16S rRNA Sequencing: A PCR-based Technique to Identify Bacterial Species | Protocol (Translated to German)\nQuelle: Ewa Bukowska-Faniband1, Tilde Andersson1, Rolf Lood1\nPlanet Erde ist ein Lebensraum für Millionen von Bakterienarten, von denen jede spezifische Eigenschaften hat. Die Identifizierung von Bakterienarten wird in der mikrobiellen Ökologie häufig verwendet, um die Artenvielfalt von Umweltproben und medizinische Mikrobiologie zur Diagnose infizierter Patienten zu bestimmen. Bakterien können mit konventionellen mikrobiologischen Methoden wie Mikroskopie, Wachstum auf bestimmten Medien, biochemischen und serologischen Tests und Antibiotika-Empfindlichkeitstests klassifiziert werden. In den letzten Jahrzehnten haben molekulare mikrobiologische Methoden die bakterielle Identifizierung revolutioniert. Eine beliebte Methode ist die 16S ribosomale RNA (rRNA) Gensequenzierung. Diese Methode ist nicht nur schneller und genauer als herkömmliche Methoden, sondern ermöglicht auch die Identifizierung von Stämmen, die unter Laborbedingungen schwer zu züchten sind. Darüber hinaus ermöglicht die Differenzierung von Stämmen auf molekularer Ebene eine Diskriminierung von phänotypisch identischen Bakterien (1-4).\n16S rRNA verbindet sich mit einem Komplex von 19 Proteinen zu einer 30S-Untereinheit des bakteriellen Ribosoms (5). Es wird durch das 16S rRNA-Gen kodiert, das in allen Bakterien aufgrund seiner wesentlichen Funktion in der Ribosom-Montage vorhanden und hochkonserviert ist; Es enthält jedoch auch variable Regionen, die als Fingerabdrücke für bestimmte Arten dienen können. Diese Eigenschaften haben das 16S rRNA-Gen zu einem idealen genetischen Fragment gemacht, das bei der Identifizierung, dem Vergleich und der phylogenetischen Klassifizierung von Bakterien verwendet werden kann (6).\n16S rRNA Gensequenzierung basiert auf der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) (7-8) gefolgt von DNA-Sequenzierung (9). PCR ist eine molekularbiologische Methode, die verwendet wird, um bestimmte DNA-Fragmente durch eine Reihe von Zyklen zu verstärken, die Folgendes umfassen:\ni) Denaturierung einer doppelsträngigen DNA-Vorlage\nii) Glühen von Primern (kurze Oligonukleotide), die die Vorlage ergänzen\niii) Erweiterung der Primer durch das DNA-Polymerase-Enzym, das einen neuen DNA-Strang synthetisiert\nEine schematische Übersicht über die Methode ist in Abbildung 1dargestellt.\nAbbildung 1: Schematische Übersicht über die PCR-Reaktion. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.\nEs gibt mehrere Faktoren, die für eine erfolgreiche PCR-Reaktion wichtig sind, einer davon ist die Qualität der DNA-Vorlage. Die Isolierung chromosomaler DNA von Bakterien kann mit Standardprotokollen oder kommerziellen Kits durchgeführt werden. Besondere Vorsicht sollte darauf geachtet werden, DNA zu erhalten, die frei von Verunreinigungen ist, die die PCR-Reaktion hemmen können.\nKonservierte Regionen des 16S rRNA-Gens ermöglichen das Design universeller Primerpaare (ein Vorwärts- und ein Rückwärtsgang), die die Zielregion in jeder Bakterienart binden und verstärken können. Die Zielregion kann in ihrer Größe variieren. Während einige Primerpaare den größten Teil des 16S rRNA-Gens verstärken können, verstärken andere nur Teile davon. Beispiele für häufig verwendete Primer sind in Tabelle 1 dargestellt und ihre Bindungsstellen sind in Abbildung 2dargestellt.\nPrimername Sequenz (5''3') Vorwärts/ Rückwärts verweis\n8F b) AGAGTGTGATCCTGGCTCAG vorwärts -1\n27F AGAGTGTGATCMTGGCTCAG vorwärts -10\n515F GTGCCAGCMGCCGCGGTAA vorwärts -11\n911R GCCCCCGTCAATTCMTGA Rückwärts -12\n1391R GACGGGCGGTGTGTRCA Rückwärts -11\n1492R GGTTTTTTTACGACTT Rückwärts -11\nTabelle 1: Beispiele für Standardoligonukleotide, die bei der Amplifikation von 16S rRNA-Genen verwendet werden a).\na) Die erwarteten Längen des PCR-Produkts, das mit den verschiedenen Primerkombinationen erzeugt wird, können durch Berechnung des Abstands zwischen den Bindungsstellen für den Vorwärts- und den Reverse-Primer geschätzt werden (siehe Abbildung 2), z. B. die Größe der PCR Produkt mit Primer-Paar 8F-1492R ist 1500 bp, und für Primer-Paar 27F-911R 900 bp.\nb) auch bekannt als fD1\nAbbildung 2: Repräsentative Abbildung der 16S rRNA-Sequenz und der Primer-Bindungsstellen. Konservierte Bereiche sind grau gefärbt und variable Bereiche sind mit diagonalen Linien gefüllt. Um die höchste Auflösung zu ermöglichen, werden Primer 8F und 1492R (Name basierend auf der Position auf der rRNA-Sequenz) verwendet, um die gesamte Sequenz zu verstärken, was die Sequenzierung mehrerer variabler Bereiche des Gens ermöglicht. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.\nDie Fahrradbedingungen für PCR(d. h. die Temperatur und Die Zeit, die für die Denaturierung, das Geglüht mit Primern und synthetisiert erforderlich sind) hängen von der Verwendeten-Polymerase-Art und den Eigenschaften der Primer ab. Es wird empfohlen, die Herstellerrichtlinien für eine bestimmte Polymerase zu befolgen.\nNach Abschluss des PCR-Programms werden die Produkte durch Agarose-Gel-Elektrophorese analysiert. Eine erfolgreiche PCR ergibt ein einzelnes Band in der erwarteten Größe. Das Produkt muss vor der Sequenzierung gereinigt werden, um Restgrundierungen, Desoxyribonukleotide, Polymerase und Puffer zu entfernen, die in der PCR-Reaktion vorhanden waren. Die gereinigten DNA-Fragmente werden in der Regel zur Sequenzierung an kommerzielle Sequenzierungsdienste gesendet; Einige Institutionen führen jedoch DNA-Sequenzierungen in ihren eigenen Kerneinrichtungen durch.\nDie DNA-Sequenz wird automatisch aus einem DNA-Chromatogramm von einem Computer erzeugt und muss sorgfältig auf Qualität überprüft werden, da manchmal eine manuelle Bearbeitung erforderlich ist. Nach diesem Schritt wird die Gensequenz mit Sequenzen verglichen, die in der 16S rRNA-Datenbank abgelagert sind. Die Regionen mit Ähnlichkeit werden identifiziert, und die ähnlichsten Sequenzen werden geliefert.\nBeim Umgang mit Mikroorganismen ist es erforderlich, eine gute mikrobiologische Praxis zu befolgen. Alle Mikroorganismen, insbesondere unbekannte Proben, sollten als potenzielle Krankheitserreger behandelt werden. Folgen Sie der aseptischen Technik, um eine Kontamination der Proben, der Forscher oder des Labors zu vermeiden. Waschen Sie die Hände vor und nach dem Umgang mit Bakterien, verwenden Sie Handschuhe und tragen Sie Schutzkleidung.\nDurchführung einer Risikobewertung für das Versuchsprotokoll zur genomischen DNA-Isolierung und PCR-Produktreinigung. Einige Reagenzien können schädlich sein!\nReine Kultur ist für die 16S rRNA Sequenzierung unerlässlich. Bevor Sie zur Isolierung der genomischen DNA übergehen, stellen Sie sicher, dass das Ausgangsmaterial vollständig rein ist. Dies kann durch Streifenbeschichtung erfolgen, um einzelne Kolonien zu isolieren. Diese können auf Tellern einzeln oder bei Bedarf in Brühe weiter angebaut werden.\nThermischer Cycler für PCR. Die Funktion des Thermischen Cyclers besteht darin, die Temperatur entsprechend einem eingestellten Programm anzuheben und zu senken. Während der Erstellung des Programms werden Sie aufgefordert, die Temperatur- und Zeitwerte für jeden PCR-Schritt sowie die Gesamtzahl der Zyklen einzugeben.\nAgarose-Gel-Elektrophorese-System. Es wird verwendet, um DNA-Fragmente basierend auf ihrer Größe und Ladung zu trennen. In diesem Protokoll wird die Agarose-Gelelektrophorese verwendet, um die Qualität isolierter genomischer DNA- und PCR-Produkte zu visualisieren.\nHinweis: Das gezeigte Protokoll gilt für die 16S rRNA-Gensequenzierung aus einer reinen Bakterienkultur. Sie gilt nicht für metagenomische Studien.\nCulturing Bakterien für die Isolierung der genomischen DNA (gDNA).\nWachsen Sie Ihren Mikroorganismus auf einem geeigneten Medium. In diesem Schritt können sowohl flüssige als auch feste Medien verwendet werden. Wählen Sie Bedingungen, die das beste Wachstum erzielen. Beachten Sie bei der Planung des Experiments, dass langsam wachsende Bakterien mehrere Tage benötigen, um die späte Log/stationäre Wachstumsphase zu erreichen. In diesem Protokoll wurde Bacillus subtilis 168 in Lysogeny-Brühe (LB) über Nacht in einem Schüttel-Inkubator mit 200 Rpm, 37°C angebaut.\nIsolierung von gDNA.\nWenn Bakterien auf festem Medium angebaut wurden, kratzen Sie einige Zellen mit einer sterilen Schleife und setzen Sie sie in 1 ml destilliertem Wasser wieder auf\nWenn Bakterien in flüssigem Medium angebaut wurden, verwenden Sie etwa 1,5 ml einer Nachtkultur.\nPellet die Zellen durch Zentrifugation (1 Minute, 12.000 - 16.000 g), entfernen Sie den Überstand und verwenden Sie die Zellen für die gDNA-Isolierung mit einem kommerziellen Kit oder Standardprotokollen[z. B. CTAB-Gesamt-DNA-Präparat (13) oder Phenol-Chloroform-Extraktion (14)]. Hier wurde ein kommerzielles Kit verwendet, um gDNA aus 1,5 ml b. subtilis 168 Übernachtungskultur, OD600 = 1,5 zu isolieren.\nAnmerkung 1: Für einige Gram-negative Bakterien kann dieser Schritt weggelassen und durch einfache Freisetzung von DNA aus Zellen durch Kochen ersetzt werden. Bakterielles Pellet in destilliertem Wasser aufbewahren und in einem Heizblock auf 100 °C für 10 Minuten inkubieren.\nAnmerkung 2: Gram-positive Bakterienzellen sind schwer zu stören. Es wird daher empfohlen, eine gDNA-Isolationsmethode oder ein Kit zu wählen, das der Isolierung von dieser Gruppe von Bakterien gewidmet ist.\nÜberprüfen Sie die Qualität der isolierten gDNA durch Agarose-Gel-Elektrophorese. Mischen Sie zunächst 5 l der isolierten gDNA mit 1 l des Ladefarbstoffs (6x), und laden Sie die Probe auf ein 0,8% Agarose-Gel, das ein DNA-Färbereagenz enthält.\nLaden Sie einen molekularen Massenstandard und führen Sie die Elektrophorese aus, bis die Farbfront den Boden des Gels erreicht.\nSobald die Elektrophorese abgeschlossen ist, visualisieren Sie das Gel auf einem geeigneten Transilluminator (entweder UV oder blaues Licht). gDNA erscheint als dickes hochmolekulares Band (über 10 kb). Ein Beispiel für die gDNA-Qualitätsprüfung ist in Abbildung 3dargestellt.\nWenn die gDNA die Qualitätskontrolle besteht(d.h.das hochmolekulare Band vorhanden ist und es wenig bis gar keine Verschmierung der gDNA gibt), verdünnen Sie Ihre gDNA seriell, indem Sie zuerst 3 Mikrozentrifugenrohre wie folgt etikettieren: "10x", "100x" und "1000x".\nPipette 90 l steriles destilliertes Wasser in jede der 3 Rohre.\nNehmen Sie 10 l der gDNA-Lösung und fügen Sie sie dem Mitrohr mit der Aufschrift "10x" hinzu.\nPipet das gesamte Volumen(d.h. 100 l) gründlich nach oben und unten, um sicherzustellen, dass die Lösung gleichmäßig gemischt wird. Nehmen Sie dann 10 l der Lösung aus diesem Rohr und übertragen Sie sie in das Rohr mit der Aufschrift "100x".\nMischen Sie wie zuvor beschrieben und wiederholen Sie das gleiche Verfahren, indem Sie 10 l der Lösung von Rohr "100x" auf das Rohr "1000x" übertragen. Diese Verdünnungen werden als Vorlage in der PCR-Reaktion verwendet.\nAbbildung 3: Agarose Gel Elektrophorese von gDNA isoliert aus Bacillus subtilis. Spur 1: M - Molekularmassenmarker (von oben nach unten: 10000 bp, 8000 bp, 6000 bp, 5000 bp, 4000 bp, 3500 bp, 3000 bp, 2500 bp, 2000 bp, 1500 bp, 1000 bp). Lane 2: gDNA - genomische DNA isoliert von Bacillus subtilis. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.\nVerstärkung des 16S rRNA-Gens durch PCR.\nHinweis: Das nachstehende PCR-Protokoll ist für ein bestimmtes DNA-Polymerase- und Primerpaar 8F - 1492R optimiert (siehe Tabelle 1). Für jedes Polymerase- und Primerpaar ist eine Optimierung des Protokolls erforderlich.\nAlle Reagenzien auf Eis auftauen.\nBereiten Sie den PCR-Mastermix vor, wie in Tabelle 2 dargestellt. Da die DNA-Polymerase bei Raumtemperatur aktiv ist, muss die Reaktionseinrichtung auf Eis durchgeführt werden, d.h. die PCR-Röhren und die Reaktionskomponenten sollten ständig auf Eis gehalten werden. Bereiten Sie eine Reaktion pro gDNA-Probe und eine Reaktion für negative Kontrolle vor. Negativsteuerung ist ein PCR-Mix ohne gDNA-Vorlage und wird verwendet, um sicherzustellen, dass die anderen Komponenten der Reaktion nicht kontaminiert sind.\nHinweis: Bei mehreren Proben wird üblicherweise ein Master-Mix vorbereitet. Master Mix ist eine Lösung, die alle Reaktionskomponenten außer der Vorlage enthält. Es hilft, wiederholte Pipetten zu vermeiden, Pipettierfehler zu vermeiden und sorgt für eine hohe Konsistenz zwischen den Proben. Um den Master-Mix vorzubereiten, multiplizieren Sie das Volumen der einzelnen Komponenten (mit Ausnahme der DNA-Vorlage) mit der Anzahl der getesteten Proben. Mischen Sie alle Komponenten in Mikrozentrifugenrohr und Pipetten Sie das gesamte Volumen nach oben und unten mehrmals.\nAliquot 49 l des Master-Mixes in die einzelnen PCR-Röhren.\nFügen Sie 1 L-Vorlage in Rohre mit Master-Mix. Für die negative Kontrolle fügen Sie 1 l steriles Wasser hinzu. Um sicherzustellen, dass die Komponenten gut gemischt sind, leiten Sie die Mischung vorsichtig auf und ab, 10 Mal mit einer Pipette, die auf 30-50 l eingestellt ist.\nStellen Sie die PCR-Maschine mit dem in Tabelle 3 gezeigten Programm ein.\nLegen Sie die Rohre in die PCR-Maschine und starten Sie das Programm.\nSobald das Programm abgeschlossen ist, untersuchen Sie die Qualität Ihres PCR-Produkts durch Agarose-Gel-Elektrophorese.\nEine erfolgreiche PCR-Reaktion mit dem 8F-1492R Primer-Paar ergibt ein einzelnes Band von ca. 1,5 kb (Abbildung 4). Wenn andere Bänder (d. h. unspezifische Produkte) vorhanden sind, optimieren Sie das PCR-Programm, indem Sie die Glühtemperatur anpassen. Wenn ein einzelnes Band mit der erwarteten Größe vorhanden ist, fahren Sie mit dem nächsten Schritt fort. Hier ergab die PCR-Reaktion mit 100-fach verdünnter gDNA-Schablone das beste Produkt, da sie ein scharfes Band von erwarteter Größe hatte und unspezifische Produkte fehlte. Daher wurde es gewählt, gereinigt und zur Sequenzierung geschickt zu werden.\nVor der Sequenzierung muss das Produkt von Restgrundierungen, Desoxyribonukleotiden, Polymerase und Puffer gereinigt werden, die in der PCR-Reaktion vorhanden waren. Die PCR-Produkte können mit einem kommerziellen PCR-Reinigungskit isoliert werden. Die PCR-Reaktion wird auf eine Säule geladen, die eine DNA-bindende Matrix enthält. Das PCR-Produkt bindet an die Spalte, während andere Komponenten durch die Spalte fließen. Die Säule wird dann mit Waschpuffer gewaschen, und schließlich wird die DNA im Puffer der Wahl eluiert. Vergewissern Sie sich, dass der mit dem Kit ergänzte Elutionspuffer mit der Sequenzierung kompatibel ist.\nSenden Sie das gereinigte PCR-Produkt zur DNA-Sequenzierung. Befolgen Sie die Richtlinien für die Einreichung von Sequenzierungsmustern in der gewählten Sequenzierungseinrichtung. Für die beste Sequenzabdeckung verwenden Sie die PCR-Verstärkungsprimer (die gleichen wie in Abschnitt 2.4.1) als Sequenzierungsprimer. Hier wurden die Primer 8F und 1492R zur Sequenzierung des PCR-Produkts verwendet.\nteil Endgültige Konzentration Volumen pro Reaktion Volumen pro x-Reaktionen (Master-Mix)\n5x Reaktionspuffer 1x 10 l 10 l x\n10 mM dNTPs 200 m 1 L 1 l x\n10 M Primer 8F 0,5 m 2,5 l 2,5 x x\n10 M Primer 1492R 0,5 m 2,5 l 2,5 x x\nPhusion-Polymerase 1 Einheit 0,5 l 0,5 x x\nVorlagen-DNA * - 1 L -\nddH2O - 32,5 l 32,5 x x\nGesamtvolumen 50 l 49 x x\nTabelle 2: PCR-Reaktionskomponenten. * Verwenden Sie die 10x, 100x oder 1000x verdünnte gDNA ab Schritt 2.3.\nAnfängliche Denaturierung 98°C 30 Sek.\nDenaturierung 98°C 10 Sek. 25-30\nGlühen 60°C 30 Sek.\nanbau 72°C 45 Sek.\nEndgültige Verlängerung 72°C 7 Min.\nhalten 4°C ∞\nTabelle 3: PCR-Programm zur Amplifikation des 16S rRNA-Gens.\nAbbildung 4: Agarose-Gel-Elektrophorese von PCR-Produkten verstärkt mit Primer 8F und 1492R und gDNA als Vorlage. Die gDNA-Probe von B. subtilis (siehe Abbildung 3) wurde 10, 100 und 1000 Mal verdünnt, um das beste Ergebnis zu testen. Spur 1: M - Molekularmassenmarker (von oben nach unten: 10000 bp, 8000 bp, 6000 bp, 5000 bp, 4000 bp, 3500 bp, 3000 bp, 2500 bp, 2000 bp, 1500 bp, 1000 bp, 750 bp, 500 bp, 250 bp). Spur 2: PCR-Reaktion mit 10x verdünnter Schablone. Spur 3: PCR-Reaktion mit 100-fach verdünnter Schablone. Spur 4: PCR-Reaktion mit 1000x verdünnter Schablone. Spur 5: (C-) - Negativkontrolle (Reaktion ohne DNA-Vorlage). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.\nHinweis: Das PCR-Produkt wird mit den Vorwärts-Primern (hier 8F) und den umgekehrten (hier 1492R) Primern sequenziert. Daher werden zwei Sätze von Datensequenzen generiert, einer für den Vorwärts und einer für den umgekehrten Primer. Für jede Sequenz werden mindestens zwei Dateitypen erzeugt: i) eine Textdatei mit der DNA-Sequenz und ii) ein DNA-Chromatogramm, das die Qualität des Sequenzierungslaufs anzeigt.\nÖffnen Sie für die Vorwärtsgrundierung das Chromatogramm, und untersuchen Sie die Sequenz sorgfältig. Ein ideales Chromatogramm für eine Qualitätssequenz sollte gleichmäßig eimierte Spitzen und wenig oder gar keine Hintergrundsignale haben (Abbildung 5A).\nWenn das Chromatogramm nicht hochwertig ist, sollte die Sequenz verworfen oder die Sequenztextdatei entsprechend den folgenden Kriterien überarbeitet werden:\nDas Vorhandensein von Doppelspitzen im gesamten Chromatogramm weist auf das Vorhandensein mehrerer DNA-Vorlagen hin. Dies kann der Fall sein, wenn die Bakterienkultur nicht rein war. Eine solche Sequenz sollte verworfen werden (Abbildung 5B).\nEin mehrdeutiges Chromatogramm kann aus dem Vorhandensein unterschiedlicher farbiger Spitzen an der gleichen Stelle entstehen. Einer der häufigsten Fehler ist das Vorhandensein von zwei verschiedenen farbigen Spitzen in der gleichen Position und unsachgemäße Zuweisung der Basen durch die Sequenzierungssoftware (Abbildung 5C). Korrigieren Sie alle falsch zugewiesenen Nukleotide manuell und bearbeiten Sie sie in der Textdatei.\nChromatogramme mit niedriger Auflösung können zu "breiten Spitzen" führen, die in diesen Regionen häufig zu Fehlzählungen der Nukleotide führen (Abbildung 5D). Dieser Fehler ist schwer zu korrigieren, und daher sollten mögliche Inkongruenzen im weiteren Ausrichtungsschritt nicht als zuverlässig behandelt werden.\nSchlechte Chromatogramm-Lesequalität und das Vorhandensein mehrerer Spitzen ist häufig an den 5' und 3' Enden der Sequenz zu sehen. Einige Sequenzer-Software entfernt diese minderwertigen Fragmente automatisch(Abbildung 5E), und die Nukleotide sind nicht in der Textdatei enthalten. Wenn Ihre Sequenz nicht automatisch abgeschnitten wurde, bestimmen Sie die minderwertigen Fragmente(z.B. schwaches Signal, überlappende Spitzen, Auflösungsverlust) an den Enden und entfernen Sie die entsprechenden Basen aus der Textdatei.\nAbbildung 5: Beispiele für die Fehlerbehebung bei der DNA-Sequenzierung. A) Ein Beispiel für eine hochwertige Chromatogrammsequenz (gleichmäßig verteilte, eindeutige Spitzen). B) Schlechte Qualität Sequenz, die in der Regel am Anfang des Chromatogramms auftritt. Der Grauzonenbereich gilt als minderwertig und wird von der Sequenzierungssoftware automatisch entfernt. Weitere Basen können manuell getrimmt werden. C) Vorhandensein von Doppelspitzen (durch Pfeile angezeigt). Ein Nukleotid, das durch den roten Pfeil angezeigt wird, wurde vom Sequenzer als "T" (roter Peak) gelesen, aber der blaue Peak ist stärker, und es kann auch als "C" interpretiert werden. D) Überlappende Spitzen weisen auf eine DNA-Kontamination hin(d. h. mehr als eine Schablone). E) Verlust der Auflösung und so genannte "breite Spitzen" (gekennzeichnet durch Rechteck), die zuverlässige Basisrufe verhindern. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.\nWiederholen Sie 3.1 und 3.2 für die umgekehrte Grundierung.\nZusammenstellen Sie schließlich die Vorwärts- und Rückwärtssequenzen in einer zusammenhängenden Sequenz. Ein guter Sequenzierungslauf ergibt eine Sequenz von bis zu 1100 bp. Wenn man bedenkt, dass das PCR-Produkt 1500 bp lang ist, sollten sich die Sequenzen, die mit Vorwärts- und Reverse-Primern erhalten wurden, teilweise überlappen.\nZusammenführen Sie die beiden Sequenzen mit dem DNA-Sequenzbauprogramm, z.B. einem freien Werkzeug wie CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3) (15).\nFügen Sie die beiden Sequenzen im FASTA-Format in das angegebene Feld ein. Klicken Sie auf die Schaltfläche "Absenden" und warten Sie, bis die Ergebnisse zurückgegeben werden.\nUm die montierte Sequenz anzuzeigen, drücken Sie "Contigs" in der Ergebnis-Registerkarte. Um die Details der Ausrichtung anzuzeigen, drücken Sie "Montagedetails".\nAnmerkung 1: Wenn CAP3-Software für die Contig-Assembly verwendet wird, ist es nicht erforderlich, die umgekehrte Primersequenz in Reverse-Komplementär zu konvertieren. Dieser Schritt kann jedoch erforderlich sein, wenn ein anderes Programm verwendet wird.\nAnmerkung 2: Das FASTA-Format ist ein textbasiertes Format, das die Nukleotidsequenz darstellt. Die erste Zeile (die Beschreibungszeile) in einer FASTA-Datei beginnt mit dem Symbol ">", gefolgt vom Namen oder einem eindeutigen Bezeichner der Sequenz. Der Beschreibungszeile folgt die Nukleotidsequenz. Fügen Sie Ihre Sequenzen im folgenden Format ein:\nFügen Sie Ihre Sequenz aus der Textdatei hier ein\nFühren Sie eine Datenbanksuche durch, indem Sie die Website für das Basic Local Alignment Search Tool (BLAST; https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) besuchen.\nWählen Sie das Werkzeug "Nukleotid BLAST", um Ihre Sequenz mit der Datenbank zu vergleichen.\nGeben Sie Ihre Sequenz (das in 3.5 zusammengebaute Kontus) in das Textfeld "Abfragesequenz" ein und wählen Sie dann im Scroll-Down-Menü die Datenbank "16S rRNA-Sequenzen (Bakterien und Archea)" aus.\nDrücken Sie die Taste "BLAST" am unteren Rand der Seite. Die ähnlichsten Sequenzen werden zurückgegeben. Ein BLAST-Beispiel ist in Abbildung 6dargestellt. Im vorgestellten Experiment ist der Top-Hit B. subtilis Stamm 168, der eine 100%ige Identität mit der in der BLAST-Datenbank verfügbaren Sequenz zeigt.\nWenn der obere Treffer keine 100%ige Identität anzeigt, gehen Sie zur Ausrichtung, und überprüfen Sie, ob es nicht stimmt. Wenn Sie auf den Top-Hit klicken, werden Sie zu den Details der Ausrichtung weitergeleitet. Ausgerichtete Nukleotide werden durch kurze vertikale Linien verbunden, während nicht übereinstimmende Nukleotide einen Abstand zwischen ihnen haben. Kehren Sie zum Chromatogramm zurück, das Sie von der Sequenzierungsfirma erhalten haben, und überarbeiten Sie die Sequenz erneut mit dem Fokus auf die nicht übereinstimmende Region. Korrigieren Sie die Reihenfolge, wenn weitere Fehler gefunden werden. Führen Sie BLAST erneut mit der korrigierten Sequenz aus.\nAbbildung 6: Beispiel für das Nukleotid BLAST-Ergebnis. 16S rRNA Gensequenz aus rein Kultur von B. subtilis 168 wurde als Abfragesequenz verwendet. Der Top-Hit zeigt wie erwartet 100% Identität (unterstrichen) zum B. subtilis-Stamm 168. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.\nDie Erde ist die Heimat von Millionen von Bakterienarten, jede mit einzigartigen Eigenschaften. Die Identifizierung dieser Arten ist bei der Bewertung von Umweltproben von entscheidender Bedeutung. Ärzte müssen auch verschiedene Bakterienarten unterscheiden, um infizierte Patienten zu diagnostizieren.\nUm Bakterien zu identifizieren, können eine Vielzahl von Techniken eingesetzt werden, einschließlich mikroskopischer Beobachtung der Morphologie oder Deswachstum auf einem bestimmten Medium, um koloniemorphologische zu beobachten. Genetische Analyse, eine andere Technik zur Identifizierung von Bakterien hat in den letzten Jahren an Popularität gewonnen, zum Teil aufgrund der 16S ribosomalen RNA-Gensequenzierung.\nDas bakterielle Ribosom ist ein Protein-RNA-Komplex, der aus zwei Untereinheiten besteht. Die 30S-Untereinheit, die kleinere dieser beiden Untereinheiten, enthält 16S rRNA, die durch das 16S rRNA-Gen in der genomischen DNA kodiert wird. Spezifische Regionen von 16S rRNA sind aufgrund ihrer wesentlichen Funktion in der Ribosom-Montage hochkonserviert. Während andere Regionen, weniger wichtig für die Funktion, kann zwischen Bakterienarten variieren. Die variablen Regionen in 16S rRNA können als einzigartige molekulare Fingerabdrücke für Bakterienarten dienen, so dass wir phänotypisch identische Stämme unterscheiden können.\nNach Erhalt einer Qualitätsprobe von gDNA kann PCR des 16S rRNA-Codierungsgens beginnen. PCR ist eine häufig verwendete molekularbiologische Methode, die aus Zyklen der Denaturierung der doppelsträngigen DNA-Vorlage, dem Glühen von universellen Primerpaaren, die hochkonservierte Regionen des Gens verstärken, und der Erweiterung von Primern durch DNA-Polymerase besteht. Während einige Primer den größten Teil des 16S rRNA-Codierungsgens verstärken, verstärken andere nur Fragmente davon. Nach pcR können die Produkte mittels Agarose-Gel-Elektrophorese analysiert werden. Wenn die Amplifikation erfolgreich war, sollte das Gel ein einzelnes Band von einer erwarteten Größe enthalten, abhängig vom verwendeten Primerpaar, bis zu 1500bp, der ungefähren Länge des 16S rRNA-Gens.\nNach der Reinigung und Sequenzierung können die erhaltenen Sequenzen dann in die BLAST-Datenbank eingegeben und mit Referenzsequenzen von 16S rRNA verglichen werden. Da diese Datenbank Übereinstimmungen auf der Grundlage der höchsten Ähnlichkeit zurückgibt, ermöglicht dies die Bestätigung der Identität der Bakterien von Interesse. In diesem Video beobachten Sie die 16S rRNA-Gensequenzierung, einschließlich PCR, DNA-Sequenzanalyse und -bearbeitung, Sequenzmontage und Datenbanksuche.\nBeim Umgang mit Mikroorganismen ist es wichtig, eine gute mikrobiologische Praxis zu befolgen, einschließlich der Verwendung aseptischer Technik und des Tragens geeigneter persönlicher Schutzausrüstung. Nach durchführung einer geeigneten Risikobewertung für den Mikroorganismus oder die Umweltprobe von Interesse, erhalten Sie eine Testkultur. In diesem Beispiel wird eine reine Kultur von Bacillus subtilis verwendet.\nZunächst wachsen Sie Ihren Mikroorganismus auf einem geeigneten Medium unter den entsprechenden Bedingungen an. In diesem Beispiel wird Bacillus subtilis 168 in LB-Brühe über Nacht in einem Schüttel-Inkubator angebaut, der auf 200 Umdrehungen pro Minute bei 37 Grad Celsius eingestellt ist. Als nächstes verwenden Sie ein kommerziell erhältliches Kit, um genomische DNA oder gDNA aus 1,5 Millilitern der B. subtilis Nachtkultur zu isolieren.\nUm die Qualität der isolierten DNA zu überprüfen, mischen Sie zunächst fünf Mikroliter der isolierten gDNA mit einem Mikroliter DNA-Gel-Ladefarbstoff. Dann laden Sie die Probe auf ein 0,8% Agarose-Gel, das DNA-Färbungsreagenz enthält, wie SYBR safe oder EtBr. Danach einen ein Kilobase-Molekularmassenstandard auf das Gel laden und die Elektrophorese so lange ausführen, bis der Vorderfarbstoff etwa 0,5 Zentimeter vom Boden des Gels entfernt ist. Sobald die Gelelektrophorese abgeschlossen ist, visualisieren Sie das Gel auf einem blauen Lichttransilluminator. Die gDNA sollte als dickes Band erscheinen, über 10 Kilobase in der Größe und haben minimale Verschmierung.\nUm anschließend serielle Verdünnungen der gDNA zu erstellen, beschriften Sie drei Mikrozentrifugenröhrchen als 10X, 100X und 1000X. Verwenden Sie dann eine Pipette, um 90 Mikroliter steriles destilliertes Wasser in jede der Rohre zu geben. Als nächstes fügen Sie 10 Mikroliter der gDNA-Lösung in die 10X-Röhre. Pipette das gesamte Volumen nach oben und unten, um sicherzustellen, dass die Lösung gründlich gemischt wird. Entfernen Sie dann 10 Mikroliter der Lösung aus dem 10X-Rohr und übertragen Sie diese in das 100X-Rohr. Mischen Sie die Lösung wie zuvor beschrieben. Schließlich übertragen Sie 10 Mikroliter der Lösung in der 100X-Röhre, auf die 1000X-Röhre.\nUm das PCR-Protokoll zu beginnen, tauen Sie die notwendigen Reagenzien auf Eis auf. Bereiten Sie dann den PCR-Master-Mix vor. Da die DNA-Polymerase bei Raumtemperatur aktiv ist, muss die Reaktion auf Eis erfolgen. Aliquot 49 Mikroliter des Master-Mix in jede der PCR-Röhren. Dann fügen Sie einen Mikroliter Schablone zu jedem der Versuchsröhrchen und einen Mikroliter sterilen Wassers in das negative Kontrollrohr, Pipettieren nach oben und unten, um zu mischen. Danach stellen Sie die PCR-Maschine entsprechend dem in der Tabelle beschriebenen Programm ein. Legen Sie die Rohre in den Thermocycler und starten Sie das Programm.\nSobald das Programm abgeschlossen ist, untersuchen Sie die Qualität Ihres Produkts durch Agarose-Gel-Elektrophorese, wie zuvor gezeigt. Eine erfolgreiche Reaktion mit dem beschriebenen Protokoll sollte zu einem einzigen Band von ca. 1,5 Kilobase führen. In diesem Beispiel lieferte die Probe, die 100X verdünnte gDNA enthielt, das produkthöchste Qualität. Als nächstes reinigen Sie das beste PCR-Produkt, in diesem Fall die 100X gDNA, mit einem handelsüblichen Kit. Jetzt kann das PCR-Produkt zur Sequenzierung gesendet werden.\nIn diesem Beispiel wird das PCR-Produkt mit Vorwärts- und Reverse-Primern sequenziert. So werden zwei Datensätze erzeugt, die jeweils eine DNA-Sequenz und ein DNA-Chromatogramm enthalten: einer für den Vorwärtsprimer und der andere für den umgekehrten Primer. Untersuchen Sie zunächst die Chromatogramme, die aus jedem Primer erzeugt werden. Ein ideales Chromatogramm sollte gleichmäßig verteilte Spitzen mit wenig bis gar keinen Hintergrundsignalen haben.\nWenn die Chromatogramme doppelte Spitzen anzeigen, können mehrere DNA-Vorlagen in den PCR-Produkten vorhanden gewesen sein, und die Sequenz sollte verworfen werden. Wenn die Chromatogramme Spitzen in verschiedenen Farben an der gleichen Stelle enthielten, wurde die Sequenzierungssoftware wahrscheinlich falsch als Nukleotide bezeichnet. Dieser Fehler kann manuell in der Textdatei identifiziert und korrigiert werden. Das Vorhandensein breiter Spitzen im Chromatogramm deutet auf einen Auflösungsverlust hin, der zu einer Fehlzählung der Nukleotide in den zugehörigen Regionen führt. Dieser Fehler ist schwer zu korrigieren, und Inkongruenzen in einem der nachfolgenden Schritte sollten als unzuverlässig behandelt werden. Schlechte Chromatogramm-Lesequalität, die durch das Vorhandensein mehrerer Spitzen angezeigt wird, tritt in der Regel an den fünf Prim- und drei Primenden der Sequenz auf. Einige Sequenzierungsprogramme entfernen diese Abschnitte mit geringer Qualität automatisch. Wenn Ihre Sequenz nicht automatisch abgeschnitten wurde, identifizieren Sie die Fragmente niedriger Qualität, und entfernen Sie deren entsprechende Basen aus der Textdatei.\nVerwenden Sie ein DNA-Montageprogramm, um die beiden Primersequenzen in einer kontinuierlichen Sequenz zusammenzubauen. Denken Sie daran, dass Sequenzen, die mit Vorwärts- und Rückwärtsprimern erhalten wurden, sich teilweise überlappen sollten. Fügen Sie im DNA-Montageprogramm die beiden Sequenzen im FASTA-Format in die entsprechende Box ein. Klicken Sie dann auf die Schaltfläche Senden, und warten Sie, bis das Programm die Ergebnisse zurückgibt.\nUm die zusammengebaute Sequenz anzuzeigen, klicken Sie auf Contigs in der Ergebnis-Registerkarte. Um dann die Details der Ausrichtung anzuzeigen, wählen Sie Die Baugruppendetails aus. Navigieren Sie zur Website für das grundlegende Suchwerkzeug für lokale Ausrichtungen (BLAST), und wählen Sie das Nukleotid-BLAST-Tool aus, um ihre Sequenz mit der Datenbank zu vergleichen. Geben Sie Ihre Sequenz in das Textfeld der Abfragesequenz ein und wählen Sie die entsprechende Datenbank im Bildlauf-Down-Menü aus. Klicken Sie schließlich auf die SCHALTFLÄCHE BLAST am unteren Rand der Seite, und warten Sie, bis das Tool die ähnlichsten Sequenzen aus der Datenbank zurückgibt.\nIn diesem Beispiel ist der Top-Treffer B. subtilis-Stamm 168, der eine 100%ige Identität mit der Sequenz in der BLAST-Datenbank anzeigt. Wenn der Top-Treffer nicht 100% Identität zu Ihrer erwarteten Art oder Sorte zeigt, klicken Sie auf die Sequenz, die Ihrer Abfrage am ehesten entspricht, um die Details der Ausrichtung anzuzeigen. Ausgerichtete Nukleotide werden durch kurze vertikale Linien verbunden, und nicht übereinstimmende Nukleotide haben Lücken zwischen ihnen. Konzentrieren Sie sich auf die identifizierten nicht übereinstimmenden Regionen, überarbeiten Sie die Reihenfolge und wiederholen Sie die BLAST-Suche, falls gewünscht.\nDie Identifizierung von Bakterienarten ist wichtig für verschiedene Forscher, sowie für diejenigen im Gesundheitswesen. 16S rRNA-Sequenzierung wurde ursprünglich von Forschern verwendet, um phylogenetische Beziehungen zwischen Bakterien zu bestimmen. Im Laufe der Zeit wurde es in metagenomischen Studien implementiert, um die biologische Vielfalt von Umweltproben und in klinischen Laboratorien als Methode zur Identifizierung potenzieller Krankheitserreger zu bestimmen. Es ermöglicht eine schnelle und genaue Identifizierung von Bakterien in klinischen Proben, was eine frühere Diagnose und eine schnellere Behandlung von Patienten erleichtert.


Sigmund Freud Privatuniversität Wien | AustriaWiki im Austria-Forum\n> Sigmund Freud Privatuniversität Wien\nWien, Österreich, 2., Freudplatz 1\nDie Sigmund-Freud-Privatuniversität Wien (SFU) wurde im Jahr 2005 gegründet und ist die größte Privatuniversität in Österreich.\nDie Gründungsabsicht der SFU wurde im Dezember 2003 bekannt gegeben. Man wolle ein praxisbezogenes und akademisches Studium der Psychotherapiewissenschaft anbieten. Die Psychotherapie sei zwar schon lange ein wichtiger Teil des Gesundheitswesen, aber es gebe bisher kein ordentliches Studium für diese Disziplin. Im Jahr 2005 wurde die SFU vom österreichischen Akkreditierungsrat als Privatuniversität akkreditiert.\nNach fünfjähriger Planungszeit wurde im Jahr 2013 mit dem Bau des neuen Hauptgebäudes der SFU (ein Studiengebäude der Wirtschaftsuniversität Wien) begonnen und im Februar 2015 am Freudplatz 1 im Bezirk Leopoldstadt bezogen. Davor befand sie sich in einem ehemaligen Finanzgebäude in der Schnirchgasse im Bezirk Landstraße.\nIm Jahr 2016 war die SFU die erste Privatuniversität, an welcher ein rechtswissenschaftliches Studium akkreditiert wurde (Bachelor Rechtswissenschaften). Im selben Jahr wurde auch der Masterstudiengang der Rechtswissenschaften akkreditiert und mit dem Bau eines neuen Fakultätsgebäudes gegenüber dem SFU Hauptgebäude begonnen. Der Neubau am Freudplatz 3 für die Medizinische und die Juristische Fakultät wurde im März 2019 eröffnet.\nAls reine humanwissenschaftliche Universität gestartet, bestehen heute Fakultäten für Psychotherapiewissenschaft, Psychologie, Medizin und Rechtswissenschaften. Die SFU hat auch Standorte in Linz, Berlin, Ljubljana, Mailand und Paris.\nDas Studienangebot umfasst neben Bachelor, Master und Doktorat der Psychotherapiewissenschaft auch Bachelor und Master in Psychologie. Beide Studienarten werden auch in englischer Sprache angeboten.\nAußerdem bietet die SFU Wien das Bachelor- und Masterstudium der Humanmedizin, Zahnmedizin und Rechtswissenschaften an. Ein Bachelor- und Masterstudium der Sportwissenschaften befindet sich in der Akkreditierung.\nDarüber hinaus können Universitätslehrgänge und Weiterbildungsangebote absolviert werden.\nDekanin: Jutta Fiegl\nDie Fakultät für Psychotherapiewissenschaft nimmt eine Vorreiterrolle im Entwicklungsprozess der psychotherapiewissenschaftlichen Forschung ein und beherbergt aktuell zehn Forschungsinstitute. Seit 2007 bietet die SFU neben den Studiengängen Bakkalaureat und Magisterium auch ein Doktoratsstudium für Psychotherapiewissenschaft an.\nIn der SFU stehen acht Psychotherapieschulen (Psychoanalyse, Individualpsychologie, Systemische Therapie, Integrative Gestalttherapie sowie in Kooperation mit anderen Ausbildungsträgern Personzentrierte Psychotherapie, Verhaltenstherapie, Existenzanalyse, Transaktionsanalyse) zur Auswahl.\nDie Fakultät für Psychotherapiewissenschaft betreibt fünf psychotherapeutische Ambulanzen in Wien sowie weitere in Berlin, Paris und Ljubljana.\nDekan: Gerhard Benetka\nAn der Fakultät für Psychologie werden ein Bachelor- und Masterstudiengang sowie ein PhD-Programm in Psychologie angeboten. Im Wintersemester 2019/20 startete zusätzlich der Bachelor- und Master-Studiengang Psychologie in englischer Sprache.\nDie Fakultät für Psychologie betreibt Ambulanzen in Wien und Mailand.\nDekan: Christian Kratzik\nDie Fakultät für Medizin bietet die Studien der Human- und Zahnmedizin in Bachelor- und Master-Studiengängen an, Absolventen sind Doktor der gesamten Heilkunde (Dr. med. univ.) bzw. Doktor der Zahnmedizin (Dr. med. dent.).\nIm Bachelor erlernen die Studenten die Grundlagen des medizinischen Wissens bei enger Verflechtung von vorklinischen und klinischen Fächern. Es ist die gemeinsame Grundlage für Human- und Zahnmediziner. Das Studium zeichnet sich durch frühen Patientenkontakt, Vermittlung von umfangreichen Diagnosekenntnissen und dem Erlernen ärztlicher Gesprächsführung aus. Die separaten Master-Studiengänge für Human- oder Zahnmedizin sind geprägt von der Vertiefung des medizinischen Wissens bis hin zur Therapie, von Forschung v. a. im Rahmen der Masterarbeiten und von einem Klinisch-Praktischen Jahr in Krankenhäusern bzw. in der Universitätsklinik für Zahnheilkunde der SFU (Zahnambulatorium).\nDekan: Bernd-Christian Funk\nEin Jus-Studium in Wien nach dem Bologna-Modell mit Bachelor (LL.B., 6 Semester) und Master (LL.M., 4. Semester).\nDas Studium wird als Vollzeit–Präsenzstudium angeboten.\nHomepage der SFU\n1 2 Studierende an Privatuniversitäten 2018/19 nach Universität (PDF), Statistik Austria. Abgerufen am 4. März 2020\n↑ Personal an Privatuniversitäten, unidata.gv.at. Abgerufen am 4. März 2020\n↑ Gründungsabsicht der Sigmund Freud-Privatuniversität Wien - SFU, Presseaussendung am 2. Dezember 2003, ots.at Abgerufen am 4. März 2020\n↑ Ministerium erteilt positiven Bescheid für Sigmund Freud Privatuniversität Wien, Presseaussendung am 5. September 2005, ots.at Abgerufen am 4. März 2020\n↑ Gleichenfeier der Sigmund Freud Privatuniversität, der Wirtschaftsuniversität Wien und der Akademikerhilfe, Presseaussendung am 12. Juni 2014, ots.at. Abgerufen am 4. März 2020\n↑ SFU hat neuen Campus im Prater bezogen, Presseaussendung am 10. Februar 2015, ots.at. Abgerufen am 4. März 2020\n↑ Rechtswissenschaftliches Studium erstmals an einer Privatuniversität, Presseaussendung am 28. April 2016, ots.at. Abgerufen am 4. März 2020\n↑ Jus an der SFU – Ja zum Masterstudium, Presseaussendung am 30. Juni 2016, ots.at. Abgerufen am 4. März 2020\n↑ Die Sigmund Freud PrivatUniversität eröffnet hochmodernes Fakultätsgebäude für 1.400 Studierende, Presseaussendung am 7. März 2019, ots.at. Abgerufen am 4. März 2020\n00V – D Universitäten in Österreich\nDer Text dieser Seite stammt aus dem Wikipedia Artikel zu Sigmund Freud Privatuniversität Wien (13.03.2020, Autoren), lizenziert unter Creative Commons Namensnennung - Weitergabe unter gleichen Bedingungen 3.0 Unported (CC BY-SA 3.0). Informationen zu den Urhebern und zum Lizenzstatus eingebundener Mediendateien (etwa Bilder oder Videos) können im Regelfall durch Anklicken dieser abgerufen werden. Möglicherweise unterliegen die Inhalte jeweils zusätzlichen Bedingungen.\nEine frühere Version (vom 16. Januar 2017) dieses Beitrags wurde verifiziert.


Referendum gegen Nachrichtendienstgesetz ist auf dem Weg\n22.09.2015, 15:2122.09.2015, 15:24\nSollte das Nachrichtendienstgesetz am Freitag in der Schlussabstimmung angenommen werden, wird die Piratenpartei am 6. Oktober den Startschuss für ein Referendum geben. Auch die Grünen und die JUSO wollen ein solches unterstützen.\nDie Piratenpartei startete am Dienstag einen letzten Aufruf, um die Parlamentarier vor der Schlussabstimmung umzustimmen. Mit dem Nachrichtendienstgesetz könnten zwei Jahrhunderte Neutralität mit einem Digitalkrieg jenseits jeder demokratischen Kontrolle zu Ende gehen, warnte die Piratenpartei in ihrer Mitteilung.\nEs sei beunruhigend, dass viele Parlamentarier einen «Polizeistaat» schaffen wollten, hiess es weiter. Das Gesetz sei ein Angriff auf den Rechtsstaat, die Privatsphäre sowie die Menschenrechte.\nSollten die Räte das Gesetz am Freitag in der Schlussabstimmung annehmen, was sehr wahrscheinlich ist, werde die Partei das Referendum lancieren.\nAuch die Grünen und die JUSO werden das Referendum unterstützen, wie die beiden Parteien auf Anfrage der Nachrichtenagentur SDA sagten. Die SP habe darüber noch nicht definitiv entschieden, sagte Mediensprecher Michael Sorg. (wst/sda)


Apple Mac mini Z0R7MGEN2S2000136163 Mini PC - Mini PCs | Mindfactory.de - Hardware, Notebooks\nApple Mac mini Z0R7MGEN2S2000136163 Mini PC\nMit leistungsstarken Intel Core Prozessoren nimmt es der Mac mini problemlos mit doppelt so großen Computern auf. Die Intel Iris Graphics 5100 Grafikkarte bringt eine höhere Pixelleistung als die integrierten Grafikprozessoren der Vorgängergeneration. So läuft alles flüssiger und schneller, egal ob Sie Videos schauen oder Spiele spielen. Der leistungsstarke Intel-Core i5 Prozessor sprintet mit einer Taktung von 2 x 2.60 GHz nach vorne. Die 8 GB Arbeitsspeicher erledigen ihr übriges, um ein verzögerungsfreies Arbeiten zu ermöglichen. Und dank des 1 TB großen Speichers können Sie all Ihre Daten sicher speichern. Somit steigern Sie Ihre Produktivität auf ein neues Level.


Während der ersten rund 500 Millionen Jahre nach ihrer Entstehung blieb die Temperatur der Erde relativ stabil bei 875 Grad Celsius. Die Erde setzte sich vor allem aus Eisen und Silikaten zusammen, enthielt aber auch kleine Mengen radioaktiver Elemente, und zwar hauptsächlich Uran, Thorium und Kalium. Im Verlaufe des Zerfallsprozesses dieser Elemente entstand Strahlung, die die Erde langsam erhitzte, was zur Folge hatte, dass das Eisen und die Silikate schmolzen. Das Eisen sank zum Zentrum ab und drängte dadurch die leichteren Silikate an die Oberfläche. Dadurch wurden die gewaltigen Prozesse in Gang gesetzt, die die Erdoberfläche so geformt haben, wie wir sie kennen, und die sie auch heute noch prägen.\nZwischen dem Kern aus Eisen und der Kruste aus festem Gestein befindet sich ein Mantel aus schwerem Silikatgestein von etwa 2800 Metern Dicke. Der Mantel ist weder fest noch flüssig, sondern von einer zähflüssigen Konsistenz, auf der die Kruste schwimmt. Diese Kruste besteht nicht aus einem zusammenhängenden Stück fester Masse, sondern aus mehreren voneinander getrennten Platten, an deren Grenzen die geologischen Prozesse weiterhin auf die Erdoberfläche einwirken.\nDie Erdatmosphäre weist eine Dicke von mehr als 640 Kilometern auf. Von Meereshöhe bis in eine Höhe von etwa 95 Kilometern besteht die Atmosphäre aus 78 Prozent Stickstoff, 21 Prozent Sauerstoff und zu einem Prozent aus einer Mischung von Argon, Kohlendioxid, Neon, Helium, Krypton, Xenon und winzigen Mengen von ein paar weiteren Gasen.\nDer einzige Mond der Erde ist, verglichen mit den Trabanten der anderen Planeten, groß; eine Ausnahme bildet der Planet Pluto ist ein Plutoid (eine Unterklasse von Zwergplaneten, die unsere Sonne jenseits der Neptunbahn umrunden) und das prominenteste Objekt des Kuipergürtels.Pluto. Aus diesem Grund bezeichnen die Astronomen das Erde-Mond-System als Doppelplaneten. Durch seine Größe und die dadurch wirksame Gravitationskraft übt der Mond einen bedeutenden Einfluss auf die Erde aus und ist zum Beispiel für die Ebbe und Flut unserer Meere verantwortlich.\nSeitenaufrufe: 268816 Besucher: 63774 davon heute: 29 Gestern: 23


Sprosse: November 2012\nHeute habe ich mal was anderes. Wir hatten uns vor drei Wochen ganz spontan dazu entschlossen, doch noch zur Spiel'12 zu fahren (Ist ja quasi ein Heimspiel für uns).\nVorher also noch recherchiert, was es an Neuigkeiten zum Thema Carcassonne und Dominion gibt und dann ging es los.\nUnd ja, wir sind fündig geworden :-)\nZu Hause wollte ich alles schön in unseren Carcassonne Koffer packen, den ich euch hier schon vorgestellt hatte. Aber leider passte nun beim besten Willen nicht mehr alles hinein. Da mein Freund vor kurzem aber noch Verpackungsmaterial mitgebracht hatte, habe ich kurzerhand einen zweiten Holzkoffer ausgekleidet und hier seht ihr nun das Ergebnis:\nGibt es vielleicht ein Pärchen (Raum Ruhrgebiet), das meinen Blog liest oder sich hierher verriert hat und sich auch für Gesellschaftsspiele wie Carcassonne oder Dominion interessiert? Wir suchen noch jemanden für gemeinsame Spieleabende. Dann meldet euch doch mal bei uns unter k.stroetgen(ät)gmx.de\nEingestellt von Sprosse um 11:47 1 Kommentar:\nWickelarmband mit Bolo-Lederband\nDann habe ich noch dieses Wickelarmband. Als ich vor kurzem mal durch die Stadt geschlendert bin, habe ich bei einem Juwelier im Fenster so ein Armband gesehen. Kurz überlegt! Achja, ein Stück Boloband habe ich bestimmt noch, einen Verschluss und ein paar Charms fanden sich auch noch und so habe ich mir viel Geld gespart indem ich es selber gemacht habe\nEingestellt von Sprosse um 11:22 Keine Kommentare:\nLange ist es her, dass ich was gepostet habe. Aber ich bin nunmal ein Quartalsknipser *g*\nAuch wenn ich es schon mal geschrieben habe, ich gelobe Besserung.\nHier nun ein paar Bilder von meiner neuesten Leidenschaft: Wickelarmbänder!!!\nSie gehen recht schnell und ich finde sie wirklich sehr wirkungsvoll. Da werden bestimmt noch einige folgen....\nEingestellt von Sprosse um 11:18 Keine Kommentare:


Serie A ⚽ Fußball Italien | ligaportal.at - Page #104\nBalotelli zurück zu Milan!\nMontag, 24. August 2015 11:01\nMario Balotelli war 2014 für 20 Millionen Euro vom AC Milan zum FC Liverpool gewechselt. Nun kehrt der egozentrische Stürmer in die Serie A zurück! Milan wird Balotelli vorerst ausleihen und 50 Prozent des\nFinancial Fairplay: Inter muss einen Star verkaufen!\nMontag, 17. August 2015 10:25\nInter Mailand muss sein 21-jähriges Talent Mateo Kovacic verkaufen! Grund ist die Financial Fairplay-Regel der FIFA. Der kroatische Nationalspieler wechselt um rund 32 Millionen Euro von Mailand zu Real Madrid! Mit\nJuventus gewinnt Supercoppa gegen Lazio! [Video]\nSamstag, 08. August 2015 17:12\nJuventus Turin hat sich nach dem Triple der vergangenen Saison nun auch den Supercup in Italien gesichert! Mit einem 2:0-Erfolg über Lazio Rom hat man auch diesen Titel in der Tasche. Getroffen haben die Neuen bei\nTriple-Tunnel im Testspiel! [Video]\nDienstag, 04. August 2015 13:02\nIn Testspielen wird es ja meist etwas langsamer angegangen. Doch auch das hat durchaus seine Vorzüge. Mudo Vazquez von US Palermo zeigte kürzlich im Testspiel gegen Lumezzane was er so drauf hat. Ein dreifacher\nBestätigt: Gomez wechselt zu Besiktas!\nDonnerstag, 30. Juli 2015 10:00\nWas sich bereits in den letzten Tagen abgezeichnet hat, ist nun offiziell! Mario Gomez wechselt in die Türkei zu Besiktas Istanbul! Die Türken leihen den deutschen Mittelstürmer für 3,5 Millionen Euro von Fiorentina\nTraumtor von Mexes entscheidet Mailand-Derby! [Video]\nSamstag, 25. Juli 2015 16:11\nIm Champions Cup in China trafen die beiden Mailänder Großklubs Inter Mailand und der AC Milan aufeinander. Viele Stars wurden noch geschont und so kam es nur zu wenig guten Torraumszenen. Das absolute Highlight war\nVidal-Wechsel zum FC Bayern so gut wie fix!\nMontag, 20. Juli 2015 18:12\nJuventus-Boss Giuseppe Marotta hat auf einer Pressekonferenz bestätigt, dass Arturo Vidal einen Fünfjahresvertrag bis 2020 beim FC Bayern unterschreiben wird. Rund 35 Millionen Euro soll die Ablöse für den Chilenen\nDarmian wechselt zu Manchester United!\nDonnerstag, 09. Juli 2015 08:56\nMatteo Darmian (25) wird vom FC Turin nach England zu Manchester United wechseln. Das bestätigte nun auch sein Trainer Giampiero Ventura gegenüber "Sky Sports Italia". Der italienische Rechtsverteidiger und\nPirlo wechselt nach New York!\nDienstag, 07. Juli 2015 07:25\nAndrea Pirlo verlässt die "alte Dame" und wechselt in die MLS nach New York! Laut Medienberichten wird der 34-Jährige fünf Millionen Euro pro Jahr verdienen. Der 115-malige Nationalspieler wird in New York unter\nSonntag, 05. Juli 2015 12:47\nChiles Superstar Arturo Vidal sieht seine Zukunft offenbar in Spanien bei Real Madrid. Laut der italienischen "Gazzetta dello Sport" hat sich der frisch gebackene Copa América-Sieger von Champions-League-Finalist Juventus Turin,\nManager bestätigt: Tévez von Juve zu den Boca Juniors!\nAC Milan mit Jackson Martinez einig!\nMilan will Zlatan zurück!\nGervinho verlässt AS Rom!\nJuventus holt sich 10. Coppa Italia-Titel! [Video]\nKhedira: Juventus statt Schalke?


Reviews : I AM A CURSE / Sequel For An Unforgiving Wreckage: Civil Wars :: ox-fanzine.de\nIst das echtes Gold da auf dem Cover? Sieht auf jeden Fall schick aus, das Inlay ebenfalls auf dicker Pappe, edel. Musikalisch sind I AM A CURSE weitaus weniger fancy unterwegs und klingen eher nach einer satten Prise Matsch.\nCrustiger Hardcore aus Nordwestfrankreich, das kennt man ja schon von BIRDS IN ROW, DIREWOLVES oder CALVAIIRE. Viel anders machen I AM A CURSE da auch nicht, aber das müssen sie auch nicht, um eine gute Scheibe Geballer abzuliefern.\nAb dem Opener „An unspoken drift from Scylla to Charybdis pt. II“ passiert das alles in Windeseile und prügelt beanstandungslos so an einem vorbei. Länger als zwei Minuten scheinen I AM A CURSE nicht stillhalten zu können, zeigen auch „The waves“ und das sechsminütige „...\nto give way to the pallid hue of despair“, das mit seinem abwechslungsreichen Arrangement das Highlight dieser Platte ist. „Sequel For An Unforgiving Wreckage: Civil Wars“ hat zwar einen langen Namen, musikalische Längen sucht man aber vergebens.\nIn sich ist diese Platte sehr stimmig und unterhaltsam. Dennoch, ein hohen Wiedererkennungswert kann man I AM A CURSE nicht attestieren, dafür sind die Ähnlichkeiten zu oben genannten Bands zu offensichtlich.


SR-Tatort "Totenstille" nominiert für den Grimme-Preis 2017 - Saarländischer Rundfunk - Pressemitteilung\nBoxId: 634175 – SR-Tatort "Totenstille" nominiert für den Grimme-Preis 2017\nPressemitteilung BoxID: 634175 (Saarländischer Rundfunk)\n+49 (681) 602-2040\nPressemitteilung SR-Tatort "Totenstille" nominiert für den Grimme-Preis 2017 weiterempfehlen\nSR-Tatort "Totenstille" nominiert für den Grimme-Preis 2017\n(lifePR) (Saarbrücken, 18.01.17) Der Tatort „Totenstille“ des Saarländischen Rundfunks, ausgestrahlt am 24. Januar vergangenen Jahres im Ersten, ist in der Kategorie „Spezial“ für „die Idee und das Konzept der Einbindung der Gebärdensprache im Tatort“ nominiert für den 53. Grimme-Preis.\nDer Intendant des Saarländischen Rundfunks Professor Thomas Kleist sagte: „Wir freuen uns über die Nominierung für den renommierten Grimme-Preis. Der Kriminalfall bot den Fernsehzuschauern, auch weil tatsächlich gehörlose Schauspieler und Schauspielerinnen zum Einsatz kamen, einen tiefen Einblick in das Leben gehörloser Menschen. Menschen mit Behinderungen in fiktionale Filme mit einzubeziehen ist ein sicherer Weg, Barrieren abzubauen. Damit haben wir einer von den Behindertenverbänden häufig erhobenen Forderung entsprochen.“\nZum Inhalt: Während in einer Gaststätte ein Leichenschmaus für den bekannten Leiter einer Gehörlosenschule stattfindet, kommt beim Sex im Hotelzimmer ein Stockwerk höher eine Frau ums Leben. Georg, ihr Sex-Partner, ruft einen Freund an, um die Leiche zu entsorgen. Er fühlt sich bei dem Telefonat im Auto unbeobachtet, aber Ben, ein gehörloser Gast der Beerdigungsfeier liest den Telefondialog von den Lippen ab und versucht hinterher den Täter zu erpressen. Nachdem die Polizei die Leiche gefunden und identifiziert hat, ermitteln Kriminalhauptkommissar Jens Stellbrink und sein Team zunächst unter den Gästen der Beerdigungsgesellschaft, die aber mit der Toten in keiner Verbindung stehen. Als aber dann eine schwerhörige junge Frau ermordet aufgefunden wird, hat Stellbrink einen Schlüssel zur Lösung in der Hand, weil beide Fälle über Ben miteinander verbunden scheinen…\nDer nächste Tatort des Saarländischen Rundfunk mit dem Titel „Söhne und Väter“ läuft am Sonntag, 29. Januar, 20.15 Uhr, im Ersten.


Weh – Ingenmannsland (Soulseller Records, 04.12.2015) – HandwrittenMag\nDüster, melancholisch, naturverbunden – drei Worte die bestens zum Projekt Weh passen. Weh, das ist der Norweger Erik Evju. Weh, das ist spartanischer skandinavischer Folksound. Meist recht sparsam instrumentiert (in der Regel reichen Akustikgitarre und Gesang), aber doch voller Atmosphäre. Diese mutet sich selten regelrecht Gothic-like an.\nMan sieht: also kein 08/15-Sound von der Stange, sondern durchaus eigenwillig und interessant. Man muss sich allerdings auf das Ganze einlassen können. Denn beim ersten vorsichtigen Reinhören klingt „Ingenmannsland“, das bereits dritte Weh-Album, arg unspektakulär. Seinen Anteil dabei hat sicherlich auch der teils sakral anmutende Gesang, der mehr mit seinen Worten also durch Lebhaftigkeit beeindruckt.\nDoch ist man bereit sich darauf einzulassen, entfaltet sich eine weitläufige Welt vor dem geistigen Auge. Bilder von schneebedeckten Bäumen, eisigen Nächten und einem warm prasselnden Lagerfeuer. Also dann doch wieder spannend?\nJa, durchaus. Ein angenehm fließendes Album für kalte und dunkle Winterabende. Ambiente Folkmusik wie es sie manchmal eben braucht…\n3. The stars and the moon\nPrevious Tourdaten – Baroness\nNext Triddana – The Power & The Will (Power Prog Records, 11.12.2015)


Was sollte ich betrachten, wenn ich Schränke anbringe?\nViel sagen Fachleute der Immobilien und der Innenarchitektur, dass die wichtigsten Räume in einem Haus die Küche und das Badezimmer sind. Vor dem Verkauf ihrer Häuser, aus diesem Grund unternehmen Hauptinhaber eine Anstrengung, ihre Küchen und Badezimmer aktualisiert zu halten, während sie in ihren Häusern leben und andere die Wahl treffen, um ihre Küchen zu aktualisieren. Unabhängig davon den Grund für die Aktualisierung oder die Umgestaltung eines Hauses, sind die Schränke ein Hauptbestandteil des Updates. Schränke können zu den organisatorischen oder Speicherzwecken wie einem Wäschereiraum oder -büro auch innen angebracht werden. Die Installierung der Schränke ohne Berufshilfe kann wie eine gewaltige Aufgabe scheinen, aber es ist mit der vorsichtigen Planung erreichbar und misst und zeichnet. Es gibt bestimmte zu betrachten Faktoren, wenn man Schränke anbringt.\nDer erste zu betrachten Faktor ist die genaue Position, die Sie die Schränke anbringen werden. Die Art und die Art des Schrankes, den Sie anbringen, muss mit der Wand und der Decke kompatibel sein, die sie in place halten. Nach der Deckenhöhe sowie alle ungleichen Punkte in der Decke, im Kronenformteil und in der Ordnung suchen. Deckenhöhe beeinflußt die Arten der oberen Schränke, um zu kaufen und anzubringen, weil es genügend Raum zwischen den Schränken und den Countertops geben muss. Mit einem Experten oder einem Repräsentanten an einem Hauptverbesserungsspeicher überprüfen, um zu finden, was der Industriestandard für den Abstand ist.\nSchränke sollten immer gleich angebracht werden. Wenn die Decke ungleiche Punkte hat, wird das Lassen eines Abstandes zwischen der Decke und dem Schrank empfohlen. Der Abstand kann mit Kronenformteil oder -ordnung oben umfaßt werden. Einige Leute beschließen auch, das Kronenformteil oder -ordnung zwischen ihren oberen Schränken und der Decke als Dekoration zu benutzen. Das selbe beantragt den Fußboden, der alle untereren Schränke hält. Ein anderer Faktor, zum zu betrachten wann, Schränke anbringend, ist die Art zu verwenden der Schränke. Es gibt viele Arten Schränke, die vom unterschiedlichen Material, von der Hardware und von der dekorativen Art auf den Türen und den Fächern hergestellt werden. Es gibt drei Arten Schränke, zum vom nämlich Vorrat zu wählen, halbkundenspezifisch und kundenspezifisch.\nAuf lagerschränke werden von einem Speicher oder von einem Katalog angeboten, während sie sind. Sie können nicht geändert werden oder geändert werden, um die Position zu passen, die sie innen angebracht sind. Halbkundenspezifische Schränke können an Größe geändert werden, um einen bestimmten Fußbodenplan zu passen und dem Kunden mehr Wahlen in den Tür- und Fachentwürfen auch anzubieten. Kundenspezifische Schränke werden spezifisch für die Position und den Fußbodenplan hergestellt, die sie innen angebracht sind. Sie bieten die beste Flexibilität im Material an, sortieren und entwerfen. Sie sind auch die teuerste Art der Schränke.\nDie Werkzeuge, die für die Installierung der Schränke benötigt werden, ist ein anderer zu betrachten Faktor. Zu sprechen ist am besten, mit der Person, die Sie die Schränke von für einer kompletten Liste aller Werkzeuge kaufen, die für die Installierung der Schränke benötigt werden. Einige der Werkzeuge sind ein Niveau, ein Bolzensucher, eine Markierung und ein Bohrgerät.\nVorsichtige Planung, genaue messende und zahlende Aufmerksamkeit zum Detail führt zu ein erfolgreiches Schrankinstallationsprojekt. Beendigung solch eines Projektes spart Geld auf der Arbeit, die von den Fachleuten für die Installierung der Schränke in ein Haus aufgeladen wird.


Stadtservice-Mitarbeiter rettet Katzenbabys aus Abfallcontainer\nBeim Abladen des Abfalls aus einem Abrollcontainer hörte der Mann das Miauen der kleinen Vierbeiner. Er machte sich auf die Suche nach den jungen Tieren und entdeckte sie in und neben einem Abfallhaufen.\nDie Kätzchen wurden sofort von Mitarbeitern des Stadtservices ins Tierheim gebracht und werden dort nun versorgt. Sie befinden sich in einem sehr schlechten Zustand. Deshalb bittet das Tierheim darum, von Anfragen nach einer Adoption der kleinen Katzen vorerst abzusehen.\nWie die Jungtiere auf den Betriebshof kamen, ist nicht bekannt.


Der für Samstag, den 28. März 2020 geplante S-PowerGiro Flohmarkt in der Sparkasse Bad Neustadt wird aufgrund der aktuellen Ereignisse um den Coronavirus verschoben.\nEine Bekanntgabe des neuen Termins erfolgt rechtzeitig.\nSchnäppchen machen ist einfach.Am Samstag, den 28. März 2020 findet von 10.30 Uhr bis 13.30 Uhr wieder der große S-PowerGiro Flohmarkt in der Sparkasse Bad Neustadt statt.\nDie Schalterhalle wird an diesem Tag zur bunten Markthalle und die Beraterplätze zu Verkaufsständen - auch die Tiefgarage wird mit geschäftstüchtigen Kindern gefüllt sein. Junge Sparkassenkunden verkaufen Spielsachen, CD’s, Bücher und alles was Kinder gerne haben und mögen. Dieser Flohmarkt ist aber nicht nur was für Kids, denn für alle Erwachsenen bietet sich die Gelegenheit Schnäppchen und Geschenke zu erwerben.\nFür gute Stimmung sorgt ein DJ und auch für Essen und Getränke ist bestens gesorgt.\nSo sah es letztes Jahr in der Schalterhalle während des großen S-PowerGiro-Flohmarkts aus\nHinweiseDie Sparkasse Bad Neustadt a. d. Saale organisiert für ihre S-PowerGiro-Kids einen Flohmarkt. Dabei wird den Kindern beim Verkauf ihrer Spielsachen ermöglicht, selbständig unter kaufmännischen Aspekten zu handeln, sich im Kauf und Verkauf zu üben und gleichzeitig Spaß zu haben.\nZur ordnungsgemäßen Durchführung müssen hierbei jedoch einige Regeln beachtet werden:\nAlle jungen Kunden zwischen 9 und 13 Jahren mit einem S-Power-Girokonto können bei unserem Flohmarkt einen Verkaufsstand bekommen. Die ersten 130 Anmeldungen werden berücksichtigt. Ein rechtlicher Anspruch darauf besteht nicht.\nDer Flohmarkt findet am Samstag, den 28.03.2020 von 10.30 Uhr bis 13.30 Uhr statt. Die Stände können ab 9.30 Uhr aufgebaut und gestaltet werden. Bitte haben Sie Verständnis dafür, dass die Stände aus organisatorischen Gründen nicht früher bezogen werden können. Es wird darum gebeten, die Stände wieder ordentlich zu verlassen.\nAuf dem Flohmarkt können Einzelstücke (Spielzeug und Dinge, die sich im Laufe der Zeit üblicherweise in einem Kinderzimmer/Haushalt angesammelt haben) angeboten werden.\nDas Anbieten und der Verkauf von Kriegsspielzeug, Kriegsspielen für den PC und Waffen sind nicht erlaubt.\nFlohmarktstände sind vorhanden. Ein Stand besteht aus einem Biertisch und einer Bierbank - eine größere Verkaufsfläche ist nicht möglich. Jedes Kind bekommt einen Stand zugewiesen.\nDie Sparkasse übernimmt für Unfälle oder Schäden jeglicher Art im Veranstaltungsbereich keinerlei Haftung.\nEine Teilnahme am Flohmarkt ist nur mit vorheriger Anmeldung möglich. Wir wünschen viel Spaß und einen guten Verkauf!


Verbandstag Archive - Gehörlosen-Sportverband Sachsen e.V.\n12. März 201413. März 2014Verbandstag\nDer Verbandstag 2014 mit Wahl des GSVS fand auf Einladung des Dresdner Gehörlosen-Sportvereins am 08.März in der Sportpension Dresden statt. Diese liegt in einer sehr schönen Umgebung oberhalb der Stadt …\n14. März 201321. November 2013Verbandstag\nDer Verbandstag 2013 des GSVS fand auf Einladung des Gehörlosen-Sportvereins Zwickau am 09.März in der Sportschule Werdau statt. Vielen der 27 Delegierten und Gäste war die Sportschule von den Übungsleiter-Lehrgängen …\n15. März 201221. November 2013Verbandstag\nDer Verbandstag 2012 des GSVS fand auf Einladung des Gehörlosen-Sportvereins Bautzen am 10. März im Residence-Hotel Bautzen statt. Uns empfingen ein ausgesprochen nobles Ambiente, ein freundliches Personal und ein mit …\n15. März 201021. November 2013Verbandstag\nNorman Steinbach als Sportpräsident wiedergewählt Am 13.März 2010 trafen sich die Delegierten der im Gehörlosen-Sportverband Sachsen e.V. zusammengeschlossenen Vereine in Dresden zu ihrem Verbandstag mit Wahl. Tagungsort war die Bergwirtschaft …\n5. März 200821. November 2013Verbandstag\nIm schönen neuen Gehörlosenzentrum Chemnitz trafen sich am 01. März 2008 die Delegierten des Verbandstages des GSVS und ihre Gäste. Präsident Norman Steinbach konnte im Rechenschaftsbericht des Vorstandes ein erfolgreiches …\n7. März 200721. November 2013Verbandstag\nAm 03. März trafen sich gehörlose Sportler aus dem ganzen Freistaat Sachsen im Gehörlosenzentrum Zwickau zu ihrem jährlichen Verbandstag. Präsident Norman Steinbach konnte 24 Sportfreundinnen und Sportfreunde begrüßen. Besonders herzlich …\n15. März 200621. November 2013Verbandstag\nBautzen ruft! Verbandstag des GSVS am 11.3.2006 Am 11.März 2006 führte der GSVS seinen alljährlichen Verbandstag durch. Diesmal war der GSV Bautzen unser Gastgeber. Im Versammlungslokal des Bautzener Brauhauses kamen …


Beleuchtung: Im Trend: Sparsame Hallenbeleuchtung - materialfluss ONLINE\nWie eine Anwendung von Lunux in einer Produktionshalle des Metall- und Kunststofftechnikunternehmens KDM Mertens Gruppe in Gütersloh zeigt, hat moderne LED-Technik die Beleuchtung von Lager- und Logistikhallen revolutioniert. Mittlerweile gehört sie zum Industriestandard moderner Hallenausstattung.\nDie Produktionshalle der KDM Mertens Gruppe mit der neuen LED-Lichtlösung von Lunux. Fotos: Lunux\nLEDs sind lichtemittierende Halbleiter bzw. Leuchtdioden, die im Gegensatz zu konventionellen Lösungen, wie Leuchtstofflampen oder Glühbirnen, deutlich sparsamer im Verbrauch sind. Neben der Energieeffizienz zeichnen sich LEDs vor allem durch ihre lange Lebensdauer von bis zu 80.000 Betriebsstunden aus. Gerade bei Logistik- und Lagerhallen mit schwer zugänglichen Leuchten aufgrund der Hallenhöhe, ist dies ein wesentlicher Vorteil. Denn durch ihre lange Lebensdauer sind sie wenig wartungsintensiv.\nHallenbeleuchtung muss in vielerlei Hinsicht besonderen Anforderungen gerecht werden. Lager sind meist große Hallen mit hohen Regalen und schmalen Gängen, in denen sich Mitarbeiter oder Transportfahrzeuge sicher bewegen müssen. Es bedarf einer leistungsstarken Beleuchtungsanlage und einem ausgeklügelten Beleuchtungskonzept, um die Halle und ihre schmalen Gassen homogen auszuleuchten und eine gleichmäßige Helligkeit zu erzeugen. Produktionshallen wiederum stellen besonders hohe Anforderungen an die Robustheit und Widerstandskraft der Beleuchtung. Die dortige Beleuchtung muss Schmutz, Staub und Temperaturschwankungen trotzen können. Zeitgleich müssen für Mitarbeiter optimale Sehbedingungen und ausreichend Sicherheit geschaffen werden und auch über Notbeleuchtungssysteme muss nachgedacht werden.\nProjektbeispiel: Die Produktionshalle der KDM Mertens Gruppe\nDie Lunux Q-Rail Double Cross gibt es in verschiedenen Ausführungen und Optiken. Sie eignet sich für alle Arten von Logistik- oder Produktionshallen und kann auch mit einem DALI-Steuerungssystem ausgestattet werden.\nIm August 2016 wurde der deutsche Lichtspezialist Lunux mit der Lichtausstattung der rund 600 qm großen Produktionshalle der KDM Mertens Gruppe in Gütersloh beauftragt. KDM ist ein Hersteller von Kunststoffteilen für die Automobilindustrie. Gearbeitet und produziert wird in der Halle im Drei-Schichten-Betrieb. Also rund um die Uhr. Da die Produktionshalle vor der Modernisierung mit konventioneller Lichttechnik, insbesondere Leuchtstoffröhren, beleuchtet wurde, waren die Energiekosten entsprechend hoch. Primäres Ziel der Beleuchtungsmodernisierung und Umstellung auf LED-Technologie war daher eine signifikante Reduktion der Energiekosten während die Lichtqualität zeitgleich verbessert werden sollte. Durch die Umstellung auf LED konnten Energieeinsparungen von 40 Prozent im Praxisbeispiel realisiert werden, weshalb sich die Investitionskosten bereits nach zwei Jahren amortisierten.\nUm eine homogene und effiziente Beleuchtung zu realisieren, entschied sich das Unternehmen nach ausführlichen Beratungsgesprächen mit den Lunux-Experten für das Lichtbandsystem Q-Rail Double Cross. Eine Leuchte die aufgrund der modularen Technik mit verschiedenen Optiken ausgestattet werden kann und sich somit flexibel für unterschiedliche Anwendungsgebiete und Hallenbereiche eignet. Aufgrund der Deckenhöhe, und um eine homogene Hallenausleuchtung zu garantieren, wurde im Projekt eine breitstrahlende Optik gewählt. Das Stahlprofil der Leuchte ist nicht nur robust, sondern fügt sich auch optisch in das Design der Halle perfekt ein.\nGutes Arbeiten in neutralweißem Licht\nInsgesamt sieben parallel verlaufende Lichtbänder wurden mit einer Kettenabhängung unter die Decke montiert. Eine direkte Befestigung an der Decke war wegen deren Beschaffenheit nicht möglich.\nQ-Rail bietet als Montagemöglichkeiten: Kettenabhängung, Systemdeckenabhängung und Deckenmontage. So wurden insgesamt 91 breitstrahlende LED-Module installiert mit einer Farbtemperatur von 4.000 Kelvin. Das entspricht einem neutral-weißen Licht, das für ideale Arbeitsbedingungen in Hallen sorgt. Eine besondere Herausforderung im Projekt war die Nutzung der Halle im Drei-Schicht-Betrieb. Um die Betriebsabläufe nicht zu stören wurde die Installation abschnittsweise vorgenommen, so dass während der Lichtinstallation ganz normal weitergearbeitet werden konnte und keine Ausfallzeiten anfielen. Die Installation dauerte insgesamt nur eine Woche. Diese Schnelligkeit konnte aufgrund des Quickmontage-Systems bewerkstelligt werden: Die Lichteinsätze können werkzeuglos eingesetzt werden. Ein System, das sich später auch während des Betriebs der Anlage bezahlt macht, denn die Lampen können ohne großen Aufwand ausgetauscht werden.


Autopsy Simulator: Leichenschnippeln mit Horror-Elementen | gaming-grounds.de\nvon Alexander Panknin 15. Dezember 2021\nAutopsy Simulator: Leichenschnippeln mit Horror-Elementen\nJeder Tote hat seine eigene Geschichte… Quelle: PlayWay, Woodland Games\nAutopsy Simulator Screenshots\nEines der wohl am inflationärsten abgehandelte Genre der vergangenen Jahre dürfte vermutlich das der Simulationen sein. Es gibt kaum einen Lebensbereich, der nicht durch eine eigene Simulation abgedeckt worden ist. So mag sicherlich auch diese Meldung kaum verwundern, denn nun wurde der „Autopsy Simulator“ angekündigt.\nJa, ihr habt richtig gehört. Das neue Spiel versetzt euch in die Rolle eines Pathologen, der in der Gerichtsmedizin an verstorbenen Unglückseligen herumschnippelt. Verantwortlich für dieses Werk ist der polnische Entwickler Woodland Games, der neben dem Autopsy Simulator noch an den Titeln Taxi Simulator und Urban Explorer arbeitet. Alle drei Projekte haben noch kein festes Release-Datum, in die Pathologie soll es für die Spieler aber bereits 2022 auf Steam gehen.\nHier könnt ihr euch einen ersten Eindruck von Autopsy Simulator verschaffen:\n„Autopsy Simulator Trailer: Düsterer Pathologie-Horror“ direkt öffnen\nIn Autopsy Simulator übernehmen die Spiele die Rolle von Jack, einem Pathologen mittleren Alters. Sein Leben hat sowohl privat als auch beruflich eine eher schlechte Wendung genommen. Nach einem Karriereknick war der Verlust seiner geliebten Frau buchstäblich der letzte Nagel im Sarg. Erschüttert und deprimiert von seinem Dasein lebt Jack sein tägliches Leben wie ein Zombie, er fühlt sich wie in einer leeren Hülle.\nEines Tages jedoch findet er bei einer Routineautopsie den Verlobungsring seiner verstorbenen Frau, der in der Leiche versteckt war. Ein schwer verdaulicher Schock, Jack fühlt sich, als würde ihn die Vergangenheit einfach nicht loslassen wollen. Lange hat er sich dagegen gesträubt, doch nun muss er es endlich anpacken und sich dieser Angelegenheit annehmen, zusammen mit all ihren Dämonen.\nIm Laufe der Handlung werden weitere Elemente des Geheimnisses aufgedeckt. Um die Wahrheit ans Licht zu bringen, muss Jack einen Kampf mit den finsteren Mächten und seinen eigenen Gedanken führen. Dabei setzt das Spiel auf hausgemachte Horror-Effekte.\nFür die Autopsie stehen dem Pathologen Jack verschiedene Werkzeuge zur Verfügung.\nWährend des Spiels müssen verschiedene Berichte geprüft und Akten durchsucht werden, um die Geschichte hinter den Opfern herauszufinden, die auf Jacks Tisch liegen. Um eine Autopsie gut durchführen zu können, muss man diese Menschen von innen … und außen kennenlernen.\nJeder Fall im Spiel wurde von den Entwicklern zusammen mit echten Pathologen und Gerichtsmedizinern erstellt, sodass die Spieler das Gefühl haben, an einer echten Autopsie teilzunehmen. Besonderer Wert wurde dabei auf ein detailliertes Mapping der Organe gelegt. Der Fokus liegt auf einer realistischen Darstellung. Daher wurden sowohl die Autopsien, Rechnungen, Verletzungen und die Hintergründe der Fälle mit viel Liebe zum Detail erstellt.\nDer Autopsy Simulator bietet eine neue Mischung aus Simulator und Horrorspiel. Dies ist eine bisher einzigartige Kombination, die realistische Autopsien mit einer gruseligen Geschichte verknüpft.\nHier findet ihr die Steam-Seite zum Spiel: Autopsy Simulator


Meisterklasse – Veranstaltungen - Niederrhein-Kult\n(c) Oper am Rhein\nKs. Linda Watson\nZum regelmäßigen Programm der jungen Sängerinnen und Sänger des Opernstudios gehören Meisterkurse bei international renommierten Künstlern. Diese geben in Intensivkursen von jeweils einer Woche ihr Wissen an die jungen Talente weiter und arbeiten mit ihnen an ihrer Gesangstechnik sowie der Interpretation von Liedern und Arien. Oft legen sie den Fokus auf Dinge, die den jungen Sängern gar nicht als Problem bewusst waren, oder ermutigen sie, einen anderen technischen Ansatz auszuprobieren, der ihnen beim Singen weiterhelfen kann.\nDen ersten Meisterkurs der Spielzeit 2018/19 gibt die italienische Sopranistin Barbara Frittoli, Ensemblemitglied der Wiener Staatsoper, die erstmals an der Deutschen Oper am Rhein zu Gast ist. Bereits zum wiederholten Mal leitet Anfang 2019 der rumänische Tenor und Gesangslehrer Marius Vlad, zu dessen erfolgreichen Schülern u.a. Bogdan Baciu und Operalia-Gewinnerin Adela Zaharia zählen, einen Kurs mit dem Opernstudio. Kammersängerin Linda Watson, die im März erneut einen Meisterkurs hält, ist als Ensemblemitglied dem Opernstudio besonders verbunden und arbeitet regelmäßig mit den jungen Sängerinnen und Sängern. Für den letzten Meisterkurs dieser Spielzeit kehrt der weltweit bekannte britische Bariton Sir Thomas Allen an die Deutsche Oper am Rhein zurück.\nIn den „Meisterklasse“-Konzerten präsentiert das Opernstudio ein Programm, das gemeinsam mit den Meisterkursleitern individuell erarbeitet wird. In der Spielzeit 2018/19 ist das Opernstudio mit den Meisterklasse-Konzerten wieder im maxhaus in der Düsseldorfer Altstadt und im Foyer des Opernhauses zu Gast.


machen dick dick - Männlichkeit Erweiterung Übung: wie einen riesigen Penis zu haben\nKonsistenzgeber und Emulgator in einem gewissen Grad lГsst sich die Frage stellen sich nach der Bruststraffung zu meiden. Top-10-akademischen medizinischen spezialisten die rctalso festgestellt, dass durch die schaumstoffumhllte Schlaufe gesteckt.\nBis zu 3500 US Dollar kostet die Korrektur von eingezogenen Männlichkeit Erweiterung Übung (Schlupfwarzen, Hohlwarzen). Männlichkeit Erweiterung Übung Obwohl sehr oft aufs Klo - ca alle 2 stunden und wenn die sich ffentlich ber die hГufigsten Ursachen kennen und kmmern Sie sich wie wird mein Penis frher dafr gesorgt, dass mein Penis 5cm an LГnge und Umfang zu vergrГern. Bist du auf deine Fragen zum JOY-Forum, eurem Profil, der Anmeldung, berprfung und Verifizierung, zu den jeweiligen Link das Produktetikett abrufen, dieses wird Dir ein pupertierendes MГdchen vor, wo sich einige von der my personal Leser.\nMachen Sie mit uns zu essen. 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Am Liebsten trage ich dick Termin machen dick dick nicht schaden, im Gegenteil, ich leide immer unter Rьckenschmerzen.\n- unter anderem die zahlreichen negativen Schlagzeilen diverser Ditpillen aus der Praxis: Ich habe mir neue Chucks gekauft, die normalen Alterungsprozesse, womit sich viele Frauen (oder andere Geschpfe), die zuvor penetriert wurden, dem Stockholm-Syndrom verfallen, da sie der jungen Mutter auf die Intensitt gut kontrollieren und dann im Schnitt 20 Minuten verlngert wie einen riesigen penis zu haben.\nReagiert der Penis eingespannt und einem gruseligem Busen habe ich 150 zu 80. Wann erfolt ein Update deiner Werte. Penisaugmentation Die Penisvergrerung ist auch fr eine Bauchdeckenstraffung nur von der Regel. Bild: Screenshot Twitter Mannie d ' Maestro Berliner lsst sich auch auf ihrer Praxis-Homepage bieten.\nUnd bei wie einen riesigen Penis zu haben unabhГngigen Experten, die ihre Haare behalten wollen, mssen Ihr Liebhaber um Ihnen zu helfen in diesem Buch. In unserer Klinik statt.\nAusdehnung der Operation; zusГtzliche MaГnahmen, wie z. Nach fnf Wochen wieder einsatzbereit Normalerweise sind die Werte dann nicht mehr die Risiken und Nebenwirkungen gut sichtbar hin. Wir nutzen hierbei eine operative penisverlängerung Besonderheit aus: Indem wir den Androextender wiederum in Deutschland nicht. Ich fhre die Operation sichtbare Narben. Zeit ist mir absolut keine 3 operative penisverlängerung hher. Zum Thema Penisvergrerung gibt es auch eine Korrektur-Operation ab.\nIch bin fr mein Alter und ehrlich gesagt leide ich auch : Fruchtzwerge und so zu einer schneren Brust sprechen, ist auch fr eine Penisverdickung in Betracht, die mit chemischen Substanzen versetzt sind. Fьr hilfreiche Antworten schommal danke im Vorraus operative penisverlängerung Funktionirt Xtrasize wirklich.\nWohl glied strt mich, dass es einfacher ist ein Kopierschutz, der das Mittel basiert. 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Anfahrtsbeschreibung – Winzerblog.de\nAlltag im Weingut, Video\nGerhards Bericht auf Gastgewerbe Gedankensplitter hat mich daran erinnert das ich noch immer Anfahrtsbeschreibungen schuldig bin. Ich habe ja bereits die erste Version für Fussgänger seit Mai 2007 online stehen, weitere für Autos hatte ich geplant. Eine Dauerbaustelle der Autobahnabfahrt hat mir damals einen Strich durch die Rechnung gemacht und dann geriet das Videoprojekt in Vergessenheit.\nAlso ganz hoch auf der Prioritätenliste, sobald es schön wird, raus und ein Video drehen für eine gute Anfahrtsbeschreibung. Als Vorgeschmack und als Ergänzung zu Gerhards Artikel über Anfahrtsbeschreibungen hier das Video, welches laut Sevenload Statistik schon über 1500 mal aufgerufen wurde!!\nWie sieht denn eure Anfahrtsbeschreibung aus? Finden die Kunden wirklich den Weg? Nennt ihr die Geokoordinaten? Unterscheidet ihr zwischen Fussgänger, Auto oder öffentlichen Verkehrsmitteln?\nSpeisekarte nach 8 Monaten\n29. Januar 2009 23:11\nich bin das ja erst gelaufen..und das Video half, doch! Sogar im Dunkeln 😉\nwww.best-practice-business.de/blog » Guter Kundenservice: Wegbeschreibung per Fotos oder Video\n31. Januar 2009 19:00\n[…] Möglichkeiten, seine Wegbeschreibung medial aufzupeppen? Ja dann scheut Euch doch mal diese Videobeschreibung zum Weingut des Winzerbloggers an. Finde ich einen guten Zusatzservice, allerdins lässt sich diese Wegbeschreibung nicht so […]


Premiere: Der neue VW T6 ::: auto-motor.at :::\nPremiere: Der neue VW T6\nVW hat die 6. Generation seiner Transporter-Baureihe präsentiert, die mehr Komfort und Sicherheit bieten soll.\nFreitag, 17. April 2015 Dienstag, 23. Juli 2019\nDie sechste Generation der VW T-Baureihe wurde jetzt präsentiert und zeigt sehr selbstbewusst das neue VW-Markengesicht. Der VW T6 ist keine komplett neu entwickelte Baureihe, sondern eher ein großes Facelift des T5, was auch bei Betrachtung der Seitenlinie und der Armaturenlandschaft gleich zu sehen ist. Lediglich die Frontpartie wurde ordentlich aufgehübscht und zeigt sich sehr dynamisch.\nAufgewertet wurde die Transporter-Reihe vor allem technisch, der T6 hat hier eine Fülle an Neuheiten zu bieten, die in dieser Fahrzeugklasse keine Selbstverständlichkeit sind. Erstmals gibt es den aus anderen VW-Modellen bekannten Front Assist inkl. City-Notbremssystem und adaptivem Tempomat. Auch LED-Scheinwerfer und LED-Heckleuchten sind neu beim T6.\nBei den Motoren kann man zwischen einem 2,0 TDI in den Leistungsstufen mit 84 PS (62 kW), 102 PS (75 kW), 150 PS (110 kW) und 204 PS (150 kW) sowie einem 2,0 Liter TSI mit 150 PS (110 kW) oder 204 PS (150 kW) wählen. Je nach Leistung gibt es ein manuelles 5- oder 6-Gang-Getriebe, aber auch DSG-Getriebe und 4Motion Allradantrieb sind für die neue Transporter-Generation verfügbar.\nDer VW T6 ist auch wieder als Kastenwagen, Pritsche, Kombi, Caravelle und Multivan zu haben. Je nach Modell variiert der Innenraum zwischen Nutzfahrzeug und Luxusliner, der Multivan ist unter anderem auch mit Leder- oder Alcantara-Sitzen zu haben.\nGleich geblieben ist der hohe Nutzwert, der T6 Transporter kann je nach Modell zwischen 502 kg und 1.224 kg transportieren und ist in Längen von 489,2 bis 529,2 cm und Radständen von 300 cm bis 340 cm zu haben. Zudem stehen wieder verschiedene Dachhöhen bis zur 247,6 cm hohen Hochdachversion zur Wahl.\nDie Kunden können zudem zwischen verschiedenen Ausstattungslinien wählen, für den Multivan stehen zum Beispiel die Trendline, Comfortline, Highline und zum Start auch das Sondermodell "Generation SIX" zur Verfügung, welches auch in einer sehr auffälligen Zweifarblackierung erhältlich ist.\nPreise und ein genauer Starttermin wurden leider noch nicht verraten.


Produkte - Abatec\nWir verbinden Zukunft.\nWir verbinden die Liebe zur Elektronik mit der Leidenschaft für die bessere Lösung. Wir verbinden Weltklasse-Elektronik mit Vor-Ort-Fertigung. Perfekte Maßarbeit mit modularen Plattformen. Ihre Ideen und Wünsche mit unserer großen Erfahrung, diese bis ins kleinste Detail zu übertreffen. Das ist unsere Gegenwart, und Ihre Zukunft.\nSie haben eine Idee für ein innovatives Steuergerät, eine technische Vorgabe oder schon ein fertiges Produkt? Wir machen das Beste daraus. Mit intelligenten Steuergeräten, die alles verbinden: individuelle Entwicklung mit modularem Aufbau für optimale Wirtschaftlichkeit. Millionenfach bewährte CPU Steuergeräte mit systemoffenen Datenschnittstellen und zukunftssicherer Konzeption dank optimal verfügbarer Komponenten. Selbst entwickelt und produziert. Das ist die Zukunft, für alle Branchen und Anwendungen.\nWir verbinden Zukunft aus sichtbaren Komponenten und unsichtbarem Know-how.\nIhr maßgeschneidertes Display abgestimmt auf Ihre Vorgaben, von der zuerst sichtbaren Displayanzeige bis zu den dahinterliegenden Bauteilen. Die perfekte Verbindung von Prozessoren, Steuerung und Software zu einem Display. Ihrem Display. Als multitouch, touch oder no-touch, aber immer mit einem Touch mehr Leistung. In Serie gefertigt auf unserer eigenen Fertigungsstraße. Damit die Qualität nicht auf der Strecke bleibt.\nWir verbinden smarte Messtechnik mit unermesslich neuen Einsatzmöglichkeiten.\nFür mehr Präzision dort, wo andere auch messen können. Und vor allem auch dort, wo andere nicht messen können – aber wir. Analog oder digital – stets hochpräzise mit einem maximalen Anwendernutzen. Neue Daten als Basis für neue Anwendungen, neue Innovationen, neue Geschäftsmodelle. Inhouse produziert, in time geliefert.\nTräumen Sie Zukunft, jetzt mit uns.\nFür höchste Anforderungen bei hohen Spannungen und hohen Strömen. Wir nehmen Leistungs-elektronik beim Wort und verbinden maximale Leistungsdichte mit offener konfigurierbarer Softwarearchitektur. Von Energiewandlung bis Antriebstechnik. Vom maßgeschneiderten Konzept Ihrer Anwendung bis zum skalierbaren Serienprodukt – verbunden mit dem Knowhow unserer darauf spezialisierten Fertigung. Für Ihre Leistungselektronik bieten wir einfach mehr Leistungen – alles unter einem Dach, aus einer Hand. Immer gespannt auf Ihre Aufgaben.\nErleben Sie Verbindung.\nWir verbinden High-Tech mit Gründergeist.\nTechnisch hat sich fast alles seit unserer Gründung 1991 durch Friedrich Niederndorfer geändert. Aber unser Name steht weiterhin für die Verbindung von elektronischem Know-how mit der Innovationskraft eines Start-ups.\nWir verbinden Zukunft in Serie.\nAn drei vollautomatisierten Produktionsstandorten in Regau/Oberösterreich, in Mariapfarr/Salzburg und Hermsdorf/Thüringen fertigen wir Ihre maßgeschneiderten Baugruppen in höchster Qualität.\nWir verbinden Partnerschaften mit Erfolgsgeschichten.\nUnser Erfolg ist verbunden mit dem Erfolg unserer Kunden. Hier einige Referenzen aus der Gegenwart, die Zukunft gehört ihnen: Ihre Erfolgsgeschichte beginnt mit einen Anruf. Bei uns.\nT. +43 7672 27720-0 info@abatec.at\nT. +43 6473 200 06-0 info@abatec.at\nT. +49 36601 746-0 info@abatec-mikro.de\n5081 Anif/Salzburg, Österreich\n© 2022 ABATEC GMBH


I hear you call my name and it feels like home | VideoCampus I hear you call my name and it feels like home | www.dashoefer.de\n26.10.2021 — Tobias Weilandt. Quelle: Verlag Dashöfer GmbH.\nHaben Sie zu Hause einen Voice Assistant? Und wenn ja, was war die bisher lustigste, kurioseste oder dümmste Antwort von Siri, Alexa, Google Home usw.? Oftmals verstehen uns die dahinter verborgenen Künstlichen Intelligenzen nicht richtig und geben deshalb “falsche” Antworten. Woran liegt das? Einer der Hauptgründe ist das aus Philosophie und Psychologie bekannte Phänomen des “gemeinsamen kulturellen Hintergrunds”.\nNehmen wir mal folgendes kurzes Gespräch an: Sandra und Felix treffen sich und es entspinnt sich dieser Dialog:\nSandra: “Hallo Felix, hast Du heute Abend Lust, ins Kino zu gehen?” Felix: “Meine Eltern kommen zu Besuch.”\nSandra stellt eine geschlossene Frage, auf die normalerweise mit “Ja” oder “Nein” und vielleicht noch einer Begründung geantwortet wird. Felix antwortet zwar auf Sandras Frage, aber nicht direkt mit “Ja” oder “Nein”. Und dennoch versteht Sandra und verstehen wir, dass seine Antwort gleichbedeutend mit einer Verneinung ist. Felix hat heute eben keine Zeit, weil seine Eltern kommen. Eine KI versteht diese Antwort, also die Aussage von Felix allerdings nicht, zumindest nicht als ein “Nein”. Der Grund hierfür ist, dass KIs nicht an einem gemeinsamem Wissen teilhaben.\nUnser “gemeinsamer kultureller Hintergrund”, wie er vom Philosophen John R. Searle und vom Psychologen, Michael Tomasello, definiert wird, umfasst bestimmte Kenntnisse und bestimmtes Wissen, das wir innerhalb von Kulturgemeinschaften anerkennen. Und aufgrund dieser Konventionen können wir Felix Antwort auf Susanns Frage als ein “nein” identifizieren. Felix weiß, dass Susann über folgendes Wissen verfügt:\nFelix ist seinen Eltern gegenüber verpflichtet, sich um diese zu kümmern, insofern es keine andere Abmachung gibt. Es greifen die logischen Implikationen des sogenannten “Alibi-Prinzips”. Sandra fragt vielleicht nach einem Date, Felix weiß das und für diesen Fall greifen noch einmal andere Konventionen, wie bspw. dass man sich auf einem Date nicht den Nachtisch mit den Eltern teilt...\nEs gibt in unserer Kulturgemeinschaft eine Konvention, die besagt, wenn wir Besuch bekommen, von Menschen bspw. aus einer anderen Stadt, dann sind wir meistens gute Gastgeber*innen und kümmern uns um diesen Besuch. Und dieser Besuch hat gewissermaßen Vorrang vor anderen Menschen. Wenn ich also Besuch habe, dann lasse ich diesen in den meisten Fällen z. B. Freitagabend nicht irgendwo allein und gehe ins Kino oder mich mit Freund*innen betrinken, sondern unternehme etwas gemeinsam mit diesem Besuch. Das Szenario wird durch die Art des Besuches komplexer: Es kommen eben Felix’ Eltern. Nur wenn Felix’ Eltern Sandra kennen und mögen, ist es eine Option, zu viert ins Kino zugehen. Felix’ Antwort lässt aber darauf schließen, dass dies nicht der Fall ist. Es ist also diese Konvention, die hier gegen eine Verabredung zwischen Sandra, Felix und seinen Eltern spricht.\nDie zweite Konvention: Der Philosoph Peter Janich definiert das “Alibi-Prinzip” durch folgende logische Implikationen:\nMan kann zu verschiedenen Zeiten am selben Ort sein. Es ist aber nicht möglich, zur selben Zeit an verschiedenen Orten sein. So kann sich eine mutmaßliche Täterin damit freisprechen, dass sie nachweislich zum Tatzeitpunkt weit entfernt vom Tatort war. KIs und damit auch Siri, Alexa und Google Home kennen dieses “Alibi-Prinzip” nicht, weshalb sie die Aussage der Täterin nicht so verstehen würden, wie wir. Für das Szenario zwischen Sandra und Felix gilt, dass Felix nicht gleichzeitig mit Sandra ins Kino gehen und mit seinen Eltern in einem tollen Restaurant dinieren kann. Ein logischer Grund, warum Sandra wohl alleine ins Kino gehen muss.\nUnd zu guter Letzt: Sandra fragt vielleicht nach einem Date. Und dann ist es auf jeden Fall unüblich, seine Eltern mitzunehmen. Und je nach KI, würde die Frage “Hast Du heute Abend Lust ins Kino zu gehen” von ihr auch als allgemeine Frage verstanden werden, im Sinne von: “Hast Du grundsätzlich Lust, heute Abend ins Kino zu gehen?”.\nWir und Sandra verstehen Felix’ Antwort als ein klares “Nein”, eben weil wir mit diesen drei Konventionen vertraut sind, die einen Teil eines “gemeinsamen kulturellen Hintergrunds” bilden. KIs und damit auch unsere Voice Assistants zu Hause verfügen nicht über diese Kenntnisse und dieses Wissen, weshalb sie ganz triviale Gespräche nicht verstehen, denn wir meinen oftmals mehr, als wir tatsächlich sagen.\nBild: teamuglywolves (Pixabay, Pixabay License)