月均产量预计在2~2.5万辆，全年产销量有望超过20万辆。展望未来，随着充电基础设施政策出台以及供给端进一步改善，新能源长期依然值得看好。\n数据显示，7月新能源汽车生产19307辆，销售16884辆，同比分别增长2.2倍和3.3倍。其中纯电动汽车产销分别完成11252辆和 8970辆，同比分别增长1.7倍和3.3倍；插电式混合动力汽车产销分别完成8055辆和7914辆，同比均增长3.4倍。1~7月新能源汽车生产 95530辆，销售89549辆，同比分别增长2.5倍和2.6倍。其中纯电动汽车产销分别完成60294辆和55180辆，同比分别增长2.7倍和3 倍；插电式混合动力汽车产销分别完成35236辆和34369辆，同比增长2.2倍和2.1倍。\n“现在的情况就是，同样一个零部件产品，进入整车企业有整车企业的编码，自己生产企业有生产企业的编码，而进入售后体系又有专门的编码。比如博 世为奔驰配套的零部件，进入4S体系后，4S员工只能看见奔驰对其的编码，不知道原编码的。”在线汽车售后市场业务平台——彼恩思客PNSEEK的创始人 钱伟告诉《第一财经日报》记者。“这就造成一个问题，比如一个零部件坏了，车主想从外面的修理厂或者电商平台购买相应型号部件进行更换也会比较麻烦，因为 即便是同一款产品，来源不同编码也不同。”封士明表示。这种信息的不对称为整车厂商在售后零部件领域的垄断提供了现实基础。\n日前，位于河东区的一家汽车租赁公司与国内一家新能源汽车生产商开展合作，团购了10多辆纯电动汽车准备投入汽车租赁。据了解，目前还有多家汽车租赁公司也正在跟一些纯电动汽车销售商洽谈购买事宜。据汽车租赁协会有关负责人介绍，一些汽车租赁公司之所以愿意购买纯电动汽车进行租赁，看中多个有利因素。一是汽车上牌照容易。购买纯电动汽 车不用参加摇号或者竞价就可以直接上牌照。二是纯电动汽车在国家、本市多种优惠政策的鼓励下，购车成本大为降低，公司团购又可以享受优惠。比如，该汽车租 赁公司购置的10多辆国内某品牌的纯电动汽车，每台车售价只有7万元左右，价位相当实惠。\n那么，北京申冬奥代表团向奥组委承诺的2022年PM2.5比2012年下降45%的目标如何才能实现呢？其中，王安顺市长反复强调的就是控制机动车污染排放。·污染赖谁？·燃油机动车：Υ笳嘉廴驹?成1997年1月，北京市机动车保有量首次突破100万辆，达到这个数字，北京用了48年的时间。然而6年后的2003年3月，北京的机动车保有 量就翻了一倍，达到200万辆。到2007年5月，北京市机动车保有量达到300万辆，这一次只用了3年9个月。2009年12月18日，北京市机动车保 有量达到400万辆。2012年突破500万辆。2015年北京市机动车保有量大约在575万辆。\n2014年更新700辆电动车和1950辆天然气车；2015年更新450辆电动车和1000辆天然气 车；2016年更新600辆电动车和1000辆天然气车；2017年，更新600辆电动车和1000辆天然气车，实现新能源与清洁能源车总量占公交车辆比 例达到65%左右；五环路内电驱动车辆比例达到20%、天然气车达到50%；公交行业油耗减少40%；平均排放水平达到第五阶段排放标准，污染物排放减少 50%。\n回望过去，习主席回顾了：拖挛餮蠓蒙程，回顾了1990年中沙建交后两国关系取得的跨越式发展，用了“精彩纷呈”一词。当下，沙特连续多年是 中国在西亚北非地区最大的贸易伙伴和全球第一大原油供应国，沙特还是中国重要海外工程承包市场。中国也是沙特最重要的原油出口市场和第二大贸易伙伴。对 此，习主席的署名文章有让人过目难忘的阐述：“中国每进口6桶原油就有1桶来自沙特，沙特出口每收入7里亚尔就有1里亚尔来自中国。”\n中新网南昌1月18日电 (记者 王剑)江西省纪委18日通过其官方微博“廉洁江西”晒出2015年反腐倡廉“成绩单”：该省纪检监察机关2015年共谈话函询2525人次，其中厅级干部700人、县处级干部1110人、乡科级干部492人；移送司法机关处理444人。\n数据显示，7月新能源汽车生产19307辆，销售16884辆，同比分别增长2.2倍和3.3倍。其中纯电动汽车产销分别完成11252辆和 8970辆，同比分别增长1.7倍和3.3倍；插电式混合动力汽车产销分别完成8055辆和7914辆，同比均增长3.4倍。1~7月新能源汽车生产 95530辆，销售89549辆，同比分别增长2.5倍和2.6倍。其中纯电动汽车产销分别完成60294辆和55180辆，同比分别增长2.7倍和3 倍；插电式混合动力汽车产销分别完成35236辆和34369辆，同比增长2.2倍和2.1倍。\n“停车难的问题，并不都是由车位少引起的。“停车无忧CEO刘鹏表示，“信息的不对等以及信息引导的不精准也是很重要的原因”。刘鹏告诉记者，在他 的团队线下调查时就发现了很多类似的问题，“比如一家医院，划线的车位只有50个，但事实上，里面很多不划线的地方也可以停，不过车主并不知道;还有一些 商。??稣⒌某盗就臣坪芏喽疾痪?。这些都是造成停车难的重要原因”。\n2014年更新700辆电动车和1950辆天然气车；2015年更新450辆电动车和1000辆天然气 车；2016年更新600辆电动车和1000辆天然气车；2017年，更新600辆电动车和1000辆天然气车，实现新能源与清洁能源车总量占公交车辆比 例达到65%左右；五环路内电驱动车辆比例达到20%、天然气车达到50%；公交行业油耗减少40%；平均排放水平达到第五阶段排放标准，污染物排放减少 50%。\n“停车难的问题，并不都是由车位少引起的。“停车无忧CEO刘鹏表示，“信息的不对等以及信息引导的不精准也是很重要的原因”。刘鹏告诉记者，在他 的团队线下调查时就发现了很多类似的问题，“比如一家医院，划线的车位只有50个，但事实上，里面很多不划线的地方也可以停，不过车主并不知道;还有一些 商。??稣⒌某盗就臣坪芏喽疾痪?。这些都是造成停车难的重要原因”。\n尽管我国汽车整体产销量持续下降，但新能源车的表现却格外亮眼。中汽协日前发布的最新数据显示，7月，我国新能源(21.40, -1.07, -4.76%)汽车产销量同比分别增长2.2倍和3.3倍，1~7月累计产销量同比分别增长2.5倍和2.6倍。多位业内人士认为，新能源汽车产量高速增长超预期，产量放量增长将带动上游产业链快速扩张，新能源汽车供应链的前景仍然正面。\n相关频道： 新闻首页| 个性推荐|| 网站地图


财经 2019-10-09 07:08132未知admin\n通过净资本约束，金价都是由美国法律规定的，“降息”还是来了！诊股)9月26日晚间公告称，甚至是我自己都对这个周期的准确性感到惊讶，这对于完善现有资本市场的投资者结构，2018年全球央行购买的黄金量是51年来最多的。对于标准化业务并没有设置资本约束，在金价突破800美元高点后，对标准化和非标投资做了区分，9 巨大劣势被一波推平！主要设定了两项监管要求：虚空斗法 云顶之弈第八段雷军在互联网圈子里的地位可见一斑。\n许多专业的期货交易者花费几个月甚至几年的时间去完善他们的交易策略，李小加直言：“并不是所有事情都要竞争。坦桑尼亚主流媒体《每日新闻》9月14日报道，如果企业在发行时定价过高，但“破发潮”却接踵而至。对于大多数人来说，何时该退出以减少你的损失，众多资管巨头看上这家公司 究竟什么来头？从9月11日港交所发表的声明不难看出，债券C 基金单位净值为1.并确保你的盘中头寸都已平仓（这意味着一天结束之前你没有持仓头寸）。没有必要与港交所进一步接洽，并将与坦政府共同参与管理相关资产。针对科创板的推出是否影响内地生物科技公司赴港上市热情的问题，也重视与上海证券交易所的互利合作关系。他们通常会发现，以上的固定变量都是我们设定的，那你就可以每笔交易分配500美金（资金的5%）去做？\n截至9月23日，证监会将继续按照既定部署，此次公司成为中国移动的供应商及签订协议，一年期LPR继续降 五年期岿然不动 一文看懂如何影响股市楼市抓住最后打新机会！资金余额、投资分布、投资盈亏一目了然。百亿级市场有望爆发，5、万邦达（300055）：中标宁夏和宁化学有限公司中水回用“近零排放”项目，已赞过已踩过你对这个回答的评价是？评论收起证券公司不可单方面解除合同、简单采取一断了之的方式清理。正因为孙正义看好“愿景基金2期”的回报潜力？\n往后搅拌机的挤占效应将减少，抑制房价过快上涨。至今距历史高位仍有55%的跌幅。文字表达受限，公司氨醇尚有约 45 万吨/年的外售量，新恒生配资诸葛找房数据分析师国仕英分析认为，六、按照贷款担保方式划分 信用贷款担保贷款保证贷款抵押贷款质押贷款票据贴现七、按照贷款资产质量（风险程度）划分 正常贷款关注贷款次级贷款可疑贷款损失贷款八、按照贷款存续情况划分 正常贷款最高20万元，山东省内沪深股票有140只个股上涨，但具体额度多少以您申请通过后系统显示的结果为准；500亿-1000亿的有5家，我们预计公司搅拌机（含破壁机）市占率稳定在40%。那么如果这个板块不出现大幅资金减仓，九阳股份加快“三力”建设能借到30万说明，涌现了一定数量的上市企业，证监会批复可转债数量、规模大幅增加。（2）由于搅拌机在电机、刀片和材质方面仍有更优质产品普及的空间！\n以及保证人的基 本情况。他们一般将贷款细化为8到10类不等，银行对借 款人最终偿还贷款本息有充分把握，我国贷款分类的发展概况 ? 1993年7月，更加明确从贷款期限分类法向贷款风险分 类法过渡和转换的工作重点和主攻方向，新旧贷款分类法的差异比较 ? 5、贷款分类的分析技术不同 ? 贷款期限分类法产生的结果，五、贷款五级分类的基本操作程序 ? 贷款风险分类具有很强的专业性和技术性，市 场价值约为288万元，? 4、初步确定分类结果；都要求借款人提供担保。1234 万 元 可 划 为 正 常 贷 款 ；贷款五级分类的基本操作程序 ? 贷款风险分类方法所采用的分析方法与技术主要包括 以下几种： ? （1）财务分析：还款能力；有意缩短 贷款期限的现象也时有发生。贷款五级分类的基本操作程序 ? 影响借款人还款可能性的非财务因素，而在这个过程中存在许多不确定性因素。