Novel Atomic Force Microscopy Based Biopanning for Isolation of Morphology Specific Reagents against TDP-43 Variants in Amyotrophic Lateral Sclerosis | Protocol (Translated to Danish)\nFordi proteinvarianter spille kritiske roller i mange sygdomme, herunder TDP-43 i amyotrofisk lateral sklerose (ALS), alfa-synuclein i Parkinsons sygdom og beta-amyloid og tau i Alzheimers sygdom, er det afgørende vigtigt at udvikle morfologi specifikke reagenser, som selektivt kan målrette disse sygdomsspecifikke protein varianter at undersøge den rolle, disse varianter i sygdomspatologi og potentielle diagnostiske og terapeutiske anvendelser. Vi har udviklet nye atomic force mikroskopi (AFM) baseret biopanning teknikker, der muliggør isolering af reagenser, som selektivt genkender sygdomsspecifikke proteinvarianter. Der er to centrale faser involveret i processen, de negative og positive panorering faser. Under den negative panorering fase, fager som er reaktive til off-målantigener elimineres gennem flere runder af subtraktiv panning udnytte en række nøje udvalgte off-target antigener. Et centralt element i den negativepanorering fase er at udnytte AFM billeddannelse at overvåge processen og bekræfte, at alle uønskede fagpartikler fjernes. For positive panorering fase er målantigen af interesse fastgjort på en glimmer overflade og bundne fager elueres og screenes for at identificere fager, som selektivt binder målantigenet. Målproteinet variant behøver ikke at være oprenset tilvejebringe de passende negative panorering kontroller er blevet anvendt. Selv målprotein varianter, der kun er til stede i meget lave koncentrationer i komplekse biologiske materiale kan anvendes i den positive panorering trin. Ved anvendelse af denne teknologi, vi købte antistoffer mod protein varianter af TDP-43, som er selektivt findes i humant ALS hjernevæv. Vi forventer, at denne protokol skal gælde for generere reagenser, som selektivt binder proteinvarianter stede i en lang række forskellige biologiske processer og sygdomme.\nTilstedeværelsen af protein-varianter er blevet impliceret som en faktor i udviklingen af mange sygdomme, herunder neurodegenerative sygdomme, såsom Alzheimers, Parkinsons, ALS og frontotemporal demens (FTD) 1,2,3,4,5,6,7,8,9 , 10,11. Oligomere former af proteinerne beta-amyloid og a-synuclein menes at være de toksiske arter, der er ansvarlige for Alzheimers og Parkinsons henholdsvis 2,3,4,5. Aggregater af TAR DNA-bindende protein 43 (TDP-43) har været knyttet til ALS og FTD 12,13,14. Derfor reagenser, såsom antistoffer, der selektivt kan målrette de forskellige proteinvarianter kan blive stærke redskaber til at tjene som diagnostiske markører og potentielle lægemidler. I denne undersøgelse har vi fokuseret på at udvikle reagenser, der selektivt binder varianter af TDP-43 protein impliceret i ALS, men teknikken er skitseret i grønbogen bør gælde for isolering af reagenser mod en bred vifte af protEin varianter.\nCytoplasmatisk sammenlægning af TDP-43 er blevet identificeret som en patologisk funktion i ALS 15,16,17,18,19. Typisk TDP-43 findes i kernen af alle celler fra et normalt individ, selvom det har en tendens til at bevæge sig mellem cytosolen og kernen 15,17. Men i ALS aggregerede former af TDP-43 er fundet i cytoplasmaet af udvalgte neuroner og glia med lavere koncentrationer fundet i kernen tyder bevægelse TDP-43 fra kernen til cytoplasmaet i sygdomsprogression 16,20. Mens sammenlægning af TDP-43 findes i de fleste ALS tilfælde betyder det ikke højde for alle tilfælde siden 1% -2% af de samlede ALS tilfælde (eller 15% -20% af familiære ALS tilfælde) er knyttet til mutationer i superoxiddismutase 1 (SOD1) -gen 15,17. På grund af den vigtige rolle, TDP-43 i langt de fleste ALS tilfælde her har vi fokus på at udvikle antistof reagenser, som selektivt kan binde til TDP-43 varianter, der ertil stede i humant ALS hjernevæv udnytte vores hidtil ukendte AFM baseret biopanning teknikker.\nOprindeligt vi har brug for en mangfoldig repertoire af antistof bindende domæner. Vi kombinerede tre biblioteker forskellige fag-display enkelt kæde variable domæne antistof fragment (scFv'er) (Tomlinson I og J og ark biblioteker 21). Den panorering processen er opdelt i negative og positive panorering faser. Fager fra bibliotekerne først underkastes den negative panorering proces, hvorunder fager reaktiv til flere off-målantigener er udelukket. Efter afslutningen af hver runde af negativ panning for hver off-target antigen, er processen overvåges af AFM imaging at sikre, at alle fag binding off-målantigener er blevet fjernet. Først efter at have kontrolleret af AFM imaging, at alle reaktive fager fjernes vi videre til det næste mål. For at isolere reagenter mod TDP-43 varianter impliceret i ALS vi udnyttet følgende negative panning antigener: 1) BSA for at fjerne fager, som binder svagt eller ikke-specifikt til proteiner; 2) den samlede alfa-synuclein at fjerne fag, der binder til generiske strukturelle elementer af aggregerede proteiner; 3) menneskelige hjerne vævshomogenater at fjerne fager, der binder til eventuelle proteiner eller andre komponenter i obduktionsprøver af sundt humant hjernevæv; 4) immunpræcipiteret TDP-43 fra sundt menneskelige hjerne for at fjerne fager, som binder til alle TDP-43 former er forbundet med sund human hjerne; og 5) immunopræcipiterede TDP-43 isoleret fra FTD hjernehomogenater at fjerne fag, der binder TDP-43 varianter, der er forbundet med ikke-ALS patologi. Efter fjernelse af alle fag reaktiv til alle off-målantigener, derefter fortsatte vi til den positive panorering fase, hvorunder antistoffragmenter, der binder antigenet af interesse isoleres, i dette tilfælde TDP-43 immunopræcipiteret fra humant ALS hjernevæv. Disse isolerede antistoffer kan være reaktiv til aggregerede eller modificerede former af TDP-43.\n"> Konventionel fag biopanning fokuserer primært på de positive panorering fase 22,23. Normalt målet af interesse immobiliseres, fagbiblioteket tilføjet og bundne fager elueres. Fagerne derefter forstærkes og sættes til målet igen. Denne forstærkning og udrugningen sædvanligvis gentages flere gange for at øge andelen af positiv binding fagen. Mens variationer af denne proces er blevet anvendt i udstrakt grad at isolere antistofreagenser mod en bred vifte af målantigener, kræver de generelt store mængder af oprenset målantigen 24,25,26, 27, mens vores proces kræver kun spormængder af målantigenet. Den her beskrevne protokol kan anvendes til at isolere reagenser, som selektivt binder målantigener der er til stede i meget lave koncentrationer, uden behov for rensning og panorering kan udføres direkte mod antigen til stede i komplekse vævsprøver. Anvendelsen af udtømmende negative panning protokoller som verificeretved AFM sikrer, at kloner isoleret mod den positive antigen selektivt skal binde målet selv når de ikke renset eller beriget.\nKasturirangan og kolleger (2003) har gennemført en tilsvarende negativ og positiv biopanning proces at isolere antistoffer, der reagerer på oligomert beta-amyloid hjælp nanogram koncentration af målet 5. Her udvide denne proces for at muliggøre dannelsen af reagenser, som selektivt binder sygdomsspecifikke protein varianter direkte fra humane vævsprøver. I fremtidige studier vil vi for yderligere at undersøge ikke blot den diagnostiske værdi af reagenserne isolerede her, men også vurdere deres terapeutiske relevans for behandling af ALS.\nSamlet set skal vores roman AFM baserede biopanning teknologi anvendelse på isolering af nogen sygdom-specifikt protein variant i ethvert biologisk materiale, uden behov for proteinoprensning eller ændring, selv når målantigenet concentrations er ekstremt lave.\nUdfør alle fag produktions- og biopanning processer i et biosikkerhed kabinet. Fremstil fager partikler fra de forskellige biblioteker (Tomlinson I og J biblioteker og ark Bibliotek 21) til biopanning proces ved at følge producentens anvisninger (http://www.lifesciences.sourcebioscience.com/media/143421/tomlinsonij.pdf).\nBEMÆRK: Vi bruger flere biblioteker i vores panorering proces at øge mangfoldigheden af antistofferne til rådighed.\nKort fortalt, kultur bakterier lagre af de tre biblioteker i 200 ml 2xYT indeholdende 1% glucose og 100 ug / ml ampicillin på en ryster ved 37 ° C, indtil OD600 er 0,4.\nTilføj 8 x 10 11 KM13 hjælperfag til 200 ml af Tomlinson I og J biblioteker og 8 x 10 11 VCSM13 hjælperfag til 200 ml af arkene biblioteket. Inkuber Bibliotek prøver med hjælperfag i 30 minutter ved 37 ° C uden omrystning.\nCentrifugerkulturer ved 3.000 xg i 10 minutter og resuspender cellepelleten i 200 ml 2xYT med 0,1% glucose, 100 ug / ml ampicillin og 50 ug / ml kanamycin.\nInkuberes kulturerne O / N ved 30 ° C med omrystning, og derefter spinde i 30 minutter ved 3.300 xg den følgende dag.\nDer tilsættes 50 ml polyethylenglycol (PEG) 8000 i 2,5 M NaCl til 200 ml af supernatanten fra hvert af bibliotekerne, og der inkuberes på is i 1 time. Efter PEG præcipitation dreje løsninger igen i 30 minutter ved 3.300 x g.\nTilføj 1-2 ml phosphatpufret saltvand (PBS) til cellepelleten (afhængigt af størrelsen af pellet) og overførsel til mikrocentrifugerør.\nInkuber fagpartikler på is i 1 time ved 37 ° C med lejlighedsvis blanding før centrifugering i 10 minutter ved 11.600 x g. Opsaml supernatanten og opbevares ved -80 ° C.\nFør frysning overføre et lille volumen af fagpartiklerne fra de tre biblioteker til en anden mikrocentrifugerør og titrere hvert bibliotekindividuelt ved hjælp TG1 celler for at bestemme koncentrationen. Nedenfor er en beskrivelse af titer fremgangsmåde til ét bibliotek.\nGrow TG1 celler til OD600 på 0,4. Tilføj 990 pi PBS i 6 mikrocentrifugerør.\nTil det første rør tilsættes 10 pi af fagpartiklerne. Efter blanding fjernes 10 pi fra røret én og tilføje til røret 2. Gentag dette trin for de resterende 4 rør.\nTilsæt 200 pi TG1 celler til 6 rør og tilsættes 10 pi af hver af de seks fag fortyndinger på disse rør. Lad fagpartikler at inficere i 30 minutter med ingen omrystning ved 37 ° C.\nPlate 100 pi af cellerne til Luria-Bertani agarplader med 100 ug / ml ampicillin (LBA). Inkuber O / N ved 37 ° C og derefter bestemme pfu / ml ved hjælp af antallet af synlige kolonier.\nBEMÆRK: Undgå for mange fryse tø af fager hele biopanning processen. Ideally, er det bedst at udføre så mange af de negative panorering trin som muligt på en dag. Efter afslutningen af de runder af negativ eller positiv panorering mod hvert mål er det vigtigt at gemme nogle af de fag i tilfælde af forurening på ethvert trin.\n12 runder af negativ panorering mod bovint serumalbumin (BSA)\nTilsæt 4 ml 1 mg / ml BSA-opløsning i PBS til 12 immunorør og inkuberes O / N ved 4 ° C.\nKombinér 1 x 10 12 fag-partikler fra hver af de tre biblioteker (afsat en lille mængde af denne fag blanding til fremtidig kontrol af den negative panorering processen).\nKassér BSA-opløsningen fra det første rør og vaske røret 2-3 gange med PBS for at fjerne eventuelt ubundet BSA.\nTilsæt de samlede fagbiblioteker denne første rør, inkuberes i 30 minutter ved stuetemperatur på rotator og indsamle de ubundne fager.\nGentag trin 2.1.3 med den anden immunrør og tilsæt fag indsamlet fra trin 2.1.4 til dette jegmmunotube. Gentag trin 2.1.4.\nGentag trin 2.1.3-2.1.4 med de resterende 10 rør af BSA-opløsning og ubundet fag opsamlet efter hver inkubation.\nFor at verificere fjernelse af alle BSA fag bindemidler bruger AFM. Tilsættes 10 ul af fag fra trin 2.1.2 og 10 pi af det resterende fag efter trin 2.1.7 separat til 10 ug / ml BSA bundet til spaltet glimmer. En kort udgave af AFM er skitseret i afsnit 8.\nDet er vigtigt at gemme en lille mængde fag efter efterbehandling de mange runder af negativ panning mod hvert mål at verificere succes panorering proces.\n10 runder af Negativ panorering mod forskellige former af alfa-synuclein\nBEMÆRK: I dette projekt ønsker vi at fjerne fag, der kunne binde andre aggregerede former for proteiner, såsom alfa-synuclein (monomer, dimer, trimer, etc.) og så vil vi fjerne nogen af disse fager (målet er at fjerne så mange krydsreaktive fager som muligt). Tillad renset alpha-synuclein at aggregere i mindst 7 dage, så både monomere og oligomere former er til stede for negative panorering.\nForbered 4 immunorør med 500 ug / ml aggregeret alfa-synuclein i PBS og 4 immunorør med 100 ug / ml aggregeret alfa-synuclein og inkuberes O / N ved 4 ° C.\nKassér opløsning fra et af rørene med 500 ug / ml aggregeret alfa-synuclein, vaskes med PBS og tilsæt fagbibliotek opsamlet efter 12 runder af negativ panning med BSA.\nInkubér røret i 30 minutter ved stuetemperatur på rotator og indsamle de ubundne fager.\nGentag trin 2.2.3 og 2.2.4 for de resterende rør med 500 ug / ml aggregeret alfa-synuclein og dernæst rør med 100 ug / ml aggregeret alfa-synuclein hjælp af ubundne fager opsamles hver gang efter trin 2.2.4.\nGentag trin 2.1.8 ved hjælp af fagen efter den første negativ panning over 500 ug / ml aggregeret alphasynuclein og fagen efter ottende runde af negativ panning over 100 ug / ml af alfa-synuclein.\nFor at fjerne alle negative bindemidler mod alfa-synuclein forberede to ekstra immunorør med 500 ug / ml aggregeret alfa-synuclein og gentag trin 2.2.2-2.2.4.\n10 runder af Negativ panorering mod Sund menneskelige hjerne vævshomogenat\nTilføj 1x STEN buffer (50 mM Tris (pH 7,6), 150 mM NaCI, 2 mM EDTA, 0,2% NP-40, 0,2% BSA, 20 mM PMSF og protease cocktail inhibitor) til humant hjernevæv 28. Homogeniser ved 24.000 rpm i 1 min, centrifugeres prøverne ved 3000 rpm og indsamle supernatanten.\nForbered 2 immunorør med 2 ml 50 ug / ml af humant hjernevæv i PBS og 8 immunorør med 10 ug / ml humant hjernevæv og inkuber O / N ved 4 ° C.\nGentag trin 2.2.3-2.2.5 først med de rør, der indeholder 50 ug / ml humant hjernevæv og derefter med de, der indeholder 10 ug / ml human Bregn væv ved hjælp af ubundet fag opsamlet efter den negative panorering mod alpha-synuclein.\nGentag trin 2.1.8 ved hjælp af fagen efter den første negativ panning over 50 ug / ml af humant hjernevæv og fagen efter den tiende runde af negativ panning mod humant hjernevæv.\n8 runder af negativ panorering mod Sund immunfældet TDP-43\nImmunpræcipitere sund TDP-43 protein fra sunde hjernevæv under anvendelse af protokollen beskrevet i afsnit 9. På grund af lavere mængde immunopræcipiteret protein, udføre disse runder af negativ panorering hjælp glimmer.\nSpalte otte glimmer overflader.\nTil den første glimmer tilføje ~ 100 pi af 5 ug / ml af det immunopræcipiterede protein og inkuberes i 5-10 minutter ved stuetemperatur.\nVask glimmer 5 gange med 0,1% PBS med Tween 20 (PBST).\nTilføj ~ 100 pi af fagen efter negativ panning over sundt hjernevæv og inkuberes i 5-10 minutter vedRT.\nVed midtvejs inkubation af trin 2.4.5, udføre trin 2.4.3 ved hjælp af den anden glimmer.\nSaml fagen fra trin 2.4.5 og vaske glimmer 5 gange med 0,1% PBST.\nVask glimmer fra trin 2.4.6 og tilføje fag fra 2.4.7.\nGentag trin 2.4.4 til 2.4.9 indtil fagen er negativt panoreres mod alle otte glimmer med immunopræcipiterede protein. Gentag trin 2.1.7 ved hjælp af fagen efter den første og otte runde af negativ panning.\n2 runder af Negativ panorering mod FTD immunfældet TDP-43\nImmunopræcipitere TDP-43 protein fra hjerner af personer med FTD.\nSpalte 2 glimmer overflader.\nDer tilsættes 50 pi 10 ug / ml FTD TDP-43 til en glimmer. Der inkuberes i 5 minutter ved stuetemperatur.\nVask glimmer 5 gange med 0,1% PBST.\nDer tilsættes 50 pi af fagen opsamlet efter negativ panning mod sund TDP-43. Der inkuberes i 5 min.\nSaml de ubundne fager.\nRepeATS trin 2.5.3 til 2.5.6 med den anden glimmer og ubundne fag indsamlet i 2.5.6.\n3. Positiv panorering mod immunfældet TDP-43 fra Personer med ALS\nImmunopræcipitere TDP-43 protein fra hjerner af personer med ALS. Spalte 3 glimmer overflader. Der tilsættes 50 pi 10 ug / ml ALS TDP-43 til en glimmer. Der inkuberes i 5 minutter ved stuetemperatur. Vask glimmer 5 gange med 0,1% PBST.\nDer tilsættes 50 pi af fagen opsamlet efter negativ panning mod sund TDP-43 til glimmer. Der inkuberes i 5 min.\nSaml de ubundne fager. Også indsamle de bundne fager hjælp af tre elueringstider metoder. Det er vigtigt at holde alle indsamlede fager i disse panorering trin adskilte.\nFørst tilsættes 50 pi trypsin (1 mg / ml i PBS) til hver glimmer og inkuberes i ikke mere end 10 min. Saml løsningen og gemme. Dernæst tilsættes 50 pi 100 mM triethylamin (TEA) til hver glimmer og inkuberes i ikke mere end 10 min. Collect opløsningen tilsættes lige så stort volumen 1 M Tris-HCI-buffer pH 7,4 og gem.\nFor det tredje, tilsættes 50 pi TG1 ved OD 600 på 0,4 direkte til glimmer og inkuberes i 30 minutter ved 37 ° C. Også tilføje fager opsamlet fra de to elueringsbetingelser metoder 3.3.1 til 100 pi TG1 ved OD 600 på 0,4 og inkuberes i 30 minutter ved 37 ° C.\nGentag trin 3.1 med et andet glimmer.\nTag den ubundne fag indsamlet i 3.3.2. ved hjælp af den første glimmer med ALS TDP-43 og føje den til den anden glimmer med ALS TDP-43. Der inkuberes i 5 min.\nGentag alle trin i 3,3 for disse andet sæt af glimmer.\nKombiner de TG1 celler inficeret med fager elueret med trypsin fra to ALS TDP-43 glimmer og plade på LBA plader. Gentag den samme proces for TEA og TG1 eluerede fager fra de to ALS TDP-43 glimmer i alt tre plader.\nBEMÆRK: På grund af TDP-43 engagement i både ALS og FTD, nogle af klonerne isoleret ito runder af positiv panorering mod ALS TDP-43 kan være specifik for dette mål, men nogle kan også binde FTD. For bedre at isolere ALS specifikke kloner, tage det ubundne fag opsamlet efter 2 runder af negativ panorering mod FTD TDP-43 (da disse to runder af negativ panorering skulle have fjernet ethvert mål, der er reaktiv til FTD TDP-43) og bruge disse fager i endnu en runde af positive panorering mod ALS TDP-43 antigenet på glimmer (forberede ALS TDP-43 glimmer som beskrevet ovenfor i 3.3 og 3.4).\nGentag alle trin i 3.3 med denne tredje ALS glimmer og plade de inficerede TG1 celler på tre LBA plader O / N ved 37 ° C. Den næste dag tælle antallet af kolonier på de 6 LBA plader med de potentielle ALS kloner. Der bør være færre kolonier på tre LBA plader med de potentielle ALS kloner efter den tredje runde af positiv panning i forhold til de tre LBA pladerne efter de to runder af positiv panning.\n4. Dyrkning og Phage Produktion af potentielle positive kloner mod ALS Specifikke TDP-43\nGrow hver koloni fra 6 plader i 96-brønds plader indeholdende 100 pi 2 x YT med 1% glucose og 100 ug / ml ampicillin på en ryster ved 37 ° CO / N.\nDen næste dag overføres 10 pi fra brønde, der indeholder kloner fra 3 LBA pladerne efter den tredje runde af positiv panning med ALS TDP-43 protein til mikrocentrifugerør indeholdende 1 ml 2 x YT med 1% glucose og 100 ug / ml ampicillin .\nTilføj glycerol til alle kulturer i 96-brønds plader til en slutkoncentration på 15% og fryse pladerne ved -80 ° C. Lad 1 ml kulturer til at vokse i 2-3 timer under omrystning ved 37 ° C.\nTilsæt 10 9 i KM13 hjælpefag og tillade hjælperfag til at inficere i 1 time ved 37 ° C med omrystning. Centrifuger cellerne i 10 minutter ved 3.000 xg, supernatanten fjernes, og der tilsættes 1 ml 2 x YT med 0,1% glucose, 100 ug / ml ampicillin og 50 ug / ml Kanamycin.\nKultur cellerne O / N ved 30 ° C med omrystning. Centrifuger rørene ved 3.300 xg i 30 minutter, Supernatanten overføres til nye mikrocentrifugerør og tilsæt 250 pi PEG / NaCl til hvert rør.\nInkuber rørene på is i 1 time. Centrifugeres rørene igen ved 3.300 xg i 30 min, supernatanten fjernes, og der tilsættes 100 pi PBS til hvert rør.\nInkuber rørene på is i 1 time. Spin rørene i 10 minutter ved 11.600 xg og overføre supernatanten til nye rør. Opbevar fager ved -80 ° C.\n5. Sekventering af potentielle ALS Clones\nGentag trin 4.2 og lad kulturer vokse O / N ved 37 ° C med omrystning. Den næste dag udføre DNA-plasmid preps af klonerne ifølge producentens anvisninger. Sekventere kloner anvendelse af den passende forward og reverse primere.\n6. Screening potentielle positive kloner mod ALS Specifik TDP-43 Brug Indirekte ELISA\nTilsæt 100 pi af 2,5 pg / ml af ALS, FTD og sundt humant hjernevæv til brøndene i en høj bindende ELISA-plade for hver potentiel ALS klon. Pladerne inkuberes ved 37 ° C i 1 time med langsom rystning.\nVask pladerne 3 gange med 0,1% PBST. Tilsæt 200 pi 2% mælkepulver i PBS til brønd og inkuberes pladerne ved 37 ° C i 1 time med langsom rystning.\nGentag vasketrin og derefter tilsættes 100 pi af hver fag fortyndet mindst 1/100 i PBS til brøndene. Efter inkubering og vask trin, tilsættes 100 pi af 1 / 1.000 anti-M13 HRP til hver brønd. Pladerne skylles, og visualisere ved hjælp af ELISA femto kemiluminescens-substrat kit.\n7. scFv Produktion og screening ved indirekte ELISA\nGrow HB 2151 celler til OD600 på 0,4. Tilsæt 5 pi af de forskellige fager til 20 pi af HB 2151-celler. Lad fager 30 min at inficere ved 37 ° C uden omrystning. Opdel LBA-plader i net, såat ca. 20 kloner kan udpladet på hver.\nTilsæt 5-10 pi hver fag inficeret bakterier til pladen og inkuber O / N ved 37 ° C. Den næste dag tilføje individuelle kolonier til 1 ml 2 x YT med 0,1% glucose og 100 ug / ml ampicillin og rystes ved 37 ° C i 3-4 timer, indtil OD600 er 0,6.\nTilsæt 1 pi 1 M isopropylthiogalactosid (IPTG) til hvert rør og inkuberes O / N ved 30 ° C med omrystning. Spin rørene ved 11.600 xg i 10 minutter og høste supernatanten for ELISA.\nFor ELISA følger de samme procedurer i kapitel 6, undtagen i stedet for fag i 6,5 tilføje scFv ufortyndet og for 6,6 tilsættes 100 pi af 1 / 1.000 9E10 HRP.\nTilføj 10-20 pi målantigenet til spaltet glimmer og inkuberes i 5-10 min. Vask glimmer 5 gange med vand. Tilføj 10-20 ul af fager til glimmer og inkuberes i 5-10 min.\nVask glimmer 5 gange igen with vand og lade glimmer lufttørre. Visualiser fagbinding hjælp AFM 1. Udfør AFM imaging proces med AFM trykke tilstand med en Nanoscope IIIa controller i luft ved stuetemperatur 29. De silicium AFM prober har en resonansfrekvens på 300 kHz og en fjederkonstant på 40 N / m. Brug en scanningshastighed på 3,05 Hz og en scanningsopløsning på 512 prøver / line.\nBehandle billeder ved grundlæggende udfladning af baggrunden for at sikre, at alle partikelstørrelser er sammenlignelige inden hvert billede. Fag bredde (ikke længde) kan variere fra billede til billede på grund af andre partikelstørrelser og scanningsområdet, men det vil aldrig gå på kompromis rigtigheden af, hvorvidt fag binder til antigenet.\nHvis der under AFM verifikation for hvert sæt af negative panorering fager er synlige på glimmer, udføre tilføjelse runder, indtil der ikke fager detekteres før man går videre til det næste sæt negativ panorering.\n9. Immunopræcipitation af målantigen\nTil isolate målantigenet (TDP-43), der tilsættes 250 ug homogenisere hjernevæv (fra motor cortex), 100 pi 1/100 fortynding af anti-TDP 43 polyklonale antistof og 1x STEN buffer til 700 pi samlet volumen på en Eppendorf røret 28.\nInkuber O / N ved 4 ° C på en rotator. Wash A / G agaroseperler med 1x STEN buffer 2-3 gange, og der tilsættes 25 ml til vævet blanding. Inkuber ved 4 ° C i 1,5 timer på en rotator, og derefter centrifugeres ved 2,000-4,000 rpm i 1 min.\nFjern supernatanten og vask pellet én gang med 1x STEN buffer og 5 gange med PBS. Tilføj 40-60 pi 1x STEN buffer til pillen og koges i 5 min. Efter prøverne er cool, centrifuge og indsamle supernatanten. Brug SDS-PAGE og Western blotting for at kontrollere succes immunopræcipitation proces 30.\nSkær nitrocellulosepapir i små rektangler for hver klon, som skal afprøves. Dot 2 pi ALS, FTD og raske hjerne vævsprøver Unto nitrocellulosepapiret og lad det tørre helt.\nTilføj 1-2 ml 5% mælkepulver i PBS og lad det rystes i 1 time ved stuetemperatur. Tilsæt 1 ml 1/100 fortynding af hver fag og lad det ryste O / N ved 4 ° C. Vask membranen 3 gange i 10 minutter hver med 0,5% PBST.\nDer tilsættes 1 ml 1 / 1.000 fortynding af anti-M13 HRP og lad det rystes i 1 time ved stuetemperatur. Gentag vaskeproceduren og visualiseres ved hjælp af Western kemiluminescens opløsning.\nI figur 1 skematisk viser den negative panorering proces, som vi fjernet fag aflukning-målantigener fra vores bibliotek ved hjælp immunorør. Vi oprindeligt startede med BSA, da dette er en fælles blokerende agent og enhver fag, der ville reagere ikke-specifikt med dette mål ville være problematisk i fremtidige tests. Dernæst vi fjernet bindemidler aggregerede alpha-synuclein at fjerne fager, der er reaktive med generiske strukturer af aggregerede proteiner (dvs. et antistof, der ville være krydsreaktiv aggregerede alfa-synuclein, TDP-43, Abeta, etc.). AFM Resultaterne viste fag bindende efter 1. runde af negativ panorering mod den aggregerede alfa-synuclein (figur 2A) og ingen binding efter 8 runder (figur 2B). Vi derefter negativt panoreres mod sundt humant hjernevæv for at fjerne fagbinding de mange antigener til stede på raske hjernehomogenat. Figur 2C (figur 2D). Da mængden af sunde og FTD immunpræcipiteret TDP-43-protein til rådighed for panning var lav, ved hjælp glimmer stedet immunorør udnyttes mindre volumen og derfor sænket totalprotein forbrugt (figur 3). Efter 8 runder af negativ panorering mod sund immunopræcipiterede TDP-43, blev fag delt. Halvdelen af fag blev brugt i to runder af negativ panorering mod FTD TDP-43. Formålet var at fjerne eventuelle FTD TDP-43 reaktive kloner (grundet TDP-43 involvering i FTD), og samtidig bevare eventuelle ALS TDP-43-specifikke kloner.\nFor positive panorering del (figur 4), har vi også ansat glimmer som et substrat for at minimere anvendelse af materialer. Vi brugte det ubundne fag efter FTD TDP-43 negative panorering mod ALS TDP-43 at erhverveALS-specifikke kloner. Vi har også positivt panoreres mod ALS TDP-43 to gange i tilfælde af, at vi ikke opnåede kloner efter brug af ubundne fag fra den negative panorering mod FTD TDP-43. Efter hele panorering processen vores tre elueringsbetingelser metoder gav 154 kloner fra de to positive panorering mod ALS TDP-43 (kloner, der kan være reaktive til ALS og FTD) og 45 potentielle ALS specifikke kloner (ved hjælp af ubundet fag fra FTD TDP- 43 negativ panorering).\nFor yderligere at reducere de 45 potentielle ALS specifikke kloner, er klonerne sekventeret og kun de kloner uden nogen stopcodoner blev anset yderligere, bortset fra en klon, som dukkede op to gange. Dette efterlod os med 23 potentielle ALS specifikke kloner. Efter udarbejdelsen både fag og opløselig scFv med disse kloner, er de testet i indirekte ELISA-test til specificitet til ALS væv. Næsten alle de fager viste en præference for ALS væv i sundt væv (figur 5). Lignende resultater er OBTained når man sammenligner fag-binding til ALS til FTD væv (figur 6). For fremtidige undersøgelser er det vigtigt, at disse kloner udtrykker høje udbytter af funktionelle scFv'er, så vi fremstillet små partier af de forskellige scFv'er og udføres lignende indirekte ELISA. Sammenligning af scFv-binding til ALS væv til både sundt (figur 7) og FTD væv (figur 8) igen viste selektiv binding til ALS væv i næsten alle kloner.\nVi brugte en anden immunoassay (dot blots) for yderligere at verificere binding til ALS væv og også at fastlægge, hvilke kloner er reaktive i andre immunologiske applikationer. Klon 2A binding til ALS væv er vist (figur 9). Alle disse kloner viste lovende resultater i enten af fagen og scFv ELISA eller begge. Disse resultater bekræfter, at vores AFM baseret biopanning proces er en meget kraftfuld teknik, der kan anvendes til at generere reagenser, der selektivt binder sygdomsspecifikke protein Varimyrer direkte fra komplekse kilder.\nFigur 1. Negativ Biopanning Process hjælp immunorør. Skematisk viser den negative biopanning proces. Fager, der er reaktive for proteiner såsom BSA, aggregeret alfa-synuclein og sundt hjernevæv fjernes ved hjælp immunorør. Klik her for at se en større udgave af dette tal.\nFigur 2. Bekræftelse af Negative Panorering Virkninger. AFM billeddannelse anvendes til at overvåge de negative panorering skridt mod de forskellige mål for at sikre alle reaktive fager fjernes. Her viser vi nogle af AFM resultater demonstrererniveau fagbinding før og efter den negative panning. (A) fagbinding kan detekteres til aggregerede alpha-synuclein partikler efter den første runde af negativ panning, men (B) nr fag er synlige efter 8 runder af negativ panning. (C ) Efter den første runde af negativ panning mod sundt væv fagbinding er indlysende, men (D) ingen binding detekteres efter 10 runder af negativ panning. Alle billeder er 5 um. De store hvide strukturer på AFM billeder er normalt på grund af salte til stede i buffere eller resterende PEG fra PEG nedbør trin under fag produktion. Klik her for at se en større udgave af dette tal.\nFigur 3. Negativ BiopannSkematisk demonstrerer yderligere negativ biopanning hjælp glimmer ing Process hjælp Mica.. På grund af begrænset prøve glimmer overflade anvendes til først at eliminere bindemidler til sunde og derefter FTD immunpræcipiterede TDP-43. Før vi går til de to runder af negativ panorering mod FTD TDP-43, er det fag delt i halve (i tilfælde af mislykket isolering af ALS TDP-43 eksklusive fager under den positive panorering fase). Klik her for at se en større version af dette tal.\nFigur 4. ALS Positive Biopanning Process. Skematisk demonstrerer ALS positive biopanning proces. De ubundne fager efter negativ panning over FTD TDP-43 anvendes i en runde af positiv panning over ALS TDP-43 til eluering mere ALSTDP-43-specifikke kloner. Ligeledes bliver to runder af positiv panning over ALS TDP-43 udføres under anvendelse af glimmer overflade og de ubundne fager efter negativ panning mod sund immunpræcipiteret TDP-43 (de bundne fager elueres da disse fager ikke bør binde sund TDP-43, men nogle kan være krydsreaktiv med både ALS og FTD). Tre eluering metoder anvendes (trypsin, te og TG1 celler) for at sikre alle bundne fager fjernes. Klik her for at se en større udgave af dette tal.\nFigur 5. fag-ELISA Screening af potentielle ALS kloner (ALS versus HT). Brug af homogeniseret human ALS, FTD og sundt hjernevæv (HT) prøver vi udførte indirekte ELISA under anvendelse af fag fremstillet af forskellige kloner. Resultaterne er vist som forholdet til raske vævsprøver. Resultaterne viste, at nogle kloner skelner mellem TDP-43 fundet i ALS-patienter og hos raske. ALS, FTD og HT væv er en blanding af hjerne prøver (motor cortex) fra tre personer. Klik her for at se en større udgave af dette tal.\nFigur 6. fag-ELISA Screening af potentielle ALS kloner (ALS versus FTD). Her viser vi de fag-ELISA resultater af ALS versus FTD patienter. De fleste af klonerne har en præference for ALS end FTD. Klik her for at se en større udgave af dette tal.\nFigur 7. scFv ELISA Screening af potentielle ALS kloner (ALS versus HT). Brug af scFv'er fremstillet af hver klon, vi kan observere kloner, der har en præference for TDP-43 fra ALS-patienter end sund. Klik her for at se en større version af dette tal.\nFigur 8. scFv ELISA Screening af potentielle ALS kloner (ALS versus FTD). Succesen med vores panorering proces demonstreres yderligere, når man sammenligner ALS til FTD for de forskellige scFv'er i de indirekte ELISA'er. Klik her for at se en større udgave af dette tal .\nFigur 9. Dot blot-analyse af potentielle ALS-kloner. Brug dot blot i stedet for ELISA er en anden teknik til at vise specificiteten af kloner for ALS end FTD eller HT. Klon 2A vises. Klik her for at se en større udgave af dette tal.\nDenne forskning blev støttet af en bevilling fra NIH: R21AG042066. Vi vil gerne takke Philip Schulz for hans bidrag i skabe skærm capture videoer.


Viljen er alt | Scleroseforeningen\nTræthed, følelsesløshed, kramper i benene og smerter i hænderne, der gør det nødvendigt at spise smertestillende piller næsten hver dag. Louises liv har været mærket af sclerosen, siden hun en morgen for to år siden vågnede op følelsesløs fra livet og ned.\nAlligevel var hun ikke et sekund i tvivl og slog straks til, da lejligheden bød sig for at sætte sin fysiske og mentale styrke på den helt store prøve: at bestige det 5.895 meter høje bjerg Kilimanjaro i Tanzania sammen med en gruppe kolleger.\nDrømmen om Kilimanjaro havde længe rumsteret i hende. Faktisk lige siden hun var en stor teenagepige. Og nu kom lejligheden til hende på et tidspunkt, hvor sygdommen havde skærpet hendes bevidsthed om, at man skal gøre det, man gerne vil, mens muligheden er der.\nTræningen er intet, viljen er alt\nGennem et helt år byggede Louise målrettet kroppen op til den store tur med intensiv løbe- og styrketræning og mindfulnessøvelser. Alligevel er hun overbevist om, at det ikke bare var en god fysisk form, der bragte hende i mål:\n”Når det kommer til stykket, er træningen intet, og viljen alt. For uanset hvor god form, man er i, så er det så usandsynlig hårdt til sidst. Jeg kom kun op på toppen, fordi jeg virkelig VILLE. Det var som at have en stemme indeni, som bare sagde: Jeg SKAL!”\nMindede om et attak\nSelvom Kilimanjaro ikke er et teknisk svært bjerg at bestige, kan ingen være sikre på at nå toppen. Det skyldes, at man under den sidste del af opstigningen kommer så højt op i den tynde luft, at der er stor risiko for at få højdesyge.\nOgså blandt Louises kolleger var der et par stykker, der faldt fra inden målet, fordi de ikke kunne klare højden. Louise, derimod, følte, at der var noget bekendt ved højdesygen... kvalmen og udmattelsen mindede hende om et attak, og det hjalp hende til at håndtere den, mener hun selv.\nDen 29. september 2012 klokken 8.30 om morgenen nåede hun toppen efter fire hele dages og en nats vandring i mørke, indtil solen brød frem to timer før målet.\n”Det var meget, meget følelsesladet. Jeg tror aldrig, jeg har oplevet noget så fantastisk. Det var en drøm, som gik i opfyldelse,” fortæller Louise om at stå på toppen:\n”... og så var det det, at jeg havde formået det – på trods af sygdommen. At jeg havde sat mig et mål og nået det. Det gav mig virkelig noget.”\nMan lærer noget om sig selv\nMan lærer noget om sig selv, når man presser sig selv, forklarer Louise. Man lærer, at man kan presse sin krop og sit sind til meget mere, end man troede, mener hun:\n”Det giver noget at presse sig selv. Man får et kick, når man overraskes af sin egen styrke og oplever, at man formår meget mere, end man troede.”\nTilbage i Danmark fik Louise et attak. Anstrengelserne havde været store, og behovet for bare at slappe af trængte sig på. Men her et par måneder senere er hun i fuld gang med at sætte sig nye mål. Inkastien kalder. Det samme gør en basecamptur på Mount Everest.\nMulighederne er mange, og nye kommer hele tiden til. For Louise lever efter devisen:\n”Hellere fortryde noget, jeg gjorde, end noget jeg ikke fik gjort.”


Fotograf i Nebel Horsens ⇒ Få 3 gratis og uforpligtende tilbud. Klik her!\nFotograf Nebel Horsens, Få op til 3 tilbud nu\nSkal du bruge en fotograf i Nebel Horsens? Så kan der være rigtig mange penge og meget tid at spare. Vi er nemlig gået sammen med et dygtigt firma, hvor du kan indhente op til 3 gratis og uforpligtende tilbud på en billig fotograf i Nebel Horsens. Det er let og hurtigt, og det behøver ikke at tage mere end 5-7 minutter for dig at beskrive din opgave. Du kan her på siden læse lidt mere om, hvordan du gør, og hvorfor det kan være en god idé.\nSådan indhenter du tilbud på fotograf i Nebel Horsens\nNår du skal indhente tilbud på en fotograf i Nebel Horsens, skal du først og fremmest klikke dig videre til vores samarbejdspartners hjemmeside. Dette kan du gøre via knappen i toppen af denne side. Her skal du beskrive din opgave så detaljeret som muligt. Det skal du gøre, så de dygtige fotografer Nebel Horsens kan komme med et så konkret tilbud til dig, uanset om du skal have taget billeder til brylluppet, fødselsdagen eller blot ønsker et portrætfoto. Når du har beskrevet din opgave, vil du inden for kort tid modtage dine tilbud, hvor du har fuld frihed til at vælge, hvilke tilbud på fotograf i Nebel Horsens, du ønsker at gøre brug af. Husk det er ganske gratis og uforpligtende, så ønsker du ikke at gøre brug af nogle af dem, kan du blot kassere dem.\nFor mange kan det virke uoverskueligt og meget uigennemsigtigt at hyre en fotograf i Nebel Horsens. Der kan være mange gode om buddet, og det kan være svært helt at aflæse de forskellige tilbud. Her vil du modtage tilbud fra billige fotografer nær Nebel Horsens, der kan hjælpe dig med at tage gode billeder til din begivenhed. Såfremt du har spørgsmål til nogle af serviceydelserne, så er du altid meget velkommen til at tage fat i vores samarbejdspartner, da de kan svare konkret på din spørgsmål.\nFotograf Stuby Vordingborg


Radiograf Rådet igennem 50 år: Kassetten 2. årgang, 1973\nDenne gang graver vi lidt i 2. årgang af Kassetten. I 1. årgang havde redaktionen slået et for stort brød op og må nu desværre reducere bladets omkostninger.\nDen forkromede forside er erstattet af et kartonomslag og læserne får en ”røffel” i lederen for ikke at indsende materiale til bladet. Steen Schak Larsen ”ansættes” til illustrationer og i et af bladene finder vi en artikel om Xerografi.\nXerografi var ukendt begreb da jeg startede uddannelsen ca 10 år senere, men mon ikke at nogle radiografer i dag kan se at der er tråde fra Xenografi til billeddannelsen i dag. Havde der bare været en god computer til at udnytte teknikken i 1973. Også i 1973 var radiografer eftertragtede i medicoindustrien der havde store forventninger til ansøgernes intelligent og opførsel i deres stillingsopslag. Og lige et gensyn med afgangsholdene i 1973 fra Radiograf skolerne i Odense og Herlev – vi ses vel til Radiograf Rådets 50 års jubilæumsfest?\nAf Radiograf, Eva Heimbürger, Rank Xerox A/S\nKassetten, 2. årgang, nr. 3, 1973\nNavnet Xerografi dækker en ny proces, der går ud på elektronisk optagelse af røntgenbilleder på en opladet selenplade. Systemet lader sig let forene med standard – røntgenudstyr, og det kan i løbet af 90 sekunder fremstille papirbilleder af meget høj kvalitet.\nRank Xerox System 125 består af to kompakte enheder, Conditioner og Processor, som i stor udstrækning er automatiske. De kræver kun normal strømforsyning og kan anbringes på Xerografi var ukendt begreb da jeg startede uddannelsen ca 10 år senere, men mon ikke at nogle radiografer i dag kan se at der er tråde fra Xenografi til billeddannelsen i dag. Havde der bare været en god computer til at udnytte teknikken i 1973. Også i 1973 var radiografer eftertragtede i medicoindustrien der havde store forventninger til ansøgernes intelligent og opførsel i deres stillingsopslag. Og lige et gensyn med afgangsholdene i 1973 fra Radiograf skolerne i Odense og Herlev – vi ses vel til Radiograf Rådets 50 års jubilæumsfest? ethvert bekvemt sted, uden at der er brug for mørkekammer. De sensibiliserede plader kan bruges igen og igen, idet deres levetid er meget lang, og de genoplades før hver optagelse, så der består ikke noget problem med hensyn til forringelse eller tilfældig påvirkning af lys eller røntgenstråler.\nHvorledes hver af de enheder fungerer vises i de følgende illustrationer:\nOperatøren indsætter en opbevaringsboks indeholdende Xerogram plader i Conditioneren og aktiverer pladens opladningssekvens.\nPladerne passerer automatisk gennem en ovn, hvor deres selenoverflade løsnes – (dvs. at alle tilbageblevne ladninger fjernes) og dernæst ind i opbevaringskammer 3.\nNår der er klar til optagelse, vælger operatøren den nødvendige billedkontrast på forsidens kontrolpanel. Ved at indsætte en tom kassette ind i Conditioneren på dennes forside, tages der på en plade fra opbevaringskammeret, og denne passerer gennem område 4, hvor den elektriske ladning anbringes på selenoverfladen. Pladen føres derpå ind i den lystætte kassette 5, som frigøres, klar til optagelse.\nKassetten, som indeholder en opladet plade, eksponeres på samme måde som film. Røntgenstrålerne og ladningen på den xerografiske plade påvirker hinanden, hvorved der dannes et latent elektrostatisk billede.\nDen eksponerede plade, stadig i kassetten, indsættes i Processoren, og operatøren vælger på kontrolpanelet den krævede billedtæthed samt positiv eller negativt billede.\nDen eksponerede plade, der nu er ført ud af kassetten, transporteres til fremkalderkammeret, hvor fint toner-pulver ”blæses” hen over pladen. Den elektrostatiske ladning trækker pulveret fast til pladen, proportionalt med det latente billede.\nPladen bringes nu i kontakt med det plastikbelagte papir, der trækkes op fra papirmagasinet. Når plade og papir kommer i kontakt med hinanden, bevirker en vending af det elektrostatiske felt, at ”pulverbilledet” forlader pladen og klæber sig til papiret.\nPapiret bevæger sig nu gennem en ”ovn”, hvor pulveret smeltes permanent ind i plastikoverfladen, så der dannes et fuldstændigt holdbart billede.\nDet færdige Xerogram føres ud, tørt og klar til at blive studeret med det samme – fremstillet på kun 90 sekunder. Det tager lidt længere tid at fremstille negative billede.\nPladen føres igennem en ”rensningsstation”, hvor eventuelt resterende tonerpulver fjernes.\nTil sidst returneres pladen automatisk til opbevaringsboksen. Når denne er fuld, er den klar til igen at blive indsat i Conditioneren, så hele cyklus kan påbegyndes igen.\nOperatøren skal blot sikre, at udstyret er fuldt forsynet med papir og tonerpulver samt koncentrere sin erfaring og sine evner om at vælge den optimale indstilling af tæthed og kontrast i forhold til den undersøgte genstand. Med systemet følger en udtømmelig håndbog til operatørens vejledning.\nXerografi er et nyt begreb, der allerede har bevist sin enorme værdi inden for mammografiområdet, hvor metodens enestående opløsningsevne kan skabe en mere nøjagtig diagnose. Metoden har endvidere en udstrakt anvendelighed inden for hele røntgenområdet.\nVi vil her give et overblik over de hidtil opnåede fordele samt medtage kommentarer fremsat af radiologiske forskere.\nEt sammenlignende studium:\nJohn N. Wolfe MD fra Hutzel Hospital i Detroit Fremlagde på den 7. nationale cancer-konference, der blev holdt i Los Angeles i 1972, en afhandling, hvis resultater resumeredes som følger:\nXeroradiografi giver flere fordele sammenlignet med konventionel mammografi. Den sammenlignende undersøgelse vi ser metodens overlegenhed mht. diagnosens nøjagtighed. Af andre åbenbare fordele kan nævnes den lethed, hvormed man kan reproducere teknisk tilfredsstillende billeder, og den lethed, hvormed radiologer kan tyde billederne. Det sammenlignende studium viste, at radiologer til aflæsning af et brystxerogram kun brugte ca. 40% af den tid, det tog at tyde et konventionelt filmmammogram, til trods for at de ikke var fortrolige med xeroradiografi.\nVigtigheden af kantskarphed:\nFølgende uddrag er fra en afhandling, der blev bragt i ”The British Journal of Radiology” og er udarbejdet af J.W. Beag DSc, FInstP, FIEE, A.J. Stacy BSc, MInstP, og R. Davis AIST fra Institute of Cancer Research and Royal Marsden Hospital i London. Uddrag:\nVed xeroradiografi optages den røntgenstrålestyrke, som en genstand lader passere, som et ladefortætningsmønster på en halvledende selen-plades overflade. Det anvendte apparaturs karakteristika beskrives, og der gives begrundelse for det specielle ”kant-skarphedsmønster”, der er resultatet af pulverfremkaldelsesmetoden. Denne kantskarphed forøger synligheden af alle fibrøse og vaskulære strukturer i blødt væv og er derfor særlig velegnet til mammografi. Der fremlægges mangfoldige eksempler på brystxerogrammer. I fedtrige bryster er blodkarrene meget skarpe i konturerne. Cyster kan let skelnes fra ondartede svulster……….\nXeroradiografi af operationsprøver er nyttige til bekræftelse af, at hele læsionen er fjernet, og hvis der tages steroskopiske fotografier, kan det vaskulære net i og omkring svulsten, der er bragt frem i forgrunden, ses i tre dimensioner.\nYderligere eksplorerende anvendelsesmuligheder:\nArbejdet med anvendelse af xeroradiografi inden for perifer kontrastangiografi udført på fakultetet for radiodiagnostik på University of Liverpool samt på fakultetet for fysik på Institute of Cancer Research og Royal Marsden Hospital resumeres som følger:\nXeroradiografi, dvs. brugen af fotoledende selen-plader i stedet for film som optagelsesmiddel bevirker, at man får gode arteriogrammer og venogrammer ved brug af betydelig mindre koncentration af kontrastmiddel end normalt, hvilket formindsker den smerte, patienten udsættes for. Fordelene og begrænsningerne ved denne ny metode beskrives og illustreres.\nXeroradiografi af knogler, led og bløddelsvæv beskrives udførligt i en afhandling af John N. Wolfe MD. De væsentligste fordele beskrives som følger:\nMan kan aflæse flere data af et enkelt xerogram end af et tilsvarende filmbillede. Tæthedsforskelle, såsom frakturlinier eller bløddelsforkalkninger accentueres inden for den undersøgte struktur. Metoden tillader stor bevægelsesfrihed mht. bestrålingsfaktorer, især ved lav mA og høj KV.


Mikro Sprøjtestøbemaskiner – Normann & Kock\nBabyplast leverer maskiner til fremstilling af små og mikro emner.\nMed stempelindsprøjtning opnås en præcis og ensartet indsprøjtning, der gør Babyplast yderst anvendelig til små komplekse emner.\nProduktprogrammet indeholder en standard proportional maskine, en vertikal udgave og en løs sprøjteenhed til flerkomponent løsninger.\nBabyplast 6/12 – Standard\nResultatet af erfaringen modnes i tusindvis af applikationer inden for medicinsk, elektronisk og mikromekanisk sektor og mange års forskning og eksperimenter inden for MICROINJECTION af termoplastiske materialer, MIM (Metal Injection Molding) og CIM (Keramisk sprøjtestøbning).\nBabyplast 6/12 – LSR\nDen mindste sprøjtestøbemaskine til LSR. Babyplast LSR-maskinen reducerer omkostningerne til udstyr og forme. Det kan leveres i tre forskellige konfigurationer: Et patron system med en forblandet 0,5 kg patron, et trykblandersystem med to 1 kg patroner (A + B komponenter) og et trykblandersystem til to 20 kg beholdere (A + B komponenter ).\nUAI – Standard\nMultikomponent emner kan fremstilles på en standard sprøjtestøbemaskine ved hjælp af en løs indsprøjtningsenhed (Babyplast Autonome Injection Unit, UAI). Det oprindelige design af UAI er baseret på erfaringen modnet i tusindvis af applikationer på Babyplast-maskinen. Babyplast UAI omfatter en indsprøjtningsenhed, der skal installeres direkte på formen og en vogn, der indeholder den proportionelle hydrauliske enhed og styringen. Alle typer termoplast kan anvendes, der kan injiceres op til en temperatur på 420 ° C.\nUAI – LSR\nLSR + Termoplast multikomponent emner kan fremstilles på en standard sprøjtestøbemaskine ved hjælp af en løs LSR-indsprøjtningsenhed (Babyplast Autonome Injection Unit, UAI). Babyplast LSR-indsprøtjningsenheden, der er den mindste LSR-indsprøjtningsenhed på markedet, omfatter en LSR-indsprøjtningsenhed, der skal installeres direkte på formen og en vogn, der indeholder den proportionelle hydrauliske enhed og styringen.Enheden kan leveres i tre forskellige konfigurationer: Med en forblandet 0,5 kg patronbelastning, med en mixer og dispenser med 1 kg patroner (A + B) og med en blander og dispenser med 20 kg beholdere (A + B).\nResultatet af erfaringen er modnet i tusindvis af overstøbningsapplikationer af indsatser og kabler inden for medicinsk, elektronisk og mikromekanisk industri og mange års forskning og eksperimenter inden for MICROINJECTION af termoplastiske materialer, MIM (Metal Injection Molding) og CIM ( Keramisk sprøjtestøbning).


Unoliving rabatkoder → 25% Rabat | 2018\nSpar med en Unoliving rabatkode hos Ekstra Bladet\nHer finder du den bedste Unoliving rabat i 2018\nHent selv og spar op til 25% af prisen på møbler\nUdløber imorgen 26 brugt i denne uge\nSe det store udvalg, hvor du kan spare op til 50% i kategorien "Hent selv"\nFå dine varer leveret gratis når du køber dem hos Unoliving!\nTilmeld dig nyhedsbrevet, og spar 50,- med unik LavprisVVS rabatkode\nSe rabatter til Lavprisvvs Netop tilføjet\nDette fine House Doctor bord er på tilbud så DU kan spare 36%.\nKøb denne formidable barstol og spar 57%!\nDette fine bomulds-tæppe fra Nordal er på tilbud og du kan skære 21% af prisen\nSådan kunne du have sparet penge på lækkert design\nMed denne Unoliving rabatkode, som vi tilbød i forrige måned, blev mange kunder glade for den ekstra besparelse de fik. De kunne spare på den populære Mason-serie på Unoliving hjemmesiden, og koden var den mest populære hidtil. Vil du også spare på deisign fra Mason eller andre kvalitetsmærker, så hold godt øje med vores side og tilmeld dig nyhedsbrevet, for at få de nyeste koder og rabatter.\nDette tæppe er på tilbud, og du kan spare hele 12% - se det her\nFå dit fine nye hvide spisebord hos Unoliving for kun 1090 kr!\nSpar 15% på et nyt spisebord med udtræk så der også er plads til gæsterne\n20% rabat på denne spisebordsstol fra Woood hos Unoliving\nDenne fine kommode fra Mavis i sort er skåret ned i pris, så du spare 44%\nDenne lækre læderstol er på tilbud hos Unoliving, find den her!\nVigtig info om Unoliving\nUnoliving tilbyder altid gratis fragt på alle deres ordrer, så du aldrig skal tænke på leveringen af de mange møbler i forskellige størrelser.\nUnoliving.dk har en online kundesupport, der er klar til at chatte og svare på alle dine spørgsmål fra mandag -fredag 9-16.\nRing også nemt til Unoliving kundeservicecentret, der ligeledes har åbent fra mandag -fredag 9-16. Kundeservice-telefon: 7242 4343.\nUnoliving er i dag hjem til mere end 10.000 flotte og nøje udvalgte designermøbler, der kan give dig og din familie et personligt, og prægtigt hjem. Udvalget er desuden meget bredt, og du vil altså finde trendy design til lettere priser, men også tunge klassikere. Unoliving er e-mærket, hvilket sikrer dig en tryg internethandel.\nTips til indretning af en lille stue eller bolig\nVil du gerne have mest ud af din plads? Stuen er også det sted i rummet, som mange forventer er rummeligt, afslappende og indbydende. Men har du ikke så mange kvadratmeter at gøre godt med i dit stueområde, så følg disse tips til mere luft og en større synende stue.\nGør din stue større med disse tips:\nSmid ud eller sælg de alt for store møbler\nVær ikke bange for at købe nyt, der passer bedre ind\nAnskaf en Puf! Den er genial som fodlæn, ekstra siddeplads eller sofabord med serveringsbakke\nBrug flere, små lamper i stedet for en loftslampe, der fylder\nOpbevar i højden - anbring f.eks dit TV på en skænk i stedet for et lavt tv-bord\nHar du vægbilleder, så ryk dem højere op - det giver et indtryk af mere plads\nFølg disse tips og skaf de perfekte møbler til at indrette dig til en større stue hos Unoliving.dk.\nSlip for besværet og få leveret helt og aldeles gratis\nSe rabatter til Bedre Nætter\npersoner har sparet hos Unoliving i dag\nSpar på design\nEr du også vild med designermøbler og interiør, men gerne vil spare lidt på pengepungen? Så skal du kigge med her, da vi giver dig de bedste råd til at spare på det fantastiske udvalg af kvalitet til hjemmet fra Unoliving.dk.\nForuden en Unoliving rabatkode, er der også andre måder at spare på. Hvis du er kvik, og sparer, der hvor du kan, slipper du meget billigere med et smukt indrettet hjem:\nStart med kategorien 'tilbud'\nSøg efter dét, du mangler\nSortér med laveste pris først\nPå denne måde undgår du at falde i fælden med interiør og møblement, der ikke allerede passer ind i din stil, eller som du slet ikke har brug for eller plads til.\nBrug din Unoliving rabatkode\nFør du shopper er det altid en god idé at kigge efter en kode, der passer dig køb.\nSådan bruger du en Unoliving kundekode:\nKlik på 'Se rabatkode'\nDu bliver henvist til forhandleren\nTilføj varerne, du ønsker\nIndsæt rabatkoden ved checkout,\nsom du finder i feltet "Indløs evt. kundekode"\nHos Unoliving finder du alt du skal bruge til at indrette dit hjem, og føre det både funktionelt og personligt, samtidig med at være på forkant med den nyeste trend og stil. Det kan du finde på Unoliving.dk:\nBorde: Spisebord, sofabord, sengebord, skrivebord\nStole: Lænestole, spisebordsstole, taburetter\nMøblering: Sofa, chaise long m.fl.\nOpbevaring: Kommode, reol, tv-bord, skænk og vitrine\nBesøg dette designhus hver dag, døgnet rundt og opfyld dine boligdrømme.\nUnoliving hjemmesiden er som en farverig bazaar, for alle de designdrømme, du måtte have. Hjemmesiden er propfyldt med de mest hippe, danske designermærker, der er helt på forkant med tidens ånd, og som pryder Europæiske boligmagasiner med deres fremafsynede stil.\nHos Unoliving finder du f.eks. disse mærker:\nEr du stor indretningsfan, og vil du spare på disse ultramoderne boligbrands, kan du med fordel benytte en Unoliving rabatkode til dit køb.\nDesign behøver ikke altid at være uoverkommeligt dyrt. På Unoliving hjemmesiden finder du en hel side fyldt med tilbud på det lækreste design fra mange forskellige mærker.\nGår du ind på kategorien 'Tilbud' i toppen af Uonliving.dk, kan du finde:\nDesignervarer fra ned til 299 kr.\nOp til 2800 kr. billigere end originalprisen\nSå tjek udsalget i og spar penge på Unoliving i dag!\n4 ud af 5 stjerner hos Trustpilot\nGlade kunder har givet deres bedømmelse til kende hos Trustpilot med hele 4/5 stjerner i anmeldelse. Over 50% har bedømt Unoliving som "Fremragende". Shop ind hos Unoliving og oplev samme gode oplevelse som tidligere kunder.


LDU Quito live resultater, program og resultat - Fodbold - SofaScore\nLDU Quito live resultater, program og resultat - Fodbold\nDer er ingen begivenhed for team LDU Quito\nTræner Pablo Repetto\nBy Quito, Ecuador\nLDU Quito live resultater (og gratis video streaming på nettet*), holdliste med sæson oversigt og resultater LDU Quito spiller næste kamp på 25. Nov 2018 imod El Nacional i Serie A, Segunda Etapa.\nNår kampen starter, vil du kunne følge LDU Quito v El Nacional live resultater , stillinger, minut for minut opdateret live resultat og kamp statistik. Vi kan have video highlights med mål og nyheder fra LDU Quito kampe, men kun hvis de spiller deres kampe i en af de mest populære ligaer. LDU Quito sidste kamp var imod Aucas i Serie A, Segunda Etapa, kampen endte med resultatet - . LDU Quito program fanen viser de sidste 100 fodbold kampe med statistikker og vundet/uafgjort/tabt ikoner. Der er også alle LDU Quito planlagte kampe som de skal spille i fremtiden.\nLDU Quito præstation & form graf er Sofascore Live resultater Fodbold unik algoritme som vi genererer fra holdets sidste 10 kampe, statistikker, detaljerede analyser og vores egen viden. Denne graf kan måske hjælpe dig med at spille på LDU Quito kampe, men vær opmærksom på at Sofascore ikke tager ansvar for økonomiske eller andre form for tab, direkte eller indirekte, som i forbindelse med handling på denne websides indhold.\nI denne kamp tilbyder vi online visning LDU Quito El Nacional live stream , sponsoreret af bet365. Hvis denne kamp er dækket af bet365 live streaming kan du se LDU Quito El Nacional på din PC og på mobil - iPhone, iPad, Android eller Windows phone. Vær venligt opmærksom på at de intellektuelle rettigheder til at streame begivenheder normalt er ejet på landniveau og derfor afhænger af din placering, så der er muligvis visse begivenheder, du ikke kan se, grundet restriktioner.\nNuværende LDU Quito trup består af:\nAngribere: Fernando Guerrero, Juan Anangonó, Gastón Rodríguez, Djorkaeff Reascos, Cristian Martínez, Julio Angulo\nMidtbanespillere: Jefferson Intriago, Edison Vega, Anderson Julio, Jefferson Orejuela, Renny Folleco, Jhojan Julio, Jonathan Borja\nForsvarsspillere: Christian Cruz, Horacio Salaberry, José Quintero, Hernán Pellerano, Franklin Guerra, Anderson Ordóñez, Edison Realpe, Anibal Chalá\nMålmænd: Leonel Nazareno, Erick Viveros, Adrián Gabbarini, Julio César Cárdenas\nDu kan klikke på enhver spiller fra listen til højre og se hans personlige informationer som nationalitet, fødselsdag, højde, fortrukne fod, position, spiller værdi, transfer historie osv. Der er også statistikker for hver spiller i alle konkurrencer med alle spillede og startende kampe, minutter spillet, antal mål, antal kort og meget mere. LDU Quito holdrekorder bliver opdateret under hver kamp.\nSofaScore fodbold live resultater er tilgængelig som iPhone og iPad app, Android app i Google Play og Windows mobil app. Du kan finde os i alle butikker på forskellige sprog, hvis du søger efter "SofaScore". Installer SofaScore app'en og følg alle LDU Quito kampe live på din telefon!


- Jeg havde det ad helvedes til – Ekstra Bladet\n3. apr. 2021 kl. 10:24\nDanske Mads Würtz kigger tilbage på tiden i Katusha som svær og glæder sig over sine nye holdkammerater\nMads Würtz forlod Katusha i 2019, hvor holdet gik i opløsning. Foto: Claus Bonnerup/Ritzau Scanpix\nDanske Mads Würtz Schmidt skiftede i 2017 til det russiske World Tour hold Katusha.\nEt stort skridt for danskeren, der indtil skiftet kun havde været tilknyttet danske cykelhold og nu tog hul på den helt store udlandsdrøm.\nDet blev dog ikke ren fryd og gammen for randrusianeren, der fik opholdet spoleret af skader og en uoptimal dynamik på holdet.\n- Intet ondt om de mennesker, jeg var på hold med i Katusha, men jeg manglede nogle, jeg kunne lære fra og blive inspireret af, siger 27-årige Mads Würtz til Ekstra Bladet.\nDen personlige succes udeblev også for den tidligere U/23 verdensmester i enkeltstart, der ikke opnåede sejre på World Touren i de to år, han var tilknyttet Katusha.\n- Jeg har lært at håndtere skuffelser efter de svære år i Katusha, siger Würtz.\nMads Würtz vandt sjette etape af det italienske løb Tirreno-Adriatico for sit nye israelske hold. Foto: Luca Bettini/Ritzau Scanpix\nDanskeren skiftede sidste år til Israel Start-Up Nation, hvor han føler, at han har fået mange af de ting, han manglede i Katusha.\n- De, jeg er på hold med nu, er vildt inspirerende at køre og træne med.\nWürtz nævner blandt andet belgiske Sep Vanmarcke og sydafrikanske Daryl Impey som to af de nuværende holdkammerater, der har inspireret ham mest.\n- Det er først nu, hvor jeg er kommet på et nyt hold, at jeg kan se tilbage på tiden i Katusha og se forskellen på, hvordan mentaliteten og ambitionsniveauet er. Det er svært at se, når man sidder i det, siger Mads Würtz.\nIsær vinteren 2018 frem til starten af 2019 var en svær tid for Mads Würtz, hvor han var knæskadet gennem meget af december og ikke fik den optimale forberedelse til forårets løb.\n- Katusha havde ikke tålmodighed til at lade mig komme ordentligt i form til de cykelløb, jeg kørte i den periode, siger Würtz og understreger, at det kun var i hans sidste år hos Katusha, at det var tilfældet.\nDet er derfor også noget, der ligger danskeren på sinde, når det kommer til hans generelle udvikling fra en, der vandt U/23 VM i enkeltstart, da han var 21 år gammel, til nu hvor han i starten af marts i år vandt sin første etapesejr på World Touren.\n- Jeg har ikke taget det der kæmpe spring, som flere af de andre danske ryttere har grundet skader og de her ting på Katusha, siger Mads Würtz.\nSkår i det nye ægteskab\nSelvom Würtz tydeligvis er glad for tilværelsen på det nye israelske hold, så har det ikke været en lang dans på roser, siden han kom til i 2020.\nDanskeren blev nemlig vraget til løbet over alle løb, da sportsdirektørerne så bort fra danskeren til sidste års Tour de France.\n- Jeg havde slet ikke den set den komme og mente egentlig, at jeg var meget klar til Touren, siger den 27-årige dansker til Ekstra Bladet.\n- Det tog mig lige et par dage, og så var det bare videre til næste løb.\nWürtz fortæller, at han i modsætning til det sidste år i Katusha havde en god og skadesfri december, inden han tog hul på cykelåret 2021, og det er svært at udfordre den påstand.\nDanskeren vandt i marts sin første etapesejr på World Touren, da han sluttede i spidsen på sjette etape af det italienske løb Tirreno-Adriatico.\nJeg blev helt fucked\n- Da jeg kom til Tirreno, var jeg nede i et sort hul.\nSådan sagde Mads Würtz Schmidt til Ekstra Bladet for to år siden, da karrieren ikke ligefrem kørte på skinner blandt andet grundet en dårlig opstart og knæskader.\nNu er det netop det italienske løb Tirreno-Adriatico, der markererer Würtz' hidtil største præstation på World Touren.\nEn sejr på sjette etape i 2021-versionen af løbet.\nMads Würtz Schmidt vinder i Tirreno-Adriatico\n- Det spillede bare til Tirreno, siger Mads Würtz til Ekstra Bladet.\n- Min vinter frem til dette år har været stort set perfekt. Jeg har trænet godt.\nNetop vinteren var udfordrende, for to år siden var hård for den 27-årige dansker, der kæmpede med en knæskade og dermed havde en klart dårligere forberedelse i december frem til løbet, som er i medio marts.\n- Man har tendens til at glemme de trælse ting, og jeg havde faktisk glemt, at jeg kørte Tirreno det år (2019 red.). Jeg havde det af helvedes til, siger den tidligere U/23 verdensmester i enkeltstart.\nDanskeren sluttede uden en top-10 placering på en af de syv etaper og endte ikke i top 100 i det samlede klassement.\nDengang følte danskeren sig ikke klar til at stille til start.\n- I stedet for at træne en måned ekstra blev jeg smidt ud i cykelløb og blev helt fucked. Jeg gravede mig selv ned i et dybere og dybere hul både fysisk og mentalt, siger Würtz, der dengang kørte for det russiske hold Katusha.\nNu kører danskeren for det israelske hold Israel Start-Up Nation, som han har været tilknyttet siden 2020.\n- Det har ikke været nemt at se dem have succes\nKnap seks år gik der, fra Mads Würtz i en alder af 21 år kunne kalde sig verdensmester i enkeltstart for under 23-årige, til han i starten af marts i år fik sin første etapesejr på World Touren i cykling.\nI mellemtiden er flere af hans jævnaldrende kolleger som Mads Pedersen, Magnus Cort, Søren Kragh Andersen og Kasper Asgreen buldret frem med flere flotte præstationer.\n- Det har sgu ikke været nemt at se dem have succes med det ene og det andet, siger Mads Würtz til Ekstra Bladet.\n- Jeg er selvfølgelig glad for at se dem lykkes, men det er også hårdt, for det er det, jeg kæmper for.\nKæmpe dansk triumf


Hvide piger Gratis sexchatrum ➤ Deltag i CAM4 Live Sex med webcam-modeller\nDyk ned i live sex på den hvide pige camchat\nDen europæiske sexchat giver sjov og underholdning under live seksuelle møder. Alle har forskellige valg, præferencer, ønsker at blive opfyldt, og sexede hvide kyllinger kommer til din redning. Cams4 er et perfekt sted at lede efter piger at tilbringe tid med gratis. Du er sikker på at finde tusinder af sexede nøgenbilleder såvel som live porno, da modeller fra forskellige dele af verden er aktive og klar til at tilbyde deres tjenester. De kan være sjove og liderlige, villige til at have virtuel sex med dig når som helst og hvor som helst. Det bedste ved Cams4 er adgang til dejlige hvide bryster, sexede kroppe og våde fisse af hvide nøgenpiger uden omkostninger.\nSurfing af nøgne hvide piger er utvivlsomt bedre end daglig porno\nAt se porno var en tendens, da der var begrænsninger for brugen af webkameraer til live sex. I dag går porno ud af mode, og al æren går til de tekniske fremskridt inden for sex og pornografi. Følgende er nogle af de fakta, der understøtter hvide piger, sex er meget bedre end porno.\nEuropæiske cam-piger på Cams4 er klar til at betjene dig nøgenbilleder og alt det, du ønsker.\nDu får se nøgne bryster i realtid på Cams4, hvilket er en fascinerende idé for mange.\nHvide nøgne piger får din fantasi til at gå vild.\nDer er en mulighed for at komme på tværs af varme lesbiske, der er klar til at lave alle de beskidte sex ting for dig.\nDu kan se solospil af elegante europæiske hvide piger.\nBortset fra at streame live kan du deltage i videochats og nyde at strippe og fingre.\nEndelig behøver du ikke stå over for den forlegenhed, som samfundet lægger på dig for dine seksuelle præferencer, og ingen vil dømme dig for at være aktiv på portalen.\nMed alle disse frynsegoder ved hånden undlader en person, der stadig vælger at holde sig til de optagede pornovideoer for fornøjelse, et klogt valg. Porno kan være behageligt, men der er ingen skade i at udforske horisonterne for levende sex med hvide kyllinger på Cams4.\nChat med den hotteste model efter eget valg på White Girl Webcam\nDu er sikker på at finde hvide piger se online fra hele verden på portalen, klar til at tilbyde seksuel nydelse. At finde en model af din præference er slet ikke en vanskelig opgave, i betragtning af hvor mange sexede hvide kyllinger du skal møde. Disse smukke kunstnere har en kvalitet til fælles: de siger næppe nej til noget. Du finder professionelle og amatører; Uanset hvilken kategori er en nøgen hvid pige stadig klar til at gøre alt for at gøre dig glad. Søgefiltre er den første ting, der kommer til din hjælp, når du vil filtrere modeller ud og finde nogen speciel. Dine præferencer kan variere afhængigt af køn, øjenfarve, sprog, alder, kropstype og meget mere. Værdsat al den indsats, som amatøren gør for at forbedre deres præstationer og tøv ikke med at interagere med varme hvide piger, der har sex.\nTilfredsstil dit lystbehov med varme nøgne hvide kvinder, der altid vil sige ja\nDer er millioner af hvide nøgne kvinder, der er klar til at fremvise deres bedste nøgenbilleder. Du kan nærme dig hotte nøgne europæiske piger, der altid vil have sex ved at få adgang til den hvide pige Cam. Ikke kun får du mulighed for at tilfredsstille din sult efter sex, men også en chance for at blive lagt sammen med den dame, du vælger. Du kan få adgang til værelser for at chatte med hvide piger og have kinky samtaler med din valgte model. Portalen sørger for at tilfredsstille dig ikke kun seksuelt, men også følelsesmæssigt. Du kan nyde et privat rum med en voksen eller en teenager og tilfredsstille hinanden på mange forskellige måder på Cams4. Nøgenbilleder er en regelmæssig ting på portalen. Liderlige hvide piger nøgne er klar til at tilbyde dit eksklusive og eksplicitte indhold. Du vil opleve endeløse sexchats, flirte og sex med hvide piger. Begræns ikke dig selv, og skift model, når du har brug for det.\nKommuniker med nøgne europæiske piger på forskellige måder\nSexede nøgne hvide piger er nemme at komme til, og det er ikke nødvendigt for dig at overbevise dem om at forkæle sig med seksuelle aktiviteter med dig, da de er tilgængelige 24/7. Der er mange måder at nærme sig nøgne hvide piger på, lige fra offentlige til private sexchatrum. Førstnævnte er et behageligt sted at udforske hinanden nærmere. Du kan bede modellerne om at gøre alt, hvad der behager dig, forudsat at de er komfortable med at gøre det. Der er ingen skade ved at bede dem om at udføre live sex eller lege med deres nøgne bryster.\nTing at huske, hvis du er ny i chatten med hvide piger\nIkke alle kan nærme sig kunstnerne med den samme tillid, som hvide piger elsker. At være amatør kan koste dig at miste smukke damer for dem, der er dygtige til at imponere dem. For at hjælpe dig, her er et sæt nyttige tip og tricks til at nærme hvide piger:\nDu skal filtrere dine valg ud ved at bruge søgefunktioner, der er tilgængelige på Cams4. Vælg det sprog, etnicitet og alder, du foretrækker.\nDer er ingen skade ved at bruge portalen gratis, men at fortsætte med at gøre det ud over en grænse lyder ikke anstændigt. Der er ingen tvang til at bruge penge på poletter for at imponere modeller, men det vil være en fordel for dig.\nKryds ikke dine grænser, når det kommer til at bede om favoriserer. At få nogen til at gå ud af deres komfortzone bare for din seksuelle nydelse, når du har en række muligheder, er ikke en behagelig ting at gøre.\nKomplimenterende nøgne hvide damer kan være til stor hjælp til at opbygge gode forbindelser til fremtidige seksuelle møder med den samme model.\nVed at huske på disse nyttige tricks kan du gøre det bedst for portalen at bruge dig uden at flamme dig selv. Overvej dem, hvis du er ny til at leve sex.\nGå ind i verdenen af seksuel fantasi med nøgne hvide damer\nFra at nyde sexchats til at blive involveret i live sex er der meget at udforske. Uden at forlade din behagelige seng kan du kigge efter hot nøgne hvide kvinder, der passer perfekt til din smag og præferencer. Modellerne på Cams4 sprænger din fantasi og fører dig til en verden af seksuel fantasi. Lad derfor ikke muligheden glide fra din hånd og udnyt tjenesten bedst muligt. Der er ingen anden portal, hvor du kan finde hvide kyllinger klar til at gå så langt for at gøre dig glad uden at du behøver at overbevise dem. Kort sagt, hvid pige sex tilbyder dig alt det sjove og eventyr, du virkelig fortjener.


Sundleg rabatkode 2018 | 60% rabat + Gratis Fragt | Sundleg\nSundleg Rabatkode 2018\nSundleg rabatkode – Få gratis fragt på din ordrer hos Sundleg\nKøb legetøj hos Sundleg og få gratis fragt ved køb...Læs mere\nKøb legetøj hos Sundleg og få gratis fragt ved køb over 499,-\nSkal du købe noget sundt legetøj? Så skal du tage et kig hos Sundleg. Hvis du er i gang med at finde det bedste legetøj til dit barn – eller måske skal du bare købe en gave til et barn, som du holder af – så er Sundleg lige en side for dig. Her kan du nemlig finde en masse forskelligt legetøj samt børnetøj, som alt er i god kvalitet og nøje udvalgt.\nKøb sundt legetøj hos Sundleg\nSom forældre er det ofte vigtigt at købe legetøj til barnet, hvor der ikke findes nogle former for sundhedsskadelige stoffer. Dette har Sundleg sørget for, da alt deres legetøj samt børnetøj er fri for alle skadelige kemikalier. Du finder blandt andet tøj og legetøj fra følgende mærker:\nSamt mangle flere. Disse mærker er mange forældres favorit, da det som oftest er sundt og godt legetøj til børnene. Du finder legetøj som både kan bruges indenfor og udenfor. Derudover er alt tøj og legetøj i den bedste kvalitet overhovedet og godkendt af EU. Dette betyder, at du kan være sikker på altid at finde en masse sundt og godt legetøj hos Sundleg. Du finder legetøj til de helt små børn men også de lidt større børn. Så hvis du har flere børn i en forskellige alder, er det slet ikke noget problem. Du kan nemlig stadig købe alt dit legetøj hos Sundleg. Med en Sundleg rabatkode kan du endda spare en masse penge på sundt og godt legetøj samt børnetøj.\nFind gode tilbud på legetøj og tøj til børn hos Sundleg\nHvis du vil være sikker på at dine børn leger med legetøj, som også er godt og sundt for dem, så skal du handle ind hos Sundleg. Hvis du samtidigt også gerne vil spare nogle penge, så er der faktisk også mulighed for det. Du kan nemlig finde masser af gode tilbud på siden, hvor du kan spare helt op til 70 % på udvalgte varer. Du kan for eksempel være heldig at finde lige det stykke legetøj, som du har ledt længe efter til en endnu billigere pris end først forventet. Derfor er det en god idé at holde øje med alle tilbudsvarerne, da du hurtigt kan gøre et rigtig godt kup.\nGør et kup med en Sundleg rabatkode\nHvis du er vild med at vide, hvad for noget legetøj som dit barn leger med, er det bare med at tage et kig hos Sundhed. Her hos Rabatkodeautomaten har vi også sørget for at samle alle rabatkoder til Sundleg. Med en Sundleg rabatkode kan du ofte opnå en stor besparelse på dit valgte legetøj. Så hvis du skal sikre dig at gøre et kup samt et godt køb, er det bare med at tage et smut forbi Rabatkodeautomaten først. Du kan hurtigt finde en masse legetøj til en endnu skarpere pris med en Sundleg rabatkode.\nBetalingsmuligheder hos Sundleg\nNår du handler hos Sundleg er der flere måder du kan betale på. Hos Sundleg vil de gerne gøre det nemmere for dig som kunde.\nDu kan betale med følgende betalingsmuligheder hos Sundleg:\nHos Sundleg sendes alle ordrer med Postnord eller GLS og leveres normalt indenfor 1-3 arbejdsdage. Der kan dog være længere leveringstid i forbindelse med tilbudskampagner, rabatkoder, helligdage og lignende.\nSådan anvender du en rabatkode hos Sundleg\nHos Sundleg ligger de meget vægt på fantastisk kundeservice, dette ses tydeligt på deres mange positive anmeldelser på Trustpilot.\nSundleg kan kontaktes på:\nTelefon: (+45) 42 41 83 86\nMandag – Fredag mellem 10.00 – 17.00


Kompakt lyd: Razer Leviathan Mini\nHome » Hovedtelefoner og højttalere » Test: Razer Leviathan Mini\nRedaktionen 07 oktober 2016 Hovedtelefoner og højttalere 0 kommentarer\nRazer Leviathan Mini er en lille kompakt Bluetooth 4.0 højttaler med understøttelse af aptX, der er kendetegnet ved en meget energisk og kraftfuld lydgengivelse, samt hvad man nærmest må beskrive som spilleglæde.\nSamlingskvaliteten er upåklagelig, og højttaleren måler 185 mm x 54 mm x 55 mm med en vægt på beskedne 550 gram. Den er i sandheden mobil af natur, hvilket den medfølgende polstrede bærepose også understreger. Batteriet er på 2600 mAh batteri, hvilket synes at være i overensstemmelse med Razers påstande om, at batteriet kan holde op til ti timer.\nNår batteriet er tomt, tager det i omegnen af fire timer at lade op igen, og det gøres via den medfølgende adapter. Udover dette medfølger der et kort 3,5 mm minijackkabel, hvis man ikke vil benytte sig af Bluetooth-opkobling.\nDenne foregår i øvrigt helt problemløst, og der er også understøttelse af NFC for parring via berøring. Betjeningen er ganske ligetil og klassisk, to volumenknapper på toppen sammen med en multifunktionsknap. Med multifunktionsknappen kan man pause numre, hoppe et nummer frem eller tilbage samt anvende den til at besvare opkald, når ens smartphone er parret med Leviathan Mini.\nHøjttaleren understøtter Combo Play, hvilket vil sige, at man trådløst kan sammenkoble to Leviathan Mini, så de begge afspiller musik fra samme kilde, det er også muligt at vælge stereo-mode, hvor hver højttaler tager sig af hver sin kanal.\nDet lyder potentielt til at udvide højttalerens kapacitet endnu mere med mulighed for et rigtigt stereoperspektiv. Desværre havde vi kun et enkelt testeksemplar. Det er dog bestemt ikke fordi, Razer Leviathan Mini mangler power, for den lille højttaler kan spille temmeligt højt og det med et kraftoverskud og en tilstedeværelse i bassen, der nærmest virker overvældende størrelsen taget i betragtning.\nDet kan man takke bestykning på to 45 mm fuldtoneenheder samt to 40 mm passive enheder for. Frekvensgangen går fra 50 Hz til 20 kHz, fysikkens love er trods alt ikke ophævet. Men det vigtigste er, at højttaleren lyder glimrende, med en lyd der betoner mellemtone og bas. For dens størrelse, selv til en pris der ikke er i den beskedne ende, er den en meget overbevisende musikformidler.\nSidste chance! Deltag i Alt om DATAs fødselsdagskonkurrence


Nyt Europol tager form – og lægger pres på Danmark\nFremtidens Europol rykkede væsentligt nærmere torsdag, og alt tyder på, at politisamarbejdet dermed bliver overstatsligt senest i 2017. Et nej kan sætte Danmark under tidspres for at få en særaftale.\nARKIVFOTO: Et nej ved næste uges folkeafstemning kan sætte Danmark under voldsomt tidspres for at få en særaftale, advarer europaparlamentariker Morten Helveg Petersen (R), mens hans kollega på nejsiden Morten Messerschmidt (DF) fastholder sin optimisme om en særaftale. Fold sammen\nTorsdag d. 26. november 2015, kl. 22.00\nOpdateret torsdag d. 26. november 2015, kl. 22.30\nBRUXELLES/KØBENHAVN: Et nyt stærkere europæisk politisamarbejde i Europol kom torsdag et væsentligt skridt nærmere, da EU-landene, EU-Kommissionen og Europa-Parlamentet efter årelange forhandlinger blev enige om kerneelementerne i lovgivningen for fremtidens Europol.\nDen danske europaparlamentariker Morten Helveg Petersen (R) har på vegne af den liberale gruppe i Europa-Parlamentet som den eneste dansker deltaget i forhandlingerne. Han glæder sig over resultatet, men frygter et dansk Europol-exit, hvis det bliver et nej ved næste uges folkeafstemning om en ændring af retsforbeholdet.\n»Med det her kommer der et styrket Europol, fordi det får nogle klare rammer for sit virke. Det gælder omkring databeskyttelsen og udveksling af data, men også ved at kunne modtage data fra private virksomheder og ved oprettelsen af nye centre, der skal bekæmpe cybercrime, menneskesmugling og terror. Jeg håber derfor på et ja 3. december, fordi så ved vi, hvad vi har, nemlig det der ligger på bordet. Og det ved vi bare ikke, hvis det bliver et nej. Ingen ved, hvilken aftale vi så kan håbe på,« siger Morten Helveg Petersen.\nDen nye Europol-forordning vil gøre Europol overstatsligt, og Danmark vil på grund af retsforbeholdet derfor ikke kunne deltage, når det implementeres. Det har af ja-kampagnen været fremført som et hovedargument for, at retsforbeholdet bliver omdannet til en såkaldt tilvalgsordning. Så vil Danmark nemlig fortsat kunne deltage. Bliver det derimod et nej, får Danmark travlt med at få en særaftale, der kan sikre fortsat deltagelse i Europol, som dansk politi har stor gavn af.\nFørst venter dog foreløbige godkendelser af aftalen i både EU-landenes Ministerråd og Europa-Parlamentet. Mandag er det Europa-Parlamentets borgerrettighedsudvalg, som normalt ser ganske kritisk på masseovervågning, der skal nikke til aftalen. Herefter skal den oversættes til de mange EU-sprog, og så venter en endelig godkendelse i foråret 2016. Derefter følger en overgangsperiode frem mod den 1. april eller 1. juli 2017.\nKamp mod tiden\nDet giver i bedste fald Danmark halvandet år til at sikre en særaftale om fortsat deltagelse i Europol, hvis det skulle blive et nej ved folkeafstemningen. Danmark har allerede fire sådanne parallelaftaler på retsområdet, men de tog mellem fire og fem år at få forhandlet på plads.\nOg intet tyder på, at det skulle gå hurtigere for Danmark at få en aftale om Europol, vurderer adjunkt, ph.d. Henning Bang Fuglsang Sørensen, der forsker i EU-ret, på Syddansk Universitet.\n»Det er min opfattelse, at der ikke kan landes en parallelaftale på halvandet år. Det er helt umuligt med den ramme, vi har for en parallelaftale. Det vil virkelig kræve politisk trylleri af hidtil usete dimensioner at få landet noget inden for den tidsramme,« siger Henning Bang Fuglsang Sørensen.\nDanmarks udfordring er langvarige procedurer: Først skal EU-Kommissionen overtales til, at dansk deltagelse vil være til alle EU-landes fordel. Herefter skal sagen forhandles med både Europa-Parlamentet og EU-landenes Ministerråd. Han fremhæver som et yderligere eksempel, at Danmark i 2013 anmodede om at tilslutte sig den ændrede lovgivning for Eurodac-systemet, hvor fingeraftryk registreres, men at Ministerrådet to år efter endnu ikke har givet EU-Kommissionen mandat til at indlede de forhandlinger.\nEn højt placeret EU-kilde fortæller også til Berlingske, at det reelt er usikkert, om Danmark vil kunne få en særaftale om Europol, samt at al erfaring siger, at det tager årevis.\nMesserschmidt vs. Pind\nNej-sidens Morten Messerschmidt (DF) ser dog helt anderledes på tingene og kalder Europol-aftalen for en »rigtigt god nyhed«, fordi der er halvandet år til at sikre en særaftale. Han køber ikke argumenterne om, at de tidligere parallelaftaler har taget mindst fire år at forhandle på plads.\n»Vi har aldrig forhandlet om Europol før, men det har Norge til gengæld, at det tog halvandet år. Og Norge står endda uden for EU, mens Danmark allerede er med i Europol i dag, så al sund logik siger, at det må tage kortere tid for Danmark at forhandle en parallelaftale for Europol, end det tog Norge,« siger Morten Messerschmidt.\nMen det argument er ifølge justitsminister Søren Pind (V) helt galt.\n»Danmarks situation er en helt anden end Norges, fordi Norge ikke er medlem af EU og derfor har en helt anden slags aftale, nemlig en samarbejdsaftale som på en lang række områder er ringere end vores nuværende forhold. Kommissionen har ikke nogen interesse i de her særaftaler, så det er at kaste sig ud i en enorm chancesejlads,« siger Søren Pind.\nJustitsministeren siger også, at Frankrig efter terroren i Paris presser på for en hurtigere implementering af det nye Europol, og at det derfor »sagtens kan blive fremskyndet.«\nDerfor er fløjenes faktakrig så forvirrende\nS og R om Europol-aftale: Vigtigt med fælles anti-terrorcenter\nNyt Europol skærper kampen mod terror\nVælgerne tror ikke på asylgaranti ved EU-folkeafstemning\nParallel-aftale: For lidt, for længe og for usikkert...


Squashkage med citronfrosting – Revalds opskrifter\nWritten by Revald on October 10, 2020 in Kager og brød\nBare prøv den! Den er vildt god!\n3 æg, både æggeblommer og æggehvider\n1 tsk. aldehånde\n1 tsk vaniljepulver / vaniljesukker\n125g grovhakkede valnødder\n100g mørk chokolade, grofthakket\n350g groftrevet squash\n150g flødeost, naturel\n1-2 citroner (øko). Revet skal fra denne\n1 tsk vaniljepulver/vaniljesukker\nSørg for at smøret er stuetemperatur. Det skal være godt blødt. Pisk det sammen med brun farin i et godt stykke tid. Det skal være en ensartet brun masse, uden for mange sukkerkorn der knaser. Pisk herefter æggene i, et af gangen.\nI en anden stor skål blander du alle de andre ingredienser til dejen, bortset fra den revne squash. Når det er godt mikset sammen, så blandet du det sammen med den brune farinmasse. Til sidst blander du squash i dejen. Lad være med at bruge en elpisker til dette sidste trin. Bare en dejskraber og kom grundigt omkring, så det hele er blandet godt.\nSmør en springform (omkring 24-25cm i diameter) og fordel dejen jævnt i formen. Bag den i en forvarmet ovn på 175 grader (varmluft). Tid: 50-60 minutter. Prik i den med en kødnål eller lign. efter 50 min. Hvis der ikke hænger dej ved, så er den færdig, ellers giv den lidt mere. Efter ca. 40. minutter kan det være du synes den allerede ser færdig ud på toppen. Læg noget sølvpapir eller en tallerken over springformen, så kagen ikke brænder på, mens den bliver færdig.\nFrosting blandes ved at piske flormelis, vaniljepulver, citronskal og smør sammen og så piske det sammen med flødeosten bagefter.\nVent til kagen er helt kold før du smører frosting ud over den i et jævn lag. Tro mig, man kan ikke få nok af denne frosting.\nKagen kan sagtens holde sig et par dage i køleskabet og stadig være lækker.


Børnebogsnostalgi-fanatik, dansk patrioti og R.C-nørd i en. – Venterpaavin\nAnne, bøger, gaver, nørd, PURE NICENESS, smukt\nBørnebogsnostalgi-fanatik, dansk patrioti og R.C-nørd i en.\nTil weekendens fredagsaftale, blev jeg forkælet (som jeg ofte, er heldig at gøre) med en skøn værtindegave.\nFaktisk en ekstra, ekstra skøn en af slagsen. Og også en helt uventet af sin type. For denne serie af H.C Andersen platter, er ikke spor lette at få fat i. Og slet ikke til et beløb, der er til at betale sig fra.\nSå blev virkelig glad og meget overrasket over, at Kit fremskaffet dette smuktmalede eksemplar, med en af vores favorit-eventyr i barndomshjemmet, nemlig Tommelise.\nEr den ikke sådan, helt utilgiveligt bedårende? Helt ned til æsken og ægtehedsbeviset er charmen gennemført. Øj, jeg er glad for den!\nI serien er der bla. også Den Grimme Ælling (som jeg før har budt på på brugmarkedet, men desværre ikke fik) og Fyrtårnet, som jeg gerne gad have fingrene i.\nDet er ikke værst, at være så heldig, som jeg!\nApril 21, 2014 at 6:53 pm Reply\nDen er rigtig sød – og meget nostalgisk! Det eventyr læste jeg mange gange, da jeg var barn 🙂\nHold op den er smuk og fuld af magi 🙂 hilsner Louise\nApril 22, 2014 at 7:03 am Reply\nÅh en fantastisk gave! Tommelise er et af mine absolutte yndlingseventyr!\nHvor er den fin! Der er ikke noget bedre end den slags uvurderlige gaver!\nApril 22, 2014 at 11:55 am Reply\nÅh, hvor er den fin. Heldige asen! 🙂\nApril 22, 2014 at 11:55 pm Reply\nDen er godt nok bare virkelig smuk!\nApril 23, 2014 at 11:25 am Reply\nDet er virkelig også så fint et eventyr på skrift, og filmen med 😀 Dejlige sange!\nOg jo tak, det har vi bestemt – og i lige måde 😀\nApril 23, 2014 at 11:26 am Reply\nTak, lige mine ord!\nJeg synes også, det er på top 5 over hans bedste, og det siger jo ikke så lidt! Og det er bare så flot illustereret herpå.\nApril 23, 2014 at 11:27 am Reply\nNej, du har helt ret, det var lige ramt plet (: Jeg synes også den er ualmindeligt fin.\nMange tak 😀 Jeg føler mig også aldeles heldig.\nTak Cindi, det regner jo med lækre platter for tiden (;\nApril 24, 2014 at 8:15 pm Reply\nWow hvor er den bare flot – er vild med farverne på den 🙂\nMange tak Julie, er også helt forgabt i netop farverne, den lyser helt.


Finansbogholder/Regnskabsassistent - Unique Human Capital\nBrænder du for at arbejde med regnskab, budgetter og bogføring i samarbejde med andre, er dette en spændende stilling i vores Shared Service Center\nFirst Chair Group er en dansk koncern bestående af markante professionelle virksomheder i konsulentbranchen med komplementære ydelser og rådgivning. Vi er +250 passionerede mennesker, der leverer førsteklasses vidensbaserede løsninger til vores kunder.\nVi søger en Finansbogholder/Regnskabsassistent med erfaring og gode regnskabsmæssige kompetencer. Det er en stilling med mange forskelligartede opgaver indenfor regnskab og økonomi, hvor du får mulighed for at være langt nede i detaljen og til at gøre Shared Service Centeret mere effektivt. Vi er et team på 8 personer fordelt i Aarhus og Charlottenlund, der arbejder tæt sammen med de interne selskaber, vi leverer ydelser til. Du vil indgå i teamet sammen med de øvrige finansbogholdere og med reference til CFO’en.\nArbejdet vil bl.a. bestå i:\nHåndtering og bogføring af finansbilag og omkostningsfakturaer mv.\nHåndtering af alle udgående kreditorbetalinger\nBogføring af udlægs- og kreditkortafregninger\nGennemgang og vurdering af igangværende projekter\nPeriode- og årsafslutninger\nLøbende afstemningsopgaver som f.eks. mellemregninger, debitor, kreditor- og bankafstemninger\nLønafregning, lønberegning og håndtering af feriepengesaldi\nBidrage til optimering af forretningsgange og processer i regnskabsfunktionen\nDu har solid erfaring fra en lignende stilling og praktisk erfaring med opgaver indenfor finansbogholderi. Det vil være en fordel med en bred baggrund fremfor meget specialiseret erfaring, da opgaverne favner bredt. Har du arbejdet med projektøkonomi, projektregnskaber eller i konsulentbranchen, vil det være en yderligere fordel.\nDin uddannelsesmæssige baggrund er ikke afgørende, men det vil klart være en fordel med uddannelse og/eller solid erfaring indenfor regnskab og økonomistyring. Desuden er du helt fortrolig med Excel og er en habil bruger af forskellige regnskabssystemer og lønsystemer mm. (f.eks. e-conomic, WorkBook og Uniconta, etc.).\nFor at lykkes i stillingen, er det afgørende, at du trives med at arbejde selvstændigt i en rolle, som bidrager aktivt til teamets fælles mål og opgaver. Du har et godt humør og vil gerne dine kolleger. Du skal samtidig være ambitiøs og kvalitetsfokuseret i din opgaveløsning. Du har en naturlig interesse i effektivisering af dagligdagens processer og har øje for optimeringer og forbedrende tiltag.\nFirst Chair Group tilbyder en spændende stilling med klassiske regnskabsopgaver, hvor der er plads til nytænkning og med friheden til selv at tilrettelægge og udvikle dine arbejdsopgaver. Vi har et uformelt arbejdsmiljø, og du bliver en del af en succesfuld og markedsledende gruppe af virksomheder. Du får nogle meget passionerede ildsjæle med hvert deres faglige speciale som nærmeste kolleger, og der er således alle muligheder for at udvikle sig både fagligt og personligt.\nVilkår: Det er en fuldtidsstilling, men der vil være mulighed for fleksible arbejdstider, dog med respekt for deadlines ved regnskabsafslutninger mv. First Chair Group tilbyder en attraktiv lønpakke med pensionsordning og sundhedsforsikring.\nArbejdssted: Charlottenlund (3 min. fra S-tog og 5 min. fra motorvej)\nVil du vide mere om stillingen og First Chair Group, er du velkommen til at kontakte CFO, Bjarne Veiergang på M: +45 22 68 56 71. Alle henvendelser behandles fortroligt.\nFirst Chair Group\nFirst Chair Group blev etableret i 2016 med ambition om at skabe Danmarks førende koncern af rådgivningsvirksomheder. Koncernen udgøres pt. af 9 virksomheder: Envision, A-2 Management Consulting, GORM Agency, Unique Human Capital, Harbinger, Rodkjær Event, FCG Consulting, Pluss Leadership og FCG Global Goals.\nVi er +250 medarbejdere fordelt i Aarhus, Aalborg, København og Charlottenlund, og vores kunder i både Danmark og udlandet betragter os som Trusted Advisors indenfor ydelser som strategisk rådgivning, marketing og reklame, management consulting, digital branding og udvikling, executive search, rekruttering, PR og kommunikation samt eventplanlægning.\nSe mere på www.firstchairgroup.dk\nAddress: First Chair Group, Jægersborg Alle, Charlottenlund, Danmark


Soveværelse. Inspiration til ny soveværelses indretning\nFå inspiration til en god indretning i dit soveværelse\nMangler du de gode ideer til at indrette dit soveværelse? Her på siden finder du spændende inspiration til indretning af soveværelse. Soveværelset skal være et sted hvor du kan falde til ro og derfor skal der ikke være nogle forstyrrende rod eller elementer, som gør at du ikke kan sove. Især hvis du har et lille soveværelse er det vigtigt at du får pakket din opbevaring væk i skabe og skuffer – måske også under sengen.\n15. marts 2017 / 0 Comments\nBrug for opbevaring i dit hjem? Så gå ikke glip af alle de muligheder Montana reoler kan give. De er meget fleksible og multifunktionelle. Hvilket andet møbel kan bruges til både rumdeler, skænk, bogreol, kommode eller et bord? Montana reoler kan kombineres både i farver og størrelser og gør det til et fleksibel møbel, som […]...\n23. august 2015 / 0 Comments\nI 2015 er det ikke nok med at et natbord kun skal bruges til opbevaring af bøger og blade. Natbordet bliver også brugt til at lægge sin smartphone på, mens den er tilopladning i stikkontakten. Tænk nu hvis stikkontakten var i natbordet? Du ved at du føler dig udenfor omverden, lige så snart din mobil […]...\nEr I et par som bor i en lille lejlighed, så er dette bord særdeles praktisk for jer. Med det indbyggede spejl i bordet og plads til opbevaring, kan kvinden i huset gemme alt sit make-up væk og samtidig have den luksus at have et sminkebord i lejligheden, for når make-up bordet ikke bruges, kan […]...\n13. juni 2015 / 0 Comments\nVasketøjskurv som bord, natbord eller skammel\nEr det ikke bare ærgerlig at en vasketøjskurv står og optager plads på badeværelset eller i soveværelset, når nu pladsen bedre kunne bruges med et natbord eller en skammel på badeværelset til de små? Vasketøjskurven med vasketøjsposen Med Hjälmaren vasketøjskurven fra IKEA får du både en vasketøjskurv og en vasketøjspose i ét, hvilket er praktisk, […]...\nIkea har for tiden en multifunktionel møbel, som fungerer både som skammel og som lampe. Denne skammel kan tåle at stå ude som såvel inde. I sidste indlæg fortalte jeg om havekrukker med lys i fra elho, og her har du et prisbilligt alternativ. Nemlig kun 399,-. Lampe på altan og terrasse som også […]...\nIndret et nyt soveværelset med plads til dine ting\nNår du skal til at indrette soveværelser er det vigtigt at tænke i, hvilke møbler som er nødvendige for dig. Måske er en sengegavl eller et natbord knap så vigtigt, hvis du kun har et lille soveværelse. Samtidig skal du tænke i, hvad du skal have opbevaret i dit soveværelse. Har du vintertøj, sengetøj og ekstra dyner og puder, som skal opbevares i soveværelset, skal du tænke i, hvordan du kan opbevare det, inden du går i gang med boligindretning af diverse soveværelses møbler som der ikke er opbevarings løsninger i. Derfor indret dit soveværelse efter dine behov og skal du have nyt, så kan du i mine blogindlæg få inspiration til de helt rigtige møbler.


Rex 2gears mærke - Stickers Viborg\nForside / Default Category / Knallert / Rex / Rex 2gears mærke\nRex mærke. 2 gears til værktøjskassen. Trykt i guld, hvid og bordeaux på klar folie. Sælges stykvis som vist på billedet. Størrelse 30x44mm.\nRex 2gears mærke antal\nVarenummer (SKU): rex-02 Kategori: Rex\nVær den første til at anmelde “Rex 2gears mærke” Annuller svar


Testamente | Lav-det-selv.dk\nBobbleTrouble 14-12-2007 07:22\nEr der nogle alternativer til en advokat til 2.400-7.000,-, hvis man vil sikre sig iforhold til et papirløst forhold?\nNæstformanden 14-12-2007 11:25\nJeg slap med 1500,-\nDet var konen der lavede research. Og hun sagde at der ikke var andet der gjaldt!\nJeg ved ikke om det er rigtigt, men det er der sikkert andre der gør!!\nSniffer 14-12-2007 17:39\nDu kan godt selv skrive det - to vitterlighedsvidner og stemplet på dommerkontoret - så er prisen under en tusse.\nProblemet er bare, at du ikke kender alle de juridiske spidsfindigheder og således kan det nemt anfægtes.\nThomas FH 16-12-2007 16:12\nHvis det bare er XX arver alt efter mig, så er det et notar testamente det bedste. Det kan ikke anfægtes. Tal med dommer kontoret.\nvvs'eren 18-12-2007 09:59\nHvis det her udelukkende handler om 2 personer uden børn, udfærdiger du et dokument, hvori der står følgende:\nI tilfælde af den enes død, ønsker vi (xx og yy) at begunstige den anden mest muligt.\nDet underskrives af jer begge og to vitterlighedsvidner.\nDerefter sørger i for at nødvendige pårørende tildeles en kopi. Forskellen på det her og det notarpåtegnede, er at jeres pårørende selv skal finde dokumentet frem hvis noget sker, hvorimod det stemplede dukker op af systemets gemmer i det øjeblik behovet er der!\nMen gå dog på rådhuset - det er en god oplevelse, der giver ro i sjælen og med lidt held kan i køre på den samme busbillet hjem, hvis problemet er penge! Desuden forenkler det sagerne alvorligt hvis der f.eks. skulle være noget med børn fra et andet forhold, som jo ikke er ualmindeligt i vore dage.\nLars ON 18-12-2007 12:34\nskabelon til testamente kan eksempelvis hentes her:\nTravis 09-02-2015 14:22\nPrøve at kigge på http://lavtestamente.nu - her kan du oprette et testamente online via et intelligent spørgeskema, hvor du svarer på de spørgsmål, som advokaten ellers ville spørge dig om. Når du har udfyldt spørgeskemaet, bliver det sendt til vores advokater, som sørger for at oprette testamentet og sende et udkast til dig, indenfor 2 hverdage efter at du har udfyldt skemaet. Herefter kan du gå til notaren og få det underskrevet, hvorefter det er gyldigt.\nSniffer 10-02-2015 18:33\nTråden er fra 07 - tror du ikke det testamente er skrevet for længe siden??\nev elmand 10-02-2015 20:37\nJeg har anmeldt den som reklame, men Adm. mener den "lige kan gå an"\nDokument24 12-06-2019 10:57\nHvis der er nogen, der læser med på denne gamle tråd, så får I lige en fagpersons input til lidt om testamenter.\nDer findes efterhånden mange måder at udarbejde et testamente på.\nDen traditionelle - hos Advokaten - vær OBS på følgende:\nLaver advokaten testamenter til daglig, eller er testamenter en bi-ting?\nEr det advokaten selv, der laver det endelige testamente eller er det en sekretær?\nHos juristen - Vær OBS på følgende\nEr juristen helt nyuddannet, og har "bare" forsøgt sig med at lave en virksomhed, der sælger testamenter?\nEr dette noget, som juristen er ekspert på, eller er det en bi-ting?\nDen nye - testamente online vær OBS på følgende\nEr du sikker på, at du ved, hvad du svarer på? Du skal være helt sikker på, at du forstår det spørgsmål, som du besvarer, ellers bliver testamentet ikke korrekt.\nIkke alle online-udbydere, sender et testamente til dig. Flere indsamler bare dine data og ringer dig efterfølgende op. Det er derfor ikke "rigtig" online.\nDet var et par fif, når der skal vælges måde at oprette et testamente på (såfremt, der er nogen, der læser denne gamle tråd).\nJørgen - Dokument24\nUnderskrifter og vitterlighedsvidner (boligkøb)\nProblemer med at oprette brugere


BEDSTE BAGERIER I CHARLESTON - REJSEIDEER\nBedste bagerier i Charleston\nVigtigste Rejseideer Bedste bagerier i Charleston\nSelv dampende somre kan ikke stoppe ovne i Charleston. Denne by elsker sine bagerier med en nidkærhed, der kun matches af sin entusiasme for andre håndværksmæssige godbidder, som is og håndværkscocktails. Nogle bagerier her læner sig mere mod brød end bagværk, men de fleste gør masser af begge dele. Og bagningen sker ofte i små, historiske bygninger, så butiksfacader ser unikke ud, og oplevelsen er personlig, ikke virksomhedsmæssig. (Personlig optagelse her: Jeg har ofte svært ved at gå eller køre forbi nogen af disse fem bagerier uden stop - hvis det ikke er for den friske bærcroissant på Baguette Magic, er det for de seje engelske boller ved Brown's Court.) Alle butikkerne på listen nedenfor serverer også kaffe og har mindst et par borde. Kom forbi for en snack, eller bliv en afslappet eftermiddag, mens du ved, at brød bager bagpå sammen med citronstænger, kager og brioche.\nMed store egetræer foran og kølige pastelvægge indeni bliver bagerier ikke meget sødere end sukker. Tidligere arkitekter i New York, Bill Bowick og David Bouffard, holder fans tilbage til Cannon Street med daglige udstillinger af gammeldags kager, tærter, tærter og cupcakes toppet med kandiserede citronskiver og sukkerholdige bær.\nNår det åbne lys er tændt ved denne ikke-beskrivende butiksfront på Folly Road, er det tid til at kigge forbi, hvad der lige er kommet ud af ovnen. Specialiteter inkluderer brioche, brød, croissanter med friske bær eller chokolade og interessante sandwich som baguetten BLT med avocado og pimiento-ost.\nLauren Mitterer, en James Beard Award-nomineret konditor, satte sit Spring Street-bageri på kortet i 2010 med Sticky Bun Sundays, en ugentlig fejring af sød morgenmads godhed. Butikken har siden tilføjet terrassepladser og har en daglig menu med scones, omsætninger og bryllupskager i klassiske sydlige smag som rød fløjl og kolibri.\nDenne er en lokal favorit. I et smalt hus med en lang sideveranda på St. Phillip Street bager Brown's Court-besætningen alt fra engelske boller til bagetter, boller, store seje småkager og Pullman-brød i firkantet hjørne. Kom efter bagværk. Bliv også gratis Wi-Fi og genopfyld kaffe.\nNormandiet Farms Artisan Bakery\nTip: hvis du bestiller frisk mozzarella, basilikum og tomat point på dette spisested i Windermere Boulevard, bed om ristet baguetten. Bagning i mere end 25 år i Charleston, Normandy Farms er altid perfekt ting, herunder brødristerteknikker og trækbrød fra ørebrød . I år begyndte det parisiske bageri også fransk med at riste deres kaffe internt.\nbedste zoologiske haver i USA\nbedste campingplads i Yellowstone\naloha sikker alarm app\nluksushoteller i la\nDette boblehus i Puerto Rico har bjergudsigt om dagen og fantastisk stjernekig om natten\nHvorfor dette italienske kunstmuseum spreder sin samling rundt i Toscana\nExpedia fejrer slutningen af 2020 med 2 ugers udflugter til $ 20,20 - men forbeholdene er begrænsede