Shark RAce 9\nPhotos dans la galerie et classements à jour dans l'onglet compétitions.\nBIG SHARK CHALLENGE 2\n2 et 3 / 4 / 22\nWeek-end de rêve pour le club, notre Big Shark a enfin pu se tenir et a réuni 72 joueurs ! La preuve d...\nCNEC J5 à Equeudreville\nAïe Aïe Aïe, ça fait mal ! Les cartes se sont détournées... Après 2 manches prometteuses et une pre...\nShark RAce 8\nPetite soirée en nombre ! Mais grande soirée en qualité !!!\nFabienne HAIRON, la grande gagnante !!!\nPour cette 8ème levée de la Shar...\nCNEC J4 à St-LAURENT DE CUVES\nEt bis repetita !...\nShark RAce 7\nCOUP DOUBLE POUR SÉBASTIEN GOUBERT !\nQuelle soirée à Bretteville en ce vendredi...\nEn effet, avec pas moins de 43 jo...\nTOP of the shArk 3\nShark RAce 6\nEn cette soirée du 28 janvier 2022, le BPC accueille la SR6, et l’équipe de France est en demi-finale du championnat d’Europe de hand. L’occasion donc de faire d’une pie...\nCNEC J3 à BRICqUeBEC\nTouche Replay pour le BPC\nAprès deux étapes en demi-teinte, le BPC devait ramener quelque ch...\nTOP of the shArk 2\nLe grand chelem pour HUBERT !\nPour ce 2ème top of the shark et malgré les incertitudes d'organisation dûes au covid, c'est pas moins de 33 joueurs qui se sont retrouvés dimanche à la salle de BRETTEVILLE dès 9h30 pour une...\nCNEC J2 à St-quentin\nNous retiendrons le plaisir de la journée passée ensemble pour cette 2ème étape ; même avec un débu...\nShark RAce 5\nPASCAL MARQUEZ EN MODE ROULEAU COMPRESSEUR !!!\nPour cette 5ème SR de l'année mais surtout la dernière pour obtenir les sésames pour le championnat ...\nWeek-end de rêve pour le club, notre Big Shark a enfin pu se tenir et a réuni 72 joueurs ! La preuve d'une certaine reconnaissance ? En tout cas, le club avait mis les petits plats dans les grands : une salle magnifique (la polyvalente de Bretteville), un prizepool estimé à 1800 €, une organisation sportive sans anicroches (merci à Florence pour ses précieux conseils...), une convivialité autour des planchas, paëllas et autres victuailles qui ont ravi les participants. Une bande de bénévoles aux p’tits soins qui ont fait tourner la buvette et préparer les repas : un grand merci à eux ! ET enfin, un champion : le fameux Jacquot qui s’impose devant 2 brettevillais : Pierre et Ludo. Les membres du bureau sont très fiers des différents retours qui ont été faits par les particpant(e)s et les sourires affichés sont autant de récompenses à leur investissement. Photos dans la galerie et classement dans l'onglet compétitions.\nAïe Aïe Aïe, ça fait mal ! Les cartes se sont détournées... Après 2 manches prometteuses et une première place à l'entâme de cette dernière étape, le club espérait bien se qualifier pour les demi-finales. Malheureusement, l'équipe emmenée par Capt'ain Reno a fait preuve de fébrilité et a subi le sort... Une première manche ratée, une 2ème manche délicate où tout le monde joue la qualif (5 clubs), c'est dans ce contexte que les derniers échanges décisifs se montrent défavorables... ça se joue à pas grand chose : à 14 points de la 2ème place (635 points) ; mais c'est le poker ! On retiendra notre progression et la bonne ambiance qui a regné dans l'équipe, ainsi que cette 4ème place finale (meilleur classement que le club ait connu). Félicitations à l'Arène Poker Club qui l'emporte et au Poker Club Saint-Quentinais qui a toujours cru en ses chances. Bonne chance, et portez haut les couleurs de la Normandie !\nRetrouvez les photos et le classement dans l'onglet compétitions - bouton CNEC...\nPour cette 8ème levée de la Shark Race du BPC ce vendredi, il y eut un peu moins de monde que d’habitude avec 29 joueurs présents... mais tout le haut du classement était présent à part Pascal et Noémie... La lutte allait donc être âpre et à ce petit jeu, tous les joueurs qui visaient les points répondaient présents en ne lâchant rien... Encore beaucoup de belles mains comme ce duel entre Sylvain : As 9 et un flop 9 as 9 qui pensait bien doubler devant Pierre, mais c'était sans compter sur la paire d’as en main de pierre (photo)... Ouille ça fait mal... Les moins chanceux se retrouvaient sur une table de la loose toujours aussi cool et c’est Karim qui remportait la barre chocolatée.\nSur le tournoi principal, sortaient respectivement, Martial 13ème, Antoine 12ème, Laëtitia 11ème et Marius le bubble boy perdait des points précieux pour le général. La Table Finale voyait un nombre imposant de Brettevillais (historique), et Mikael dont c’était la première participation (vidéo). Fabrice sortait 8ème, Pierre 7ème, pendant que Séb Goubert 4ème faisait des misères à tout le monde et particulièrement Bastoon 5ème, mais finissait par rencontrer la paire de rois de Fabienne avec un roi au flop... Encore une belle perf pour Sébastien qui prend le large au classement général...\nRestaient 3 joueurs : Arnaud, Fabienne et le président David pour les 2 places du HU et les paniers garnis... C’est Arnaud qui allait lâcher le 1er et laisser un duel entre le président et la future 1ère joueuse classée du BPC. Fabienne avec sa main As Dame allait remporter cette SR8 devant David et son as valet... Un super podium tout gris... couleur a la mode en ce moment dans les sommets du poker...\nUn classement général avec un trio inchangé en tête et un peloton de gris : Fabienne 5ème, Antoine 6ème, Fabrice 7ème, Arnaud 9ème, Pierre 11ème, David 12ème et Bastoon 17ème : tous en course pour allaient chercher les places qualificatives pour le CNIC...\nQui décrochera le Graal ? Éléments de réponses dans la prochaine SR le 22 avril… D’ici là d’autres rendez-vous attendent avec un calendrier infernal. Dès dimanche prochain, les joueurs du BPC en tête du classement provisoire essayeront de décrocher le titre de champion de Normandie des clubs et se qualifier pour les 1/2 finales du championnat de France... Puis le week-end suivant, les 2 et 3 avril c’est LE GRAND RDV DU BPC : le BIG SHARK CHALLENGE. Il est encore possible de s'inscrire pour ce tournoi… Bref plus le BPC sur tous les fronts... Vive le BPC...\nPhotos dans la galerie et classement dans l'onglet compétitions.\nUne première pour le club, après la très bonne étape au donjon, le BPC s'impose à Avranches et frappe un grand coup en remportant 2 étapes de suite... Une journée qui commence aux aurores avec un lever à 5h30, récupération du minibus et des joueurs au point de rdv. Notre bizut nous fait des frayeurs en se rendormant après le réveil mais l'équipe est au complet en arrivant à Saint-Laurent de Cuves. Le club d'Avranches nous reçoit très bien dans une salle un peu froide qui se réchauffera tout au long de la matinée avec l'ouverture des hostilités. Les prestations du matin montrent notre bonne forme du moment : 1 seule place de 6ème, deux 3èmes et 4èmes place, une 5ème place et 2 victoires. Avec 69 points, le club gagne le premier sit-and-go et devance de 10 points le 2ème (Saint-Quentin). Mention spéciale à Anthony et Fabrice qui cumulent les bonnes perfs, sans oublier Arnaud... Après un repas riche et revigorant, on termine le 1er sit et enchainons sur le 2ème. Quelques retrouvailles dans le tirage au sort de cette 2ème manche (photos), et nous nous lançons pour confirmer que les résultats du matin ne sont pas usurpés. Nos adversaires directs déchantent assez vite, et avec le soutien de nos "petits oiseaux" à distance (Séb, Antoine, Manon, Pierre...), l'équipe joue les places. Stratégie payante : 1 seule place de 6ème, une 4ème place, trois 3èmes places, une 2ème place et 2 victoires (73 points). Victoires de Renaud et Karim et encore une 2ème place d'Arnaud ! Bonus de la Manche en poche, le club s'adjuge l'étape et repart avec le sentiment du devoir accompli.\nAvant la dernière à Equeurdreville le 27 mars, le club conforte son classement, sa progression et son ambition. L’équipe ayant tourné avec pas moins de 13 joueurs, qui ont su porte haut les couleurs du club. Rendez-vous dimanche 27, chez les rouges de l’Arène Poker Club, avec l’objectif de se qualifier pour les demi-finales !\nEn effet, avec pas moins de 43 joueurs présents, la shark race numéro 7 a connu les sommets en quantité (record sur un vendredi égalé !!!) mais aussi en qualité puisque tous les favoris étaient au rdv.\n6 tables dès le début de la soirée avec pas moins de 10 joueuses...\nUne ambiance des grands soirs qui aller être défavorable aux historiques du BPC puisque très rapidement : Bastoon, David, Pierre et Antoine sortent alors que Pierre Philipart, l'ancien maire de Bretteville aller lui connaître une soirée magique...\nLe haut du classement avec Marius, Marcial, Pascal et Laetitia sortent aussi et perdent pas mal de points au général.\nHubert lui, fait quelques dégâts aussi mais c'est vraiment Pierre Philipart qui écrase la soirée et sort les joueurs les uns après les autres...\nUn petit problème technique inhabituel avec l'ordinateur freina un peu les ardeurs et le temps de remettre tout en route on se dirigeait vers la table finale...\nUne TF où on retrouve 2 femmes, Pépette et Renée mais aussi David, Lolo, Sébastien, Sylvain, les membres du BPC Fabrice et Antho et enfin Pierre Philipart pour sa 1ère TF !\nC est Lolo qui nous quitte en 9ème place suivi de Pierre qui était en grande difficulté avec cette horaire avancé... Pépette et Sylvain suivent alors que Fabrice cartonne avec un carré de 3 magique...\nUn clin d'œil aussi avec David aux couleurs du PSG assis à côté de Antho aux couleurs du Réal Madrid et c'est David qui était éliminé en 5ème position puis Fabrice en 4ème avec une belle résistance devant un Seb Goubert en mode rouleau compresseur.\nCelui-ci déjà vainqueur de la SR4 se retrouvait en HU après avoir éliminé Antho face à une Renée toute heureuse d'être arrivée si haut...\nLe HU était rapide et disproportionné puisque Séb bat Renée dès la 1ère main et remporte sa seconde SR de l'année et prend par la même occasion la tête au classement général...\nEncore une superbe soirée au BPC.\nRetour sur le Top of the Shark et la victoire de Bernard qui est venue conclure cette belle journée à la Chènevière.\nMalgré (ou grâce) au temps maussade, pas moins de 34 joueurs présents pour rattraper David au sommet du classement.\nMais en finissant à nouveau en Table Finale (3/3, 3ème) il conserve la 1ère place.\nRien n'est finit pour Philippe et nos deux joueurs du HU, Bernard et Pépette pour espérer finir sur la plus haute marche lors de la dernière étape du 6 juin.\nFélicitations à tous les joueurs, un grand merci à Martine pour sa (grosse) journée de travail aux fourneaux, à Laetitia pour le deal de la Table Finale et rendez-vous très vite autour d'une table de poker\nVous pouvez retrouver les photos dans la galerie. Le classement général est mis à jour dans l'onglet compétitions / classement du the of the TOP Shark 2021 / 2022.\nEn cette soirée du 28 janvier 2022, le BPC accueille la SR6, et l’équipe de France est en demi-finale du championnat d’Europe de hand. L’occasion donc de faire d’une pierre deux coups avec tous nos fans de poker et de Handball. La salle est aux couleurs française et les joueurs sont prêts à en découdre..\nC’est parti et on accueille 38 joueurs pour cette manche... on perd rapidement les fans de hand aux couleurs de la France pour cette soirée (Dan, Fabienne, Pascal et David) comme l’équipe de France malheureusement... mais il en reste un encore qui porte haut les couleurs du Hand... Les éliminations s’enchaînent au fur est à mesure et Hubert fait encore mal en demi et prend des kills. A la bulle, c’est Bernard qui nous quitte. Arrive la TF, et Hubert ne refera le même coup que la dernière fois, il sort 7ème. En Heads-up, on retrouve le dernier supporter des couleurs françaises : Antoine contre Marius (qui a fait mal à tout le monde en TF). La victoire finale revient à Antoine qui venge la défaite de l’équipe de France et s’adjuge cette 6ème étape.\nRdv dimanche 6 février pour le TOP 3 !\nAprès deux étapes en demi-teinte, le BPC devait ramener quelque chose du Donjon pour encore espérer à la qualification.\nAprès la belle et primo victoire de l'histoire du club de l'an dernier dans ce même lieu mais la compétition annulée à cause de covid, on reprenait presque les mêmes pour atteindre le résultat escompté (Antho remplace Manon et Antoine remplacé par David). Et c'est le président qui sortait rapidement en premier de sa table suivi de captain Renaud en 6ème position aussi. La mission était mal embarquée. Malgré la belle performance d'Antho avec une nouvelle victoire ainsi que la toute première de Mika dans cette compétition, le BPC arrivait à midi avec 52 points et une avant-dernière place peu flatteuse...\nAprès-midi de feu\nIl fallait réagir pour ne pas tout perdre au général. Mais ça recommence mal avec Arnaud qui finit 6ème. En réaction, Ludo marche sur sa table et se retrouve rapidement en HU avec un stack énorme. Bastoon joue de malchance avec les valets contre les 10 qui font carré (4ème). S'enchaîne les éliminations, mais les petits gris résistent pour emmener David, Mika, Antho (au bord du gouffre avec 5K à 4 left) et Fabrice en HU !! Tout est possible alors. Totale déconvenue dans le jeu, les 5 perdent leur tête-à-tête mais engrangent des gros points.\nReste la dernière table à 3 left avec captain Renaud, Saint Quentin et l'Arène (Yohann Beust).\nAprès calcul, le BPC et Saint Quentin sont à égalité si Renaud va en HU et que Saint Quentin finit 3ème. Et c'est le cas !\nLa victoire d'étape se jouera donc sur la dernière main du tournoi.. et après un HU qui aura commencé à 27K contre 93 pour le joueur de l'Arène et de nombreux retournements, Renaud décochait deux flèches -AA contre A8- avec un board sans embûches et envoyait le BPC soulevait la coupe de l'étape ! Belle opération au général dans cette étape serrée et une fin de saison CNEC qui s'annonce passionnante.\nRendez-vous en Mars pour la suite et fin !!! GG à tous mes petits gris, rien lâcher\nPour ce 2ème top of the shark et malgré les incertitudes d'organisation dûes au covid, c'est pas moins de 33 joueurs qui se sont retrouvés dimanche à la salle de BRETTEVILLE dès 9h30 pour une belle journée de poker. Apres le café - chouquette consommé assis et à distance réglementaire, les joueurs ont commencé leur journée de poker tranquillement... On pouvait déjà admirer des magnifiques looks...\nLe tout gris de mister Antho, Hubert l'homme invisible derrière son masque et son magnifique chapeau, David et son sweet très explicite sur ces intentions de gagner cette 2ème manche apres sa victoire lors de la 1ère... Mais la palme allait à Pascal avec des chaussettes extraordinaires (voir les photos dans la galerie)...\nLes cartes, les jetons et les combinaisons amenaient tout ce beau monde jusqu'à la pause repas de midi où Martine, notre grande bénévole sur toute la journée, avait préparé avec Caco de sublimes croque-monsieurs et la traditionnelle galette des rois... Après ce moment de plaisir et un petit café, les joueurs se remettaient à table pour le re retour des cartes.\nLes Antes et les bluffs faisaient leur travail et éliminaient les uns après les autres les joueurs jusqu'à la fameuse bulle... A ce petit jeu, c'est le président qui faisait éclater cette bulle contre Karim avec un roi river des familles !!! Nous avions notre Tf (voir video FB).\nNous étions partis pour assister à un festival (pas celui de Cannes) mais celui de Hubert !!!\nEn effet, il allait réussir quelque chose d'inédit à Bretteville et de très rare sur la planète poker :\ndégommer tout le monde sur la table finale, les uns après les autres... d'où l'expression bien connue maintenant "HUBERT EAT" !!! Sans exception, il allait faire le ménage des fois un par un, mais aussi avec un strike sur david et Lolo avec une couleur de l'espace à la river (voir video). Arrivé au Heads-Up contre Philippe avec 637 500 jetons contre 22 500, Hubert gagnera en 1 seule main... Bref un Hubert stratosphérique, un grand chlem que l'on est pas prêt de revoir. Bravo à lui !!!\nPetit message sur Pascal avec ses chaussettes qui remporte la table de la loose contre mister Antho et Fabienne, 1ère féminine de cette journée.\nLe classement sera a suivre dans les prochains jours mais le duel entre David et Philippe va être très serré... Tout est encore possible puisqu'il reste 2 manches (6 février et 6 juin). Pour le BPC, la suite immédiate : c'est l'étape 3 du CNEC le 23 janvier à Bricquebec et la prochaine soirée de poker à la salle de BRETTEVILLE le vendredi 28 janvier à 20h15...\nNous retiendrons le plaisir de la journée passée ensemble pour cette 2ème étape ; même avec un début difficile de la team, on est resté solidaire et à on s'est soutenus pour aller chercher 3 heads-up dont 2 victoires le matin. Idem l'après midi avec un début ompliqué et un gros soutien pour aller chercher encore 3 HU et 1 victoire. On n'est pas morts, il reste 3 manches...\nPour cette 5ème SR de l'année mais surtout la dernière pour obtenir les sésames pour le championnat de France individuel de juin 2022 à Gujean Mestras, il y avait 31 joueurs dont Loic Lahaye (brillant 4ème aux CNIC 2021 à la grande motte), mais également Fabrice Courtais, Ludovic Dubosq, David Chopin, Pascale Kerleau, Pascal Marquez tous présents eux aussi à la grande motte...\nIl ne fallait pas oublier les Martial Lecarpentier, Laëtitia Renet, Marius Lemenand, Séb Goubert ou les purs locaux de BRETTEVILLE Fabienne hairon, Pierre Jeanne... Bref la crème de la crème pour cette dernière de 2021.\nEt bataille il y eut... pas pour Antoine Hairon, "brillant" premier sortant de la soirée, après seulement 23 min, presque un record !!!\nParmi les sortants de marque, on peut situer Pierre jeanne, Ludo, Martial ou Séb ainsi que Karim... qui allait se consoler avec la traditionnelle table de la loose. A cet exercice, c'est Karim qui remporte la "barre chocolatée" : the trophée of the loose...\nLe tournoi principal était palpitant, les mains encore 1 fois énormes, jusqu'à même voir un carré d'as !!! Bref que du lourd...\nJusqu'à la bulle, nous retrouvions nos 9 derniers finalistes, Pascal Marquez rentrait déjà leader sur cette table mais les autres avaient les dents longues...\nA ce petit jeu, un duel de petits jeunes était palpitant mais ils sortaient 9 et 8eme : Fabien et Steven... Nicolas, Loîc et Noémie marquaient ensuite des points importants et Arnaud aussi en 5ème. Mais c'est avec Marius et David Chopin que Pascal allait finir. Avec un énorme avantage en jetons, Pascal allait défiait David dans le H.U après que Marius explose contre les rois de David...\nUn H.U qui restera dans les mémoires, puisque dès la 2ème main Pascal écrasait le pauvre David (vidéo)... Une victoire que personne n'a pu contester tellement elle fut propre et nette.\nMais place au classement que vous allez retrouver dans quelques jours et le bilan pour le CNIC 2022 sur le site du BPC (photos dans la galerie et classement dans l'onglet compétitions). Pour le classement général 2021-22, c est tout juste la mi-course puisqu'il y aura encore 5 manches en 2022 et donc si vous souhaitez venir nous rejoindre, la possibilité de remporter cette SR est toujours d'actualité.\nLe prochain rdv après les fêtes pour le BPC sera le top of the Shark le dimanche 9 janvier et pour la SR6, il faudra patienter jusqu'au vendredi 28 janvier.\nVoilà tout le bureau vous souhaite des belles fêtes de fin d'année pour vous et vos proches ! Rdv en 2022 et VIVE LE BPC !


Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish | Protocol (Translated to French)\nComportement invasif des cellules cancéreuses du sein humain dans Embryonic Zebrafish\nNous décrivons ici les modèles de xénogreffes de poisson zèbre en utilisant deux sites d'injection différents, à savoir, l' espace périvitelline et canal de Cuvier, pour étudier le comportement invasif et d'évaluer le potentiel de intravasculaire et extravasation des cellules cancéreuses du sein humain, respectivement.\nDans de nombreux cas, les patients atteints de cancer ne meurent pas d'une tumeur primaire, mais plutôt à cause de métastases. Bien que de nombreux modèles de rongeurs sont disponibles pour l' étude des métastases cancéreuses in vivo, d' autres efficaces, fiables, les modèles à faible coût sont nécessaires pour accéder rapidement aux effets potentiels de (Epi) modifications génétiques ou des composés pharmacologiques. En tant que tel, nous illustrons et expliquons la faisabilité des modèles de xénogreffes en utilisant des cellules de cancer du sein humain injecté dans des embryons de poisson zèbre pour soutenir cet objectif. Sous le microscope, ou des protéines fluorescentes marquées chimiquement les cellules cancéreuses du sein humain sont transplantés dans des embryons de poisson zèbre transgénique, Tg (fli: EGFP), à l'espace périvitellin ou conduit de Cuvier (Doc) 48 h après la fécondation. Peu de temps après, le processus spatio-temporelle de l'invasion de cellules cancéreuses, la diffusion, et des métastases dans le corps du poisson vivant est visualisé sous un microscope à fluorescence. Les modèles utilisant différents sites d'injection, soit, parespace ivitelline ou Doc sont complémentaires les unes aux autres, ce qui reflète le stade précoce (étape de intravasation) et stade tardif (étape de extravasation) de la cascade métastatique en plusieurs étapes des événements. De plus, l'angiogenèse péritumorale et intratumorale peut être observée avec l'injection dans l'espace périvitellin. La période expérimentale est plus de 8 jours. Ces deux modèles combinent marquage cellulaire, micro-transplantation, et des techniques d'imagerie par fluorescence, ce qui permet l'évaluation rapide de métastases du cancer en réponse à des manipulations génétiques et pharmacologiques.\nOvert métastases du cancer dans la clinique comprend une série d'événements complexes et en plusieurs étapes appelées la « cascade métastatique ». La cascade a été largement revue et peut être disséqué en plusieurs étapes successives: l' invasion locale, intravasculaire, diffusion, arrestation, extravasation et la colonisation 1, 2. Une meilleure compréhension de la pathogenèse des métastases du cancer et l'élaboration de stratégies de traitement potentielles in vivo nécessitent des modèles d'accueil robustes de propagation des cellules cancéreuses. Modèles murins sont bien établis et sont largement utilisés pour évaluer les métastases 3, mais ces approches ont une faible efficacité et les limites éthiques et sont coûteuses comme un modèle avant - garde pour déterminer si une manipulation particulière pourrait affecter le phénotype métastatique. D'autres efficaces, fiables, les modèles à faible coût sont nécessaires pour accéder rapidement aux effets potentiels de (Epi) modifications génétiques ou pharmacologcomposés iques. En raison de leur forte homologie génétique avec l'homme et la transparence de leurs embryons de poisson zèbre (Danio rerio) ont émergé comme un modèle de vertébrés importants et sont de plus en plus appliquée à l'étude des processus de développement, les interactions microbe-hôte, les maladies humaines, le dépistage des drogues, etc. . 4. Les modèles de métastases cancéreuses établies chez le poisson zèbre peut fournir une réponse aux insuffisances des modèles de rongeurs 5, 6.\nBien que la néoplasie spontanée est à peine vu chez le poisson zèbre sauvage 7, il existe plusieurs techniques de longue date pour induire le cancer désiré chez le poisson zèbre. Mutations du gène cancérigène ou induite par activation de la voie de signalisation peuvent histologiquement et le modèle moléculaire carcinogenèse, mimant la maladie humaine chez le poisson zèbre 7, 8, 9. par taking avantage de diversité avant et arrière manipulations génétiques des oncogènes ou des suppresseurs de tumeurs, (transgéniques) zebrafish ont également permis des études potentiels de la formation du cancer et de maintenance 6, 10. Les modèles de cancer induits chez le poisson zèbre couvrent un large spectre, y compris digestif, reproductif, le sang, le système nerveux et l' épithélium 6.\nL'utilisation du poisson zèbre dans la recherche sur le cancer a augmenté récemment en raison de la mise en place de modèles de xénogreffes de cellules tumorales humaines dans cet organisme. Ce fut d' abord rapporté avec des cellules de mélanome métastatique humaines qui ont été greffées avec succès dans des embryons de poisson zèbre au stade de la blastula en 2005 11. Plusieurs laboratoires indépendants ont validé la faisabilité de ce travail de pionnier en introduisant toute une gamme de cellules cancéreuses de mammifères dans des lignes à zebrafish différents sites et stades de développement 5 </ Sup>. Par exemple, des injections près blastodisque et blastocyste du stade blastula; injections dans le sac vitellin, l'espace périvitellin, canal de Cuvier (Doc), et la veine cardinale postérieure de 6-h- à des embryons âgés de 5 jours; et des injections dans la cavité péritonéale de vieux de 30 jours de larves immunodéprimés ont été effectuées 5, 12. De plus, la tumeur allogénique transplantations ont également été signalées dans 12 zebrafish, 13. L'un des grands avantages de l'utilisation xénogreffes est que les cellules cancéreuses greffées peuvent être facilement marquées par fluorescence et distingué des cellules normales. Par conséquent, les enquêtes sur les comportements dynamiques de la formation de microtumor 14, l' invasion cellulaire et la métastase 15, 16, 17, l' angiogenèse induite par une tumeur 15, 18, et les interactions entre les cellules cancéreuses et les facteurs de l' hôte 17 peut être clairement visualisé dans le corps de poissons vivants, en particulier lorsque les lignes de poisson - zèbre transgénique sont appliqués 5.\nInspiré par le fort potentiel des modèles de poisson zèbre de xénogreffes pour évaluer les métastases, nous avons démontré les propriétés transvasculaires extravasation de différentes lignées cellulaires du cancer du sein dans la zone tailfin de Tg (FLI: EGFP) embryons de poisson zèbre par des injections de Doc 16. Le rôle de facteur de transformation-β (TGF-β de) 16 et protéines morphogénétiques osseuses (BMP) 19 voies de signalisation dans pro / invasion des cellules cancéreuses anti-sein et métastases croissance ont également été étudiée dans ce modèle. De plus, nous avons également récapitulé la capacité de pénétration intravasculaire de diverses lignées cellulaires du cancer du sein en circulation en utilisant des modèles de xénogreffes avec des injections de poisson zèbre espace périvitelline.\nToutes les recherches en utilisant la Tg zebrafish fluorescente transgénique (de Fli: EGFP) souche, qui a amélioré la protéine fluorescente verte (EGFP) marqué à la vasculature 20, y compris le logement et les expériences, a été réalisée conformément aux directives internationales et a été approuvé par le Comité institutionnel local pour le bien-être des animaux (Dier Ethische Commissie (DEC) du Centre médical de l'Université de Leiden.\nRemarque: Comme résumé sur la figure 1, le protocole est grossièrement divisé en quatre étapes: collecte d'embryons (Figure 1A), la micro - injection (figure 1B), le dépistage (figure 1c), et l' analyse (figure 1D).\n1. Préparer les aiguilles d'injection\nPréparer des aiguilles d'injection avec microcapillaires en verre de borosilicate. Mettre un microcapillaire dans un dispositif d'étirage de micropipettes avec les paramètres suivants: pression d'air, 500; la chaleur, 650; tirer, 100; vitesse, 200; temps,40. Maintenir les aiguilles d'injection dans une plaque porte-aiguille jusqu'à ce qu'ils soient utilisés pour l'injection.\n2. Préparer les fluorescents, génétiquement les cellules cancéreuses Labellisées du sein pour injection\nCulture cancer mammaire humain MDA-MB-231 cellules à 37 ° C dans du milieu DMEM glucose élevé contenant de la L-glutamine, 10% de sérum bovin fœtal et 1: 100 de pénicilline-streptomycine (pen-strep).\nCulture des lignées de cellules epitheliales du sein, MCF10A (M1) et MCF10A-Ras (M2), à 37 ° C dans du milieu DMEM / F12 contenant de la L-glutamine avec 5% de sérum de cheval, 20 ng / ml de facteur de croissance épidermique, 10 mg / mL insuline, 100 ng / ml d'entérotoxine cholérique, 0,5 mg / ml d'hydrocortisone et 1: 100 pen-strep.\nProduire mCherry lentivirus par co-transfection PLV-mCherry, pCMV-VSVG 21, pMDLg-RRE (gag / pol) 22, et pRSV-REV 22 plasmide dans des cellules HEK293T. récolte des surnageants de cellules 48 h après la transfection et stocker à -80 ° C.\njenfect MDA-MB-231, M1, M2 et des cellules à confluence de 30% pendant 24 heures avec des surnageants dilués lentiviraux 1: 1 avec du milieu de culture normal en présence de 5 ng / ml de polybrène.\nSélectionner des clones monocellulaires en diluant les cellules dans une plaque à 96 puits, ce qui permet l'excroissance de clones de cellules isolées, jusqu'à l'obtention des lignées cellulaires stables exprimant mCherry.\nCulture un flacon T75 de cellules pour l'injection. Récolter les cellules à 80% de confluence avec un traitement à la trypsine-EDTA 0,5%. Laver les cellules avec du PBS 1x fois 2-3.\nRe-suspendre les cellules dans environ 200 pi de PBS. Magasin à les 4 ° C pendant moins de 5 h avant l'injection.\n3. Préparer Embryons pour injection Zebrafish\nMettre en place les couples reproducteurs de poisson zèbre et de recueillir des embryons, comme indiqué dans un précédent article JoVE par Rosen et al. 23.\nSélectionnez les embryons qui sont à 0-4 HPF en supprimant les embryons non fécondés et anormaux. Gardez les embryons dans une dis Petrih d'eau d'oeuf (60 sels de mer ug / ml; ~ 60 embryons / boîte) et incuber à 28 ° C.\nDechorionate les embryons avec des pincettes fines à 48 HPF.\nAnesthésier les embryons en les transférant à 40 ug / mL de tricaïne (acide 3-aminobenzoïque) contenant de l'eau d'oeuf à environ 2 min avant l'injection, mais pas plus de 2 h avant l'injection.\nNOTE: tricaïne solution mère (4 mg / ml, 100x) est préparé sous forme de 400 mg de poudre de tricaïne dans 97,9 ml d'eau doublement distillée et 2,1 ml de 1 M Tris-base (pH 9), avec le pH ajusté à 7,4. A conserver dans le congélateur à -20 ° C.\n4. Injecter des cellules humaines du cancer du sein dans l'espace périvitellin\nCharge: 15 ul de la suspension cellulaire dans une aiguille d'injection. Monter l'aiguille sur le micromanipulateur et détacher la pointe d'aiguille avec des pinces fines afin d'obtenir un diamètre d'ouverture d'extrémité de 5 à 10 um.\nUtiliser un picopump pneumatique et un manipulateur pour exécuter la micro-injection. ADJUst le picopump à injecter 400 cellules à chaque fois. Avant l'injection, compter les nombres de cellules manuellement par l'injection des cellules sur la partie supérieure d'une boîte de Petri contenant 1% d'agarose.\nmise en ligne des embryons anesthésiés (2-3 jours après la fécondation (dpf)) sur une surface plane, 1% d'agarose plaque injection, environ 10 embryons à chaque fois.\nOrienter la plaque d'injection à la main pendant les injections de placer les embryons dans la position préférée pour l' insertion de l'aiguille ( par exemple, en diagonale).\nPointer le bout de l' aiguille au niveau du site d'injection et insérer doucement la pointe de l' aiguille dans l'espace périvitellin entre le sac vitellin et le périderme de l'embryon de poisson zèbre (figure 2A).\nInjecter environ 400 cellules tumorales mCherry marqué. Assurez-vous que le sac jaune n'est pas rompu pour éviter l'implantation dans le sac jaune.\n5. Injecter des cellules humaines du cancer du sein dans le Doc\nPréparer l'aiguille d'injection et embryons de poisson zèbre comme décrit i protocole n étapes 1, 2 et 3.\nUtiliser une aiguille angle de 45 ° de sorte que le Doc peut être approché à partir du côté dorsal de l'embryon.\nInsérer l'aiguille dans le point de départ du Doc (figure 3A), juste dorsale à l' endroit où le conduit commence l' élargissement sur le sac vitellin, et injecter environ 400 cellules; l'injection est correct si le volume intérieur de la conduite se développe directement après l'impulsion et la vésicule ombilicale.\nNOTE: Plusieurs injections consécutives peut être effectuée sans extraire l'aiguille.\nTransférer les embryons de poisson zèbre injecté à l'eau d'oeuf.\nNOTE: Comme une variation considérable existe entre les embryons de poisson zèbre individuels, et comme la mort d'embryons après l'injection peut se produire, un nombre relativement important d'embryons de poisson zèbre (environ 100) doit être injecté avec des cellules cancéreuses.\nMaintenir les embryons de poisson zèbre à 33 ° C pour tenir compte des conditions de température optimales pour les poissons et les cellules de mammifères.\n_title "> 6. Écran du Injecté Embryons\nCribler chaque poisson sous un stéréomicroscope de fluorescence à 2 h post-injection (hpi) pour l'injection de l' espace périvitellin (Figure 2) ou à 24/2 hpi pour l'injection de Doc (figure 2) pour assurer que l' on injecte toutes les embryons avec un le même nombre de cellules tumorales. Retirer les embryons avec des erreurs d'injection, telles que les ruptures (figure 2B) ou des injections (figure 3B) de la vésicule ombilicale, et choisir les embryons avec des cellules injectées ci - dessous (figures 2C et 3B) ou au- dessus (figures 2D et 3B) seuil. Ne garder que les embryons avec environ 400 cellules en culture.\nRègle la possibilité que les cellules sont introduites directement dans la circulation au cours du processus d'injection en retirant les embryons avec des cellules déjà en circulation. De plus, enlever un embryon à une cellule de masse à proximité de la Doc (Figure 2D\n7. image et analyser le processus métastasique\nRecueillir plusieurs embryons anesthésiés avec une pipette de Pasteur large pointe et les transférer vers le fond de verre d'une boîte en polystyrène.\nRetirer l'excès d'eau et de garder une quantité limitée d'eau d'œufs. Manipuler l'embryon en position avec un outil de boucle de cheveux et de placer un couvercle sur le dessus du verre.\nUtilisation d'un microscope confocal inversé en combinaison avec l'eau d'immersion ou objectifs secs à longue distance. Placez l'embryon de telle sorte que la région d'intérêt est aussi proche de l'objectif que possible.\nImager immédiatement après l'anesthésie pour réduire le risque de mort due à l'évaporation du liquide.\ndes signaux de capture de EGFP marqué vasculature et les cellules tumorales marquées mCherry à la même position sur les embryons de co-injectées avec des cellules enregistrer les vaisseaux sanguins en fusionnant les deux canaux d'imagerie.\nPour chaque embryon de poisson zèbre, recueillir deux ensembles différents d'imagesà partir de la zone de tête et la région de queue.\nQuantifier le nombre de cellules disséminées.\nPour les injections d'espace périvitellin, compter le nombre de cellules dans chaque poisson ayant diffusé à partir de la masse cellulaire vers le corps du poisson embryonnaire dans les régions de tête et de queue 4, 15; les régions sont au-delà des limites de la cavité cardiaque frontalement, au-dessus de la face dorsale de la vessie natatoire, et au-delà de l'ouverture urogénitale caudale.\nPour l'injection de Doc, compter le nombre de cellules individuelles qui ont envahi les fibres de collagène de l'empennage de la circulation (MDA-MB-231) ou le nombre de groupes formés par des cellules collectivement (M2) dans le tissu hématopoïétique caudal (CHT) de chaque poisson zèbre 19.\nÉtude invasion et métastases plus en détail à l'aide de la microscopie confocale (fortement recommandé).\nUtiliser un faible grossissement (objectif 4X) à l'image l'ensemblele corps et pour obtenir une vue d'ensemble du motif de diffusion de cellules tumorales.\nREMARQUE: un grossissement supérieur (20X et 40X objectifs) est adapté à l'étude de l'angiogenèse intra et péri-tumorale et la localisation précise des cellules disséminées dans le corps de l'embryon.\nUtiliser un laser de 488 nm pour balayer le système vasculaire d'embryons de poisson zèbre et un laser 543 nm pour balayer les cellules tumorales implantées marqués par fluorescence rouge. Obtenir une image de haute qualité en balayant chaque embryon dans huit à dix étapes. Numériser et faire la moyenne de chaque étape six fois.\nplacer délicatement l'embryon dans l'eau d'œuf si elle est nécessaire pour d'autres expériences.\n8. Effectuer une analyse statistique en utilisant une analyse de variance (Anova) Suivi par analyse post - hoc\nDans le modèle de poisson zèbre xénogreffe embryonnaire avec une injection d'espace périvitelline, la diffusion hématogène des cellules cancéreuses marquées dans le corps du poisson est considéré comme la migration active. Ce processus peut être détecté et quantifié sous un microscope à fluorescence, comme décrit dans les procédés ci-dessus. Pour illustrer ce modèle de xénogreffe, nous avons suivi le processus de diffusion des différentes lignées cellulaires de cancer du sein connu (ou sans) invasion / métastases potentiel selon in vitro et in vivo des études de souris, y compris les cellules épithéliales mammaires bénignes normale M1, précancéreuses ASDH transformé des cellules M2 et hautement métastatiques des cellules MDA-MB-231, 1 jour après l'injection (ppp) en avant. Une image de microscopie confocale haute résolution a montré que les cellules MDA-MB-231 (rouge) présentent un phénotype agressif, avec des bords irréguliers dans l'espace périvitellin. protubérances en forme de pseudopodes et fronts invasifs étaient aussi fréquemment présents (Figure 4A, à gauche). Quelques cellules disséminées dans la circulation sanguine dès 1 dpi (figure 4A, à droite). A 2 dpi, la diffusion claire a été observée dans les parties distales du poisson (figure 4A, à droite). Le nombre de cellules disséminées a encore augmenté à 3 dpi (Figure 4A et 4D). En revanche, lorsque les cellules ont été contestées M2 zebrafish, ils ont fait preuve propagation modeste dans le corps du poisson après 2 dpi (figure 4B). Ils ont également montré une diffusion accrue après le temps passé (figure 4F). Comme le montre la figure 4C et 4G, les cellules M1 rarement diffusées en circulation zebrafish, et même la migration locale active dans l'espace périvitelline était peu fréquente au cours de la période d'observation. La masse cellulaire M1 a été pratiquement détenu au site d'injection d'origine. Si la définition de la diffusion positive ou métastases comme> 5 cellules dans le corps du poissonss = "xref"> 4, la métastase des cellules MDA-MB-231 et M2 a été observée chez 92% et 57% des poissons, respectivement, à 3 dpi (figure 4G). En revanche, aucune diffusion positive a été observée avec des cellules M1. Par conséquent, ce modèle zebrafish de la progression des cellules cancéreuses humaines reflète exactement le niveau relatif du potentiel métastatique des différentes cellules chez les souris. La néovascularisation (verte) qui a germé à partir du plexus sous - intestinaux du poisson zèbre embryonnaire et a pénétré dans la masse des cellules MDA-MB-231 ou M2 était également présente après l'injection de l' espace périvitellin de cellules tumorales suivi de 3 jours d'incubation (Figure 4A et 4B, à gauche ). Conformément à l'incapacité dans la diffusion, seulement une légère néovascularisation a été détectée lors de l' implantation de cellules M1 (figure 4C).\nDans le modèle de poisson zèbre xénogreffe embryonnaire avec mCherry marqués cellules MDA-MB-231 et l'injection de Doc, le laboratoireles cellules cancéreuses DELE dans le tailfin du poisson zèbre sont considérés comme représentatifs de l'extravasation actif. Les cellules MDA-MB-231 ont été marquées mCherry injectés à 2 dpf. A 3 dpi, les cellules ont commencé à migrer hors des vaisseaux à la nageoire caudale, qui est enrichie en collagène. Simple MDA-MB-231 cellules migrées une par une, de façon indépendante à partir des vaisseaux, à l'empennage distant (figure 5A). A 6 dpi, l'invasion peut être quantifiée en comptant le nombre de cellules ayant migré dans le tissu empennage. Dans le modèle d'injection Doc cellulaire M2 marqué mCherry, l'injection a également été réalisée à 2 dpf. Cependant, un phénotype a été observé au cours de cluster du processus de extravasation actif. A 1 dpi, les cellules M2 ont commencé à migrer hors des vaisseaux dans le CHT du poisson zèbre. A 2 dpi, les cellules M2 migrés ont commencé à former un cluster entre les navires dans le CHT (figure 5B). Quantification du nombre de groupe de cellules invasives M2 dans la région CHT pourrait être menée à6 dpi.\nFigure 1: Principales étapes pour étudier le comportement invasif des cellules cancéreuses du sein chez le poisson zèbre embryonnaire. (A) Après avoir traversé le poisson zèbre parental pendant une nuit, Tg (FLI1: EGFP) embryons de poisson zèbre ont été recueillies le matin suivant et ont été maintenues à 28 ° C. (B) Les embryons ont été dechorionated avec des pincettes fines sous une loupe binoculaire 48 fécondation h (HPF). Les cellules cancéreuses du sein marquées ont été recueillies et remises en suspension dans une petite quantité de PBS. Après préparation bien, les cellules en suspension ont été chargés dans une aiguille. Environ 400 cellules ont été injectées dans le conduit de Cuvier (Doc) de l'espace périvitellin sous un stéréomicroscope. Les embryons injectés ont été maintenus à 33 ° C. (C) 2 h après l' injection (hpi), les embryons ont été soumis à cale dépistage Reful sous un stéréomicroscope de fluorescence. Les embryons ont été maintenus à 33 ° C pendant 3 ou 6 jours. Pendant l'intervalle, les embryons ont été soumis au traitement prévu. (D) la diffusion des cellules cancéreuses par injection de l' espace périvitellin ou invasion par injection doc a été détectée, compté, et imagée par microscopie confocale 3 ou 6 jours après l' injection (dpi). S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 2: site d'injection de l' espace périvitellin et erreurs communes. (A) A environ 400 cellules marquées mCherry (MDA-MB-231) ont été injectées dans l'espace périvitellin. Le fond clair (le plus haut), le vert vasculature (moyenne supérieure), et la masse de globules rouges (moyenne inférieure) d'injectioned embryons de poisson zèbre ont été capturés par microscope confocal. L'image fusionnée (la plus basse) des trois canaux montre l'emplacement stéréo de la masse cellulaire dans l'embryon. (B) Les cellules ne visaient pas de manière appropriée l'espace périvitelline. Le sac jaune a été rompu. (C) des cellules injectées en dessous du seuil (moins de 400). (D) des cellules injectées seuil ci - dessus (plus de 400). La masse cellulaire était trop proche du canal de Cuvier, qui a un large flux sanguin. Barre d'échelle = 50 pm. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 3: Vue d' ensemble du conduit d'injection Cuvier (Doc). (A) Schéma de l'injection de Doc à 2 jours post-fertilisation (dPf) avec des cellules de cancer du sein chez les embryons de poisson zèbre. La flèche indique le Doc. (B) Exemples d'injections positives, avec environ 400 cellules de cancer du sein; injections négatives, y compris le jaune misinjection; et un nombre incorrect de cellules injectées à 4 hpi. Les flèches et les cercles indiquent les cellules injectées. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 4: Comparaison de la capacité de diffusion entre les différentes lignées de cellules du sein. Environ 400 mCherry marqué MDA-MB-231, MCF10Aras (M2), ou des cellules MCF10A (M1) ont été injectés dans l'espace périvitellin de l'embryon de poisson zèbre 48 HPF. Les embryons injectés ont été suivis pendant 3 jours. (A, B, et C) Haut-resolution micrographies montrant le processus de migration et la diffusion représentant de MDA-MB-231 (A), M2 (B), et M1 cellules (C) dans les corps embryonnaires individuelles 1, 2 et 3 jours après l'injection (dpi). À gauche, la migration des cellules dans l'espace périvitelline (rouge) et la vasculature peritumoral et intratumorale (vert). signaux jaunes indiquent le chevauchement des microvaisseaux et des cellules. Moyen-Orient, l'image entière de l'embryon. Droit, visualisation des cellules disséminées dans la partie postérieure de l'embryon. jaune indiquent les pointes de flèches simples cellules disséminées. Barre d'échelle = 50 pm. (D, E, et F) Quantification du nombre de cellules disséminées dans chaque corps embryonnaire à 1, 2, et 3 dpi. Les résultats sont exprimés en moyenne ± SEM. Les résultats de l'analyse à sens unique de la variance (Anova), suivie par l'analyse post-hoc sont présentés. P <0,05 a été acceptée comme significative statistiquement (* 0,01 <P <0,05; ** 0.001 <P <0,01; *** P <0,001. (G) La comparaison de l'incidence des intravasation pour MDA-MB-231, M2, M1 et les cellules dans les organes embryonnaires à 1, 2, et 3 dpi. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nFigure 5: Les différents comportements de la métastase des cellules MDA-MB-231 et M2 dans le poisson zèbre avec conduit d'injection Cuvier. (A) représentatifs des images confocales du poisson zèbre suivis à 3, 4, et 5 dpi pour montrer le comportement de migration cellulaire unique de cellules MDA-MB-231 chez le poisson zèbre. Les flèches indiquent invasifs MDA-MB-231 cellules qui ont migré hors des vaisseaux dans les tailfins. Barre d'échelle = 200 pm dans la colonne de gauche, 50 pm dans la colonne de droite. (B) représentantimages confocale du poisson zèbre ont suivi à 1, 2 et 3 ppp pour montrer le comportement de migration des amas de cellules des cellules M2 zebrafish. Les flèches indiquent les cellules M2 invasives qui ont migré hors des vaisseaux du tissu hématopoïétique caudale (CHT) et forment un groupe entre les navires. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.\nIci, nous avons décrit deux méthodes pour étudier le comportement invasif des cellules cancéreuses du sein dans Tg (FLI1: EGFP) embryons de poisson zèbre, avec des injections d'espace périvitelline et Doc. En injectant des cellules cancéreuses marquées par un colorant chimique ou protéine fluorescente dans des embryons de poisson zèbre transgénique, les caractéristiques dynamiques et spatiales de l'invasion et les métastases peuvent être clairement suivis en temps réel à la seule cellule ou au niveau du groupe sous un microscope à fluorescence. Dans la plupart des cas, la progression rapide de métastases chez le poisson zèbre assure que le dosage peut être effectué dans 1 semaine après la transplantation. De plus, les statistiques puissantes peuvent être obtenues avec de grandes cohortes de poissons.\nLes événements précoces et tardifs de la cascade métastatique pourraient être simulés et récapitulées en injectant des cellules cancéreuses dans l'espace périvitelline ou Doc, respectivement. L'espace périvitellin est l'espace confiné entre le périderme du poisson et de la vésicule ombilicale, qui pr Interdictionws pour surveiller une dissémination des cellules tumorales uniques provenant de sites primaires dans le corps vivant. Après l'implantation, les cellules cancéreuses subissent la migration locale et l'invasion dans l'espace périvitelline (considéré comme le site principal), puis ils intravasate dans les vaisseaux sanguins et diffuser ainsi que la circulation. A la tête et empennages (considéré des sites cibles éloignés), les cellules cancéreuses s'accumulent dans les lits capillaires étroits et extravasation. Par conséquent, le nombre de cellules qui se trouvent sur les sites distants dans le corps du poisson est une mesure de la capacité métastatique. En outre, les cellules plus extravasées peuvent être observées à des points de temps plus tard, ce qui est également vrai de l'essai d'injection de Doc.\nLe Doc est une veine cardinale commune élargie avec un flux sanguin étendu 24. Cibler directement le Doc comme un site d'injection introduit des cellules cancéreuses dans le système circulatoire. Dans la pratique, les cellules cancéreuses du sein diffuse dans tout le corps embryonnaire par leflux sanguin immédiatement après l'injection de Doc. Les cellules arrêtent ensuite à la veine caudale et de l'aorte dorsale. Extravasation, l'invasion et la formation de micrométastases peuvent être observées successivement dans les 6 jours. Comme indiqué précédemment 16, métastatique MDA-MB-231 cellules et cellules précancéreuses mammaires M2 présentent différents phénotypes invasives. cellules MDA-MB-231 subissent une invasion unicellulaire de la tailfin matrice riche en collagène. Ainsi, le potentiel d'invasion des cellules MDA-MB-231 peut être mesurée en comptant le nombre de cellules qui ont extravasées et envahies le tissu tailfin. En revanche, les cellules M2 forment des groupes de tailles différentes et subissent une invasion collective du CHT. Quantification du potentiel d'invasion des cellules M2 en comptant le nombre de grappes de ce protocole est difficile et est réalisée de préférence en faisant une image en 3D en utilisant la microscopie confocale et la détermination du volume des cellules tumorales en cluster.\nLe défi technique en micro des cellules cancéreusesinjection cible avec succès l'espace périvitelline ou Doc. La micro-injection d'un grand nombre d'embryons est une procédure fastidieuse nécessitant un opérateur hautement qualifié et patient. Les facteurs qui contribuent à des variations dans les résultats de chaque poisson comprennent le stade de développement de l'embryon lors de l'injection, les différences dans le nombre de cellules injectées, et la fuite des cellules dans le sac jaune. Bien que rare, la manipulation non intentionnelle peut pénétrer dans le système vasculaire et à introduire les cellules dans le système circulatoire directement, en particulier dans l'injection de l'espace périvitellin. Pour réduire davantage la variation et d'assurer la fiabilité des analyses, l'examen microscopique est nécessaire d'exclure du poisson non qualifié à des moments tout au long du processus. En outre, aveuglé l'analyse par un professionnel sans connaissance du cadre est fortement recommandé d'obtenir une quantification impartiale.\nEn résumé, les deux modèles que nous avons présentés ici mettent en lumièrevisualiser les processus d'invasion cellulaire et les métastases in vivo sans procédures invasives. Bien que nous ne ont étudié les cellules de cancer du sein en deux modèles en ce qui concerne le potentiel métastatique, ils pourraient être extrapolés à d'autres types de cancer. De plus, les modèles pourraient avoir des applications plus larges pour déterminer les mécanismes et de nouvelles cibles moléculaires qui contrôlent les métastases des cellules cancéreuses en utilisant (epi) la manipulation génétique. En raison de la pénétrabilité plus élevé d'embryons de poisson zèbre par des composés à petite molécule par rapport à l'alimentation ou l' injection de rongeurs 25, les deux modèles présentés ont également des avantages en termes de criblage à haut débit de potentiels nouveaux médicaments anti-invasion / métastases.\nLes études sur les membres de la famille du TGF-β sont pris en charge par le Centre de génomique du cancer des Pays-Bas. Sijia Liu Jiang Ren et sont pris en charge par le Conseil des bourses d'études en Chine pour 4 années d'études à l'Université de Leiden. Nous tenons à remercier le Dr Fred Miller (Barbara Ann Karmanos Cancer Institute, Detroit, MI, USA) pour les lignées cellulaires MCF10A.


Artek – méthodes de production\nLe pieds-L, composant central du mobilier Aalto\nInspection d'un piètement en bois courbé dans les années 1930\nArtisan qualifié travaillant sur une courbe de lamelle de bouleau.\nProduction du mobilier Alvar Aalto dans les annéées 1930\nSavoir d'où vient le bois, comment il a été exploité, coupé et acheminé, fait partie de la chaîne de responsabilité environnementale. L'entreprise Artek veut être complètement transparente et ses produits – conçus pour durer – sont plus pertinents que jamais.\nLes meubles, les luminaires, et les accessoires sont régulièrement et minutieusement testés selon des critères de respect de l’environnement, de sécurité et de durabilité. Le nom Artek ne garantit pas seulement un beau design, mais aussi la plus haute qualité possible.\nDes normes rigoureuses doivent être respectées pour la production d’objets Artek, aussi bien sur le site mère que dans les usines partenaires, soigneusement sélectionnées.\nArtek se conforme aux normes de sécurité européennes. L’usine-mère en Finlande, où sont fabriqués la majorité des produits, répond aux certifications ISO 9001 et 14001. Le bois utilisé est certifié FSC et/ou PEFC.\nChaque arbre coupé pour fabriquer des produits Artek est vieux de 50 à 80 ans. Il faut une vie entière à un arbre pour pousser et les objets fabriqués grâce à lui devraient au moins durer aussi longtemps. En Finlande, les produits Artek se transmettent de génération en génération, et les ajouts récents à la collection viennent complèter cet héritage durable.\nLa petite sœur de la colonne architecturale\nA l’origine, Alvar Aalto dessina le L-leg pour le tabouret 60, mais il est par la suite devenu un élément de base de la collection de mobilier Artek. Aalto en parlait comme de "la petite soeur des colonnes en architecture".\nLes L-legs, dans des tailles variées, sont utilisées dans la construction de nombreuses chaises et tables.\nPour la fabrication du « L-leg », Alvar Aalto a breveté un procédé de flexion du bois massif au début des années 30 : des coupes verticales multiples sont réalisées à la fin de la pièce de bois massif pour créer des fentes jusqu'au niveau de la courbe prévue. De fines bandes de bois plaqué sont insérées dans ces fentes et collées. Puis l'ensemble est courbé, les lamelles insérées glissant dans les fentes du bois massif.\n...à partir de lamelles de bouleau\nLes lamelles de bouleau sont moulées pour former des courbes fermées ou des formes ouvertes.\nAlvar Aalto utilisa les courbes fermées pour la création de nombreux meubles tel que le fauteuil Paimio, les tea trolley, les tables d’appoint ou les étagères murales.\nLes formes ouvertes servent quant à elle de piètement aux assises suspendues ou de dossier pour la chaise Rival de Konstantin Grcic.\nDu bois contreplaqué...\nCréer du mobilier en bois moderne était une des grandes ambitions d’Aalto. Il effectua de nombreuses expériences à la fin des années 20 avec du bois contreplaqué courbé : de longues bandes de bouleau de quelques millimètres d’épaisseur – appelées lamelles – assemblées en respectant la cohésion des veines du bois, puis collées et courbées selon la forme désirée. Ces lamelles sont assez fine pour réaliser des courbes aussi facilement qu’avec l’acier tubulaire. Le résultat est solide et flexible, mais avec un aspect et un toucher bien plus chaleureux.\nAu cours des décennies, des techniques variées ont été développées et affinées spécifiquement pour les produits dessinés par Alvar Aalto.\ntechniques de cintrage du bois\nLes troncs sont triés pour y découper des planches sans gaspillage.\nChaque pièce de bois est évaluée afin d’être utilisée au mieux : un morceau de bouleau sans noeud servira par exemple pour des pieds de tabouret, du bois marqué sera laqué, tandis que les déchets de bois alimenteront le système de chauffage du site.\nLe bois utilisé pour les produits Artek est choisi pour sa qualité, son grain, et sa couleur, mais il reste un matériau naturel. Chaque arbre dans une forêt possède ses particularités et ses marques, de même chaque pièce Artek est légèrement différente des autres grâce à ses petites irrégularités naturelles. Loin d’être des défauts, elles donnent aux objets leur spécificité et leur caractère.\nLe séchage à l’air libre - ou saisonnier - donne sa couleur finale au bois. Joliment nommé le "bouleau blond », il est prisé pour sa teinte claire.\nLe bois sèche en extérieur à l’air libre jusqu’à 12 mois, à l’ombre afin de ne pas être décoloré par le soleil.\nBouleaux de Finlande\nLes forêts finlandaises sont riches en pins et en bouleaux qui sont les principales essences utilisées par Artek. Pour s'imposer dans les forêts mixtes, les bouleaux finnois grandissent vite et haut, avec un tronc simple, une couronne à leur sommet dotée de peu de branches pour capter le maximum de soleil.\nUne fois à maturité, ils développent un bois dur, au grain serré, de grande qualité.\nLa majorité des produits Artek est fabriquée dans l’usine de Turku en Finlande, comme depuis les débuts de la production dans les années 1920.\nL’usine-mère, répartie sur 7 000 m2, est une exploitation semi-industrielle. Elle est spécialisée dans la flexion de bouleau massif, les lamelles de bois, le contre-plaqué et le vernissage, aussi bien que dans la menuiserie traditionnelle et la finition laquée. Les ébénistes y travaillent chaque pièce à la main.\nLes forêts finlandaises sont riches en pins et en bouleaux qui sont les principales essences utilisées par Artek. Pour s'imposer dans les forêts mixtes, les bouleaux finnois grandissent vite et haut, avec un tronc simple, une couronne à leur sommet et peu de branches pour capter le maximum de soleil.\nLes produits Artek sont fabriqués en série, mais les matériaux choisis et les méthodes utilisées n’ont rien à voir avec une production mécanique à la chaîne.\nLes méthode de production d'Artek combinent des techniques de fabrication modernes avec de l'artisanat qualifié, conformément à l'esprit du travail d’Alvar Aalto.\nArtek a choisi d’utiliser des matériaux locaux, durables et sûrs, qui permettent une production respectueuse de l'environnement et des produits design de la plus haute qualité possible.


Publié le 20 mars 2013 à 03h55 - Mis à jour le 20 mars 2013 à 11h17\nLe président de l'UMP, Jean-François Copé visite le Salon de l'agriculture, porte de Versailles, à Paris, le 27 février. AFP/KENZO TRIBOUILLARD\nTirer un profit politique de la démission de Jérôme Cahuzac, sans accabler l'ancien ministre du budget. Tel est le positionnement adopté par la majorité des responsables de l'UMP suite à l'annonce par l'Elysée, mardi 19 mars, du départ de ce poids-lourd du gouvernement de Jean-Marc Ayrault.\n"La situation de Jérôme Cahuzac n'était évidemment plus tenable", estime Jean-François Copé. Pour le président de l'UMP, cette démission - intervenant la veille de la présentation de sa motion de censure contre le gouvernement - fragilise encore un peu plus la situation d'un exécutif au plus bas. "Ce gouvernement n'a plus ni direction ni boussole", juge M. Copé. Pour un de ses proches, "cette démission ajoute un problème de gouvernance à un échec dans le domaine économique et social".\n"COUP TRÉS DUR"\nLes soupçons pesant sur M. Cahuzac constituent".un coup très dur pour un gouvernement qui s'était autoproclamé exemplaire"., fait valoir le filloniste, Dominique Dord. La".risque de"., ironise à son tour Eric Ciotti. L'exécutif"., accuse Pierre Lellouche."., ironise un proche de M. Copé.".\nD'autres ténors de l'UMP enfoncent le clou.".Cahuzac n'était plus à même de gérer les affaires de la France"."., estime Nadine Morano. Sa démission "fragilise considérablement le gouvernement et le président de la République", poursuit Alain Juppé sur BFM TV.\nAu sein du parti, Laurent Wauquiez se montre le plus virulent en jugeant que l'ancien ministre du budget ".aurait dû démissionner plus tôt"., en raison des".soupçons de collusion et de conflits d'intérêt".qui pèsent sur lui.".\nRESPECTER LA PRÉSOMPTION D'INNOCENCE\nMalgré la tentation d'enfoncer un gouvernement à la peine, la retenue domine dans le ton employé par les responsables UMP. Tous soulignent la nécessité de respecter la présomption d'innocence. M. Copé a donné l'exemple en rappelant qu'il faut respecter ce principe. Dans la même veine, le chef de file des députés UMP, Christian Jacob, a souligné ne pas vouloi".à M. Cahuzac à ce stade. "L'UMP ne s'acharnera pas sur lui", promet M. Jacob, mercredi, sur France Info.\nMême appel à la prudence de la part de Claude Guéant :"., rappelle-t-il sur BFM TV."., résume Guillaume Peltier.".\nLa droite se félicite également de ne pas s'être déchaînée contre M. Cahuzac ces dernières semaines. Elle tient à marquer sa différence avec la gauche, accusée d'avoir accablé l'ancien ministre du travail Eric Woerth quand il avait été mis en cause par le site Mediapart dans l'affaire Bettencourt, en 2010."., insiste M. Copé. M. Cahuzac"., remarque Luc Chatel sur France 2.".\nDans les rangs de l'UMP, certains saluent même les qualités de M. Cahuzac, exprimant".pour lui, à l'instar de François Baroin, qui salue"., écrit Dominique Bussereau sur Twitter.".\nPour un proche de M. Copé, la démission de l'ex-ministre du budget s'inscrit dans "un contexte parfait" pour l'opposition car elle intervient au moment d'une offensive du président de l'UMP. Mercredi après-midi, il va présenter à l'Assemblée nationale une motion de censure contre la politique économique du gouvernement. Lors du débat qui suivra, "Jean-François Copé va être en position de force, veut croire un de ses soutiens. Il va pouvoir incarner l'opposition et être très audible" face au premier ministre, Jean-Marc Ayrault.\nLire : Copé veut apparaître comme le premier opposant au gouvernement (en zone abonnés)".


Un jour un homme > Entretien barbe > Kit entretien barbe > Kit entretien barbe Dandy N.1706\nRéférence : N.1706\nKit entretien barbe Dandy parfait pour les hommes raffinés qui aiment prendre soin d'eux avec des produits d'exceptions !\nVous ne savez plus où donner de la tête pour sélectionner vos produits pour entretenir votre frimousse ? Alors ne cherchez plus, nous avons sélectionné pour vous les soins et accessoires nécessaire pour le bien-être de votre barbe !\nCe coffret est composé de 6 produits idéals pour prendre soin de vous et qui se transporte partout dans vos déplacements.\nCe kit vous propose :\n- Une trousse de toilette homme Paul Marius Le Barbier. Elle est composée en cuir de buffle naturel(réf : PM.BN).\nAvec elle, vous pouvez ranger facilement tous vos produits de beauté et accessoires afin de les réunir en un seul et même endroit. Résistante et de qualité, la trousse se transporte dans tous vos voyages.\nL’intérieur de la pochette est en toile imperméable, ceci permet de la nettoyer plus aisément. Ses dimensions sont standard : 24x11x11cm.\n- Huile à barbe Osma Tradition en format 50ml. (réf : HB50)\nDe fabrication française, ce soin est spécialement conçu pour les hommes souhaitant garder un poil souple, bien hydraté et nourrit.\nComposé à 98% d’agents naturels, cette solution permet d’obtenir une barbe forte et résistante face aux éléments extérieurs.\nElle ne laisse aucun effet gras sur vos poils contrairement à certains produits de grande surface ou de mauvaise qualité.\n- Baume barbe Uppercut Deluxe en format tube de 100ml. Son conditionnement facilite l’application et la conservation de la solution. (réf : UPDP0002)\nLes mecs qui prennent soin d’eux ne peuvent pas passer à côté d’un tel produit. Grâce à sa formule vous facilitez le coiffage et l’entretien de votre barbe.\nSes propriétés permettent d’obtenir d’hydrater et de favoriser la pousse pour une barbe plus douce et souple.\nDe plus, vous apprécierez son doux parfum de caramel / coco qui vous accompagnera tout au long de la journée.\n- Brosse a barbe Beyer's Oil et son manche en véritable bois de poirier provenant de la forêt noire de Beyer en Allemagne. (réf : BB0004)\nL’accessoire est en poils de sanglier ce qui lui permet d’être robuste et d’agir délicatement sur vos poils.\nSes dimensions sont de 90mm x 28mm ce qui lui permet d’avoir une bonne prise en main lors de votre geste quotidien. Elle se range facilement dans une poche et permet de recoiffer votre barbe à n’importe quel moment de la journée.\nVous pouvez l’utiliser pour faciliter l’application d’une huile ou d’un baume à barbe pour agir plus en profondeur.\nCet accessoire est fortement conseillé pour tailler vos poils dans le détail. Sa petite taille lui permet d’accéder à des endroits difficiles du visage et d’avoir une précision ultime.\nGrâce à ses lames affûtées de 9.5cm à la perfection, votre geste de coupe sera rapide et efficace.\n- Cire à moustache Bluebeards Revenge dans son pot en aluminium de 20ml. (réf : BBRMOWAX)\nCe soin en format de poche permet de la trasporter partout avec vous pour une utilisation quotidienne.\nAvec cette formule, vous domptez et sculptez tous vos poils et évitez ainsi l’effet frisotis qui casse tout le charme de votre glorieuse.\nFacile à utiliser, sa texture malléable apporte une bonne tenue du poil. Et vous profitez d’une douce odeur de parfum citronné qui sait se faire discret.\nComme vous pouvez le constater, ce kit entretien barbe Dandy contient des produits et accessoires de qualité, très reconnus à travers le monde pour leur efficacité et simplicité !


San Francisco est en passe de devenir emblématique, mère de nombreux stéréotypes à travers le monde. Les amateurs des shows télévisés comme Silicon Valley ont sans doute remarqué que “San Fran” véhicule une image de billionaires, baskets aux pieds et maisons tenues par de dociles Siris. Épicentre incontesté des startups et de la technologie, San Francisco ne semble pas au premier coup d’oeil, propice à la vente physique traditionnelle. Et si l’on transformait les citrons technologiques en limonade du retail ? Ou csi l’on suivait l’évolution du shopping aux côtés de la technologie ? Voilà une métaphore que la communauté Bespoke a décidé d’explorer. Le Bespoke Center se décline ainsi en trois facteurs clés, un espace de co-working pour le retail et les startups tech, un espace événementiel pour partir à la rencontre des nombreux partenaires, enfin, un lieu de démonstration pour tester sur des consommateurs du monde réel, le champ des possibles qui s’offre aux nouveaux formats du retail alliés aux nouvelles technologies.\nLe Bespoke Co-working met à disposition 1300m² qui comportent des bureaux et salles de conférence à l’attention des entreprises de retail-tech. Sa localisation en est un atout majeur. Situé au coeur du centre commercial de Westfield, marques et entrepreneurs peuvent ainsi profiter de sa forte fréquentation. Les événements Bespoke peuvent accueillir de 30 à 1200 personnes pour des conférences, workshops, hackathons, défilés, commerces ou autres. De son côté, Bespoke Demo permet aux détaillants et entreprises tech de lancer leurs produits en procédant à des études de marché. Par ailleurs, les salles de conférences donnant directement sur le centre peuvent se transformer en pop-up stores. Superbe opportunité pour les marques qui profitent dès lors des 20 millions de visiteurs par an. Hors des sentiers battus, au programme du Bespoke Demo, Joy Fan, la leader de la conception expérientielle, propose un rendez-vous mensuel “How to Pop-Up Series” (séries de réflexion sur le pop-up)\n“Si vous êtes un entrepreneur ou un fabricant, vous avez un nombre incalculable de canaux (pour tester) en ligne mais rares sont les endroits où il est possible de tester du offline”. – Kevin McKenzie, en charge du bureau numérique de Westfield Corp.\n“L’espace de démo est véritablement notre raison d’être. Tandis que que les parties co-working et événements oeuvrent en coulisse, nous avions vraiment envie d’un espace en premières loges pour atteindre directement le consommateur. Il s’agit là certainement de la partie la plus novatrice de notre configuration. Westfield se définit comme un lieu de rencontre [à San Francisco] où la technologie est en parfaite adéquation avec ce que nous faisons. Nous avons accueillis des choses comme Angry Birds et Samsung piliers d’expériences de réalité virtuelle. On ne pouvait pas toucher du doigt cette nouvelle technologie ailleurs” – Lindsey Thomas, VP marketing et communications au Westfield Labs.