Dentista per bambini Rosate - DENTISTA MILANO\nDentista per bambini Rosate: ✅ eseguiamo terapie innovative ed efficaci perché il paziente è il centro del nostro lavoro!\nI bambini sono esseri fragili, piccoli, da proteggere e che devono essere curati cercando di non danneggiare la loro psiche, un Dentista per bambini Rosate è consapevole di quanto possa essere delicato il suo lavoro. Un Dentista per bambini Rosate è un professionista che deve avere una grande esperienza nel suo settore, ma avere anche un buon carattere, molto paziente per riuscire ad interagire con i propri clienti poiché basta molto poco per rendere irrequieto il paziente e quindi far divenire una semplice visita in un vero dramma. Ogni età infantile porta ad avere diverse problematiche da affrontare, ci sono tanti elementi che si evidenziano nei denti e nel palato di un bambino che possono essere risolti in tempi brevi e quindi non avere conseguenze da adulti. Molti genitori sono inconsapevoli che, proprio quando si è bambini, si apprendono i primi movimenti di masticazione, triturazione e lavorazione del cibo nella bocca.\nUn Dentista per bambini Rosate lo nota immediatamente.\nOltre ai denti limati si ha anche uno sviluppo diverso dei muscoli mandibolari, questo porta ad avere una parte più “gonfia” dell’altra e si ha un immediato impatto estetico di disuguaglianza. Un Dentista per bambini Rosate cerca di valutare il problema nella sua interezza è proporre una soluzione che non sia troppo dispendiosa, per le tasche dei genitori, e facile da seguire per il bambino.\nDentista per bambini Rosate, specializzazioni\nQuali sono le differenze tra un dentista “normale”, cioè per adulti, da un Dentista per bambini Rosate? Perché è consigliato far visitare un bambino, con una fascia di età dai 5 anni fino ai 10 anni, da un Dentista per bambini Rosate? Non vogliamo assolutamente togliere nulla a nessuno di questi due professionisti, ovviamente essi sono medici specializzati che hanno una grande esperienza nel loro settore, cioè nella cura dei denti, e una buona esperienza nella cura della dentatura.\nTuttavia il Dentista per bambini Rosate si occupa di ortodonzia pediatrica, conosce quali sono le patologie che interessano i bambini, quali sono le problematiche che essi affrontano, cerca indizi chiari di problemi, come quello della masticazione, riesce a prevenire i problemi che si potrebbero sviluppare con il tempo. Un dentista normale potrebbe non conoscere affondo il problema e, nei casi di “totale inesperienza” in campo pediatrico, potrebbe commettere degli errori che ricadono direttamente sul bambino quando esso raggiunge l’età adulta e perde i denti da latte. Uno dei problemi che molti pazienti hanno dovuto affrontare poiché i genitori li avevano fatti “curare” da dentisti e non da Dentista per bambini Rosate specializzati, sono le problematiche date dai denti del giudizio e dal morso inverso. Il dente del giudizio è un dente molto particolare che cresce in tarda età, ma che deve avere anche lo “spazio” per riuscire a spuntare o comunque per svilupparsi.\nLa verità è che un dentista, quando non ha una adeguata competenza infantile, dovrebbe immediatamente dirotta il genitore, che magari è inconsapevole della ortodonzia pediatrica, verso un suo collega che sia un Dentista per bambini Rosate.\nNonostante essi diano un beneficio momentaneo, con l’avanzare dell’età nasceranno i problemi seri. Nel caso non siete pienamente soddisfatti del servizio del vostro dentista potete rivolgervi ad un Dentista per bambini Rosate per avere diversi pareri. Il morso inverso è un problema dentale dove l’arcata inferiore sporge in avanti e non si allinea con l’arcata superiore durante la masticazione.\nSe esso non viene corretto in tempi rapidi, da un Dentista per bambini Rosate, provoca una deformazione della mandibola e quindi anche dell’estetica del bambino che negli anni continua a degenerare. Il morso inverso o morso incrociato, molti lo conosco in questo modo, è quando il cibo viene sospinto dalla lingua verso i denti e si esegue un movimento contrario della bocca, invece di mordere dall’alto verso il basso, si morde dal basso verso l’alto. Un Dentista per bambini Rosate, per poter risolvere il problema inizia una sorta di cura “educativa” prima nei genitori e poi nei bambini e pone anche un eventuale apparecchio ortodontico di “controllo” in modo da garantire un risultato.\nDentista per bambini Rosate, problemi al palato\nIl palato dei bambini è maggiormente soggetto a deformarsi a causa di un uso spropositato del ciucciotto anche in età “avanzata”, se cosi possiamo dire poiché si parla di usare il ciucciotto ancora a 4 o 5 anni, oppure avere la cattiva abitudine di giocare con il cibo lasciandolo in bocca per molto tempo senza ingoiarlo. Possono sembrare vezzi e giochi da bambini, ma che in realtà, in alcuni soggetti, potrebbero creare un problema che perdura in età adulta, ma oltre al problema della “grandezza” o deformazioni del palato, si ha anche un danno alle radici dei denti. Allora cerchiamo di far capire le conseguenze, in modo che anche i genitori diretti possano fare dei piccoli controlli e valutare se occorre una visita da un Dentista per bambini Rosate. Si consiglia sempre di far eseguire una visita da un Dentista per bambini Rosate, anche solo per avere un quadro generale di salute, ma possiamo richiedere le competenze di un Dentista per bambini Rosate anche se siamo noi a notare qualche cosa che non va. L’uso del ciucciotto per lungo tempo, quando esso diventa un vezzo o una ossessione per il bambino, lo lasciano fino a 4 anni, esso potrebbe aver creato un palato molto profondo, aver deformato la lingua che non ha abbastanza spazio “per riposare” e quindi dare anche problemi di pronuncia.\nDentista per bambini Rosate, sovrannumero di denti\nQuesto vuol dire avere un danno notevole, alti fattori di sviluppare le carie e anche dolori durante la masticazione. Per questo è necessario rivolgersi sempre ad un Dentista per bambini Rosate, proprio per evidenziare questi tipi di danni che si possono avere. Per risolversi, quando poi si è adulti, si è costretti ad affrontare cure costose, a portare diversi apparecchi ortodontici o subire anche operazioni per nulla piacevoli.\nLo stesso capita quando si ha un palato piccolo, che è un problema genetico. In questo caso è opportuno rivolgersi immediatamente ad un Dentista per bambini Rosate che potrebbe studiare un apparecchio ortodontico per riuscire a garantire un aumento di spazio o comunque una dentatura messa nuovamente in linea. La cura dei denti, tramite un Dentista per bambini Rosate, porta ad avere tantissimi benefici e quindi a rendere anche migliore la qualità della vita del bambino che non soffre di eventuali problemi e dolori.\nRicordiamo che sempre tramite un Dentista per bambini Rosate, potete avere dei buoni consigli da seguire che sono mirati esclusivamente al proprio caso o meglio al proprio bambino. Potete comunque iniziare a notare qualche problema simile quando il bambino ha la esse sibilante, dichiara che ha un dolore in bocca o sulla lingua, quindi una pre visita da parte dei genitori potrebbe realmente essere adatta a prevenire questo danno.\nOvviamente, una volta che avete qualche chiaro indizio dovete assolutamente rivolgervi ad un Dentista per bambini Rosate.\nDentista per bambini Rosate e apparecchi ortodontici\nQuando si ha questo tipo di consapevolezza, portare un apparecchio ortodontico, rende il bambino asociale, timido, apatico e con tendenza a isolarsi. Per fortuna in soccorso giunge una nuova tecnologia del tutto innovativa, vale a dire l’invisaling, vale a dire un apparecchio invisibile, che è formato di un materiale trasparente, ma che nei bambini potrebbe essere personalizzato con dei disegni, colori e altri elementi che lo fanno assomigliare ad un gioco oppure che lo rende un accessorio “estetico”. Ricordiamo sempre che comunque, qualsiasi sia l’apparecchio ortodontico che ci occorre, meglio affidarsi comunque ad un Dentista per bambini Rosate che apporti alla fine un reale beneficio nel soggetto e quindi si sa esattamente cosa fare. Cercare di prevenire è realmente meglio che curare perché le spese che si sostengono, per la cura dei denti dei bambini, sono molto inferiori rispetto ai costi che si sostengono in età adulta. Inoltre, la dentatura infantile è più facile da “lavorare” rispetto alla dentatura fissa che è molto forte e quindi provoca anche dolori acuti.


SANT'ORSOLA, 2011 DIFFICILE: FATTURATO IN CALO (-2%) | Corriere ortofrutticolo\nSANT’ORSOLA, 2011 DIFFICILE: FATTURATO IN CALO (-2%)\nIl 2011 sarà ricordato forse come una delle stagioni più complesse nella storia della Cooperativa Sant'Orsola (che a sede a Pergine Valsugana, in provincia di Trento), che lo scorso 28 aprile ha presentato ai suoi soci riuniti in assemblea i dati del bilancio dell'annata appena trascorsa, insieme alle iniziative in programma per il 2012.\nIl 2011 sarà ricordato forse come una delle stagioni più complesse nella storia della Cooperativa Sant’Orsola (che a sede a Pergine Valsugana, in provincia di Trento), che lo scorso 28 aprile ha presentato ai suoi soci riuniti in assemblea i dati del bilancio dell’annata appena trascorsa, insieme alle iniziative in programma per il 2012.\nIl mix composto dalle difficili condizioni meteorologiche dell’estate scorsa e dai problemi legati a nuovi insetti infestanti hanno pesato in modo determinante sui risultati della Cooperativa. Nonostante tutto, l’esercizio 2011 si è chiuso con un fatturato pari a 52,2 milioni di euro, con una flessione del 2% rispetto all’anno precedente da imputare principalmente a un netto calo dei conferimenti.\nNel corso dei mesi, infatti, il prezzo medio di vendita al chilogrammo dei prodotti Sant’Orsola si è mantenuto a un livello leggermente superiore a quello del 2010 (da 6,52 a 6,61 euro/al chilo), dimostrando come, a fronte di una stagione di produzione normale, si sarebbero potute ottenere performance in linea con quelle degli esercizi precedenti, anche in virtù di una domanda che si mantiene su buoni livelli.\nAnche nel 2011 Sant’Orsola si conferma comunque leader nel settore dei piccoli frutti, fragole e ciliegie tardive, grazie alla solidità strutturale e alla compattezza della compagine sociale e un marchio forte e molto noto, che gode della fedeltà di milioni di consumatori in tutta la Penisola.\nIl bilancio 2011: meno conferimenti, ma solidità patrimoniale e finanziaria\nNonostante i fattori esterni che hanno influito negativamente sulla stagione, Sant’Orsola ha chiuso l’esercizio con un consuntivo in linea con i risultati attesi nella seconda metà dell’anno. In particolare, il bilancio 2011 ha confermato l’equilibrio e la solidità economica, finanziaria e patrimoniale della Cooperativa, testimoniata dai livelli di assoluta tranquillità dei seguenti indici: indice di copertura delle immobilizzazioni, grado di copertura dell’indebitamento, rapporto debiti finanziari su fatturato, incidenza oneri finanziari su fatturato, costo del lavoro su fatturato, capitale investito su fatturato. Sull’andamento della stagione hanno pesato principalmente le condizioni climatiche avverse che si sono registrate durante tutta l’annata.\nL’andamento dei mesi invernali ha inciso sul primo ciclo produttivo di fragole, mentre le piogge della prima quindicina di giugno hanno influito negativamente sulla stagione delle ciliegie. Infine, l’andamento meteorologico anomalo ha determinato sovrapposizioni di picchi produttivi tra diverse aree di produzione, in particolare per quanto riguarda lampone e mora. A incidere sulla produzione, anche la presenza del parassita Drosophila suzukii. In questo scenario, le entrate complessive della Cooperativa Sant’Orsola nel 2011 si sono attestate sui 52,2 milioni di euro, con una diminuzione del 2%.\nIl fatturato derivante dalla frutta fresca ammonta a 41,9 milioni di euro, con una diminuzione del 6%. A questi si aggiungono 3,2 milioni di euro derivanti dalle vendite di scorte agrarie, 3,1 milioni dalla vendita di piante ai soci, 680mila euro dal punto vendita aziendale e oltre 415.000 euro derivanti dalla vendita di prodotto trasformato.\nNel corso dell’anno sono state messe in commercio 6.100 tonnellate di fragole, piccoli frutti e ciliegie, con una richiesta costante lungo tutti i 12 mesi. Il prezzo di vendita medio è stato di 6,61 euro al chilo. Le liquidazioni ai soci hanno raggiunto complessivamente poco più di 18 milioni di euro, mentre gli acquisti di frutta dall’Italia e dall’estero si sono attestati a 9,9 milioni di euro.\n"Anche in presenza di una annata non ottimale – ha commentato il presidente della Cooperativa Sant’Orsola Silvio Bertoldi – siamo riusciti ad avere valutazioni positive per il nostro prodotto. Siamo fiduciosi in un miglioramento delle nostre performance nel 2012, grazie alle misure di efficienza e contenimento dei costi che stiamo introducendo da diverso tempo".\n"La domanda di piccoli frutti, fragole e ciliegie tardive continua ad attestarsi su buoni livelli – gli fa eco Michele Scrinzi, direttore della Cooperativa Sant’Orsola – Grazie alle loro caratteristiche gustative, nutrizionali e alle grandi proprietà salutistiche, i nostri prodotti si continuano a vendere molto bene e i problemi di giacenze e scorte sono praticamente assenti".\nLa scommessa: tecnologia per l’incremento del reddito netto dell’azienda agricola\nGli elementi che contribuisco alla formazione e mantenimento del reddito degli agricoltori soci della Cooperativa sono molteplici. In particolare, hanno un ruolo importante il livello della produzione in qualità e quantità ed il livello dei costi di gestione dell’azienda agricola. Per incrementare i livelli quantitativi e qualitativi delle produzioni la Cooperativa, attraverso il servizio Tecnico ed il servizio Ricerca e Sviluppo, mette a disposizione specifiche tecnologie per la programmazione delle coltivazioni, per il controllo del microclima all’interno delle strutture di protezione, per la gestione dell’acqua e della fertirrigazione.\nL’utilizzo, inoltre, delle varietà ottenute attraverso il lavoro di miglioramento genetico, capaci di soddisfare gli aspetti sia produttivi per il coltivatore che gustativi per il consumatore, contribuisce alla crescita tecnica ed economica delle aziende. Si è inoltre concluso il primo anno del progetto pilota per il controllo di gestione all’interno dell’azienda agricola, che ha coinvolto un gruppo di aziende socie. L’iniziativa, che ha lo scopo di fornire all’imprenditore agricolo elementi di scelta per tenere sotto controllo i costi aziendali, verrà estesa ad altre aziende socie della Cooperativa, nell’ottica di incrementare l’efficienza aziendale anche sotto il profilo dei costi di gestione.\nSant’Orsola, un marchio simbolo di 40 anni di tradizione\nEra il 1972 quando un piccolo gruppo di coltivatori diede vita – in località Sant’Orsola Terme – a quella che, nel giro di pochi anni, sarebbe diventata una delle realtà più solide del tessuto produttivo regionale. E oggi, a quarant’anni esatti di distanza, quasi 1.200 produttori portano avanti quella tradizione produttiva con la stessa passione e dedizione che animò per primi i fondatori di Sant’Orsola. Due ventenni di storia, che hanno consentito alla Cooperativa di accumulare un enorme bagaglio di conoscenze ed esperienza in questo campo, si sedimentano oggi in un marchio divenuto simbolo di tradizione, competenza, cultura produttiva, qualità e sicurezza.\nÈ da questi valori che nasce il grande capitale di fiducia che i consumatori ripongono in Sant’Orsola e che rappresenta oggi uno degli asset principali con cui guardare al futuro con grande ottimismo. Una realtà testimoniata dai numeri: parlando di piccoli frutti, il brand della Cooperativa trentina ha una percentuale di ricordo spontaneo che sfiora il 5% (fonte dati: Ricerca Sociometrica 2010) mentre gli altri produttori, presi singolarmente, non arrivano allo 0,5%. La percentuale sale al 13% quando si chiede di riconoscere il marchio in una lista di nomi. Sant’Orsola è inoltre l’unico marchio ad essere ricordato spontaneamente da chi consuma regolarmente piccoli frutti, con una percentuale vicina al 15%. Se al dato sul ricordo spontaneo si aggiungono coloro che riconoscono il brand su una lista di nomi, comprendendo anche chi non consuma piccoli frutti, la percentuale di notorietà schizza oltre il 28%. Oltre la metà dei consumatori associa al marchio Sant’Orsola caratteristiche di qualità o italianità. Circa un terzo attribuisce ai suoi prodotti un valore più alto di quelli di altri produttori. Non sono inoltre state registrate risposte che collegano Sant’Orsola a connotazioni negative o percezioni di scarsa qualità. Risultati lusinghieri che confermano la bontà del lavoro dei soci e della cooperativa.\nSant’Orsola, il fatturato 2011 in sintesi\n■ Frutta fresca: 41.891.349 € (-6% rispetto all’anno precedente)\n■ Scorte agrarie: 3.153.381 € (+17% rispetto all’anno scorso)\n■ Piante: 3.136.584 € (-4% rispetto all’anno precedente)\n■ Punto vendita: 680.211 € (+6% rispetto all’anno precedente)\n■ Prodotto trasformato: 415.522 € (+16% rispetto all’anno precedente)\nSant’Orsola, i numeri della produzione conferita dai soci nel 2011 in chili\nFragola Fragolina Lampone Mora Mirtillo Ribes R Ciliegia Totale\n1.816.954 24.389 789.893 391.818 511.031 320.576 927.362 4.987.164\nNella prima foto in alto, da sinistra: Diego Nart, addetto stampa della Federazione Trentina della Cooperazione, Michele Scrinzi, Direttore della Cooperativa Sant’Orsola, Silvio Bertoldi, Presidente della Cooperativa Sant’Orsola, Gioacchino Trentinaglia, Vicepresidente della Cooperativa Sant’Orsola\nNella seconda foto, da sinistra Michele Scrinzi e Silvio Bertoldi


di Redazione IVG - 12 Agosto 2020 - 19:16\nLiguria. “Tamponi per tutti i passeggeri? E’ possibile, lasciamo questa opzione aperta. Ovviamente i nostri test saranno molto affidabili, la tecnologia si sta sviluppando velocemente. Potrebbero arrivare”. Così l’amministratore delegato di Costa Crociere Michael Thamm, al termine dell’incontro con il presidente della Regione Giovanni Toti e il presidente dell’autorità portuale Paolo Emilio Signorini, conferma che la compagnia è pronta a ripartire con un primo viaggio da Genova il 19 settembre e un protocollo di sicurezza che potrebbe diventare molto stringente.\nLa mattinata di Thamm è iniziata a Savona, dove ha incontrato il sindaco Ilaria Caprioglio. “È stata l’occasione per rinsaldare il legame fra Costa Crociere e la Città di Savona e parlare dei progetti condivisi – commenta il primo cittadino – Poche settimane fa la nostra Amministrazione aveva auspicato e sollecitato, insieme ad Autorità di sistema portuale, la ripartenza del settore crocieristico. La Città di Savona sarà lieta di poter accogliere, nuovamente, i turisti nella consapevolezza che i protocolli di sicurezza, messi a punto e condivisi dalle maggiori compagnie, garantiscono le condizioni per la ripartenza di uno dei comparti che hanno più sofferto in questo grave periodo di crisi globale. Costa Crociere a Savona, in questi anni, è stata motore dello sviluppo economico, turistico e sociale della Città. I dati raccolti nel rapporto Costa 2018 stimano in 125 milioni di euro l’impatto economico sulla Città home port, con quasi 900.000 passeggeri movimentati all’anno, oltre 700 posti di lavoro e rapporti con 30 fornitori”.


saveSave Trombosi-pcr-Indagini Di Alterazioni Geniche For Later\nlezione tecniche 2006\nPCR La reazione a catena della polimerasi , in inglese: Polymerase Chain Reaction , una tecnica di biologia molecolare che consente\ne la moltiplicazione (amplificazione) di frammenti di acidi nucleici dei quali si conoscano le sequenze nucleotidiche iniziali e terminali. L'amplificazione mediante PCR consente di ottenere in vitro molto rapidamente la quantit di materiale genetico necessaria per le successive applicazioni. Tale metodica fu ideata nel 1983 da Kary B. Mullis il quale ottenne, per questo, il premio Nobel per la chimica (1993). Schema di un ciclo di PCR : 1 ) fase di denaturazione : La soluzione di DNA da replicare + desossiribonucleotidi trifosfati + ioni magnesio + primer + TAQ polimerasi viene portata a una temperatura compresa tra 94 e 99 C. A questa temperatura la doppia elica del DNA si scinde e i due filamenti di cui essa composta sono liberi . 2) fase di annealing : La temperatura viene abbassata fino a 40-55 C per permettere il legame dei primer alle regioni loro complementari dei filamenti di DNA denaturati . 3) fase di estensione : Infine la temperatura viene alzata fino a 65-72 C al fine di massimizzare l'azione della TAQ polimerasi che determina un allungamento dei primer legati, utilizzando come stampo il filamento singolo di DNA . Il ciclo viene ripetuto generalmente per circa 30-40 volte. In genere non si superano i 50 cicli in quanto ad un certo punto la quota di DNA ottenuto raggiunge un plateau. I primers hanno una lunghezza di 20-30 coppie di basi, il valore di Tm ( temperatura di melting alla quale il 50 % del dna denaturato ) deve essere compreso tra 45-68C; per di pi i diversi primers che si vanno a ibridare ai filamenti opposti del DNA denaturato devono avere una Tm simile poich nella fase di ibridazione dobbiamo scegliere una T di Annealing che sar unica per entrambi gli oligonucleotidi ed uguale a: Tm = 5C. La Tm si ottiene tramite una formula: 4C (G+C) + 2C (A+T). Ricorda che la coppia C+G ha 3 legami H contro i 2 della coppia A+T, e richiede una T maggiore per la denaturazione. Dopo vari cicIi ripetuti di PCR si avr una accumulo esponenziale del frammento di interesse, la cui lunghezza sar definita dall estremit 5' dei 2 primers ; questo accumulo esponenziale perch il prodotto di ciascun ciclo diventa lo stampo del ciclo successivo. La reazione avviene in TERMOCYCLERS : dei termostati che consentono modifiche veloci della T fatte avvenire in un blocco in cui vengono alloggiate le provette che contengono la miscela di reazione; questi apparecchi consentono di impostare nella memoria le diverse T, le diverse fasi, i tempi delle fasi e le velocit di passaggio da una fase all'altra, creando quindi dei protocolli. Esistono diversi tipi di TERMOCYCLERS che differiscono principalmente in base al sistema di refrigerazione\_ riscaldamento del blocco; inizialmente erano utilizzati sistemi pi economici e lenti nel cambiamento della T ed erano sistemi a fluidi, a resistenza elettrica... Oggi si utilizzano sistemi pi sofisticati ma pi costosi basati sull'impiego di elementi semiconduttori; EFFETTO PELTIER : il fenomeno termoelettrico per cui una corrente elettrica che scorre tra due metalli o semiconduttori differenti posti in contatto (giunzione Peltier) produce un trasferimento di calore.\nPer ottenere la miscela PCR sufficiente una piccola quantit di DNA stampo, un largo eccesso di Primers, una miscela di DeossiRibonucleotidi Trifosfati per la successiva polimerizzazione, Mg che stabilizza libridazione del DNA , un buffer e la Taq polimerasi ( che una polimerasi termostabile ) ottenuta da un batterio estremofilo che vive in sorgenti bollenti a 70C. Il totale di miscela reazione circa 25-100 microL. Graficando le moli di prodotto in funzione del numero di cicli :\nci accorgiamo che c una fase di accumulo esponenziale a cui segue una fase di Platou , in cui la velocit di accumulo del prodotto si riduce fino ad annullarsi se il numero di cicli > 30. Fattori che determinano l'effetto Platou: -Inattivazione termica dellenzima TAQ a causa dellelevata temperatura della fase di denaturazione. - Riduzione del rapporto molare tra le concentrazioni della DNA-polimerasi e del DNA -Riduzione progressiva dellefficienza di denaturazione e/o di ibridazione -Distruzione degli amplificati per lattivit esonucleasica 5>3 della polimerasi -Accumulo di pirofosfati (inibitori della polimerasi)\n-Progressiva diminuzione della concentrazione dei reagenti . -Annealing sempre meno efficace : si riduce l'efficienza della formazione del complesso primer-DNA target poich il prodotto pu 1) reibridarsi o 2) fare un Annealing aspecifico o 3) competere con i primer per libridazione . Nel disegno dei primers bisogna : evitare sequenze inusuali come serie di purine o pirimidine, evitare sequenze palindromiche che provocano strutture secondarie (loop), e le estremit 3 non devono essere tra loro complementari per evitare la formazione dei primers-dimeri . Come in tutti i test di laboratorio necessario valutare i risultati tramite il CONTROLLO QUALITA . Il controllo positivo consiste in un campione in cui la sequenza bersaglio contenuta. Tale controllo non dovrebbe contenere un numero di copie di sequenza bersaglio troppo alto al fine di evitare di creare pericolosi aerosol che possano contaminare altri campioni o di sottostimare eventuali cali di sensibilit della reazione con produzione di falsi negativi. Il controllo negativo consiste in un campione in cui la sequenza bersaglio manca. Esso serve per evidenziare eventuali contaminazioni che potrebbero riferirsi sia all'estrazione del materiale genomico, sia al momento di preparazione della PCR ed utilizzato per verificare eventuali falsi positivi. I metodi pi comuni per la rivelazione dei prodotti della PCR sono: -Elettroforesi -Tecniche di ibridazione HPLC ( cromatografia liquida ad alta prestazione) -Elettroforesi capillare\nPCR QUANTITATIVA o REAL-TIME PCR Per la sua elevata sensibilit, la PCR consente di analizzare e determinare la quantit di un acido nucleico presente in una soluzione con accuratezza. Questo perch la [prodotto di reazione] proporzionale alla [Sub] nella fase di amplificazione esponenziale. La PCR Quantitativa in grado di misurare in tempo reale la concentrazione di una sequenza target di un campione biologico . Ha diverse applicazioni: per esempio nel monitoraggio di un'infezione, possiamo valutare il livello di attivit virale andando a determinare la [Dna virale]; nel monitoraggio terapeutico per predire la risposta al trattamento, ossia per stabilire se la terapia efficacie o meno; nello Screening di sostanze antivirali , studiamo in vitro queste sostanze verificando il loro effetto sull'attivit virale; oppure nella quantificazione dell mRNA dopo retrotrascrizione a cDNA , e pu essere utile per studiare come varia l'espressione di un gene in seguito ad uno stimolo esogeno, vedendo se c un aumento o riduzione del livello dell mRNA relativo. SISTEMA TAQMAN Per la quantificazione si utilizza un oligonucleotide -sonda; questa sonda a singola elica e complementare allamplicone ( la regione da amplificare ) e la si aggiunge durante la reazione di amplificazione. marcata con 2 fluorocromi che sono indicati uno con la lettera R =REPORTER che emette fluorescenza, e uno con la lettera Q =QUENCHER che spegne la fluorescenza quando si trova sufficientemente vicino a R . Questo possibile perch lo spettro di emissione del reporter si sovrappone allo spettro di assorbimento del quencher e quindi i fotoni emessi da R sono assorbiti da Q. Quando la sonda intatta , la fluorescenza del reporter spenta dalla vicinanza del quencher. Poi quando la sonda viene degradata/rotta dall attivit esonuclesica 5'-3' della Taq Polimersi nella fase di estensione , ha luogo un'emissione di fluorescenza a\ncausa dell allontanamento del reporter dal quencher; quindi posso misurare l'intesit della fluorescenza di R che sar direttamente proporzionale al numero di ampliconi generati durante la PCR.\nSISTEMA LIGHT CYCLER Basato sull'impiego di 2 ODN all'interno della regione di interesse, ognuno con un fluoroforo: uno legato ad un fluoroforo DONATORE, e l'altro ad un fluoroforo ACCETTORE. Questi ODN sono disegnati in modo che si vanno ad ibridare in regioni adiacenti, affinch donatore e accettore siano sufficientemente vicini per un trasferimento di energia di risonanza, FRET. Prima dell annealing, il segnale fluorescente proviene dal donatore, mentre l'accettore non emette fluorescenza; durante l'ibirdazione donatore e accettore si trovano abbastanza vicini, da trasferirsi energia cosi che l'accettore possa emettere un segnale fluorescente; anche qui deve esserci parziale sovrapposizione dello spettro di emissione del primo con lo spettro di assorbimento dell'altro.\nSYBER GREEN un colorante fluorescente capace di legare specificamente il DNA a duplice elica formando un complesso che assorbe luce blu e emette luce verde . Aggiunto ad una reazione di PCR , si complesser con il DNA a duplice elica man mano che esso verr prodotto e ne permetter la quantificazione in tempo reale da parte della strumentazione Dopo l'amplificazione si riscalda il campione per verificare la variazione dell'intensit di fluorescenza per ottenere una CURVA DI DISSOCIAZIONE; quando il DNA si denatura , e quindi aumenta la T, diminuisce la fluorescenza. Questo utile per determinare i valori di Tm dei prodotti di DNA presenti nel mio campione, e osservare se i valori di Tm sono quelli attesi. Il vantaggio che la metodica semplice e poco costosa, per si ha un perdita di specificit proprio per il fatto che si lega random a tutte le doppie eliche, compresi prodotti aspecifici.\nINDAGINI DIAGNOSTICHE DI ALTERAZIONI GENICHE Esistono diverse migliaia di patologie ereditarie dell'uomo, alcune pi frequenti con 1 incidenza di 1 affetto su 10000, altre pi rare con 1 affetto su 100000; dobbiamo anche distinguere le patologie ereditarie monogeniche da quelle multigeniche ; Monogeniche: sono dovute a mutazioni in un unico gene e tali mutazioni determinano il fenotipo della patologia; Multigeniche : mutazioni a carico di pi geni, come il cancro che deriva dall accumulo di mutazioni in pi geni che codificano proteine coinvolte nella regolazione della crescita cellulare. Conoscendo la sintomatologia e il fenotipo e sappiamo che dovuto a mutazioni a carico del singolo gene, possiamo ricavare info sull eredit del gene dallo studio degli alberi genealogici.\nTECNICHE DI DIAGNOSI - DIAGNOSI DIRETTA: la mutazione viene ricercato direttamente sul DNA o sul prodotto proteico; si pu fare questa diagnosi quando la mutazione nota e il gene stato clonato. Se la mutazione di grosse dimensioni , cio una delezione di una buona parte del gene, si pu usare la tecnica del Southern blotting. Tecnica 1 ) Southern Blotting : Un campione eterogeneo di DNA genomico viene trattato con enzimi di restrizione e successivamente sottoposto ad elettroforesi su gel d'agarosio o di poliacrilammide. Nel gel sar possibile osservare uno smear, ossia una striscia continua; non si vedranno bande nette perch il DNA genomico digerito con l'enzima di restrizione ha tantissimi punti di taglio, quindi sul gel si troveranno tantissimi frammenti che migreranno con velocit diverse in base al diverso peso molecolare. Il gel viene immerso in una soluzione alcalina per denaturare il DNA . Il gel viene coperto da un foglio di nitrocellulosa e sopra di questo viene posta una pila di fogli assorbenti. Per capillarit la soluzione tender ad attraversare il gel, il foglio di nitrocellulosa e risalir nei fogli assorbenti. I sali trascinano i segmenti di DNA perfettamente in verticale, depositandoli sullo strato di nitrocellulosa con il quale i segmenti instaurano legami elettrostatici . Il foglio di nitrocellulosa viene separato dal gel e immerso in una soluzione contenente una sonda marcata in vario modo che ibridizza con sequenze di DNA complementari presenti sul foglio, identificandole. A seguito di lavaggio della nitrocellulosa per eliminare le sonde non ibridate, si fa una lastra fotografica che metta in evidenza dove la sonda ha legato il DNA genomico. Se avvenuta una delezione totale del gene , si osserva l'assenza del segnale della sonda ; se la delezione parziale abbiamo un'alterazione della banda che sar di dimensioni diverse. Se quindi andiamo a analizzare tramite S.Blotting il campione di un individuo eterozigote avremo sia la banda del gene sano sia la banda del gene mutato. Tecnica 2 ) Un'altra metodica da utilizzare per evidenziare grosse delezioni la Multiplex PCR , che si utilizza nel caso in cui si voglia amplificare pi di un target nella stessa reazione. Nella Multiplex PCR vengono utilizzate diverse coppie di primers, e si producono contemporaneamente nella stessa provetta diversi amplificati (ovviamente con resa pi bassa). Tale tecnica trova applicazione in problemi diagnostici di routine, come nellanalisi della Fibrosi cistica, dellipercolesterolemia familiare, distrofia muscolare di Duchenne, ecc.\nPer le mutazioni puntiformi bisogna utilizzare tecniche diverse dal S.Blotting. Una di queste la Aso ( alleles specific oligonucletides ) Tecnica 3) ASO , che significa Oligonucleotide Allele Specifico. Si tratta di una sonda nella quale c una sequenza specifica di basi complementare ad una sequenza nota in cui vuoi identificare cambiamenti nucleotidici. Usando condizioni molto stringenti, puoi fare in modo che la sonda si leghi allo stampo solo se c' una complementarit del 100% con lo stampo. In questo caso la PCR avviene. Se non c' 100% complementarit, la sonda non pu legarsi e non si ha amplificazione. Per esempio, per mettere in evidenza una piccola mutazione che determina una condizione patologica come una semplice sostituzione di una G con una A, sintetizziamo 2 ODN, uno complementare allallele normale e laltro allallele mutato; questi ODN sono anche marcati con un radioisotopo come il Fosforo 32, e li utilizziamo per libridazione con filtri su cui presente il campione di DNA che vogliamo analizzare. Se si utilizzano condizioni di ibridazione normali, poich c solo un appaiamento scorretto si avr che lODN complementare allallele sano si ibrider sia al DNA selvatico N sia al DNA mutato D. Se aumentiamo la T di reazione gli ODN si legheranno solo agli alleli cui sono complementari . Si utilizzano 2 ODN per mettere anche in evidenza una condizione di eterozigosi; se osserviamo il profilo di un omozigote sano rimane legato al filtro solo lODN complementare allallele normale; se osserviamo il profilo dellomozigote malato, rimane legato al filtro solo lODN complementare allallele mutato; se osserviamo il profilo di un eterozigote, rimarranno legati al filtro entrambi gli ODN. Invece di far assorbire il Dna al filtro (Dot Blott), possibile immobilizzare la sonda al filtro e andare ad ibridare il Dna amplificato con PCR (Reverse Dott Blott). In questo caso invece di sonde radioattive, si utilizzano tecniche basate sull'affinit Antigene - Anticorpo, o Enzima-Coenzima. Il mio anticorpo si legher solamente al Dna a doppio filamento, mentre non si legher se non avvenuta l'ibridazione. Per rivelare l'anticorpo, si utilizza un secondo anticorpo che porta legato a s un enzima capace di catalizzare una reazione colorimetrica. Se avvenuta l'ibridazione si osserver una macchia colorata nel punto del filtro dove l'ibridazione avvenuta. Il vantaggio di questa tecnica si nota quando ci sono diverse possibili mutazioni in un gene, perch possibile immobilizzare pi sonde su un unica micropiastra, ognuna delle quali va ad ibridarsi al segmento del gene suscettibile della mutazione. Si potrebbe utilizzare anche un altro sistema, per esempio si pu amplificare il Dna mediante l'impiego di ODN biotimilati ; la biotina un coenzima che viene riconosciuto dalla Streptamidina (proteina batterica) che coniugata alla Perossidasi HRP catalizza una reazione colorimetrica. Ci sar anche qui sviluppo di colore se c stata ibridazione e viceversa.\nTecnica 4) Un'ulteriore tecnica l' RFLP ( principio dell'analisi di 1 polimorfismo di restrizione ) si basa sul principio che 1 mutazione pu creare o eliminare un sito di restrizione; queste mutazioni possono essere riconosciute mediante elettroforesi dopo digestione del DNA con l'enzima di restrizione appropriato. Ricapitolando, si amplifica il DNA tramite PCR, si fa digerire il frammento amplificato con enzima di restrizione, si va ad analizzare tramite elettroforesi su gel di agarosio e colorazione con bromuro di etidio. Se stato creato un sito di taglio , si avr una banda in pi , mentre si avr una banda in meno se il sito di taglio stato eliminato.\nTecnica 5) La PCR OLA (reazione di legatura di ODN) utilizzata quando la mutazione puntiforme ma non crea\_elimina siti di restrizione. Supponiamo che la mutazione avviene in un punto noto, ad esempio a livello del nucleotide 100, dove una T viene mutata in G. Bisogna sintetizzare 2 ODN, X e Y, 1 biotinilato, l'altro sar marcato con la Digossigenina. La prima sonda avr al 3' il nucleotide complementare al nucleotide 100, mentre la Y avr un nucleotide al 5' complementare al nucleotide successivo a quello suscettibile alla mutazione, ossia il 101. Nel momento in cui facciamo avvenire l'ibridazione, se il DNA selvatico gli ODN si allineano perfettamente; se mutato gli ODN non saranno allineati. Se utilizzo una Ligasi la reazione di legatura avverr solo se le sonde sono perfettamente allineate, se c mutazione questo non avviene. Per vedere il risultato: denaturo in modo da staccare le sonde dal DNA e le trasferisco in una piastra con micro pozzetti dove ho fissato la streptavidina, che lega la sonda X ( con la biotina ). La sonda Y rimarr legata al pozzetto solo se avvenuta la legatura. Lavo per eliminare tutto ci che non si legato e aggiungo un anticorpo che riconosce la Digossigenina della sonda Y, che porta legato un enzima in grado di catalizzare una reazione colorimetrica; l'anticorpo si legher se la legatura avvenuta, altrimenti la sonda Y stata lavata via. Aggiungendo il Substrato se si svilupper colore , si tratta di DNA selvatico , altrimenti di DNA mutato. Come metto in evidenza una condizione di eterozigosi ( ossia se si portatori sani )??? Utilizzo 2 coppie di inneschi, 1 complementare all'allele normale e 1 al mutato; se si eterozigote avr sviluppo di colore per entrambe le coppie di sonde, mentre se omozigote sano solo la coppia complementare all'allele selvatico svilupper colore. Esiste anche una variante di questa metodica chiamata LCR ( reazione a catena della Ligasi );\nTecnica 6) La reazione a catena della ligasi (o Ligase chain reaction, LCR) una variante della PCR. Permette l'amplificazione di materiale genetico sfruttando un processo ciclico che viene ripetuto pi volte. A differenza della PCR, per, viene sfruttata l'azione di una ligasi termostabile e la presenza di quattro oligonucleotidi in grado di appaiarsi, a due a due, a specifiche sequenze della molecola di DNA. Nella soluzione in cui si trova il materiale genetico si aggiunge la ligasi, gli oligonucleotidi (in quantit elevata), dessossiribonucleotidi trifosfati ed una DNA-polimerasi anch'essa termostabile. Dopo che il DNA stato denaturato, aumentando la temperatura della soluzione in cui si trova, si procede ad un raffreddamento che permette l'ibridizzazione degli oligonucleotidi con le sequenze bersaglio ad essi complementari.\nA questo punto la DNA-polimerasi sfrutta gli oligonucleotidi ibridizzati come inneschi ed inizia a sintetizzare un nuovo filmento di DNA usando quello di partenza come stampo. L'azione della polimerasi fa s che i due oligonucleotidi vengano collegati tra loro tramite il filamento neosintetizzato. Questi tre filamenti, per, non sono ancora uniti; a questo provvede la ligasi attraverso la formazione di legame covalente tra di loro. In tale modo viene a crearsi un filamento unico che verr utilizzato come stampo nei cicli successivi. Gli ODN sono disegnati con le stesse caratteristiche della PCR OLA; ci che cambia la tecnica di rivelazione: non utilizzo una reazione colorimetrica ma un sistema automatizzato. Se il Dna di tipo selvatico, avr l'accumulo di prodotto, mentre se mutato non avr accumulo di prodotto. Tecnica 7) L'ultima tecnica, per quanto riguarda la diagnosi diretta utilizza inneschi marcati con fluorofori allele-specifici; questi inneschi vengono utilizzati per reazioni di PCR; sintetizzo l'innesco per la PCR marcato con un fluoroforo ( con fluorescenza rossa ) in modo tale che al 3' presenti un nucleotide complementare al nucleotide suscettibile di mutazione; 1 altro nucleotide utilizzato semplicemente per l'amplificazione che si va ad ibridare all'altro filamento, non sar marcato. Se il DNA selvatico , il mio prodotto presenter fluorescenza, se invece c la mutazione, non avr nessun prodotto perch non avverr polimerizzazione. La condizione di eterozigosi necessita di un terzo innesco con marcatore che emette fluorescenza in verde complementare all'allele mutato; se l'individuo eterozigote si svilupper fluorescenza in giallo, perch c l incrocio tra quella rossa dell'allele sano e verde dell'allele mutato. Se la mutazione non conosciuta o altamente variabile posso sfruttare le diverse caratteristiche chimico fisiche che la mutazione induce nella molecola di DNA. Le varie metodiche sono: 1 - DGGE (elettroforesi su gel in gradiente denaturante) un metodo di separazione che si basa sulle differenze di comportamento nella denaturazione di frammenti a doppia elica di DNA. Il principio che regola la DGGE che, in presenza di un gradiente di sostanze denaturanti, le molecole di DNA a doppio filamento si denaturano in domini distinti. Una volta raggiunto il punto di denaturazione di un dominio, tale porzione del frammento di DNA inizia a denaturare, dando origine a molecole ramificate che hanno una mobilit pi ridotta nel gel di poliacrilamide. In presenza di concentrazioni molto elevate di denaturanti il frammento di DNA sar completamente denaturato in due molecole a doppio filamento. Pertanto, frammenti di DNA della stessa dimensione, ma con una sequenza differente mostreranno una diversa risposta al gradiente denaturante . 8\nSi polimerizza un gel con un gradiente di denaturante (urea e formammide); nel momento in cui carico le molecole su gel, migrando con velocit in base al diverso valore di Tm il DNA comincia a denaturarsi ad un livello di gradiente che sar diverso a seconda della Tm, e inizia a migrare come singolo filamento. Se la mutazione ha indotto un abbassamento del valore di Tm, avr una velocit ridotta di migrazione; se la mutazione aumenta il valore di Tm, avremmo una migrazione pi rapida, perch si denatura dopo. Questa tecnica mi dice solo se c o no una mutazione, ma non dove avvenuta. 2- SSCP ( analisi dei polimorfismi di conformazione del Dna a singolo filamento ): L' sscp pcr permette di evidenziare i polimorfismi delle conformazioni del dna a singolo filamento. Il DNA amplificato tramite pcr viene denaturato con il calore e repentinamente raffreddato, per evitare che si rinaturi. A questo punto il DNA a singolo filamento si avvolger su se stesso in una conformazione che dipender dalla sua sequenza . I singoli filamenti vengono, quindi, esaminati, tramite elettroforesi non denaturante. La conformazione che assume un singolo filamento di DNA strettamente legata alla sua sequenza nucleotidica: anche una sola variazione in questa sequenza determina conformazioni differenti. L'analisi elettroforetica permette di ottenere un pattern di conformazioni (colorazione con argento). Visto che la mobilit elettroforetica del DNA a singolo filamento sar in funzione della sua conformazione, eventuali variazioni a livello nucleotidico, ne altereranno la mobilit elettroforetica (dato che determinano conformazioni diverse). In questo modo, le bande "anomale" corrisponderanno al filamento di DNA in cui sono presenti le alterazioni nucleotidiche. 3- DHPLC ( o HPLC in condizioni denaturanti ). Viene utilizzata per la rivelazione di nuove mutazioni o sullo screening su popolazioni per la ricerca di una specifica mutazione. E' una tecnica cromatografica automatizzabile, una cromatografia a fase inversa e viene utilizzata per discriminare gli eteroduplex (appaiamento scorretto) dagli omoduplex (appaiamento corretto). Questi duplex si formano quando un frammento amplificato di DNA mutato ed uno non mutato vengono denaturati termicamente e lasciati ricombinare. Una qualsiasi variazione tra la molecola originale (wild type) e quella mutata porta alla formazione di un eteroduplex (combinazione di due catene di DNA a singola catena non perfettamente corrispondenti, caratterizzata dalla presenza di una "bolla" dove c' la mutazione). La DHPLC rileva la differenza tra la molecola dell'omoduplex - che ad una determinata temperatura ancora sotto forma di doppia elica - e quella dell'eteroduplex - che alla stessa temperatura mostra una parziale denaturazione in corrispondenza del sito dove si verificato un misappaiamento. Tale temperatura detta temperatura di "quasidenaturazione". La fase stazionaria costituita da catene idrofobiche, con le quali il DNA interagisce tramite un accoppiante ionico ( che essendo una molecola bifunzionale ha sia cariche negative per legare la fase stazionaria , sia cariche positive x legare il Dna, quindi funge da ponte ). Il DNA viene eluito con acetonitrile, nell'ordine prima i frammenti piccoli che hanno meno legami, e man mano quelli di dimensioni maggiori. Se si vuole mettere in evidenza una mutazione, eseguiamo la stessa procedura in condizioni denaturanti, termostatando la colonna alla T di quasi denaturazione ( quella a cui si verifica una parziale denaturazione in corrispondenza del punto dove l'accoppiamento non perfetto). Gli eteroduplex hanno un comportamento cromatografico diverso dagli omoduplex, in quanto denaturando prima verranno eluiti pi rapidamente. Procedimento generale : -si denatura il Dna di controllo e lo si mescola col Dna di cui si sospetta una mutazione -li si lascia rinaturare insieme, con formazione di omoduplex o eteroduplex -facendo una DHPLC riusciamo a discriminare gli eteroduplex dagli omoduplex.\nQueste 3 tecniche non discriminano una mutazione che provoca conseguenze, da mutazioni "innocue". Una procedura utilizzata in tal senso chiamata PTT, si utilizza per mettere in evidenza mutazioni che danno luogo ad una precoce terminazione della sintesi della catena proteica. In questo caso si amplifica il DNA con PCR con ODN che contengono tutte le sequenze necessarie per la trascrizione e traduzione, e si va ad analizzare direttamente il prodotto proteico; se le dimensioni della proteina sono ridotte significa che c' stata un'interruzione precoce della sintesi proteica.\n-DIAGNOSI INDIRETTA: quando la mutazione altamente variabile o non nota e il gene non stato clonato; in quel caso si fa uso degli alberi genealogici utilizzando dei markers associati ai geni responsabili della patologia, analisi di linkage. Se il gene non stato clonato dobbiamo ricorrere ad una diagnosi indiretta, ossia mediante l'impiego di analisi di linkage o associazioni con marcatori. Un marcatore qualsiasi carattere che pu essere impiegato per seguire l'ereditariet di un segmento cromosomico attraverso un albero genealogico. Si pu utilizzare come marcatore una piccola regione di DNA che si trovi vicina al gene suscettibile di mutazione (perch regioni vicine sul cromosoma vengono co-ereditate), e in pi il marcatore deve essere polimorfico. Bisogna trovare un polimorfismo che si associa sempre al fenotipo di quella patologia; una volta trovato andando a analizzare i membri delle diverse generazioni dell albero genealogico, posso ricavare dal marcatore informazioni sull'eredit del gene. Come marcatori si possono usare sequenze di DNA come DNTR o STR, oltre agli RFLP. Facciamo un esempio: il nostro gene Bmd ( distrofia muscolare) e il nostro marcatore polimorfico RFLP, quindi vicino al gene possiamo avere la presenza o la assenza di un sito di restrizione ad ognuna delle quali associamo o il cromosoma normale o quello mutato. Si digerisce il DNA con questo enzima e si utilizza una sonda per l'ibridazione che riconosce la regione di interesse . Andando ad analizzare , avr un frammento di 30 kb se il sito di taglio assente; viceversa avr un frammento di 22 e 1 di 8 kb. Negli individui eterozigoti avr entrambi i frammenti. Il marcatore deve trovarsi ad una distanza inferiore a 5 centimorgan; 1 centimorgan corrisponde a quella porzione di DNA dove c' l'1% di probabilit che avvenga un evento di crossing-over che separa il marcatore dal gene. Per ridurre il rischi di diagnosi errata per ricombinazione, utilizzo 2 marcatori , uno ad ogni estremit del gene. In questo caso si pu mettere in evidenza un fenomeno di crossing-over osservando la perdita di 1 marcatore. La probabilit del doppio crossing-over uguale al prodotto delle probabilit del singolo crossing-over, ossia 0.01x 0.01.\nTROMBOSI La trombosi una coagulazione intravascolare localizzata . Per sapere se ci sono difetti della coagulazione del sangue possibile una diagnosi post natale con due tipi di test : aPTT : Tempo di Tromboplastina Parziale Attivato , che evidenzia i difetti della via intrinseca . PT: Tempo di Protrombina , che evidenzia i difetti della via estrinseca . Eseguire la PT : In genere il tempo di protrombina nel soggetto adulto viene misurato prelevando un campione di sangue periferico. Il sangue viene quindi posto in una provetta contenente del liquido citrato, (che agisce come un anticoagulante legando gli ioni calcio presenti nel campione) e EDTA. Il sangue viene mescolato, quindi centrifugato al fine di separare le cellule del sangue dal plasma. Al campione di plasma viene aggiunto un eccesso di calcio ( si annullano in questo modo gli effetti anticoagulanti del citrato) e questa operazione consente al sangue di tornare a coagulare. Della tromboplastina (chiamata anche fattore tissutale oppure fattore III della coagulazione) viene aggiunta al campione in esame. Uno strumento misura otticamente il tempo necessario affinch il campione coaguli. In genere la formazione del coagulo di 1214 secondi. Se maggiore la via estrinseca ha dei problemi. Eseguire la aPTT : Poich una corretta coagulazione del sangue dipende dalla azione combinata ed 'a cascata' di molte sostanze definite fattori della coagulazione, misurare il tempo di tromboplastina parziale aiuta a valutare quali specifici fattori della coagulazione possono essere mancanti o difettosi. Si provvede al prelievo di un campione di sangue periferico. Tale campione viene raccolto in una provette con ossalato o citrato, che agiscono come anticoagulanti in quanto chelanti (cio in grado di legare) gli ioni calcio presenti nel campione. Per attivare la via intrinseca della coagulazione, un attivatore come caolino o silice e dei fosfolipidi anionici e degli ioni calcio vengono addizionati e mescolati al campione di plasma. Il calcio ha lo scopo di annullare l'effetto anticoagulante dell'ossalato o del citrato, i fosfolipidi anionici agiscono come sostituti delle piastrine e servono per la formazione di complessi tra i fattori 10 e 5 , il caolino o la silice innescano lattivazione da contatto. Il tempo di tromboplastina parziale perci il tempo impiegato da un simile campione a coagulare (tempo di formazione del trombo) ed rapportato al tempo impiegato per coagulare da parte di un plasma di riferimento del laboratorio. L'aPTT viene misurato con l'aggiunta di un attivatore della fase di contatto ( caolino o silice ). Il termine "parziale" sta a indicare che tra i reagenti non vi la tromboplastina (fattore tissutale liberato normalmente dalle cellule traumatizzate, per es. quelle di una ferita). Il valore normale 30-40 secondi . Se maggiore c un problema della via intrinseca. Per rivelare anomalie legate al fibrinogeno si usa il test TT ( Tempo di Trombina ) : Il tempo di trombina (TT ) utilizzato, per valutare la presenza di anticoagulanti circolanti, per riconoscere specificatamente le anomalie che riguardano la reazione trombina-fibrinogeno e per identificare il livello terapeutico dell'eparina. Il tempo di trombina misura il tempo impiegato dal plasma citrato a coagulare quando al campione in esame viene aggiunto un eccesso di trombina in genere di origine bovina. La differenza di tempo di coagulazione tra il campione di plasma in esame ed il campione 'normale' indica un'anomalia nella conversione del fibrinogeno (una proteina solubile) in fibrina (una proteina insolubile) . In un campione normale la coagulazione avviene in genere in 15 secondi .\nPer cercare eventuali difetti delle piastrine c il test del Tempo di emorragia o sanguinamento : Per calcolare il tempo di emorragia si effettua unincisione di 6 mm sullavambraccio e il sangue che esce viene assorbito a intervalli di 30 secondi con un foglietto di carta da filtro, fino a quando la carta non viene pi macchiata dal sangue . Il tempo necessario per larresto del sanguinamento in genere 7,5 minuti . Le fasi della coagulazione sanguigna : - Vascolare Piastrinica Coagulativa Fibrinolitica La fase vascolare inizia con la lesione del vaso e causa essenzialmente quattro fenomeni: vasocostrizione e rallentamento del flusso del sangue; adesione delle piastrine alle pareti del vaso; attivazione della coagulazione. La fase piastrinica inizia con ladesione al vaso leso delle piastrine , le quali si aggregano reversibilmente (aggregazione primaria) e danno luogo alla reazione di liberazione, che consiste nella secrezione di varie sostanze ad attivit favorente laggregazione secondaria (irreversibile), che porta alla formazione del cosiddetto trombo bianco.La fase emocoagulativa ha invece lo scopo di favorire il consolidamento del tappo piastrinico con la formazione di un reticolo insolubile di fibrina. Nella fase fibrinolitica c la fibrinolisi con la partecipazione di proteasi a serina : la fibrinolisi prevede la partecipazione di proteasi a serina ed il processo mediante il quale un reticolo di fibrina viene dissolto. Inizia con la trasformazione del PLASMINOGENO in PLASMINA grazie agli attivatori del plasminogeno come il t-PA ( attivatore tissutale del plasminogeno ) . La plasmina in grado di degradare i legami covalenti tra le fibrine, con la conseguente formazione di prodotti di degradazione della fibrina. Regolazione della coagulazione : La coagulazione deve avvenire rapidamente ma nelle giuste zone , senza formazione eccessiva di coaguli o trombi. Il flusso sanguigno stesso diminuisce la concentrazione dei fattori di coagulazione per evitare la TROMBOFILIA , un'anomalia della coagulazione del sangue che aumenta il rischio di trombosi. I fattori che inibiscono la coagulazione sono molteplici : 1) Inibitore della via del fattore tissutale ( TFPI ) : Proteina circolante nel sangue associata a lipoproteine, che rappresenta un importante inibitore fisiologico della coagulazione ematica. Inibendo cos l'attivazione della coagulazione tramite la via estrinseca. 2) Antitrombina III , EPARINA , 2 Anti-Plasmina : fattori anticoagulanti che inibiscono i fattori della via intrinseca . Lantitrombina inibisce lattivit della trombina . Lantiplasmina un inibitore della plasmina . 3) Proteina C : il maggior anticoagulante fisiologico e degrada il fattore 5 e il fattore 8 . La trombina capace di attivare fattori PRO-Coagulanti , come l Inibitore della Fibrinolisi Attivabile dalla Trombina ( TAFI ) che una carbossipeptidasi che rimuove i gruppi carbossilici presenti sulla fibrina che costituiscono il punto daggancio per il plasminogeno e per il suo attivatore. EMOSTASI : larresto di una emorragia, che si pu verificare spontaneamente col meccanismo della coagulazione. Consiste in una serie di reazioni biochimiche e cellulari sequenziali finalizzate ad impedire la fuoriuscita del sangue . Possono esserci due alterazioni opposte : lEMOFILIA ( inefficiente sistema coagulativo ) e la TROMBOSI ( eccessiva tendenza alla coagulazione ) .\nDocuments Similar To Trombosi-pcr-Indagini Di Alterazioni Geniche\nDomande Genetica Agraria\nProtocolo Hemofilia Marzo 2015


Il Resto del Carlino: 6,5 a Rocchi. Gestisce con polso ma senza esagerare – Tutto Bologna Web\n19 dicembre 2016 - 10:30\nIl Resto del Carlino: 6,5 a Rocchi. Gestisce con polso ma senza esagerare\nBuona la gara di Rocchi in una partita tranquilla\nRocchi sopra la sufficienza. Secondo il Resto del Carlino, buona la prova del direttore di gara anche in virtù di una partita estremamente tranquilla. bene nei due episodi principali.\nROCCHI 6,5. Sui due episodi importanti, ovvero l’espulsione di Verre per il fallaccio su Mounier, e il rigore su Destro, vede bene. Gestisce con polso senza esagerare con i cartellini una partita che diventa tranquilla perché c’è troppa differenza di valori in campo,e il Pescara non riesce mai ad accendersi.\nLe pagelle del Resto del Carlino: Viviani il migliore, Destro e Mounier giornata no


IBM Blockchain Transparent Supply - Italia | IBM\nIBM Blockchain Transparent Supply: una soluzione di trasparenza della supply chain\nCrea il tuo ecosistema blockchain per condividere i dati con i tuoi partner della supply chain\nWebinar con i principali innovatori della blockchain\nScopri come i clienti IBM stanno potenziando le loro supply chain con le innovazioni della blockchain e scopri in che modo i vantaggi che hanno riscontrato sono stati interpretati da cinque artisti.\nAbilita la trasparenza su più partner della supply chain\nLa condivisione dei dati è un vantaggio per il business. La condivisione dei dati su una piattaforma blockchain aziendale è ancora meglio perché sei tu a decidere chi può vedere i tuoi dati. Con una soluzione di trasparenza della supply chain puoi creare un registro immutabile, distribuito e condiviso per eseguire transazioni con i tuoi partner della supply chain in un modo più attendibile ed efficiente. In un mondo dove velocità, accuratezza e connettività definiscono le supply chain ottimali, la blockchain è essenziale.\nLa soluzione IBM Blockchain Transparent Supply fornisce una piattaforma blockchain che consente alle aziende di sviluppare un loro ecosistema di condivisione dei dati con i partner della supply chain affidabili.\nLeggi: Prospetto informativo della soluzione Blockchain Transparent Supply\nGarantisci la provenienza e la qualità per realizzare un marchio affidabile\nAutentica le origini dei prodotto e dimostra ai consumatori gli elementi distintivi dei brand per approfondire il coinvolgimento, consentendo loro di apprendere il processo di produzione di un articolo tramite i dati della blockchain autorizzati.\nMigliora le previsioni con una segnalazione più accurata della domanda\nTraccia l'inventario lungo tutta la supply chain in tempo quasi reale e ottimizzalo con un rifornimento automatico per ridurre le condizioni di esaurimento delle scorte e di inventario in eccesso, migliorare la spedizione e abilitare la determinazione dei prezzi dinamica.\nRiduci i problemi della supply chain\nOttieni la visibilità end-to-end in modo da ridurre i costi amministrativi per la gestione delle risoluzioni delle controversie, il controllo dei richiami di prodotto, la dimostrazione della conformità e la condivisione della documentazione con i Business Partner.\nSupply chain di nuova generazione con la blockchain\nUnisciti a Constellation Research e IBM per discutere del valore unico che la blockchain può offrire alle supply chain.\nCasi di utilizzo della trasparenza della supply chain\nOltre 200 aziende dell'ecosistema alimentare condividono i dati e monitorano gli spostamenti del cibo attraverso la catena del valore.\nScopri di più su Food Trust™\nProgettata per l'industria del caffè, questa piattaforma blockchain connette gli agricoltori ai consumatori e viceversa, in modo da sviluppare valore condiviso e trasformare il settore.\nGuarda la storia di Farmer Connect (03:09)\nScopri di più sulla rete di provenienza dei prodotti ittici di Seafood\nLa trasparenza della supply chain per i tuoi settori\nGuida approfondita alla blockchain\nEsplora la nostra guida per scoprire cos'è la tecnologia blockchain, come funziona e perché le aziende la stanno adottando per aumentare la fiducia e la trasparenza nei loro settori.\nLeggi la nostra guida alla blockchain\nSoluzioni di supply chain della blockchain\nEsplora le soluzioni di supply chain della blockchain\nOttieni maggiore visibilità nelle transazioni della supply chain con il software e le soluzioni che forniscono un'intelligence in tempo reale e consigli pratici per ridurre il tempo necessario per mitigare le interruzioni.\nEsplora software e soluzioni di visibilità della supply chain\nL'innovazione blockchain spiegata dai clienti IBM\nScopri da clienti e Business Partner IBM in che modo le loro innovazioni blockchain garantiscono la sicurezza e la fiducia dei consumatori, migliorano la trasparenza e promuovono un'efficienza end-to-end in tutte le loro supply chain.\nGuarda la serie di webinar su Blockparty\nScopri la blockchain attraverso studi, webinar, ebook e strumenti interattivi. Scopri perché le aziende in tutto il mondo stanno adottando la tecnologia.\nTrasforma la tua strategia blockchain in risultati di business che i colleghi vorranno analizzare.\nIndipendentemente dalla fase in cui ti trovi del percorso verso l'adozione della blockchain, IBM può aiutarti a intraprendere il passo successivo più appropriato.


Fattoria Veneruso: l’eccellenza della carne parte dagli allevamenti | About web, food & tv\nFood » Fattoria Veneruso: l’eccellenza della carne parte dagli allevamenti\nPubblicato il 29 ottobre 2017 da evelina\nLa Fattoria Veneruso è una macelleria a Portici aperta dal 1989. Ma è anche molto di più: è un progetto di qualità che va dagli allevamenti alle proposte culinarie, a base di carne, preparate con amore da Francesco e disponibili in negozio. Ciro, invece, si occupa dell’ approvvigionamento carni, che sono seguite fin dalla scelta degli animali, splendidamente tenuti in allevamenti nel beneventano, precisamente a Buonalbergo.\nPrima, invece, quando anche Portici era campagna, gli allevamenti si trovavano sul posto:\nIl nome della macelleria, “La Fattoria di Ciro Veneruso”, deriva dal fatto che dove ora è\nubicato il negozio un tempo c’erano dei campi di allevamento appartenenti alla\nfamiglia dell’attuale titolare. I nonni di Ciro si occupavano dell’allevamento e del\ncommercio di bestiame mentre il papà si occupava del loro trasporto. Pertanto il nome\ndella macelleria è un omaggio al passato. Trent’anni fa, poi, ragioni urbanistiche e di\nspazio, obbligarono a spostare gli allevamenti in montagna dove alcune piccole\naziende familiari, in funzione delle esigenze della macelleria, allevano animali per i\nLa loro idea è semplice quanto vincente: mostrare il ciclo produttivo che gli permette tuttora di controllare la filiera intera, dagli animali al prodotto venduto in negozio. Per questo, complice una giornata autunnale dal clima quasi estivo, siamo stati ospitati dalla famiglia D’oto, che alleva i capi di Marchigiana per conto dei Veneruso e con cui da circa tre anni segue una linea di alimentazione dei capi volta a migliorare la qualità della carne\nattraverso un mangime costituito “solo” da mais, orzo, triticale, avena, fieno e paglia.\nFrancesco, invece, si sta specializzando come griller e con le preparazioni di carne, particolari, ricercate e sempre gustose, che si trovano anche in negozio.\nLa visita agli allevamenti, il pranzo agreste che ne è seguito -allietato dagli ottimi vini della cantina De Santis, è stato quello che una foodblogger come me auspica: il racconto di un cibo in tutte le sue tappe, la storia di un territorio e di una famiglia, una tradizione che riesce ad innovarsi.\n← Haccademia: l’autunno da mangiare qui\nTotò Sapore: dal campione della pizza Angelo Ranieri →


CERTIFICATO / ESTRATTO DI MATRIMONIO | STUDIO KANTZ & ASSOCIATI\nIl certificato di Matrimonio è un documento con il quale si attesta l’attuale residenza dell’intestatario del certificato stesso. Il certificato residenza, quindi, contiene le informazioni relative alla residenza di una persona trascritte nel registro di stato civile, dunque dati quali il nome, il cognome, data e comune di nascita, comune e indirizzo di residenza.\nGrazie alla nostra esperienza potrai ottenere il tuo certificato senza recarti presso l’Ufficio Pubblico. Effettuare la richiesta sarà molto semplice. Accedendo al form potrai selezionare il servizio specifico di richiesta del Certificato/Estratto di Matrimonio.\nCertificato / Estratto di matrimonio *\nCertificato/Estratto di € 31,00\nIl Certificato/Estratto di Matrimonio è uno dei certificati anagrafici più utilizzati. Per la richiesta dovranno essere indicati i dati di uno dei due coniugi (nome, cognome, codice fiscale e/o data e luogo di nascita) e quelli del matrimonio (data completa, Provincia e Comune dove è avvenuto). Va poi specificato il motivo della richiesta del documento.


Tanto lavoro, buone vacanze\nDevo dire che mi prendo qualche giorno di riposo con una bella soddisfazione: a dispetto di tutte le polemiche che trapelano, abbiamo lavorato molto. E per far capire di cosa sto parlando, ecco qui di seguito un elenco di tutti i provvedimenti presi in questi mesi di Aula, andando a ritroso, cioè cominciando con gli ultimi appena approvati.\n– Veramente ecobonus: il decreto Ecobonus diventa legge. Il testo proroga al 31 dicembre le detrazioni per le ristrutturazioni edilizie, per l’efficienza energetica e l’adeguamento antisismico. Un emendamento del Pd prevede di far diventare gli ecoincentivi permanenti dal 2014.\n– Ilva commissariata: con il via libera definitivo al Senato è diventato legge il cosiddetto decreto Ilva. Accogliendo le proposte del Pd, il Governo commissaria l’industria di Taranto per 12 mesi prorogabili fino a un massimo di 36, svincola le somme sequestrate per finalità di bonifica, consente di migliorare la qualità della salute dei cittadini e di continuare parte della produzione.\n– Questa volta si vuole Fare sul serio: 319 sì al primo giro di voti e il Decreto del Fare, il 10 agosto, è diventato legge. Il provvedimento semplifica parte della burocrazia, immette soldi per completare alcune opere, ha un occhio di riguardo per l’edilizia scolastica e la sicurezza delle scuole, dà sostegno alle piccole e medie imprese e molto altro.\n– Occupare i giovani: via libera al decreto Lavoro che prevede 794 milioni di euro, fino al 2016, per incentivare in tutta Italia le stabilizzazioni di giovani dai 18 ai 29 anni di età. Aiuti alle imprese che assumono e pausa tra un contratto e l’altro di nuovo di 10-20 giorni.\n– Inchiesta sui rifiuti: grazie all’approvazione di una proposta di legge, prenderà il via la nuova commissione d’inchiesta su ciclo dei rifiuti, che dovrà essere moderno, integrato e funzionale.\n– Rifinanziati gli ammortizzatori sociali: con il decreto Imu-Cig del 17 luglio sono stati rifinanziati gli ammortizzatori sociali in deroga con 1 miliardo di euro. Ciononostante, nella sola Lombardia ci sono circa 6mila persone che non percepiscono denaro in alcuna forma di paracadute sociale.\n– F35 solo con il sì del Parlamento: passa la mozione del Pd che impegna il Governo a non procedere a nessuna nuova acquisizione dei contestati aerei senza che le stesse Camere si siano espresse nel merito e fino al termine dell’indagine conoscitiva sul\ncomplesso del sistema d’armamento italiano.\n– No secco al voto di scambio: la Camera ha approvato la modifica dell’articolo 416 ter del codice penale che prevede il delitto di voto di scambio elettorale e lo mette tra i reati di stampo mafioso. Soddisfatti noi deputati “braccialetti bianchi” che avevamo aderito alla campagna di Libera per apportare questa fondamentale modifica.\n– Svuotacarceri, ma con giudizio: viene approvato, dopo lunga discussione, il decreto definito “Svuotacarceri”, ovvero la delega al Governo in materia di pene detentive non carcerarie e disposizioni in materia di sospensione del procedimento con messa alla prova nei confronti degli irreperibili.\n-Adempimenti Europei : approvata la Delega al Governo per il recepimento di direttive europee in diversi campi ferme dal 2009 e Disposizioni per l’adempimento degli obblighi derivanti dall’appartenenza dell’Italia all’Unione Europea.\n– Tutti contro la violenza sulle donne: a giugno il Senato approva all’unanimità, subito dopo la Camera, la ratifica della Convenzione di Istanbul sulla prevenzione e la lotta contro la violenza nei confronti delle donne e subito dopo, agli inizia di agosto, il Governo Letta ha approvato il decreto legge in materia di sicurezza e per il contrasto della violenza di genere, con lo scopo di combattere il fenomeno del cosiddetto femminicidio.\n– L’ora delle emergenze: nonostante un forte ostruzionismo, passa a larga maggioranza il decreto sulle Emergenze che riguarda i danni ambientali provocati sull’isola del Giglio a seguito del naufragio della nave Costa Concordia, le zone terremotate dell’Emilia, dell’Abruzzo e del Molise, oltre a finanziamenti compensativi per i territori interessati dalla costruzione della Tav in Val di Susa.\n– Abbasso le mafie: La Camera vota all’unanimità l’istituzione della nuova Commissione parlamentare antimafia. Lo strumento migliore per contrastare la malavita organizzata.\n– Giusto risarcimento per gli incidenti: con una nostra mozione abbiamo impegnato il Governo a sospendere l’iter di approvazione del decreto del Presidente della Repubblica con le tabelle sulle menomazioni all’integrità psico-fisica. E’ stato così possibile garantire l’adeguato rispetto delle esigenze di tutela delle vittime degli incidenti stradali e contenere i costi delle polizze automobilistiche.\n– Sperimentare si può: l’approvazione del Decreto Stamina permetterà una sperimentazione di 18 mesi con il metodo omonimo, che fa un particolare uso delle cellule staminali in determinate cure. Inoltre, l’articolo 1 della legge differisce al 1 aprile 2014 il termine per il completamento del processo di chiusura degli istituti psichiatrici giudiziari.\n– Un Def di peso: nel Documento economico finanziario 2013 sono state poste le basi del futuro lavoro del Governo: dalle misure prioritarie per la crescita e l’occupazione al Programma di stabilità, a quello nazionale di riforma. E la sospensione immediata della rata dell’Imu sulla prima casa.\n– Si rientra dall’infrazione: Il Presidente del Consiglio Enrico Letta esulta e ne ha tutte le ragioni: a fine maggio la Commissione Ue ha adottato la raccomandazione per l’uscita dalla procedura di deficit eccessivo per l’Italia.\n– Via alle riforme costituzionali: viene approvata la mozione presentata dalla maggioranza che dà un tempo di 18 mesi per concretizzare l’impegno preso dal Presidente del Consiglio Enrico Letta per arrivare alle riforme costituzionali.\n– Soldi alle imprese: È stato il primo provvedimento della legislatura approvato all’unanimità e ha permesso di dare ossigeno alle aziende strozzate dalla crisi: con il decreto 35 sono state restituiti 14 miliardi di euro da parte della pubblica amministrazione alle imprese. Sono stati così immessi soldi freschi nel mercato che, se era in attesa da tempo, ora può ripartire alla grande. Tagliati gli stipendi ai Ministri che sono parlamentari per andare incontro ai tagli alla politica.


A ciascuno il suo - Informatore\nHome Blog Letture in Circolo A ciascuno il suo\nIn un paese della Sicilia vengono uccisi due uomini, il farmacista Manno e il dottor Roscio. Le indagini della polizia concludono che gli assassini hanno agito per motivi di onore nei confronti di Manno, e che Roscio è stato ucciso in quanto aveva assistito all’omicidio.\nLaurana, un professore di liceo, giunge invece alla conclusione che le persone incriminate sono estranee al fatto e che la vera vittima da colpire era Roscio e non Manno. Il professore però confida le sue deduzioni alle persone sbagliate…\nL’autore non si risparmia in merito alla caratterizzazione dei personaggi poiché ciascuno è delineato e reso concreto a prescindere dalla durata della sua apparizione. Grazie a questo il lettore riesce a prefigurarsi in maniera chiara i protagonisti, i quali, mano a mano che il racconto va avanti, subiscono una trasformazione diventando sempre meno “bravi” e più scaltri.\nLa miglior giustizia può uscire solo dalla canna del fucile\nUn racconto triste senza speranza, pessimista, in cui la verità rimane nel silenzio.\nUn racconto di una Sicilia non capita, in cui vengono messi in risalto gli aspetti più banali. Un luogo di omertà, di ipocrisia, di corruzione, di pregiudizio, di connivenza con la malavita, in cui al tempo stesso troviamo atmosfere affascinanti, caratterizzate dal pettegolezzo e dal chiacchiericcio da bar.\nUna narrazione con un ritmo scenico e una prosa forbita, appassionante, moderna e piacevole.


30 giugno 2021 di Fabiana Salsi\nHa appena aperto uno dei più sontuosi e sognanti hotel del mondo: Le Grand Contrôle, il primo albergo all’interno del parco del Castello di Versailles. Un albergo – letteralmente – regale, costruito in un edificio con vista sull’Orangerie, adiacente allo Château di Luigi XIV e Maria Antonietta progettato da Jules Hardouin-Mansart (l’architetto preferito del Re Sole) che nei secoli è stato sede di uffici amministrativi, ma noto soprattutto come salotto dell’élite illuminista.\nHa appena inaugurato con la collezione di hotel di lusso Airelles, dopo un restauro imponente firmato dell’interior designer Christophe Tollemer. Si è ispirato allo stile di Luigi XVI e, con esperti del patrimonio artistico francese e i più abili artigiani del Paese, ha ricreato l’atmosfera della corte più lussuosa, sfarzosa e chiacchierata di sempre badando a tutto: mobili d’epoca, oggetti autentici del XVII e XVIII secolo, tessuti e parquet ricreati identici a quelli del tempo, e perfino arazzi realizzati con disegni tratti dagli archivi del castello, alcuni dei quali raffigurano quei fiori e le farfalle che raccontano del «ritorno alla natura» tanto caro al filosofo Jean-Jacques Rosseau.\nDettagli unici, che sono ovunque, cominciando dalle 14 camere e suite intitolate ai personaggi illustri che negli anni sono stati protagonisti della vita del palazzo: come Madame De Staël, scrittrice, intellettuale, protagonista della cultura francese tra ‘700 e ‘800 di cui Le Grand Contrôle custodisce preziosi cimeli, tra i quali una lettera al suo amante Louis, Conte di Narbonne-Lara.\nÈ ispirata alla corte del Re Sole anche l’esperienza culinaria, firmata Alain Ducasse. Il grande chef, con ormai 20 stelle Michelin, si è ispirato alle tavole di Luigi XIV per menù spettacolari per ogni momento della giornata: dal tè con pasticcini e torte di ogni tipo come amava Maria Antonietta alla cena, che ricorda un banchetto reale, servita da personale in costume d’epoca che porta piatti ricoperti da cupole d’oro e d’argento. Il brunch della domenica, invece, è ispirato a «Le Grand Couvert»: antico rituale francese in cui re e regina cenavano davanti al pubblico e per il quale si preparavano buffet grandiosi. I re di Francia non l’avevano, ma in un hotel del genere non poteva mancare una spa: è firmata Valmont, offre una piscina coperta di 15 metri, hammam, sauna e un programma rigenerante di trattamenti termali che la vanitosa Maria Antonietta avrebbe certamente apprezzato.\nMa non è solo questo a rendere speciale un soggiorno in questo hotel: ci sono anche tante esperienze esclusive riservate agli ospiti, che possono vivere Versailles come nessuno ha fatto mai. Per esempio visite private di mattina, prima dell’arrivo dei turisti, a Le Hameau de la Reine (il «villaggio» che Maria Antonietta si fece costruire per allontanarsi dai riti di corte e dedicarsi a teatro, feste, una vita più libera) e al Trianon (in cui invece era il re a rifugiarsi, anche con le sue amanti). Ogni sera, poi, ci sono tour esclusivi di Versailles con visite agli appartamenti di Stato, e stanze inedite dove fermarsi anche per cene private con un sottofondo di quartetto d’archi. Se preferite, potete anche indossare costumi d’epoca per sentirvi Maria Antonietta. Il costo? A partire da 1700 al giorno, ma nella cifra è incluso un maggiordomo personale. Nella gallery sopra le foto dell’albergo


Porto 3 - Porto, Portogallo\nHome › Portogallo › Porto › Porto 3\nL’ultimo giorno a Porto in Portogallo, spinta da un sentimento nostalgico, ho provato a prendere un mezzo che percorresse la città, quale ad esempio un autobus turistico a due piani.\nDurante questo viaggio fino alla fine il cielo non è stato quasi mai sereno e, al secondo piano dell’autobus soffiava un vento freddo.\nSe penso alla città di Porto mi viene sempre in mente il freddo.\nMa è stato molto interessante andare verso l’oceano Atlantico e vedere per la prima volta la foce del fiume Douro.\nGrandi onde infuriavano e si scagliavano sulla costa.\nTra l’altro, come detto in precedenza, il fatto che in città ci siano numerosi affascinanti palazzi che sembra quasi stiano crollando e che vengano lasciati in decadenza, insieme al fatto che l’industria del vino Porto sia al tramonto, mi ha fatto pensare che questa fosse una città povera, ma, quando con l’autobus abbiamo lasciato il centro città e siamo andati in periferia, ho visto che c’erano numerose residenze di lusso di cattivo gusto.\nCredo che i palazzi del centro città completamente piastrellati, siano belli perché antichi, se fossero nuovi di zecca, forse non lo sarebbero.\nQuesto è il gusto dei cittadini di Porto.\nAnche a Porto come in altre località turistiche il modo di stendere la biancheria è da notare.\nStendono i panni sapendo che vengono visti senza dubbio dalle altre persone.\nLa biancheria si riflette sui palazzi decadenti.\nNella zona maggiormente turistica, lungo il fiume Douro, ho avuto l’impressione che i panni fossero bianchi, ma che fossero stesi in ordine dai più piccoli ai più grandi, partendo dalle calze.\nVi sembra un po’ esagerato?\nInoltre, la foto a sinistra mostra l’interno della libreria Lello che si dice sia la più bella libreria del mondo.\nSembra sia stata aperta nel 1869, ma solo all’inizio del XX secolo è stata allestita così come la si può vedere oggi.\nOvviamente si tratta di una libreria che vale la pena visitare.\nConcludendo questo viaggio, mi soffermo nel dire che il Portogallo ora è in crisi economica.\nSta chiedendo aiuto alla Banca Centrale Europea (B.C.E) e all’Unione Europea (U.E,).\nSarebbe bello se le persone di buon cuore non avessero problemi.\nIo penso che in paesi quali l’Italia e il Portogallo, l’economia, della quale non mostro le cifre, si sta sicuramente sviluppando.\nSe si guarda il mondo soltanto dal punto di vista ebraico del sistema anglosassone, si finisce spesso per fraintendere e sbagliare la realtà effettiva delle cose.\n« Porto 2\nNegozi ad Amsterdam »


Europee, Civati annuncia candidatura | LaRampa.it\nEuropee, Civati annuncia candidatura\n“La questione è culturale. L’avete letto diverse volte sulle pagine di questo piccolo blog. E ho passato l’ultimo anno a occuparmene, ed è stato un anno bello e intenso. Ho frequentato persone, idee e parole che mi hanno confermato che le cose più importanti stanno fuori dai dibattiti correnti e corrivi della politica italiana”. Lo scrive sul proprio blog Giuseppe Civati, fondatore di Possibile, annunciando la candidatura alle Europee con la lista Europa Verde.\n“Ho trovato più senso nelle pagine di Langer e negli appelli di Greta che in milioni di ore di dibattiti televisivi e social, pieni di propaganda, di trucchi, di truffe. Di cose insensate. Le questioni, quelle vere, stanno tutte insieme, una dentro l’altra come in una matrioska. La figura, la bambola più grande è quella del clima. Anche se appare piccola (minuscola in Italia), è gigantesca. Dentro ci stanno tutte le altre, le disuguaglianze, le migrazioni, il nostro modello di sviluppo. E il baratro che si sta aprendo davanti a noi. È per questo che troverete il mio nome nelle liste dell’Europa Verde nel Nord Ovest e nel Centro Italia (con Possibile per i Verdi europei, insomma). Per un paio di mesi darò una mano a una proposta di cambiamento radicale dell’Unione europea e del mondo (l’Unione europea a questo deve servire, a cambiare il mondo) e alla questione di cui tutti saranno presto obbligati ad occuparsi. Se non lo faranno, saremo spacciati”.\n“Mi metto al servizio dei ragazzi che vogliono salvare il pianeta – aggiunge Civati nel suo post – a e che hanno già cominciato a salvare l’anima di tutti quelli che li ascoltano. Alla testa della lista saranno ragazze speciali, favolose, perché come dice uno slogan bellissimo «tocca a loro»: come un candidato tra gli altri, in rigoroso ordine alfabetico, porterò avanti le cose di cui in questi mesi ho sentito parlare ovunque, tranne che nei salotti politici. Non cerco un posto, ho avviato un’attività che proseguirà il suo lavoro, ma do il mio contributo perché l’Italia ha il dovere di diventare un posto migliore. E così l’Europa, di cui facciamo parte, per ragioni molto importanti, anzi, decisive. Questo è quanto, per oggi. Ora esco. È venerdì. Passo a prendere Nina a scuola e ci vediamo in piazza”.\n← Cassa integrazione Piaggio Aero, Pastorino: “Colpa del Governo”\n(VIDEO) Commento al Vangelo di Mons. Spinillo: Domenica delle Palme 2019 →


Questo andirivieni di Greganti… | Avanti!\nQuesto andirivieni di Greganti…\nRicordo bene che in una festa dell’Unità vendevano le magliette con la scritta “Viva Greganti”. Se avessero creduto che i soldi se li fosse tenuti per sé ne avrebbero vendute molte? Di più. Il compagno G, noto a Torino come militante di indiscussa fede che si occupava di finanziamenti al partito, venne sospeso dal Pci-Pds, ma poi riammesso al partito. Era considerato un faccendiere? Nella sua sezione gli era stata data la tessera del Pd, e adesso gli è nuovamente stata sospesa. Perché? Non sapevano cosa Greganti facesse? Ma non era sempre lui, utilizzato per le stesse cose di prima? Ecco quel che non mi piace: l’ipocrisia. È una ipocrisia devastante che ha coperto gli occhi a magistrati, giornalisti e politici. Questo andirivieni di Greganti dal suo partito che si propone nelle parti di un Catullo che non può vivere “nec tecum nec sine te”, è perfino surreale. È un viaggio di andata e ritorno costruito sulla menzogna.\nUna volta alla settimana Greganti era a Roma e si recava al Senato. A fare che? A bere caffè alla bouvette? A partecipare a qualche cerimonia commemorativa? Di una cosa sono certo. Che il compagno G non dirà nulla neanche stavolta. Racconterà che lavorava per sé solo. Spero che almeno questa volta ci risparmino le magliette. Dirà di aver avuto qualche consulenza legittima dal movimento cooperativo, data la sua alta professionalità di manager. Dirà che al Senato incontrava solo cooperatori per bene. D’altronde chi lo sa, magari pure loro sono previsti nella futura riforma dell’istituzione. Greganti è la cattiva coscienza di Tangentopoli uno. Non lo dico per ansia di vendetta rispetto a un’operazione che ha visto travolto il nostro partito. Lo dico per amore di verità. Se Greganti avesse detto quel che sapeva sarebbe crollato anche il Pci-Pds e tutta l’operazione avrebbe assunto un diverso orientamento e significato.\nOggi sono trascorsi vent’anni e Renzi ma neanche Cuperlo c’entrano qualcosa con quelle responsabilità. Non mi posso ancora dimenticare il senso di frustrazione e di umiliazione di tanti socialisti in quegli anni di gogna. Se c’è un motivo forte per il quale ho continuato a fare politica in questi vent’anni, io che non sono mai stato raggiunto da provvedimenti giudiziari, è stato proprio questo. Quello di non cedere a chi ci voleva morti. Per vergogna, ma in realtà perché abbiamo avuto ragione nella storia. Anche se non siamo stati certo esenti da errori politici e da comportamenti sbagliati. Forse non è ancora il tempo di scrivere la storia di questo ventennio. Di una cosa sono certo. Chi costruisce il suo futuro sulla menzogna non può costruire nulla di buono. Questo purtroppo è successo per la politica della cosiddetta seconda Repubblica. Tra le macerie della prima c’era il sale dell’ipocrisia.\nDaniele Leoni il 14/05/2014 alle 11:31 scrive:\nD’accordo su tutto. Però mi chiedo: perché non lasciamo che i magistrati facciano finalmente il loro mestiere, rispettando le garanzie previste dalla legge e senza gogne mediatiche. Che lo facciano, alla buon’ora, perché questa volta non è loro consentito di sgarrare. Sono sotto osservazione e hanno la chance di guadagnarsi lo stipendio facendo professione di equilibrio, di riservatezza e di professionalità. Poi è sacrosanto quello che sostiene Matteo Renzi: fermiamo i ladri ma non i lavori! Perché sul blocco dei lavori spera il sottobosco criminale che punta ad dissesto. Come dice Nino Galloni, la speculazione finanziaria prospera nelle turbolenze non nel sano sviluppo equilibrato. Come nelle turbolenze prosperano tutti i parassiti che navigano nel torbido, delinquenti annidati in ogni categoria, compresa quella dei magistrati.\nvictorlupis il 14/05/2014 alle 11:58 scrive:\nSottoscrivo ogni parola. Ed è vero che Renzi e Cuperlo non c’entrano nulla con quelle responsabilità ma, anche loro fanno poco o nulla per fare chiarezza su quella vicenda che i socialisti si portano dietro come una infamia incancellabile, nonostante la storia ha dato ragione al socialismo Italiano. Ecco perché con questi soggetti bisogna andare sempre con i piedi di piombo rivendicando con orgoglio e forza l’appartenenza ad un partito glorioso quanto attuale.\nleonardo il 14/05/2014 alle 14:15 scrive:\nCaro Direttore, adoro questo articolo perchè dice quello che pensiamo tutti noi socialisti, che cio’ che ci lega è la identità socialista, il volere riscrivere la Storia. Follie? Eppure.\nAdoro questo articolo anche per la citazione letteraria, cui dedicai versi amorosi tempo fa. Pero’ era Ovidio se non erro.\nAldo il 14/05/2014 alle 15:01 scrive:\nAnche questa volta tutto sarà accaduto al loro insaputa!!!!!!\nsilvio minardi il 14/05/2014 alle 16:27 scrive:\nDobbiamo avere, e non è facile, la forza della pazienza e guardare al futuro, che è il filo conduttore della nostra storia. Sbagliare è nella natura umana.\nNicola Savino il 14/05/2014 alle 16:39 scrive:\nChe i Magistrati Facciano il loro mestiere,invoca Leoni! Perciò è il caso di ricordare che non sempre l’hanno fatto,per scelta deliberata:prendi il caso Martelli. La sera prima,con M;auro e Manca,Artioli,Landolfi ,Mancini eravamo nel suo studio al Ministero della Giustizia per incoraggiarlo ad assumere la Segreteria del PSi.Ma la mattina successiva lo raggiunge l’avviso di garanzia per la fandonia del conto Protezione che,ecco il punto,viene poi arbitrariamente collegato alla bancarotta dell’Ambrosiano per evitarne la prescrizione.E che , non è mai giunto a sentenza sebbene testardamente inseguita e richiesta dall’Interessato. Dunque,non sempre la “Giustizia giusta”!\nmarcello ramadori il 14/05/2014 alle 17:01 scrive:\nallora questa volta la racconto: si diceva ai tempi di tangentopoli,che un giorno il grande inquisitore incontrò il signore col pizzetto sulle scale di Botteghe Oscure e gli chiese do ve si stava recando. Il signore del pizzetto disse che andava dal segretario del suo partito per consegna un miliardo (ovviamente vecchie lire). Il grande inquisitore gli disse che lo lasci ava andare in cambio di una candidatura al senato. E così fu.\nCaro Mauro, visto che Nencini non ci sente gli vuoi per favore far capire che i socialisti non opportunisti non sono daccordo con questa strategia del coccolone?\nciappini giuliano il 14/05/2014 alle 17:41 scrive:\nLa doppiezza, l’ipocrisia, l’odio sono sempre stati gli elementi che hanno prevalso nel Pci nei confronti del Psi e questo ha condizionato tutta la vita politica della sinistra in Italia dal dopoguerra ad oggi. La scelta del compromesso storico è stato il sigillo che fra l’unità socialista e l’accordo con i democristiani i comunisti hanno fatto la loro scelta, ora lentamente la balena bianca li sta divorando, ed anche per loro è arrivata la parola fine. Ora il problema è cosa fare per dare voce ad una nuova sinistra in questo Paese???.\nAlessandro Bravi il 14/05/2014 alle 20:23 scrive:\nGiusto. Grazie direttore. Saluti socialisti!\nalessandro gaboardi il 14/05/2014 alle 21:45 scrive:\nGreganti allora non parlò perché i magistrati non utilizzarono il criterio usato per i socialisti, la famosa interpretazione della legge “non poteva non sapere”. Una borsa piena di danaro che entra in via Botteghe oscure a chi mai poteva portarla? Chi era il responsabile della “bottega”? Avessero incriminato i dirigenti del PCI il silenzio di Greganti non sarebbe più servito. Allora avrebbe parlato.\nInutile piangere sul latte versato, ma diventa veramente difficile, se non impossibile, avere fiducia in questa magistratura.\nPasquale Claps il 17/05/2014 alle 10:24 scrive:\nCaro Direttore sono daccordo al 99/°, ma quella frase che hai detto mi lascia perplesso, ” sono passati vent’anni e Renzi e Cuperlo non hanno responsabilità”. Sicuramente è vero, ma loro sono sempre figli di quella stagione scellerata e sono cresciuti con quella convizione maldestra nei nostri confronti, molte sono state le affermazioni da piccionaio del signor Renzi nei confronti del Signor Bettino Craxi.\nAndiamo avanti i conti li faremo alla fine, perchè il bello deve ancora venire.\nClaudio Pedretti il 17/05/2014 alle 22:38 scrive:\nGiusto venerdi sera Claudio Martelli alla cena modenese ci ha detto: “adesso che i socialisti non possono più essere additati come i responsabili del malaffare a chi daranno la colpa?”\nÈ il momento di dirlo ad alta voce !


Elena Ceste: i genitori cercano ancora la verità (VIDEO)\nElena Ceste, una verità mai del tutto scoperta. Ancora in carcere il marito Michele Buoninconti, condannato a 30 anni di carcere per il delitto. I genitori della donna di Costigliole d’Asti però vorrebbero ancora conoscere il movente. Perchè Elena Ceste è stata uccisa? Forse per quel presunto tradimento e quell’animo ribelle che il vigile del fuoco ha cercato spesso di piegare al proprio volere? I genitori della vittima a Quarto Grado svelano un dettaglio interessante.\nIl padre e la madre di Elena Ceste a Quarto Grado: “Ecco perché mi ha fatto dire il Rosario”\nSi ritorna ancora a quel giorno del 24 gennaio del 2014, quando Elena Ceste è ufficialmente una donna scomparsa. Lo dice il marito Michele Buoninconti, che racconta ad inquirenti e media nazionali di essere ritornato a casa e di non aver più trovato la madre dei suoi quattro figli. Qualcosa però non convince, dal suo racconto sconnesso fino al percorso che il vigile del fuoco compie subito dopo aver scoperto che Elena si è allontanata da casa senza vestiti. Sono ore drammatiche che si concluderanno solo il 18 ottobre dello stesso anno, quando il corpo di Elena verrà ritrovato riverso in un corso d’acqua della campagna di Costigliole d’Asti.\nPapà Franco e mamma Lucia confidano a Quarto Grado il loro dolore, soprattutto perché Michele Buoninconti continua a dichiararsi innocente. Anche di fronte al verdetto della Cassazione che il 15 febbraio dell’anno scorso ha confermato la condanna a 30 anni di reclusione. Non capiscono il movente e soprattutto la madre si addolora nel sapere che l’ex genero abbia speso brutte parole per definire Elena, paragonandola ad una donna di strada. La sofferenza è tanta e non solo perché l’amata figlia non c’è più, ma anche perché i quattro nipoti dovranno crescere senza una madre.\n“Gli ha tolto la madre nel momento più importante”, dice mamma Lucia. I quattro ragazzini non parlano mai del padre, nemmeno una parola. Buoninconti invece avrebbe cercato di manipolarli, intimando a tutti e quattro forse di non parlare. Che cosa sanno? Potrebbero aiutare a chiarire i tanti punti oscuri ancora rimasti senza una spiegazione?Il padre di Elena invece ricorda ancora una frase detta da Michele subito dopo la presunta scomparsa della donna. Una strana richiesta: un Rosario da recitare insieme perché tutto si risolva. “Ecco perché me lo ha detto”, dice Franco Ceste sottolineando come il Rosario si reciti per le persone morte e non per chi potrebbe ancora essere in vita. Puoi rivedere il video di Quarto Grado con l’intervista ai genitori di Elena Ceste su Mediaset Play.\nPrecedenteJessica Lattuca: la pista dell’amante segreta a Quarto Grado (VIDEO)\nSuccessivoTragico incidente per Michele Bravi: Ermal Meta lo sostituisce a Verissimo


Cosa Facciamo – Itaca Volontariato\nDurante tutto l’anno realizziamo corsi di italiano L2 di livello diversificato a favore dei richiedenti asilo ospitati nel Progetto SPRAR di Capannori in collaborazione con la Cooperativa Sociale Odissea per una media di 30 ore settimanali di lezione.\nCollaborazione e organizzazione nella gestione dei Corsi di italiano per donne migranti nel territorio di Capannori con la collaborazione del Comune di Capannori, il Comitato Micheloni ed il CPIA di Lucca. Svolgiamo servizio di babysitting, cura e custodia dei locali ed abbiamo fornito insegnanti per lo svolgimento delle lezioni.\nPartecipazione al Progetto del Comune di Capannori “Lavoro Conveniente”.\nOrganizzazione e gestione dell’evento interculturale “Oltrepassare 2017” in collaborazione con il Comune di Capannori ed altri soggetti del terzo settore. Organizzazione del Convegno Tutor per il percorso di valorizzazione della solidarietà giovanile e dell’impegno civico e civile dei giovani, delle relazioni tra giovani impegnati nella società e gli aspetti positivi ingenerati dalle stesse , denominato “ Sogna ragazzo Sogna”.\nOrganizzazione progetto Una Spina nel Fianco che mira a capire le ragioni e le dinamiche che si attuarono intorno al 1968 e al fenomeno socio-culturale avvenuto negli anni a cavallo, nei quali grandi movimenti di massa socialmente eterogenei, formatisi spesso per aggregazione spontanea , interessarono quasi tutti i paesi del mondo con la loro forte carica di contestazione contro i pregiudizi socio-politici.\nOrganizzazione del Campo Volontari a Luglio 2018, con la partecipazione di Volontari facenti parte dei progetti SPRAR di tutta Italia per una formazione riguardante i progetti di accoglienza.\nEvento musicale Ricreativo sul tema del dialogo Interculturale Luglio 2019 -Progetto “ Orti nelle Scuole “ 17 Maggio 2019\nIl corso di italiano, nell’ambito del progetto Sprar, rappresenta un primo e fondamentale passo verso l’integrazione sociale e lavorativa del beneficiario. Spesso i ragazzi che\nAbbiamo pubblicato il nostro nuovo sito web.