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Un bando da 3 milioni per le imprese dei giovani - Telemat\nHomepage / Rassegna stampa / Un bando da 3 milioni per le imprese dei giovani\nUn bando da 3 milioni per le imprese dei giovani\nIl Sole 24 Ore - NordEst\nRegione Veneto / DAI TERRITORI\nÈ aperto dal 20 settembre il nuovo bando destinato a promuovere e sostenere le piccole e medie imprese giovanili nei settori artigianato, industria, commercio e servizi promosso dalla Regione del Veneto attraverso l'assessorato allo Sviluppo economico. Ammontano a tre milioni di euro le risorse stanziate dalla Giunta regionale a favore dei giovani tra i 18 e 35 anni compiuti che decidono di investire, in Veneto, nella creazione di nuove attività economiche o nello sviluppo di attività già esistenti. Beneficiarie del contributo del bando sono le Pmi dei settori individuati che rientrano in una delle seguenti tipologie: imprese individuali i cui titolari siano persone di età compresa tra i 18 e i 35 anni o società e cooperative i cui soci siano per almeno il 60% persone di età compresa tra i 18 e i 35 anni, ovvero il cui capitale sociale sia detenuto per almeno i due terzi da persone di questa fascia di età. Tali requisiti devono sussistere alla data del 20 settembre 2021. Le domande di partecipazione al bando potranno essere presentate fino alle ore 12 del 30 settembre 2021.\nFoto: Palazzo Balbi. A Venezia la sede della Giunta regionale del Veneto


La Linea 60 ti porta direttamente alla stazione di Guaguas (autobus) di San Telmo, in pieno centro del capoluogo Las Palmas de Gran Canaria. Inoltre, ti offre la possibilità di arrivare a Santa Catalina (zona Porto- spiaggia Canteras).\nLa Linea 91, che parte da Puerto de Mogán, nel sud dell’isola, realizza una fermata all’aeroporto, in direzione verso la stazione di autobus di San Telmo (Las Palmas de Gran Canaria). Inoltre, ti offre la possibilità di arrivare a Santa Catalina (zona Porto- spiaggia Canteras). Consulta gli orari tenendo in considerazione che passa dall’Aeroporto approssimativamente 55 minuti dopo la partenza da Puerto de Mogán.\nLa Linea 66 inizia il suo percorso dall’aeroporto (partenze comunitarie) e ti porta direttamente al centro turistico di Maspalomas, vicino a Meloneras. Si ferma nei seguenti paesi turistici del sud: Playa del Águila, San Agustín, Playa del Inglés, Campo Internacional de Maspalomas e termina il suo servizio nel faro di Maspalomas.\nLa Linea 91, nel suo percorso dal capoluogo a Puerto de Mogán, realizza una fermata all’aeroporto. Si ferma nei seguenti centri turistici: Arguineguín, Patalavaca, Puerto Rico, Amadores, Tauro e Mogán.\nConsulta gli orari tenendo in considerazione che passa dall’Aeroporto approssimativamente 35 minuti dopo la partenza da Las Palmas de Gran Canaria.\nLa Linea 90 realizza una fermata all’aeroporto nel suo percorso da Telde a Maspalomas. Questa linea si ferma anche nei seguenti centri turistici: Playa del Águila, Bahía Felíz, San Agustín, Playa del Inglés, campo internacional de Maspalomas e termina il suo servizio nel faro di Maspalomas, vicino alla zona di Meloneras.\nConsulta gli orari tenendo in considerazione che passa dall’Aeroporto approssimativamente 15 minuti dopo la partenza da Telde.\nPer avere una conferma degli orari delle diverse linee di autobus, puoi guardare direttamente i link della pagina web di Global oppure contattare la compagnia al seguente numero di telefono: 928 252 630.


Facelift in arrivo per la Porsche Panamera Sport Turismo - ReportMotori.it\ndi Marco Lasala 7 Luglio 2019, 19:20\nA distanza di circa un paio di anni dal suo debutto, la Porsche Panamera Sport Turismo è pronta a rifarsi il trucco.\nDopo la recente 911 Carrera S e 4S, dopo aver svelato la nuova Macan, è tempo anche per la Porsche Panamera Sport Turismo di aggiornarsi nel look e contenuti.\nIn Austria si aggira un primo prototipo che lascia intravedere quali saranno i reali aggiornamenti del futuro e nuovo modello.\nNuovi fari, nuove luci posteriori, nuovi cerchi e volante.\nProbabile che così come la Sport Turismo anche la Panamera “normale” riceverà diversi aggiornamenti, del resto sono gemelle…non tanto diverse!\nSaranno così disponibili diverse motorizzazioni, Panamera 4 , Panamera 4S , Panamera 4S Diesel , Panamera 4 E-Hybrid e Panamera Turbo.\nPer la Panamera Sport Turismo sarà disponibile anche la versione Turbo S E-Hybrid, un V8 biturbo da 4,0 litri che lavora unitamente ad un’unità elettrica per una potenza totale di oltre 670 cavalli e 850 Nm di coppia massima.\nPrecedente Al Nurburgring le future Jaguar F-Type 2021\nSuccessivo Al Sachsenring un imbattibile Marc Marquez\nNuova Porsche 911 GT3 – Al Nurburgring più veloce di 17 secondi!\nAl Sachsenring un imbattibile Marc Marquez


AT 24- Hotel Centrale P.za Verdi (Piombino)\nUBICAZIONE: P.za Verdi\nSuperficie Territoriale mq. 1.230\nSuperficie Coperta esistente mq 1.190\nVolume esistente mc 11.770\nL’area di trasformazione è ubicata in Piazza Verdi, e comprende l’edificio che ospita l’Hotel Centrale (risalente ai primi decenni del ‘900), principale struttura alberghiera della città.\nIl fabbricato oggetto dell’AT coincide con l’isolato posto tra Piazza Verdi, Via San Francesco, Via del Fosso e Piazza Edison; l’edificio, costituito dal fabbricato principale di origine novecentesca e da un corpo aggiunto di più recente edificazione, è attualmente utilizzato al piano terreno per attività commerciali e per i servizi complementari della struttura alberghiera (ristorante, spazi congressuali, garage, ecc.) ed ai livelli superiori per la ricettività alberghiera.\n- favorire la permanenza della struttura ricettiva alberghiera pur riducendone la capacità ricettiva complessiva in relazione al sovradimensionamento della struttura e delle relative dotazioni di servizio;\n- ottimizzare l’utilizzo dei volumi disponibili, integrando la funzione ricettiva con altre funzioni di tipo commerciale e direzionale peraltro già presenti nell’immobile;\n- incrementare l’offerta abitativa nella città consolidata;\nE’consentita la riconversione funzionale del piano terra e del piano primo del fabbricato principale prospettante su Piazza Verdi, per funzioni di tipo commerciale, direzionale e di servizio. I piani superiori dovranno conservare invece la funzione ricettiva (albergo).\nLe dotazioni di servizio della struttura ricettiva potranno essere in parte conservate al piano terra o collocate ai livelli superiori.\nPer il fabbricato in oggetto sono ammissibili interventi di ristrutturazione edilizia (r1).\nLa porzione del complesso edilizio prospettante su Via del Fosso potrà essere sopraelevato di due livelli ammettendovi funzioni di tipo residenziale e/o di servizio all’attività ricettiva. L’intervento di sopraelevazione potrà essere attuato conservando l’organismo edilizio esistente o in alternativa mediante la realizzazione di un nuovo fabbricato in sostituzione dell’esistente.\nSono prescrittive tutte le disposizioni contenute nella presente scheda. Dovranno inoltre essere osservate le disposizioni normative generali, ove pertinenti all’intervento, di cui al Titolo II, Capo IV (regole per la tutela ambientale) e al Titolo III , Capo III (infrastrutture e dotazioni territoriali e urbane) delle NTA del RU.\n- l’albergo dovrà mantenere una ricettività minima pari a 50 posti letto;\n- SLP max in incremento pari a mq. 700;\n- n. alloggi max: 8\nAltezza massima (Hmax) edificio prospettante su Via del Fosso: 13 mt.\n- commerciale al dettaglio di vicinato e attività assimilate, anche organizzate nella forma di centro commerciale, (di cui ai punti 3.02.02, 3.03 dell’art. 17 del RU) direzionale e servizi (di cui al punto 6.02 dell’art. 17 del RU), limitatamente al piano terra e al piano primo dell’immobile;\nintervento di sopraelevazione:\n- residenziale/direzionale/servizi all’attività ricettiva.\n- si dovrà-assicurare il mantenimento dei caratteri architettonici e decorativi del fabbricato storico di origine novecentesca;\n- per l’intervento di sopraelevazione, si potrà ricorrere a soluzioni di tipo tradizionale, richiamando gli elementi compositivi e decorativi dell’architettura novecentesca del fabbricato prospettante Piazza Verdi; è ammessa, in alternativa, una soluzione architettonica che usi stili e materiali della contemporaneità, per la quale occorre dimostrare che si instaurano nuovi rapporti percettivi con il contesto di dominanza o di distinguibilità, e che essi risultano di valore pari o maggiore rispetto alla soluzione dell’integrazione tramite utilizzo delle componenti architettoniche tradizionali e consolidate.\n- la sistemazione dello spazio pedonale circostante il Rivellino dovrà utilizzare materiali di qualità appropriati al centro storico da concordare con il Comune e la competente Soprintendenza;\n- nel caso di riconversione funzionale del piano terra dell’immobile per funzioni commerciali i singoli esercizi dovranno attestarsi su una galleria interna con ingresso da Piazza Verdi;\n- i parcheggi pertinenziali di cui alla L. 122/89 connessi all’intervento di sopraelevazione dovranno essere ricavati al piano terra del complesso edilizio esistente o a livello interrato.\n- sistemazione dell’area circostante il Rivellino in continuità con la pavimentazione del centro storico\nL’area di trasformazione di cui trattasi non è interessata da invarianti strutturali; l’area è interessata dalla fascia di rispetto a tutela del Rivellino identificato come "bene culturale" ai sensi dell’art. 13 del D. Lgs. 42/2004, così come rappresentato nella tavola 5 del presente RU.\nConsiderata la scala esclusivamente architettonica dell’intervento, non si rilevano interferenze negative con il paesaggio tali da giustificare particolari azioni di tutela.\nL’attuazione è assentibile mediante piano urbanistico attuativo convenzionato di iniziativa privata.\n- la prima che dia continuità all’edificio primi-novecento dell’Hotel Centrale, riproponendone gli elementi tipologici e architettonici\n- la seconda che proponga una soluzione architettonica "di rottura", che comunque dialoghi con l’edificio esistente pur facendone leggere la discontinuità in termini di materiali e soluzioni costruttive.\nIl percorso partecipato, da attivare nell’ambito del processo valutativo di cui all’art. 11, comma 2, della L.R. 1/05 e ai sensi della L.R. 69/2007, sarà svolto a cura e a spese del soggetto proponente in collaborazione con l’amministrazione comunale.\nIl piano attuativo sarà assoggettato a valutazione degli effetti di cui all’art. 11 comma 2 della L.R. 1/2005; in relazione agli obiettivi ed alle criticità specifiche dell’AT si dovranno in particolare valutare gli effetti prodotti dalle trasformazioni previste in ordine ai seguenti fattori:\n- capacità di attivare relazioni funzionali tra gli spazi interni del complesso edilizio e gli spazi pubblici circostanti.\nAd avvenuta ultimazione degli interventi previsti dal permesso a costruire, agli immobili compresi nella presente area di trasformazione si applica la seguente disciplina:


OROLOGIO DA PARETE A FORMA DI OROLOGIO DA POLSO\nOrologio da parete a forma di orologio da polso.\n-75% Special Price 29,90 €\nOrologio da parete dalle sembianze di un orologio da polso con cinturino. Un orologio dallo stile unico, resistente e versatile; un regalo adatto a qualsiasi occasione. L'alimentazione a pile stilo AA permette di collocare l'orologio anche lontano da fonti di elettricità.\nQuadrante Nero Cornice Nera\nMdf, Metallo, Poliuretano, Vetro


Qual è la differenza tra il germe di lino e il grano?\nIl germe di grano e l’olio di semi di lino sembrano avere gusti, applicazioni, valori nutrizionali e persino apparenze simili. Tuttavia, sono distinti, derivanti da piante separate e contenenti diversi costituenti, non sono intercambiabili. In realtà, esistono più differenze tra i due alimenti per la salute rispetto alle somiglianze. Tuttavia, possono essere utilizzati allo stesso modo negli alimenti, rendendoli facilmente confusi.\nIl germe di grano è un kernel al centro di un seme di frumento da cui si sviluppa un nuovo germoglio di frumento. La parte più densamente nutriente del frumento, ha un sapore leggermente zuccherato che è facilmente sopraffatto da altri sapori, rendendolo un ingrediente versatile. L’aspetto più comune del germe di grano è nei piccoli chicchi d’oro, anche se è disponibile anche come polvere, estratto e olio. Il germe di frumento richiede frigorifero per prevenire rancidità.\nLino di semi di lino o di semi di lino è un seme della pianta di lino. Sembra che i semi interi sono giallastri al marrone rossastro o come polvere. Il flaxseed è disponibile anche in forma fermentata, che è reputamente più nutriente della sua versione non fermentata. Anche il lino vende un olio che è paragonabile a quella di soia, di semi di zucca, di canola e di noce. Simile al germe di grano, il flaxseed richiede refrigerazione.\nIl germe di grano è uno dei tre costituenti di un seme di frumento, gli altri due sono lo scafo esterno e l’endosperma. Anche se lo scafo esterno fornisce fibra e l’endosperma è quasi interamente composto da amido, il germe di grano è dove il grano porta tutta la sua nutrizione. Di conseguenza, il germe di grano contiene anche piccole quantità di amido e fibre. Vitamine e minerali che appaiono nel germe di grano includono il potassio, lo zinco, il folato, il magnesio, il fosforo, la vitamina S, il tiamina, la riboflavina e la niacina.\nIl lino non è densa con sostanze nutritive come il germe di grano. Tuttavia, contiene elevate quantità di omega-3 e di acidi grassi omega-6, che hanno diversi benefici per la salute, tra cui l’aumento della lipoproteina ad alta densità e l’abbassamento del colesterolo lipoproteico a bassa densità. Il lino contiene anche fibre solubili e solubili, nonché mucillagini, un materiale gommoso che aumenta gli effetti digestivi della fibra. Di conseguenza, il flaxseed viene spesso utilizzato come lassativo. Altre proprietà del flaxseed includono proteine e lignani. Secondo l’Università di Maryland Medical Center, vi è la prova che i lignani possono aiutare a prevenire o trattare il colesterolo alto, la malattia di cuore, il cancro del colon, il cancro alla prostata, il cancro della pelle e i sintomi della menopausa.\nNutrizione del germe di grano\nNutrizione di flaxseed\nPrevious Previous post: Quali frutti da evitare durante la dieta hcg\nNext Next post: Sollevamento pesi su una dieta perdita di grasso


Mesini Muriel - Quadreria Blarasin\nHome / Artisti / Mesini Muriel\nPubblicato il 20 Luglio 2016 2 Novembre 2018 di quadreriablarasin\nMuriel Mesini nasce a Torino il 26 ottobre del 1980.\nAttualmente vive a Castelnuovo Calcea (Asti), un piccolo Comune del Monferrato.\nFiglia d’arte, con un padre incisore di argenti e pittore ed un nonno scultore, ha da sempre maturato una forte passione per il disegno – in particolare per il ritratto a matita – che ha coltivato da autodidatta. Dopo aver conseguito il Diploma Magistrale ha iniziato a svolgere l’attività di Assistente alle Autonomie dei ragazzi diversamente abili all’Istituto d’Arte di Asti, dove lavora tuttora. Grazie al tipo di ambiente lavorativo ha spesso potuto trasportare la sua creatività e il suo amore per l’arte nel lavoro, inventando e proponendo attività grafico pittoriche ai ragazzi che segue. Nel 2003 partecipa alla seconda edizione del Concorso Internazionale “Il Bosco Stregato”, indetto dal Comune di Bosia (Cuneo) dove ottiene la segnalazione della Giuria. Nel 2007 partecipa al Concorso per il Manifesto Ufficiale 2008 dell’Associazione Nazionale “Città del Vino” classificandosi al secondo posto. Realizza inoltre illustrazioni originali per Natale 2007 e San Valentino 2008, che grazie alla sinergia con il fratello Luca (ex-allievo del Colle don Bosco e abile grafico) diventano preziosi bigliettini rifiniti a stampa.\nIl suo personale percorso di formazione continua con la ricerca di uno stile sempre più personale, la sperimentazione di nuove tecniche e di nuovi supporti su cui lavorare come la tela o il legno dove negli ultimi tempi ha trasportato immagini fino ad ora impresse unicamente sulla carta. Essendo particolarmente attratta e affascinata dal mondo dell’illustrazione per l’infanzia e aspirando a voler lavorare per esso, in questi ultimi anni si è dedicata alla stesura di brani inediti rivolti all’infanzia e alla loro illustrazione.\nNel febbraio del 2008 si pone all’attenzione della galleria Artanda di Carmelina Barbato (Acqui Terme) con la quale vaglia la proposta di condividere un sodalizio creativo sul tema dell’illustrato e della favola, tuttora in corso.\nArticolo precedente: Borghese Franz\nArticolo successivo: Crociara Renzo\nOpere in galleria (1008)\nSerigrafie di vari artisti (103)


Man City, 150 milioni sterline per tenere Guardiola - Globo Diroma\nGraziato dal Tas e riammesso in Europa, il Manchester City è pronto a offrire un mega ingaggio a Pep Guardiola affinchè resti sulla panchina. Ora che il City sa di poter giocare la Champions anche il prossimo anno, dopo che la squalifica è stata cancellata, tutto il programma del club finora immaginato al ribasso, riprende quota. E si riparte proprio dal tecnico catalano al quale, secondo i media britannici, sarebbero stati offerti addirittura 150 milioni di sterline.\nUn altro passo passo riguarda il difensore senegalese del Napoli Kalidou Koulibaly, 29 anni, sul quale da anni il City ha messo gli occhi e che potrebbe costituire il fulcro dei piani di Guardiola di ricostruire la sua difesa. Altre voci di interesse, riportano i media britannici, riguardano l'attaccante dell'Inter e dell'Argentina Lautaro Martinez, che ogni giorno per la verità viene dato in partenza da Milano; Lautaro è infatti richiesto anche altrove, e il presidente del Barcellona Josep Maria Bartomeu non ha negato le intenzioni del suo club, mentre ha detto risolutamente no alla possibilità che l' attaccante brasiliano del Psg Neymar, torni al Camp Nou. Tra possibili arrivi e partenze, Bartomeu ha una certezza: Lio Messi resterà al Barça anche l'anno prossimo.\n"Quella del Tas sul City è una decisione vergognosa, perché se loro non sono colpevoli allora non si capisce perché siano stati puniti con una multa di dieci milioni di euro". Il manager del Tottenham Josè Mourinho commenta così in conferenza stampa, secondo quanto riporta la Bbc, la sentenza del Tas di Losanna che ha riammesso il Manchester City nelle coppe europee dopo l'esclusione decisa dall'Uefa per presunte violazioni del fair play finanziario. "E' semplice - dice ancora 'Mou' -: se uno non è colpevole, non deve pagare multe. Se invece sei colpevole è una vergogna e devi essere escluso dalle competizioni. Non so se il Manchester City sia colpevole o no, ma in ogni caso si tratta di una sentenza di cui vergognarsi".\n"Sono felice che il City possa giocare in Champions League ma, ad essere onesti, non penso che quello di ieri sia stato un bel giorno per il calcio". Così Jurgen Klopp, in conferenza stampa tramite Zoom, sulla sentenza del Tas di Losanna che ha annullato la squalifica in Europa del Manchester City, per presunte violazioni al fair play finanziario. "Questo perché io penso che il Fair Play Finanziario sia una buona idea - ha detto ancora il tecnico del Liverpool -. Esiste per proteggere i club e le competizioni. Questa era l'idea originaria, quella che nessun club potesse spendere troppo, e cose così. I club devono fare in modo che possano spendere in base alle reali possibilità". Ora Klopp auspica che "il fair play finanziario rimanga in vigore, perché almeno pone dei limiti che non puoi oltrepassare, il che è una cosa buona per il calcio".


UNIVERSITA POLITECNICA DELLE MARCHE SEMAFORINE E CANCRO: NUOVI ORIZZONTI PER LA DIAGNOSI E TERAPIA SPERIMENTALE - PDF\nUNIVERSITA POLITECNICA DELLE MARCHE SEMAFORINE E CANCRO: NUOVI ORIZZONTI PER LA DIAGNOSI E TERAPIA SPERIMENTALE\nDownload "UNIVERSITA POLITECNICA DELLE MARCHE SEMAFORINE E CANCRO: NUOVI ORIZZONTI PER LA DIAGNOSI E TERAPIA SPERIMENTALE"\n1 UNIVERSITA POLITECNICA DELLE MARCHE FACOLTÀ DI MEDICINA E CHIRURGIA DIPARTIMENTO DI PATOLOGIA MOLECOLARE E TERAPIE INNOVATIVE LABORATORIO DI PATOLOGIA SPERIMENTALE Dottorato di Ricerca in Scienze della Sicurezza e della Tutela della Salute negli Ambienti di Lavoro SEMAFORINE E CANCRO: NUOVI ORIZZONTI PER LA DIAGNOSI E TERAPIA SPERIMENTALE Dottorando: Dotta.ssa Silvia Di Nuzzo Coordinatore: Chiar.mo Prof. Antonio Procopio Tutor: Chiar.mo Prof. Alfonso Catalano Anno Accademico I\n2 INDICE INTRODUZIONE 1. Le semaforine I recettori delle semaforine 2 -Plexine. -Neuropiline. -CD72. -Tim-2. -Integrine Vie di trasduzione del segnale delle semaforine 7 -Chinasi. -GTPasi Semaforine nel cancro Regolazione della progressione tumorale da parte delle Semaforine Semaforie e Apoptosi Semaforine e Angiogenesi Tumorale. 13 -Iinibizione dell angiogenesi. -Induzione dell angiogenesi Immunità e tumori: meccanismi di evasione della risposta 16 immunitaria da parte dei tumori Carcinomi Renali: esempio di un modello sperimentale di studio per le Semaforine 17 -Classificazione istopatologia e caratteristiche generali. -Eziologia e fattori di rischio -Sintomatologia e diagnosi clinica. -Strategia terapeutica. SCOPO DEL LAVORO 25 MATERIALI E METODI 26 RISULTATI Sbilanciamento costitutivo del rapporto (endogeno) NP2/NP1 nelle cellule di carcinoma renale (RCC). -. Le cellule di carcinoma renale esprimono i ligandi delle neuropiline e i loro co-recettori. -. Mancanza dell effetto inibitorio della Sema-3A nel carcinoma renale. -. Confronto tra l espressione della proteina Sema-3A e del suo recettore Np-1, in biopsie umane di carcinoma renale II\n3 DISCUSSIONE E CONCLUSIONI 41 BIBLIOGRAFIA 44 III\n4 INTRODUZIONE 1.Le Semaforine Le semaforine (Sema) sono una eterogenea famiglia di proteine inizialmente identificate nel sistema nervoso dell adulto e nell embrione, e associate alle funzioni di guida degli assoni, alla migrazione e polarizzazione dei neuroni e alla formazione delle sinapsi (Kolodkin et al., 1993). La famiglia delle semaforine comprende oltre 30 membri, conservati nel corso dell evoluzione e accomunati dalla presenza di un dominio extracellulare di circa 500 aminoacidi, detto dominio Sema. Le semaforine sono state suddivise in otto classi sulla base delle similitudini nella sequenza aminoacidica e nella struttura complessiva (Semaphorin Nomenclature Committee, 1999): le prime due comprendono molecole identificate negli invertebrati; tra la terza e la settima classe sono raggruppate le semaforine presenti nei vertebrati, mentre l ultima classe comprende molecole codificate da geni di origine virale. Le semaforine di II e III sono molecole secrete ed agiscono principalmente formando un gradiente di concentrazione tra i tessuti; i membri delle classi I, IV, V e VI sono molecole transmembrana; mentre le semaforine di classe VII sono ancorate alla membrana mediante un residuo di glicosil-fosfatidil-inositolo (GPI)(Figura 1). Figura 1. Schema riassuntivo della famiglia delle semaforine e dei loro recettori. 1\n5 La porzione extracellulare di tutte le semaforine comprende, oltre al dominio Sema, il dominio PSI (Plexins, Semaphorins and Integrins) assente nelle semaforine di origine virale; il dominio Immunoglobulina (Ig)-simile, tipico delle semaforine di classe II, III, IV, V e VII; e un dominio di circa 60 aminoacidi omologo alla trombospondina, caratteristico delle semaforine di classe V. Infine, nella regione intracitosolica delle semaforine di membrana di classe IV si trovano domini PDZ (Postsynaptic-density protein of 95 kda, Disc large, Zona-occludens-1), coinvolti nell interazione tra proteine sulla superficie cellulare (Figura 1). Le semaforine trans membrana sono capaci di trasmettere segnali in maniera bidirezionale grazie alla presenza di un dominio intracellulare in grado di mediare il cosiddetto reverse signalling (Hall et al., 1996). Ad esempio, la Sema4D si associa con chinasi serina/treonina, nei linfociti T umani (Elhabazi et al., 1997), e con la fosfatasi CD45 nei linfociti B (Billard et al., 2000). Durante lo sviluppo del miocardio, la Sema-6D guida la migrazione delle cellule cardiache funzionando sia come ligando che come recettore (Toyofuku et al., 2004). Le semaforine sono proteine estremamente pleitropiche, esse contribuiscono al controllo di numerosi processi biologici quali il direzionamento dei prolungamenti assonici e dentritici nelle cellule neurali, la diramazione dell assone stesso, la migrazione degli oligodentrociti e quella delle cellule della cresta neurale, l angiogenesi, la migrazione leucocitaria, i processi apoptotici e la progressione neoplastica (Tamagnone & Comoglio., 2004). 1.2 I recettori delle semaforine Le plexine rappresentano i recettori ad alta affinità per le semaforine. In particolare, le semaforine di membrana legano direttamente le plexine; mentre le semaforine secrete (Sema-3) legano un complesso recettoriale formato dalle plexine, che fungono da elemento trasducente, e dalle neuropiline, che legano direttamente le semaforine di classe III attivando a loro volta le plexine. CD72 e Tim-2 sono strutturalmente e funzionalmente molto diversi dalle plexine e dalle neuropiline e rappresentano i recettori a bassa affinità per alcune semaforine di membrana nel sistema immunitario (Kumanogoh et al., 2000, 2002a). Infine, la Sema-7A può attivare un segnale intracellulare attraverso sia la plexina-c1 (Tamagnone et al., 1999) sia l integrina-β1 in modo del tutto indipendente dalle plexine (Pasterkamp et al., 2003)(Figura 1). Plexine. Le plexine sono proteine transmembrana che legano ad alta affinità le semaforine, attivando un segnale a livello intracellulare (Tamagnone et al., 1999). Nei vertebrati sono stati individuati almeno nove tipi di plexine, raggruppati in quattro sottofamiglie: quattro plexine di tipo A (A1, A2, A3, A4); tre di tipo B (B1, B2, B3); una di tipo C (C1), e una di tipo D (D1) (Figura 1). Dal punto di vista funzionale, le plexine legano ligandi differenti e sono implicate in vie metaboliche distinte. Così, ad esempio, la Plexina-B1 è il recettore funzionale per la Sema- 4D, mentre la Plexina-C1 lo è per la Sema-7A (Tamagnone et al., 1999). Come le semaforine, anche le plexine contengono un dominio Sema nella porzione extracellulare, affiancato da tre domini PSI e da tre domini IPT (Ig-like, Plexins and Transcription factors). Nella regione 2\n6 intracellulare delle plexine, invece, si trovano domini molto conservati, detti domini GAP (GTPase Activating Protein), che inattivano alcune proteine bersaglio, quali le proteine G, aumentando il tasso di idrolisi delle molecole di GTP ad esse legate (Figura 2). Le plexine possono legare sia le semaforine esposte sulla membrana di cellule adiacenti sia le semaforine secrete nell ambiente extracellulare, ed il legame è mediato proprio dal dominio Sema che accomuna entrambe le proteine. E stato ipotizzato che, in assenza del ligando, il dominio Sema può interagire con il resto della porzione extracellulare della plexina causando l inibizione della stessa plexina (Takahashi and Strittmatter, 2001). Oltre che con le neuropiline, spesso le plexine si complessano sulla membrana cellulare con altri tipi di molecole strutturalmente e funzionalmente differenti, come la molecola di adesione cellulare L1 (Castellani et al., 2002), il recettore tirosina-chinasi Off-track (OTK; Winberg et al., 2001) o i recettori Met e Ron che legano, rispettivamente, l HGF/SF (Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor) e l HGFl/MSF (Hepatocyte Gowth Factor-like/Macrophage Stimulating Factor) (Conrotto et al., 2005). Pertanto, le semaforine possono provocare effetti diversi su tipi cellulari differenti in funzione delle molecole che costituiscono il complesso recettoriale. Ad esempio, la Sema-4D inibisce l adesione e la migrazione cellulare attraverso la sola plexina, mentre promuove l attrazione cellulare se la cellula bersaglio esprime la plexina complessata con Met. Anche la Sema-6D può mediare segnali di attrazione o di repulsione in popolazioni cellulari differenti in funzione del tipo di complesso che la plexina-a1 forma con i recettori per il VEGF o con OTK (Toyofuku et al., 2004)(Figura 2). Figura 2: Interazioni tra semaforine e plexine. Le frecce indicano le interazioni delle semaforine con i diversi tipi di plexina. Le semaforine indicate in blu ed in celeste richiedono la presenza della neuropilina- 1 (per la semaforina-3a) o della neuropilna-2 (per le semaforine-3fe 3C) come co-recettore. Il dominio G- P è un dominio ricco in glicina e prolina 3\n7 Neuropiline. Le neuropiline, distinte in neuropilina-1 (Np-1) e neuropilina-2 (Np-2), sono un altra importante famiglia di recettori, in particolare, per le semaforine di classe III (Kolodkin et al., 1997). Le neuropiline sono proteine di membrana di circa 900 aminoacidi con un dominio citoplasmatico molto corto (di circa 40 aminoacidi) privo di attività enzimatica intrinseca. Tuttavia, è stato di recente dimostrato che anche il segmento intracellulare della Np-1 potrebbe avere un ruolo funzionale indipendente, perché capace di interagire con proteine contenenti un dominio PDZ (Wang et al., 2003). La porzione extracellulare delle neuropiline è costituita da sub-domini definiti in funzione della omologia con siti caratteristici di altre proteine. Si distinguono, pertanto, due domini omologhi al complemento (domini CUB o a1/a2) e due domini omologhi ai fattori di coagulazione V e VIII (domini b1/b2), tutti essenziali per la definizione di specificità alle differenti Sema-3 (Nakamura et al., 1998; Giger et al., 1998); e un dominio MAM (meprin/a5/mu-phosphatase, o dominio c), importante per la formazione di omo ed eterodimeri di neuropiline sulla superficie cellulare (Takagi et al., 1995; Chen et al., 1998)(figura 3). Recentemente è stato scoperto che la presenza di un motivo GXXG nel dominio transmembrana di Np-1 e Np-2 è richiesto per l omodimerizzazione (Roth et al., 2008), fenomeno necessario per la sua funzionalità del recettore stesso e per la definizione del tipo di ligando (Raper, 2000). Ad esempio, il complesso Np-2/Np-2 lega la Sema-3F. L eterodimero Np-2/Np-1 è il recettore per la Sema-3B e -3C; mentre l omodimero Np-1/Np-1 lega con diversa affinità le Sema-3A, -3B, -3C e -3F (Takahashi et al., 1999). Figura 3: Rappresentazione schematica delle neuropiline. Lo schema rappresenta i vari domini di cui è costituita la regione extracellulare delle neuropiline, indicati dalle lettere con cui vengono denominati. Il rettangolo rosso indica la porzione transmembrana. Il cerchio verde indica il dominio PDZ nella porzione intracellulare. Le neuropiline formano complessi proteici con le plexine che costituiscono, pertanto, il solo elemento trasduttore del complesso recettoriale delle Sema-3 (Takahaschi et al., 1999). L unica eccezione è rappresentata dalla Sema-3E che lega direttamente la plexina-d1 in modo del tutto indipendente dalle neuropiline (Gu et al., 2005). La principale funzione delle neuropiline è di mediare l attivazione della plexina da parte della specifica Sema-3, interagendo contemporaneamente con entrambe le proteine. Tuttavia, non è ancora chiaro se la formazione del complesso Nps/plexina è antecedente oppure successiva all interazione con lo specifico ligando. Nel primo caso la specificità della risposta cellulare alla Sema-3 dipenderebbe dal tipo di plexina espressa; altrimenti sarebbe il tipo di semaforina a decidere la formazione di uno specifico complesso Nps/plexina (Tamagnone et al., 2000). Le neuropiline funzionano da co- 4\n8 recettori anche per il fattore di crescita di origine endoteliale (VEGF) (Soker et al., 1998; Gluzman-Poltorak et al., 2001) e svolgono funzioni importanti per lo sviluppo del sistema vascolare (Kawasaki et al., 1999; Takashima et al., 2002). La Sema-3A compete con l isoforma VEGF165 per il legame alla Np-1 inibendo l effetto del VEGF sulle cellule endoteliali (Miao et al., 1999) (figura 4). Si presume, in ogni caso, che il ruolo fondamentale delle semaforine secrete, attraverso il legame con il complesso recettoriale Nps/plexine, sia di regolare la migrazione cellulare (Comoglio et al., 2004). Figura 4: Competizione Sema3A/VEGF 165 per il recettore comune Np-1. CD72. CD72, una proteina transmembrana di tipo II di 45 kda, è l unico recettore finora identificato per la Sema-4D nel sistema immunitario. La sua espressione è limitata ai linfociti B (Tutt Landolfi etal., 1997; Parnes et al., 2000; Yamazaki et al,.2005), e alle cellule presentanti l antigene (APC) comprese le cellule dendritiche (CD) ed i macrofagi (Kumanogoh et al., 2002b). In assenza della Sema-4D, CD72 inibisce i linfociti B, prevenendone la differenziazione in plasmacellule (Yamazaki et al., 2005). Inoltre, CD72 può interferire con il segnale di attivazione mediato dal recettore dei linfociti B (BCR) (Wu et al., 2002; Baba et al., 2005). La regione extracellulare di CD72 consiste di un dominio molto simile alla lectina, mentre la porzione intracitoplasmatica contiene due motivi di sei aminoacidi ciascuno (isoleucina-xtirosina-xx-leucina), denominati ITIM1 e ITIM2 ( Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motifs ), comuni ad altri recettori del sistema immunitario e che mediano la trasduzione di un segnale di tipo inibitorio (Figura 3). In seguito alla fosforilazione da parte delle chinasi associate al BCR, ITIM1 e ITIM2 reclutano, rispettivamente, la fosfatasi SHP-1 (SH2-containing protein tyrosine phosphatase-1) e la proteina Grb2 (Growth factor receptor-bound protein 2). SHP-1 inattiva le tirosina-chinasi Syk e Lyn (Somani et al., 2001), mentre l effetto del reclutamento di Grb2 da parte di ITIM2 è di inibizione di tale segnale negativo (Baba et al., 2005). Il legame con la Sema-4D riduce la fosforilazione di BCR ed il reclutamento di SHP-1 mentre aumenta lo stato 5\n9 di attivazione dei linfociti B (Kumanogoh et al., 2001; Ishida et al., 2003). Non a caso i topi deficitari di CD72 sono iper-responsivi a diversi stimoli, mentre i topi che non esprimono Sema- 4D sono ipo-responsivi (Shi et al., 2000). Tuttavia non si conoscono ancora i meccanismi molecolari attraverso cui la Sema-4D induce la defosforilazione di BCR e delle proteine ad esso associate. Tim-2. Tim-2, una proteina transmembrana di tipo I appartenente alla famiglia delle proteine TIM (T cell, Immunoglobulin and Mucin domain), è il recettore della Sema-4A nel sistema immunitario (Kumanogoh et al., 2002a). La regione extracellulare di Tim-2 comprende una sequenza omologa alla regione variabile dell immunoglobulina (IgV) e un dominio molto simile alla mucina. Nella porzione citoplasmatica si trovano, invece, diverse tirosine, probabili bersagli di fosforilazione (Mayers et al., 2005) (Figura 4). Il legame della Sema-4A con Tim-2 determina la fosforilazione dei suddetti residui di tirosina secondo meccanismi non ancora definiti (Kumanogoh et al., 2002a). Tim-2 è espresso nei linfociti T CD4+ e CD8+ in quantità modeste. Tuttavia i suoi livelli di espressione aumentano notevolmente in seguito alla differenziazione in linfociti Th2 (T helper 2), mentre diminuisce nei linfociti Th1 (Chakravarti et al., 2005). Ciò suggerisce che Tim-2 potrebbe avere un ruolo decisivo nella fase effettrice di una risposta immunitaria piuttosto che nelle prime fasi di attivazione della risposta. Sembra che Tim-2 sia una molecola inibitoria e che il legame con la Sema-4A sulle cellule Th2 abbia come effetto finale l inibizione della risposta immunitaria di tipo Th2 (Chakravarti et al., 2005; Kumanogoh et al., 2002a). Integrine. Le integrine sono una famiglia di proteine di membrana formate da due catene polipeptidiche, α e β, legate in modo non covalente. Esistono due sottofamiglie di integrine; i diversi componenti di ciascuna di esse esprimono una catena β comune (β1 e β2) in combinazione con una catena α differente. La regione N-terminale di ciascuna catena forma una testa globulare che contribuisce all associazione tra le due catene e all interazione con il ligando. Alla testa globulare segue un segmento extracellulare, un dominio trasmembrana e una coda intracitoplasmatica. Il dominio extracellulare interagisce con ligandi diversi, tra cui proteine della matrice extracellulare, alcune proteine del complemento e proteine espresse sulla superficie di altre cellule. Il dominio citoplasmatico è invece collegato alle proteine del citoscheletro (vinculina, talina, actina e tropomiosina). Le integrine promuovono l adesione tra cellule e con la matrice, mediando alcune funzioni dipendenti dal citoscheletro, quali la motilità cellulare, la variazione della forma cellulare e le risposte flogistiche. Inoltre, a seguito dell interazione con il loro ligando, le integrine possono trasmettere nelle cellule segnali di attivazione. Il meccanismo di trasduzione del segnale comporta la fosforilazione in tirosina di numerosi substrati, il ricambio degli inositoli e l innalzamento dei livelli intracellulari di calcio. Le conseguenze funzionali dei segnali mediati dalle integrine variano a seconda del tipo cellulare coinvolto. 6\n10 Dati recenti dimostrano che una delle semaforine della classe VII, la Sema-7A, utilizza l integrina α1β1 (o VLA1) per promuove l accrescimento assonico nel sistema nervoso (Pasterkamp et al. 2003), e per stimolare la produzione di citochine da parte dei monociti e dei macrofagi, nel sistema immunitario (Suzuki et al., 2007) Vie di trasduzione del segnale delle semaforine Chinasi. In seguito all interazione con lo specifico ligando, il dominio intracellulare di tutte le plexine subisce la fosforilazione dei residui di tirosina da parte di chinasi citosoliche che vengono in qualche modo attivate direttamente dalle plexine, o indirettamente da altre molecole. In ogni caso le plexine non possiedono attività di auto-fosforilazione (Tamagnone et al., 1999). I meccanismi di fosforilazione ed il ruolo delle chinasi nelle vie di trasduzione del segnale innescate dalle plexine, sono stati in gran parte definiti per entrambe le sottofamiglie di plexine A e B (figura 5). Le plexine A regolano le chinasi Fes e Fyn. Il legame della Sema-3A alla plexina corrispondente, favorisce l associazione di Fes alla regione intracellulare della plexina. Pertanto Fes aggiunge gruppi fosfato sia alla plexina sia alle molecole CRMP-2 (Collapse Response Mediator Protein-2) e CRAM (CRMP-Associated molecole) (Mitsui et al., 2002). Si ritiene che il segnale che deriva dal complesso plexina A1/Fes/CRMP-2 comporti una destabilizzazione dei microtubuli (Gu and Ihara, 2000). Analogamente la plexina A2 interagisce con la tirosinachinasi Fyn che fosforila la ciclina Cdk-5 (Cyclin-Dependent Kinase-5) innescando una via di segnale che termina con una riorganizzazione dell apparato dei microtubuli (Sasaki Y et al., 2002). Come già accennato, la plexina-b1 si associa con il recettore ad attività tirosina-chinasica Met (Giordano et al., 2002) e anche con Erb-2 (Swiercz et al., 2004). La Sema-4D stimola l attività chinasica di entrambi i recettori e, nel caso particolare di Met, incrementa le capacità invasive delle cellule epiteliali attraverso effettori diversi come, Grb2, SHP2, Src e/o PI3K (phosphatidylinositol 3-kinase) (Giordano et al., 2002). Off-track è un recettore tirosina-chinasi che ha perduto l attività catalitica e che può legarsi sia alla plexina B1 sia alla plexina A3. Il ruolo di questa molecola nelle vie di segnale delle plexine rimane ancora irrisolto; tuttavia, Off-track potrebbe favorire il reclutamento di altre chinasi o di GTPasi che trasmetterebbero il segnale (Winberg et al., 2001, Toyofuku et al., 2004a). Le semaforine possono attivare anche le chinasi ERK (Extracellular signal-regulated Kinase) e MAPK (Mitogen-Activated Protein Kinase) in modi diversi e attraverso plexine differenti (Campbell et al., 2003; Pasterkamp et al., 2003) (figura 4). GTPasi. Le GTPasi sono piccole proteine citosoliche, denominate proteine G perché legano alternativamente il GTP o il GDP per modificare il loro stato di attivazione. Attraverso la loro attività specifici segnali provenienti dal microambiente cellulare possono essere rapidamente trasdotti in processi di rimodellamento del citoscheletro, proprio come quelli che regolano l adesione e la migrazione cellulare (Puschel et al., 2005). Alcuni membri della famiglia delle 7\n11 Rho-GTPasi, come RhoA, Rac1 e Rnd1, controllano la motilità cellulare soprattutto attraverso la modificazione dell architettura dei filamenti di actina e dei microtubuli. I componenti della famiglia delle Ras-GTPasi, come H-Ras e N-Ras, invece, stimolano le chinasi ERK e MAPK promuovendo la sintesi di nuove proteine che intervengono nella regolazione della crescita cellulare, nella morfogenesi e in altre attività (Kinbara et al., 2003); mentre R-Ras è coinvolta nella regolazione dell attività delle integrine. In ogni caso, tutte le proteine G sopra menzionate svolgono funzioni importanti nelle vie di segnale intracellulare innescate dalle semaforine per mezzo delle plexine. Ad esempio, Rac1 interagisce direttamente con la porzione citosolica della plexina A1 o della plexina B1, mediando il rimodellamento del citoscheletro indotto dalla Sema- 3A o dalla Sema-4D, rispettivamente (Turner et al., 2004; Zanata et al., 2002). Rac1 attivo e quindi legato al GTP, attiva la chinasi PAK (p21 activated kinase) per iniziare la polimerizzazione dei filamenti di actina. Quando la Sema-4D si lega alla plexina B1, Rac1 è reclutato a livello del recettore e non è più in grado di stimolare la sintesi dell actina per mezzo di PAK (Vikis et., 2000) (Figura 6 B). E interessante notare che mutazioni nella sequenza primaria della regione che lega le GTPasi nelle plexine, hanno un effetto sulla normale localizzazione del recettore sulla memnbrana cellulare. Le interazioni con Rac e Rnd1 potrebbero dunque giocare un ruolo a monte della segnalazione delle plexine, regolando l attivazione del recettore e le sue interazioni con molecole capaci di trasdurre il segnale (Casazza A et al., 2007). L attività GTPasica delle proteine G è finemente controllata dalle proteine GEF (Guanine nucleotide-exchange Factor) che scambiano il GDP con il GTP favorendo l attivazione delle stesse proteine G; e dalle proteine GAP (GTPase Activating Protein) che, invece, incrementano l idrolisi del GTP in GDP promuovendo la disattivazione delle GTPasi. La plexina B1 interagisce con RhoA indirettamente, per mezzo di due tipi diversi di proteine GEF; LARG (Leukaemia-Associated Rho-GEF) o PRG (PDZ-RhoGEF). Il legame di LARG o di PRG alla plexina B1 è mediato dal dominio PDZ che si trova all estremità carbossilica della stessa plexina, e determina un incremento intracellulare dei livelli di RhoA attivo a cui spesso corrisponde un collasso dei pseudopodi delle cellule in movimento (figura 5 B). Inoltre, l attivazione di RhoA da parte della Sema-4D potrebbe co-operare con Ras per l attivazione di Raf1 e delle chinasi ERK/MAPK (Aurandt et al., 2006). Entrambe la plexina A1 e la plexina B1 possiedono attività GAP nei confronti di R-Ras (Oinuma et al., 2004). Nel dominio intracellulare delle plexine, infatti, si trovano due regioni molto conservate, costituite da due residui di arginina e denominate domini GAP, che si attivano in seguito al reclutamento intracellulare di Rnd1 (Oinuma et al., 2004). Pertanto le molecole di GTP vengono idrolizzate, R-Ras viene disattivata e le integrine αβ si distaccano dalla matrice extracellulare compromettendo l adesione delle cellule alla membrana basale o allo stroma interstiziale (Oinuma et al., 2004) (figura 5). In particolare, il legame della Sema-3A con il 8\n12 complesso Np-1/plexina A1 determina il distacco dal recettore e l attivazione della proteina Rac- GEF FARP2 (FERM, RhoGEF and pleckstrin domain protein 2). FARP2 attiva a sua volta Rac1, che media il legame di Rnd1 al dominio GAP della plexina A1. L attività GAP della plexina disattiva R-Ras e, di conseguenza, anche le integrine (Toyofuku et al., 2005) (figura 5a). Oltre a FARP2, ci sono altre molecole che interagiscono con la regione intracellulare delle plexina A provocando una riorganizzazione del citoscheletro, come RanBPM (Ran Binding Protein M) (Togashi et al., 2006) e CRMP2 (Fukata et al., 2002) che sono state identificate, di recente, anche nel sistema immunitario (Wu et al., 2006; Vincent et al., 2005). Figura 5. Vie di segnale delle plexine. Rappresentazione schematica delle molecole coinvolte nelle vie di trasduzione del segnale iniziate dalla plexina A1 (a) e dalla plexina B1 (b). 1.4 Semaforine nel cancro Molte evidenze suggeriscono che le semaforine e i loro recettori possono giocare un ruolo importante nelle diverse fasi della tumorigenesi poiché, sia le semaforine, che i loro recettori, sono diffusamente espressi nelle cellule tumorali, così come negli endoteli e nelle cellule stromali del microambiente tumorale (Catalano A et al., 2006; Zhao et al., 2007;Castro-Rivera et al., 2008; Rolny et al., 2008). Negli ultimi anni è stato dimostrato come le semaforine possono regolare diversi passaggi della progressione tumorale: dalla velocità di crescita del tumore primitivo, all angiogensi, al reclutamento dei macrofagi associati al tumore, alla formazione di metastasi. Inoltre si è osservato che le semaforine sono in grado di controllare, talvolta in modo 9\n13 antitetico, il comportamento delle cellule tumorali e delle cellule stromali che infiltrano il tumore. Ad esempio è stato osservato come alcune semaforine agiscano inibendo la proliferazione cellulare e l angiogenesi, ma allo stesso modo inducano l invasività e la metastasi (Rolny C et al., 2008; Sierra JR et al.,2008) Regolazione della progressione tumorale da parte delle Semaforine Le semaforine possono modificare il comportamento delle cellule tumorali agendo tramite l attivazione delle plexine o, per quanto riguarda quelle appartenenti alla classe 3, tramite l inibizione delle interazioni tra fattori di crescita quali VEGF o HGF e le neuropiline. Il gene codificante per la Sema 3B è stato inizialmente identificato come oncosoppressore la cui funzione è persa nei carcinomi polmonari a piccole cellule a causa di metilazioni o delezioni anomale nella ragione del promotore (Kuroki et al., 2003; Nair et al.,2007). A conferma del ruolo della semaforina nello sviluppo del tumore al polmone è stata inoltre individuata una singola mutazione puntiforme di questo gene (T4151) che causa una minore funzionalità della Sema 3B e, di conseguenza, una maggiore suscettibilità a questa forma di tumore nelle popolazioni con questo genotipo (Marsit et al., 2005). E interessante notare che lo sviluppo di topi knockout per il gene della Sema 3B è normale, suggerendo un ruolo ridondante apparentemente in contrasto con quanto osservato in precedenza. La Sema3B inibisce la crescita indipendente dall ancoraggio e induce apoptosi in cellule tumorali polmonari del polmone e del seno, agendo direttamente sulle cellule cancerose (Tomizawa et al., 2001). Gli effetti proapoptotici mediati dalla Sema 3B sono antagonizzati dal VEGF 165, che è in grado di legare entrambe le neuropiline: questo suggerisce che l azione della semaforina sia mediata dalle neuropiline stesse e che modifiche anche minime nelle concentrazioni della semaforina o del fattore di crescita, possano risultare nella rottura dell equilibrio tra i due e nel conseguente effetto tumori-genico (Castro-Rivera et al., 2004). Recentemente è stato scoperto che la Sema 3B è in grado di promuovere la formazione di un ambiente prometastatico inducendo la secrezione dell interluchina-8 da parte delle cellule tumorali e il reclutamento di cellule macrofagi che a livello del tumore primario (Rolny et al., 2008). Anche la Sema3F è in grado di modificare il comportamento delle cellule tumorali, agendo come oncosoppressore. Cellule tumorali polmonari che presentano una ridotta espressione di questa proteina non sono più in grado di formare tumori quando l espressione della semaforina viene ristabilita, così come non sono più in grado di crescere in assenza di adesione cellulare (Xiang et al., 2002; Potiron et al.,2009). La Sema3F e il VEGF hanno azioni opposte sulle cellule di tumore primario in vitro: mentre il VEGF promuove lo spreading cellulare e l adesione (meccanismi alla base dei processi migratori e metastatici), Sema3F inibisce questi processi portando alla perdita dei lamellipodia e dei contatti cellula-cellula fino a portare al distacco della cellula e alla conseguente apoptosi. 10\n14 Questi effetti sembrano coinvolgere nuovamente l'azione di NP1 e NP2 e, anche in questo caso, la rottura dell equilibrio tra presenza di VEGF e Sema3F a favore di VEGF sembra essere alla base degli effetti pro tumorali (Nasarre et al, 2003). È stato inoltre osservato che il potenziale metastatico di diverse linee cellulari tumorali correla inversamente con il livello di espressione della Sema3F e che, in seguito all overespressione della proteina, il fenotipo caratteristico del melanoma, caratterizzato da elevate invasività, vascolarizzazione e metasticità, viene trasformato in uno caratterizzato da un tumore incapsulato, benigno e con alto tasso di necrosi (Bielemberg et al, 2004). Contemporaneamente è anche stato dimostrato che le cellule tumorali che esprimono la Sema3F tendono ad avere un effetto repulsivo sui vasi linfatici ed endoteliali; questo ha permesso di comprendere che il potente effetto antimetastatico della semaforina è dovuto a un azione sia a livello delle cellule tumorali, sia a livello dello stroma (Bielemberg et al, 2004). Altre semaforine di classe 3 sono in grado di modificare il comportamento di cellule tumorali in vitro o presentano livelli di espressione anomali in cellule tumorali, anche se i loro effetti a livello dello sviluppo tumorale in vivo non sono mai stati esaminati sperimentalmente. La Sema3A ad esempio inibisce sia la migrazione che la proliferazione di cellule di tumore alla mammella che hanno una elevata espressione della neuropilina-1(kigel et al., 2008),ed è anche in grado di inibire l invasività di cellule di tumore prostatico in saggi in vitro (Bachelder et al, 2003; Herman et al, 2007). In contraddizione con questi dati, alcuni lavori riportano un effetto positivo di Sema3A nella progressione di tumori pancreatici, del colon e nel glioblastoma (Nguyen et al, 2006; Muller et al, 2007). In particolare è stato dimostrato che le cellule di glioblastoma producono e secernano la semaforina, la quale ha un effetto autocrino nel promuovere la migrazione delle cellule stesse (Bagci T et al., 2009). Il suo ruolo nelle fasi di tumorigenesi rimane comunque molto discusso. Livelli di espressione anomali della Sema3C sono stati riscontrati frequentemente in casi di carcinoma a cellule squamose e in casi di carcinoma del polmone particolarmente metastatici. La stessa semaforina è in grado di indurre angiogenesi in saggi in vitro, suggerendo un suo possibile ruolo positivo nella progressione tumorale (Martin-Satue et al, 1999; Banu et al, 2006). L espressione di Sema3E sembra correlare direttamente con la progressione tumorale in carcinomi della mammella nel topo (Christensen et al, 1998) e la stessa semaforina risulta overespressa in cellule metastatiche di adenocarcinoma polmonare umano (Martin-Satue et al,1999). Nel carcinoma del colon è stato visto che l espressione della Sema3E è statisticamente associata con la progressione metastatica del tumore stesso (Casazza et al., 2010). Anche semaforine appartenenti ad altre classi possono risultare importanti nei processi di progressione tumorale. La Semaforina-6Dè in grado di svolgere importanti funzioni durante lo sviluppo del miocardio, dove guida la migrazione delle cellule miocardiche (Toyofuku et al., 2004), di promuovere la maturazione delle cellule detritiche (Takegahara et al., 2006) e di 11\n15 regolare l attivazione dei linfociti T durante la risposta immunitaria (O Connor et al., 2008). Una possibile funzione della Sema-6D in un contesto patologico, in particolare nel cancro, è stato dimostrato per la prima volta nel nostro laboratorio. In particolare abbiamo provato che cellule di mesotelioma maligno della pleura (MPM) esprimono la Sema-6D e il suo recettore, la plexina A1, ed abbiamo dimostrato che in risposta al ligando, la plexina A1, si complessa con il VEGFR2(vascular endothelial growth factor receptor 2), attivando un pathway di sopravvivenza cellulare mediato dal fattore di trascrizione NF-KB (Catalano et al,.2008). La Semaforina 4D è in grado di determinare un aumento dell invasività delle cellule tumorali tramite l attivazione dei recettori Met e Ron attraverso l interazione con la plexina B1 (Giordano et al., 2002; Conrotto et al., 2004). Inoltre è stato recentemente osservato che l espressione della Sema-4D in sarcomi dei tessuti molli ha un significato a livello di prognosi della malattia, dal momento che alti livelli di espressione di questa semaforina sono correlati a un elevato potenziale proliferativo e una scarsa probabilità di guarigione (Ch ng et al., 2007). Anche la Plexina B1 rappresenta un nuovo importante marker per la prognosi del cancro al seno. L espressione di questo recettore è fortemente connessa all espressione di recettori per gli estrogeni (ER) e a un basso potenziale proliferativo delle cellule tumorali (Rody et al., 2007). Le Sema-5A e Sema-5D sono entrambe espresse in alcune cellule tumorali quali ad esempio quelle derivati da melanomi umani. Il recettore della Sema-5A è la Plexina B3, capace a sua volta di interagire con Met e attivarlo, probabilmente promuovendo l invasività tumorale (Artigiani et al., 2004) Anche la Sema-5B potrebbe ricoprire un ruolo in alcuni tumori poiché una sua down regolazione in cellule di carcinoma renale compromette in modo significativo la loro vitalità (Hirota et al., 2006) Semaforine e Apoptosi Sempre più evidenze sperimentali dimostrano che le semaforine possono indurre apoptosi anche se con meccanismi non ancora completamente definiti. Uno studio condotto su cellule tumorali del neuroectoderma ha rilevato che l equilibrio esistente tra Sema-3A e VEGF regola la migrazione e l apoptosi (Bagnard et al., 2001). In particolare, all aumento del VEGF corrisponde una maggiore sopravvivenza cellulare ed un incremento della capacità di migrazione. Viceversa, un bilancio quantitativo a favore della Sema-3A riduce l attività migratoria ed induce apoptosi nelle cellule tumorali (Bagnard et al., 2001). L attivazione di vie di segnale diverse determinano gli effetti della Sema-3A sulla motilità cellulare e sull apoptosi. Il reclutamento delle chinasi ERK1/2 è necessario per inibire la migrazione delle cellule nervose progenitrici; mentre l attivazione della MAPK p38 è fondamentale per indurre apoptosi (Bagnard et al., 2004). Pertanto, la capacità della Sema-3A di regolare processi biologici diversi sulle stesse cellule, dipende dall attivazione di vie di trasduzione del segnale differenti così come può dipendere 12\n16 anche dalla distribuzione spazio-temporale della semaforina, similmente a ciò che avviene nel fenomeno di repulsione degli assoni nervosi in crescita. La Sema-3A è stata indicata come mediatore di apoptosi neurale durante l embriogenesi, e l osservazione che la Sema-3A si trova anche nel sistema nervoso dell adulto e quando i neuroni subiscono danni o sono sottoposti a stress, suggeriscono un possibile coinvolgimento della Sema-3A nella riparazione neurale (Pasterkamp et al., 2001). Un altro importante ruolo attribuito, solo di recente, alla Sema-3A è quello di protezione dei neuroni dai danni provocati dalle cellule della microglia in corso di patologie neurodegenerative (Majed et al., 2006). In tal caso, infatti, le cellule della microglia producono una serie di citochine pro-infiammatorie che contribuiscono all ulteriore danneggiamento dei neuroni. I neuroni, a loro volta, possono utilizzare la Sema-3A secreta per indurre apoptosi nelle microglia attivate, regolando l espressione dei recettori Plexina-A1 e Np-1 sulla superficie cellulare, e limitando, così, i danni causati dallo stesso processo infiammatorio (Majed et al.,2006). Nel nostro laboratorio è stato dimostrato che la Sema-3A, mediante la Np-1, è in grado di sensibilizzare i linfociti T tumorali all apoptosi incrementando gli effetti del recettore di morte Fas(Moretti et al., 2008). Gli effetti pro-apoptotici della Sema-3A non dipendono dalla sintesi de novo di proteine, ma dalla ridistribuzione di Fas in regioni specializzate della membrana plasmatica, chiamte raft lipidici (Moretti et al., 2008). Le molecole di Fas concentrate a livello di tali regioni possono, perciò, interagire più facilmente con le molecole adattatrici e le chiansi necessarie per la trasduzione del segnale apoptotico, che viene attivato in seguito al legame con FasL (Muppidi et al., 2004; Legembre et al., 2006). Quindi la Sema-3A ha un ruolo nel modulare il segnale apoptotico attivato dal sistema Fas/FasL sia in un contesto fisiologico che in un contesto oncologico, durante la progressione tumorale Semaforine e Angiogenesi Tumorale La progressione e la crescita dei tumori presuppongono la necessità che i tumori stessi sviluppino una rete vascolare in grado di fornire nutrimento e ossigenazione alle cellule neoplastiche. Tale fenomeno, conosciuto come angiogenesi tumorale, ha suscitato nell ultimo decennio un notevole interesse, anche alla luce del fatto che questa fase della patologia potrebbe rappresentare un rilevante bersaglio nella terapia dei tumori. Molte semaforine giocano un ruolo anche in questo processo della progressione tumorale ma, ancora una volta, si tratta di un ruolo molto variabile e sfaccettato. Inibizione dell angiogensi. L espressione contemporanea di neuropiline e plexine nelle cellule endoteliali implica il fatto che le semaforine di classe 3 potrebbero modulare i processi di angiogenesi e omeostasi vascolare, sia tramite modificazioni del segnalazione a valle del VEGF sia tramite vie di segnalazione indipendente. Molte semaforine di classe 3, incluse la Sema-3A e la Sema-3F, sono espresse dalle cellule endoteliali e probabilmente agiscono in modo autocrino (Serini et al., 2003; Acevedo et al.,2008; Bielenberg et al., 2004). La Sema-3A può inibire il 13\n17 legame del VEGF 165 con la Np-1, agendo in vitro come inibitore dell angiogenesi tumorale (Miao at al., 1999). Comunque la Sema-3A ha un effetto repulsivo sulle cellule endoteliali e induce la loro apoptosi anche in assenza del VEGF, suggerendo che l azione della semaforina non è esclusivamente dovuta alla competizione con il VEGF, ma anche ad un effetto inibitorio intrinseco mediato dall interazione con la Np-1 (Guttmann-Raviv et al.,2007). Inoltre è stato dimostrato in modelli in vivo che, durante l angiogensi tumorale, la Sema-3A è espressa dalle cellule endoteliali ed è in grado di agire come un inibitore endogeno dell angiogenesi nelle lesioni pre-maligne e durante la progressione tumorale (Maione et al., 2009). Inoltre è stato osservato che, l inibizione farmacologia della Sema-3A, durante il momento in cui la crescita tumorale necessita della vascolarizzazione (angiogenic switch), aumenta il fenomeno di angiogenesi stesso e accelera la progressione del tumore (Maione et al., 2009). Non sembra che la Sema-3A possieda un ruolo essenziale nella regolazione dell angiogenesi durante lo sviluppo (Viera et al., 2007; Gu et al., 2003). Quando furono esaminati gli effetti della Sema-3F sulle cellule endoteliali fu scoperto che era in grado di inibire la loro proliferazione e la loro sopravvivenza, di indurre apoptosi e di agire come agente repulsivo (Bielemberg et al., 2004; Guttmann-Raviv et al., 2007; Kessler et al.,2004). La Sema-3F inibisce l angiogenesi sia in vitro che in vivo e l overespressione della proteina in cellule tumorigeniche che non rispondono al trattamento con la Sema-3F in coltura inibisce la crescita tumorale in topi nudi iniettati con queste cellule, provocando una densità molto bassa di vasi sanguigni nei tumori sviluppati (Bielemberg et al.,2004; Kessler et al.,2004). È interessante notare che la Sema3F sembra essere sotto il controllo di p53: la perdita di p53 funzionale in cellule tumorali provoca una netta down regolazione della Sema-3F e un netto aumento dell angiogenesi tumorale (Futamura et al., 2007). Mentre la Sema-3A segnala primariamente tramite la NP1, la Sema3F sfrutta soprattutto la NP2. La combinazione di Sema-3A e Sema-3F compromette fortemente la sopravvivenza di cellule endoteliali molto più che le singole semaforine in modo indipendente (Guttmann-Raviv et al., 2007). La Sema-3E rappresenta un eccezione all interno della classe 3 in quanto è l unica semaforina capace di legare direttamente la plexina D1 senza l intervento delle neuropiline. L espressione della Sema-3E nelle fasi di sviluppo embrionale sembra inibire l espansione dei vasi sanguigni, suggerendo un ruolo anti-angiogenico e repulsivo attraverso la Plx-D1 e indipendentemente dalle neuropiline (Gu et al., 2005). La Plx-D1 è overespressa nelle cellule endoteliali dei vasi sanguigni tumorali e nelle cellule tumorali stesse in casi di tumore al cervello (Roodink et al., 2005); è in grado di formare complessi recettoriali con le neuropiline e di indurre un aumento dell affinità di NP-1 e NP-2 per Sema-3A e Sema-3C rispettivamente, suggerendo che queste semaforine dipendenti dal legame con le neuropiline potrebbero in qualche modo trasdurre dei segnali attraverso la plexina stessa (Gitler et al., 2004). In un contesto oncologico il ruolo di inibitore dell angiogensi tumorale è stato recentemente dimostrato anche per la Sema-3E. E stato infatti visto che 14\n18 l attivazione della Plx-D1 da parte del suo ligando causa un rapido di assemblaggio delle strutture adesive mediate dalle integrine, in modo da inibire l adesione delle cellule endoteliali con la matrice extracellulare (Sakurai et al., 2010). Anche la Sema-4A è in grado di legare la plexina D1 e il suo ruolo sembra essere inibitorio a livello dell angiogenesi nello sviluppo, attraverso l inibizione dell attivazione di Rac mediata da VEGF e l adesione cellulare mediata dalle integrine (Toyofuku et al., 2007). Infine, sono presenti lavori che suggeriscono un ruolo inibitorio per il dominio extracellulare della Sema-6A, sia a livello della migrazione endoteliale sia a livello della neoangiogenesi tumorale. Gli effetti della forma intera della semaforina, tuttavia, non sono ancora stati esaminati (Dhanabal et al, 2005). Induzione dell angiogenesi. Alcune semaforine sono state associate in modo positivo alla fase di neoangiogenesi tumorale. La Sema-4D è altamente espressa nelle cellule endoteliali e promuove la loro migrazione e la tubulogenesi in vitro (Conrotto et al., 2005), suggerendo un analogo effetto anche in vivo. La porzione extracellulare della Sema-4D può essere clivata e rilasciata dalle cellule che la esprimono grazie all azione di alcune metalloprotesi della matrice che sono spesso sovraespresse dalle cellule tumorali, le quali a loro volta conservano anche l attività biologica mediata dalla semaforina 4D intera (Basile et al., 2007). L attivazione della plexina B1 sembra essere sufficiente per determinare gli effetti pro-angiogenici attraverso un meccanismo Rho dipendente (Basile et al., 2004). E stato osservato che la Sema-4D gioca un ruolo importante nella neoangiogensi e nella progressione tumorale nei casi di carcinoma a cellule squamose di collo e testa (Basile et al., 2004). In questo tipo di tumore il gene della Sema-4D contiene elementi in grado di rispondere all ipossia che sono sensibili all azione di Hif 1α. Inibendo l espressione della semaforina con shrna specifici, si ha una riduzione nella capacità migratoria delle cellule endoteliali in vitro e una ridotta vascolarizzazione. E stato inoltre dimostrato che i livelli di espressione della Sema-4D correlano con l attività di Hif 1α, suggerendo che la Sema-4D sia una strategia con la quale il tumore promuove l angiogenesi (Sun et al., 2009). Grazie all associazione tra Plx-B1 e Met, la Sema-4D è anche in grado di indurre processi di angiogenesi tramite l attivazione di Met, mimando gli effetti del suo recettore naturale HGF (Giordano et al., 2002; Conrotto et al., 2005). L angiogenesi tumorale non è tuttavia compromessa in topi privati dell espressione della Plx-B1, questo suggerisce che il ruolo in questa fase della tumorigenesi possa essere ridondante, grazie a una compensazione generata dalla presenza di altre semaforine di classe B (Fazzari et al., 2007). Un altra semaforina che sembra agire come agente pro-angiogenico è la Sema-6D, capace di legare la plexina A1 e attivarne la trasduzione del segnale mediata dal VEGFR2 (Toyofuku et al., 2004). 15\n19 Immunità e tumori: meccanismi di evasione della risposta immunitaria da parte dei tumori. Il concetto di immunosorveglianza, proposto da M. Burnet negli anni 50 del secolo scorso, prevede che una delle funzioni fisiologiche del sistema immunitario sia di riconoscere e distruggere i cloni di cellule trasformate prima che esse possano crescere e formare tumori, nonché di eliminare il tumore generato. L importanza della sorveglianza immunologica, ed addirittura la sua esistenza, è stata spesso messa in dubbio; tuttavia oggi sappiamo che il sistema immunitario è in grado di riconoscere gli antigeni tumorali e di dare inizio ad una risposta immune specifica (Pettit et al., 2000; Rosenberg 2001). In ogni caso è da considerare che la maggior parte degli antigeni tumorali è debolmente immunogenica, e le risposte dell ospite spesso non riescono a prevenire o a contrastare efficacemente la crescita del tumore. Indagini istopatologiche di diversi tipi di tumore dimostrano, infatti, l esistenza di un infiltrato di natura infiammatoria, principalmente costituito da linfociti T e cellule NK ( natural killer ) e macrofagi che appaiono, ciò nonostante, totalmente incapaci di eliminare le cellule tumorali (anergia). Le cellule tumorali possono sviluppare diverse strategie per evadere l attacco immunitario. Spesso acquisiscono resistenza all apoptosi (Rippo et al., 2005) e producono fattori solubili immunosoppressivi, come interluchina-6 (IL-6), interluchina-10 (IL-10), Vascular-Endothelial Growth Factor (VEGF) e Transforming Growth Factor-beta (TGF-β) (Bellone et al., 1999; Rubinstein et al., 2004). In altri casi, le cellule tumorali diventano capaci di uccidere le cellule immunitarie, sfruttando a proprio vantaggio i meccanismi effettori della risposta immunitaria. Ad esempio, diversi tipi di tumori esprimono il ligando di Fas (FasL o CD178) per indurre apoptosi nei linfociti esprimenti il recettore Fas (CD95) e reclutati a livello del micro-ambiente tumorale (Hahne et al., 1996; Hoffmann et al., 2002; Abrahams et al., 2003). Piuttosto recente è la scoperta che alcuni membri delle semaforine svolgono funzioni importanti anche nella modulazione del sistema immunitario (Kikutani & Kumanogoh, 2003). Come già detto, l espressione della Sema-3A è stata osservata in diversi tipi di cellule tumorali, quali il cancro della mammella, del polmone, il glioma ed il mesotelioma maligno della pleura (Catalano et al., 2006). Questa semaforina prodotta dalle cellule tumorali è in grado di legarsi ai linfociti T, a livello della Np-1, inibendone la proliferazione e la produzione di citochine, in particolare IL-2. Quando l espressione della Sema-3A è inibita con sirna specifici, le cellule tumorali formano aggregati con i linfociti T in percentuale maggiore rispetto a quello che si osserva in presenza delle semaforine (Catalano et al., 2006).La Sema-3A di derivazione tumorale può, quindi, inibire il riconoscimento degli antigeni tumorali da parte dei linfociti T bloccando le interazioni omofiliche tra molecole di Np-1 espresse sulla superficie di entrambi i tipi cellulari. E stato infatti dimostrato che tali interazioni sono importanti per la formazione della cosiddetta sinapsi immunologica tra cellule presentanti l antigene (APC) e linfociti T già nelle prime fasi della risposta immunitaria antigene specifica (Dustin & Colman, 2002). In 16\n20 aggiunta è stato osservato che la Sema-3A, attraverso il legame con la Np-1, incrementa nei linfociti T l apoptosi indotta dal ligando di morte FasL. I risultati ottenuti mostrano come l effetto della la Sema-3A dipende dal riarrangiamento dei filamenti di actina e della membrana (Moretti et al.,2008) La Semaforina-3A può quindi, contribuire a creare un microambiente tumorale dal carattere immunosopprensivo e il suo rilascio da parte delle cellule tumorali può servire come mezzo per rendere anergici i linfociti T reclutati nella regione di sviluppo della neoplasia o, addirittura, per sensibilizzarli all apoptosi. Tutto ciò potrebbe avere importanti implicazioni nella terapia immunitaria contro il cancro. 1.5 Carcinomi Renali: esempio di un modello sperimentale di studio per le Semaforine Epidemiologia. Il carcinoma a cellule renali origina dal tessuto epiteliale e costituisce il 3% delle forme di cancro riscontrabili nell uomo ed è causa, nel mondo, di decessi ogni anno (Mortzer et al., 2004). Nonostante la sua incidenza sia inferiore a quella del tumore alla prostata e a quella del cancro della vescica, il carcinoma del rene costituisce la forma cancerosa maggiormente letale nell ambito delle patologie neoplastiche a carattere urologico. Negli ultimi 30 anni si è registrato un significativo incremento dell incidenza del carcinoma renale, probabilmente dovuto alla diffusione delle nuove tecniche di imaging, che consentono di identificare la neoplasia in una fase precoce, quando non abbia ancora determinato la comparsa di sintomi. Questa evoluzione ha, oltretutto, condotto un miglioramento in termini di sopravvivenza(mathew et al., 2002). Per quanto concerne l incidenza sesso correlata, i soggetti maschi presentano un rischio doppio, rispetto a quelli di sesso femminile, di sviluppare la patologia, mentre l incidenza età-correlata presenta un picco massimo intorno alla sesta-settima decade di età (McLaughlin et al., 2000). All atto della sua diagnosi la neoplasia risulta localizzata nel 70-80% della casistica clinica, mentre nel 20-30% dei pazienti sono già presenti metastasi. Il tasso di sopravvivenza del carcinoma renale varia in base allo stadio della malattia: a 5 anni sono vivi il 95% ed il 20% dei pazienti, rispettivamente, in stadio I ed in stadio IV. In presenza di metastasi l aspettativa di vita è di 6-12 mesi, con un a sopravvivenza di 5 anni non superiore al 10%(Rini et al., 2008). Classificazione istopatologica e caratteristiche citogenetiche. Le neoplasie a cellule renali rappresentano un gruppo eterogeneo di neoplasie, caratterizzate da differenze istologiche, genetiche, cliniche e spaziano da forme benigne a altre maligne di alto grado (Eble et al 1998). La classificazione del carcinoma a cellule renali, introdotta nel 1997dall Union Internationale Contre le Cacer (UICC) e dall American Joint Committe on Cancer (AJCC), è stata elaborata sulla base di peculiarità citologiche, genetiche e molecolari delle varianti neoplastiche. Tra i vari istotipi è possibile distinguere: 17


Serie A, il 25 maggio la Lega decide sui diritti Tv - CorCom\nDopo l’ok dell’Antitrust, a sbloccare la situazione arriva anche il via libera di Agcom sulle linee guida dell’asta. Giovedì prossimo il confezionamento di offerte e pacchetti per il triennio 2015-2018, con la gara che si dovrebbe concludere a luglio\nL’Antitrust aveva bocciato la prima versione delle linee guida proposte dalla Lega serie A il 25 gennaio, e ora le ha approvate “con osservazioni”, riservandosi di vigilare sull’asta.\nQuale possa essere la novità del prossimo bando, lo indicano le autorità vigilanti, “valutando con favore la scelta delle linee guida di valorizzare i diritti di trasmissione sulla piattaforma Internet, che non sono più considerati ‘accessori’ rispetto alle piattaforme tradizionali”. La piattaforma Internet era prevista già, ma ora, sottolineano le autorità, dovranno avere pari opportunità con le altre.\nL’auspicio era per “l’adozione di una modalità di vendita tale da alimentare un confronto effettivo tra più piattaforme distributive (digitale terrestre, satellite e internet) – recita la nota dell’Antitrust – stimolando lo sviluppo competitivo nei mercati a valle, in particolar modo della pay-tv. Si tratta di modalità che consente una effettiva concorrenza in particolare nei riguardi del consumatore, il quale può scegliere tra più offerte in concorrenza tra loro senza dover sostenere maggiori costi derivanti dalla necessità di sottoscrivere una pluralità di abbonamenti”.\nLa delibera dell’Agcom, inoltre, indica altri paletti: tempi certi per tutte le fasi dell’asta, e questo potrebbe consentire di evitare come nell’ultima occasione periodi lunghi tra l’apertura delle buste e la fase successiva; pacchetti business, ovvero per i locali pubblici, concorrenziali come quelli per il singolo consumatore; un limite alla discrezionalità della Lega di annullare l’asta in caso di mancata assegnazione di tutti i pacchetti e il divieto di “esclusive negative”.


pomiciata – TrippaPerGatti.it\nNon Mi Ricordo n.2\nMaggio 5, 2011 Maggio 5, 2011 TpGLascia un commento\nNo, non mi ricordo di quando sei andata via. Non saprei neanche dire quanto tempo è passato. Un anno, due, dieci? Non mi ricordo più niente della tua voce, dei tuoi capelli che arrotolavo con le dita. Mi sono completamente dimenticato del neo buffo che avevi dietro l’orecchio destro, e io che cercavo di descrivetelo, e tu che non capivi, mentre la primavera correva veloce come il cavallo bianco sulla spiaggia dei nostri “forse ti amo ma non sono sicuro comunque intanto vai con la pomiciata yuhuhh!”. Pensa: non mi ricordo neanche che ti piacevano le fragole con la panna. Insomma, come vedi, mi sono dimenticato di te. Sì, tutto passato, finito. Non mi ricordo neanche più come ti chiamavi. Però mi ricordo che occupavi il bagno per delle mezzore, che madonna io ti avrei…\nPosted in memoria liquidaContrassegnato da tag bagno, cavallo bianco, madonne, mezzore, pomiciata


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ceneri: ep d'esordio e le prime date estive - Musica Dal Palco\nceneri: ep d’esordio e le prime date estive\n30/05/2022 30/05/2022 Redazione\t0 commenti\nCon l’ep d’esordio la giovane artista friulana annuncia le prime date del suo tour estivo\nceneri, dopo aver annunciato la sua partecipazione al MI AMI Festival e la release di Nello spazio che resta, suo ep di debutto, ha svelato le prime date del suo tour estivo dal calendario in continuo aggiornamento.\n28 maggio 2022 – Milano – MI AMI Festival\n21 giugno 2022 – Roma – Monk\n29 giugno 2022 – Padova – Arcella Bella\n01 luglio 2022 – Torino – Hiroshima Sound Garden\nCresciuta ascoltando Bon Iver e Frank Ocean ma anche artisti italiani come Calcutta e I Cani, Irene oggi si ispira a cantautrici come Lorde e Phoebe Bridges di cui ammira le sonorità leggere e le parole dirette ed empatiche in cui è facile potersi ritrovare. Un’attenzione alla scrittura che emerge anche nei suoi testi delicati, intimi e immediati, capaci di creare delle immagini vivide con pochissime parole.\nIrene Ciol in arte ceneri, è una cantautrice friulana classe 2000. Nata in provincia di Pordenone, in un paesino di 8000 anime tra i campi, è cresciuta respirando arte e aria buona.\nUna voglia incessante di sperimentare e creare l’ha portata sin da piccolissima a confrontarsi con la pittura e poi con la fotografia, passione che ha ereditato dal nonno e dal padre. Oggi studia grafica e design. Nel 2016 grazie a un corso di song writing si è avvicinata alla musica, universo che le ha permesso di trovare un modo per raccontarsi, esprimersi e capirsi. Da lì in poi non l’ha più abbandonato.\n← FRANCO126: nuove date\nLUCIANO LIGABUE: ospita Gazzelle e Finardi →


Idee per Trovare un Secondo Lavoro >\tConsulenti del Lavoro\nIdee per Trovare un Secondo Lavoro\nHai bisogno di arrotondare lo stipendio per riuscire ad arrivare a fine mese? Vuoi toglierti qualche sfizio in più? Sei uno studente e ha bisogno di qualche soldo in più in tasca? Allora sei alla ricerca di quello che può essere definito un secondo lavoro. Cercare un secondo lavoro non è facile ma seguendo alcuni suggerimenti ed avvalendosi di diversi servizi si può riuscire in questa impresa che spaventa molti.\nCome quando si è alla ricerca di un primo lavoro, anche quando si cerca una seconda attività è molto utile navigare nel web dove esistono siti interamente dedicati alla ricerca del lavoro nei quali ci si può iscrivere e inoltrare il proprio curriculum vitae.\nMolto diffuso è il telelavoro da casa. Questa tipologia di professione permette di lavorare indipendente dalla propria ubicazione geografica e può essere quindi un’ ottima opzione per chi è alla ricerca di un secondo lavoro e vuole risparmiare sulle spese per recarsi sul luogo d’ impiego. Tra le opzioni più gettonate ci sono i lavori come articolisti o web writer, grafici, addetti alla stesura di recensioni e guide di diverso genere ecc…\nMolte aziende, soprattutto negli ultimi anni, cercano personale da assumere con contratto part time. Se l’ orario lo permette, si possono cercare attraverso motori di ricerca, giornali ed uffici di orientamento due lavori con questo genere di contratto. Solitamente due lavori part time, a confronto, permettono di guadagnare di più di un lavoro a tempo pieno.\nColoro che non hanno bisogno di un secondo lavoro durante tutto l’ anno possono cercare un lavoro stagionale. Molte attività commerciali ubicate nelle città con maggiore afflusso turistico durante il periodo delle vacanze estive o delle festività hanno bisogno di incrementare il personale. E’ ottimo consiglio riuscire a fare combaciare il proprio secondo lavoro con i propri interessi per non essere vittime dell’ eccessiva stanchezza e dello stress.\nFotografia tratta da http://www.affari-web.it/blog/\nOfferte di Lavoro > Documenti > Idee per Trovare un Secondo Lavoro\nTags: articolisti, impiego, servizi, studente, telelavoro\nArticoli Correlati:Lavorare come Colf e Badante Come Nasce la fase di Start-up di un'Azienda Gruppo Hera assume a Tempo Indeterminato Riforma Pensioni 2013: ecco cosa cambia Do you have any comments on Idee per Trovare un Secondo Lavoro ?


Per questo 2020 mi sono ripromessa di essere più presente e pubblicare il più possibile. Infatti questo post è stato pubblicato l’ultima volta il 23 Ottobre 2019 e, nel mentre, ho letto libri su libri, ma mai a comunicarlo in questo post. Vedrò di essere più corretta e più presente anche qui e non solo su Instagram.\nOra leggiamo un po’ cosa ho già concluso in questo 2020.\nA gennaio 2019 ho letto “Lady Midnight” e a inizio 2020 termino questo. E’ segno che devo iniziare l’anno con la Cassandra, ma quest’anno penso che ne leggerò molti di suoi libri, anche perchè ne sforna abbastanza.\n“Shatter Me” di Tahereh Mafi è una rilettura poichè mi serve per continuare finalmente la serie. Mi sa che quest’anno porterò a conclusione molte serie, oltre ad iniziarne delle altre. Chiusa una serie, se ne apre un’altra. Continua la lettura di “Il nome del vento” di Patrick Rothfuss, gentilmente inviatomi dalla Oscar Vault. Mi sta piacendo, nonostante sia lento e ricco di cose. Piano Piano procedo.\nScelto per la TBR Book Challenge da me, è mio compito leggerlo perchè farlo leggere agli altri e non farlo io, è abbastanza brutto.\nArticolo precedente5 Cose Che… 5 Graphic Novel che vorrei leggere\nArticolo successivoMANIE D’AUTORE\n14/01/2020 alle 21:09\nIo sto leggendo Nevernight. L’ho appena iniziato 😊


Operatori divulgano rispetto per l'ambiente - Travelnostop\nOperatori divulgano rispetto per l’ambiente\nIl turismo a cavallo come opportunità per i visitatori e per gli abitanti\n07 novembre 2006, 9:30\nDa anni il turismo equestre è considerata una delle tante opportunità per chi vuole visitare la Valle d’Aosta. Per dare ordine e credibilità al settore in rapida espansione, è nata la Confederazione Tecnici Equestri (Cte), cui aderiscono 40 esperti, di cui oltre 20 sono accompagnatori di turismo equestre iscritti all’albo regionale, al quale si accede dopo avere frequentato un corso di formazione organizzato dalla Regione e finanziato dal Fondo Sociale Europeo. Ai corsisti vengono impartite nozioni sulle risorse turistiche della Valle d’Aosta, sulle competenze tecniche e strumentali e su come relazionarsi con il turista. Inoltre, dal punto di vista pratico, approfondiscono come organizzare un viaggio a cavallo, come gestire un centro di turismo equestre e alcune nozioni di pronto soccorso veterinario. Gli accompagnatori equestri vengono poi impiegati nei maneggi, nei centri specializzati e negli agriturismo, organizzano giornate di trekking a cavallo per gruppi e nel corso delle escursioni spiegano le peculiarità del territorio e delle tradizioni locali e illustrano le risorse naturali della regione, fornendo informazioni su flora e fauna.


Brexit, Johnson ammette il caos Irlanda: "Sì, ci saranno controlli al confine" - Affaritaliani.it\nHome > Europa > Brexit, Johnson ammette il caos Irlanda: "Sì, ci saranno controlli al confine"\nMartedì, 1 ottobre 2019 - 15:06:00\nBrexit, Johnson ammette il caos Irlanda: "Sì, ci saranno controlli al confine"\nLa possibile reintroduzione di controlli al confine in Irlanda fa aumentare il rischio del ritorno di violenze\nBrexit, Johnson: "Qualche tipo di controllo in Irlanda sarà realtà"\nQualche tipo di controllo sulle merci che attraverseranno la frontiera tra Irlanda e Irlanda del Nord dopo la Brexit ci sarà, "questa è la realtà". Parole del premier britannico Boris Johnson, che in un'intervista alla Bbc ha però smentito che il presunto piano alternativo al backstop, rivelato dall'emittente Rte, porti a un ritorno a un confine 'pesante'. Le anticipazioni diffuse dalla tv irlandese parlano della creazione di centri di sdoganamento, posti non sulla frontiera ma 5-10 miglia all'interno. "Penso che stiamo arrivando al momento critico della scelta per noi su come procedere. Perché alla fine un Paese sovrano e unito deve avere un unico territorio doganale", ha sottolineato il premier britannico. "Ma ci sono molti modi in cui possiamo facilitare il commercio nord-sud e affrontare il problema", ha assicurato BoJo.\nOra in Irlanda si teme il ritorno delle violenze\nPer la leader del Sinn Fein irlandese, Mary Lou McDonald, l'ipotesi di realizzare centri di sdoganamento non lontano dalla frontiera è invece un vero e proprio ritorno a un confine pesante, una situazione inaccettabile per Dublino. "Tutto ciò che provoca dogane, dazi, controlli in qualsiasi luogo rappresenta un inasprimento del confine", ha sottolineato. Critiche sono arrivate anche dal leader del Parito nazionalista scozzese a Westminster, Ian Blackford, che ha denunciato il piano sostenendo che dimostra come Johnson non sia serio nei suoi propositi di ottenere un accordo con l'Ue sull'uscita. Sul tema è tornato anche il sottosegretario per la Brexit James Duddridge, assicurando che "per nessun motivo il Regno Unito porrà infrastrutture o controlli al confine". "Non c'è alcuna intenzione di avere controlli fisici al confine, non ci sono piani in questo senso", ha ribadito, riferendo che piani alternativi verranno presentati nei prossimi giorni.


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