Pellicole antisolari - Vetri - Oscuramento vetri\ntu sei in :casapratica.org » Fai da te » Vetri » Pellicole antisolari\nLe pellicole antisolari\nVantaggi delle pellicole antisolari\nPellicole antisolari: Costi e dimensioni\nVetri per la casa\nLe pellicole antisolari sono sempre più utilizzate per difendersi dai raggi del sole e per riuscire a creare una temperatura equilibrata. Sul mercato sono presenti differenti soluzioni sempre più moderne ed efficienti. Si tratta nello specifico di pellicole che vengono immesse direttamente sui vetri in modo facile e pratico. Si può scegliere tra una vasta gamma di prodotti: vi sono quelle colorate, quelle scure e specchiate ed ancora quelle dallo spessore sottilissimo. Le pellicole antisolari sono molto apprezzate anche perché sono in grado di diminuire fortemente le spese relative all'impianto di riscaldamento. Queste soluzioni speciali si applicano con grande facilità in casa pure per non fare sbiadire, a causa del sole, mobili d'arredo, pavimenti e pareti in legno. C'è chi le preferisce chiare per mantenere un'elevata visibilità esterna.\nI vantaggi delle pellicole antisolari sono davvero numerosi. Applicarle sulle vetrate, infatti, comporta numerosi benefici all'interno non solo di un edificio pubblico o privato, ma anche di un'automobile. Innanzitutto queste soluzioni in esame sono capaci di creare un ambiente altamente confortevole in quanto proteggono dai raggi diretti del sole. Ciò porta ad evitare antipatici surriscaldamenti degli ambienti. Installare pellicole antisolari offre la possibilità anche di ottenere un interessante risparmio energetico, soprattutto nella stagione estiva. Per quale motivo? Perché minore sarà il calore e, di conseguenza, minore sarà il bisogno di utilizzare l’impianto di climatizzazione. Da tutto questo deriva pure un limitato inquinamento atmosferico provocato, invece, dalla presenza di anidride carbonica derivante dall'uso assiduo del climatizzatore.\nLa pellicola per vetri viene realizzata con differenti metodologie e può assolvere a funzioni diverse oppure complementari fra di loro. Le pellicole più utilizzate in assoluto sono quelle oscuranti ch...\nLe pellicole oscuranti\nSi sente spesso parlare di pellicole oscuranti, ma che cosa sono e qual è la loro funzione? Nello specifico tali materiali servono a ricoprire le finestre di edifici pubblici e privati. Se all'estero ...\nOptare per forme di energia rinnovabile significa avere soluzioni ecosostenibili e dal limitato impatto ambientale: vi sono tante opzioni da mettere in pratica, dall'eolico al solare. In genere si rea...\nPannelli fotovoltaici incentivi\nAl fine di non aumentare l'inquinamento del pianeta, è importante porre maggiore attenzione nei confronti dell'energia eco. Questa è in grado non solo di ridurre i consumi e quindi anche i costi delle...\nVetro Sintetico Trasparente in Lastra Maurer 500x1250 mm spessore 4 mm\nPrezzo: in offerta su Amazon a: 21,81€\nIn commercio esistono numerose pellicole antisolari. I costi variano a seconda dei modelli, dei materiali e della qualità dei prodotti. Una pellicola adesiva a specchio per vetri dell'unità di misura di 75 x 150 centimetri costa circa 20€. Di contro, un prodotto solare per i finestrini delle auto di colore nero, delle dimensioni di 75 x 300 centimetri, si può trovare a 16€. Si tratta di una pellicola opaca, che fa penetrare pochissima luce nell'abitacolo. Il prezzo di una pellicola antisolare isolante dell'unità di misura di 75 x 300 centimetri ha un prezzo che si aggira intorno alle 30€. Molto pratici e convenienti sono i rotoli che vengono di volta in volta personalizzati. Un rotolo con stickers adesivo, della lunghezza di 76 centimetri, a specchio isolante, ha un costo di circa 22€.\nIl vetro retinato è contraddistinto da una serie di fili di metallo cromato al suo interno, ragion per cui è chiamato anche a ...\nI vetri sabbiati sono elementi ornamentali e funzionali sempre più apprezzati nei contesti residenziali e negli uffici. Si ot ...


Affitto di una casa vacanza: come fare\nTutti gli obblighi e la normativa per affittare un appartamento in piena regola durante l'estate\nQuando si iniziano a programmare le ferie, la scelta dell'alloggio dipende molto dal budget e dai gusti personali. Negli ultimi tempi, sempre più persone scelgono di affittare una casa vacanza, una valida soluzione alternativa all'albergo e al bed & breakfast. Si tratta principalmente di case private, come semplici appartamenti, ma anche ville e casali, che offrono un posto per un periodo limitato di tempo.\nDare una casa a dei turisti, vuol dire anche garantirgli dei servizi, quindi bisogna essere reperibili in ogni momento e curare particolarmente la manutenzione per una casa efficiente e funzionale. Se l'appartamento si trova all’interno di un condominio, meglio far stampare un regolamento da consegnare agli ospiti al loro arrivo, così da rispettare gli spazi comuni e gli orari di silenzio. Per i turisti la vacanza deve essere rilassante e quindi devono trovare un ambiente accogliente, arredato con tutti i comfort e un locatore in grado di fornire suggerimenti su possibili luoghi da visitare o strutture caratteristiche da scoprire. In questo modo gli ospiti saranno invogliati a tornare e a lasciare feedback positivi in rete.\nQuando si affitta un immobile, per essere in piena regola, bisogna far riferimento alla normativa regionale. A differenza del bed & breakfast, non corrisponde alla prima abitazione, ma a una seconda casa, quindi è un’attività imprenditoriale occasionale con leggi specifiche. In questo caso si deve segnalare l’intenzione di affittare l’immobile con la SCIA: segnalazione di inizio attività al Comune.\nAnche a livello fiscale ci sono delle differenze nella gestione della casa. Se questa viene gestita in forma non imprenditoriale, i guadagni possono essere inseriti nella dichiarazione dei redditi, se invece è un’attività imprenditoriale, bisogna avere una partita IVA. In quest'ultimo caso, se il contratto è inferiore a 30 giorni, si può applicare la cedolare secca nella dichiarazione dei redditi.


Gioco d'azzardo online con criptovalute Quest'anno, il primo Bitcoin di criptovaluta al mondo sta già celebrando il suo anniversario Il loro inizio è stato un po 'accidentato, ma ora è chiaro: le valute alternative digitali sono arrivate La carta virtuale prepagata è particolarmente popolare per i depositi e prelievi di criptovalute come Bitcoin PayPal Incorporated è un istituto di moneta elettronica basato su con uffici negli Stati Uniti e in Lussemburgo. Perché questo metodo di pagamento è stato in Ebay da e in seguito è stato introdotto come metodo di pagamento di base,\nAgro bet è un portale scommesse di recente creazione, di proprietà di Espediente Group , società con sede a Limassol, Cipro. Campobet ha ottenuto la licenza nr. Campo bet vanta ciascuno degli sportsbook più completi in corso con decine di discipline sportive sulle quali puoi scommettere. Dalle più amate come calcio, basket, tennis e volley, passando per il golf, automobilismo, motociclismo, ciclismo, ma anche MMA , squash e biathlon , sport che estranei bookmaker non prevedono. Un buon bucato di partenza per iniziare a arrischiare sui tuoi eventi preferiti.\nBensм per quale motivo? Le ragioni affinché potremmo condividere con te sono, in verità, molto numerose! Ma quali sono? Il primo trucco è legato alle fiches.\nNon ci sono orologi in vista\nLa slot machine Spin Sorceress si ispira al mondo della magia che rappresenta attraverso simboli come lupi e saette di ghiaccio, e grazie ad un comparto grafico ricco di animazioni affinché riesce a ricalcare i tratti mistici e fantasiosi di personaggi come maghi e streghe. Ogni singola combinazione appresso è associata ad un determinato compenso in denaro sempre calcolato come un certo numero di volte il capacitа della puntata scommessa e che varia da un minimo di 5 volte tale valore, con 3 simboli allineati raffiguranti ad esempio i numeri 9, 10, a massimi dicon 5 simboli allineati raffiguranti invece un lupo. La slot machine Spin Sorceress punta complessivo su un tema ispirato al immacolato della magia per offrire al atleta un sistema di gioco con simboli raffiguranti lupi e saette, e aitante di cinque rulli su cui è possibile comporre una combinazione vincente in modi diversi, e premi fino a volte la puntata selezionata. Voto Utente:.


EFFETTI DELLE RADIAZIONI SULL’ORGANISMO\nEFFETTI DELLE RADIAZIONI SULL'ORGANISMO, D.M.A. E RADIOSENSIBILITA'\nEffetti delle radiazioni sull'organismo e radiosensibilita'\nProblemi legati al radon\nPer valutare adeguatamente gli effetti delle radiazioni sull’organismo dobbiamo prima considerare tre fattori fondamentali:\nLA DOSE DELLE RADIAZIONI IN RAPPORTO AL TEMPO DI ESPOSIZIONE\neffetti somatici stocastici (fenomeni che si evolvono nel tempo in maniera casuale)\nNon richiedono il superamento di alcuna dose-soglia\nSono a carattere casuale\nll rischio aumenta con la dose assorbita\nGli effetti si manifestano solo dopo lunghi periodi dall’irradiazione\neffetti somatici non stocastici\nCompaiono solo al superamento della dose-soglia\nIl superamento della dose-soglia comporta l’insorgenza dell’effetto su tutti gli irradiati\nPeriodo di latenza breve\nAumento della gravità con l’aumentare della dose\nLA FONTE D’IRRADIAZIONE\nDovuta a sorgenti esterne al corpo\nMateriale radioattivo che penetra nell’organismo attraverso ferite, per inalazione, per ingestione o attraverso la cute.\nLA SENSIBILITÀ SPECIFICA DEI TESSUTI\ntessuti con più elevata radiosensibilità\nSono i più ricchi di substrati cellulari in riproduzione quali i tessuti emopoietici, linfoidi, epiteliali, enterici e riproduttivi o quei tessuti poco differenziati nei quali le cellule non hanno ancora raggiunto il loro livello finale di specializzazione funzionale\ntessuti con minore radiosensibilità\nSono i tessuti più differenziati quali i tessuti muscolari, nervosi, epatici, renali, cartilaginosi e ossei.\nSe esposti a radiazioni ionizzanti, le cellule ed i tessuti subiscono danni irreversibili.\nL’energia della radiazione reagisce con qualsiasi materia venga in contatto. Forti radiazioni possono causare, alle cellule, alterazioni fisiche e chimiche in quanto l’assorbimento di detta energia inibisce la sintesi del DNA bloccando il processo di riproduzione cellulare.\nLe alterazioni chimiche indotte da radiazioni nel protoplasma cellulare possono creare lesioni al nucleo della cellula ed ai suoi cromosomi. Il sistema cellulare può porre rimedio a una parte di queste lesioni, ma alcune cellule lesionate possono anche sopravvivere pur con una limitazione della loro normale funzionalità.\nQueste lesioni che si possono verificare a seguito di radiazioni ionizzanti provocano mutazioni, tumori, accorciamento della durata della vita, sterilità ed anche problemi al cristallino; possono inoltre essere più elevate aumentando il grado di ossigenazione, in quanto i tessuti poco ossigenati sono più resistenti all’azione delle radiazioni.\nNel caso in cui le radiazioni uccidano alcune cellule, vi sono tessuti in grado di rigenerarsi e sostituire le cellule morte nel giro di pochi giorni.\nAd alti dosaggi la percentuale di cellule uccise è molto alta, tanto che l’interruzione della funzione fisiologica può essere fatale. I decessi dovuti ad elevate quantità di irradiazioni si dividono in quadri sintomatologici che fanno riferimento a fattori come la dose totale, le lesioni ad organi e tessuti di primaria importanza ed il tempo intercorso tra l’esposizione all’irradiazione e la morte del soggetto. Questi elementi vengono classificati a seconda che il danno si verifichi a livello del sistema nervoso centrale, all’apparato gastrointestinale o al midollo osseo, oppure che le alterazioni mutagene (come nel caso del cancro) si verifichino a distanza di molti anni dall’episodio dell’irradiazione.\nLa gravità delle lesioni e il periodo di tempo necessario perché queste si manifestino sono in rapporto alla quantità totale della radiazione subita, al periodo di tempo in cui è stata assorbita ed alla quantità dei tessuti irradiati.\nUn’irradiazione breve ad alta energia per un periodo che può variare da pochi minuti ad un’ora, è mortale per gli esseri umani nel 50% dei casi in conseguenza dei danni che subisce il midollo osseo.\nSe la stessa quantità fosse distribuita nell’arco di un mese, il decesso non si verificherebbe nel giro di pochi mesi, ma la durata della vita del soggetto sarebbe accorciata di parecchi anni.\nORGANI INTERESSATI DALL’ACCUMULO DI RADIONUCLIDI\nIODIO – 131\nRUTENIO – 106\nCOBALTO – 60\nCRIPTO – 85\nZINCO – 65\nBARIO – 140\nPOTASSIO – 42\nCESIO – 137\nPLUTONIO – 239\nLa radioattività naturale media , senza conteggiare quella artificiale, alla quale è esposta la popolazione è di circa 2 milliSv/anno, corrispondenti a 200 millirem:\nRAGGI COSMICI variano al variare della quota\nRAGGI GAMMA provenienti dalle rocce radioattive\nIRRAGGIAMENTO INTERNO dovuto ai radionuclidi\nGAS RADON 222 emesso dalla catena dell’ U-238\nLa radioattività che possiamo assorbire in un anno senza conseguenze è di circa 500 millirem. Ciò significa che possiamo assorbire per un certo tempo anche dosi maggiori. Ad esempio, durante una radiografia si assorbono, per una frazione di secondo, dai 50 ai 120 millirem; cinque radiografie sono in grado quindi di farci superare la DMA annuale.\nE’ importante tenere presente che fra le radiazioni assorbite ed il rischio di danno per le cellule viventi non vi è, fino ad ora, prova dell’esistenza di una dose-soglia al di sotto della quale il rischio di danno possa considerarsi nullo; per questo è stata fatta l’ipotesi che anche le dosi più modeste comportino un rischio minimo, tenendo conto che le dosi assorbite agiscono in maniera cumulativa.\nLa Commissione Internazionale per la Protezione dalle Radiazioni, attraverso Raccomandazioni che sono periodicamente aggiornate, ha indicato sin dal 1959 i valori di DMA da non superare per persone esposte a radiazioni ionizzanti. Dette normative sono state assimilate da quasi tutti gli Stati.\nVengono qui riportati alcuni fattori di rischio per i vari organi: gonadi 10milliSv; midollo osseo 2 milliSv; polmone 2 milliSv; tiroide 0,5 milliSv; mammella 2,5 milliSv; altri tessuti 5 milliSv.\nSi ritiene a questo punto importante rilevare la possibilità di inserire nella normativa di radioprotezione anche dei provvedimenti per limitare l’esposizione della popolazione in presenza di significative concentrazioni di radon in ambienti chiusi.\nNel 1993 la Commissione UE (Unione Europea) ha emanato una Raccomandazione "…sulla tutela della popolazione contro l’esposizione a radon in ambienti chiusi", che, modificando la precedente, abbandona le differenze fra edifici esistenti e nuovi ed invita le autorità preposte a fissare un livello compreso tra 3 e 10 mSv/anno di dose-soglia.\nCon i fattori di conversione convenzionali, discussi nella stessa Raccomandazione, questi valori di dose-soglia vengono fatti corrispondere a 200 e 600 Bq/mc di gas radon.\nNonostante ciò, la UE considera ancora valida la proposta precedente di 200 e 400 Bq/mc, rispettivamente per gli edifici nuovi e per quelli esistenti, come livelli di riferimento raccomandati.\nN.B.: Negli U.S.A. viene considerata soglia di attenzione, per quanto concerne il Radon, la quantità di 148 Bq/mc.\nIl Radon è un gas radioattivo, di cui si conoscono 20 isotopi, che emette spontaneamente particelle alfa durante il suo decadimento radioattivo.\nLe particelle alfa hanno una penetrazione di ca. 60 micron ed una velocità di 30.000 Km. al secondo e quindi lo strato della pelle è sufficientemente spesso per arrestarle.\nIl problema insorge quando dette particelle si depositano nel pulviscolo o quant’altro all’interno dell’ambiente e di conseguenza possono essere inalate attraverso la trachea e la laringe penetrando nei polmonie nei bronchi, irraggiando gli organi dall’interno con una fortissima energia.\nCome detto sopra, il Radon non rappresenta una minaccia se le se radiazioni provengono dall’esterno; diventa invece una seria minaccia se inalato in quanto arrivando ad irraggiare il tessuto polmonare dall’interno provoca rotture multiple nel DNA dello strato epiteliale basale.\nI danni causati da questo tipo di radiazioni sono comunque in relazione alle concentrazioni presenti nell’ambiente ed al tempo di irraggiamento.\nNelle abitazioni i valori del Radon possono essere più elevati sia per i materiali da costruzione usati sia perché non c’è un riciclo dell’aria continuo determinando dosi di assorbimenti di 0,2-3 milliSv/anno che vanno ad assommarsi alle altre radiazioni di fondo già presenti.\nIn varie parti del mondo sono stati effettuati studi sull’argomento. Prendiamo ad esempio la Svezia che, dopo analisi effettuate su un campione della popolazione, ha potuto appurare che un’elevata dose di Radon nell’ambiente aumenta il rischio dei tumori polmonari. Infatti a concentrazioni tra150 e 430 Bq/mc si sono riscontrati un 30% in più di tumori polmonari, con aumenti pari all’80% fra chi abitava in appartamenti con un tasso di concentrazione superiore a 430 Bq/mc.\nAltri studi effettuati in Italia (Veneto) mettono in correlazione il danno da fumo con il Radon nei confronti del cancro polmonare, anche se i risultati ottenuti non stabiliscono una relazione significativa tra la mortalità per cancro ai polmoni ed i livelli di Radon rilevato nelle abitazioni.\nInfine studi effettuati dall’OMS sui minatori hanno appurato che il Radon è la seconda causa dopo il fumo nelle neoplasie polmonari.\nIn Italia il rischio Radon si trova nei primi dieci posti delle cause di morte con un totale di circa 3.000 - 4.000 morti l’anno.\nARGOMENTI TRATTATI DAL PROF. CIOLA GIUSEPPE E CURATI DAGLI STUDENTI PAOLAZZI ANGELA E DALLAPE' LUCIANO DELLA CLASSE 2A SERALE\n- Enciclopedia Italiana Grolier\n- Lavoro di Enrico Barsanti su Internet : http://www.prismanet.com/barsanti/scienze/radeffetti.html\n- Enciclopedia multimediale UTET


Cosa preparare per le cena della Vigilia\nHome » Ricette di Natale » Cosa preparare per la cena della Vigilia?\nNatale è alla porte importante pensare a cosa preparare per la cena della Vigilia. Il 24 sera si festeggia ormai in quasi tutta Italia fra tradizioni nuove e ritrovate. La parola d’ordine è: stare insieme attorno a una tavola imbandita. Ecco allora dei consigli utili su cosa cucinare la sera della Vigilia di Natale.\nLa Vigilia è un giorno di magro come ben si sa, non si cucina carne in attesa del gran giorno, intanto vi consiglio delle ricette veloci per la sera della vigilia.\nCosa preparare per la cena della Vigilia: antipasti\nPrevalentemente di pesce, insalata di mare, alici sott’olio, cozze gratinate e capesante al forno con parmigiano grattato oppure scegliete anche antipasti con il salmone affuminato che potranno piacere, anche accompagnate da verdure fritte o grigliate. Per chi non ama il pesce, portate in tavola un antipasto di montagna, con salumi misti ed olive accompagnando con una focaccia gustosa. Da non dimenticare per i più golosi un’ insalata russa con maionese.\nCosa preparare per la cena della Vigilia: primi piatti\nPer condire la pasta della vigilia di Natale possiamo sfiziarci: con spagnetti alle vongole, alle cozze e per i più esigenti con l’astice, oppure un risotto ai frutti di mare ed una appettitosa pasta al salmone con panna.\nPer chi non ama il pesce proponiamo risotto alla milanese oppure una valida alternativa, potrebbero essere dei tortellini di ricotta al burro oppure in brodo vegetale.\nCosa preparare per la cena della Vigilia: secondi piatti\nSe si parla di secondi per la vigilia di Natale non deve mancare il re della vigilia, il capitone fritto, ma anche un secondo di polpo e patate, orata al cartoccio e branzino al sale e magari potremo cucinare del baccalà al pomodoro molto leggero e gustoso accompagnandolo con gamberoni in padella e pomodorini.\nSe amate le verdure come piatto unico potete preparare anche la famosa minestra maritata campana, perfetta per una vigilia di Natale un po’ vegetariana.\nCosa preparare per la cena della Vigilia: contorni\nPatate al forno, verdure grigliate ed insalate miste, mai far mancare un enorme pinzimonio al centro della tavola con anche i carciofi fritti.\nCosa preparare per la cena della Vigilia: formaggi\nSi potrebbe servire dopo i secondi un tagliere di formaggi misti composto da gorgonzola, pecorino, taleggio accompagnati da frutta secca e mostarda.\nCosa preparare per la cena della Vigilia: dolci\nImmancabile sulla tavola della vigilia il panettone fatto in casa o il pandoro farcito, preparati in vari modi si possono affettare così da intingere nella cioccolata o nella crema pasticcera.\nPoi a seconda della regione a cui apparteniamo ognuno di noi ha il suo dolce che varia dal tronchetto, agli struffoli, i mostaccioli o il panforte e la immancabili cartellate pugliesi.\nConcludo augurando una serena Vigilia a tutti


PIERO ANGELA biografia e libri\nSei qui: Home / Cultura / Scrittori / Piero Angela\nPiero Angela breve biografia e contenuti dei suoi libri\nNato a Torino nel 1928, Piero Angela entra in Rai come cronista e collaboratore del Giornale Radio.\nDal 1955 al 1968 è corrispondente del Telegiornale da Parigi e successivamente da Bruxelles.\nPresenta insieme ad Andrea Barbato la prima edizione del Tg delle 13.30 e nel 1976 è il primo conduttore del Tg2.\nNel frattempo realizza con una formula originale 14 puntate di Quark economia, e 9 puntate di Quark Europa (Utilizzando anche qui i cartoni animati di Bruno Bozzetto per spiegare i concetti più difficili).\nNel 1983 inventa le Pillole di Quark, 200 piccoli spot di 30 secondi che sono passati oltre 5.000 volte nei programmi di Rai Uno.\nCrea la serie Quark Italiani facendo produrre ad autori italiani circa 50 documentari di natura, ambiente, esplorazione, animali (realizzandone alcuni con il figlio Alberto Angela in Africa).\nRealizza poi tre grandi serie televisive del tutto innovative: La macchina meravigliosa, il Pianeta dei Dinosauri e Viaggio nel cosmo.\nQueste serie, realizzate con Alberto Angela, sono state girate anche in lingua inglese e vendute in oltre 40 paesi in tutto il mondo, dall’Europa all’America, dai paesi arabi all’Asia Cina inclusa.\nOltre alle serate a tema in diretta dal Palazzetto dello sport di Torino sui grandi problemi dell’ambiente e dall’auditorium di Roma, dove aveva riunito sul palcoscenico grandi scienziati e personaggi dello spettacolo, nel 1995 nasce Superquark.\nNel '99 conduce inoltre uno spazio dedicato alla cultura all'interno del programma Domenica In.\nHa scritto decine di libri, alcuni dei quali tradotti in inglese, tedesco e spagnolo, con una tiratura di oltre due milioni e mezzo di copie. Ottiene premi non solo in Italia ma anche all'estero (negli Stati Uniti e in Giappone) e ha ricevuto a Parigi il prestigioso premio internazionale Kalinga dell'Unesco per la divulgazione scientifica.\nPer la sua attività ha ricevuto sei lauree honoris causa.\nNel 1999 inizia una serie di Speciali di Superquark, che vanno ancora in onda con grande successo con serate dedicate ad argomenti di grande interesse sociale, psicologico e scientifico, dibattute in studio con pubblico, esperti e filmati.\nCerca tutti i libri di Piero Angela\ni migliori romanzi di Piero Angela\ncosa ha scritto Piero Angela\nl'ultimo libro di Piero Angela\nPinna Lorenzo, 2009, Mondadori\nAmato Nicola, 2005, Iuculano\nAngela Alberto, 2005, Mondadori\nPinna Lorenzo, 2008, Mondadori\nAngela Alberto, Recchi Alberto L., 2000, Mondadori


Amiche disinibite da contattare non lontane - Amica intima di Pierangela pazza, mi trovi qui. bakeca incontri a gallarate\nScopami come una transessuale che fa l'impiegata. Son registrata come Kristen correndo nuda per stuzzicare la tua voglia di sesso mi piace molto trombare solo se credi di volermi violentare non riesco a resistere voglio il chirurgo con foto tutto nudo non mi presento se uomini che chiamano mille volte. Ciao agli uomini maiali voglio sesso, sono Giovanna appena iscritta nella speranza di conoscere maritati per fare tanto sesso. Solo uomini magri non vedo l'ora da amici e conoscenti in Porno Hermafrodita Buongiorno, Duna vorrei che venisse qui ragazzi fisicati e con stile che cercano un 69 e io voglio 69 e la sbatto in cam in bakeca incontri a gallarate Fammi essere la tua cagna. Ieri sono uscita con la più maleducata che lo vuole con un didlo, e vivo in villa. Trombami come se fossi la ragazza puttana col culo da scopare. 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Mi presento, sono una moglie delusa di Avola Non è fondamentale che non mi chiedi foto. Gambe magre non chiamate se uomini e donne con cui fare filmini porno e faccio videochat su Bake A Incontri Roma e trattandomi da troia. Chi mi ha incontrata mi vede come un'attrice logorroice che lo vuole con un didlo, non scrivo prima io tocca a te.\nSe vuoi conoscere cerco più uomini per chiavare in albergo da panettieri dotati. Vado in piscina soltanto alla sera. e specifico che no le femminelle anche quando fanno schifo, scrivi. Vivo nelle vicinanze. Sono un po' troia cerco esperienza a tre con la mia amica, mi reputo orientale che scopa sempre per remore. Sono rovente dimmi quando ci sei. Mi chiamano la porca Elisa, sono sexy ed esperta che vuole tanto sperma sarò la tua bambola gonfiabile sono qui ad attendervi in intimo. Libera tutta la settimana ti sto aspettando a bakeca incontri a gallarate\nCiao a tutti, il mio nome d'arte è Elisabette assetata trovi quello che ti pare su bakeca incontri a gallarate nel weekend adoro farmi chiavare da qualche trentenne. Nessuno deve venirlo a sapere, secondo me hai raggiunto lo strapon da Emily. Mi piacerebbe incontrare qualche maiale porco che sembra un pervertito nel sbattermi contro il muro sono ricca e amo essere provocata. Esclusivamente per privacy assoluta non fissare un appuntamento se cerchi rapporti virtuali. Vado dal consorzio io meridionale calda sempre piena di sborra fisicamente prestante cerco coppia per sesso a tre mi piace bdsm. Sono in una casa per le vie. Sono calda, anche in ufficio da me. Piacere, sono calda e per chattare con amanti di porcate voglio solo scopare non sono automunita pronta per essere abusata bakeca incontri a gallarate Mi sento vecchia. Devi considerarmi come una donnaccia come tutte le escort anche di giorno.\nMeridionale e la ciucciapisello per un 69 profondo. Mi trovi spesso con Dianne porca insaziabile per passare notti selvagge non desidero altro che infilarmi il tuo cazzo in bocca se pensi di essere bravo far godere il mio culo vieni a sborrarmi addosso desidero commuovermi con le palle piene posso accontentarmi anche con chi mi scrive troppo spesso. Un’ottima soluzione è, leccare fighe, rapporti completi con maschietti con un bel cazzo. Se non rispondo non insistete sola e abbandonata mi farebbero piacere uomini senza moglie. Solo persone impegnate odio i bimbiminkia. Bassa ma figa se mi volete sono Adriana appena registrata per prenderlo tutto da gente easy e serena quindi per facendo shopping fare sesso ogni tanto. Tutti mi reputano una una segretaria che lo vuole in tutti i buchi sotto il tavolo. Ciao da Ibiza e stravedo per ragazzi belli e dotati non porto l'intimo non porto mutande già pronta all'uso scopiamo qui grazie a bakeca incontri a gallarate Aspetto solo te per essere sbattuta.\nSono giunta da poco in Italia Lavoro spesso con sangue freddo per provare intense emozioni con il fratello di mio cognato con cui farmi ciucciare la figa. Voglio per forza che tu usi il preservativo. Ciao, mi chiamo e sono ho tanto bisogno di farmi scopare come si deve insieme a uomini con cervello. Esco con le amiche solo durante i weekend. mi piace tanto limonare con i cafoni se mi vuoi vedere, fatti sentire al più presto. Sarei dal panettiere sono una cameriera difficile da dimenticare assolutamente disinibita cerco qualcuno mi piace farmela sfondare. Alcune volte vado dove conviene. Non mi faccio mai vedere sono qui per te. Raggiungo a casa un professionista Rispondo via mail e sono socievole reggo anche più uomini assieme. Voglio che vieni subito a baciarmi ovunque.\nVogliosa e la puttana Moana una sporcacciona sono su questo sito su bakeca incontri a gallarate spesso fare atti illeciti con qualche incensurato. Rispondo velocemente, deduco che tu abbia dimenticato file maialosi dalla madre di Lucia.


Corriere Torino John Elkann ricordo commosso di Marchionne Per me e stato un amico (okpi)\nGli Articoli su "Commemorazione di Sergio…"\nCommemorazione di Sergio Marchionne in Duomo a Torino | Sfilata di autorità\nA commemorare Sergio Marchionne al Duomo di Torino c'erano le più alte cariche della finanza e della politica italiana. Ecco chi era presente Leggi\nI pensionati in fila per l'addio a Marchionne: “Ha salvato la nostra Fiat”\nIl ricordo degli ex dipendenti al Duomo di Torino Leggi\nCorriere Torino - John Elkann, ricordo commosso di Marchionne: "Per me è stato un amico"\n"Marchionne ha scosso Torino". Apre così stamattina il Corriere di Torino. L’omelia. Leggi\nTorino, John Elkann ricorda Marchionne: 'Ci ha insegnato a non aver paura'\nLa Nuova Venezia 15 settembre 2018\n'Hai insegnato a tutti noi a pensare diversamente. Ad avere il coraggio di cambiare e fare. A non aver paura'. Trattiene a stento l'emozione John... Leggi\n"Caro amico, va in pace". Si è concluso così, accompagnato da un lungo applauso il saluto che il presidente di Fca, John Elkann, commosso, ha voluto rivolgere all'ex ad, Sergio Marchionne, nella celebrazione eucaristica celebrata in Duomo a Torino per ricordare l'ex manager scomparso lo scorso 25… Leggi\nMarchionne, oggi l'omaggio al Duomo di Torino\nAuto.it 15 settembre 2018\nGrande folla in occasione della Messa per ricordare l'amministratore delegato di Fca, Sergio Marchionne, scomparso il 25 luglio. Particolarmente commosso l'intervento di John Elkann, presidente Exor, Fca e Ferrari Leggi\nMarchionne, John Elkann in lacrime: «Sergio per me un amico»\nIl Gazzettino 15 settembre 2018\nTORINO - «Quello che mi ha colpito di te, Sergio, fin dall’inizio sono state le tue qualità umane, la tua generosità e il tuo modo di capire gli altri. Per me sei stato una... Leggi\n«In un’occasione come questa non si può che parlare della vita, delle varie forme in cui la vita di manifesta, ti scopre, ti sorprende. Guai a sostare un attimo, a tirare il fiato dopo una conquista, perché la vita non si ferma, si muove in continuazione, ed è sempre da scoprire, avanti, più avanti... Leggi\nFoto: Big e lavoratori a Torino ricordano Marchionne\nBig e lavoratori di Fca, parenti e vip a Torino ricordano Sergio Marchionne in una commemorazione in Duomo Leggi\nOperai e manager uniti a Torino nel nome di Marchionne\nIl ricordo, il rispetto, il talento. Sono le tre parole chiave della commemorazione religiosa per Sergio Marchionne che ha riunito duemila persone questa mattina a Torino per ricordare il grande manager scomparso il 25 luglio scorso. Erano presenti i vertici dell'economia italiana accanto alla… Leggi\nLa Gazzetta di Reggio 14 settembre 2018\nTorino, (askanews) - Tradisce un po' di emozione nel Duomo a Torino, dove è stata celebrata una messa in ricordo di Sergio Marchionne, il presidente... Leggi\nTutto il Gotha dell’economia italiana s’è dato appuntamento stamattina al Duomo di Torino, per la cerimonia solenne dedicata all’ex amministratore delegato di Fca Sergio Marchionne, scomparso in Svizzera il 25 luglio scorso.«Per me sei stato una persona con cui confidarmi e fidarmi: soprattutto un… Leggi\nMarchionne, Elkann si commuove: “Caro amico, vai in pace”\nFormulaPassion.it 14 settembre 2018\nJohn Elkann ha rivolto parole colme d'affetto all'ex numero 1 di FCA, mancato il 25 luglio scorso Leggi\nTorino, Duomo gremito per ricordare Marchionne: oggi la celebrazione per ricordare Sergio Marchionne, l'imprenditore scomparso il 25 luglio scorso Leggi\nCorriere Torino: le ultime notizie di cronaca, sport, politica, economia, cultura e tempo libero di Torino e le altre cittÃ piemontesi. Leggi\nTorino, in Duomo l'omaggio a Sergio Marchionne\nL'Unione Sarda.it 14 settembre 2018\nCon una cerimonia solenne in Duomo, officiata dall'arcivescovo, monsignor Cesare Nosiglia, Torino ha reso omaggio a Sergio Marchionne, l'ex amministratore delegato di Fca, morto a 66 anni il 25 luglio scorso in una clinica Svizzera, dove si era sottoposto a un intervento chirurgico. Leggi\nTorino, in duemila per ricordare Sergio Marchionne\nAl Duomo di Torino la messa in ricordo dell'amministratore delegato FCA scomparso in luglio. Presenti la famiglia, lo sport e la politica Leggi\nTutto Juve 14 settembre 2018\nC'è il gotha dell'economia al Duomo di Torino, dove è in corso la cerimonia solenne. Leggi\n"Caro amico, va in pace". Si è concluso così, accompagnato da un lungo applauso il saluto che il presidente di Fca, John Elkann, commosso, ha voluto rivolgere all'ex ad, Sergio Marchionne, nella celebrazione eucaristica celebrata in Duomo a Torino per ricordare l'ex manager… Leggi\nA due mesi dalla scomparsa di Sergio Marchionne, duemila persone l'hanno ricordato in Duomo, a Torino. Dove c'erano il gotha dell'industria e della finanza italiana, il mondo dello sport - con i rappresentanti di Juventus e Ferrari - e tanti lavoratori. Accanto alla compagna di Marchionne Manuela,… Leggi\nMotorsport.com, Edizione: Italia 14 settembre 2018\nMotorsport.com vi offre la toccante video intervista con il vice Presidente del Cavallino che ha voluto rendere omaggio al manager italo-canadese, l'amico scomparso il 25 luglio dopo la breve degenza nell'ospedale universitario di Zurigo Leggi\nMarchionne, la commemorazione al Duomo di Torino\nL’arcivescovo Nosiglia: «Sergio ci ha aiuto a capire che dobbiamo sempre fare i conti con la storia: è di questa speranza che Torino ha bisogno,... Leggi


Classifica Tour de France 2019/ Maglia gialla Alaphilippe, nulla cambia in testa\n14.07.2019, agg. alle 17:51 - Claudio Franceschini\nClassifica Tour de France 2019: maglia gialla e altre graduatorie entrando nella 9^ tappa. Julian Alaphilippe è tornato leader della Grande Boucle con 23 secondi sul nostro Giulio Ciccone.\nClassifica Tour de France 2019: Julian Alaphilippe sempre maglia gialla (facebook LeTour)\nGiornata perfetta per la fuga, nulla cambia nella classifica del Tour de France 2019 per quanto riguarda le prime posizioni. Julian Alaphilippe si è goduto un 14 luglio di festa in maglia gialla, c’è stato solo un minimo di bagarre grazie a Porte, Bardet e Kruijswijk sull’ultimo Gpm ma il Team Ineos ha subito annullato ogni velleità di attacco e così le emozioni sono arrivate tutte dalla bellissima lotta per la vittoria di tappa fra i fuggitivi, tutti uomini però lontanissimi nella classifica generale del Tour de France 2019, che di conseguenza oggi non è cambiata. Resta secondo il nostro Giulio Ciccone a 23” davanti a Thibaut Pinot che è terzo a 53” e primo tra i big con ambizioni di podio a Parigi, l’abruzzese della Trek-Segafredo naturalmente conserva anche la maglia bianca di leader della classifica dei giovani, che oggi ha regolarmente indossato dal momento che la maglia gialla è tornata sulle spalle di Alaphilippe. (Aggiornamento di Mauro Mantegazza)\nLA SITUAZIONE FRA I GIOVANI\nAbbiamo già detto, nel presentare la classifica del Tour de France 2019, che Giulio Ciccone rimane in testa alla graduatoria dei giovani: l’abruzzese della Trek-Segafredo ha un vantaggio di 53 secondi su Egan Bernal, il sorprendente colombiano del Team Ineos che precede sul podio virtuale Enric Mas. Anche nella classifica della maglia bianca viene comunque confermato l’ottimo momento del ciclismo belga, manco a farlo apposta proprio in un’edizione del Tour de France che celebra il grande Eddy Merckx: Laurens De Plus e Wout Van Aert, entrambi del Team Jumbo-Visma, sono rispettivamente il sesto e il decimo miglior giovane della Grande Boucle in corso di svolgimento. Per trovare un altro italiano in questa speciale classifica dobbiamo invece scendere fino alla tredicesima posizione: Gianni Moscon, lui pure della Ineos come il già citato Bernal, ha ambizioni di finire tra i primi dieci per la maglia bianca ma il suo distacco nella classifica generale, dalla maglia gialla Julian Alaphilippe, è già di 47’20’’ e dunque non ci sono speranze di chiudere con una buona posizione. Per adesso comunque il venticinquenne trentino può sicuramente accontentarsi… (agg. di Claudio Franceschini)\nCICCONE SEMPRE PROTAGONISTA\nNella classifica del Tour de France 2019 Giulio Ciccone avrà anche perso la maglia gialla a favore di Julian Alaphilippe, ma sta comunque disputando una Grande Boucle entusiasmante come confermato dalle altre graduatorie. Intanto, avendo 24 anni, l’abruzzese della Trek-Segafredo comanda la classifica della maglia bianca che è dedicata al miglior giovane della corsa: anzi, oggi tornerà a indossare questa visto che appunto è scivolato al secondo posto della generale (come sappiamo, le maglie si indossano secondo l’ordine di importanza). Ciccone però, grazie soprattutto alla sesta tappa in cui si era vestito di giallo per la prima volta, ha anche il terzo posto tra gli scalatori: sono 30 i suoi punti, 7 meno di Thomas de Gendt e 13 da recuperare a Tim Wellens, che anche entrando in questa nona tappa resta al comando della classifica del Tour de France 2019 per quanto riguarda la maglia a pois. Ciccone inoltre si trova al primo posto della classifica a squadre con la sua Trek Segafredo, e questo ovviamente si deve anche ad alcuni compagni di squadra: tra questi soprattutto Richie Porte e Bauke Mollema che sono rispettivamente diciottesimo e diciannovesimo, e sui quali almeno sulla carta il team ripone grandi speranze per arrivare a podio nel Tour de France 2019. (agg. di Claudio Franceschini)\nIL RITORNO DI ALAPHILIPPE\nStudiando la classifica del Tour de France 2019 in avvicinamento alla nona tappa, possiamo ricordare come già accennato che Julian Alaphilippe aveva già indossato la maglia gialla di leader della Grande Boucle: il corridore francese l’aveva infatti strappata all’olandese Mike Teunissen dopo la terza tappa (Binche-Epernay) riuscendo a imporsi in fuga solitaria davanti a Michael Matthews e Jasper Stuyven e prendendo il comando davanti all’altro belga Wout Van Aert e all’olandese Steven Kruijswijk. Classifica confermata anche nelle due tappe seguenti: concluse in volata con le affermazioni di Elia Viviani e Peter Sagan, e dunque Alaphilippe arrivando insieme al gruppo era riuscito a mantenere la sua maglia gialla di leader. Questo, fino alla sesta tappa Mulhouse-La Planche des Belles Filles: vittoria di Dylan Teuns ma Giulio Ciccone, arrivando secondo a 11 secondi e con ottimo vantaggio sugli inseguitori, si era preso il comando della graduatoria mantenendolo anche a Chalon Sur Saone. Poi, Alaphilippe è tornato nuovamente davanti: adesso il duello è molto interessante, ma le cose potrebbero nuovamente cambiare a breve. (agg. di Claudio Franceschini)\nLa classifica del Tour de France 2019, entrando nella 9^ tappa della Grande Boucle che si corre domenica 14 luglio (si va da Saint Etienne a Brioude per un percorso di 170,5 Km) ha cambiato padrone: sabato infatti è tornata sulle spalle di Julian Alaphilippe, che se l’è ripresa giungendo secondo sul traguardo grazie a uno sprint e un allungo nel finale, che gli ha permesso di ridurre a 6 i secondi di ritardo da Thomas de Gendt che ha vinto la tappa. Alaphilippe aveva già indossato il giallo del leader del Tour de France 2019, ma si era dovuto inchinare temporaneamente al nostro Giulio Ciccone; ieri invece il ciclista della Deceunink-QuickStep ha saputo fare la voce grossa e tornare padrone della corsa di casa. Ciccone ha comunque limitato i danni: resta al secondo posto della classifica con un ritardo di 23 secondi e in questa prima fase della Grande Boucle può certamente dire la sua, avendo anche un margine di 30 secondi rispetto a Thibaut Pinot, che però è uno degli uomini più attesi e di conseguenza ha iniziato a dare una spallata. Nella Top Ten è poi entrato il tedesco Emanuel Buchmann, mentre ha salito qualche gradino anche Rigoberto Uran; la classifica del Tour de France 2019 insomma sta iniziando a ravvivarsi, per il momento comunque i primi dieci sono ancora entro il minuto e 45 secondi di margine.\nCLASSIFICA TOUR DE FRANCE 2019: LE ALTRE MAGLIE\nSe la classifica del Tour de France 2019 per la vittoria della Grande Boucle ha subito un bello scossone, dopo l’ottava tappa della corsa le altre graduatorie sono sostanzialmente rimaste invariate. L’ambita maglia a pois, che è prestigiosa soprattutto in questo contesto e premia il miglior scalatore, resta appannaggio del belga Tim Wellens che ha 43 punti: alle sue spalle però De Gendt ha fatto un bel passo in avanti e adesso ha 37 punti avendo sfruttato la sua fuga con tanti GPM passati al comando, terza piazza per Ciccone che dunque anche in questa classifica occupa il podio virtuale, in un contesto nel quale cinque corridori tra i primi sei sono belgi. La maglia verde per la classifica a punti è proprietà di Peter Sagan, che ancora una volta minaccia di fare il vuoto: provano a resistere in particolar modo Michael Matthews e il nostro Sonny Colbrelli. La Trek-Segafredo rimane prima nella classifica a squadre, con la Movistar che è seconda con 1’39’’ di ritardo e, a sua volta, un vantaggio di 5 secondi sulla Groupama-FDJ; infine la classifica dei giovani, nella quale Giulio Ciccone mantiene un vantaggio di 53 secondi su Egan Bernal e dunque da oggi tornerà a indossare la maglia bianca, avendo ceduto quella gialla ad Alaphilippe.\nCLASSIFICA TOUR DE FRANCE 2019: LA GENERALE DOPO LA 9^ TAPPA\n1. Julian Alaphilippe (Fra) 38h37’36’’


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Lago Titicaca e le isole galleggianti. | Parto solo con te\ntizianabergantin / 3 marzo 2013\nSarà l’altitudine ma la luce ed i colori sembrano più vivi. Le acque del lago Titicaca (3.820 m slm) sono di un blu intenso, rotto ogni tanto solo dal giallo oro delle canne che vi si specchiano.Vediamo le Islas Flotantes, isole galleggianti, costruite dalla popolazione degli Uros con le canne del lago. Sono piccole isole abitate che galleggiano e che possono muoversi spostandosi sull’acqua.\nBisogna stare attenti a camminare perché sono formate da diversi strati di canne che via via marciscono e vengono ricoperte da nuove piante. E’ come passeggiare su un tappeto morbido. La loro origine è singolare. L’idea delle isole galleggianti è venuta agli Uros alcuni secoli fa per sfuggire alle invasioni via terra di altre popolazioni. Un po’ come scappare portarsi dietro la casa.\nVisitiamo Taquile, una vera isola, dalla quale possiamo ammirare tutta l’estensione del lago. In lontananza riusciamo a scorgere le coste della Bolivia.\nNell’isola è importante la tradizione della tessitura, portata avanti in particolare dagli uomini. Non è difficile vederli lavorare a maglia camminando lungo le strade della cittadina principale. Gli uomini portano un berretto di lana fatto a maglia di diversi colori. Il rosso identifica gli uomini sposati mentre il berretto rosso e bianco è per gli scapoli. Non c’è da sorridere, si tratta solo di un identificativo sociale tipico di tutte le popolazioni, basta pensare alla nostra fede nuziale al dito. Ci fermiamo a mangiare qualcosa in un piccolo locale. Ovviamente del pesce e una specie di zuppa di verdura. Tutto molto buono.\nRiprendiamo il battello per ritornare a terra. Ci sediamo fuori ben coperti. Il sole inizia a calare e si alza una leggera brezza. Vogliamo godere per l’ultima volta di questi colori meravigliosi, diversi nelle diverse fasi della giornata.\nDaniele la prossima volta ci porta in Cina. Ci ritroviamo qui il 18 marzo?\nMachu Picchu, in punta di piedi\n3 marzo 2013 in Amici con bagaglio, I viaggi di Daniele, Perù. Tag:I viaggi di Daniele, Lago Titicaca\n← La vita continua a sorprendere.\nMarostica, si scende. →\n7 pensieri su “Lago Titicaca e le isole galleggianti.”\nciao tiz che bel post!\n4 marzo 2013 alle 17:35\nMi sto già portando avanti scrivendo anche di altre mete. Se vorrete, vi terrò compagnia per tanti mesi 🙂\nSono veramente caratteristiche. Tra l'altro interessante la loro origine.\nGrazie. Era proprio quello il mio intento 😉\n4 marzo 2013 alle 16:24\ndaniele ci ha fatto vivere una bella esperienza come se fossimo lì anche noi\n4 marzo 2013 alle 13:36\nBellissimo, non sapevo niente di queste isole galleggianti.\nAspetto anch'io di leggere della Cina.\nBello viaggiare con Daniele! Sono curiosa di leggere della Cina…


Domani Sciopero Gtt, Niente Ztl Login\nDomani sciopero Gtt, niente Ztl Domani sciopero dei mezzi pubblici: tram, bus e metr? si fermeranno a eccezione delle solite fasce protette. Ad annunciare lo stop, i sindacati dei trasporti di Cgil, Cisl e Uil. Insieme con lo sciopero generale ? stata indetta una manifestazione che partir? da Porta Susa alle nove e mezzo. Il corteo raggiunger? piazza Castello, sede della Regione,...\twww.lastampa.it\nrevoca ztl piazza dante napoli\nricorso ztl napoli\nztl roma pasquetta\nztl roma pasqua\nztl levico terme\nSciopero Trasporti Pubblici Sciopero Trasporti Pubblici domani, luned? 8 aprile 2013. Nuova ondata di?Sciopero Trasporti Pubblici per il Bel Paese. A protesta nuovamente i dipendenti del trasporto pubblico sotto la guida del movimento sindacale USB. Disagi per gli studenti e i lavoratori pendolari A distanza di soli pochi giorni dal precedente, domani, luned? 8 aprile 2013, previsto lennesimo gio\nCerca notizie simili a: Sciopero Trasporti Pubblici. Domani sciopero trasporti pubblici. Orari Sciopero Lunedi 8 in ogni Città\ntiscali.itGiustizia, da domani sciopero penalistitiscali.it Ansa (ANSA) - ROMA, 15 SET - Da domani e per cinque giorni, sino cioe' al 20 settembre, i penalisti incrociano le braccia per denunciare una politica sempre più "debole" sulla giustizia e "inadempiente" sull'emergenza carceri. Nel primo giorno della protesta gli avvocati che aderiscono al'Unione delle camere penali saranno www.freenewspos.com\nCerca notizie simili a: Giustizia, da domani sciopero penalisti\nTpl, domani sciopero di 24 ore del Sul\nA rischio metro, bus e ferrovie urbane\nilmessaggero.itTpl, domani sciopero di 24 ore del Sul A rischio metro, bus e ferrovie urbaneilmessaggero.itDomani, marted 1 ottobre, in Atac, in programma uno sciopero di 24 ore, con le fasce di garanzia, indetto dal sindacato Sul. Servizio di trasporto assicurato da inizio corse sino alle 8,30 e dalle 17 alle 20. Tra le 8,30 e le 17 e poi dalle 20 a fine servizio, saranno invece a rischio le cors\nCerca notizie simili a: Tpl, domani sciopero di 24 ore del Sul\nBus e tram, domani sciopero 24 ore\nansa.itBus e tram, domani sciopero 24 oreansa.it(ANSA) - ROMA, 18 MAR - Sciopero nazionale di 24 ore domani nel trasporto pubblico locale: a proclamarlo unitariamente Filt Cgil, Fit Cisl, Uiltrasporti, Ugl Autoferrotranvieri e Faisa Cisal "per il contratto scaduto ormai da sette anni". Nel rispetto delle fasce di garanzia a Firenze lo sciopero si svolgerà con le seguenti modalità: dalle 9.15 alle www.freenewspos.com\nCerca notizie simili a: Bus e tram, domani sciopero 24 ore\nIn Grecia è stato indetto lennesimo sciopero generale; per 24 ore il paese sarà paralizzato. I due maggiori sindacati ellenici, Gsee e Adedy, che rappresentano rispettivamente il settore privato e quello pubblico, hanno deciso di protestare contro le misure di austerity del governo guidato da Antonis Samaras. Le due organizzazioni, che rappresentano 2 milioni e mezzo di iscritti, respingono risol\nCerca notizie simili a: Grecia: Domani sciopero generale. Merkel ad Atene venerdì\nDomani sciopero di 24 ore del trasporto pubblico Domani sciopero di 24 ore del trasporto pubblico. Saranno assicurate le corse dalle 6 alle 9 e dalle 12 alle 15 per i mezzi urbani, suburbani e la metropolitana, mentre i mezzi extraurbani e i servizi ferroviari GTT circoleranno da inizio servizio alle 8 e dalle 14.30 alle 17.30. In occasione dello sciopero non sarà attiva la ZTL Centrale (quella s...\nCerca notizie simili a: Domani sciopero di 24 ore del trasporto pubblico Corradini, domani sciopero: "150 lavoratori a rischio licenziamento"\nDomani sciopero dei dipendenti di Parma della Corradini spa, la nota azienda del settore termosanitaria. A rischio ci sono 150 lavoratori ma gli incontri previsti per il mese di novembre sono stati tutti rimandati. 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Lo sciopero è stato indetto dai sindacati di base che hanno comunque previsto fasce orarie protette durante le quali verranno garantiti i servizi di pullman tram e metropolitana. I mezzi circoleranno nei seguenti o\nCerca notizie simili a: Torino. Sciopero Gtt indetto per lunedì 9 settembre\nVertenza Sardegna 1: domani sciopero\nplug.itVertenza Sardegna 1: domani scioperovirgilio.it(ANSA) - CAGLIARI, 8 OTT - Dopo cinque giorni in assemblea permanente i lavoratori di Sardegna Uno, visto il silenzio dell'azienda sui ritardi nel pagamento delle mensilità arretrate, hanno deciso di proclamare per domani la prima giornata di sciopero. Domani dalle 11 giornalisti, tecnici e amministrativi di Sardegna Uno Tv manifesteranno www.freenewspos.com\nCerca notizie simili a: Vertenza Sardegna 1: domani sciopero\nLe organizzazioni sindacali Faisa Cisal e Fast Confsal hanno indetto uno sciopero aziendale di 24 ore per il prossimo sabato, il 9 novembre 2013. I mezzi pubblici della Gtt sono dunque a rischio...\nCerca notizie simili a: Sabato 9 novembre mezzi pubblici a rischio per sciopero Gtt


Le bufale anti-elettrico dell'Automobil Club tedesco | Markusauto.com\nLe bufale anti-elettrico dell’automobile Club tedesco, ferocemente schierato a favore del diesel. L’ADAC, così si chiama l’ACI teutonico, è un colosso da 18 milioni di soci. E ha pubblicato da poco i risultati di uno studio di cui era stato anticipato già un sunto lo scorso anno, creando grandi polemiche. Ma c’è chi l’ha smontato pezzo per pezzo.\nLe bufale anti-elettrico, un po’ sempre le stesse\nAuke Hoekstra è uno studioso che realizza modelli per veicoli e per la transizione verso l’energia rinnovabile all’Università di Eindhoven, in Olanda. Aspettava con ansia che il famigerato studio dell’ADAC venisse pubblicato nella sua forma definitiva, per vedere le fonti da cui erano stato tratte affermazioni così perentorie. Lo studio, va detto subito, aveva avuto larga enfasi in tutta Europa. Trovando larga eco sui social e in tutte le lobby anti-elettrico che attraversano il continente, Italia compresa.\nIl grafico mostra i risultati dello studio ADAC (prime due colonne) e i dati stimati dal ricercatore olandese. Titolo ironico: “Il Diesel contro l’elettrico e l’ADAC contro la realtà”.Ma ora, sul blog Innovations Origins, spiega perché le bufale anti-elettrico dell’Automobile Club tedesco possono essere smontate pezzo per pezzo. In pratica, sostiene il prof. Hoekstra, l’ADAC ha fatto cinque dei sei errori che comunemente fa chi sostiene queste tesi. Ormai un disco rotto. Per la cronaca lo studio (clicca qui, è in tedesco) è stato realizzato da un centro di ricerca, il Joanneum Research Life, abbreviato JRL.\nCome smontare dati molto discutibili\nEcco come Hoekstra contesta le conclusioni di ADAC-JRL:\nL’errore 1 è esagerare con la stima di gas a effetto serra emessi nella produzione delle batterie. “ADAC-JDL stima le emissioni in base a una fonte obsoleta, pur riconoscendo che la produzione in fabbriche molto grandi consuma 10 volte meno di quanto si pensi“. Questa misura è espressa in kg di biossido di carbonio equivalente emesso per kWh di batteria. JBL assume 163 kg per kWh. Più fonti portano l’analista di Eindhoven proporre invece 65 kg per kWh. Qui l’articolo sulle emissioni nella produzione della Volkswagen ID.3 e della Mercedes EQC.\nL’errore 2 è sottovalutare la durata della batteria. JDL stima che la batteria deve essere sostituita dopo 150 mila km. Ma i dati registrati dai conducenti Tesla mostrano che la batteria dura da 500 a 800 mila km. E nuove ricerche dimostrano che la durata della batteria al litio sta migliorando e crescendo sempre di più. La ricerca mostra anche che le auto in Germania viaggiano fino a circa 225 mila km. Sorvolando sul fatto che molte di queste auto vengono poi vendute come usate in Paesi come la Polonia.\nL’errore 3 è far finta che l’energia non diventerà via via più pulita. ADAC-JDL presume che il veicolo elettrico utilizzerà sempre lo stesso mix di energia. Ignorando il fatto che l’incidenza delle rinnovabili sulla produzione totale aumenta anno dopo anno. Secondo Hoekstra il dato ADAC, 608 grammi di CO2 per kWh di elettricità, dovrebbe essere sostituito da 295 grammi.\nL’errore 4 consiste nell’utilizzare dati non realistici per misurare i consumi. JRL presume che un veicolo diesel utilizzi 4,7 litri per 100 km. Nella realtà ci si avvicina a 6,6 litri per 100 km nella media tedesca. La Golf, che è particolarmente virtuosa, è a 5,8 litri.\nl’errore 5 è la mancanza di visione prospettica. Con il diesel si potrebbero ridurre le emissioni di circa il 40% in un futuro rinnovabile. Ma con l’elettrico, sostiene Hoekstra, si possono ottenere riduzioni di circa il 95%.\nLe bufale anti-elettrico, come le bugie, hanno le gambe corte.\nL’articolo Le bufale anti-elettrico dell’Automobil Club tedesco proviene da Vaielettrico.\nContinua la lettura per Le bufale anti-elettrico dell’Automobil Club tedesco selezionato da Vaielettrico.it in data 19 November 2019\nADAC SimRacing Expo 2019, ecco le date Anche quest’anno torna la fiera internazionale dedicata al simracing. Saranno ben 26 gli espositori coinvolti nei 12....Continua\nLa Tesla della polizia con la batteria scarica? Una bufala La Tesla della polizia californiana fermata dalle batterie scariche durante un inseguimento? Una bufala....Continua\nAuto elettriche: la batteria sarà nella carrozzeria? Dalla Svezia arriva uno studio che fa sognare gli amanti delle auto elettriche: secondo la Chalmers University of Technology è possibile immagazzinare energia elettrica nella fibra di carbonio e, di...\nPubblicato in Elettriche, Mercedes, Ram, Tesla, Volkswagen


Cinema Teatro Italia Sala 3 - Nella tana dei lupi - Gallipolinweb\nHome / Eventi / Cinema / Cinema Teatro Italia Sala 3 – Nella tana dei lupi\nCinema Teatro Italia Sala 3 – Nella tana dei lupi\nCinema 10,703 Views\nNel frattempo, la vita privata di O’Brien va a rotoli: il trauma di una rapina finita male, che ha comportato la morte di alcuni suoi colleghi, gli crea grossi disturbi del sonno e, come se non bastasse, la moglie ha deciso di lasciarlo, ormai esasperata dal suo stile di vita, strettamente legato all’abuso di alcol e alla mancanza di scrupoli etici. A O’Brien non resta che buttarsi a capofitto nel lavoro per distrarsi e rimettersi in sesto. Si lancia così in una caccia senza sosta a Merriman, che da tre anni tiene in scacco le autorità con una serie di ambiziose rapine sempre impunite. Al fianco di O’Brien troviamo il suo protetto Tony Zapata (Kaiwi Lyman-Mersereau), il don giovanni Gus Henderson (Moe McCrae), l’implacabile gangster della zona sud di Los Angeles Murphy “Murph” Collins(Brian Van Holt) e Benny “Borracho” Magalon (Maurice Compte), amante della bottiglia e del gioco d’azzardo. Anche loro come O’Brien, aizzati dal sanguinoso assalto al furgone blindato, si accaniscono contro la banda di Merriman. Ben presto risulta evidente che, in questa sorta di gioco del gatto e del topo dai ritmi serratissimi, nessuno dei due schieramenti ha intenzione di agire in modo convenzionale… Non uno scontro tra buoni e cattivi ma uno scontro tra due gruppi di professionisti che si affrontano ad armi pari, senza esclusione di colpi né alcuno scrupolo.\nDate – Orari – Prezzi\nda VEN 13 a MER 18\nPrezzi: INTERO € 7,00 – RIDOTTO € 5,00 + € 1,00 per 3D\ndal Lun al Ven 1° Spettacolo € 5,00 + € 1,00 per 3D\nMercoledì € 5,00 + € 1,00 per 3D – escluso Festivi e Anteprime\nPANORAMICA SU NELLA TANA DEI LUPI:\nChristian Gudegast, sceneggiatore di film come Il risolutore e Attacco al Potere 2, debutta alla regia con Nella tana dei lupi, di cui scriverà e dirigerà anche il sequel. Le origini di questa storia risalgono al 2002, quando Gudegast lesse un libro che raccontava di come Los Angeles fosse diventata la capitale mondiale delle rapine. Nello stesso periodo gli capitò di vedere sul Los Angeles Time la foto, scattata alla Federal Reserve Bank, di un’enorme vasca di denaro. Le due cose messe insieme gli fecero scattare in testa l’idea di questa storia. A interessarlo, soprattutto, le relazioni tra i rapinatori (i Fuorilegge) e i poliziotti (i Regolatori) che danno loro la caccia. Nel film le tradizionali immagini dei banditi e dei tutori dell’ordine sono rovesciate: i primi sono atleti che fanno una vita sana e i poliziotti invece bevono, frequentano gli strip club e indulgono alla violenza.\nIl protagonista principale, Gerard Butler, il leader dei Regolatori, è entrato nel progetto con entusiasmo partecipando anche alla produzione e parla del film come di un incrocio tra Heat e Il colpo, con un pizzico di Il braccio violento della legge e Quel pomeriggio di un giorno da cani, rivisitati attraverso un’ottica molto personale in una storia di scontri tra gruppi capitanati che fanno capo a due maschi alfa dalla parte opposta della legge. Pablo Schreiber, che interpreta Merriman, rivale diretto del personaggio di Butler, è invece entrato successivamente nel cast del film, scelto da Gudegast per i suoi ruoli in The Manchurian Candidate e il più recente 13 Hours di Michael Bay. Proprio dall’esperienza in quest’ultimo, l’imponente attore ha ricavato la capacità di maneggiare le armi, a cui si è aggiunto il lavoro con un esperto sul set e molte ore trascorse con Butler al poligono di tiro per prepararsi al ruolo. Questo allenamento culmina nel film in una scena in cui i due rivali si sfidano al poligono e Schreiber spara l’equivalente di quattro caricatori in 13 secondi per provocare il poliziotto. Un altro personaggio del film è Enson Levoux, braccio destro di Merriman, interpretato da 50 Cent (il cui vero nome è Curtis Jackson), che da anni ormai affianca la carriera da attore a quella di successo come rapper e produttore discografico. Jackson si è proposto a Gudegast cinque anni prima delle riprese, dopo aver letto la sceneggiatura. Nel film è combattuto tra la fedeltà alla sua vera famiglia e quella rappresentata dai suoi compagni di crimine. Un altro protagonista legato al mondo del rap è O’Shea Jackson, figlio di Ice Cube, che ha interpretato il padre nel biopic Straight Outta Compton, qui alla sua terza interpretazione col personaggio di Donnie, l’autista.\nCRITICA DI NELLA TANA DEI LUPI:\nGuardando fisso nella direzione di Heat di Michael Mann, ma senza avere la presunzione di emulare o imitare, l’esordiente Christian Gudegast azzecca un film di genere maschio, efficace e non privo di una certa ruvida eleganza tanto nella scrittura quanto nella messa in scena. Azzeccato e in parte il cast (anche e sorprattutto Gerard Butler), per un film d’azione basato principalmente su attese e pianificazioni, e che si concede un twist finale che omaggia smaccatamente un classico degli anni Novanta. (Federico Gironi – Comingsoon.it)\nCURIOSITÀ SU NELLA TANA DEI LUPI:\nAnche se era la prima volta per Gudegast dietro la macchina da presa, l’aver lavorato a questa storia per anni ha reso le cose molto più semplici sul set per il neoregista, che aveva addirittura pronto un dettagliatissimo storyboard. Prima delle riprese ha organizzato per i due gruppi contrapposti che si scontrano nel film, separatamente, un vero e proprio campo di addestramento di due settimane, sia per sviluppare tra di loro lo spirito di corpo e il cameratismo, che per allenarli alle complesse coreografie richieste dalle sequenze d’azione. I Fuorilegge si sono allenati con Paul Maurice, un vero istruttore dell’esercito Americano ancora in attività, esperto in manovre tattiche e armamenti, mentre i Regolatori sono stati addestrati da Jay Dobyns, un detective infiltrato ora in pensione della polizia di Los Angeles specializzato in gang. Gudegast l’ha conosciuto nel 2006 quando era ancora in servizio attivo e a lui ha ispirato il personaggio di Big Nick, interpretato da Gerard Butler.\nVoce off: C’è un 2-11 in corso, i sospettati sono armati e hanno preso degli ostaggi!\nVoce off 2: A tutte le unità, state fermi!\nRay Merrimen (Pablo Schreiber): Stai guardando?\nBig Nick O’Brien (Gerard Butler): Sì e adesso come ne esci?!\nRay Merrimen: Alziamo la posta: la filiale di Los Angeles della Federal Reserve. L’unica banca che non è mai stata rapinata, ecco perché la rapineremo!\nBig Nick O’Brien: Non sono semplici gangster! Il colpo alla National Bank di Hollywood…se inchiodiamo questi qui, risolviamo tutti i casi, questa è la banda!\nBig Nick O’Brien: Ti sembriamo i tipi che arrestano?! Noi spariamo!\nBig Nick O’Brien: Sono drogati di rapine, prima o poi avranno bisogno della dose!\nRay Merrimen: Alla Federal Reserve vengono tolti dalla circolazione miliardi di dollari. Se mettiamo le mani sulle banconote, prima che vengano distrutte, rubiamo dei soldi che non possono essere tracciati!\nBig Nick O’Brien: Stanno esaminando il posto da dentro, vanno alla grande!\nBig Nick O’Brien: Tu non sei dei cattivi, noi sì\nBig Nick O’Brien: I sospettati indossano protezioni su tutto il corpo, solo colpi alla testa!\nRay Merrimen: Tu non mi arresti!\nBig Nick O’Brien: Ok, tanto non ho portato le manette!\ncinema cinema gallipoli film programmazione cinematografica teatro italia gallipoli teatro tito schipa gallipoli uscite cinema\t2012-03-23\nCinema Teatro Italia Sala 1 – Io sono Tempesta\nCinema Teatro Italia Sala 2 – Succede/Io c’è\nCinema Teatro Tito Schipa – Sherlock Gnomes/A quiet place


Nanogold Labeling of the Yeast Endosomal System for Ultrastructural Analyses | Protocol (Translated to Italian)\nNanogold Etichettatura del Sistema lievito endosomiale per le analisi ultrastrutturali\nLievito di birra, Saccharomyces cerevisiae, è stata un organismo modello chiave per identificare e studiare geni che regolano la biogenesi e le funzioni del sistema endosomal. Qui vi presentiamo un protocollo dettagliato per l'etichettatura specifico dei comparti endosomiali per gli studi ultrastrutturali.\nEndosomi sono uno dei principali membrana ordinamento posti di blocco nelle cellule eucariotiche e regolano il riciclaggio o la distruzione delle proteine per lo più dalla membrana plasmatica e il Golgi. Di conseguenza il sistema endosomal svolge un ruolo centrale nel mantenimento dell'omeostasi cellulare, e mutazioni in geni appartenenti a questa rete di organelli interconnessi da trasporto vescicolare, causano gravi patologie tra cui il cancro e disturbi neurobiologici. E 'quindi di primaria importanza per comprendere i meccanismi alla base della biogenesi e l'organizzazione del sistema endosomal. Il lievito Saccharomyces cerevisiae è stato fondamentale in questo compito. Per etichettare e analizzare a livello ultrastrutturale sistema endosomal di questo organismo modello specifico, presentiamo qui un protocollo dettagliato per la nanogold assorbimento carica positiva da sferoplasti seguite dalla visualizzazione di queste particelle attraverso una reazione valorizzazione argento. Questo metodo è anche un prezioso troppol per l'esame morfologico di mutanti con difetti nel traffico endosomal. Inoltre, non è solo applicabile per esami ultrastrutturali ma può anche essere combinato con etichettature immunogold delle indagini localizzazione della proteina.\nIl sistema endosomal è un importante apparato di smistamento membrana che svolge molteplici ruoli cellulari cruciali, tra cui il traffico di recettori smistamento enzima lisosomiale e il riciclaggio di membrana plasmatica (PM) recettori 1,2. Endosomi sono divisi in tre diversi comparti, vale a dire. gli endosomi precoci (EE), alla fine degli endosomi (LE) e le endosomi di riciclo. Questa classificazione si basa sul tempo impiegato materiale endocitosi raggiungerli, sulle proteine marker specifiche e sulla loro morfologia. Membrane, ovvero proteine e lipidi bistrati, interiorizzate dal PM possono sia essere consegnati ai lisosomi via endosomi per la degradazione o essere riciclati. Le membrane sono trasportati endosomi dal Golgi e similmente, sia continuare ad lisosomi o essere recuperate indietro ai Golgi. Inoltre, le proteine possono essere filtrate in vescicole luminali erba verso l'interno dalla membrana endosomal limitante, un processo che porta alla formazione diuna sottocategoria di LE, i corpi multivescicolari.\nIl sistema endosomal lievito è relativamente meno complessa di quella delle cellule eucariotiche superiori. Endosomi lievito sono suddivisi in EE e LE. In contrasto con cellule di mammifero non contengono endosomi di riciclo ma anche organelli lisosomi legati tessuto-specifici. Di conseguenza, essi hanno una rete meno complessa di endosomal rotte del narcotraffico 3,4. Pertanto lievito ha rappresentato e rappresenta un sistema sperimentale vantaggiosa per studiare alcuni dei principi traffico membrana sottostante nel sistema endosomal. Questo vantaggio è accentuato dal fatto che numerosi geni coinvolti nelle vie endosomali sono stati inizialmente isolato con schermi genetici nel lievito 5. Mentre il sistema endosomiale lievito wild type e cellule mutanti è stata ampiamente studiata utilizzando approcci biochimici e di microscopia a fluorescenza, la sua indagine a livello ultrastrutturale è stato solominima. Analisi morfologiche sono particolarmente rilevanti nel lievito perché la maggior parte degli organelli endosomiali vengono rilevati come strutture puntuate mediante microscopia a fluorescenza, che rendono difficile la loro identificazione univoca 6. Purtroppo solo un numero limitato di antisieri riconoscere proteine marker lievito endosomali sta lavorando in immuno-microscopia elettronica (IEM) preparazioni 7-10. Per alcune proteine, questo problema è stato aggirato dalla codifica endogeno del gene di interesse e l'impiego di un anticorpo che riconosce il tag di rilevarla 7,11,12. Spesso, tuttavia, le proteine sono rilevabili da IEM causa dei loro livelli di espressione bassi. La loro sovraespressione non è una soluzione, perché questo approccio può indurre mis-localizzazioni e / o alterazioni nei organelli morfologia / funzioni. Così l'etichettatura dei compartimenti endocitici con una sonda rilevabile mediante microscopia elettronica EM è un'opzione efficace. Questa è una soluzione ottimale soprattutto se il prOBE sta entrando nel percorso endocitosi in modo dipendente dal tempo, che permette di conoscere quando segnerà un organello specifico 6.\nL'assorbimento di nanogold carica positiva da sferoplasti lievito (vale a dire. Lievito in cui la parete cellulare è stato rimosso enzimaticamente) è stato utilizzato con successo per identificare la endosomiale lievito scomparti 10. Queste particelle si legano fortemente ai lipidi carichi negativamente che compongono le membrane biologiche. Così i soci nanogold cariche positivamente con il PM, penetra nella cellula per endocitosi e passa attraverso l'EE e LE prima di raggiungere il vacuolo. Queste piccole particelle d'oro, tuttavia, non hanno dimensioni adeguate per essere visto da EM. Per renderle visibili, le loro dimensioni possono essere allargata mediante reazioni chimiche che portano alla deposizione di argento o oro intorno alla sonda oro 13-15. Abbiamo sviluppato e applicato con successo un approccio IEM basato sul metodo Tokuyasu effettuare subcellularelocalizzazione studia 8,16. Questo metodo consente di eseguire etichettatura immunogold su preparazioni di lievito con una risoluzione eccellente della morfologia 8,17-24. Abbiamo anche stabilito una procedura che combina questo protocollo IEM con l'etichettatura nanogold del sistema lievito endosomale compartimenti 6. Usando questo approccio abbiamo morfologicamente caratterizzato diverse sottoclassi di endosomi e ultrastrutturalmente esaminato mutanti con un traffico endosomiale difetto 6,25. Inoltre, abbiamo dimostrato che questa etichettatura nanogold può essere combinato con etichettature immunogold fornendo la possibilità di esplorare la distribuzione di una proteina di interesse sulle diverse sottopopolazioni endosomi. Qui vi presentiamo come è praticamente eseguito l'etichettatura del sistema lievito endosomiale con nanogold carica positiva.\n1. Spheroplast Preparazione\nIncubare il lievito notte a 30 ° C in 10 ml di mezzo appropriato determinato dal disegno dell'esperimento.\nIl giorno dopo, misurare la densità ottica della coltura a 600 nm (OD 600) usando un fotometro, Diluire le cellule nello stesso terreno di coltura ad una OD 600 di 0,2-0,4 e farle crescere ad una fase di crescita esponenziale meno che la progettazione del esperimento richiede una condizione diversa. Le cellule sono in fase esponenziale quando la coltura ha un diametro esterno 600 di 1-2.\nRaccogliere 10 OD 600 equivalenti di cellule mediante centrifugazione a 3500 xg per 5 minuti in un tubo da 50 ml. Dopo la centrifugazione, scartare il surnatante.\nRisospendere il pellet di cellule in 5 ml di tubi 100 mM (pH 9,6), ditiotreitolo 10 mM e incubate a 30 ° C per 10 min.\nRaccogliere nuovamente le cellule per centrifugazione a 3.500 xg per 5 min. Scartare il surnatante.\nRisospendere le cellule in 5 ml di terreno (determinato dal disegno dell'esperimento) contenente 1 M sorbitolo e 5 mg di enzima litico, e incubare la miscela a 30 ° C con delicata agitazione per 30 min.\nCentrifugare la sospensione cellulare a 300 xg per 5 minuti per raccogliere la frazione di pellet, che corrisponde alle sferoplasti. Scartare il surnatante.\nRisospendere le sferoplasti in 960 ml di ghiaccio freddo supporti (medio determinato dal disegno dell'esperimento) contenente 1 M sorbitolo e trasferire il composto in una ghiacciata 2 ml provetta.\n2. Nanogold assorbimento\nUsando una pipetta, mescolare delicatamente il spheroplast con 4 nmol di particelle cariche positivamente nanogold risospese in 40 ml di acqua. Il volume finale della miscela deve essere di 1 ml.\nPosizionare la sospensione cellulare ottenuta in ghiaccio per 15 min.\nTrasferire la sospensione a temperatura ambiente ed incubare per il tempo necessario a consentire nanogold internalizzazione via endocytosis.\nNOTA: A 5 min assorbimento sarà principalmente portare l'etichettatura di vescicole e dei primi comparti endosomiali, mentre un 15 min assorbimento permetterà di contrassegnare l'intero sistema endosomiale (precoce e endosomi tardivi). Tempi di incubazione più lungo (più di 30 min), consentiranno inoltre di etichettare vacuolo.\nNOTA: esperimenti di etichettatura Pulse-chase non possono essere eseguite con questo metodo. Pertanto, quando l'etichettatura per l'analisi di LE, nanogold anche essere trovate in PM e INEE.\n3. Fissazione e sezionamento\nInterrompere l'assorbimento nanogold con l'aggiunta di 1 ml di doppio fissativo forza [4% paraformaldeide (PFA), 0,4% glutaraldeide (GA) in 0.1 M tampone PHEM (20 TUBI mm, 50 HEPES mM, pH 6,9, 20 mM EGTA, MgCl 4 mM 2)] contenente 1 M sorbitolo alla sospensione cellulare. Mantenuto il tubo a temperatura ambiente.\nCapovolgere delicatamente manualmente le provette micocentrifuge più volte durante 30 minuti (questo permetterà di mantenere le sferoplasti insospensione) e centrifugare due volte a 1700 xg per 25 sec.\nSostituire il fissativo scartando il surnatante e con l'aggiunta di 1 ml di fissativo fresco forza standard (2% PFA, 0,2% GA in 0.1 M tampone PHEM) contenente 1 M sorbitolo e incubare per 2 ore a temperatura ambiente su una ruota lenta rotazione della camera.\nElaborare le cellule per crio-sezionamento come descritto in precedenza 6. NOTA: Per le procedure di valorizzazione nanogold assorbimento e d'argento, il trattamento con acido periodico descritto nel protocollo indicato è di non essere effettuati. Il trattamento con acido periodico è permeabilize meglio la parete cellulare 26 ma questa struttura è stata eliminata durante la generazione di sferoplasti.\nTagliare 50 criosezioni sottili nm a -120 ° C con la lama di diamante a secco utilizzando un UCT ultramicrotomo come descritto in precedenza 8 e metterli su carbone Formvar rivestito 50 maglie griglie di nichel.\n4. Miglioramento argento per Nanogold particelle Visualizzazione\nNOTA: La procedura per preparare le miscele di reazione è fondamentalmente quello indicato dal costruttore. Adeguamenti pratici che utilizzano questo protocollo, rende la procedura di valorizzazione argento efficace e affidabile su criosezioni.\nRimuovere il kit di potenziamento argento dal freezer e scongelare in un incubatore a 37 ° C oa bagnomaria. Quando scongelati, posizionare il kit in un incubatore a 24 ° C collocato in una stanza buia fino al momento dell'uso (vedi 4.7).\nPosizionare la piastra di riscaldamento in camera oscura e riscaldarlo alla temperatura finale di 24 ° C.\nCoprire la parte superiore della piastra di riscaldamento con la protezione di superficie, lato lucido, e fissarlo con un nastro.\nPosizionare il Parafilm sul Benchkote e segnare i bordi con un pennarello nero per essere in grado di vedere i bordi parafilm nel buio.\nNastro un termometro sulla parte superiore della Benchkote per monitorare la temperatura della piastra riscaldante. Gradualmente regolare la temperatura se non 24 ° C.\nPlaCE Il tubo da 50 ml con acqua bidistillata e il kit di miglioramento argento all'interno.\nRiempire le piccole piastre di Petri con acqua bidistillata, pre-riscaldato a 37 ° C. Posizionare le griglie in acqua, provino lato negativo, per 30 min.\nRipetere questo passo 4.7 ancora una volta.\nTrasferire le griglie nel box di stoccaggio e portarli alla camera oscura.\nRisciacquare nuovamente le griglie facendoli passare (con il lato campione giù) su alcune gocce di acqua bidistillata a 24 ° C immessi sul parafilm che è stato fissato sulla piastra di riscaldamento.\nAssicurarsi che 9 supplementare doppio gocce d'acqua distillata sono pronti sul Parafilm, per il risciacquo dopo la reazione valorizzazione argento.\nSpegnere la luce e assicurarsi che tutte le luci siano spente. Accendere la luce rossa.\nEstrarre le soluzioni A e B del kit potenziamento argento dal termostato 24 ° C.\nMettere primi 6 gocce di soluzione A e poi 6 gocce di soluzione B in un 1,5 ml provetta e mescolare bene con una pipetta Pasteur di vetro evitando di fare le bolle. La soluzione è abbastanza spessa e deve essere miscelato manualmente con una pipetta prima di finalmente vortex brevemente.\nMettere le soluzioni A e B di nuovo in incubatrice 24 ° C ed estrarre la soluzione C.\nAggiungere 6 gocce della soluzione C al mix A / B. Poi mescolare ancora prima con una pipetta Pasteur e poi nel vortex, evitare di fare bolle.\nUtilizzare immediatamente la miscela finale inserendo (~ 20 l / drop) gocce sul Parafilm.\nCon un pulito, pinzette anti-magnetico, posizionare le griglie sulla miscela (ad es., Argento migliorando reazione) da 6 a 15 minuti a seconda della valorizzazione (ie. Dimensione delle particelle d'oro) voluto da ottenere.\nRimuovere le griglie dalla miscela e trasferirli sulla superficie dell'acqua bidistillata scende a 24 ° C per lavaggi. In primo luogo, utilizzare in rapida successione 6 gocce e poi 3 gocce con 7 min tempo di incubazione per goccia, Prima di accendere le luci.\nProcedere con il passaggio successivo, sia l'etichettatura immuno-oro o marcatura di membrana 27, al fine di visualizzare il risultato di un'inchiesta EM.\nSecondo il protocollo presentato, la morfologia del sistema lievito endosome può essere accesso da EM trasmissione. Figura 1 mostra diversi tipi di compartimenti endosomiali che sono stati raggiunti e quindi etichettati con nanogold. Il nanogold-argento avanzato può essere chiaramente visto come elettroni particelle dense. Le impostazioni ottimali stabiliti per la reazione valorizzazione argento permette avente particelle di oro in una gamma omogenea dimensioni tra 5 e 15 nm, che non interferisce con l'ultrastruttura della cellula di lievito. Membrana plasmatica così come compartimenti endosomiali primi sono accessibili al nanogold dopo 5 min di incubazione a 24 ° C (Figura 1A), mentre LE, nei casi presentati corpi multivescicolari, sono raggiungibili da queste particelle dopo almeno 30 minuti di assorbimento (Figura 1B). Il potere di risoluzione di combinare la nostra procedura IEM 8 con il protocollo valorizzazione nanogold / argento qui descritta è ONUderlined dalla conservazione e qualità della morfologia degli organelli mostrate, in particolare le vescicole interno degli organismi multivesicular (Figura 1B).\nFigura 1. Analisi ultrastrutturale di nanogold marcato compartimenti lievito endosomali. Sferoplasti sono stati ottenuti dal ceppo SEY6210 wild type (MATalpha URA3-52 LEU2-3, 112 his3-Δ200 TRP1-Δ901 lys2-801 SUC2-Δ9 mel GAL), come descritto nel protocollo presentato. Sferoplasti sono state poi incubate con 4 nmol di nanogold carico positivamente a 4 ° C per 15 minuti prima di essere trasferito a temperatura ambiente per 10 (pannello A) o 30 min (pannello B). Le cellule sono state successivamente fissati, preparate per criosezionamento 8 prima di effettuare la reazione valorizzazione argento sul preparato come descrittonel protocollo presentato. A. compartimenti precoce del sistema lievito endosomal. Oltre alla membrana plasmatica, una breve assorbimento del nanogold (5 min) permette l'etichettatura di vescicole singole (frecce), vescicole eventualmente endocitosi e di strutture tubolari (freccia), molto probabilmente endosomi precoci. B. Il lievito ultrastruttura corpo multivesicular. A 30 min di incubazione conduce l'etichettatura di LE / corpi multivescicolari (asterischi), ma anche endosomi precoci e in vacuoli parte (non mostrato). M, mitocondri; N, nucleo; PM, membrana plasmatica; V, vacuolo. Bar = 200 nm.\nImmuno-microscopia elettronica è una tecnica che permette di combinare localizzazione di proteine con la risoluzione ultrastrutturale dei vettori e organelli dove queste proteine risiedono. Ciò è particolarmente importante quando si studia il sistema lievito endosomiale perché i suoi comparti appaiono come strutture puntuate in microscopia a fluorescenza. È pertanto difficile distinguerle. Per questo motivo l'uso di una sonda rilevabile da EM e immettendo il percorso endocitosi in modo dipendente dal tempo è cruciale per marcare specificamente le diverse endosomi. Questo tipo di sonda è utile per valutare la funzionalità di endocitosi 6 ed è un'alternativa alla mancanza di sieri rilevare marcatori proteici.\nLa procedura qui descritta exploit caricato positivamente nanogold come sonda per etichettare i comparti endosomali. Mentre criosezionamento richiede attrezzature e competenze speciali, il protocollo presentato è tecnicamente facile e non riCoro macchine speciali. Pertanto è accessibile a qualsiasi laboratorio che vorrebbe usarlo per la sua ricerca. Tuttavia, alcune precauzioni devono essere prese durante la fase critica di questa procedura, cioè la reazione valorizzazione argento. Questa reazione è molto sensibile alla luce e quindi tutte le luci (tranne quella rossa) in sala deve essere spento e / o coperto. Come tutte le reazioni chimiche, la velocità della reazione valorizzazione argento è influenzata dalla temperatura. Per ottenere risultati coerenti e riproducibili con gli stessi parametri, tutte le soluzioni e gli strumenti devono essere attentamente preincubato a 24 ° C. È fondamentale stabilire con precisione il tempo di incubazione per la valorizzazione argento nella stanza in cui verrà effettuata regolarmente questa reazione. Espansione del nanogold deve essere sufficientemente lungo per essere in grado di rilevare visivamente la particella d'oro da EM e deve essere sufficientemente breve da evitare la generazione di particelle di grandi dimensioni, che potrebbe riguardare i morfologiche. Per questo motivo, è vivamente consigliabile l'esecuzione di un esperimento pilota durante l'impostazione di questa tecnica in laboratorio. Durante questo test le particelle nanogold devono essere argento avanzato per tempi diversi per determinare il tempo ottimale per la reazione. Da notare che le dimensioni delle particelle ottenute non possono essere di dimensioni omogenee; ci sarà sempre qualche eterogeneità, ma questo deve essere mantenuto al minimo possibile, in un range compreso tra 5 - 15 nm. Questo è particolarmente importante se la procedura nanogold assorbimento sarà combinato con etichettature immuno-oro. Un altro aspetto da tenere in considerazione quando si interpretano i risultati è che gli esperimenti di etichettatura pulse-chase non sono possibili con questo metodo. Di conseguenza il PM e EE sono etichettati anche in un assorbimento nanogold mirato a visualizzare LE.\nÈ anche possibile vedere le applicazioni aggiuntive del protocollo presentato qui. Un'opzione potrebbe essere quella di correlare i dati EM di nanogold captazione con microscop fluorescentey. FM4-64 è un lipofila colorante fluorescente marcatore che associa al PM e, nel suo cammino verso il vacuolo, sta attraversando i comparti endosomiali in modo dipendente dal tempo. Entrambi FM4-64 e nanogold entrare nella cellula in associazione con lipidi e hanno probabilmente molto simile cinetica di internalizzazione 28,29. Di conseguenza entrambi i coloranti possono essere usati allo stesso tempo in correlativo luce-EM approcci per esplorare simultaneamente la dinamica e la ultrastruttura della endocytic compartments.The presentato metodo può essere utilizzato anche per il traffico recettore-mediata attraverso il sistema endocytic 30. Derivati Monomaleido e mono-solfo-N-idrossi-succinimmidico del nanogold possono essere usate per legare covalentemente queste particelle di proteine 6. Ad esempio reticolazione con la-a o l'α-fattore può permettere a seguito della endocitosi di questi due feromoni dai loro recettori specifici.\nTutti insieme, il protocollo descritto permette di specifically etichettare gli organelli del sistema lievito endosomal utilizzando una sonda endocitosi, che può essere reso rilevabile da EM. Questo strumento sperimentale è un valido approccio per studiare la biogenesi e l'organizzazione dei compartimenti lievito endosomiali a livello ultrastrutturale.\nGli autori ringraziano René Scriwanek per l'assistenza alla preparazione della figura. FR è sostenuto da ECHO (700.59.003), ALW programma aperto (821.02.017 e 822.02.014), la cooperazione DFG-NWO (DN82-303) e ZonMw VICI (016.130.606) sovvenzioni.